Исследованию подлежит вода централизованного водоснабжения, колодцев, открытых водоемов, бассейнов, сточные воды.
Отбор проб водопроводной воды. Кран стерилизуют обжиганием с последующим стоком воды в течение 10 мин при полностью открытом кране. Пробу воды забирают в стерильную стеклянную посуду с плотно закрывающимися пробками. Доставка воды производится в контейнерах-холодильниках при температуре 4-10 0 С.
Для оценки санитарно-бактериологического состояния воды используют следующие показатели:
1. определение общего микробного числа (ОМЧ);
2. определение бактерий семейства Enterobacteriaceae и термотолерантных колиформных бактерий;
3. определение спор сульфитредуцирующих клостридий;
5. определение патогенных бактерий кишечной группы.
Исследование питьевой воды на наличие колифагов, патогенных бактерий кишечной группы проводится по эпидемиологическим показателям. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий проводится при оценке эффективности технологий обработки воды.
Определение общего микробного числа (ОМЧ)
Для определения ОМЧ вносят два объема воды по 1 мл в стерильные чашки Петри, в которые выливают по 6-8 мл расплавленного и остуженного до 45 0 С МПА. Содержимое чашки смешивают, оставляют до застывания агара и помещают в термостат на 24 ч. Подсчитывают количество колоний на чашках, вычисляют среднее арифметическое. Результат выражают числом КОЕ (колониеобразующих единиц) в 1 мл воды.
Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae
и термотолерантных колиформных бактерий
Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками бактерий семейства Enterobacteriaceae, но они способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при температуре 44 0 С в течение 24 ч.
Для выявления бактерий семейства Enterobacteriaceae и термотолерантных колиформных бактерий используют два метода: 1) метод мембранных фильтров, 2) титрационный метод.
Метод мембранных фильтров. Необходимый объем воды — 300 мл -фильтруют через мембранные фильтры по 100 мл. Фильтры переносят на среду Эндо в чашке Петри и инкубируют при 37 0 С 24 ч. Подсчитывают число красных и красных с металлическим блеском колоний.
Идентификацию бактерий проводят по оксидазному тесту и тесту образования кислоты и газа при ферментации лактозы (маннита) для чего исследуют не менее 10 колоний.
Так как, микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae и термотолерантные колиформные бактерии не обладают оксидазной активностью, то оксидазоположительные культуры дальше не исследуются.
Все лактозоположительные колонии засевают в две пробирки с одной из лактозных сред и 1 пробирку инкубируют при 37 0 (для культивирования микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae), а другую при 44 0 (для культивирования термотолерантных колиформных бактерий).
Учитывают бактерии семейства Enterobacteriaceae – показатели давнего фекального загрязнения воды и термотолерантные колиформные бактерии – показатели свежего фекального загрязнения.
Результаты анализа выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий семейства Enterobacteriaceae и термотолерантных колиформных бактерий в 100 мл воды.
Титрационный метод. Принцип метода заключается в посеве установленного объема воды (300 мл – 3 объема по 100 мл – качественный анализ и 333 мл – 3 объема по 100 мл, 3 объема по 10 мл, 3 объема по 1 мл – количественный анализ) в лактозно-пептонную (или глюкозо-пептонную) среду, с последующим пересевом в среду Эндо и идентификацией культуры по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам для определения бактерий семейства Enterobacteriaceae.
Для выявления термотолерантных колиформных бактерий делают посев 2-3 изолированных колоний в пробирки с лактозной средой, нагретой на водяной бане или в термостате до 44 0 С.
При обнаружении бактерий семейства Enterobacteriaceae и термотолерантных колиформных бактерий хотя бы в одном из трех объемов делают заключение – об обнаружении колиформных бактерий в 100 мл воды.
Определение спор сульфитредуцирующих бактерий
Сульфитредуцирующие клостридии, преимущественно C. perfringens – спорообразующие анаэробные палочки, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при 44 0 в течение 24 ч.
Определение сульфитредуцирующих клостридий проводят двумя методами: 1) метод мембранных фильтров, 2) прямым посевом.
Метод мембранных фильтров. Метод основан на фильтровании воды через мембранные фильтры, выращивании посевов в железо-сульфитном агаре в анаэробных условиях и подсчете черных колоний.
Результаты анализа выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.
Метод прямого посева. Производят посев 20 мл воды в пробирки с железо-сульфитным агаром (2 объема по 10 мл в 2 пробирки или 4 объема по 5 мл в 4 пробирки) инкубируют при 44 0 С 24 ч и посчитывают черные колонии. Результаты выражают числом КОЕ в 20 мл воды.
