Нормы анализа фрагментация днк спермограмма

Согласно последним статистическим данным, средний показатель бесплодия в мире составляет 15%. Каждая восьмая пара испытывает проблемы с зачатием первенца. У каждой шестой возникают сложности с рождением последующих детей. В 50% это случается из-за повреждения генетического материала. Если показатели спермограммы нормальные, есть смысл пройти анализ фрагментации ДНК сперматозоидов.

Сперматозоид — это самая мелкая клетка в организме человека, состоящая из головки и хвостика. Главная задача мужской половой клетки — быстро добраться к яйцеклетке, внедриться в неё и поделиться генетической информацией.

Важнейший показатель качества сперматозоидов — это целостность генетической структуры. Фрагментацией называется нарушение структуры спирали ДНК. Из-за этого происходит повреждение информации, которую несёт в себе половая клетка мужчины. Что, в свою очередь, существенно снижает вероятность нормального развития зародыша.

Одна из основных причин этой неприятной патологии — пониженный синтез транспортных белков — протаминов. Они содержатся в хромосомах и выполняют очень важную защитную функцию, предохраняя ДНК от агрессивных внешних факторов.

Половые клетки, имеющие фрагментацию ДНК, на анализе спермограммы не обнаруживаются, ведь они ничем внешне не отличаются от своих здоровых собратьев и способны к оплодотворению яйцеклетки. Однако из-за повреждённого генетического материала происходят многочисленные сбои уже на ранних стадиях развития плода. Обычно всё заканчивается выкидышем или замершей беременностью.

Важно понимать, что повреждённые сперматозоиды — это бракованный материал, не подлежащий восстановлению. Невозможно искусственно провести дефрагментацию ДНК.

Спермограмма не может выявить эту патологию, для этих целей разработана современная методика под названием TUNNEL. К сожалению, далеко не все пары, страдающие от бесплодия, знают об этом методе изучения половых клеток.

В некоторых случаях, если нарушения в цепочке генов не слишком масштабные, целостность возвращается природным путём. Яйцеклетка восстанавливает структуру мужской ДНК при помощи своего генетического материала. Однако это встречается довольно редко.

Существуют две внутренние причины, способные вызвать нарушение целостности ДНК в сперме. Первая — это сбои в процессе образования семенной жидкости. Дело в том, что сперматозоиды созревают в придатках мужских яичек. Одновременно с этим происходит активизация хроматинового комплекса, состоящего из молекул ДНК и специфических белков в ядрах клеток. Случается, что этот процесс идёт не так, как положено, в результате происходят многочисленные повреждения генетических цепочек.

В половой системе у мужчин есть природный механизм контроля половых клеток. Каждый сперматозоид проверяется на соответствие стандарту. В случае выявления каких-либо отклонений в строении или в качестве наследственного материала, он выбраковывается и немедленно уничтожается.

Случается, что эта защитная система работает неправильно. Может наблюдаться такое явление: когда здоровые экземпляры не проходят контроль и организм от них избавляется, а дефективный материал допускается к участию в оплодотворении. Сперма мужчины с этой патологией неполноценна, так как содержит смесь из повреждённых и здоровых клеток.

Кроме внутренних факторов развития патологии, существует несколько внешних причин:

Острые и хронические заболевания, особенно перенесённые без соответствующей медицинской помощи и не долеченные до конца.
Воспалительные процессы, локализованные в мочеполовой системе, могут очень активно повлиять на репродуктивные свойства человека.
Многие представители сильного пола страдают от варикозного расширения вен, оплетающих яички (варикоцеле). Это распространённое заболевание является главной причиной бесплодия у мужчин. Патологию легко выявить при самостоятельном осмотре, а также по характерным симптомам.
Высокая температура без каких-либо видимых причин, которая длится довольно долго и не проходит.
Оксидативный стресс — множественные повреждения клеток в результате их окисления.
Длительное воздействие ионизирующего излучения, например, рентгеновские лучи.
Курс химиотерапии.
Чрезмерное употребление алкоголя и прочие вредные привычки.

Особенно губительно воздействие курения. Это доказано многими исследованиями.

Сейчас существует немало методик для избавления от этой вредной привычки. Будущему отцу желательно отказаться от употребления никотина за 2−3 месяца до зачатия.

Грамотное планирование семьи обязательно включает в себя проверку качества мужской спермы. Для рождения полноценного здорового ребёнка требуется соответствующий генетический материал. Это поможет сделать стандартный анализ — спермограмма.

Параметры проверки мужского семени:

концентрация;
строение;
подвижность;
соответствие определённым нормам;
кислотность;
содержание лейкоцитов;
цвет;
запах.

Здоровая сперма должна быть белой или кремовой, допускается розовый оттенок. Запах чем-то напоминает каштан.

В результате этого теста можно определить причину проблем с оплодотворением. Если спермограмма не выявила никаких патологий, а зачать ребёнка не выходит — причина кроется именно в нарушениях ДНК.

Недостаток спермограммы в том, что исследуются только внешние свойства сперматозоида. Классический анализ не способен определить качество наследственной информации. Для того чтобы выявить фрагментацию ДНК, придётся воспользоваться более точными и продвинутыми методиками. Наиболее совершенная на сегодняшний день техника исследования семенной жидкости, которая позволяет с большой точностью определить процентное содержание фрагментированных сперматозоидов, это — TUNNEL.

Правила для проведения анализа:

в течение недели нельзя принимать горячую ванну;
походы в сауну и баню также исключаются;
половое воздержание и отказ от алкоголя на тот же период;
сбор эякулята в день проведения процедуры, используется специальная пластиковая ёмкость.

Для проведения анализа собранный эякулят подвергают воздействию специальных реактивов, в результате чего дефективные клетки начинают существенно отличаться от здоровых. Полученный таким образом препарат попадает под микроскоп, где тщательно исследуется опытным медицинским специалистом.

Исследователь сразу же выявляет наличие клеток с фрагментированной ДНК. Их количество подсчитывается и вычисляется соотношение здоровых и больных экземпляров.

Индекс фрагментации:

До 15% — норма. Оплодотворению ничего не мешает и беременность должна наступить природным путём.
От 15 до 25% — зачатие возможно, но придётся подождать.
Начиная от 30% вероятность забеременеть естественным способом снижается, может потребоваться процедура искусственного оплодотворения — ЭКО.
Если фрагментировано более 50% сперматозоидов, самостоятельно зачать не получится. ЭКО тоже не всегда помогает. Наилучший вариант в такой ситуации — это интрацитоплазматическая инъекция (ИКСИ).
Если повреждено более 60% половых клеток, поможет лишь донорская семенная жидкость.

Результат исследования выдаётся пациенту в виде фотографии с описанием, в нём указывается процентное содержание повреждённых клеток. Врач даёт пациенту подробные рекомендации для успешного зачатия ребёнка.

Пройти анализ на фрагментацию можно почти в любой государственной клинической лаборатории, оборудованной современной аппаратурой. Процедура проводится бесплатно, а результат можно получить уже через несколько дней. Для создания более целостной картины и получения точных данных рекомендуется сделать несколько тестов.

Некоторые частные лаборатории выдают результат исследования в тот же день. Цена такого удовольствия в столице составит 5−10 тыс. рублей.

К сожалению, многие мужчины не подозревают о своём бесплодии, предпочитая сваливать всё на женщин. Далеко не каждый пойдёт сдавать спермограмму, а про исследование дефрагментации ДНК кое-кто даже и не слышал. Всё это способствует всеобщему росту бесплодия в стране.

Существует несколько основных признаков, которые должны насторожить представителей мужского пола, а также навести на мысль о походе к врачу.

