Как берут анализ на вирусы пцр

Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:

наличие ВПЧ;
штаммы, которыми инфицирован больной;
количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. ВПЧ распространяется следующими путями:

при незащищенных половых контактах;
при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие.

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения.

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику.

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

источник

Все чаще в медицинской практике стали применять новый метод диагностики инфекционных заболеваний, который имеет аббревиатуру ПЦР. В чем заключается сущность такого метода исследования и какие заболевания можно благодаря ему выявить, а также в чем достоинства ПЦР в сравнении с другими распространенными способами диагностики и как правильно подготовиться к анализу, можно узнать, прочитав данную статью.

Аббревиатура ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Это возможность участка ДНК пропорционально приумножаться при необходимых условиях. Изобретена ПЦР-диагностика инфекций еще в 1980-х годах. Работали над открытием европейские, американские и советские ученые, поэтому определить первоизобретателя инновационного диагностического метода не представляется возможным. Кроме того, начиная с 1983 года, когда был официально зарегистрирован такой метод исследования инфекционных заболеваний, как ПЦР, продолжается работа по усовершенствованию данного способа. На сегодняшний день такой метод диагностики применяют практически в каждой медицинской лаборатории, имеющей современное необходимое оборудование.

Для анализа ПЦР, в зависимости от медицинских показаний, необходимо провести медицинский забор таких материалов, как кровь, слюна, моча, сперма, грудное молоко или половые выделения, эпителиальные клетки. Диагностика инфекций методом ПЦР заключается в том, чтобы обнаружить ДНК возбудителя в исследуемом материале. С помощью специальных лабораторных манипуляций с использованием химических реактивов и оборудования лаборанты проводят полимеразную цепную реакцию. С ее помощью незаметный в микроскоп участок ДНК возбудителя разрастается до заметных в прибор размеров. Именно поэтому можно обнаружить возбудителя инфекции даже при наличии незначительного участка его ДНК в исследуемом материале.

Способна обнаружить целый ряд патогенных микроорганизмов ПЦР-диагностика инфекций. Расшифровка результатов сводится к обнаружению возбудителя и определению его вида. С помощью полимеразной цепной реакции диагностируют различные заболевания человека: от передающихся половым путем до бессимптомных, так называемых скрытых инфекций. С помощью ПЦР находят:

вирус гепатита (А, В, С);
уреплазму уреалитикум;
уреплазму парвум;
хламидию трахоматис;
кандиду;
микоплазму хоминис;
микоплазму гениталиум;
гарганеллу вагиналис;
трихомоназ;
микобактерию туберкулеза;
вирус герпеса простого 1 и 2 типа;
вирус папилломы;
вирус Эпшетейна-Барра;
хеликобактер пилори;
вирус иммунодефицита.

Вышеперечисленные микроорганизмы вызывают такие заболевания, как гепатит, туберкулез, ИППП и СПИД.

ПЦР-диагностика инфекций проводится в виде качественного (то есть определяют наличие или отсутствие возбудителя) и количественного анализа (высчитывают количество микроба в организме – такой подход необходим, например, при диагностике ВИЧ-инфекций и гепатита).

Практически в каждой лаборатории сегодня проводят диагностику инфекций человека с помощью полимеразной цепной реакции. В чем же достоинства такого метода, почему он стал невероятно популярным как среди медиков, так и в среде пациентов за такой короткий промежуток времени? Объясняется такое стремительное распространение инновационной технологии высоким уровнем достоверности, эффективности и чувствительности. Рассмотрим подробнее достоинства метода диагностики ПЦР:

Процесс проведения анализа максимально автоматизирован, что исключает человеческий фактор при проведении исследования и расшифровке результата.
Благодаря современным технологиям культуры выращиваются в течение 4–6 часов, а соответственно, получить результат анализа можно в день сдачи материала для исследования.
ПЦР-диагностика инфекций обладает высокой чувствительностью, что позволяет обнаружить возбудителя даже при наличии незначительного участка ДНК. В некоторых случаях, например, при вялотекущих и бессимптомных заболеваниях, посев культур иным методом является затруднительным или полностью невозможным.
Материалом для исследования методом ПЦР могут стать кровь, слюна, урогенитальные выделения, эпителиальные клетки, моча, сперма, что крайне удобно при невозможности взятия для анализа определенного материала. Для диагностики инфекционных заболеваний обычно используют венозную кровь и урогенитальный мазок.
Методом полимеразной цепной реакции можно определить несколько возбудителей из одного материала. Такой подход не только сокращает время для постановления правильного диагноза, но и экономит затраты на исследование.
Метод ПЦР считается достоверным, так как было отмечено лишь небольшое количество ложноотрицательных результатов. Ложноположительных ответов зафиксировано до сегодняшнего дня не было.

Какими бы достоинствами ни обладала ПЦР-диагностика инфекций, применяют такой метод не всегда. Например, при диагностике токсоплазмоза полимеразную цепную реакцию проводят только в том случае, если анализ ИФА показал сомнительный или спорный результат. С помощью метода ПЦР невозможно проследить динамику заболевания. Отметим следующие случаи, когда данный метод исследования принесет достоверные и эффективные результаты:

для определения инфекционных заболеваний, указанных выше, в соответствующем разделе статьи;
широко распространена ПЦР-диагностика урогенитальных инфекций;
для определения ИППП во время беременности;
для диагностики ВИЧ;
при спорных медицинских ситуациях для подтверждения или опровержения предварительного диагноза;
для определения отцовства и родственных связей;
применяют в генотипировании для обнаружения наследственных предрасположенностей;
помогает метод ПЦР работникам криминалистического отдела медицины для идентификации генетического материала.

