Норма показателей анализа на пцр

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови. При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя. Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии. Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С). При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР. Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С). Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР). После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые. Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

источник

Результаты ПЦР и особенности их расшифровки интересуют многих людей, чьим диагнозом является подозрение на ЗППП.

Как отмечают доктора, метод обладает высокой результативностью и минимальным процентом ошибок. Поэтому зачастую используется как контрольный в диагностике инфекционных процессов.

В чем состоит суть ПЦР методики, хотят знать больные люди, и благодаря чему обеспечивается высокая вероятность получения верных результатов. Как расшифровываются полученные итоги, и есть ли связь между этим методом и другими способами диагностики?

Суть метода ПЦР
Какие материалы можно использовать для ПЦР
Что значит положительный результат ПЦР
Что значит отрицательный результат ПЦР
Кто из докторов выполняет расшифровку результатов ПЦР
Когда показатели ПЦР становятся положительными после заражения
Вид бланка анализов на ПЦР
Вероятность ошибочных итогов при ПЦР
Связь ПЦР с другими методиками

ПЦР-методика – исследование, используемое довольно широко в современном мире. Диагностика позволяет поставить диагноз не только при инфекционных процессах, но и при генетических патологиях, некоторых онкологических недугах. Изначально ПЦР изобреталась не для применения в медицине.

В отрасль здравоохранения метод пришел из области молекулярной биологии, в которой активно использовался после своего открытия. Ученый, создавший ПЦР, получил нобелевскую премию.

Прежде чем разбираться, как расшифровывать результаты анализов ПЦР, необходимо понять, в чем основная суть методики.

На самом деле на словах все выглядит довольно просто. У пациента берется биологический материал. Затем он обрабатывается особым образом с помощью специальных химических реагентов.

Затем получившуюся смесь помещают в особую машину, которая проводит процесс амплификации. То есть многократного умножения определенных фрагментов ДНК или РНК, что удалось выявить с помощью добавления реагентов.

Когда процесс амплификации подойдет к концу, доктору остается только идентифицировать полученные результаты, чтобы поставить верный диагноз.

Главное – проявить внимательность на этапе идентификации. Но учитывая, что сегодня большую часть работы делает компьютер, все сильно упрощается.

ПЦР отличается высокой эффективностью. Ее широко применяют для того, чтобы определять наличие в организме скрытых инфекционных процессов, которые не дают положительных серологических реакций. Также скрытые инфекции обычно нельзя выявить с помощью посева или микроскопии. Поэтому зачастую ПЦР – единственный достоверный способ постановки диагноза в этом случае.

Часто удачность исследования зависит от того, как и какой материал брался для выполнения анализа. Однако в случае с полимеразной цепной реакцией расшифровка результатов ПЦР исследований мало зависит от биологического материала, который брался у пациента. Гораздо большее значение имеет подготовка к обследованию с помощью метода.

В качестве материала могут служить:

кровь, сдаваемая в соответствии со стандартными рекомендациями из вены на локтевом сгибе
мокрота, собираемая при откашливании
налет с ротовой полости, собираемый доктором в утреннее время, пока пациент еще не завтракал и не чистил зубы
мазок с половых органов, дающий хорошие результаты в том случае, если больной не мочился в течение нескольких часов, отказывался от сексуальных контактов несколько дней и соблюдал ряд других рекомендаций
исследование мочи, при котором биоматериал также предпочтительно собирать с утра, не проводя накануне гигиену половых органов
биоптаты органов или тканей, получаемые с помощью специальных инструментов и др.

Как отмечают врачи, материалом для ПЦР может быть совершенно любая жидкая среда организма человека.

При выборе главное помнить о том, что предпочтение отдают той среде, где с большей долей вероятности будет присутствовать возбудитель. Например, при половых инфекциях целесообразнее брать мазок с половых органов или кровь, чем мазок из ротовой полости.

Решать вопрос о том, какие материалы используются для получения результатов ПЦР в том или ином случае, лучше всего с лечащим врачом на приеме. Доктор сделает оптимальный выбор, исходя из предполагаемого у пациента заболевания.

ПЦР – метод, который может похвастаться своей высокой специфичностью.

Предположим, доктор поставил себе цель обнаружить какой-то патогенный микроорганизм в теле пациента. И если тот на самом деле присутствует в теле, он будет обнаружен. При этом спутать его с каким-либо другим патогеном благодаря уникальному коду ДНК будет невозможно.

Если ПЦР положительный, значит, в организме с вероятностью почти в 100% находится возбудитель, поиск которого проводился врачом. Ведь методика рассчитана, в отличие от многих других диагностических методов, именно на поиск самих возбудителей, а не их следов.

Как отмечают доктора, при данном исследовании вероятность случайно принять один возбудитель за другой сводится к нулю. Зато существует вероятность получения положительных результатов после терапии.

Если в организме будут оставаться обломки нуклеиновых кислот. Однозначно положительной реакция чаще всего бывает, если пациент предъявляет жалобы на какие-то конкретные симптомы инфекционного процесса. Причем результат будет сохраняться даже в течение нескольких месяцев после того, как возбудитель будет полностью побежден и удален из организма.

Если ПЦР результат отрицательный, значительное число пациентов автоматически считают, что они здоровы. Это практически правильное решение.

Ведь если итоги оказались отрицательными, значит фрагменты патогенного микроорганизма не были определены тест-системой. Из этого следует логичный вывод, что микроорганизма в теле нет.

Однако стоит учитывать, что несмотря на всю свою высокую чувствительность и специфичность, методика имеет определенный порог чувствительности. Если концентрация возбудителя на момент обследования не переходит границу этого порога, результат будет расцениваться, как отрицательные. Хотя на самом деле окажется ложным до поры до времени.

Доктора акцентируют особое внимание на том, что отрицательный результат не всегда означает отсутствие патологии. Чтобы на 100% быть уверенным в своем здоровье, пройти исследование повторно рекомендуется через несколько недель, а порой и месяцев.

Часто среди пациентов звучит вопрос о том, какой врач будет проводить расшифровку ПЦР исследования.

В первую очередь необходимо запомнить, что доверять результаты стоит тому же медицинскому работнику, что первоначально давал направление на исследование. Связана эта рекомендация с тем, что в этом случае доктор будет представлять себе, что он ожидает увидеть в анализах. Сможет грамотно интерпретировать итоги, соотнося их с клинической картиной.

