Меню Рубрики

Анализ на антитела к стафилококку

Стафилококки относятся к группе условно-патогенных бактерий. Это микроорганизмы, которые присутствуют на коже и слизистых оболочках и на общем благоприятном фоне не оказывают негативного воздействия на организм — до тех пор, пока в порядке иммунитет. Как только происходит сбой, бактерии начинают атаковать. Чтобы выявить конкретный штамм стафилококка, ставший причиной воспалительного процесса, и его чувствительность к антибиотикам, важно знать, какие именно анализы вам потребуется сдать.

В первую очередь стафилококковой атаке подвергаются пациенты с хроническими заболеваниями, пожилые люди, дети, беременные и кормящие женщины. Следствием становится целый «букет» проблем: от лор-заболеваний до поражений костей, суставов, оболочек сердца, мозга и общего заражения крови. Однако в силах человека — предупредить развитие патологии, обратить внимание на тревожные симптомы и обратиться к врачу за назначением лабораторной диагностики и последующего лечения. Рассмотрим подробнее, как происходит диагностика, как правильно сдавать анализ на стафилококк и где это можно сделать.

Стафилококки — это малоподвижные округлые бактерии, внешне напоминающие виноградные грозди. Их обнаружили еще 150 лет назад. Французский биолог Луи Пастер доказал взаимосвязь стафилококка и гнойного воспаления. Современным микробиологам известно около 20-ти типов бактерий этой группы, большинство из которых не наносят вреда здоровью. Существуют штаммы, опасные только для животных. Есть те, которые вызывают патологические реакции и у животных, и у человека. Наиболее часто гнойно-воспалительные процессы провоцируют S.aureus, S.saprophiticus и S.epidermidis . При ослаблении защитных сил организма они вызывают заболевания, общую совокупность которых называют стафилококковой инфекцией. Возникает она и в случаях, когда бактерии попадают в те органы, где их быть не должно.

Стафилококки обладают биохимической активностью. Они вырабатывают токсины, которые оказывают сильное воздействие на системы органов и тканей. Сложность профилактики и лечения обусловлена высокой устойчивостью бактерии к антибиотикам и факторам внешней среды. Микроорганизмы не боятся солнечных лучей, активно размножаются на воздухе, живут в воде и пищевых продуктах, полгода способны храниться в замороженном или высушенном состоянии, не погибают под воздействием спирта, хлорида натрия, перекиси водорода.

Путей заражения стафилококком несколько. Основные из них:

  • Контактный. Факторы передачи — одежда, предметы обихода и гигиены, постельное белье, домашняя пыль, перевязочные материалы.
  • Воздушно-капельный. Распространение происходит через воздух. Возможный фактор передачи — при вдыхании кондиционированного воздуха или воздуха, прошедшего по системе вентиляции.
  • Пищевой. Стафилококк активно размножается в несвежих продуктах: молоке, кефире, консервах, сладостях и т.д.
  • Парентеральный — через биологические жидкости: кровь, слюну, слезную жидкость, грудное молоко.

Человек часто не подозревает о наличии у него стафилококка и невольно становится разносчиком. Особенно это опасно, если по долгу службы ему приходится работать с большими группами людей. Речь идет о таких профессиях, как школьные учителя, продавцы, раздатчики готовых блюд в общепите, медицинские работники. Последние, впрочем, регулярно проходят обследование. Для остальных факт носительства может оставаться неизвестным на протяжении многих лет. Врачи условно выделяют группы лиц, которые в большей степени подвержены воздействию стафилококка. Среди них онкобольные, пациенты с диабетом, дети и пожилые люди, больные с открытыми ранами, травмами и ожогами, кормящие матери, военнослужащие, заключенные, работники образовательных и лечебных учреждений.

Симптомы, которые указывают на инфекцию, крайне разнообразны, сразу обнаружить истинную причину проблемы удается далеко не всегда. Между тем развивается она стремительно, переходя из одной стадии в другую. Стафилококковой инфекции в целом присущи симптомы интоксикации:

  • подъем температуры тела;
  • снижение аппетита;
  • сонливость;
  • слабость.

Болезнь имеет и местные проявления в зависимости от того, в какой части организма локализован процесс.

  • кожа : гнойнички, фурункулы, абсцессы, воспаление пупка у новорожденных;
  • кости и суставы : покраснения кожи, боли в руках и ногах при движении и надавливании;
  • дыхательные пути : налет на миндалинах, боль в горле, насморк, сухой кашель, покраснение;
  • оболочки сердца : резкий подъем температуры, шумы;
  • ЖКТ : боли в животе, вздутие, жидкий стул, тошнота, рвота.
  • мочеполовая система : частое и болезненное мочеиспускание, боль в спине.

Именно стафилококк в 95% случаев становится причиной остеомиелита — воспаления костного мозга с разрушением костных слоев. Если поражение переходит на суставы, возникает артрит. При попадании стафилококка к сердцу разрушается сердечный клапан, что влечет за собой закупорку периферических артерий, абсцесс миокарда, сердечную недостаточность. При поражении стафилококком головного мозга развивается абсцесс (образование гнойной полости), возникает менингит. Бактерии в дыхательной системе провоцируют воспаление легких и плевры. Существует понятие стафилококкового сепсиса — это состояние, для которого характерно поражение всех органов и систем. Оно требует неотложной помощи и несет прямую угрозу жизни. Все эти осложнения плохо поддаются терапии, часто оставляют последствия на всю жизнь или приводят к инвалидности.

Клиническая картина стафилококковой инфекции обширна. Симптомы часто схожи с признаками других заболеваний, не связанных с бактериальным заражением. Тем не менее в совокупности проявлений грамотный специалист способен заподозрить стафилококк, диагностировать наличие которого можно лишь лабораторно. Отсюда — важность своевременного и качественного анализа на стафилококк. Часто анализ является обязательным перед госпитализацией больного в стационар либо при наличии в больнице инфекции.

Выписать направление может терапевт, педиатр, врач общей практики, инфекционист или лор. В результате исследования определяют тип бактерии и степень устойчивости к антимикробным препаратам.

В числе известных медицине видов стафилококка чаще всего речь идет о трех из них:

  • Золотистый стафилококк . Он вызывает инфекции у взрослых и детей практически в любом органе и участке тела, затрагивает слизистые оболочки, кожу и даже нервную ткань.
  • Эпидермальный стафилококк. Наиболее опасен для людей с ослабленным иммунитетом, для больных с онкологией и ВИЧ, а также для недоношенных детей.
  • Сапрофитный стафилококк. Провоцирует заболевания мочеполовой системы, встречается, как правило, у женщин.

В каждой группе несколько разновидностей. В зависимости от штамма, бактерии поражают те или иные органы. Решение о том, какие анализы на стафилококк сдавать пациенту, принимает только квалифицированный специалист, ориентируясь на жалобы и общую картину заболевания. Для диагностики в лаборатории проводят микробиологическое исследование биоматериала. Для анализа берут кровь, кал, мочу, мокроту, грудное молоко, жидкости из раны или уха и различные виды мазков: ректальный, урогенитальный, из носоглотки и полости рта. У каждой процедуры — свои особенности проведения, которые напрямую влияют на результаты. Для того чтобы исследование оказалось достоверным, к сдаче анализов на стафилококк необходимо подготовиться.