Колифаги – вирусы, лизирующие кишечную палочку и образующие зоны лизиса (бляшки) на бактериальном газоне.
Определение колифагов проводят прямым и титрационным методами.
Прямой метод. Исследуемую воду вносят в 5 стерильных чашек по 20 мл. В 6-ю — контрольную воду не берут. Затем во все чашки заливают расплавленный и остуженный до 45 0 агар с добавлением суточной культуры E.сoli, штамм К2 (1,5 мл смыва E.сoli в концентрации 10 9 на 150 мл агара). Перемешивают, оставляют для застывания и инкубируют при 37 0 С 24 ч.
Учитывают результат подсчетом бляшек в чашках Петри в БОЕ (бляшкообразующих единицах) в 100 мл воды. В контрольной чашке бляшки должны отсутствовать.
Титрационный метод. В основе метода — предварительное подращивание колифагов в среде обогащения в присутствии E.сoli и последующее выявления бляшек колифага на газоне E.сoli.
Определение бактерий родов сальмонелла и шигелла
Для выявления патогенных энтеробактерий исследуемый объем воды (не менее 2-3 мл) засевают в среды обогащения (Мюллера-Кауфмана, магниевая среда) с последующим высевом на плотные селективные и дифференциально-диагностические среды – Плоскирева, Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар. Выделенные культуры идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, биохимическим и серологическим свойствам.
Оценка воды по микробиологическим показателям
Критерии оценки воды разработаны дифференциально в зависимости от ее категории и назначения. Вода плавательных бассейнов по своим качествам должна соответствовать ГОСТу питьевой воды (табл. 3).
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Лучшие изречения: Для студента самое главное не сдать экзамен, а вовремя вспомнить про него. 9949 — 
| 7468 — 
или читать все.
195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.
Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно
источник
Компания «Эко-Дефенс» более 10 лет производит профессиональную дезинсекцию, дезинфекцию, дератизацию. Также мы проводим экспертизу и анализы воды, почвы, воздуха, радиации и шума в Москве и Московской области. Мы используем проверенные и надежные гипоаллергенные препараты и гарантируем 100%-е качество выполненных услуг. Точную стоимость услуги, вы можете узнать позвонив по телефону 8 (495) 151-84-77. Менеджер уточнит площадь квартиры, дома или участка, удаленность от МКАД и еще ряд параметров и даст вам развернутый ответ по стоимости, методах работы и времени приезда специалиста.
Современный мир полон опасностей, и купить противоядие от каждой из них вряд ли получится. Даже привычные элементы комфорта могут нести серьезную угрозу. К примеру, забираемая из колодца, родника, скважины жидкость для питья может быть заражена опасными патогенными микроорганизмами. В этом случае любое употребление некипяченой воды, в том числе при купании, умывании, других манипуляциях, может приводить к весьма тяжелым последствиям. Но с проблемой можно справиться и даже ее предупредить, если использовать для этого специализированные исследования в лаборатории. Анализ воды — химический и бактериологический, подразумевает наличие возможностей для своевременного выявления угрозы, а также ее классификации с учетом требований Роспотребнадзора и СанПиН.
Прайс на услуги нашей санэпидемстанции в Москве и Московской области предусматривает и предоставления полного комплекса лабораторных услуг. Специалисты выполняют необходимые исследования на бактериальные показатели, наличие опасных химикатов и составляют квалифицированные экспертные заключения. Долго употреблять зараженную воду просто опасно. Если ее качество не соответствует санитарным нормам, считать жидкость питьевой нельзя. Она должна подвергаться кипячению и другим видам очистки. Органические примеси в источниках должны присутствовать в строго ограниченном количестве. Для проверки содержимого природных источников водоснабжения достаточно сделать проверку микробиологических характеристик и качества по заданным параметрам.
Поскольку водопроводные системы регулярно подвергаются достаточно интенсивной санитарной обработке, проводить в них контрольные исследования приходится нечасто. А вот владельцы колодцев и скважин — частные лица и компании, должны сдавать пробы в СЭС не реже раза в полугодие, чтобы позаботиться о регулярном проведении лабораторных исследований для оценки состава воды. Однако бывают и исключения из правил. В старых водопроводных трубах магистрали также может наблюдаться существенное ухудшение санитарных показателей транспортируемой среды. Если вода явно имеет следы загрязнений, мутная, имеет осадок, посторонние запахи, не стоит полагаться на добросовестность коммунальных служб — лучше сразу обратиться за помощью в СЭС.