Причины для беспокойства:

несмотря на все старания в течение нескольких лет зачатие ребёнка не происходит;
опыт неуспешного искусственного оплодотворения;
выявление патологий эмбриона на ранних стадиях развития;
частые случаи выкидыша у жены без видимых на то причин и каких-либо патологий репродуктивной системы;
расширенные вены на яичках и семенном канатике;
повышенная температура тела на протяжении нескольких месяцев.

Безусловно, все эти признаки ещё не означают, что у мужчины проблемы с ДНК сперматозоидов. Необходим осмотр врача, он назначит все необходимые исследования, на основе которых поставит правильный диагноз.

Действенных методов коррекции дефрагментированной ДНК в мужских половых клетках, к сожалению, пока не найдено. Но поиски решения проблемы постоянно ведутся. Проводятся многочисленные исследования. Недавно выяснилось, что введение в организм веществ с антиоксидантными свойствами способствует уменьшению количества повреждённых генетических цепочек. Однако, если нарушения вызваны токсинами или высокой температурой, положительного результата не наблюдается.

Ещё одно открытие основано на наблюдении за образом жизни и питанием большого количества мужчин. В результате этого исследования выяснилась взаимосвязь между потреблением фолиевой кислоты и образованием повреждённых клеток. Диета с низким содержанием витамина В9 способствует повышению риска фрагментации в спиралях ДНК.

источник

Фрагментация ДНК сперматозоидов – это показатель, который начали исследовать относительно недавно. Однако такое исследование стало настоящей революцией в сфере определения причин мужского бесплодия. Анализ помогает определить полноценность генетического материала в сперматозоидах, требует специальных реагентов, а также хорошего технического оснащения лаборатории, поэтому стоимость такого исследования довольно высока. В данной статье мы обсудим суть проводимого анализа, его цену, условия сбора материала, возможную расшифровку получаемых результатов.

Многие люди привыкли полагать, что наличие или отсутствие бесплодия определяет спермограмма. На деле же показатели, ею отображаемые, сильно отличаются от анализов на фрагментацию. В спермограмме отражается качественный и количественный состав эякулята, его объем, физические характеристики. В тестах на ДНК определяется количество сперматозоидов, которые несут качественный генетический материал, а значит, количество половых клеток, способных образовать полноценную зиготу с яйцеклеткой.

В некоторых источниках данные исследования подаются как «фрагментация ДНК спермограммы». Такое название считается ошибочным, поскольку никакой взаимосвязи анализ на ДНК со спермограммой не имеет. Даже сбор материала осуществляется для каждого исследования по отдельности.

Фрагментация ДНК сперматозоида – это процесс разрыва цепочек ДНК, которые содержатся внутри его головки, выполняя основную роль половой клетки – передачу генетического материала. Данный процесс считается патологическим, поскольку влияет на возможность зачатия, нормального развития эмбриона, успешность вынашивания ребенка.

Оплодотворение яйцеклетки фрагментированным сперматозоидом фактически не дает нормальной зиготы, а если зачатие случилось, то начинаются проблемы с присоединением плаценты, развитием эмбриона. Как следствие, часто случаются выкидыши.

При этом содержание сперматозоидов в эякуляте не нарушается, иные показатели спермограммы также остаются нормальными. Единственное отклонение общего анализа спермы, которое иногда замечается при фрагментированности клеток, – это показатели нормальной морфологии клеток.

Тест на фрагментацию сдается при невозможности объективно установить причину отсутствия у пары детей с помощью обычных анализов. Поводом для исследования также могут стать:

Беспричинное бесплодие.
Многократные выкидыши.
Возраст мужчины после 45 лет.
Варикоцеле.
Подготовка к процедуре ЭКО или ИКСИ.
Плохие показатели морфологии клеток, отражаемые спермограммой.

Исследование нужно провоодить при варикоцеле.

Сдать анализ на фрагментацию ДНК сперматозоидов можно в частных поликлиниках, лабораториях, а также в центрах планирования семьи. Учитывая то, что для проведения теста используются различные методы, пациентам приходится выбирать, но на результат выбора чаще влияет не суть или эффективность методики, а цена проводимого исследования.

Halosperm тест являет собой исследование хроматина сперматозоидов. Этим тестом отображается не уже имеющиеся нарушения структуры ДНК, а склонность цепочек к денатурализации, поэтому прогнозирующую способность данного теста нельзя назвать достаточно высокой. Цена его составляет около 4500-5000 рублей.

TUNEL-тест – инновационная методика тестирования спермиев на фрагментацию ДНК. Путем смешивания специального энзима с исследуемым материалом и последующим его рассмотрением под микроскопом удается проанализировать соотношение фрагментированных клеток относительно здоровых. Разница видна сразу, поскольку фрагментированный сперматозоид выглядит четко окрашенным определенным цветом, а здоровая клетка распределяет энзим как внутри себя, так и вокруг.

Результаты TUNEL-теста имеют высокую прогнозирующую способность. Сама методика считается максимально точной для таких исследований. Цена анализа составляет приблизительно 10000 рублей, хотя некоторые лаборатории предлагают сниженную цену – 7500-8000 рублей.

Готовиться к исследованию на фрагментацию половых клеток мужчине нужно так же, как и к проведению спермограммы, а именно:

Три дня соблюдать половой покой.
Отказаться от бани, горячего душа, тесного белья.
Исключить употребление алкоголя, никотина, лекарственных средств.

Где собирать материал, решает сам пациент, но отдать свое предпочтение лучше именно лабораторным условиям, для сохранения чистоты материала, а также его целостности, ведь когда на улице температура -30°С, то избежать замораживания контейнера чрезвычайно тяжело. Воздействие высокими или низкими температурами может стать причиной получения недостоверных данных.

Перед сдачей анализов следует отказаться от бани и горячего душа.

Инструкция сбора спермы для анализа фрагментации и спермограммы одинакова: необходимо добиться эякуляции вручную, поместить семенную жидкость внутрь стерильного пластикового контейнера, не касаясь его внутренних стенок, и сдать на исследование на протяжении часа после сбора.

Сдав анализ единожды, необходимо быть готовым к повторной его сдаче, ведь показатели по истечении некоторого отрезка времени могут отличаться из-за устранения причины фрагментации или изменений условий жизни. Чаще всего повторно сдают анализ мужчины после 30 лет, имеющие вредные привычки.

Результаты анализов пациент получает на руки, поэтому имеет возможность рассмотреть показатели самостоятельно. Уровень фрагментации ДНК сперматозоидов отображается в процентах, а расшифровывается следующим образом:

До 15% – возможно естественное оплодотворение.
15-25% – естественное оплодотворение затруднено.
Фрагментация превысила 30% – показание для ЭКО.
Количество спермиев с разрывами ДНК превысило 50% – показание для ИКСИ.
Фрагментация больше 60% – показание для использования донорского материала.

Фрагментация у здоровых мужчин обычно не превышает 15%. Даже если фрагментированный спермий попадает в яйцеклетку, она может самостоятельно восстановить поврежденную структуру его ДНК. Наилучшая способность к этому сохраняется у молодых будущих матерей. Стоит отметить, что при фрагментированных ДНК в сперматозоидах до 30% естественное оплодотворение считается возможным, но оно может занять достаточно длительное время, поэтому паре лучше запастись терпением.

Если показатель будет превышать этот порог, то лучше прибегнуть к методам искусственного оплодотворения. Методика ИКСИ позволяет выбрать сперматозоид для оплодотворения с нормальной структурой ДНК, что уменьшает риски выкидышей или аномалий развития эмбрионов.

Как видно из изложенного выше материала, спермограммы не всегда достаточно для точного определения причины бесплодия пары. Благодаря развитию науки нынче можно заранее определить возможность мужчины нормально зачать ребенка, а также предпринять необходимые меры в случае нарушения или утери такой возможности.