Анализ на золотистый и другие виды стафилококка проводят до начала антибактериальной терапии. Если она назначена по другому поводу, пациенту следует отказаться от приема антибиотиков (после консультации с врачом), чтобы не допустить ложноотрицательного результата исследования на стафилококк. За 48 часов, также по согласованию, прекращают прием мочегонных препаратов. В числе других рекомендаций:

  • за 12 часов до исследования мокроты выпить максимально возможное количество воды, чтобы мокрота легко отхаркивалась и не была вязкой;
  • не ходить в туалет за 3–4 часа до анализа мочи или урогенитального мазка;
  • женщинам — не сдавать анализ мочи и урогенитальный мазок во время менструации и 2 дня до/после;
  • при анализе кала — за 3 дня прекратить использование ректальных свечей, слабительных препаратов и средств, влияющих на перистальтику кишечника и окраску каловых масс. К числу таких препаратов относят пилокарпин, белладонну, сернокислый барий, висмут, железо.

Помимо подготовительных мероприятий, крайне важен правильный забор материала для анализа. Необходимо использовать специальные контейнеры, пробирки, тампоны и другие атрибуты лабораторного исследования. В некоторых случаях пациенту предоставляют право собрать материал в домашних условиях, обращая внимание на необходимость точного следования инструкции.

Самостоятельно собранный биоматериал у пациентов принимают, когда речь идет об анализе кала на стафилококк, исследованиях мочи и грудного молока. Общее правило: для сбора используют стерильную тару (пластиковый одноразовый контейнер с винтовой крышкой), которую доставляют в лабораторию максимально быстро. Современные медицинские центры при подготовке к исследованию выдают пациентам подробную инструкцию, как правильно собрать материал.

Требования к сбору кала для анализа на стафилококк:

  • каловые массы должны быть естественными, не допускается применение слабительных препаратов;
  • собирать кал на чистую поверхность (лист бумаги или полиэтилен). Не рекомендован сбор из унитаза;
  • судно промыть с мылом под проточной водой, ошпарить кипятком и высушить;
  • для забора использовать специальную ложечку. Контейнер достаточно наполнить на 1/3.

Требования к сбору грудного молока:

  • перед сцеживанием вымыть руки с мылом. Область сосков обработать 70%-ным спиртом. Для каждой железы — отдельный тампон;
  • первые 5–10 мл сцедить в отдельную посуду — они не подходят для анализа. Дальше сцеживают молоко в контейнер, не касаясь стенок руками или грудью;
  • молоко из разных желез поместить в разные контейнеры.
  • наружные половые органы следует предварительно ополоснуть водой. Женщинам — использовать 4 ватных шарика, смоченных в мыльном растворе, каждым проводя только один раз.
  • первую струю мочи для анализа не использовать. В процессе сбора не прикасаться контейнером к телу. Емкость следует наполнять до середины.

Прочие виды анализов проводят непосредственно в лаборатории. Для определения стафилококка часто исследуют ротовую полость и носоглотку. Анализ из зева на стафилококк проводят при помощи мазка. Его берут натощак или через 3 часа после еды. Язык аккуратно прижимают шпателем, стерильным тампоном проводят между дужками миндалин по язычку и задней стенке глотки, не затрагивая губы и щеки. Затем тампон погружают в транспортную среду и отправляют в лабораторию. Аналогичны действия врача и при заборе материала для анализа из носа на стафилококк. Тампон вводят в носовой ход на глубину 2–3 см на уровне носовой раковины, прижимают к перегородке и несколько раз вращают.

Перед мазком не следует предварительно промывать рот или носоглотку. Если на слизистых оболочках имеются гнойники и язвенные образования, материал берут с области на стыке зараженной и здоровой ткани, поскольку там концентрируется наибольшее количество бактерий. Далее в лабораторных условиях производят посев. Частичку слизи переносят на подготовленную среду, в которой микробы быстро размножаются и образуют колонии. Это позволяет врачам определить разновидность бактерий, а также установить чувствительность к антибактериальным препаратам, что является решающим фактором при назначении лечения.

Бактериологический посев занимает в среднем 7 дней. В результатах анализов представлены данные о наличии или отсутствии роста бактерий. Отрицательный результат говорит об отсутствии стафилококковой инфекции. Положительный — о ее наличии или бессимптомном носительстве. В норме золотистого стафилококка ( S. aureus ) у человека быть не должно. Сапрофитный и эпидермальный могут присутствовать до определенных отметок. К примеру, количество бактерий при анализе кала на стафилококк у детей не должно превышать 10 4 степени КОЕ/г.

Стафилококковую инфекцию излечивают с помощью антибиотиков. Какие именно вещества окажутся эффективны, также показывает исследование. В результатах теста представлен список антимикробных препаратов, которые используются для лечения бактериальных инфекций. В их числе бензилпенициллин, оксациллин, цефокситин, амоксициллин, цефазолин, цефуроксим и многие другие. Напротив каждого лаборант ставит отметку «R» или «S» . Первая означает устойчивость к антибиотику, вторая — чувствительность. Из тех препаратов, к которым бактерия чувствительна, и будет состоять лечение.

Итоговый диагноз пациенту ставят на основании общей картины заболевания, совокупности симптомов и положительного анализа на стафилококк. Недооценивать важность своевременной диагностики нельзя. Инфекция способна быстро распространяться, создавая необратимые проблемы для здоровья. Кроме того, с каждым годом растет число штаммов, имеющих устойчивость к препаратам, которые еще недавно использовали для лечения, поэтому при каждом новом симптоме анализы необходимо сдавать заново.

Для опре­де­ле­ния ста­фи­ло­кок­ко­вой ин­фек­ции, в за­ви­си­мос­ти от пред­по­ла­га­е­мых мест ее ло­ка­ли­за­ции, мо­гут по­тре­бо­вать­ся раз­лич­ные био­ма­те­ри­а­лы — кровь, слизь из но­со­глот­ки или по­ло­вых ор­га­нов, мо­ча, кал. Не­за­ви­си­мо от то­го, ка­кое кон­крет­но ла­бо­ра­тор­ное ис­сле­до­ва­ние вам на­зна­чи­ли, во из­бе­жа­ние лож­ных или не­точ­ных ре­зуль­та­тов, сле­ду­ет со всей от­вет­ст­вен­ностью от­нес­тись к про­цес­су под­го­тов­ки и сда­чи био­ма­те­ри­а­ла на ана­лиз, за­про­сив ин­струк­цию в ла­бо­ра­то­рии.

источник

Стафилококковая инфекция уже на протяжении многих лет является одной из наиболее важных для здравоохранения. Это группа весьма различных заболеваний, вызываемых стафилококками, протекающих как в локализованных, так и генерализованных формах, и характеризующихся поражением кожи, подкожно-жировой клетчатки, органов дыхания, нервной системы, почек, печени, кишечника.

Заражению стафилококковой инфекцией подвержены все возрастные группы детского населения. У новорожденных и детей первого года жизни превалирует контактный путь инфицирования через предметы ухода, руки матери и больничного персонала, белье. Возможен и пищевой путь через зараженное стафилококком молоко при наличии у матери мастита. Дети более старшего возраста инфицируются через зараженные стафилококком продукты питания.

Этиология. Поражения ЖКТ S.aureus, сопровождаемые развитием энтеритов, энтероколитов, гастроэнтеритов и гастроэнтероколитов, наблюдаются преимущественно у новорожденных и детей первого года жизни, а также у детей с ослабленной иммунной системой.

Поражения могут быть первичными, связанными главным образом с экзогенным инфицированием S.aureus, и вторичными, возникающими на фоне имеющихся очагов воспаления и длительной антибиотикотерапии. Поражения ЖКТ наблюдаются у септических больных как проявления сепсиса.

Первичные поражения встречаются гораздо реже, чем вторичные. Вторичные являются проявлением инфекционного процесса стафилококковой этиологии внекишечной локализации.