Выполненный на высоком профессиональном уровне, бак анализ воды из скважины позволяет успешно выявить и уточнить все необходимые показатели, способные представлять опасность для здоровья человека. Потенциальные источники угрозы могут быть выявлены при присутствии фекальных примесей. Они проявляются в воде в виде колиформных бактерий — чаще всего Escherichia coli, имеющих спорообразующуюся структуру. При возникновении эпидемиологической угрозы такая вода становится основным источником распространения опасных кишечных инфекций. Если примеси попадают в скважину с завидной регулярностью, может встать вопрос о целесообразности ее применения в хозяйственно-бытовых целях. Принять решение собственник сможет лично.
Установленная на бак анализ воды цена невысока, но позволяет получить важнейшие данные о санитарной безопасности источника. Для колодцев это особенно важно, ведь для них характерны следующие особенности:
- Близкое расположение водоносного слоя. Жидкость подвержена заражению через наружные слои почвы, при наличии контакта с фекальными массами может включать в себя широкий спектр бактериальной флоры.
- Высокий подъем грунтовых вод. Разливаясь, они могут приносить с собой дополнительные примеси, способные представлять существенную санитарную опасность.
- Нарушение санитарных норм в строительстве. Копка колодца поблизости от дачного туалета, выгребной или компостной ямы может привести к просачиванию загрязнений в чистую воду.
Уточняя, сколько стоит бак анализ на воду, нужно обязательно учитывать, что все ее показатели достоверно и точно сможет установить только квалифицированная экспертиза. Выполнять исследования имеют право только аккредитованные лаборатории. Именно на них Роспотребнадзором возлагается проведение всех необходимых контрольно-ревизионных действий для проверки безопасности жидкости в природных источниках водоснабжения. В нашей санэпидемстанции уже оборудовано все необходимое для решения самых сложных задач в этой области. Сотрудники лаборатории имеют опыт обслуживания колодцев и скважин общественного и индивидуального назначения и всегда готовы отправиться на выезд для забора образцов, а также их последующего изучения.
Сколько стоит химический и бактериологический анализ воды, и когда он должен проводиться обязательно? Важно понимать, что любые источники водоснабжения, искусственные водоемы и бассейны периодически должны проходить контроль на предмет обнаружения в составе потенциально опасных веществ в высокой концентрации. Среди важных показателей можно отметить:
- колиформная бактериальная флора — ее содержание в питьевой воде недопустимо (проверяется на каждые 100 мл);
- микробное число — допустимая концентрация составляет 50 КОЕ/мл;
- термотолерантная колиформная микрофлора — не должна присутствовать в любом объеме;
- эндотоксические бактериальные показатели — здесь норма не должна превышать 0,125 ЭЕ/мл.
Химико-бактериологическая экспертиза и анализ воды проводится с исследованием характерных для ее состава показателей, а также их проверкой на соответствие нормам и требованиям. Все актуальные параметры регламентированы требованиями СанПиН. Микробиологические аналитические исследования выполняются для определения соответствия воды нормам питьевого или технического стандарта. Проверка проб выполняется с использованием современных и актуальных методов, позволяет обеспечивать оптимальное соотношение скорости и качества выполняемых исследовательских мероприятий. Современное техническое оснащение делает такой лабораторный контроль по-настоящему эффективным, обеспечивает возможности для точного выявления всех фактов нарушения санитарии.
Применение данного способа проверки микробиологических параметров воды подразумевает использования индикаторов, которые при контакте со средой позволяют выявлять колибактерии при помощи изменения окраски жидкости. Проявление происходит в случае, если в жидкости есть определенные группы кислот и выделяемые патогенными бактериями продукты жизнедеятельности. Такой способ рекомендован Роспотребнадзором для контроля за качеством воды в бассейнах, природных водоемах: реках, озерах, а также при проверке колодцев и скважин различного назначения. Вода при этом берется в довольно значительных объемах, поскольку в экспериментах оказывается задействовано несколько пробирок с контрольными образцами, предназначенными для проверки.
На регулярной основе химический и бактериологический анализ воды в Москве в комплексе проводится на промышленных, социальных, культурных объектах, в образовательных и лечебных учреждениях. Здесь исследованию подвергаются также стоки и воды технического назначения. Оценить достоверно содержание в них патогенных микроорганизмов бывает достаточно сложно. На помощь приходит использование метода АТФ, в котором своеобразным индикатором выступает аденозинтрифорсфорная кислота. С ее помощью удается определить уровень концентрации живых микроорганизмов в составе пробы. При добавлении химического компонента в пробирку происходит реакция, проверить результаты которой можно при помощи люминометра. Интенсивность свечения покажет масштаб заражения.