Обследование ПЦР-методом назначается в обязательном порядке беременной женщине при постановке на учет с целью ранней диагностики инфекций, передающихся половым путем. Так как такие заболевания крайне опасны для нормального протекания периода вынашивания ребенка. ИППП провоцируют замирание развитие плода, выкидыши, внутриутробные уродства, мертворождение, врожденные патологии. Своевременное обнаружение и лечение инфекции значительно повышают шансы на благоприятный исход беременности и рождение здорового малыша.

Обычно будущей маме назначается комплексное обследование, которое имеет название «ПЦР 6». Такое исследование включает анализ на 6 разных инфекций. Проводится как в государственных, так и в частных учреждениях ПЦР-диагностика: «Инвитро», «Счастливая семья», «Уро-Про» и другие лаборатории предлагают такую услугу. Более подробно этот вопрос описан ниже.

Таким образом, понадобится лишь один раз провести забор материала для анализа. При проведении ПЦР-диагностики во время беременности необходим урогенитальный мазок, который берется из канала шейки матки гинекологической щеточкой. Такая процедура не вызывает болезненных ощущений у беременной и никак не влияет на плод.

Часто назначают ПЦР-диагностику для обнаружения возбудителя гепатита. Объясняется это тем, что такое заболевание нередко протекает бессимптомно и переходит в хроническую тяжелую трудноизлечимую стадию. С помощью ПЦР определяют гепатит на самых ранних этапах, что способствует благоприятному излечению в максимально короткие сроки. Проводится в большинстве частных лабораторий такая ПЦР-диагностика инфекций. Цена зависит от типа определяемого вируса и вида анализа. Так, простое определение наличия или отсутствия ДНК возбудителя в крови стоит 400–600 р. Количественный метод обойдется в 1200-1500 р.

Для еще более эффективной результативности метода ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний широко применяют комплексное исследование, которое способствует сокращению сроков постановки диагноза и своевременному лечению. Так, лаборатории предлагают анализ «ПЦР-6» и «ПЦР-12». В первый комплекс входит ПЦР-диагностика половых инфекций, таких как:

уреплазмоз;
хламидиоз;
микоплазмоз;
папилломавирус человека;
простой герпес;
цитомегаловирус.

Такое исследование часто назначается женщинам на ранних сроках беременности, а также в период планирования зачатия.

При проведении «ПЦР-12», помимо вышеуказанных заболеваний, диагностируют следующие:

гонорею;
кандидоз;
бактериальный вагиноз;
трихомониаз;
уреплазмоз;
герпес 1 и 2 типа.

В зависимости от лаборатории, перечень исследуемых заболеваний, входящих в комплекс, может различаться. Врач подберет в каждом конкретном случае наиболее подходящий вариант обследования. В любом случае комплексный анализ методом ПЦР займет гораздо меньше времени, сил и материальных затрат.

Подготовка к анализу методом ПЦР заключается в соблюдении рекомендаций по забору определенного вида материала:

Сдавая урогенитальный мазок, следует воздержаться от полового контакта за трое суток до предполагаемого анализа, прекратить прием антибактериальных препаратов и местных мазей, кремов, свеч, нельзя проводить процедуру спринцевания. Во время менструальных выделений забор материала не проводится – необходимо провести анализ не ранее, чем через 3 дня после завершения менструаций. Следует воздержаться от мочеиспускания за 3 часа до анализа.
Венозную кровь лучше сдавать с утра, натощак (хотя это не является правилом). Накануне следует ограничить употребление алкоголя и жирной пищи.
При сдаче спермы необходимо воздерживаться от полового контакта трое суток. Рекомендуется ограничить употребление спиртного, посещение сауны, прием горячей ванны.
Мочу следует сдавать утреннюю, предварительно проведя тщательный туалет половых органов. Лучше собирать материал в специальную стерильную емкость. Материал следует доставить в лабораторию в течение нескольких часов.

Не вызывает сложностей интерпретация результатов, после того как была проведена ПЦР-диагностика инфекций. Расшифровка качественного метода заключается в оценке наличия или отсутствия в исследуемом материале возбудителя, а также в определении вида патогенного микроорганизма. Если в исследуемом материале был обнаружен участок ДНК микроба, то записывается положительный результат на соответствующем бланке, а также указывается, какой именно вид микроба был определен. При отсутствии патогенного микроорганизма в материале результат будет отрицательным.

Полученные результаты количественного анализа, например при диагностике гепатита, необходимо расшифровывать с помощью норм, указанных лабораторией. Так как единицы измерения и количественный фактор значительно отличаются в разных медицинских диагностических учреждениях. Достоверно, с учетом всех сопутствующих факторов, расшифровать такой анализ может только врач.

На сегодняшний день практически каждая частная лаборатория предлагает такую услугу, как ПЦР-диагностика инфекций.