Получить направление наиболее часто можно от уролога, гинеколога или венеролога. Соответственно, после получения итогов относить бланк с результатами стоит кому-то из них. Важно помнить, что ПЦР – довольно дорогой метод диагностики. Его не принято использовать просто так, без специальных показаний к обследованию.

появление специфических для ЗППП симптомов
обследование перед планированием беременности или процедурой искусственного оплодотворения
поиск причин бесплодия и другие показания

Часто пациенты задают на приеме у медицинского работника вопрос о том, когда результаты ПЦР крови и мазков становятся положительными после заражения. Все зависит от того, насколько быстро конкретная инфекция сможет, размножаясь, пройти пороговую для теста концентрацию в материале.

Преимуществом ПЦР является то, что порог чувствительности у теста довольно низкий. Это значит, что выявить признаки заражения можно даже в том случае, если количество возбудителя в биологическом материале будет минимальным.

Подобная особенность дает возможность постановки диагноза даже в период инкубации, когда симптомы еще полностью отсутствуют.

Однако осечка возможна и при применении ПЦР методики. Это происходит, например, если пороговая концентрация все же не успела достичь определяемых тестом значений. В этом случае велика вероятность получения далеких от правды результатов.

Вопрос о том, как выглядит бланк результатов анализов ПЦР, весьма актуален.

Как отмечают доктора, ничего сложного во внешнем виде бумаги нет. Зачастую на документе можно обнаружить название искомого возбудителя. А напротив него пометку «обнаружен» или «не обнаружен».

В первом случае пациенту рекомендуется озаботиться собственным здоровьем. Так как анализ расценивается как положительный, а человек, как зараженный. Следовательно, ему требуется терапия.

Во втором случае чаще всего состояние пациента оценивают, как здоровое, хотя могут быть и исключения. Важно помнить, что количество возбудителей, указанных на бланке, зависит во многом от того, какое конкретно вид анализа применялся.

Если проводился поиск только одного патогенного микроорганизма, в результате будет фигурировать только его название с соответствующей пометкой. Если ПЦР проводилось сразу на несколько инфекций, что тоже возможно, в бланке будет список патологий с пометками.

Сегодня в лабораториях при комплексном анализе на группу инфекций не принято выдавать на каждый патогенный микроорганизм отдельный бланк. Их все указывают на одном листе.

Часто пациенты интересуются вопросом о том, возможно ли получение ложных результатов обследования при использовании методики. К сожалению, как отмечают врачи, ошибки хоть и редко, но случаются.

Существует, например, вероятность получить ложноположительные результаты ПЦР сразу после лечения. Объясняется это очень просто.

Терапия уже окончена, возбудитель удален из организма и не может заражать новые ткани. Однако остатки ДНК или РНК еще могут циркулировать в крови или ином диагностическом материале. В этом случае тест-система будет улавливать их и воспринимать за полноценную патологию, выдавая ложноположительный итог.

Именно поэтому рекомендуется после терапии сдавать исследование несколько раз с разными промежутками времени. Только в этом случае итоги будут достаточно объективными.

Ложноотрицательные результаты анализов ПЦР после приема антибиотиков также возможны. Происходит это в том случае, если пациент, неверно используя препараты антибактериального ряда, смазал симптомы болезни.

Не позволил микроорганизму активно размножаться в теле, но при этом и не довел его уничтожение до конца. В этом случае количество возбудителей может упасть ниже пороговой концентрации чувствительности. Это и даст неверные результаты тестирования.

С помощью метода ПЦР доктора нередко подтверждают или, напротив, опровергают результаты других методов обследования, используемых для диагностики ИППП.

Например, с этой целью может использоваться ИФА.

Бывает так, что ПЦР отрицательный, а ИФА положительный. Тогда больной оказывается в замешательстве относительно своего состояния.

Доктора рекомендуют не теряться, а сначала провести оба теста повторно. Если ИФА останется положительным, а ПЦР отрицательным, с большой вероятностью заболевание в организме пациента отсутствует.

Ведь иммуноферментный анализ направлен на реакцию антиген-антитело. И порой может принимать сходные по структуре антигены других возбудителей за искомый, выдавая ложноположительные результаты.

Вероятность того, что ИФА дало верный результате на второй раз, а ПЦР, напротив, выдало ошибку, например, из-за низкого титра возбудителя, сведена к минимуму. Это скорее казуистика, чем реальная клиническая практика.

Результаты ПЦР диагностики обладают высокой ценностью в диагностике большого количества различных патологий. В первую очередь методика является незаменимой при подозрении на различные ЗППП.

Если вам нужно сдать получить комментарии по результатам ПЦР, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

ВИЧ
Гарднереллез
Кондиломатоз
Молочница
Сифилис
Трихомониаз
Баланопостит
Герпес
Гонорея
Микоплазмоз
Уреаплазмоз
Уретрит
Хламидиоз
ЗППП

источник

Данная методика славится своей точностью и универсальностью. Посредством ПЦР-обследования можно выявить одновременно несколько видов вредоносных микроорганизмов в одном образце. Для подобных мероприятий биоматериал может быть использован разнообразный: слюна, моча, кровь, плевральная жидкость и т.д.

С другой стороны, для осуществления данной диагностики необходимо современное оборудование и подготовленные должным образом кадры. При выборе медицинского учреждения лучше ориентироваться на крупные заведения, которые могут позволить себе приобрести новейшие приборы. Это прямым образом отобразится на скорости расшифровки анализа и на его точности.

Вся совокупность генетической информации, которой располагает любой живой организм, содержится в ДНК. Указанную нуклеиновую кислоту составляют четыре соединения. Идентифицировать живое создание совсем несложно: у каждого из них, независимо от параметров (будь то бактерия, животное, рыба), имеется своя уникальная ДНК.

Некоторые же микроорганизмы хранят генетические сведения о себе в РНК.

В основе рассматриваемого тестирования – использование специальных ферментов, благодаря которым осуществляется копирование некоторых участков ДНК/РНК вирусных, микробных, иных инфекций.

Источником указанных возбудителей может служить практически любой биологический материал, взятый у человека: слюна кровь, моча, выделения из уретры или влагалища и т.д.

Так как в образцах крови и других биологических материалах содержание нуклеиновых кислот весьма низко, при помощи иных методов исследования выявить конкретное заболевания невозможно. В ходе ПЦР можно достичь увеличения уровня ДНК молекул, что обеспечивает достоверную постановку диагноза в будущем.