Классическая методика, применяемая на протяжении долгих лет. В чашках Петри с питательной средой (агаром)высаживаются бактериальные колонии из полученных проб. При отсутствии микрофлоры, спустя сутки микробиологический фон не изменится. Но, если для опасных вредителей найдется питательная среда, за 24 часа их колония сумеет разрастись до значительных размеров. Для получения пригодной к высеванию бак посева среды воду разбавляют до определенной концентрации. Кроме того, при выращивании бактериальной колонии поддерживается определенный температурный режим. Применение данной методики актуально для контрольных исследований бактериальных показателей любых типов питьевой воды: от природной до бутилированной.
Если обычно колонизация бактерий в рамках аналитических исследований выполняется при помощи гелеобразного агара, имеющего довольно высокую плотность, то в этом случае бак посев делается исключительно в жидкость. Правда, состоящую из слабой концентрации все того же питательного «бульона» из коллагена, содержащегося в водорослях. Сильно разбавленный агар обеспечивает возможности для максимально быстрого роста колонии, гарантирует точность получаемых результатов. Размножение микроорганизмов в этом случае оказывается гораздо более быстрым и активным — при их отсутствии, питательная среда так и останется лишенной новых обитателей. Метод используется при исследовании воды питьевого назначения.
В рамках этого метода применяется дополнительная вакуумная фильтрация исследуемых образцов. Это целесообразно, если речь идет о точном установлении видовой и классовой принадлежности выявленных микроорганизмов. Стоит обратить внимание, что такой подход оказывается актуален для контроля качества питьевых вод всех типов.
Чтобы установленная на химический и бактериологический анализ воды цена оставалась выгодной, стоит с самого начала найти лабораторию, которой вы сможете доверять. Наша санэпидемстанция предлагает возможности для быстрого и эффективного решения этой проблемы. В аккредитованной лаборатории созданы все условия для успешного исследования всех представленных образцов и собранных проб. Вы можете обратиться к специалистам для проверки на наличие колиформных бактерий открытых водоемов и природных источников водоснабжения, а также сред, используемых для подачи по магистральным коммуникационным линиям. Обращаясь к специалистам, вы исключаете возможность ошибок и можете быть уверены в санитарной безопасности водоема.
источник
Цель работы: изучение методов оценки санитарнобактериологического состояния питьевой воды и воды из естественных водоемов.
Вода, используемая на предприятиях пищевой промышленности, должна отвечать требованиям, предъявляемым к питьевой воде действующими нормативными документами. Безопасность воды в эпидемиологическом отношении определяют по общему числу микроорганизмов и количеству бактерий группы кишечных палочек в ее определенном объеме.
Качество воды централизованных систем питьевого водоснабжения определяют в соответствии с санитарными правилами и нормами. Питьевая вода должна быть безопасна в эпидемиологическом и радиационном отношениях, безопасна по химическому составу и иметь благоприятные органолептические свойства (табл. 12.1).
Таблица 12.1. Безопасность питьевой воды в эпидемиологическом отношении (по микробиологическим и паразитологическим показателям) СанПиН 2.1.4.1074-01
Общее микробное число (ОМЧ)
Термотолерантные колиформные бактерии
Число бактерий в 100 см 3
Общие колиформные бактерии
Споры сульфитредуцирующих бактерий
* БОЕ — бляшкообразующие единицы.
12.1. Отбор проб и подготовка их к анализу
Воду для санитарно-бактериологического контроля отбирают в количестве 500 см 3 в бутылки, предварительно простерилизованные в бумажных пакетах, с ватно-марлевой пробкой, покрытой сверху бумажным колпачком.
Перед отбором пробы кран или край трубы обжигают зажженным ватным тампоном, пропитанным спиртом. Открывают кран и в течение 10-15 мин воду спускают, затем производят отбор пробы. Вода подлежит анализу не позже чем через 2 ч после отбора.
Пробы воды из открытых водоемов — колодцев, бассейнов, рек, озер — отбирают с помощью батометров, представляющих собой металлический каркас с массивным свинцовым дном — грузилом. В металлический каркас вставлена бутылка. Батометр погружают на заданную глубину и открывают бутылку, потягивая за веревку, привязанную к пробке. После наполнения бутылки батометр извлекают и закрывают ее стерильной пробкой.
Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором, так как под действием хлора микробы в воде погибают. В качестве дехлоратора используют серноватистый натрий из расчета 10 мг на 500 см исследуемой воды.
К отобранным пробам воды прилагают сопроводительный документ с указанием соответствующих данных. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре от 4 до 10 °С.