«Инвитро» — цена проводимых данной лабораторией исследований и качество зарекомендовали себя не только в России, но и в Украине, Казахстане, Белоруси. Отзывы пациентов свидетельствуют о высоком качестве предоставления медицинских услуг, быстром получении достоверных результатов. Но ценовая политика соответствует высокому качеству. Так, за анализ методом ПЦР на одну инфекцию, например гепатит, необходимо будет заплатить около 700 р. За сбор материала берут отдельную плату – это еще 400р. Значительно дешевле обойдется комплексное исследование «ПЦР-6» в данной лаборатории – такой анализ стоит 1445 р., в него входят исследования шести инфекций, передающихся половым путем.
Лаборатория «Хеликс» также заслуживает достойные отзывы потребителей. Современные технологии и оборудование, высококвалифицированный персонал и умеренные цены заслужили положительные отзывы. Стоимость анализа на одну инфекцию методом ПЦР составляет 290 р., дополнительно нужно оплатить забор материала. В зависимости от его вида такой платеж составит от 25 р. (моча) до 550 р. (урогенитальный мазок с секретом простаты).
Лаборатория «СитиЛаб» отличается тем, что выполняет практически любой анализ методом ПЦР в течение суток, в то время как другие предоставляют готовый результат только через 2 дня. Заплатив немного больше, можно получить ответ даже в день сдачи анализа. Ценовая категория приблизительно следующая: анализ на определение хламидий стоит 230 р., «ПЦР-6» обойдется в 1430 р., а количественный анализ гепатита С – 12650 р. Стоит отметить, что в данной лаборатории представлен широкий выбор комплексных анализов методом ПЦР. Это является несомненным достоинством при диагностике заболеваний.

Проводится ПЦР-диагностика и в государственной поликлинике на платной основе. Следует отметить, что стоимость таких анализов незначительно ниже по сравнению с исследованиями в частной лаборатории. А вот оборудование и материалы значительно отличаются – по этому критерию частные клиники явно выигрывают. Проконсультируйтесь с лечащим врачом по поводу выбора лаборатории для сдачи анализа методом ПЦР в вашем регионе.

источник

ПЦР мазок позволяет определить наличие возбудителя инфекции в организме человека. Чаще всего исследуют выделения человека на предмет хламидий и иных возбудителей венерических заболеваний, передающихся через половые контакты. Точность диагностики довольно высокая, однако, иногда бывают погрешности в определении ДНК возбудителя. С чем это связано, рассмотрим в статье.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) считается одним из надежных способов определения наличия бактерий и вирусов в организме человека. Исследование проводят с помощью биоматериалов — слюны, выделений, крови, мокроты и иных субстанций организма. Взятые на анализ материалы смешивают с реактором, который выявляет наличие чужеродных ДНК в составе выделений человека.

Специальные ферменты провоцируют цепную реакцию роста молекул ДНК микроорганизмов, с помощью которой появляется возможность их обнаружения. Помимо выявления присутствия возбудителя в тканях организма, мазок позволяет установить вид и количество находящихся бактерий.

Преимущество данного метода исследования заключается в возможности обнаружить вирус даже по частичным фрагментам его ДНК в выделениях человека — цепная реакция выстраивает молекулы ДНК полностью. Другими преимуществами ПЦР метода являются:

быстрый результат, в сравнении с бактериальным посевом и иными методами, — ответ готов в тот же день после сдачи анализов;
возможность исследования любого биоматериала — крови, слюны, выделений из матки и т.д;
возможность определения вида вируса, точность диагностики.

Помимо преимуществ, метод имеет и свои недочеты. К ним относится:

вероятность неточного результата после курса антибиотиков — анализ обнаружит мертвые структуры бактерий и покажет их наличие в организме;
невозможность выявления гарднереллеза — небольшое количество бактерий постоянно присутствует во влагалище;
метод не в состоянии определить мутацию вирусов, способность видоизменяться.

Чтобы исследование биоматериала было максимально точным, выполняйте данные правила:

кровь сдают с утра натощак, за сутки до забора плазмы нельзя кушать сладкое, соленое и пить спиртное;
урину сдают рано утром, первую порцию;
мазок эпителия слизистых половых органов берут после воздержания от интимных контактов в течение трое суток;
мазки не сдают во время критических дней, только на третьи сутки после менструации.

Обычно для исследования микроорганизмов берут биоматериал соответствующих болезни слизистых оболочек и выделений:

при заболевании мочеполовой системы — забор урины;
при заболевании легких/бронхов — мокроту;
ИППП заболевания — исследуют эпителий соответствующих слизистых оболочек;
при подозрении на гепатит — исследуют кровь пациента;
при диагностике хеликобактерной инфекции — используют биоптаты.

Исследование туберкулеза внутренних органов проводят с помощью полимеразной цепной реакции. Палочки Коха могут поражать не только ткань легких, но и кишечник, кожу, почки и другие внутренние органы.

Заболевания ЖКТ имеют разнообразный характер, но общие симптомы. Эффективность терапии напрямую зависит от точного определения возбудителя. Чтобы выявить наличие инфекции, применяют диагностику полимеразной цепной реакции.

В некоторых случаях проводят ПЦР диагностику каловых масс. Для точности анализа материала необходимо учесть следующие рекомендации:

прекратить использование слабительных средств за трое суток до сдачи биоматериала;
прекратить прием медикаментов, которые могут повлиять на характеристики каловых масс.

Не следует специально омывать анус перед взятием материала, в том числе, использовать душистые моющие средства. Массу нужно взять стерильной ватной палочкой и положить в контейнер. Недопустимо попадание урины в контейнер, также недопустимо использование клизмы для опорожнения.