Для проведения анализа лаборанты применяют специальное оборудование – амплификатор. Данный прибор нагревает и охлаждает пробирки, в которые помещен биоматериал. Адекватный температурный режим прямо влияет на точность полученных результатов.

В итоге ПЦР лаборанты получают электрофореграмму, на которой зафиксированы фрагменты выделенных нуклеиновых кислот.

Указанное изображение сверяют с базой данных на компьютере — и таким образом определяют тип возбудителя, его концентрацию в организме.

Посредством рассматриваемого анализа можно выявить следующие патологии:

ВИЧ.
Гепатита А, В, С, D, G.
Инфекционного мононуклеоза.
Клещевого энцефалита.
Герпеса I и II типа.
Цитомегалии.
Папилломавирусной инфекции.

При помощи полимеразной цепной реакции можно также установить отцовство.

Инструментарий, контейнеры для изъятого материала должны быть продезинфицированы. А лучше использовать одноразовые приспособления.
Собранные образцы крови нужно помещать в пробирки, которые содержат антикоагулянты. А в процессе забора обращаются к специальным вакуумным системам.
Забор любого биоматериала нужно осуществлять в манипуляционном кабинете.

Мaзки/сoскобы из шейки матки/уретры, утренняя мoча: при тестировании на патологии, которые передаются половым путем.
Крoвь: при тестировaнии на TORCH-инфекции, ВИЧ, гепатит.
Спиннoмозговая жидкoсть: при подозрении на дефекты в работе центральной нервной системе.
Мазoк из горла/зева: при проверке на цитомегаловирус, мононуклеоз.
Мoкрота/плевральная жидкость: при инфицировании легких.
Образцы ткани плаценты: для исключения либо подтверждения внутриутробной инфекции.

Если указанный материал извлекают из уретры, запрещены половые акты и использование антибактериальных средств для интимной гигиены за 3 дня до сдачи анализа. За 3 часа до тестирования нужно воздержаться от мочеиспускания.
Кровь для исследований берут ранним утром на голодный желудок.
Для тестирования мочи используют первую ее порцию после сна. Для данного анализа пациенту следует предварительно приобрести специальный контейнер в аптеке. Взятый биоматериал желательно доставить в диагностическую лабораторию через два часа.
Мазок из влагалища лучше брать за пару дней до менструации, либо через 1-2 дня после ее завершения.
Образец слюны нужно изымать только после тщательного полоскания (3 раза) ротовой полости физиологическим раствором.

Если есть возможность, взятый биообразец нужно сразу же отнести в лабораторию.

При невозможности срочной доставки, материал можно хранить короткое время в прохладном месте (+4…+8 С).

При необходимости длительного хранения некоторые виды биоматериалов можно замораживать, но — только единожды.

К контейнеру следует обязательно приложить направление доктора на ПЦР.

Продолжительность подготовки результатов рассматриваемого вида тестирования будет определяться возможностями лаборатории, в которой его будут проводить.

Положительный. Указывает на то, что в организме пациента присутствует чужеродные ДНК/РНК, а значит произошло заражение. Если у пациента нету каких-либо жалоб, в целом он чувствует себя хорошо, а результаты ПЦР-диагностики положительные, это свидетельствует о начальной стадии заболевания. При подобных ситуациях лечение не отнимет много времени и денег. В крайне редких случаях результат может быть ложноположительным: при нарушении правил антисептики в ходе забора биоматериала.
Отрицательный. Означает отсутствие искомых вирусных агентов во взятом образце. Ложноотрицательный результат может стать следствием человеческого фактора (в первую очередь – нарушение правил хранения биообразца, неправильный его сбор).

Количественная оценка исследуемого биоматериала дает возможность делать выводы о том, какой уровень нагрузки оказывают вирусы/бактерии на организм.

В ходе расшифровки определяют число чужеродных РНК или ДНК, которые концентрируются в 1 мл. крови (МЕ/мл).

Повторный анализ зачастую назначают через 1 месяц после лечебных мероприятий.

Главными преимуществами рассматриваемого тестирования являются его надежность и достоверность.

Наиболее точно определить наличие/отсутствие инфекции в организме.
Диагностировать разновидность вирусного агента.
Отыскать бактерии даже при минимальном количестве вражеских ДНК во взятом биоматериале.

Процент неверного диагностирования минимален.

Причины ложноположительных и ложноотрицательных результатов описаны выше.

Загрузка.

источник

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – наиболее информативный, точный и современный метод диагностики инфекционных заболеваний, позволяющий обнаружить возбудителя в организме пациента, даже если количество вредоносных клеток исчисляется единицами, и они пока не успели спровоцировать развитие болезни. Еще 25 лет назад врачи не могли даже мечтать о таких возможностях, а сегодня сдать анализ ПЦР можно в любой крупной лаборатории.

ПЦР-диагностика открыла перед людьми многие другие ценные перспективы – с помощью этой методики можно изучать генные мутации, устанавливать отцовство, вычислять риск развития онкологических заболеваний, оценивать возраст и происхождение археологических артефактов и даже доказывать вину преступников, обнаруживая их ДНК в уликах. Но сегодня мы обсудим именно медицинский аспект этого открытия и расскажем вам, какие заболевания можно диагностировать методом ПЦР, как сдавать анализ и что означают его результаты.

Любое живое существо на Земле, будь то человек, животное или микроб, имеет гены – носители наследственной информации, которые представляют собой участки ДНК или РНК с определенной последовательностью нуклеотидов, уникальной для каждого организма. ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота) образует длинные молекулы, состоящие из двух нитей, закрученных в спираль друг относительно друга, и эти нити собираются из нуклеотидов, как из бусинок.

Допустим, требуется увидеть, есть ли в биологическом материале пациента ДНК или РНК инфекционного возбудителя или ее фрагменты. Но как это сделать, если молекулы крошечные и их мало? Методика ПЦР дает ответ: можно искусственно размножить вредоносную ДНК или РНК в лабораторных условиях, чтобы без труда ее обнаружить и идентифицировать.