12.2. Определение общего микробного числа воды
Общее микробное число (ОМЧ) — это количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, образующих колонии на мясопептонном агаре при посеве 1 см 3 воды с последующей инкубацией посевов при температуре 37±0,5 °С в течение 48 ч. ОМЧ должно быть не более 50 КОЕ/см 3 .
В зависимости от степени предполагаемого загрязнения производят посев не менее двух различных объемов воды, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний. Водопроводную и артезианскую воду засевают в неразведенном виде по 1 см 3 . При бактериологическом исследовании загрязненных вод делают посевы разведенной воды. Разведения готовят так, как указано в разделе 8.3.
Из исследуемого образца и из пробирок с его разведениями в соответствии со степенью предполагаемого микробного загрязнения отбирают по 1 см 3 , вносят в стерильные чашки Петри и заливают 10-12 см расплавленного и остуженного до температуры 45 °С мясопептонного агара. Круговыми движениями руки, вращая чашки по горизонтальной поверхности стола, распределяют их содержимое равномерным слоем по всей площади дна. После застывания агара чашки с посевами помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С. После инкубации подсчитывают число выросших колоний.
Определение микробного числа указанным методом позволяет выявить лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы.
12.3. Определение содержания колиформных бактерий в воде
С эпидемиологической точки зрения особенно важным является обнаружение в воде патогенных микроорганизмов — возбудителей кишечных инфекций (брюшного тифа, дизентерии, холеры и др.) Однако в связи с большой трудностью обнаружения патогенных микроорганизмов при бактериологических анализах ограничиваются определением так называемых санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ). К санитарно-показательным относят микроорганизмы, постоянно находящиеся в естественных полостях человека или животных. Присутствие СПМ в различных объектах внешней среды является индикатором их загрязнения человеком. Чем больше СПМ во внешней среде, тем более вероятным становится присутствие специфических возбудителей инфекционных заболеваний.
В качестве СПМ наибольшее значение имеют бактерии группы кишечных палочек (БГКП). К группе кишечных палочек относят колиформные бактерии родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.
При определении количества СПМ в воде используют следующие характеристики:
• коли-титр — наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка. Для питьевой воды, прошедшей очистку, титр кишечной палочки должен быть не менее 300 см 3 ;
• коли-индекс — количество кишечных палочек в 1 дм 3 воды. Коли-индекс для питьевой воды должен быть не более 3.
Колиформные бактерии определяют в воде методом мембранных фильтров или бродильным методом.
Бродильный метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды, инкубации
посевов при температуре 37 °С в средах накопления с последующим высевом на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1 дм 3 воды.
При исследовании воды централизованного водоснабжения исследуемый материал дважды засевают в три объема: 100, 10 и 1 см 3 . Для исследования речной, озерной, прудовой воды готовят десятикратные разведения 1:10, 1:100, 1:1000 и засевают еще 10 см 3 и 1 см 3 без разведения. Посев воды производят в бродильные сосуды (колбы, бутылки, пробирки с поплавками), заполненные глюкозопептонной средой Эйкмана. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 24 ч.
Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:
а) при отсутствии газообразования и изменения цвета среды дают отрицательный ответ на наличие БГКП в исследуемом объеме воды, дающим право закончить исследование через 24 ч;
б) при образовании кислоты и газа производится высев материала из бродильных сосудов на среду Эндо. Высев делается бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. После инкубации посевы просматривают. Отсутствие на среде Эндо характерных для кишечных палочек колоний дает основание на выдачу отрицательного ответа и окончание исследования;
в) при обнаружении на среде Эндо лактозоположительных темно-красных колоний, с металлическим блеском или без него, необходимо установить принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. С этой целью производится микроскопирование препарата из колоний и постановка оксидазного теста.
Оксидазный тест предложен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonodaceae и других водных сапрофитов, которые, в отличие от кишечных бактерий, вырабатывают фермент оксидазу.
Для постановки оксидазного теста со среды Эндо снимают петлей по 2-3 колонии каждого типа. Микробную массу наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную специальным реактивом (30 г α-д-нафтола растворяют в 2,5 см 3 этанола, прибавляют 7,5 см 3 дистиллированной воды и 40 мг диметил-парафенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением).
При отрицательном результате оксидазного теста бумага при контакте с колонией цвета не меняет. Если же бумага синеет в течение 1 мин при контакте с колонией, то оксидазный тест считают положительным.
Наличие в препарате грамотрицательных неспорообразующих палочек, не обладающих оксидазной активностью, позволяет немедленно дать ответ о наличии в воде БГКП.