Преимущество полимеразной цепной реакции в определении диагноза заболеваний ЖКТ:

выявление ДНК гельминта;
выявление типа возбудителя;
определение наличия вируса даже по одной молекуле ДНК.

Точность диагноза заболевания позволяет назначить эффективный курс терапии для устранения болезни.

Как правильно сдать мазок на ИППП (хламидии, микоплазмы, уреаплазмы)? Возбудители половых инфекций относятся к скрытым — они не проявляют себя при других анализах, обнаружить их очень тяжело. Как берут выделения для лабораторной диагностики?

Чтобы получить точность анализа при исследовании, необходимо сдать мазок правильно:

ПЦР мазок из уретры берут у мужчин;
у женщин мазок на ИППП берут из выделений влагалища, мочевого канальчика или шейки матки;
нельзя брать мазок во время критических женских дней;
после интенсивного курса антибиотиков следует подождать 3 недели, потом сдавать анализы;
перед забором слизи из половых органов нельзя мочиться (после последнего опорожнения должно пройти не менее трех часов);
недопустимо использовать душистые моющие средства для подмывания половых органов перед сдачей анализов;
более достоверный результат можно получить при заборе выделений перед критическими днями либо сразу после их завершения;
недопустимо применять вагинальные свечи или спринцевание в день забора выделений.

Является ли процедура забора болезненной? Не следует опасаться мазка на диагностику — биоматериал берут медицинским зондом в малом объеме без повреждения поверхности слизистой оболочки. После забора выделения помещают в транспортировочную жидкость для хранения.

Важно! Забор слизи из уретры может спровоцировать дискомфорт в течение некоторого времени — жжение при выделении урины.

Заболевания, передаваемые при интимных сношениях, держат лидирующее положение среди вирусных инфекций. Опасность бактериально-вирусного поражения половой сферы заключается в осложнениях и возникновении тяжелых форм патологии данных органов.

Хламидиоз проявляется у мужчин и женщин по-разному. Зараженный мужчина испытывает болезненность при опорожнении, зараженные женщины страдают обильными выделениями и прорывными кровотечениями.

Уреаплазмоз никак не проявляется, находится в «спящей» форме. При отсутствии терапии способен спровоцировать выкидыш у беременных и воспаление уретры у мужчин.

Микоплазмоз — женское заболевание, мужчины лишь переносят инфекцию в момент полового сношения. Микоплазмоз может спровоцировать осложнения в течении беременности, отзывается паховыми болями, вызывает жжение при отходе урины.

Молочница у женщин (кандидоз) проявляет себя обильными выделениями, напоминающими творог. Также характерным признаком кандидоза является зуд и жжение. Молочница может появиться и у мужчин, но чаще — это женское заболевание.

Трихомониаз вызывает отек половых органов и покраснение эпителиального слоя, сильные вагинальные выделения с резким запахом рыбы и крошечные изъязвления на половых губах. У мужчин данный вирус вызывает неприятные ощущения и жжение при выделении урины.

Вирус папилломы человека отличается образованием папиллом небольшого размера на наружных половых органах. Опасность состоит в том, что вирус остается внутри организма даже после курса терапии. В некоторых случаях папилломы могут спровоцировать рак шейки матки.

Генитальный герпес имеет две формы проявления — острую и «спящую». Опасность данного заболевания состоит в том, что лечению оно не поддается. При помощи медикаментов вирус переходит в спящую фазу и продолжает находиться в теле человека.

ПЦР мазок на герпес делают следующим образом:

мужчинам в уретру вводят ватный тампончик на палочке и круговым движением собирают выделения;
у женщин берется эпителий с влагалища, шейки матки или мочеиспускательного канальчика.

Своевременно выявленная инфекция поддается быстрому искоренению. Запущенная инфекция может серьезно подорвать здоровье.

Анализы на скрытые вирусные инфекции помогают выявить заболевание и предотвратить патологии развития плода. ПЦР мазок при беременности может выявить скрытую инфекцию гепатита, причем, другие методы диагностики не способны справиться с задачей. Анализ выделений организма беременной позволяет выявить наличие скрытых паразитирующих микроорганизмов, которые внешне себя не проявляют.

Данный вирус, раз попав в тело человека, остается там навсегда. Во время снижения иммунной защиты, вирус переходит из спящей фазы в активную. Во время беременности защита иммунитета снижается, поэтому вероятность агрессии герпеса увеличивается.

Чем опасен герпес для беременных? Крайней степенью агрессии вируса является поражение внутренних органов тела. Причем, опасна любая форма герпеса — оральная и генитальная. Анализ крови берут у всех беременных женщин.

Герпес способен проникать через плаценту и поражать плод. Известны случаи самопроизвольного выкидыша, гибели младенца после рождения и преждевременных родов, вызванные активностью герпеса. Малыш может заразиться во время прохождения по родовым путям матери.

Анализ полимеразной цепной реакции способен обнаружить вирус герпеса даже в малых количествах в слизистых оболочках органов, а также установить его вид — оральный/генитальный.

Диагностику на наличие герпеса необходимо проводить в следующих случаях:

перед планированием оплодотворения;
при предшествующих новому зачатию выкидышах;
при наличии высыпаний на наружных половых органах;
при определении причин бесплодия.

В случае хронического течения инфекции анализ позволит установить степень опасности заражения вирусом полового партнера.

Особенно опасной считается цитомегаловирусная инфекция, попавшая в тело матери в первые 10 недель формирования плода. Нередко цитомегаловирус приводит к прерыванию беременности и выкидышу.