источник

Как показывает статистика, в ряде стран степень распространения бесплодия составляет 8-29%, а по всему миру – 15%. При этом у каждой восьмой пары не получается зачать первого ребенка. Каждая шестая пара испытывает трудности с рождением второго и последующих детей. В половине случаев это связано с проблемами сильного пола, то есть с измененными параметрами мужского семени, что еще носит название «фрагментация ДНК». За последние два десятка лет тенденция эта только увеличивается: с 30 до 50%.

При необходимости сделать соответствующий анализ, нужно определить степень фрагментации ДНК. Но не каждый мужчина знаком с приведенным термином, и у него может возникнуть немало вопросов. Поэтому стоит его расшифровать подробнее.

Под данным определением понимается степень повреждения цепочки ДНК, которая является показателем качества половых клеток и говорит об уровне фертильности мужчины. Разрывы спирали ДНК приводят к тому, что целостность генетической информации нарушается. В результате вероятность рождения ребенка существенно сокращается.

Зачастую фрагментация ДНК случается из-за снижения протаминов. Это такие специальные транспортные белки, которые содержатся в хромосомах. Они выполняют главную защитную функцию – предотвращают повреждения цепочки ДНК под воздействием внешних факторов.

Наличие фрагментации ДНК в половых клетках оказывает непосредственное влияние на созревание эмбриона в ранний период и формирование бластоцисты. Что характерно, сперматозоиды даже с высокой степенью фрагментации способны оплодотворить женские половые клетки, но впоследствии на ранней стадии развития эмбриона процесс может остановиться.

Нарушение генетической информации в сперматозоидах может быть вызвано разными факторами, которые носят как внутренний, так и внешний характер. Мужское бесплодие может наступать из-за многочисленных нарушений разных систем организма, таких как:

половая;
эндокринная;
нервная;
кровеносная;
иммунная и пр.

Главная задача мужской половой клетки заключается в доставке яйцеклетке здорового материала без каких-либо повреждений. Только в этом случае после оплодотворения последней эмбрион будет полноценно и нормально развиваться. В противном случае могут быть различные патологии. Из-за чего же случается фрагментация ДНК?

К внутренним факторам относятся две причины. Первая из них заключается в неполноценном развитии семенной жидкости. Созревание мужских половых клеток происходит в придатках яичек. В это время активируется хроматин, который располагается в ядре клетки. Именно он отвечает за подвижность сперматозоидов. В некоторых случаях процедура может пойти неправильно, и тогда спираль ДНК повреждается.

Второй внутренний фактор заключается в неправильной отбраковке половых клеток. Рождение сперматозоидов происходит в семенниках. Особенность мужского организма заключается в способности определять состояние половых клеток. Если в сперматозоидах наблюдаются те или иные отклонения в генетическом плане либо отличия по своему строению, то организм сам избавляется от них. Но иногда сам процесс отбраковки протекает неправильно. В этом случае эякулят будет содержать как здоровые клетки, так и поврежденные.

Помимо внутренних причин, фрагментация ДНК клеток может происходить вследствие ряда внешних факторов. К ним можно причислить наличие некоторых заболеваний, протекающих в острой или хронической форме. Разрушение половых клеток может быть вызвано воспалением органов мочеполовой системы. Особенно это проявляется в тех случаях, когда какое-либо заболевание не было полностью вылечено.

Нередко причиной служит и такое распространенное среди мужчин заболевание, как варикоцеле. Обычно патологию легко обнаружить по расширению вен в яичках. Но более точный диагноз установит соответствующее обследование. Но кроме этого, причинами могут быть:

высокая температура в течение достаточно длительного периода времени, при отсутствии явных признаков и симптомов;
наличие оксидативного стресса;
облучение рентгеновскими лучами;
прохождение курса химиотерапии;
вредные привычки.

Что касается последнего пункта, то фрагментация ДНК сперматозоидов случается из-за курения.

В настоящее время существует множество способов борьбы с этой вредной привычкой. И если есть желание растить детей, следует полностью отказаться от нее. И чем раньше, тем лучше!

Для рождения полноценно здорового ребенка нужен хороший наследственный материал. А чтобы определить состояние мужских половых клеток, проводится стандартный анализ эякулята. Результат такого исследования покажет вероятные причины нарушения оплодотворения. Спермограмма также позволяет определить строение, концентрацию, степень подвижности мужских половых клеток, а заодно и проверить их на соответствие физиологической норме. Также в задачу анализа входит определение кислотности семенной жидкости.

Кроме того, данное исследование позволяет определить количество лейкоцитов, которых в норме не должно быть больше одного млн в миллилитре семени. Важным параметром выступает цвет и запах. Здоровая семенная жидкость имеет белый, кремовый или чуть розовый оттенок, а по запаху напоминает каштан. При наличии каких-либо отклонений требуется более тщательное обследование, решение о котором принимает лечащий врач на основе полученного результата.

Однако специалисты считают, что стандартный анализ не может определить, была ли фрагментация ДНК. Методы обследования просто не позволяют это сделать, так как спермограмма в основном определяет только физические параметры семенной жидкости. Поэтому диагностирование цепочки ДНК этим способом произвести невозможно, и специалисты рекомендуют использовать другую распространенную методику под названием TUNEL.

Многие специалисты рекомендуют исследовать цепочку ДНК именно данной методикой. Исследование позволяет определить количество (в %) поврежденных половых клеток. Исходя из результатов, можно подобрать необходимые способы лечения в целях повысить мужские способности к оплодотворению.

После сдачи эякулята в него добавляются специальные реагенты, и дальнейшее исследование происходит с использованием микроскопа. При этом количество здоровых и поврежденных сперматозоидов четко прослеживается. Опытный исследователь быстро и безошибочно выявит изменение ДНК. Фрагментация спермы в этом случае проявляется в том, что поврежденные половые клетки существенно отличаются по своему внешнему виду.

Результат исследования выдается только квалифицированным специалистом на руки пациенту в виде фотографии с изображением клеток. Важным параметром обследования является процентное соотношение здоровых клеток к фрагментированным. В норме количество поврежденных клеток не превышает 15%.

Многие мужчины не только не представляют, что такое фрагментация ДНК, норма этого показателя им тоже неизвестна. Как, впрочем, и то, в какой момент нужно пройти обследование. По этой причине и наблюдается рост бесплодия и возникновение различных заболеваний. В связи с этим стоит привести случаи, когда следует хорошо задуматься:

Семья на протяжении длительного периода времени не может зачать ребенка.
В прошлом было несколько попыток искусственного оплодотворения.
Неудовлетворительное состояние эмбриона.
У любимой второй половинки наблюдаются частые случаи выкидышей, но дело явно не в ней.
Возраст мужчины 45 и более лет.
Наличие варикозного расширения вен семенного канатика.
Три месяца и более у мужчины наблюдается повышенная температура.

Что касается первого случая, то нередко при этом женщины проходят обследование, в ходе которого выясняется, что они полностью здоровы, но беременность не наступает. В этом случае обследоваться должны и мужчины.

Обследование на фрагментацию половых клеток назначает личный лечащий врач и только при определенных обстоятельствах.

Теперь известно, что такое ДНК фрагментация, «где сдать» – это следующий вопрос, который может возникнуть. В настоявшее время практически любая лаборатория с современным оборудованием занимается исследованием мужского семени. Сдать анализ можно практически в любом государственном медицинском учреждении на бесплатной основе. Только ожидание результата может затянуться на несколько суток. При обращении в одну из частных лабораторий результат будет доступен в течение одного дня.

Стоит помнить, что каждое исследование отличается своим результатом. Поэтому для достоверности лучше сдать несколько анализов подряд. Только так врач может собрать все воедино и установить точный диагноз.