При обнаружении на среде Эндо розовых и бесцветных колоний ведут подсчет и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 3-4 ч. При образовании кислоты (изменение цвета среды) и газа, накапливающегося в поплавке, результат считается положительным, при отсутствии кислото- и газообразования — отрицательным.
После проведения анализа записывают в лабораторный журнал окончательные результаты (положительные и отрицательные) по каждому засеянному объему и определяют коли-титр и коли-индекс.
Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на среде Эндо при температуре 37 °С, дифференцированием выросших колоний и подсчетом количества БГКП в 1 см 3 воды.
Подготовка мембранных фильтров. Для фильтрования воды отбирают мембранные фильтры № 3, помещают их в подогретую до температуры 80 °С дистиллированную воду и ставят на небольшой огонь для кипячения. Кипячение проводят трижды по 10 мин. После первого и второго кипячения воду сливают, а после третьего фильтры оставляют в воде до употребления.
Подготовка фильтровального аппарата. Фильтровальный аппарат стерилизуют в автоклаве или протирают ватным тампоном, смоченным в спирте, и обжигают в целях стерилизации. На столик фильтровального аппарата стерильным пинцетом помещают мембранный фильтр. Во избежание повреждения фильтра под него подкладывают кружок стерильной фильтровальной бумаги. На фильтровальный столик с положенными на него фильтрами устанавливают и закрепляют верхнюю часть прибора — воронку (рис. 12.1).
Рис. 12.1. Определение количества микроорганизмов методом мембранных фильтров
Фильтрование воды и выращивание микроорганизмов. В воронку фильтровального аппарата стерильно наливают исследуемый объем воды и с помощью водоструйного насоса создают вакуум в приемном сосуде. При анализе питьевой воды, поступающей в водопроводную сеть, необходимо брать объем не менее 333 см 3 . По окончании фильтрования мембранный фильтр профламбированным пинцетом переносят на поверхность питательной среды Эндо в чашки Петри. В настоящее время выпускают фильтры, пропитанные соответствующими питательными средами. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 ч.
Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:
а) отсутствие микробного роста на фильтрах или обнаружение на них колоний, не характерных для БГКП, позволяет закончить исследования на этом этапе анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в анализируемом объеме воды;
б) при обнаружении на фильтре колоний, характерных для БГКП, исследование продолжают. Из нескольких колоний каждого типа готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Отсутствие в мазках мелких грамотрицательных неспороносных палочек является основанием для прекращения анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды;
в) при наличии в мазках грамотрицательных палочек, морфологически сходных с кишечными, ставится оксидазная проба. При обнаружении на мембранных фильтрах однотипных лактозоположительных колоний (темно-красных с металлическим блеском или без него), не вырабатывающих оксидазы, анализ воды на этом этапе заканчивают и подсчитывают число выросших на мембранном фильтре колоний кишечных палочек. Результат выражают в виде коли- индекса в пересчете на 1 дм 3 воды;
г) при обнаружении на мембранных фильтрах розовых и бесцветных колоний подсчитывают их число и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. После инкубации в течение 3-4 ч при температуре 37 °С отмечают изменение цвета среды за счет образования кислоты и накопления газа в поплавке. В этом случае результат считается положительным. Если изменений в среде нет, то дают отрицательный результат на присутствие БГКП.
Пример определения колииндекса: профильтровано три объема воды по 100 см 3 . На первом и втором фильтрах выросло по три колонии, на третьем — девять колоний. Всего выросло пятнадцать колоний. Таким образом, колииндекс исследуемого образца воды равен: (1000 х 15):300 = 50. Колииндекс переводится в колититр следующим образом: 1000:50 = 20.
Контрольные вопросы
1. Какие Вы знаете показатели эпидемиологической безопасности питьевой воды?
2. Что такое общее микробное число, колититр и колииндекс?
3. Какие роды микроорганизмов входят в БГКП?
4. Какими методами определяют колиформные бактерии?
5. Каковы основные критерии, по которым устанавливают присутствие колиформных бактерий в питьевой воде?
6. С какой целью проводят тест на оксидазу?
источник
Некоторые из нас лечат простуду самостоятельно, назначают, покупают и принимают таблетки. Это обусловлено тем, что к врачу идти долго и нет уверенности в целесообразности визита. Но что, если речь идет о более серьезных заболеваниях? Вероятно, что в таком случае принимать лекарства без предварительной диагностики — дорогая и опасная затея. Аналогичная ситуация наблюдается для воды. Использование фильтра против свободного хлора для водопровода — безобидно и правильно. Но установка в загородном доме фильтрационной системы, стоимостью более 100 000 рублей без предварительного исследования может стать убыточным проектом. Поэтому действиям по изменению состава предшествует анализ, расчет и консультация — это верный путь к улучшению качества.