Суть полимеразной цепной реакции состоит в том, чтобы разъединить нити молекул и попытаться «подсадить» к их противоположным концам фрагменты ДНК или РНК возбудителей – если они подойдут, значит, это и есть искомый микроб. А добавленный в пробирку фермент под названием «ДНК-полимераза» запустит синтез новых копий нужных участков молекул, они многократно размножатся и станут заметны. Далее мы опишем простыми словами, как происходит этот удивительный процесс и для чего это необходимо.

Американский ученый Кэрри Муллис изобрел ПЦР в 1983 году, а спустя десять лет, в 1993 году, получил за свое открытие Нобелевскую премию по химии. Однако методика была несовершенной и требовала существенных доработок. На сегодняшний день существует уже более десятка видов ПЦР для разных диагностических целей.

Итак, мы знаем, что длинная молекула ДНК или РНК образована двумя цепочками нуклеотидов, всего их бывает пять типов:

Ген – это устойчивая, многократно повторяемая уникальная комбинация нуклеотидов, и в одном гене их может быть несколько десятков или даже сотен, но все они располагаются друг напротив друга в строгом соответствии с правилом комплементарности. Это означает, что напротив гуанина в одной нити может стоять только цитозин из другой нити, а напротив аденозина – только тимин, иначе молекула ДНК не сложится и не закрутится в спираль. При этом пары «А – Т», «Т – А», «Г – Ц» и «Ц – Г» могут сочетаться в любых комбинациях: повторяться несколько раз подряд или идти вразнобой.

Схематически это можно представить так:

У РНК вместо тимина есть урацил, и такие молекулы выступают носителями генетической информации у некоторых вирусов, называемых ретровирусами. Например, у вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

Вот это свойство – комплементарность – является ключевым для ПЦР-диагностики. Ведь чтобы началась амплификация (синтез дополнительных копий участков ДНК на родительской матрице), нужно чтобы «подсаженный» фрагмент ей подходил. Такой фрагмент называется праймером или попросту «затравкой» и содержит до тридцати нуклеотидов, расположенных в уникальной для каждого возбудителя последовательности. Праймеры для проведения ПЦР-анализов производятся отдельно и доставляются в лабораторию в готовом виде. На сегодняшний день в распоряжении врачей есть праймеры сотен различных бактерий, вирусов и простейших.

Чтобы процесс начался, необходимо соблюсти ряд условий: добавить нужные реагенты и создать особый температурный режим. Все это происходит в приборе под названием «амплификатор» или «термоциклер», который может обеспечить нагревание и охлаждение пробирок с точностью до 0,1°C. Современные модификации амплификаторов могут замораживать и хранить готовые материалы, а некоторые даже имеют встроенный флуоресцентный детектор для определения результатов анализа ПЦР в режиме реального времени, когда нужно вычислить вирусную нагрузку (об этом мы расскажем ниже).

Внутри амплификатора взятый у пациента биоматериал проходит несколько десятков циклов, каждый из которых состоит из трех стадий: денатурации, отжига и элонгации. Это самая интересная часть ПЦР-диагностики, давайте рассмотрим весь процесс в подробностях, а начнем с необходимых реагентов.

Стандартный набор выглядит так:

Биоматериал, предположительно содержащий ДНК возбудителя заболевания;

Праймеры, то есть два комплекта нуклеотидов, комплементарных противоположным концам цепочек нужного фрагмента ДНК;

ДНК-полимераза – термостабильный фермент, который выступает катализатором реакции амплификации. К этому ферменту очень серьезные требования: он должен сохранять активность при высокой температуре длительное время – несколько часов, пока повторяются циклы ПЦР. Поэтому для проведения анализа используются ферменты, выделенные из термофильных микроорганизмов: Thermus aquaticus (Taq-полимераза), Pyrococcus woesei (Pwo-полимераза), Thermus thermophilus (Tth-полимераза), Pyrococcus furiosus (Pfu-полимераза) и другие;

Mg2+, то есть ионы магния, двухвалентного металла, необходимого ДНК-полимеразе для эффективной работы;

dATP, dGTP, dCTP и dTTP, четыре дезоксирибонуклеозидтрифосфата, из которых будут строиться новые фрагменты цепочек ДНК;

Буферный раствор, позволяющий поддерживать оптимальные условия – в него входят некоторые соли и сывороточный белок альбумин.

Итак, реагенты помещены в пробирку, она установлена в амплификатор, что же происходит дальше? Запускается повторяющийся цикл из трех стадий, целью которых является амплификация ДНК инфекционных возбудителей, если таковые будут обнаружены в пробе.

Амплификатор нагревает пробирку до 94-98 °C и сохраняет такую температуру на протяжении 30 секунд – 2 минут, чтобы цепочки ДНК разошлись в стороны. Конкретное значение температуры и времени зависит от типа полимеразы и от того, какого именно микроба ищут. По-другому этот период называется стадией плавления. Большинство видов ПЦР-диагностики требуют прогрева пробирки перед первым циклом в течение 2-5 минут.

В игру вступают праймеры – один из них комплементарен первой нити развалившейся надвое цепочки ДНК, а другой подходит ко второй нити, причем, праймеры ограничивают начало и конец того участка молекулы, который необходимо достроить. Праймеры называют «затравкой», потому что фермент полимераза катализирует производство новых копий нужного фрагмента ДНК именно после соединения праймеров с родительской матрицей.

Чтобы это соединения произошло, амплификатор должен понизить температуру пробирки. Как правило, отжиг с праймерами производится при температуре на 5 °C ниже, чем нужно для их денатурации. Если установить слишком высокую температуру, праймеры будут плохо соединяться с матрицей, а если слишком низкую, они могут прикрепиться не в том месте, где нужно. Поэтому лучше показывают себя праймеры с температурой плавления выше 60 °C, ведь они позволяют проводить отжиг и элонгацию одновременно при 60-75 °C. Стадия отжига длится 30 секунд, и за этот короткий период полимераза уже успевает катализировать синтез двух-трех сотен новых нуклеотидов.

Происходит собственно амплификация, то есть размножение нужного участка вредоносной ДНК, если таковая обнаружена. В рамках одного цикла количество участков увеличивается вдвое, каждый последующий цикл опять приводит к двукратному увеличению их числа, то есть действует принцип геометрической прогрессии. А всего за время ПЦР-анализа проводится 30-50 циклов, что по времени занимает 2-3 часа.