Читайте также:  В анализах обнаружены антитела к хламидиозу

Возбудители стафилококковых поражений ЖКТ — бактерии вида Staphylococcus aureus — шаровидные, неподвижные, аспорогенные, факультативно-анаэробные грамположительные бактерии. Продуцируют пигмент желтого или оранжевого цвета, который относится к каротиноидам, нерастворим в воде. Оптимум роста стафилококков при температуре 37 °С.

S.aureus, выделяемые при энтероколитах, обычно продуцируют энтеротоксин В, а при гастроэнтеритах и гастроэнтероколитах — энтеротоксин А и, как правило, являются возбудителями пищевых токсикоинфекций.

Энтеротоксин В имеет сходство с термолабильными энтеротоксинами кишечной группы. К ферментам, прямо или косвенно участвующим в патогенезе заболевания, относятся гиалуронидаза, ДНКаза, фибрино-лизины, коагулаза.

S.aureus, как правило, чувствительны к цефалоспоринам 3—4-го поколения, карбопенемам, ванкомицину, фторхинолонам.

Источником инфекции являются больные и носители. Наибольшую эпидемическую опасность представляют больные стафилококковой инфекцией с открытыми очагами в остром периоде заболевания, а также «здоровые» бактерионосители среди персонала родильных домов, отделений для новорожденных, работников пищеблоков.

Инфекция распространяется контактным, воздушно-капельным и пищевым путями. Возможен эндогенный путь инфицирования, в частности у пациентов с первичным и вторичным иммунодефицитом.

В основе лабораторного подтверждения стафилококковых поражений ЖКТ лежат данные бактериологических и серологических исследований.

Выделение из фекалий S.aureus, в том числе и патогенных, не является бесспорным доказательством стафилококкового поражения кишечника.

При оценке важны следующие показатели: массивность выделения стафилококков, повторное выделение одного и того же фаготипа, его патогенность.

Серологические исследования являются второстепенными, дополняющими бактериологические данные. Наиболее значимы РА с аутоштаммами, РНГА и ИФА.

Из серологических методов диагностики гнойно-септических заболеваний применяют реакцию прямой гемагглютинации и ИФА. Диагностическим считают нарастание титра АТ через 7-10 сут при исследовании парных сывороток. Однократное исследование диагностического значения не имеет, так как практически у 100% взрослых в сыворотке присутствуют АТ к стафилококкам.

Определение АТ к стафилококкам применяют для диагностики гнойно-септических процессов, вызванных золотистым стафилококком, при следующих заболеваниях:

? воспалительные заболевания лёгких;

? флегмоны, абсцессы, фурункулёз, ангина;

? перитонит, сепсис, пиелонефрит;

? стафилококковые пищевые отравления.

Пути распространения стафилококковой инфекции различны, но в основном это воздушно-капельный и пылевой.
Контактно-бытовой путь передачи тоже очень важен, заражение может происходить через предметы, руки, перевязочный материал, посуду, белье и пр. Существует и пищевой путь передачи через зараженные пищевые продукты при употреблении их в пищу.
Наконец, возможен и инъекционный способ инфицирования, при этом стафилококк попадает в организм при медицинских манипуляциях, из-за недостаточной обработки инструментов, дефектов техники инъекций, введения недоброкачественных лекарственных препаратов. В этом отношении особенно опасны растворы глюкозы, являющиеся хорошей питательной средой для стафилококков, они легко могут быть инфицированы при дефектах приготовления или хранения.
Источником инфекции могут быть и домашние животные, но их эпидемиологическое значение ничтожно. Во внешней среде самостоятельных резервуаров патогенных стафилококков, по-видимому, не существует.

Восприимчивость к стафилококковой инфекции различна и зависит от возраста и состояния. Она наиболее высока у новорожденных, грудных детей, стариков, а также у больных.
Особенно большой восприимчивостью к стафилококкам обладают больные с острыми вирусными заболеваниями (гриппом, корью, вирусным гепатитом), болезнями крови, диабетом, послеоперационные больные и больные с обширными поражениями кожи (экзема, ожог). Восприимчивость к стафилококкам повышается при длительном применении кортикостероидов и цитостатиков.

Заболеваемость стафилококковыми инфекциями очень велика, но точных данных не существует. Стафилококковые инфекции чаще возникают спорадически, но могут быть семейные, групповые заболевания и значительные эпидемические вспышки, которые возникают чаще всего в стационарах — в домах ребенка, родильных домах и пр.; могут наблюдаться вспышки стафилококковых пищевых токсикоинфекций.
Летальность при стафилококковой инфекции держится на значительных цифрах и по мере уменьшения летальности при других болезнях удельный вес стафилококковой инфекции среди причин смерти высок.
По данным больниц разных стран и разных городов, стафилококковая инфекция как непосредственная причина смерти стоит на первом месте.

Стафилококковые инфекции всегда представляли опасность как внутрибольничные заболевания, они могут принимать характер бедствий, поражающих иногда даже хорошие благоустроенные учреждения.

Внутрибольничному распространению стафилококков способствуют недостаточное выявление и устранение источников заболевания (больные с легкими стафилококковыми процессами и носители, в том числе персонал), скученность, нарушение санитарного режима, недостаточная стерилизация инструментов, перевязочного материала и др.

Клинические проявления стафилококковых поражений кишечника разнообразны, не имеют специфических симптомов. Принята следующая классификация стафилококковых поражений ЖКТ:

3. Кишечные проявления при стафилококковом сепсисе:

Первичные стафилококковые гастроэнтериты и гастроэнтероколиты, энтериты и энтероколиты, как правило, начинаются остро с повышения температуры тела до субфебрильных и фебрильных цифр, реже подостро, протекающих, как правило, с нормальной температурой. Сопровождаются рвотой до 5—6 раз в сутки, частым жидким стулом до 5—10 раз в сутки с примесями слизи и зелени. Частота колитического и диспепсического стула совпадает. Нередко наблюдается примесь крови в кале, что в сочетании со рвотой, жидким стулом, температурной реакцией и другими симптомами интоксикации симулирует клинику шигеллеза. Однако в отличие от шигеллеза отсутствуют тенезмы, спазмы сигмовидного отдела кишечника, податливость и зияние ануса.

Стафилококковая инфекция желудочно-кишечного тракта разнообразна по месту локализации процесса: стоматит, гастрит, энтерит, колит. Возможны сочетанные формы: гастроэнтерит, энтероколит, гастроэнтероколит.

Клинические проявления стафилококкового поражения желудочно-кишечного тракта, тяжесть течения зависят от характера заражения (пищевой, контактный, эндогенный), возраста и преморбидного фона больного, свойств возбудителя, величины инфицирующей дозы.

Пищевая токсикоинфекция стафилококковой этиологии, чаще развивающаяся у детей старшего возраста, характеризуется коротким инкубационным периодом (2—5 ч), острым внезапным началом, появлением болей в эпигастральной области, повторной или многократной рвотой. Больного беспокоят резкая слабость, головокружение, тошнота. При осмотре обнаруживается резкая бледность кожных покровов, возможен акро- и периоральный цианоз. Кожа покрыта холодным потом. Со стороны сердечно-сосудистой системы: пульс слабого наполнения, тоны сердца приглушены, артериальное давление снижено. Довольно часто присоединяются признаки поражения кишечника, отмечается жидкий, водянистый, обильный стул, возможны примеси слизи, прожилки крови. Легкая форма заканчивается выздоровлением через 1-3 дня. У больных с тяжелыми формами развиваются токсикоз и эксикоз.

У детей первого года жизни первичные стафилококковые энтериты и энтероколиты характеризуются острым, реже постепенным началом, повышением температуры тела, повторной рвотой, появлением жидкого водянистого стула, нередко с примесями слизи, крови. Характерна длительная дисфункция кишечника (до 2-3 нед. и более). Диарея чаще инвазивного, реже секреторного характера.