Инфицирование в срок от трех месяцев до полугода приводит к различным отклонениям в развитии плода, замедлению роста и дисплазии внутренних органов. Заражение на последних месяцах вынашивания приводит к поражению органов ребенка, которое можно увидеть уже после рождения.

Устранить цитомегаловирусную инфекцию невозможно, однако, сдержать ее активную форму удается с помощью курса терапии. Беременным назначают медикаменты, способствующие укреплению иммунной системы: в этом случае организм сам борется против агрессии вируса.

Передается вирус разными способами:

в организм матери вирус попадает при общении с зараженным человеком и во время полового контакта;
от матери плоду бактерии передаются через плаценту, в процессе родов и при грудном вскармливании.

Цитомегаловирус может проявить себя через два месяца после проникновения в тело женщины, симптомы похожи за простудное заболевание:

гипертермия и озноб;
головные боли;
бронхит и кашель;
боли в мышцах и костях.

Нельзя приписывать расстройство здоровья беременной ее особому состоянию. Нельзя назначать лечение самостоятельно без консультаций с гинекологом. Проявления заболеваний могут носить одинаковый характер, но различную этимологи.

К мерам защиты от цитомегаловируса относится:

защищенный секс с постоянным партнером;
использование индивидуальной посуды;
использование индивидуальных предметов личной гигиены;
дозированная физическая нагрузка на организм;
сбалансированная диета, прием витаминов;
позитивный настрой и прогулки на улице.

ПЦР мазок на цитомегаловирус способен защитить мать и плод от тяжелых последствий развития недуга.

С помощью ПЦР диагностики стали доступными исследования внутриутробного развития ребенка. Особую опасность здоровью плода представляет микоплазма и хламидии.

Перед планированием беременности женщина обязана сдать анализы и на другие виды инфекций — краснуха, токсоплазма, гепатит, вирус герпеса. После выявления наличия перечисленных вирусов, необходимо пройти терапевтическое лечение.

Мазок беременной способен дать информацию о наличии урогенитальной инфекции в родовых путях, своевременное устранение которой защитит малыша от заражения.

Забор выделений на мазок производят в любое удобное время при посещении женщиной гинеколога, специальной подготовки для этого не требуется.

После рождения у младенца тоже берут мазок на предмет выявления инфекции. У малышей берут соскоб с задней стенки гортани и слизь с конъюнктивы, мочу или слюну.

Показания к диагностике в первых триместрах беременности:

различные виды патологи беременности;
подозрение на хроническую форму инфекции;
обострение половых инфекций;
выявление чувствительности организма к некоторым медикаментам;
наличие инфекционного заболевания крови.

Важно! Не следует опасаться сдавать мазок на анализ во время беременности. Процедура забора материала не вредит развитию плода.

Большую опасность представляет не сдача анализов, а не выявленная инфекция, которая может причинить вред здоровью плода. Полимеразная цепная реакция сможет определить наличие скрытой инфекции, которая легко передается плоду через плаценту.

Часто скрытое протекание инфекционного заболевания принимают за общее недомогание беременной, ввязанное с особенностью положения. Важно в первые 12 недель пройти обследование и выявить скрытые патологии. Повторную диагностику проводят уже после назначенного курса терапии.

Что нужно для обследования беременной:

не использовать спринцевание и вагинальные суппозитории за три дня до диагностики;
не иметь половых контактов за три дня до забора биоматериалов;
последнее посещение туалета должно быть не позднее трех часов до забора мазка с шейки матки.

Если на анализ сдается кровь, нельзя употреблять сладкое накануне диагностики. Также запрещен прием любых медицинских препаратов внутрь и снаружи. Однако чаще для исследования проводят забор мазка из шейки матки.

источник

В современном мире существует множество способов обнаружить возбудителей заболеваний на разных этапах развития заболевания. Одним из таких методов является PCR (метод ПЦР или полимеразная цепная реакция), позволяющий выявить инфекцию на самом раннем этапе. Буквально одна единица ДНК или РНК уже могут указать на наличие того или иного возбудителя в организме при должном уровне подготовки пациента и профессионализма лаборантов медицинского учреждения.

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма. Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя. Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды,трихомонады,гонококки);
бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром. Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования. Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи.

Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ (вирус папилломы человека). Мочи достаточно 10 мл, мокроты – субстанции, размером со спичечную головку.

Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования:

кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак;
мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена;
как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0.9% наружное отверстие уретры. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором (своеобразный питательный агар для бактерий);
из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке;
как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 – 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры;
из ротоглотки забор происходит натощак. Придерживая кончик языка, зондом производят мазок с задней стенки глотки, по миндалинам или по небным дужкам. Не соприкасаясь со слизистой ротовой полости и зубами, зонд выводится и отправляется на пцр-исследование;
из конъюнктивы, предварительно очистив физиологическим раствором гнойные выделения, производят соскоб слизистой нижнего века от латерального к медиальному краю. Веко при этом придерживается медицинским работником во избежание соприкосновения зонда со слизистой глаза и ресницами.

Анализ на ПЦР является самым быстрым и достоверным способом на ранних этапах обнаружить инфекцию, но бывают и ложноположительные/ложноотрицательные результаты.

Для сохранения нервной системы как своей, так и сотрудников медицинского учреждения, следует правильно подготовиться к исследованию.