Температура элонгации и длительность этой стадии зависит от того, какая полимераза используется и какова длина размножаемого участка ДНК. Например, для Taq и Pfu-полимеразы оптимальна температура 72 °C, при этом фермент произведет 1000 пар оснований за 1 минуту. По окончанию всех циклов ПЦР, как правило, запускают дополнительную, финальную стадию элонгации – она длится около 10 минут и позволяет достроить все оставшиеся участки ДНК.

Существует два способа определения итогов ПЦР-анализа: традиционный – электрофорез, когда в реакции задействуются обычные праймеры, а оценку результатов проводит человек, и более современный – сканирование в режиме реального времени, когда «затравки» меченые, а их свечение регистрирует прибор.

В первом случае все цепочки ДНК сортируются по размерам. У этого способа есть существенные недостатки: во-первых, лаборанту приходится открывать пробирки с материалом, следовательно, в них могут попасть посторонние фрагменты ДНК из соседних пробирок (контаминация ампликонами), и тогда результат анализа ПЦР будет ложноположительным. Во-вторых, оценку производит человек, что называется, «на глаз», поэтому достоверность полученных данных целиком зависит от внимательности и профессионализма специалиста.

В случае с ПЦР-диагностикой в режиме реального времени (Real-Time PCR) влияние человеческого фактора на итоги исследования минимально – пробирки помещаются в современный высокотехнологичный прибор и ни разу не открываются на протяжении всех циклов, включая анализ результатов, который тоже проводит умная машина. У этого способа только два очевидных недостатка – высокая стоимость и ограниченная доступность, поскольку амплификаторами нового поколения оснащена далеко не каждая лаборатория.

ПЦР-диагностика активно используется во многих отраслях клинической медицины:

Урогинекология и дерматовенерология. Это, пожалуй, самые заинтересованные в ПЦР врачебные направления. С помощью соответствующего анализа можно диагностировать любые заболевания, передающиеся половым путем: гонорею, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз, гарднереллез и т. д. Метод ПЦР позволяет обнаружить и вирусы, часто поражающие органы половой сферы человека – например, генитальный герпес или папилломовирус. А эти возбудители, как известно, обладают онкогенной активностью, то есть могут провоцировать развитие злокачественных опухолей (рака шейки матки у женщин, рака предстательной железы у мужчин);

Инфектология и эпидемиология. На втором (а возможно и на первом) месте по частоте использования ПЦР-диагностики находится инфекционная медицина, поскольку обсуждаемая методика позволяет диагностировать все распространенные заразные болезни, некоторые из которых несут смертельную угрозу здоровью людей и представляют эпидемиологическую опасность. Речь идет о ВИЧ, гепатитах, сифилисе, холере, бруцеллезе, токсоплазмозе, дифтерии, туляремии и прочих серьезных заболеваниях;

Донорство и трансплантология. ПЦР-диагностика позволяет службе крови оценивать качество донорского материала: выявлять опасных возбудителей и отсортировывать непригодный материал. А при пересадке органов очень важно оценить совместимость тканей донора и реципиента – тут на помощь тоже приходит методика ПЦР;

Генетика и репродуктология. С помощью специальных разновидностей ПЦР-анализа можно установить отцовство, просчитать риск возникновения опасных генных мутаций у предполагаемого потомства пары, обратившейся в центр планирования семьи, а также изучить взятый у беременной женщины биоматериал (например, амниотическую жидкость) с той же целью – вовремя обнаружить тяжелый порок развития плода;

Акушерство и неонатология. Современные родильные дома тоже часто используют ПЦР-диагностику, а некоторые даже имеют собственную лабораторию. Это нужно для того, чтобы максимально оперативно обследовать новорожденных малышей при подозрении на наличие у них внутриутробной или полученной во время родов инфекции: ВИЧ, сифилиса, хламидиоза, цитомегаловируса, мононуклеоза, краснухи и других;

Пульмонология и фтизиатрия. Метод ПЦР дает возможность специалистам этих врачебных направлений бороться с редкими, устойчивыми штаммами бактерий, вызывающих респираторные заболевания, например, атипичный хронический бронхит. В этом случае успех лечения целиком зависит от того, удастся ли точно идентифицировать возбудителя болезни и назначить адресную терапию. Кроме того, ПЦР-анализ позволяет проводить максимально раннюю диагностику туберкулеза;

Гастроэнтерология и аллергология. Врачи этих двух специальностей тоже крайне заинтересованы в методе ПЦР, поскольку он дает возможность обнаружить главную причину развития гастрита и язвы желудка – коварную бактерию Хеликобактер пилори, а также установить индивидуальную непереносимость продуктов питания у конкретного человека. Существуют врожденные особенности работы пищеварительного тракта, не позволяющие правильно перерабатывать и усваивать некоторые компоненты пищи, например, глютен или лактозу. Эти особенности наследуются генетически, следовательно, могут быть обнаружены методом ПЦР. Кстати, если у кого-то из родителей есть аллергия на определенный продукт (орехи, грибы, цитрусовые), то велика вероятность того, что у ребенка возникнет такая же проблема;

Онкология. Специалисты этого серьезнейшего направления медицины используют ПЦР-диагностику для оценки риска развития злокачественных опухолей у пациента, поскольку те клетки человеческого тела, которые подвергаются мутации и начинают бесконтрольно делиться, меняют структуру своей ДНК и начинают отличаться от здоровых клеток. Необходимо взять пункцию или биопсию подозрительных тканей и изучить материал методом ПЦР, чтобы установить масштабы угрозы.

А вот лишь неполный список тех вредоносных микроорганизмов, которые можно обнаружить с помощью ПЦР-анализа:

Обширное семейство герпес-вирусов, в том числе цитомегаловирус, варицелла-зостер, вирус Эпштейна-Барра и другие;

источник

Анализ ПЦР на 12 инфекций является самым эффективным, точным и быстрым способом выявления вредоносных микроорганизмов и диагностирования скрытых, острых и хронических заболеваний.

Анализ ПЦР на выявление 12 инфекций раскрывает суть проистекающего заболевания скрытого либо хронического характера. Диагностика методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) помогает произвести обследование человеческого организма на присутствие инфекционных, и даже наследственных заболеваний.

Многие длительно практикующие специалисты в разных областях медицины склоняются к тому, что ПЦР-12 – обязательный анализ, без которого постановка окончательного диагноза не производится. Стоит разобраться, в особенностях исследований методикой полимеразной цепной реакции, и какие анализы входят в основу обследования.