Возможны вторичные поражения желудочно-кишечного тракта на фоне других проявлений стафилококковой инфекции (сепсис, флегмона, пневмония). Наблюдаются длительно сохраняющиеся высокая температура тела, рвота, жидкий стул со слизью, кровью. Течение болезни длительное, волнообразное. При прогрессировании септического процесса, особенно у детей первого года жизни, возможно развитие псевдомембранозного или язвенного энтероколита с перфорацией стенки кишечника и развитием перитонита.

Лечение стафилококковых болезней — удивительно сложная задача, ибо нет микроба, способного сравниться со стафилококком по способности вырабатывать устойчивость к антибиотикам и другим антибактериальным средствам. Опыт первого применения пенициллина показал его эффективность именно по отношению к стафилококкам. Прошло около 70 лет, и сейчас о таких стафилококках можно только мечтать. Фармакологи синтезируют все новые и новые антимикробные средства, а микробиологи, с не меньшей частотой, обнаруживают стафилококки к этим средствам не чувствительные.

Главная причина этого явления не только сам стафилококк, но и неоправданно широкое применение антибиотиков в ситуациях, когда без этого вполне можно обойтись. Парадокс, но даже некоторые стафилококковые болезни в лечении антибиотиками не нуждаются — например, пищевые отравления, связанные, как мы уже говорили, не с самим микробом, а с его токсинами.

Стафилококк стафилококку рознь. Самые опасные и устойчивые ко многим лекарствам обитают в больницах. Жизнь там нелегкая (и для бактерий в том числе), но стафилококки, выжившие в условиях постоянного применения дезинфицирующих средств и массового использования антибиотиков — серьезнейший фактор риска, основа так называемой госпитальной инфекции.

Лечение стафилококковых болезней — задача сложная, путь к ее решению долог и дорог, но вполне реален. Конкретный стафилококк, устойчивый ко всем антибактериальным средствам, — явление очень редкое. Бактериологические методы позволяют не только обнаружить виновника болезни, но и определить его чувствительность к лекарствам, после чего провести курс эффективной терапии. Гнойные очаги в соответствующих органах устраняются оперативными вмешательствами, используются также антистафилококковые плазма и иммуноглобулины, посредством которых в организм вводятся уже готовые антитела. Огромное значение имеет устранение провоцирующих факторов, тех, что снижают иммунную защиту и определяют принципиальную возможность возникновение болезни.

Печально, но перенесенная стафилококковая инфекция не оставляет после себя длительного иммунитета. Уж слишком велико количество возможных факторов патогенности. К токсинам одного стафилококка в крови появились антитела, но итог встречи с другим микробом не предсказуем, ибо он может обладать другими токсинами, организму еще не знакомыми.

Профилактика заболеваний, вызываемых стафилококками, включает несколько направлений. К ним относятся меры борьбы с источником инфекции, которыми являются люди, страдающие гнойно-воспалительными процессами и бактерионосители, при лечении которых возникают определенные трудности. Особенно важно в комплексе профилактических мероприятий предупреждение стафилококковых заболеваний в лечебных учреждениях. Это прежде всего организация режима работы отделений больниц. Отделения, в которых находятся больные с открытыми гнойно-воспалительными процессами, должны обслуживаться отдельным персоналом. Для предупреждения возникновения стафилококковых заболеваний у лиц, подвергающихся риску травматизма или инфицирования, рекомендуется использовать метод иммунизации сорбированным анатоксином или введение иммуноглобулина.

Особая проблема — профилактика стафилококковых заболеваний у новорожденных. У них еще до настоящего времени стафилококк является одним из главных возбудителей инфекции. В данном случае в профилактику включают иммунизацию рожениц стафилококковым анатоксином, а также проведение количественного и качественного анализа обсемененности молока родильниц с целью более строго подхода к переводу новорожденного на вскармливание кипяченым грудным молоком. В норме в женском молоке содержится три класса иммуноглобулинов — IgG, IgM и IgA, которые разрушаются при кипячении.

Несмотря на многочисленные ферменты и опаснейшие токсины, несмотря на поразительную устойчивость во внешней среде, микроб ничего не может поделать с иммунной защитой здорового человека: против каждого яда имеется противоядие, системы общего и местного иммунитета способны нейтрализовать факторы патогенности, сдерживать размножение стафилококков, предотвращать возникновение болезней!

источник

способ определения специфических ige-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка, с применением тест-системы для определения специфических ige-антител к стафилококку, выделенная из стафилококка активная аллергенная субстанция (аас) и способ диагностики стафилококковой аллергии

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и аллергологии. Изобретение обеспечивает тест-систему ИФА для определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка; способ определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка, с применением указанной тест-системы; и способ диагностики стафилококковой аллергии. Применение заявленного изобретения позволяет выявить аллергию на стафилококк. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к аллергологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностике.

В России аллергическими заболеваниями страдает от 10 до 30% населения [1]. Инфекционно-зависимые формы в структуре аллергических болезней составляют до 75% всех аллергопатологий, в числе которых следует отметить тяжело протекающие болезни: бронхиальную астму, хронические бронхиты, риниты, аллергодерматозы, осложненные инфекцией, нередко приводящие больных к инвалидности [2]. Экономический ущерб от аллергических заболеваний, осложненных инфекцией, чрезвычайно высок из-за многократных ежегодных обострений хронических инфекций у больных.

В основе инфекционно-зависимых форм аллергии лежит гиперреактивность сенсибилизированного организма больного к аллергенам микробов, обитающих на коже и слизистых оболочках носа, зева, бронхов больных [3, 4, 5, 6, 7]. Аллергенные свойства микроба зависят от природы его метаболитов, путей их трансформации внутри организма человека, от специфики взаимосвязей живой микробной клетки с организмом хозяина.

Многообразие способов воздействия микроба на макроорганизм обусловливает сложность решения проблемы аллергенности бактерий и их метаболитов [8]. Ранее исследованиями многочисленных авторов [9, 10], в частности сотрудниками ГНЦ-Института иммунологии ФМБА А.Д.Адо, В.Н.Федосеевой и соавт. 1997-2003 гг., было показано, что стафилококки играют важную роль в патогенезе инфекционно-зависимых форм аллергии. Была доказана возможность формирования гиперчувствительности немедленного типа у больных респираторно-аллергическими заболеваниями, атопическими дерматитами на аллергены стафилококка. Последнее является важным критерием назначения больным аллерген-специфической иммунотерапии аллерговакцинами из стафилококка [11] и последующей тактики ведения больных с немедленным типом аллергии к стафилококку.

Предлагаемая тест-система ИФА позволяет в условиях «ин витро» выявлять специфическое связывание IgE-антител в сыворотках крови пациентов, сенсибилизированных аллергенами стафилококка, и является необходимым дополнением как при клинико-лабораторной диагностике стафилококковой аллергии, так и при разработке стратегии ее аллерген-специфической иммунотерапии.

Существующие коммерческие тест-системы ИФА стафилококковой специфичности позволяют лишь определить наличие в организме человека стафилококковой инфекции, не выявляя специфического IgE-ответа на стафилококковые аллергены. В связи с этим в настоящее время в современной «ин витро»-диагностике стафилококковой аллергии указанный тест ИФА отсутствует. Возможно это объясняется тем, что длительный период времени основное внимание исследователей уделялось изучению механизмов иммунотоксических эффектов при действии на организм стафилококковых энтеротоксинов, а стафилококк — в качестве источника аллергенов, стимулирующих специфический IgE-ответ, рассматривался в качестве теоретических разработок лишь в единичных работах [9, 4, 12].