Перед исследованием ПЦР мужчинам следует помнить, чего делать нельзя:

мочиться за 3 часа до исследования;
производить спринцевание и стерильную обработку члена;
мыть член мылом, содержащим антибиотик;
заниматься сексом за двое суток до ПЦР на ИППП;

Женщинам перед тем как сдать мазок на ПЦР запрещено:

при соскобе из уретры запрещено мочиться за 3 часа до исследования;
использовать вагинальные растворы с дезинфицирующими свойствами;
за двое суток до исследования применять суппозитории для влагалища;
использовать антибиотики местно, в том числе и мыло с антибиотиком;
занятия сексом за 48 часов до исследования;
применять антибиотик внутрь влагалища и уретры;
спринцеваться;
принимать антибиотики. После последнего приема антибактериального препарата должно пройти не менее 4 недель;
сдавать ПЦР во время менструации.

Следует сдать на анализ первую мочу утром, ее среднюю порцию. Другими словами начинать мочиться следует в унитаз. Затем остановить акт мочеиспускания, подставить под уретру баночку для сбора мочи, продолжить мочиться в течении 2-3 секунд, затем снова остановить мочеиспускание и, убрав контейнер, закончить акт мочеиспускания в унитаз.

Женщинам и мужчинам перед тем как сдать ПЦР следует хорошо вымыть наружные половые органы для исключения попадания в мочу смегмы (смесь секрета сальных желез крайней плоти) и выделений из влагалища.

Баночка для мочи должна быть стерильной. Попросите контейнер в клинике, где вы сдаете анализ, либо заранее приготовьте баночку с плотно закрывающейся крышкой и прокипятите их не менее 10 минут.

Непосредственно перед сдачей ПЦР запрещено:

мочиться (необходима самая первая порция мочи за день);
изменять количество выпитой за сутки до исследования жидкости. Это необходимо, чтобы поддерживать обычный водно-электролитный баланс организма, в котором себя комфортно чувствует потенциальный возбудитель инфекции;
использовать уросептики;
применять мыло, содержащее в себе антибиотик;
заниматься сексом за 12 часов до исследования;
при менструации желателен забор мочи уретральным катетером для исключения попадания крови в контейнер с мочой;

Если один из пунктов был нарушен:

Следует воздержаться от проведения диагностики инфекций методом ПЦР. Если же все-таки анализ был сдан, следует его повторить через двое суток. Если при использовании антисептиков и антибиотиков результат оказался «хорошим» – не стоит радоваться. Скорее всего, при наличии определенных жалоб, это ложноположительный результат.

Расшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования. Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген. Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна. То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники. Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Метод ПЦР относится к группе обширных анализов. С помощью ПЦР анализа можно определить практически любое заболевание. К сожалению, это не самый дешевый метод исследования, поэтому его не назначают всем пациентам поголовно. Цены могут варьироваться в зависимости от клиники и количества исследований.

Существует полимеразная цепная реакция (анализы ПЦР) на 12 инфекций. Какие инфекции входят в ПЦР 12:

микоплазмы гениталиум (mycoplasma genitalium) и гоминис (hominis);
трихомонады (trichomonas);
хламидии (chlamydia trachomatis);
уреаплазмы (ureaplasma, включающая ureaplasma parvum (уреаплазмы парвум));
кандиды (candida);
гарднереллы (gardnerella vaginalis);
гонококк (neisseria gonorrhoeae);
антитела IgG, IgM;
герпеса двух типов.

Также есть упрощенная ПЦР 6 диагностика. Она исключает уреаплазму парвум, кандиды, гонококк, IgG, IgM, герпес обоих типов.

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

Сдавать анализ следует через 14 суток после известного контакта с ВИЧ-инфицированным человеком. Стоит помнить, что заразность этого вируса несколько преувеличена из-за тяжести нелеченного заболевания. Если произошел контакт через кровь, то тут шанс заразиться самый высокий, однако и он не превышает 85%. При остальных контактах вероятность заражения составляет от 1% до 10%.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

При отражении плюсов ПЦР следует отметить:

чувствительность. Как говорилось выше, даже единичный агент, оставленный возбудителем, позволяет обнаружить инфекцию на ее ранней стадии или если она протекает скрытно;
широкий спектр. Например, ПЦР 6 позволяет 1 исследованием выявить целых 6 возбудителей;
точность. Ложные результаты при данном методе исследования имеют место быть, но их количество сведено к минимуму;
скорость. Как правило, пациент уже на следующий день может забрать готовый результат ПЦР исследования.

стоимость. ПЦР-исследование не включено в список исследований в системе ОМС. Дорогое высокоточное оборудование требует оплаты своей работы;
требования к соблюдению техники исследования и к профессионализму сотрудников;
требования к подготовке.

источник

Высокоинформативный метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) дает возможность раннего выявления различных генетических и инфекционных болезней, протекающих остро или хронически. Причем выявить их можно еще на том этапе, когда они не проявляют себя никакими симптомами. Чаще всего к анализу ПЦР прибегают для обнаружения инфекций передающихся половым путем (ЗППП, ИППП).

Анализ ПЦР относится к молекулярному методу диагностики, который основан на многократном увеличения малых концентраций определенных фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) возбудителя в любом биологическом материале (мазке из шейки матки, влагалища, уретры, крови, слюны, мокроте и т. д.) и сопоставление его ДНК или РНК с базой данных известных видов возбудителей инфекций.