Анализ ПЦР-12 основан на методике полимеразной цепной реакции молекулярной биологии. Производится исследовательский процесс исключительно в лабораторных условиях при использовании специального оборудования с простым принципом деятельности и сбора информации.

В медицинской практике используется способ для точнейшего диагностирования многих форм активных патологий, инфекций, когда микробиологические либо иммунологические методики исследований не в силах определить проблемы.

Принцип работы анализа ПЦР основан на произведении многократного умножения (амплификация) отысканных в генетическом материале человеческого организма фрагментов ДНК либо РНК. Сколько бы ни было получено биоматериала, методика размножит клетки для рассмотрения типа заболевания. Технологический лабораторный процесс амплификации состоит из 3-х основных этапов:

Денатурация. Полученный для анализов образец биологического материала человека подготавливается в виде подогрева до 95 градусов. При типовом температурном показателе происходит закономерное расщепление на два отдельных элемента нити двух цепочной структуры ДНК.
Отжиг. На втором этапе биоматериал подают остуживанию. После чего примешивается к образцу реагент (азотистый праймер), умеющий распознавать специфичные последовательности ДНК в молекулах, которые характерны исключительно для вредоносного агента.
Элонгация. Методом присоединения (сам процесс полимеразной реакции) к болезнетворным фрагментам, праймер формирует (достраивает) молекулярно-генетический участок молекул. Каждое последующее воссоединение молекулы с реагентом, образует новое звено ДНК, дочернее основополагающей.

Цикличность процесса повторяется до десятков раз, пока в итоге получится необходимое количество строений ДНК, достаточных для диагностирования. Результаты сравниваются с данными, которые имеются на разнообразные строения клеточного уровня. Так определяется не только наличие вируса в организме, но и устанавливается сила воздействия бактерии на организм, и сколько клеток, то есть общее количество их концентрации.

Методика полимеразной цепной реакции довольно таки универсальна в своем роде при выявлении и определении многих патологий, отклонений инфекционного, сколько и иммунологического характера. В частности, анализ ПЦР-12 помогает определить такие инфекции:

Герпесвирусы (норма 0).
Хламидиоз с поражением мочеполовой системы.
Уреаплазмоз (норма 0-10*3).
Кандидоз.
Трихомониаз (норма 10*3-4).
Гарднереллез (дисбактериоз либо вагиноз бактериальный: норма 0-10*3).
Микоплазмоз половых или же дыхательных путей (норма 0-10*3).
Папилломавирус вызывает ряд патологических заболеваний (норма 0).
Гепатиты (вирусные).
ВИЧ-инфекции (гепатиты А, В, С, D).
Язвенные заболевания и гастрит.
Туберкулез.

источник

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) —это высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который способен идентифицировать возбудителей инфекционных болезней человека на основе выявления их генетического материала (ДНК или РНК) в пробах, полученных от обследуемого. Материалом для ПЦР-исследования служат биологические среды и жидкости человека: слизь, моча, кровь, мокрота, соскоб эпителиальных клеток, ткани плаценты, крови, сок простаты, околоплодные воды, плевральная и спинномозговая жидкость. ПЦР позволяет выявить активную стадию заболеваний в то время, когда бактериологические, вирусологические, иммунологические методы диагностики неэффективны.

Специалисты, широко практикующие ПЦР-диагностику:

гинеколог;
уролог;
инфекционист;
пульмонолог;
фтизиатр;
гастроэнтеролог;
гематолог;
онколог.

Возможны следующие результаты ПЦР-анализа:

отрицательный результат — означает, что в исследуемом биологическом материале не обнаружено никаких следов инфекции, которую пытались обнаружить;
положительный результат — с большой степенью точности указывает на наличие той или иной инфекции.

Инфекции, определяемые с помощью ПЦР-диагностики:

ВИЧ-инфекция;
вирусные гепатиты А, В, С, G;
инфекционный мононуклеоз;
цитомегаловирусная инфекция;
папилломавирусная инфекция (в том числе ее онкогенные виды 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, и 59);
герпетическая инфекция;
инфекции, передающиеся половым путем (уреаплазмоз, гарднереллез, хламидиоз, микоплазмоз, трихомониаз);
туберкулез;
боррелиоз;
клещевой энцефалит;
листериоз;
кандидоз, в т.ч. кандидоз половых органов;
хеликобактерная инфекция.

В норме результат ПЦР-диагностики отрицательный.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя кандидоза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя клещевого энцефалита с большой степенью точности указывает на наличие этого заболевания.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя туберкулеза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя бактериального вагиноза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя инфекционного мононуклеоза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя урогенитального кандидоза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя урогенитального трихомониаза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя хламидиоза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие вируса простого герпеса с большой степенью точности указывает на наличие герпетической инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие цитомегаловируса с большой степенью точности указывает на наличие цитомегаловирусной инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя листериоза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя вирусного гепатита B с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя микоплазмоза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

Положительный результат ПЦР-диагностики на наличие возбудителя уреаплазмоза с большой степенью точности указывает на наличие этой инфекции.

facebook

twitter

odnoklassniki

vkontakte

youtube

mail

Online диагноз
© ООО «Интеллектуальные медицинские системы», 2012—2019 гг.
Все права защищены. Информация сайта юридически защищена, копирование преследуется по закону.

Размещение рекламы, сотрудничество: info@online-diagnos.ru

Сайт не несет ответственность за содержание и достоверность размещенного пользователями на сайте контента, отзывы посетителей сайта. Материалы сайта носят исключительно информационно-ознакомительный характер. Содержание сайта не является заменой профессиональной консультации врача-специалиста, диагностики и/или лечения. Самолечение может быть опасно для здоровья!

источник

Рядом с метро Кропоткинская
Работаем каждый день с 9:00 до 20:00
Стоимость консультации 900 рублей

Результаты ПЦР позволяют в большинстве случаев точно определить, имеются ли у человека венерические заболевания.

Это исследование обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

Его чувствительность достигает 100% и превышает по этому показателю любые другие существующие диагностические тесты.

По специфичности ПЦР уступает только бактериологическому посеву.

Исследование может быть количественным или качественным.

Соответственно, результаты выдаются разные.

При большинстве половых инфекций проводятся качественные исследования.

Они позволяют получить ответ: да или нет.

То есть, присутствует ли возбудитель в урогенитальном тракте или его там нет.