До некоторого момента времени было невозможно изменить показатель фрагментации ДНК в лучшую сторону. Но после проведенных не так давно исследований было доказано обратное. Снижение фрагментации достигается путем ввода в организм пациента антиоксидантов. Но в некоторых случаях анализ фрагментации ДНК сперматозоидов не подтверждает положительный результат.

К примеру, если изменение клеток вызвано длительным воздействием высокой температуры либо токсических веществ.

После того как ученые проанализировали питание многих мужчин, они пришли к одному интересному выводу. Чем большее количество фолиевой кислоты в пище, тем меньше аномальных клеток образуется. Поэтому следует за 3-4 месяца до планирования беременности включить в рацион кислоту, которая содержится в разных продуктах. Среди растительных продуктов это:

зелень;
злаковая, бобовая культура;
бананы;
цитрусовые;
морковь;
орехи.

Кислота содержится и в продуктах животного происхождения:

печени и мясе говядины, свинины и баранины;
лососе;
яичном желтке.

Также она присутствует и в молочных продуктах.

При тепловой обработке некоторых продуктов потеря кислоты составляет до 90%. Поэтому по возможности их лучше употреблять в сыром виде. Включив в рацион эти продукты, можно быть уверенным в том, что анализ на фрагментацию ДНК покажет положительный результат. А это значит, что за здоровье будущего малыша волноваться не придется.

источник

Под фрагментацией ДНК сперматозоидов следует понимать нарушение целостности их цепочек. Чем сильнее повреждения, тем хуже качество генетического материала, следовательно, низкая вероятность наступления оплодотворения.

Если повреждения несущественны, яйцеклетка в состоянии устранить их самостоятельно. Это зависит от характера фрагментации, количества поврежденных участков, качества самой яйцеклетки (обычно ее определяет возраст и состояние репродуктивного здоровья женщины).

Причины нарушения ДНК бывают двух типов: внешние и внутренние. Внутренние это:

Сбой механизма отбраковки. У здоровых мужчин непригодные к оплодотворению сперматозоиды, вырабатываемые семенниками (тестикулами), устраняются. Но если функционирование механизма нарушено, они попадают в сперму, снижая ее качество и способность к зачатию.
Нарушение процесса вызревания. Созревают сперматозоиды в придатках яичек, в ходе вызревания происходит конденсация хроматина ядра клеток, отвечающая за активность сперматозоидов. Если процесс протекает с отклонениями, это становится причиной фрагментации их ДНК.

Прохождение лечения химио- и рентгенотерапией.
Повышенная температура тела.
Варикоз сосудов семенного канатика.
Высокотемпературные воздействия.
Наличие хронических заболеваний, воспалений, инфекций.
Оксидативный стресс при переходе через эпидидимий. Повреждения вызывают свободные радикалы, либо сперматозоиды выходят невызревшими.

Также нарушение цепочки ДНК вызывают токсины, прием антибиотиков, заболевания мочеполовой системы, вредные привычки.

Чтобы выявить разрыв ДНК-цепочки сперматозоидов, проводится специальный тест. Спермограмма в данном случае неинформативна. Она показывает только концентрацию сперматозоидов в эякуляте, их активность. Тест на фрагментацию показан:

при мужском бесплодии, если отсутствуют другие провоцирующие его факторы;
если попытки искусственного оплодотворения не дали результата;
повторяющиеся выкидыши;
если эмбрион плохого качества;
мужчинам в возрасте от 45 лет;
после криохранения образца спермы перед ЭКО (экстракорпоральным оплодотворением);
при варикозе сосудов семенного канатика;
если в течение трех месяцев имела место повышенная температура тела.

Также процедуру должны пройти мужчины, работающие в условиях повышенной вредности.

Для проверки целостности ДНК спермы проводится tunel-тест, предполагающий микроскопическое исследование сперматозоидов. Образец спермы пациент должен собрать в специальный стерильный контейнер с крышкой. Важно! Презерватив не подходит для этой цели, так как компоненты, входящие в его состав, могут оказать негативное влияние на подвижность сперматозоидов. Также при транспортировке емкости с генетическим материалом необходимо соблюдать температурный режим, составляющий диапазон температур в пределах +27 до +37 градусов Цельсия.

Чтобы получить точный результат, анализ должен быть проведен в течение часа с момента забора образца. Для этого лаборант добавляет в эякулят реактив. Он, вступая в реакцию с семенной жидкостью, заполняет разрывы ДНК флуоресцирующим нуклеотидом, делая видимыми фрагментированные сперматозоиды. Лаборант проводит их подсчет, который указывается в процентах.

Для получения полной картины параллельно проводится электронно-микроскопическое исследование и спермограмма.

Чтобы тест был максимально точным, перед сдачей образца необходимо в течение 2-7 дней: воздержаться от половых контактов, приема лекарственных препаратов, посещения бань. Важно соблюдать режим питания, избегать употребления алкоголя, не курить. Перед забором спермы нужно освободить мочевик.

При повторных проведениях анализа рекомендуется соблюдать последовательность и длительность подготовительных мероприятий, так как это может повлиять на результат.

После анализа выдается результат с индексом теста и снимок, на котором зафиксированы фрагментированные сперматозоиды. Индекс – это соотношение между поврежденным и здоровым, способным к оплодотворению, генетическим материалом. В норме показатель не должен быть выше 15%. Это говорит о том, что спермиев с разрушенной цепочкой ДНК меньше, чем здоровых, поэтому репродуктивное здоровье мужчины в порядке и существует высокая вероятность естественного зачатия.

При индексе выше 15%, но ниже 30% сохраняется возможность оплодотворения яйцеклетки естественным способом, но для этого может потребоваться много времени.

Если количество поврежденных сперматозоидов в эякуляте составляет 30-50%, специалисты считают, что наступление беременности естественным путем маловероятно, поэтому рекомендуют ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение), внутриматочную инсеминацию (репродуктивная методика, предполагающая введение здоровых, полученных и отобранных заранее сперматозоидов в цервикальный канал) или ИКСИ. Так, при показателе индекса более 30%, врачи-репродуктологи рекомендуют проводить ЭКО. Если фрагментированный генетический материал составляет 50% и выше, экстракорпоральное оплодотворение малоэффективно. Целесообразно применять интрацитоплазматическую инъекцию сперматозоидов (ИКСИ). При индексе 60% и больше, шансы на успешное оплодотворение минимальны. Проводится ИКСИ, либо берется донорская сперма.

Еще недавно отсутствовала возможность выявить поврежденные сперматозоиды, не говоря о том, чтобы это лечить. Сегодня эта проблема поддается лечению. Внедрение инновационных медицинских методик позволяет успешно восстанавливать фрагментированную ДНК сперматозоидов.

Для этого следует устранить или ограничить воздействие факторов, провоцирующих мужское бесплодие: лишний вес, вредные привычки (курение, алкоголь), воздействие токсических, химических веществ (работа на вредных производствах). Второй этап – комплексная диагностика, устранение различных воспалительных процессов в организме, в том числе заболеваний репродуктивной системы мужчины. Параллельно проводится лечение антибактериальными, противовоспалительными медпрепаратами (при необходимости). Обязательно назначаются витаминные комплексы, антиоксиданты, позволяющие восстановить мужское здоровье и способствующие формированию здоровых сперматозоидов.

Длительность лечения может составлять 3-6 месяцев. Иногда может понадобиться больше. Если терапия оказалась малоэффективной, и количество здоровых сперматозоидов не превышает 20-30%, врачи предлагают паре услугу ИКСИ. Так, из эякулята репродуктологи искусственным путем отбирают здоровый, способный к оплодотворению, генетический материал. Затем его подсаживают в яйцеклетку женщины.