В последние годы появилась серия работ, подтверждающих участие стафилококковых суперантигенов в патогенезе аллергических заболеваний, в частности в стимуляции синтеза IgE-антител. При этом доказана связь аллергии к стафилококку с I (немедленным) типом аллергических реакций [13]. Это, в свою очередь, свидетельствует о необходимости применения рассматриваемой тест-системы ИФА при ин витро -диагностике аллергии немедленного типа к стафилококку [14, 4, 6, 15, 16].

Авторы не обнаружили в уровне техники аналог-прототип, наиболее близкий к заявленному изобретению, поскольку нами впервые была поставлена задача разработки технологии получения тест-системы ИФА для определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотках крови больных аллергическими заболеваниями, имеющих гиперчувствительность к аллергенам стафилококка, и диагностики аллергии к стафилококку с использованием указанной тест-системы.

Использование настоящего изобретения позволяет определить специфические IgE-антитела к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями с помощью заявляемой тест-системы, обладающей высокой чувствительностью, и повысить эффективность диагностики аллергии к стафилококку.

В соответствии с настоящим изобретением тест-система ИФА для определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка, включает планшеты одноразового применения с иммобилизованной активной аллергенной субстанцией (AAC), выделенной из стафилококка, на стрипах; AAC St. aureus; положительный и отрицательный контроли (сыворотки); конъюгат анти-IgE-антител; твин-20; буфер с добавлением Твина (pH 7,0-7,2) для приготовления раствора для отмывок; цитратный буфер (pH 4,7) для приготовления рабочего раствора; ортофенилендиамин (ОФД) в виде таблеток 0,0002 г и пергидроль H 2 O 2 — 37% — для приготовления красящего раствора; H 2 SO 4 в качестве стоп-раствора; и инструкцию по использованию набора. При этом AAC состоит из трех активных фракций с молекулярными массами 50, 130 и 170 кДа.

Вторым объектом изобретения является способ определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка. Указанный способ включает следующие стадии: подготовку твердой фазы (планшет) для сорбции AAC с использованием КББ — карбонатно-бикарбонатного буфера (pH 9,5); нанесение раствора AAC в лунки планшета; инкубацию AAC на твердой фазе в холоде при 2-4°C в течение 2 суток; отмывание буфером (pH 7,0-7,2) трижды, подсушивание; нанесение контрольных и испытуемых сывороток в лунки соответствующих стрипов с 50 мкл буфера (pH 7,0-7,2); инкубацию в термостате при 37°C в течение 2,5 часов; отмывание буфером (pH 7,0-7,2) трижды, подсушивание стрипов; нанесение раствора конъюгата во все лунки стрипов; инкубацию в холоде при 2-4°C в течение 18-20 часов; нанесение красителя ОФД в цитратном буфере (pH 4,7) во все лунки стрипов; нанесение во все лунки стоп-раствора; контроль реакции ИФА по оптической плотности во всех образцах при длине волны 492 нм на Мультискане.

Следующим объектом изобретения является способ диагностики стафилококковой аллергии, включающий определение специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного с использованием вышеуказанного способа, причем позитивная реакция оценивается 2-4 классом.

1. Подбор и паспортизация опытных штаммов стафилококка для получения аллергенной субстанции осуществлялась на основе идентификации видовых признаков штаммов стафилококка, выделенных от больных бронхиальной астмой и атопическим дерматитом стафилококкового генеза, на базе бактериологической лаборатории ГФБУ Институт иммунологии ФМБА, Отдела живых культур ГИСКа им Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора с учетом морфологических, культуральных и биохимических характеристик.

1.2 Создание банка специфических сывороток с высокой IgE-связывающей активностью с аллергенами стафилококка осуществлялось на основе клинико-лабораторного обследования больных респираторно-аллергическими заболеваниями и атопическим дерматитом (АД), осложненными стафилококковой инфекцией отделения НКО (зав. проф. Л.В.Лусс) и отд. аллергологии и иммунопатологии кожи (зав. проф. Феденко Е.С.). Обследовано 47 больных с бронхиальной астмой и 12 чел. с АД, осложненными стафилококковой инфекцией (всего 59 чел.). Банк специфических сывороток составил 15 образцов с интенсивностью ИФА в специфическом IgE-связывании со стафилококковым аллергеном 2-4 класса.

1.3 Получение аллергенной фракции производили по методу выращивания культур на питательных средах, покрытых целлофановыми дисками [9] с последующей обработкой суспензии клеток стафилококка в ультразвуковом дезинтеграторе. Дробление стафилококковых клеток проводили с помощью ультразвукового дезинтегратора UD-20 фирмы Techpan (Польша) при рабочей частоте 22±1,65 кГц и выходной мощности 180 Вт. Дезинтегрирование проходило в течение 45 мин. Неразрушенные фрагменты микробных клеток осаждали центрифугированием, осадок удаляли. Определяли чистоту и однородность декантата, содержание белка по Кьельдалю, которое составило 0,5 мг/мл. Разделение белковых фракций в надосадочной жидкости проводили методом электрофореза в полиамилакридном геле с использованием камеры для электрофореза SE 300 mini VE фирмы Hoefer (США). Фракции с молекулярной массой 170, 130 и 50 кДа показали наивысшую степень специфического IgE-связывания в иммуноблоте. Выделение указанных фракций осуществляли методом гель-фильтрации с использованием Сефадекса G-100 фирмы Pharmacia (Швеция) на колонке фирмы LKB (Швеция) размером 3>

Классы МПК: G01N33/53 иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого
A61P37/08 противоаллергические средства
Автор(ы): Федосеева Вера Николаевна (RU) , Камышева Валерия Алексеевна (RU) , Миславский Олег Владимирович (RU) , Федоскова Татьяна Германовна (RU) , Лункина Елена Владимировна (RU) , Мартынов Александр Игоревич (RU)
Патентообладатель(и): Федеральное государственное бюджетное учреждение «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства (ФГБУ «Институт иммунологии» ФМБА России) (RU),
Федосеева Вера Николаевна (RU),
Мартынов Александр Игоревич (RU),
Камышева Валерия Алексеевна (RU)
Приоритеты:
Таблица 1
Показатели специфической IgE-связывающей активности AAC Staphylococcus aureus с сыворотками крови больных в «in vitro»-тесте ИФА для выявления аллергии немедленного типа по специфическому IgE-связыванию с аллергенами St
Форма аллергена Изготовитель IgE-антитела
Класс реакции (M±m)
Число экспериментов
AAC Staphylococcus aureus Институт иммунологии 3,2±0,2 7
Аллерген Рузам Брынцалов-А (Россия) 2,1±0,2 7
Контроль (сыворотка) Отрицат. 3
сыворотка, не содержащая специфических антител против Staphylococcus aureus.
Читайте также:  В челнах анализ на антитела

Из таблицы 1 видно, что образец AAC St. aureus, полученный в Институте иммунологии, обладает специфической активностью.

Уровни связывания специфических IgE-антител в сыворотках крови больных с гиперчувствительностью к Staphylococcus aureus с испытуемой AAC из Staphylococcus aureus составили 3,2±0,2 (класс ИФА), что подтверждает специфическую активность AAC. Препарат Рузам — менее активен.

2.5 Разработка экспериментального технологического процесса изготовления на основе ЛАС тест-системы ИФА для определения IgE-антител в сыворотках крови больных с гиперчувствительностью к аллергенам стафилококка

Для определения аллерген-специфических IgE-антител был отработан оптимизированный метод твердофазного ИФА на основе конъюгатов, меченных пероксидазой хрена (ООО Полигност , Санкт-Петербург) с тестированием планшет сборных, одноразового применения, различной сорбции для иммунологических исследований. Тест-система модифицирована для определения IgE-антител на стрипах с иммобилизованными аллергенами (1 стрип — 8 ячеек) ЗАО «БиоХимМак».