При этом количественные показатели не определяются.

Это связано с тем, что при многих заболеваниях количество микроорганизма не имеет никакого значения в плане выбора терапевтической тактике.

Лечение проводится при выявлении даже единичных микроорганизмов.

Потому что целью терапии является полное уничтожение представителей данной микрофлоры в урогенитальной системе пациента.

На схему лечения количество бактерий или вирусов тоже не влияет.

Дозы антибиотиков назначаются одинаковые.

Длительность курса и дозировки определяются не количеством бактерий, а распространенностью и давностью инфекционного процесса, опытом предыдущих терапевтических курсов.

Примеры таких инфекций:

Для некоторых заболеваний нужны количественные показатели.

Потому что они влияют на врачебную тактику.

В частности, исходя из количества бактерий или вирусов, могут приниматься такие решения:

нужно ли пациенту лечение или достаточно динамического наблюдения;
какие схемы терапии должны использоваться;
стоит ли прекращать проводимое лечение или его нужно продолжать дальше.

Некоторые возбудители в небольших количествах не представляют большой угрозы.

В то время как при высокой концентрации способны вызывать значительные воспалительные процессы или осложнения.

Примеры заболеваний, для которых количественные результаты ПЦР имеют немаловажное значение:

папилломавирусная инфекция;
кандидоз;
ВИЧ.

Исследование выполняется с различными целями.

В основном они следующие:

1. Первичная этиологическая диагностика.

ПЦР назначается для установления вида возбудителей.

Или видов нескольких возбудителей – ведь инфекция вполне может оказаться сочетанной.

ПЦР хороша тем, что позволяет однократно взять мазок и провести исследование сразу не все возможные ЗППП.

Благодаря этому исследованию удается выявить любых микроорганизмов в урогенитальном тракте или других участках организма человека.

Но для эффективной этиотропной диагностики важно взять биоматериал именно из той зоны, где могут присутствовать микроорганизмы.

Например, при гонорее наиболее информативным будет проведение исследования уретрального соскоба.

В то время как хламидии чаще всего обнаруживаются у женщин в цервикальных образцах.

Некоторые инфекции поражают ротовую полость или прямую кишку.

Соответственно, для их обнаружения оттуда берутся мазки.

Для выявления ВИЧ и вирусных гепатитов требуются результаты ПЦР крови.

2. Установление типа или вида возбудителя.

ПЦР может проводиться как уточняющее исследование.

В том числе при уже установленном диагнозе.

Например, аногенитальные бородавки могут быть диагностированы клинически.

Для этого достаточно визуального осмотра и дерматоскопии.

После обнаружения кондилом становится очевидным, что человек заражен папилломавирусом.

Казалось бы, этиотропная диагностика не нужна.

Но в действительности нужно получить результаты ПЦР в такой ситуации.

Потому что типов папилломавируса существуют десятки.

Необходимо выяснить, какой конкретно тип спровоцировал инфекционное заболевания у данного пациента.

Потому что типы бывают различными по степени онкологического риска.

Он может быть низким, средним или высоким.

Соответственно, совершенно отличается тактика ведения пациента.

Если выявляются низко- или среднеонкогенные типы ВПЧ, то дальнейшее наблюдение за человеком не требуется.

Он повторно возвращается в клинику разве что в случае рецидива аногенитальных бородавок для их удаления.

Но в случае обнаружения ВПЧ высокого онкогенного риска терапевтическая тактика становится совершенно другой.

За человеком устанавливается наблюдение.

Особенно если это женщина, ведь у неё значительно возрастает риск цервикального рака.

Пациента каждые полгода обследуется.

мазки на онкоцитологию;
ПЦР на ВПЧ с вирусной нагрузкой;
по показаниям – проходит кольпоскопию, а по её результатам может быть выполнена биопсия.

Оценивается иммунный статус.

А в случае необходимости выполняются деструктивные процедуры для удаления очагов патологически измененного эпителия шейки матки.

То же самое касается кандидоза.

Диагноз может быть установлен с помощью одной только микроскопии, а то и клинически.

Но выявление вида грибка помогает подобрать более эффективное лечение.

Потому что только Кандида альбиканс хорошо восприимчива к традиционно используемому флуконазолу.

Другие виды грибков могут не реагировать на такое лечение.

В результате кандидоз может стать рецидивирующим.

Чтобы этого не произошло, делают ПЦР на 8 видов грибков.

Определяется точный вид кандиды и проводится целенаправленная терапия.

3. Определение количества микроорганизмов.

Может потребоваться даже при установленном этиологическом диагнозе.

К примеру, если выявлено, что у человека в репродуктивной системе присутствует папилломавирус, это ещё не означает, что ему необходимо лечение.

Потому что при низкой вирусной нагрузке даже онкогенные типы относительно безопасны.

Исследование проводится через каждые несколько месяцев.

Если количественная ПЦР показывает увеличение вирусной нагрузки, назначается лечение.

Данное исследование является одним из основных методов контроля течения ВИЧ-инфекции.

Наряду с показателями работы иммунной системы результаты ПЦР определяют:

когда нужно назначить антиретровирусную терапию;
какие дозировки препаратов необходимы;
сколько должно быть препаратов и какие;
реагирует ли человек на лечение;
какой у него риск осложнений и т.д.

Количественная ПЦР позволяет оценить динамику заболевания.

При возрастании вирусной нагрузки прогноз болезни оценивается как неблагоприятный.

Если же количество ДНК ВИЧ снижается, это говорит о том, что лечение проходит успешно.

4. Оценка успешности терапии.

Как качественные, так и количественные исследования ПЦР применяются для контроля результативности терапии.

Мы только что приводили пример с ВИЧ-инфекцией.

Снижение вирусной нагрузки, особенно до неопределяемой, говорит о том, что терапия проходит удачно.

Схему в этом случае не меняют.

ПЦР проводится снова и снова.

Если вирусная нагрузка начинает увеличиваться, это может означать развитие резистентности к некоторым лекарствам.

В таком случае их заменяют другими.

После коррекции схему её работоспособность снова оценивается по ряду показателей, включая вирусную нагрузку.

Результаты качественной ПЦР используются для подтверждения излеченности большинства венерических заболеваний.

Исключение составляет только сифилис – его излеченность подтверждается с помощью серологических исследований (анализов крови на антитела).