В случае большого количества спермиев с фрагментированным ДНК, также проводиться операция по извлечению их непосредственно из яичек. Это обусловлено тем фактом, что во время эякуляции повышается процент поврежденных клеток.

Влияет ли прием лекарств на анализ на фрагментацию ДНК?
На фрагментацию ДНК влияет прием некоторых лекарственных средств и химиопрепаратов.

Как улучшить фрагментацию ДНК?
Сначала необходимо разобраться в возможных причинах фрагментации и затем убрать ее причину, если это возможно.

источник

Состояние мужских репродуктивных органов, выполняют ли они свою функцию, каковы шансы мужчины стать отцом – об этом легко узнать из стандартной спермограммы. Но иногда показателей этого анализа недостаточно. Чтобы прогноз был более достоверным и точным, необходимо оценить такой показатель, как фрагментация ДНК (повреждение генетического кода в сперматозоидах).

Исследование появилось благодаря последним достижениям науки в области изучения генетического кода человека. Каждый сперматозоид несет в головной части информацию – генетический материал мужчины. Задача носителя – проникнуть в яйцеклетку, довести свою ДНК до ядра, слить код с материнским и образовать новую клетку с уникальным набором наследственной информации.

Чтобы процесс прошел безупречно, в головке сперматозоида должна быть обеспечена непрерывность цепочек ДНК. В этом случае наследственный код сохранен, а клетка годится к производству новой жизни. Но существуют факторы (внутренние и внешние), нарушающие целостность связей.

Плохая отбраковка материала. При образовании сперматозоидов неминуемо возникают ошибки, и неполноценные спермии в норме должны быть уничтожены. Для них характерна ДНК фрагментация. Но программа уничтожения дает сбой, и бракованные клетки попадают в эякулят.
Ошибки при созревании половых клеток. В этом случае происходит повреждение хроматина — материала, заполняющего ядро клеток и являющегося основой хромосом. Образуются нарушения связей, разрывы в структуре ДНК.

Воздействие рентгеновских лучей, химиотерапии.
Влияние повышенных температур внутри тела и извне.
Длительные хронические воспаления в половой сфере, варикоцеле.
Повреждение клеток свободными радикалами (активными формами кислорода). Они образуются вследствие неправильного питания, стресса, малой подвижности, заболеваний, химических зависимостей, интоксикации.

ДНК с дефектами структуры – это поврежденная информация о человеке, которая сравнима с книгой, в которой страницы с оторванными углами или замазанными строчками.

Спермограмма в общих чертах – подсчет клеток, оценка их морфологии, то есть строения, внешнего вида и двигательной активности. Но этот анализ не дает точного ответа на вопрос: сколько среди сперматозоидов с целостным генетическим материалом, а сколько — с фрагментацией ДНК. В то же время все больше исследований указывают на то, что доля хромосомных аномалий в головке сперматозоида исключительно важны для зачатия и сохранности беременности.

Фрагментация ДНК клеток определяется только специальными, углубленными исследованиями. Стандартное изучение спермия под микроскопом не даст нужной информации о состоянии цепочек. В этом заключается главное отличие оценки фрагментации ДНК от спермограммы.

При хорошей морфологии мужских половых клеток и их подвижности в границах нормы можно получить плохой результат по структуре генетических цепочек.

Анализ фрагментации ДНК сперматозоидов назначается в случаях:

Неоднократное самопроизвольное прерывание возникшей беременности, особенно на ранних сроках при отсутствии видимых причин со стороны женского организма.
Неустановленная причина бесплодия пары.
Бесплодным мужчинам старше 45 лет.
При длительном повышении температуры тела у мужчины или пребывание в подобных обстоятельствах.
При неудачных попытках искусственного оплодотворения.
Перед заморозкой спермы на хранение.
Плохие морфологические характеристики в спермограмме.
Выраженное варикоцеле.

Анализ на фрагментацию ДНК делается несколькими способами, основанными на разных принципах. В одном подсчитываются «правильные» клетки, в другом фиксируются именно дефектные. На основе полученных данных определяется процент тех и других. Они отличаются ценой и сроком готовности. Наиболее распространены два вида исследования:

Этот тест на фрагментацию ДНК сперматозоидов позволяет посчитать клетки с дефектами генетической цепочки и оценить масштаб изменений.

Исследователь смешивает порцию спермы с ферментом – белком-катализатором биохимических реакций. Он проникает в структуру клетки и заполняет промежутки между фрагментами. Места разрывов при этом подсвечиваются мечеными нуклеотидами. Лаборант фиксирует флуоресцирующие сперматозоиды с помощью оптического микроскопа. Спермии с целостными ДНК при этом не светятся.

Если по tunel тест фрагментация составляет 15% или меньше, то сперма признается годной к зачатию в естественном цикле.

Для этого вида тестирования берется минимум 200 (максимум 500) морфологически безупречных сперматозоидов. Обработанные специальным особым реактивом клетки с целостной структурой показывают характерную картину: петли ДНК расширяются, что через оптический микроскоп выглядит как свечение вокруг сперматозоида – «хало». Подсчитываются спермии с большим и средним «хало» и видимым хвостом. А вокруг клеток, несущих информацию не целостную, а в виде фрагментов, такого визуального эффекта не наблюдается. В норме для естественного зачатия носителей дефектных цепочек по тесту halo должно быть не более 20%.

Этот тест на фрагментацию ДНК подсчитывает количество полноценных сперматозоидов. На основе информации делается вывод о процентном выражении носителей поврежденной информации.

Анализ фрагментации ДНК методом HALO выполняется намного быстрее, чем методом tunel, и считается более информативным и точным.

Оба теста довольно дорогие. В Москве стоимость исследования начинается от 6000 руб.

Для проведения теста важно правильно сдать материал на анализ, заранее подготовившись:

Требуется воздерживаться от секса, мастурбации 3 — 5 дней.
Избегать интенсивных занятий спортом или перегрева.
Не употреблять алкоголь или иные стимуляторы.
Перед сдачей обеспечить чистоту половых органов.

Сбор семенного материала – только в стерильную емкость. Если для спермограммы можно привезти сперму на анализ в лабораторию самостоятельно в течение заданного времени, то в данном случае лучше сдать материал непосредственно на месте. Иначе придется соблюдать температурный режим во время доставки.

Применяя определенный тест, лаборант определяет индекс фрагментации ДНК. При трактовке полученных результатов важно знать метод подсчета сперматозоидов с поврежденными цепочками. Для каждой из двух представленных в статье методик норма фрагментации своя. Если в halo-тесте максимально допустимо для фертильного мужчины 20% спермиев с поврежденной структурой, то для метода tunel норма составляет 15%.

При значениях от 20 до 30% (и по тесту tunel, и по тесту halo) врач сделает вывод о возможной самостоятельной беременности, но на ее возникновение может потребоваться больше времени. Есть риск самопроизвольного прерывания беременности. Врач порекомендует скорректировать образ жизни, питание, свести к минимуму стрессы, назначит антиоксиданты и витамины.

А когда фиксируется превышение порога 30%, репродуктолог даст рекомендацию воспользоваться современными репродуктивными технологиями – ЭКО и ИКСИ. При этом в спермограмме большинство клеток могут выглядеть полноценными и подвижными при нормальной концентрации.

Если при любом анализе определяется 60 и более процентов носителей с хромосомными нарушениями, сперма считается не фертильной. В этом случае репродуктолог порекомендует оплодотворение донорской спермой.

Фрагментация ДНК – показатель важный для оценки способности мужчины к оплодотворению, но он не является статичным. Тесты, сделанные в разное время, могут дать не идентичные результаты. Об этом важно помнить, делая выводы о собственной фертильности.