Этот блок исследования состоит из показателей, имеющих химическую природу. Их разделяют на обобщенные, металлы или элементы, органические показатели, анионы и другие. В первую очередь контролируют вещества и элементы, оказывающие токсическое действие на организм. При анализе воды из скважины обращают внимание на тяжелые металлы, радиологию. В случае колодца — на перманганатную окисляемость, нитраты, нитриты, ПАВ. В анализ водопровода входят алюминий, окисляемость, pH. Химические анализы разделяются по подробности. Минимальный анализ содержит базовый набор показателей, расширенный набор — полный перечень тяжелых металлов и нефтепродукты, максимальный — в дополнение к расширенному, набор органических веществ, в том числе канцерогенных (способных вызывать рак).
Включает в себя определение базовых обобщенных групп микроорганизмов, таких как ОМЧ — общее микробное число, ОКБ — общие колиформные бактерии, ТКБ — термотолерантные колиформные бактерии по МУК 4.2.1018-01. Общее микробное число выявляет количество микроорганизмов способных образовывать колонии на питательной среде. Эта группа включает как патогенные (опасные для организма), так и условно патогенные микроорганизмы. В ОКБ и ТКБ входят колиформные бактерии, это группа кишечной палочки, которая вызывает расстройства желудочно-кишечного тракта. Эти организмы опасны для пожилых людей и детей, а также для людей с ослабленным иммунитетом.
Если результаты исследований показывают, что присутствуют указанные выше группы — проводят дополнительные исследования или предпринимают меры по очистке воды от микроорганизмов. Подробную статью о методах очистки читайте здесь. Развернутый материал о микрофлоре питьевой воды поможет разобраться в особенностях классификации микроорганизмов и узнать их типичные места обитания.
Требования к качеству питьевой воды зависят от её класса. Источники питьевого водоснабжения делят следующим образом:
- Источники централизованного водоснабжения
К этой группе относятся водопроводы городов, поселков городского типа, крупных поселений. К ним предъявляются жесткие требования, которые контролируются водоканалом, поставляющим воду в сеть и управляющей компанией, которая обслуживает распределительную сеть жилого строения. Документ, регламентирующий качество в этом случае — СанПиН 2.1.4.1074-01. В отличие от состава бутилированной, в водопроводе содержание показателей регламентируется только сверху, т.е. показатель должен быть не больше определенного числа. - Бутилированная вода
Сюда попадает питьевая, расфасованная в ёмкости и не попадает минеральная вода (с минерализацией более одного грамма на литр) и напитки, включая сладкие газированные. Эта группа подразделяется на две части: высшую категорию и первую категорию. Требования к ним различаются в том числе тем, что содержание веществ и элементов в воде высшей категории ограничено как сверху, так и снизу. Т.е. вещества должны находиться в отведенном диапазоне. Это сделано для того, чтобы жидкость в бутылке была физиологически полноценной.
Вода после обратного осмоса не считается физиологически полноценной. Требования к воде, расфасованной в емкости, предъявляются в СанПиН 2.1.4.1116-02.
Микробиологические требования к качеству подробно описаны здесь.
Анализ необходим если вы хотите узнать состояние своего источника водоснабжения и скорректировать его, если что-то не так. Вот несколько примеров:
Вырыли новый колодец или переехали в место, где колодец уже есть. Колодец — один из самых не защищенных от воздействия окружающей среды источников водоснабжения. На состав в нем влияют грунтовая влага, осадки, почвы. В колодезной воде рекомендовано проводить бактериальный анализ в дополнение к химическому.
Пробурили скважину. Состав воды из скважины разнится в зависимости от глубины, местоположения, геологии. Для безопасного употребления в пищу воду стоит проанализировать, убедиться в отсутствии загрязнителей, в случае необходимости, подобрать и установить фильтр, подходящий составу Вашей скважины.
Пользуетесь кулером или накопительными баками. В 83 % случаев образцы бутилированной воды, отобранные из распределительной системы кулера, не проходят проверку по микробиологии. Это связано с нарушением частоты и технологии санобработки. Не моете накопительный бак после обратного осмоса — со временем там образуются биопленки.
Бактериологический анализ воды в офисах Москвы рекомендовано проводить регулярно, поскольку систематические заболевания сотрудников приводят к убыткам.
Чтобы правильно отобрать образец, воспользуйтесь инструкцией. Обратите внимание, что образец для микробиологического анализа отбирают в стерильную тару. Это требование связано с недопустимостью попадания в образец микроорганизмов извне, поскольку это искажает результаты исследования. Для отбора подходит контейнер для биоматериала из аптеки или другая одноразовая стерильная тара вместимостью не менее 100 мл.