Для остальных инфекций ПЦР остается предпочтительным методом контроля.

Этот анализ сдают после терапии гонореи, хламидиоза, уреаплазмоза и других ЗППП.

ПЦР на половые инфекции выполняются пациентам, которые:

жалуются на симптомы со стороны урогенитального тракта;
вступали в половые контакты с потенциальным или установленным источником венерических инфекций;
желают обследоваться с профилактической целью (для раннего выявления и лечения венерических заболеваний до возникновения осложнений);
обследуются по поводу бесплодия;
планируют лечение бесплодия, в частности с использованием вспомогательных репродуктивных технологий;
планируют операции на репродуктивных органах (все венерические болезни должны быть выявлены и пролечены для снижения риска инфекционных осложнений).

Как мы уже выяснили, ПЦР выполняется не только для первичной диагностики.

Поэтому показаниями для получения результатов этого исследования также являются:

прохождение курса терапии по поводу венерического заболевания;
ВИЧ-позитивный статус (исследования проводятся регулярно для оценки последствий заболевания, особенностей его течения, назначения и коррекции антиретровирусной терапии);
наличие папиллом на половых органах (для оценки риска рака);
выявление ЗППП другими методами, например с помощью микроскопии или бак посева (показано обследование методом ПЦР на сопутствующие инфекции).

Нередко ПЦР делают пациентам в случае неудач в лечении тех или иных заболеваний.

Например, если терапия кандидоза не приносит успеха, необходимо исследование для определения вида грибка.

Исходя из этой информации, врач сможет подобрать более эффективную схему медикаментозной терапии.

В большинстве случаев интерпретация ПЦР не представляет затруднений.

Особенно если выдаются качественные результаты ПЦР диагностики.

Но всё же некоторые пациенты путаются в понятиях.

Когда врач им говорит, что результат исследования ПЦР положительный, они воспринимают эту новость с радостью.

Потому что слово «положительный» ассоциируется с чем-то хорошим, благоприятным.

Но на самом деле всё обстоит совсем наоборот.

Позитивность означает присутствие в организме определенного возбудителя.

Поэтому после положительный результат означает, что вам будет назначено лечение.

Если же он отрицательный, это действительно повод для того, чтобы обрадоваться.

Потому что такой результат значит, что инфекции, на которую проводилось исследование, у вас нет.

Чтобы результаты ПЦР были максимально достоверными, сдавать их нужно не раньше, чем начнется интенсивное выделение возбудителя во внешнюю среду.

Обычно на обследование идут либо после появления симптомов, либо через 2 недели после незащищенного полового акта.

ПЦР может дать положительный результат и раньше: часто его получают уже через несколько дней после заражения.

Но если слишком поторопиться, возрастает вероятность ложноотрицательного результата.

Потому что бактериальных клеток или вирусных частиц в структурах урогенитального тракта ещё мало.

Они могут не попасть в соскоб в достаточном для определения количестве.

В случае появления симптоматики делать ПЦР можно сразу.

С высокой вероятностью исследование даст положительный результат.

Бланк результатов в основном выглядит как таблица.

В ней указаны строки с наименованиями инфекций, на которые проводится обследование.

Указаны не названия заболеваний, а конкретные виды микроорганизмов.

Хламидия трахоматис;
Гарднерелла вагиналис;
Кандида альбиканс и т.д.

В столбцах напротив соответствующих видов указаны:

результаты анализа (обнаружено, не обнаружено, либо количественные значения);
единицы измерения (обычно копии ДНК на мл);
референсные значения (то есть, норма – какие показатели должны быть у здоровых людей).

Указание референсных значений необходимо, так как некоторые микроорганизмы, определяемые в ходе ПЦР, могут присутствовать в урогенитальном тракте в норме.

К примеру, может проводиться исследование на лактобактерии, которые составляют основу биоценоза здоровой женщины.

Если же диагностируется кандидоз, то нормальным считается наличие грибков в количестве 10 в 3 степени копий ДНК и меньше.

Бывают случаи, когда разные исследования дают противоречивые результаты.

Например, ПЦР отрицательный, антитела – положительный.

Наиболее частая причина такого явления состоит в том, что бактерии действительно нет в урогенитальном тракте.

Антитела обнаруживаются из-за перенесенной в прошлом инфекции.

В целом ИФА не обладает высокой специфичностью.

Ложноположительные результаты не являются редкостью для этого теста.

Но возможна и обратная ситуация.

Отрицательный ПЦР может оказаться ложным.

Например, если мазок взят не из того участка тела, где обитают бактерии.

К примеру, пациент страдает орофарингеальной гонореей.

У него гонококки обитают во рту, а мазок для ПЦР взяли из уретры.

Естественно, результаты покажут, что никаких гонококков нет.

Но в крови появятся антитела, поэтому ИФА будет положительным.

Теперь рассмотрим обратную ситуацию.

ПЦР показывает наличие инфекции, но антител нет.

Причин может быть несколько:

исследование проведено слишком рано, антитела ещё не успели синтезироваться;
патоген обладает низкой иммуногенностью (например, при кандидозе иммуноглобулины появляются лишь в случае осложнений);
произошло загрязнение исследуемого материала, в него попали бактерии, которые были обнаружены в ходе ПЦР (такое случается очень редко).

Если ПЦР и ИФА вступают в противоречие, то доверять нужно скорее ПЦР.

Потому что эта методика более точная.

Ложноположительные и ложноотрицательные результаты встречаются очень редко.

Ложноотрицательный тест возможен, если инфекция была недавно пролечена.

Потому что в ходе ПЦР определяется ДНК не только живых, но и погибших микроорганизмов.

Но в этом случае противоречия с ИФА обычно не наблюдается.

Потому что антитела в крови сохраняются длительное время после завершения курса терапии ЗППП.

При необходимости сделать ПЦР и расшифровать результаты, обращайтесь в нашу клинику.

Здесь работают опытные венерологи.

ПЦР – один из наиболее часто используемых тестов в нашем медицинском учреждении.

Наши преимущества:

безболезненное взятие мазков для ПЦР по авторской методике;
материал отправляется в лучшие лаборатории города, что обеспечивает высокую точность и достоверность проводимых исследований;
возможность анонимной диагностики.

После интерпретации полученных результатов доктор либо констатирует отсутствие инфекций, либо подберет необходимое лечение в случае их наличия.

Для консультации по результатам ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

источник