Были выявлены оптимальные условия связывания AAC Staphylococcus aureus на планшетах разной степени сорбции аллергенов. Найдены критерии оптимальной фиксации препарата и максимальной интенсивности специфического IgE-связывания, что использовано на разных этапах выполнения работ.

Проведена оценка специфической активности разработанной тест-системы ИФА.

Сформулированы требования к тест-системе ИФА на основе AAC:

— AAC должна обладать способностью взаимодействовать со специфическими к St. aureus IgE -антителами контрольной положительной сыворотки (положительный контроль). Образуемый комплекс выявляется пероксидазным конъюгатом моноклональных анти-IgE-антител, образующих цветное окрашивание с субстратной смесью. Определение проводят твердофазным иммуноферментным анализом (ИФА) [23].

Определение считают удовлетворительным, если положительная контрольная сыворотка при взаимодействии с испытуемыми образцами Staphylococcus aureus дает цветное окрашивание, оптическая плотность которого выше оптической плотности контрольной отрицательной сыворотки

Пример технологического процесса (ТП)

ТП-1 — подготовка твердой фазы (планшет) для сорбции AAC с использованием КББ (pH — 9,25);

ТП-2 — нанесение раствора AAC в лунки планшета;

ТП-3 — инкубация AAC на твердой фазе в холоде при 2-4°C в течение 2 суток;

ТП-4 — отмывание буфером (pH 7,0-7,2), подсушивание;

ТП-5 — нанесение контрольных и испытуемых сывороток в лунки соответствующих стрипов с 50 мкл буфера (pH 7,0-7,2);

ТП-6 — инкубация в термостате при 37°C в течение 2,5 часов;

ТП-7 — отмывание буфером (pH 7,0-7,2), подсушивание стрипов;

ТП-8 — нанесение раствора конъюгата во все лунки стрипов;

ТП-9 — инкубация в холоде при 2-4°C в течение 18-20 часов;

ТП-10 — отмывание буфером (pH 7,0-7,2), подсушивание стрипов;

ТП-11 — нанесение красителя ОФД в цитратном буфере (pH 4,7) во все лунки стрипов;

ТП-12 — нанесение во все лунки стоп-раствора;

ТП-13 — контроль реакции ИФА по оптической плотности во всех образцах при длине волны 492 в Мультискане.

2.6 Апробация разработанной тест-системы ИФА в клинико-лабораторных исследованиях

Было собрано 26 сывороток крови больных с респираторно-аллергическими заболеваниями и атопическим дерматитом, осложненными стафилококковой инфекцией. Показано, что сыворотки 81% пациентов с гиперчувствительностью к St.aureus показали положительную реакцию с AAC в тест-системе ИФА (2-4 класс реакции) при сравнении с позитивным и негативным контролями.

На основании проведенной работы разработана Инструкция по применению тест-системы ИФА для диагностики аллергии к стафилококку и макет тест-системы (см. иллюстрации).

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ИФА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ К СТАФИЛОКОККУ

Назначение: тест-система ИФА на основе AAC St.aureus предназначена для выявления специфических к стафилококку IgE-антител в сыворотках крови больных аллергическими заболеваниями, осложненными стафилококковой инфекцией.

Область применения: данная диагностическая система может быть использована для выявления аллергии к стафилококку.

Принцип определения: на основе активной аллергенной субстанции стафилококка (AAC) проводится скрининговый ИФА для выявления специфических IgE-антител к стафилококку у больных аллергическими заболеваниями, осложненными стафилококковой инфекцией.

Комплект тест-системы включает:

— планшеты одноразового применения (тест-система модифицирована для определения IgE-антител на стрипах с иммобилизованной AAC (1 стрип — 8 ячеек) ЗАО «БиоХимМак»),

— положительный контроль (сыворотка),

— отрицательный контроль (сыворотка),

— буфер с добавлением Твина (pH 7,2) (для отмывания, рабочий раствор),

— цитратный буфер (pH 4,7) — рабочий раствор,

— ортофенилендиамин (ОФД), таблетки 0,002 г,

— Инструкция по использованию набора.

Таблица 2.
Приготовление растворов
Рабочие растворы Состав и приготовление Хранение
1 Промывочный раствор Буфер (натриевая соль-твин 20) pH 7,0-7,2: Хранить при 5±3°C — 7 дней
Натрия хлорид, чда 9,0 г
Твин-20 0,5 мл
Дистиллированная вода до 1 л
Коррекцию pH проводить 0,2 М раствором натрия фосфорнокислого двузамещенного
2 Рабочий раствор конъюгата 12 мкл конъюгата (моноклональные антитела против эпсилон-цепи IgE человека) поместить в 12 мл буфер натриевой соли-твина 20 (на 1 планшет) Использовать в день приготовления
3 Цитратный буфер рабочий раствор Цитратный буфер pH 4,7±0,2: Хранить при 5±3°C — 7 дней
Лимонная кислота 0,1М 3 мл
Натрий фосфорнокислый однозамещенный 0,2 М 1 мл
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,2 М 2 мл
Дистиллированная вода 6,5 мл
Из расчета на 1 планшет
Коррекцию pH проводить 0,2 М раствором натрия фосфорнокислого двузамещенного
4 Красящий раствор ОФД В цитратном буфере полностью растворить 1 таб. ортофенилендиамина, после этого внести водорода перекись 37% (пергидроль) 5 мкл (на 1 планшет) Использовать в течение 1 часа после приготовления
5 H 2 SO 4 — 50% (стоп-раствор) Серная кислота — H 2 SO 4 50% В течение 1 года

1. Набор автоматических дозаторов переменного объема «Biohit».

2. Холодильник с морозильной камерой на -20°C.

4. Пробирки типа «Эппендорф» на 1,5 мл.

6. Мультискан (Multiskan EX, Thermo Labsystems).

9. Иономер универсальный ЭВ-74.

10. Планшеты разборные, одноразовые, модифицированные, высокой сорбции (производства ГУП ГОС НИИ «Биомедикал»).

— В лунки планшета вносят по 100 мкл карбонатного буфера.

— В каждую лунку добавляют 20 мкл AAC.

— Планшет помещают на 2 суток в холодильник.

— Отмывание несвязавшегося AAC проводят 3 раза буфером (pH 7,2).

— Во все лунки стрипов вносят по 50 мкл буфера pH 7,2, а затем:

— в стрип № 1 — 50 мкл положительного контроля — позитивная сыворотка, содержащая IgE-антитела к стафилококку, с реакцией в ИФА — 2-4 класса.

— В стрип № 2 — 50 мкл исследуемых сывороток крови, содержащих IgE-антитела к стафилококку.

— В стрип № 3 — 50 мкл сывороток крови, не содержащих IgE-антитела к стафилококку,

— отрицательный контроль, на 2-3 часа все стрипы, прикрыв крышкой, помещают в термостат при t=37°C.

— Планшет вынимают, отмывают буфером (pH=7,2) 3 раза.

— Заливают во все лунки каждого стрипа по 100 мкл рабочего раствора конъюгата и выдерживают в холодильнике 18-20 часов.

— Вынимают из холодильника и отмывают 3-4 раза буфером (pH 7,2), просушивают.

— Добавляют во все лунки стрипов по 100 мкл краски ОФД (рабочий субстрат), выдерживают в темноте 10-15 минут.

— Реакцию останавливают добавлением во все лунки стрипов по 100 мкл 50% р-ра H 2 SO 4 .

— Результаты считывают на Мультискане (при длине волны 492 нм).