На возможность мужчины зачать здорового ребенка влияет возраст мужчины, образ жизни, привычки, состояние здоровья, наследственность. Многие из названных факторов поддаются контролю человека. Даже солидный возраст потенциального отца – не помеха. Природа предусмотрела возможность восстановления поврежденной ДНК мужчины ресурсами яйцеклетки. Правда, эту способность женщина с годами утрачивает.

Помочь восстановить цельность генов в половых клетках может и антиоксидантная терапия, призванная бороться со свободными радикалами.

Если анализ не улучшается после лечения, можно воспользоваться достижениями современной медицины. С помощью применения такого метода репродукции человека, как ИКСИ, фрагментация генов даже в значениях выше 30% — не приговор. Поскольку репродуктолог после исследования многих спермиев отбирает всего один – наилучшего качества. Его вводят в женскую половую клетку, а после слияния зиготу помещают обратно в матку.

источник

Срок готовности: 1-3 рабочих дня

Биоматериал: сперма (эякулят)

Срок готовности: 2-3 недели

Биоматериал: сперма (эякулят)

В лаборатории SPERMA-TEST.ru определение Индекса Фрагментации ДНК проводится методом HALO (HALOSPERM) или TUNEL.

HALO-тест это актуальный метод оценки целостности ДНК. Поэтому сначала мы рассмотрим его.
В отличие от других методов, HALO выявляет и “подсвечивает” не поврежденную, а целую ДНК. Вокруг “здоровых” сперматозоидов с неповрежденной ДНК формируется ореол, который отчетливо виден на оптическом микроскопе. Таких ореолов нет у мужчин с поврежденной ДНК.

Анализ выполняют спустя 30-60 минут после разжижения эякулята. Оценивают от 200 до 500 сперматозоидов с хвостами (незрелые не оценивают).

У сперматозоидов с неповрежденной ДНК-молекулой есть четкий большой ореол. У сперматозоидов с фрагментацией (разрывами) ДНК такого ореола нет или он не четкий.

В основе теста HALO лежит метод SCD (запатентован компанией Halotech) . На сегодняшний момент этот метод активно используется в клинической практике и участвует во множестве клинических испытаний. HALO считается более чувствительным тестом, по сравнению с остальными.

Референсное значение (норма) для этого теста – 20% и ниже.

Это значит, что сперматозоидов с фрагментацией ДНК должно быть меньше 20% от общего количества.

Лаборант смешивает сперму со специальным реактивом, запуская тем самым процесс денатурации ДНК, а затем окрашивания. Если ДНК спермы не повреждена (не фрагментирована), вокруг плотного центрального ядра ДНК образуется четкий «ореол». Если ДНК спермы имеет разрывы, то ореола нет, даже если он проявляется, то очень тонкий и неясный. Это хорошо видно под микроскопом, когда сперматолог-эмбриолог считает сперматозоиды с фрагментированной ДНК. Результат подсчета выражается в процентах, и в норме он не должен быть более 20%.

Для полноты обследования параллельно с анализом фрагментации ДНК обычно выполняют спермограмму и ЭМИС (электронно-микроскопическое исследование спермы). Если они были сделаны ранее, но не более 3 месяцев назад, покажите их врачу на консультации. Все 3 анализа можно провести из одной порции спермы.

Подготовка подразумевает воздержание в течение 2–5 дней.

Метод сбора эякулята — мастурбация.

Ёмкость для сбора эякулята — стерильный контейнер (бесплатно у администратора лаборатории)

Непосредственно перед сбором материала нужно освободить от содержимого мочевой пузырь и помыть половые органы

Если тест проводится неоднократно, продолжительность воздержания должна быть всегда одинаковой. Это важно для сравнения результатов в динамике.

Если образец собирается дома, то доставить контейнер в лабораторию должен курьер в контейнере, поддерживающим температуру.

У каждого теста свои нормы (референсные значения). После проведения исследования формируется протокол, где указан индекс фрагментации ДНК.

Ниже описаны варианты результатов и рекомендации по тактике лечения. Эти рекомендации основаны на исследованиях, проводимых реальными научными группами за последние 10 лет. Это ценный исследовательский опыт, но это все равно только рекомендации. Интерпретировать результаты должен ваш лечащий врач и исходя из истории болезни предлагать варианты лечения.

Что показывает индекс фрагментации? Он отражает процентное соотношение между «здоровыми» сперматозоидами и сперматозоидами с разрывами в ДНК-цепочках.

Рассмотрим расшифровку на примере норм для HALO-теста.

Если результат выше 50% рекомендуется воспользоваться ИКСИ-технологией. При таких результатах ИКСИ будет эффективнее ЭКО.

Если результат выше 60% шансы на беременность даже с применением вспомогательных репродуктивных технологий крайне низкие. Лучше использовать сперму донора.

Если индекс фрагментации ДНК сперматозоидов равен 50% и более, даже при использовании репродуктивных технологий наступление беременности маловероятно.

Получили результат на руки? Покажите андрологу.

Получил результат. Индекс фрагментации 21%. Что это значит?

Это случай пограничного результата. Нет повода для паники. Этот результат самый близкий к норме. Покажите заключение андрологу. Врач может назначить лечение антиоксидантами и рекомендовать оптимизировать образ жизни (режим работы и отдыха, снижение уровня стресса, прогулки на свежем воздухе и спортивная активность).

Одна из причин мужского бесплодия – это повреждение (фрагментация) цепочки ДНК, находящейся в ядре головки сперматозоида. Именно в молекуле этой нуклеиновой кислоты закодирована и хранится вся генетическая информация, которая при зачатии передается ребенку. И чем больше в молекуле ДНК таких разрывов, тем меньше вероятность оплодотворения яйцеклетки сперматозоидом.

Спермограмма — золотой стандарт первичной оценки качества спермы. Нормы спермограммы не пересматривались с 2010 года. С введением оценки морфологии по Крюгеру, этот анализ достиг максимальной диагностической значимости. Однако до сих пор спермограмма не может объяснить даже половины случаев мужского бесплодия. Поэтому репродуктологам пришлось искать другие, более глубокие и конкретные методы исследования.

Диагностировать разрывы ДНК при проведении спермограммы невозможно. Сперматозоиды с поврежденной ДНК обычно сохраняют хорошую подвижность. Иногда они даже способны к оплодотворению, но наступившая беременность замирает или прерывается уже на ранних сроках.

За последние 10 лет наука убедилась, что повреждения ДНК сперматозоидов напрямую связаны с нарушениями оплодотворения, задержками развития эмбриона, плохой имплантацией, выкидышами. Т.е. со всеми сложностями наступления и начала протекания беременности.

У меня хорошая спермограмма. Не выявлено никакой патоспермии. Зачем мне сдавать анализ на фрагментацию сперматозоида?
Исследования 2016 года показали, что 10% мужчин с нормальными показателями спермограммы имели высокий индекс фрагментации ДНК сперматозоидов и входили в категорию пациентов с идиопатическим бесплодием (т.е. бесплодие по неизвестным причинам). Поэтому есть вероятность, что у вас аналогичный случай. И тогда ваши сперматозоиды с нормальной подвижностью и морфологией будут усиливать шансы на успешную беременность.

Показания для назначения тестов на ДНК-фрагментацию:

идиопатическое (необъяснимое) мужское бесплодие
замершая беременность (задержка развития эмбриона)
многократное и безуспешное ЭКО\ИКСИ
повторяющиеся выкидыши
варикоцеле
возраст мужчины 45 лет и более

Кроме того, тест на фрагментацию ДНК проводится перед замораживанием донорской спермы для оценки ее качества и во время подготовки к проведению ЭКО (экстракорпорального оплодотворения) или ИКСИ (интрацитоплазматического введения сперматозоидов).