Методика разработана американцем Кэрри Мюллисом в 80-х годах прошлого столетия. В 1993 ученый стал лауреатом Нобелевской премией в области химии. Сегодня исследование ПЦР считается своего рода «золотым стандартом» для диагностирования подавляющего большинства инфекций. Анализ ПЦР повсеместно применяется в медицинской практике для уточнения характера болезни и постановки точного диагноза. Очень часто бывают случаи, когда все известные иммунологические, вирусологические и бактериологические методы не действуют. Тогда ПЦР становится единственным способом, с помощью которого можно выявить активную стадию заболевания.

Методика ПЦР нашла широкое применение в современной медицине благодаря ряду бесспорных преимуществ. Расскажем о них более подробно.

Многие из традиционных диагностических методик основаны на определении маркеров – белков, которые являются продуктами жизнедеятельности возбудителя болезни. Такой принцип диагностики может дать только опосредованное подтверждение патологии. Метод ПЦР обеспечивает прямое определение возбудителя, поскольку выявляет специфические участки ДНК патогенных организмов.

Методика ПЦР отличается высокой специфичностью благодаря тому, что позволяет выявлять фрагменты ДНК, характерные только для конкретного инфекционного агента. При использовании иммунологических методов остается вероятность получить ложный результат (ошибки в диагностике связаны с перекрестно-реагирующими антигенами). Что касается ПЦР, то здесь ошибки исключены, поскольку специфичность в данном случае задается нуклеотидной последовательностью праймеров.

Посредством этого метода определяются даже единичные болезнетворные микроорганизмы. Возбудители инфекций выявляются в организме человека даже тогда, когда другие методы диагностики не проясняют ситуацию (речь идет о различных иммунологических микроскопических и бактериологических способах исследования).

Приведем данные для сравнения. Чувствительность микроскопических и иммунологических методов составляет 103-105 клеток, а чувствительность ПЦР – 10-100 клеток в пробе.

Методика ПЦР основана на исследовании ДНК патогенных организмов. В процессе исследования определяются фрагменты РНК или ДНК, которые являются специфичными для конкретных возбудителей инфекций. Поскольку все нуклеиновые кислоты имеют сходный химический состав, при лабораторном анализе можно применять унифицированные методики. А это значит, что исследование одной пробы дает возможность выявлять сразу несколько возбудителей.

Данная методика не требует выращивания культур возбудителей, на которое уходит довольно много времени. Благодаря применению унифицированной технологии обработки материала и выявления продуктов реакции, а также автоматизированному процессу амплификации вся процедура исследования занимает лишь несколько часов.

Методика ПЦР дает возможность эффективно выполнить доклиническую диагностику (выявление возбудителей до появления симптоматики) и ретроспективную диагностику (определение патогенов после перенесенной болезни). Так, доклиническая диагностика имеет большое значение при обследовании пациента в инкубационном периоде возможного заболевания – после предполагаемого заражения до возникновения первых признаков.

Одним из важных преимуществ ПЦР является возможность использования для анализа биологических остатков или архивных материалов. Это дает возможность идентифицировать отцовство и личность.

На сегодняшний день методы ПЦР-диагностики продолжают развиваться. Усовершенствуется сама технология проведения анализа, а также появляются новые виды ПЦР. В медицинскую практику внедряются инновационные тест-системы для этой реакции. Благодаря такому быстрому развитию науки стоимость процедуры уменьшается, и теперь обследование ПЦР может применяться для многих категорий пациентов.

В основе этого метода диагностики лежит многократное удвоение данного участка РНК или ДНК. Этот процесс реализуется в лаборатории с использованием особых ферментов. В итоге формируется столько участков ДНК (РНК), сколько нужно для визуального исследования. Во время процедуры копируется лишь участок, соответствующий заданным условиям (если он присутствует в изучаемом образце).

Биологический материал, которые необходимо исследовать на наличие ДНК или РНК возбудителей помещают в амплификатор. (В зависимости от конкретной ситуации для анализа берут кровь, мочу, слюну, отделяемое из половых органов). Затем к образцам добавляют особые ферменты. Они связываются с РНК или ДНК патогенных микробов, и начинается синтез копий. Копирование представляет собой многоэтапный процесс, протекающий по типу цепной реакции. В результате возможно появление сотен или даже тысяч копий.

На следующем этапе диагностики результаты анализируются и сопоставляются с базой данных возбудителей инфекций.

Методика ПЦР не просто дает возможность определить вид патогенного организма, но и позволяет сделать выводы о количестве возбудителей инфекции в человеческом организме.
Сегодня применение подобных технологий открывает широкие возможности при исследовании мутаций, сращивания участков ДНК. В современной медицине метод начал применяться для определения отцовства, выявления новых генов и многого другого.

Благодаря своей универсальности метод ПЦР нашел широкое применение в урологии, гинекологии, пульмонологии, онкологии, гематологии, фтизиатрии, практике инфекциониста и других областях медицины.

Для ПЦР диагностики применяются различные биологические среды и жидкости, взятые из организма человека: мокрота, слизь, слюна, моча, кровь, соскоб эпителиальных клеток, ткани плаценты, плевральная жидкость, околоплодная жидкость, сок простаты и др.

При диагностике ЗППП (ИППП) анализу подвергаются выделения из мужских и женских половых органов. Для этого выполняют мазок или соскоб из уретры или шейки матки. Также для исследования используют мочу.