Результаты измерений сравнивают с показателями в позитивном и негативном контролях, позитивная реакция оценивается 2-4 классом.

Примеры осуществления способа диагностики

1. Пациентка Максимова И.В., 33 г. На протяжении 4 лет принимает противоаллергическую терапию без эффекта. Пациентке провели определение специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови заявленным способом. Определился 4 класс реакции, что явилось показанием к назначению специфической иммунотерапии стафилококковой иммуновакциной.

2. Пациентка Худуева Е.Ю., 47 л. Практически всю жизнь страдает от аллергии. Принимает лечение, часто без эффекта. Заявленным способом определили 4 класс реакции, что явилось показанием к назначению специфической иммунотерапии стафилококковой иммуновакциной.

Читайте также:  Хеликобактер анализ на антитела положительный

3. Пациент Кларк М., 13 лет. Определили 3 класс реакции, что явилось показанием к назначению специфической иммунотерапии стафилококковой иммуновакциной.

4. Пациент Киреев C., 2 года. Определили 2 класс реакции, что явилось показанием к назначению специфической иммунотерапии стафилококковой иммуновакциной.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ.

1. Адо А.Д. Общая аллергология , М., 1978, 464 с.

2. Фрадкин В.В. «Диагностические и лечебные аллергены», М., Мед., 1990, 256 с.

3. Беклемишев Н.Д., Суходоева Г.С.«Аллергия к микробам в клинике и эксперименте», М., Мед., 1990, 262 с.

4. Елисютина О.Г., Феденко Е.С.Staphylococcus aureus в патогенезе атопического дерматита. Рос., аллергологический ж., 2004, № 1, с.17-21.

5. Мокроносова М.А. «Влияние золотистого стафилококка и дрожжеподобных грибов на течение атопического дерматита». Дисс. докт. мед. наук. М., 1999 г.

6. Федосеева В.Н., Молотилов Б.А., Ларина О.Н., Федоскова Т.Г. «Бактериальная аллергия», Пенза, ЧТ Тугушева, 2004, 214 с.

7. Хутуева С.Х. Бронхиальная астма. Нальчик, 1988, с.127.

8. Государственная Фармакопея СССР, XI, 1, 2, М., 1998.

9. Федосеева В.Н., Камышева В.А., Ларина О.Н. «Способ получения бактериальных аллергенов», Рос. Гос. Регистрация № 2183970 от 27.06.2002 г.

10. A.Oehling, Бактериальная инфекция в этиологии бронхиальной астмы , Патофиз. и эксп. терапия, 1999, № 1, стр.6-11.

11. Reha CM, Ebru А Specific immunotherapy is effective in the prevention of new sensitivities. Allergol Immunopathol (Madr) 2007; v35; N 2, p.44-51.

12. Gould H J et al. The allergic march from St. aureus superantigens to IgE , Allergy, 2007, 93, 106-136.

13. Gisch K, Gehrke N. Formalin-fixed Staphylococcus aureus et al particles preven allergic sensitization of type I allergy . Int Arch allergy Immunol, 2007, v 144 (3) p.183-196.

14. Taskapan M.J., Kumar P. «Role о staphylococcal superantigens in atopic dermatitis, Ann Allergy Asthma Immunol, 2000, V. 84(1) p 3-10; p.11-2.

15. Cardona I.D., et al. Role of bacterial superantigens in atopic dermatis. Am J. Clin Dermatol. 2006, 7(5), p.273-79.

16 Lin YT, Wang C.T. et al «Role bacterial pathogens in atopic Dermatitis»/ Clin Rev Allergy Immunol., 2007 v 33 (3) p.167-177.

17. Guerin В Purification ana standatdization of allergens. Rev. Med Suisse Romande, 1994, v 114, N 3, p.251-254.

18. Правила доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP), Москва, 1992 г.

19. Siegel LM., Monty K J. Determination of molecular weights and frictional ration of proteins in impure systems by use of gel filtration and dtnsity gradient centrifugation. Application to crude preparations of sulfite and hidroxylamine reductases. Biochim. et biophis. acta, 1966, 112, p.346-362.

20. В.Н.Федосеева, Г.В.Порядин и др. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях , М., «Промедек», 1993, 319 с.

21. «Методические рекомендации по контролю иммунобиологических препаратов. Фармакопейная статья» — ФС-42., М., МЗ РФ, 2005 г.

22. «Программа EAACI по стандартизации аллергенов», ALLERGI, 2004, 59, 571-574.

23. Федосеева В.Н., Кудрина Г.П.(ред). Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологических средств. М.: МЗ, 1988, 22 с.

1. Тест-система ИФА для определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка, включающая планшеты одноразового применения с иммобилизованной активной аллергенной субстанцией (ААС), выделенной из стафилококка, на стрипах; ААС St. aureus; положительный и отрицательный контроли (сыворотки); конъюгат анти-IgE-антител; твин-20; буфер с добавлением Твина (рН 7,0-7,2) для приготовления раствора для отмывок; цтратный бефер (рН 4,7) для приготовления рабочего раствора; ортофенилендиамин (ОФД) в виде таблеток 0,0002 г и пергидроль H 2 O 2 — 37% — для приготовления красящего раствора; H 2 SO 4 в качестве стоп-раствора; и инструкцию по использованию набора.

2. Активная аллергенная субстанция (ААС), выделенная из стафилококка, которая состоит из трех активных фракций с молекулярными массами 50, 130 и 170 кДа.

3. Способ определения специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного аллергическими заболеваниями, имеющего гиперчувствительность к аллергенам стафилококка, с применением тест-системы по п.1, включающий подготовку твердой фазы (планшет) для сорбции ААС с использованием КББ (рН 9,5); нанесение раствора ААС в лунки планшета; инкубацию ААС на твердой фазе в холоде при 2-4°С в течение 2 суток; отмывание буфером (рН 7,0-7,2) трижды, подсушивание; нанесение контрольных и испытуемых сывороток в лунки соответствующих стрипов с 50 мкл буфера (рН 7,0-7,2); инкубацию в термостате при 37°С в течение 2,5 ч; отмывание буфером (рН 7,0-7,2) трижды, подсушивание стрипов; нанесение раствора конъюгата во все лунки стрипов; инкубацию в холоде при 2-4°С в течение 18-20 ч; нанесение красителя ОФД в цитратном буфере (рН 4,7) во все лунки стрипов; нанесение во все лунки стоп-раствора; контроль реакции ИФА по оптической плотности во всех образцах при длине волны 492 нм на Мультискане.

4. Способ по п.3, в котором планшетом является одноразовый планшет с высокой сорбцией.

5. Способ по п.3, в котором ААС является AAC St. aureus.

6. Способ по п.3, в котором промывочный раствор содержит натрия хлорид, Твин 20, дистиллированную воду.

7. Способ по п.3, в котором раствор конъюгата получают путем помещения конъюгата, представляющего собой моноклональные антитела против эпсилон-цепи IgE человека, в буфер натриевой соли — Твин 20.

8. Способ по п.3, в котором цитратный буфер содержит лимонную кислоту 0,1 М, натрий фосфорнокислый однозамещенный 0,2 М, натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,2 М, дистиллированную воду.

9. Способ по п.3, в котором красящий раствор получают путем растворения в цитратном буфере 1 таблетки ортофенилендиамина, с последующим внесением пергидроля 37%.

10. Способ по п.3, в котором стоп раствором является серная кислота (H 2 SO 4 ) 50%.

11. Способ диагностики стафилококковой аллергии, включающий определение специфических IgE-антител к стафилококку в сыворотке крови больного с использованием способа по п.2, причем позитивная реакция оценивается 2-4 классом.