Анализ фрагментаций ДНК помогает определить какой именно из методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) поможет конкретной паре. Так, парам, с низким и средним количеством повреждений ДНК у мужчины помогут внутриматочная инсеминация (IUI) и экстрокорпоральное оплодотворение. А парам с высоким уровнем повреждения ДНК поможет ИКСИ (ICSI).

Единственная группа пар, для которых анализ повреждений ДНК не принесет пользы это те,в которых у мужчины диагностирована и подтверждена олигоастенотератозооспермия (т.е. 3 патоспермии сразу). Таким парам может помочь только ИКСИ и опытный андролог может сразу это сказать.

Анализ на фрагментацию ДНК необходим парам с идиопатическим мужским бесплодием. Т.е. когда диагностика устанавливает, что причина в мужчине, однако не может объяснить причину, поставить диагноз и назначить лечение. Для пары с идиопатическим мужским бесплодием, фрагментация ДНК поможет сохранить время, не тратя его на неудачные попытки ЭКО, безрезультатные схемы лечения и общего укрепления организм. Не тратьте время на пустое волнение, отчаяние и пустое ожидание.

Одним из наиболее изученных механизмов повреждений цепочек ДНК является действие свободных радикалов (активных форм кислорода). Они окисляют молекулу ДНК, нанося ей тем самым ущерб.

Чтобы внести ясность: свободные радикалы и повреждения ДНК есть у всех мужчин. Но в норме таких повреждений не много, а свободным радикалам должны противостоять антиоксиданты.
Антиоксиданты защищают сперматозоиды, поглощая свободные радикалы. Ими богата семенная плазма — жидкость, в которой “плавают” сперматозоиды.

Чтобы выяснить как много таких потенциально опасных свободных радикалов в сперме мужчины, выполняют Исследование активных форм кислорода в нативном эякуляте (ROS) (т.е. так как он есть) или Исследование активных форм кислорода в отмытых сперматозоидах (ROS), отмывая сперматозоиды от семенной плазмы. Какой именно тест следует провести — может подсказать врач.

Чтобы выяснить насколько хорошо антиоксиданты противостоят свободным радикалам, выполняют анализ на антиокислительную активность семенной плазмы.

радиация и токсические химические вещества;
перенесенные инфекции, в том числе передающиеся половым путем;
неблагоприятные климатические и экологические условия в районе проживания;
стресс и нездоровое питание;
курение, злоупотребление алкоголем;
варикоцеле;
возраст мужчины старше 40–45 лет;
хронические заболевания органов мочеполового тракта;
химиотерапия;
генетическая предрасположенность.

неполное созревание мужских половых клеток;
в норме мужской организм сам отбраковывает большую часть некачественных сперматозоидов, и в эякулят попадают лишь единицы из них. Если по какой-то причине в работе системы по отбраковке происходит сбой, в сперме оказывается гораздо больше «больных» половых клеток. От этого качество эякуляции не страдает, но снижается вероятность успешного оплодотворения.

Существуют данные исследований, подтверждающие, что женская яйцеклетка, оплодотворенная сперматозоидом с фрагментированной ДНК, способна «вылечить» его, восстановить поврежденную генетическую структуру. Но успех такого «лечения» определяется, в первую очередь, биологическим возрастом и состоянием здоровья женщины. Только молодые яйцеклетки, имеющие высокий потенциал к восстановлению ДНК сперматозоида, способны устранить подобный дефект. Кроме того, большое значение имеют степень разрушения и характер повреждений генетических структур.

Главное различие между этими анализами заключается в том, что HALO подсвечивает сперматозоиды с «целой» ДНК, а TUNEL — с поврежденной. Есть так же отличие в чувствительности тестов в пользу HALO и времени выполнения. На анализ фрагментации ДНК методом HALO требуется в 5-7 раз меньше времени.
Индекс фрагментации в отличие от спермограммы показывает нарушения целостности цепочек ДНК. Поврежденная ДНК часто может быть у мужчин с хорошими результатами спермограммы. Потому что сама молекула ДНК никак не влияет на основные параметры, тестируемые при анализе спермограмма: морфология, подвижность, количество сперматозоидов.

Как только была обнаружена значимая взаимосвязь фрагментации ДНК с проблемами на ранних сроках беременности, начался настоящий бум в разработке методик. Новые методы анализа и исследований фрагментации ДНК появляются каждый год. Все они проходят клинические исследования, доказывают свою диагностическую значимость. В лаборатории SPERMA-TEST.ru определение Индекса Фрагментации ДНК проводится методом HALO (HALOSPERM) и TUNEL. Мы, как эксперты в области сперматологии рекомендуем использовать HALO. Но если ваш врач назначил именно TUNEL, мы готовы провести это исследование.

Tunel-тест – это микроскопическое исследование спермы, цель которого – обнаружить сперматозоиды с поврежденной ДНК и посчитать их количество.

Метод позволяет оценить масштаб повреждений ДНК в сперматозоидах. Сперма смешивается со специальным реактивом. Запускается ферментативная реакция. Разрывы цепочек ДНК сперматозоидов заполняются флуоресцирующим меченым нуклеотидом. Это видно под микроскопом, когда сперматолог считает сперматозоиды с фрагментированной ДНК.

Еще 2-3 года назад TUNEL-тест использовался повсеместно. Однако это был долгий и трудоемкий в выполнении тест. Сейчас более чувствительным и информативным считается тест HALO, что подтверждается клиническими исследованиями. А срок выполнения по сравнению с TUNEL сократился в 5-7 раз.

HALO-тест — это полная альтернатива тесту TUNEL. Новый тест быстрее и эффективнее. Поэтому мы рекомендуем использовать именно его. Однако не все андрологи и репродуктологи обадают информацией о HALO и требуют от пациентов результатов TUNEL-теста. Поэтому мы оставили TUNEL в списке услуг лаборатории.

HALO или TUNEL – это исследования, которые лучше выполнять в специализированной лаборатории, где работают сперматологи и эмбриологи, а не обычные лаборанты , соблюдаются международные стандарты проведения исследований и принципы доказательной медицины. Андрологи и репродуктологи не доверяют результатам сетевых лабораторий.

Сдать сперму для проведения HALO или TUNEL можно в лаборатории сперматологии Sperma-test.ru.
Стоимость HALO-теста (альтернатива TUNEL) – 8500 р.
Стоимость TUNEL-теста – 8500 р.
Адрес лаборатории где можно сдать анализ:

г. Москва, Б. Переяславская улица, 46, стр. 2
м.Проспект Мира
Московская Академическая Клиника ЭКО (МАК ЭКО)

Записаться на прием и задать вопрос можно по телефону: +7 (495) 787-79-30.

источник

Фрагментация ДНК сперматозоидов – дефект содержащегося в ядре мужской половой клетки генетического материала. Это серьезная и сложно корректируемая патология. При большом количестве таких сперматозоидов мужская сперма теряет фертильность (способность к оплодотворению). Даже современные методы искусственного оплодотворения (ЭКО и ИКСИ) зачастую оказываются бессильны. Выявить фрагментацию ДНК можно при помощи специальных микробиологических исследований эякулята.

Молекула ДНК, по сути, является генетической инструкцией. В ней закодирован путь развития и функционирования любого живого организма. В сперматозоиде ДНК упакованы в виде особого вещества – хроматина, которое находится в ядре (в средней части головки).

ДНК состоит из двух спирально свитых друг с другом нитей (полинуклеотидов), состоящих из звеньев (нуклеотидов). Фрагментация – это ломка нитей, выпадение отдельных звеньев, вследствие чего нарушается генокод. Подобные микроповреждения не всегда влияют на способность сперматозоида проникать в яйцеклетку, но за таким оплодотворением последует самопроизвольный аборт или патологии развития плода.