Для выявления инфекций (герпес, мононуклеоз, ЦМВИ, токсоплазмоз, ВИЧ, гепатиты В и С) на анализ берут кровь. При подозрениях на поражения нервной системы производят забор спинномозговой жидкости.

Для пульмонологических исследований используют плевральную жидкость и мокроту.

Для выявления внутриутробных инфекций анализу подвергают ткани плаценты и околоплодную жидкость.

— ВИЧ-инфекция (можно выявить вирус иммунодефицита человека ВИЧ-1).

— Вирусные гепатиты А, В, С, G ( РНК-HAV, ДНК-HBV, РНК-HCV, РНК-HGV).

— ИППП (инфекции, передающиеся половым путем) – уреаплазмоз, гарднереллез, хламидиоз, микоплазмоз, трихомониаз.

— Инфекционный мононуклеоз (ДНК вируса Эпштейн-Барр -ВЭБ).

— Цитомегаловирусная инфекция (ДНК-CMV).

— Герпетическая инфекция (ДНК- вируса простого герпеса ВПГ 1 и 2 типа).

— Туберкулез (микобактерия туберкулеза).

— Онкогенные вирусы – папилломавирусная инфекция (вирус папилломы человека (в том числе его онкогенные виды 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, и 59).

— Боррелиоз, клещевой энцефалит.

— Кандидоз (грибы рода Candida).

— Хеликобактерная инфекция (Helicobacter pylori)
и другие.

Пациенты, сдавшие материал для проведения ПЦР диагностики, рассчитывают на получение быстрого и точного результата. При этом нужно учесть один важный момент – достоверность диагностики зависит не только от профессионализма специалистов и возможностей медицинской лаборатории. Чтобы исследование было информативным, должен приложить усилия и сам больной. Так, необходимо строго придерживаться всех рекомендаций доктора и тщательно соблюдать правила подготовки к сбору материала. Очень важно не допустить загрязнения биологических образцов, иначе результаты обследования будут искажены.

Подготовка к процедуре не связана особыми сложностями. Достаточно запомнить несколько правил:

— Кровь на анализ ПЦР сдается натощак. Кровь берут из вены обычно с утра стерильной иголкой в специальный контейнер.

— В течение суток до забора материала показано половое воздержание при взятие мазка ПЦР на ИППП.

— Для анализа мочи на ПЦР берется первая порция, емкость должна быть стерильной.

Анализ ПЦР берут у мужчин и женщин в прививочном кабинете, это кровь из вены, слюну, мазки из глотки, миндалин, смывы из носоглотки и т.д. Метод забора не отличается.

ПЦР на ИППП сдают в женской консультации при гинекологическом осмотре у женщин, это мазки из влагалища, шейки матки, уретры. У мужчин во время посещения андролога или венеролога, это мазок из уретры.

Схема забора материала на ПЦР из носа

Схема забора материала на ПЦР с миндалин

Схема забора материала на ПЦР со слизистой глаз

Схема забора материала на ПЦР со слизистой щеки

Схема забора материала на ПЦР у женщин

Схема забора материала на ПЦР у мужчин

Пациентам не приходится долго ждать результатов ПЦР-обследования. На всю процедуру анализа обычно уходит от нескольких часов (ПЦР в реальном времени) до 2-10 суток. Как правило, результаты анализа на руки пациент получает через 2-5 дней, максимально до 10 дней, это зависит от вида анализа. Дольше всего делается ПЦР-диагностика крови на ВИЧ и гепатиты, а меньше всего мазки и соскобы — 2-3 дня.

Отрицательный результат говорит о том, что на данный момент в биологическом материале не выявляются следы возбудителей инфекции. То есть инфекция, по поводу которой проводилось обследование, отсутствует.

Положительный результат говорит об обнаружении следов возбудителя в биологических образцах. Это значит, что в данное время в организме человека присутствует инфекция.
Возможны случаи, когда ПЦР дает положительный результат, но активного инфекционного процесса не наблюдается. Речь идет о явлении, которое называют «здоровым носительством». Лечение таким пациентом не требуется, но они должны находиться под постоянным динамическим наблюдением. Такие ситуации характерны для вирусных инфекций: вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ), гинитальный герпес, цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ), вирус папилломы человека(ВПЧ), при которых для исследования берутся образцы из местных очагов (соскоб уретры, цервикального канала, слюна). При этом нельзя забывать, что здоровый носитель может передать инфекцию другим людям. Кроме того, не исключена активация инфекционного процесса. В случаях, когда ПЦР дает положительный результат при исследовании крови, это уже нельзя считать носительством. Таким пациентам необходимо специфическое лечение заболевания вызванного обнаруженным возбудителем.

Количественные показатели не имеют общих градаций. Их оценивает врач индивидуально для каждой конкретной инфекции. Количественный результат дает возможность определить насколько активна инфекция и выявить стадию процесса.

Для оценки эффективности методики есть три критерия:

— Точность – выявление инфекции (или ее отсутствия) с высокой степенью вероятности.

— Специфичность – точность определения конкретного возбудителя.

— Чувствительность – возможность идентификации возбудителя даже при малом количестве генетического материала в биологических образцах.

При использовании метода ПЦР получение ложноположительных результатов практически невозможно (то есть, если возбудитель отсутствует, то положительной проба не будет).

Ложноотрицательный результат возможен, но такое происходит довольно редко. Подобные ситуации возникают, если инфекция на момент исследования неактивна. К примеру, хроническая инфекция вне активности или же латентная инфекция.

источник