12. Способ по п.11, в котором стафилококковой аллергией является аллергия немедленного типа.

источник

Человеческий организм может служить домом для тысяч микробов и бактерий, причем, такое соседство вовсе не обязательно заканчивается болезнью. Иммунитет надежно защищает нас, сдерживая активность непрошеных гостей и заставляя их следовать правилам хорошего тона. Стафилококк – не исключение; он в норме обнаруживается примерно у трети населения Земли, но ничем себя не проявляет до поры до времени.

Ослабление иммунитета, банальное переохлаждение или наличие в организме другой инфекции, против которой применялись антибиотики, — вот причины, по которым стафилококк может перейти в наступление. Поэтому важно понимать две вещи: нельзя лечиться антибиотиками в случае малейшего недомогания или простуды, и просто бессмысленно использовать их против стафилококка для упреждения. От носительства вы все равно не избавитесь, зато познакомите свой стафилококк с антибактериальными препаратами и сведете на нет их эффективность в будущем, когда они действительно могут понадобиться.

Единственная разумная мера по упреждению стафилококковых инфекций – это местная санация кожи, слизистых оболочек и верхних дыхательных путей в холодный период года, а также приём препаратов, укрепляющих иммунитет. Назначение антибиотиков оправдано лишь в случае тяжелых, опасных для жизни заболеваний: пневмонии, эндокардита, остеомиелита, множественных гнойных абсцессов на коже и в мягких тканях, чирьев на лице и голове (в непосредственной близости к головному мозгу). Но прежде чем выбрать антибиотик против стафилококка, квалифицированный врач всегда производит бактериальный посев.

В санэпидстанции, кожно-венерологическом диспансере или медицинском кабинете профильного специалиста (ЛОРа, дерматовенеролога, гинеколога, уролога, пульмонолога, гастроэнтеролога, инфекциониста) производится забор бактериальной культуры из места локализации стафилококковой инфекции. Это может быть мазок из зева, гнойного абсцесса на коже, влагалища или уретры, а также образец крови, мокроты, мочи, слюны, желудочного сока, спермы и прочих физиологических жидкостей.

Полученный материал помещается в питательную среду, через некоторое время колония стафилококков размножается, и лаборант может определить, к какому типу относится возбудитель, и к каким антибиотикам он чувствителен.

Результат посева выглядит как список, в котором напротив названий всех актуальных противомикробных препаратов стоит одно из буквенных обозначений:

S (susceptible) — чувствителен;

I (intermediate) — умеренно чувствителен;

Среди антибиотиков из группы «S» или, в крайнем случае,«I» лечащий врач выбирает препарат, которым больной в течение предшествующих нескольких лет не лечил ни одно заболевание. Так больше шансов добиться успеха и избежать быстрой адаптации стафилококка к антибиотику. Это особенно важно в тех случаях, когда речь идёт о лечении затяжных и часто рецидивирующих стафилококковых инфекций.

По сути, есть только одна объективная причина для применения антибиотиков против такого устойчивого и гибкого возбудителя, как стафилококк – ожидаемая польза превысит неизбежный вред. Лишь в случае, когда инфекция охватила весь организм, попала в кровь, вызвала лихорадку, а естественных защитных сил не хватает для победы над болезнью, приходится прибегать к антибактериальной терапии.

Зато есть целых три веских причины, чтобы отказаться от антибиотиков при лечении стафилококка:

Справиться с некоторыми типами возбудителя, например, с золотистым стафилококком, могут лишь цефалоспорины второго-третьего поколения, полусинтетические пенициллины (оксациллин, метициллин), да мощнейшие современные антибиотики (ванкомицин, тейкопланин, фузидин, линезолид). Прибегать к крайним средствам приходится все чаще, потому что за последние 5-10 лет стафилококки мутировали и обзавелись ферментом бета-лактамаза, с помощью которого они успешно разрушают цефалоспорины и метициллин. Для таких возбудителей существует термин MRSA (methicillin-resistant Staphylococcus aureus), и уничтожать их приходится комбинациями препаратов, например, фузидина с бисептолом. А если пациент до возникновения обширной стафилококковой инфекции бесконтрольно употреблял антибиотики, возбудитель может оказаться нечувствительным;

Каким бы эффективным ни был антибиотик, на практике эффект от его применения против стафилококка почти всегда оказывается временным. Например, при фурункулезе после успешного купирования инфекции у 60% пациентов болезнь рецидивирует, причем, справиться с ней с помощью того же самого препарата уже не удается, поскольку возбудитель приспособился. Очевидно, что такую цену стоит платить только за «выход из пике», когда без антибиотика стабилизировать состояние больного стафилококковой инфекцией просто невозможно;

Антибиотики не выбирают жертв – помимо тех бактерий, против которых вы их применяете, они уничтожают и другие микроорганизмы, в том числе, полезные. Длительное лечение антибактериальными препаратами почти всегда провоцирует дисбактериоз в органах ЖКТ и мочеполовой сфере, а также усугубляет опасность активизации других инфекций, присутствующих в организме в форме носительства.

Скажем сразу – нет, нельзя. Лишь в очень редких случаях, когда стафилококк попал на небольшой участок кожного покрова, а иммунитет человека был по какой-то причине активизирован, макрофаги ухитряются справиться с непрошеным гостем, и тогда говорят о «транзиторном носительстве стафилококка». Такую ситуацию если и обнаруживают, то по чистой случайности. Чаще возбудителю удается закрепиться на новом месте, особенно если контакт был обширным (купание в зараженном водоеме, пользование инфицированной одеждой, постельным бельем, полотенцами). Приобретенный в больнице, детском садике, школе или летнем лагере стафилококк обычно поселяется в организме на всю жизнь.

Почему иммунитет здорового ребенка или взрослого человека не избавляется от этой опасной бактерии? Потому что на то нет объективных причин, пока носительство не переходит в заболевание. Скромно сидящий в уголочке стафилококк не вызывает никакого интереса у иммунной системы, лейкоциты и макрофаги не объявляют на него охоту, и в крови не вырабатываются нужные антитела. Но что же делать, если, например, ребенок каждую осень-зиму болеет стафилококковой ангиной, или девушка, знающая о присутствии зловредной бактерии в своем организме, планирует беременность?

В этих случаях необходимо прибегнуть к иммуностимулирующей терапии и санации доступных проблемных зон: зева, носоглотки, кожи, влагалища. Такие меры не позволят вам избавиться от стафилококка навсегда, но существенно сократят численность его колоний и снизят риск перехода носительства в опасную болезнь.

Профилактическая санация – очень действенная мера, к которой рекомендуется регулярно прибегать всем носителям стафилококка. Сотрудники детских образовательных и лечебных учреждений дважды в год сдают мазки из носа, и если результат положительный, проводится санация, а затем анализ берут повторно, стремясь добиться полного отсутствия стафилококка в верхних дыхательных путях. Это очень важно, ведь только так можно застраховаться от распространения возбудителя воздушно-капельным путем.

Если у вас или вашего ребенка ежегодно наблюдаются рецидивы ангины, фурункулеза и прочих гнойно-воспалительных заболеваний, причиной которых (согласно результатам анализов, а не исходя из ваших догадок) служит именно стафилококк, стоит пополнить домашнюю аптечку средствами для местной санации. С помощью этих препаратов производится полоскание горла, закапывание носа, закладывание ватных тампонов в носовые ходы, орошение или спринцевание половых путей, протирание и смазывание кожи или слизистых оболочек, в зависимости от локализации носителя. Для каждого случая нужно подбирать подходящий вариант препарата и строго придерживаться инструкции.

Вот список всех эффективных растворов и мазей против стафилококка:

Масляный раствор ретинола ацетата (витамина A);

источник