Сперматозоиды с фрагментацией ДНК могут повреждать яйцеклетку и при протоколе ЭКО. В результате она теряет функциональность, эмбрион не образуется, протокол оплодотворения оканчивается неудачно. Если уровень фрагментации ДНК невысок, то в некоторых случаях молодая и здоровая яйцеклетка может восстановить структуру цепочки.

Механизмы, которые приводят к фрагментации нитей ДНК, до сих пор до конца не исследованы. Одной из наиболее вероятных версий считается окислительный стресс сперматозоидов − повреждение их мембран, белков и ДНК свободными радикалами (активный кислород – ROS, или АФК). Последние являются продуктом обменных процессов в клетках, естественным компонентом среды, в которой вызревают сперматозоиды, и семенной плазмы. В норме радикалы нейтрализуются веществами-антиоксидантами, но в ряде случаев (при воспалительном процессе, иммунных нарушениях) баланс нарушается, активных форм кислорода становится слишком много. Выявить наличие АФК можно при помощи ROS-теста.

Основные причины окислительного стресса, приводящего к фрагментации ДНК:

Хронические воспалительные процессы в органах малого таза: яичках, их придатках, простате, мочевом пузыре, даже в копчике (инфекция легко мигрирует с кровотоком, периодически активизируясь).
Варикоцеле – расширение вен мошонки, приводящее к застою крови и нарушению питания яичек.
Длительное воздержание (чем дольше сперматозоид находится в придатке яичка, тем выше вероятность его повреждения оксидантами).

Интоксикация (курение, алкоголь, пестициды, гербициды). Исследования (Mutat Res за 1996 г, № 351(2), стр. 199-203, Cancer Inst за 1997 г, № 89(3), стр. 238-244) выявили прямую зависимость между онкологическими заболеваниями у детей и курением их отцов (сперматозоиды которых подверглись окислительному повреждению ДНК).
Длительный прием медикаментов: препараты для лечения гипертонии, подагры, противосудорожные, метадон, некоторые антибиотики.
Аутоиммунные нарушения, при которых организм вырабатывает антитела против собственных половых клеток.
Злоупотребление кофе (более 300 г в день). Кофеин способен провоцировать повреждения ДНК и препятствовать восстановлению нитей.

У 40% мужчин с бесплодием выявляется повышенный уровень активных форм кислорода (Androl за 2012, №33(6), Fertil. Steril за 1995 № 64(4)), поэтому определение их уровня является важным этапом диагностики.

Оценку фрагментации ДНК спермограмма не дает. С помощью этого анализа невозможно определить качество генетического материала, который несет сперматозоид. Даже расширенная версия с морфологией по Крюгеру позволяет обнаружить лишь внешние патологии головки (сперматозоиды с поврежденной цепью ДНК внешне могут ничем не отличаться от нормальных). Согласно исследованиям (https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1110569016300607)10% мужчин с совершенно нормальной спермограммой не могут иметь детей именно из-за фрагментации ДНК, но им диагностируют идиопатическое (без видимых причин) бесплодие.

Тест на ДНК-фрагментацию позволяет парам выявить причину бесплодия и самопроизвольных абортов на ранних сроках. Анализ сперматозоидов на ДНК-фрагментацию перед ЭКО необходим для определения следующих параметров:

Частота оплодотворения яйцеклетки.
Качество предимплантационного развития эмбрионов.
Вероятность развития врожденных пороков плода и выкидышей на ранних сроках.

В зависимости от результатов определяют целесообразность применения того или иного метода ЭКО.

Частота наступления беременности для пациентов с разной степенью фрагментации ДНК

Тест на ДНК-фрагментацию особенно актуален для мужчин, которые решили завести ребенка в позднем возрасте. После 45 лет риск окислительных повреждений сперматозоидов существенно увеличивается. В зоне повышенной опасности мужчины с артериальной гипертензией, сахарным диабетом, ожирением.

Исследование сперматозоида на наличие повреждений ДНК относится к области геномики и микробиологии. В андрологии и репродуктологии применяют следующие типы тестов:

TUNEL. Устаревший метод, который по-прежнему практикует большинство лабораторий. Для выявления пробелов в цепочке ДНК используется светооптический эффект. Отдельные нуклеотиды маркируются и помещаются в образец спермы. Там они находят сперматозоиды с поврежденными сегментами цепочек и встраиваются в них. Половые клетки с вклинившимися в ДНК нуклеотидами будут светиться, лаборантам остается вычислить их процент в общей массе. Результат будет готов через 2 недели (в некоторых лабораториях срок продлевается до трех).
HALO (HALOSPERM-тест, SCD). В отличие от предыдущего метода подсвечиваются не битые, а целые ДНК. Сперму смешивают с реактивом, в результате чего вокруг нормальных сперматозоидов образуется хорошо заметный ореол (на фото ниже). Метод считается наиболее чувствительным. Результат будет готов через 1-3 дня.
SCSA. Сперматозоиды просвечивают лазерным лучом, под воздействием которого они окрашиваются в зависимости от степени повреждений ДНК: зеленый – норма, желтый – несущественные повреждения, красный – серьезные дефекты. Референсное (среднее для здорового мужчины) значение – 20% (меньше – норма, больше – высокий уровень фрагментации).

Анализ ДНК методом HALO

Тест проводится только совместно со спермограммой. Некоторые лаборатории позволяют предоставить предыдущий результат анализа, выполненного не более двух дней назад. Подготовка к сдаче теста на фрагментацию такая же, как и перед обычной спермограммой.

Цены в популярных медучреждениях (по умолчанию указана стоимость методом TUNEL без учета цены спермограммы):

«ДНКом»: 8340 руб.;
«Инвитро»: 8620 руб.;
«Сперматест»: 6900 руб. за HALO, 7900 руб. за TUNEL.

По завершении исследования формируется протокол, где указывается индекс фрагментации – процентное соотношение между здоровыми и дефектными сперматозоидами (DNA Fragmentation Index (DFI)). Пример заключения и референсные значения:

Заключение теста ДНК-фрагментации, выполненного методом TUNEL

Интерпретация результатов исследования, выполненного методом HALO:

50%: потребуется отбор и искусственное введение сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ).
> 60%: вероятность успешного протокола ИКСИ крайне низка, рекомендуется донорская сперма.

Для определения причин фрагментации назначают УЗИ органов малого таза, исследования спермы, простатического сока, крови и мочи на наличие инфекций.

Методы лечения зависят от выявленной причины. Если БАК-посев или микроскопическое исследование показали наличие инфекции, то назначают курс антибиотиков. Варикоцеле, нарушение проходимости уретры, крипторхизм лечат путем хирургического вмешательства.

Уровень фрагментации ДНК можно снизить при помощи антиоксидантной терапии (Cochrane Database Syst Rev (сборник баз данных по медицине, «библиотека Кокрейна») 2011 г № 1, CD007411). В центре вспомогательных репродуктивных технологий было выполнено пилотное исследование, в ходе которого было проанализировано 32 неудачных протокола ЭКО + ИКСИ (Источник: «Экспериментальная и клиническая урология», № 3 за 2017 г, стр. 70-76). У мужчин диагностирована низкая фертильность спермы: олигоастенотератозоспермия (малоподвижные сперматозоиды с нарушенным строением) при высоком уровне фрагментации ДНК (более 30%). Средние значения фрагментации и АФК были 38% и 4,6 соответственно.

Пациентам была предложена антиоксидантная терапия, включающая ежедневный прием следующих препаратов:

Селен (100 мг);
L-карнитин (3000 мг);
Витамины группы Е (токоферолы и токотриенолы в количестве 400 МЕ).
Витамин С (1000 мг).

источник