Отбор проб питьевой воды для химического анализа регламентирован ГОСТ 31861-2012. Допускается и упрощенный отбор, описание и объем тары смотрите в инструкции. Если Вам требуется расчет тары по ГОСТ — обратитесь к нам, мы предоставим перечень и, если потребуется, саму тару с консервантами. Обратите внимание на условия хранения, большинство показателей требует хранения проб при температуре 3-5 градусов. Так что, после отбора, положите пробу в холодильник.
источник
ГОСТ 31942-2012 (ISO 19458:2006)
Отбор проб для микробиологического анализа
Water. Sampling for microbiological analysis
____________________________________________________________________
Текст Сравнения ГОСТ 31942-2012 с ГОСТ Р 53415-2009 см. по ссылке.
— Примечание изготовителя базы данных.
____________________________________________________________________
МКС 13.060.45
ТН ВЭД 220100000
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Обществом с ограниченной ответственностью «Протектор» совместно с Федеральным государственным бюджетным учреждением «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им.А.Н.Сысина» и Закрытым акционерным обществом «Роса» на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (по переписке, протокол от 3 декабря 2012 г. N 54)
За принятие стандарта проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Минэкономики Республики Армения
Госстандарт Республики Беларусь
Госстандарт Республики Казахстан
4 Настоящий стандарт модифицирован по отношению к международному стандарту ISO 19458:2006* Water quality — Sampling for microbiological analysis (Качество воды. Отбор проб для микробиологического анализа) путем:
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить, перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru. — Примечание изготовителя базы данных.
— внесения дополнительных положений, фраз и слов в текст настоящего стандарта для учета потребностей экономики и особенностей межгосударственной стандартизации, выделенных в тексте настоящего стандарта курсивом*, за исключением наименований микроорганизмов;
________________
* В бумажном оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделах «Предисловие», таблице Д.Г.1 приложения Д.Г, таблице Д.Д.1 приложения Д.Д приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. — Примечание изготовителя базы данных.
— изменения структуры. Сравнение структуры международного стандарта со структурой настоящего стандарта приведено в дополнительном приложении Д.Г.
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001 (подраздел 3.6).
Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в приложении Д.Д.
Степень соответствия — модифицированная (MOD).
Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53415-2009 (ИСО 19458:2006)
5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 декабря 2012 г. N 1903-ст межгосударственный стандарт введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
Настоящий стандарт распространяется на поверхностные, подземные, питьевые, сточные воды, а также воду плавательных бассейнов и устанавливает общие требования к отбору, транспортированию и хранению проб воды, предназначенных для микробиологического анализа.
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты*:
_______________
* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. — Примечание изготовителя базы данных.
ГОСТ 596-89 Реактивы. Натрий сернистый технический (натрия сульфид). Технические условия
ГОСТ 4159-79 Реактивы. Иод. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9805-84 Спирт изопропиловый. Технические условия
ГОСТ 11086-76 Реактивы. Гипохлорит натрия. Технические условия
ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия
ГОСТ 25151-82 Водоснабжение. Термины и определения
ГОСТ 27065-86 Качество вод. Термины и определения
ГОСТ 27068-86 Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия
ГОСТ 30813-2002 Вода и водоподготовка. Термины и определения
ГОСТ 31861-2012 Вода. Общие требования к отбору проб
ГОСТ 31862-2012 Вода питьевая. Отбор проб
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
_______________
* Наименование раздела 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. — Примечание изготовителя базы данных.
3.1 В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 25151 , ГОСТ 27065 и ГОСТ 30813 .
4.1 Точка отбора проб должна обеспечивать представительные характеристики места отбора и учитывать любые вертикальные, горизонтальные и временные изменения и должна быть однозначно идентифицирована в соответствии с общими требованиями ГОСТ 31861 , ГОСТ 31862, включая дополнительные требования для микробиологии.
4.2 Точки отбора проб выбирают в зависимости от цели анализа, например:
— при исследованиях питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения обязательна точка отбора воды, поступающей в распределительную сеть для потребления, а также точки в различных местах разводящей сети с учетом тупиковых участков, застойных зон, точек наиболее удаленных от станции, на возвышенных и низких участках магистральных распределительных сетей, в резервуарах-накопителях воды, в уличных водоразборных устройствах (колонках) и т.п.;
— в поверхностных водоемах пробы должны быть отобраны в местах водопользования (в месте водозабора, рекреации, в черте населенных пунктов и т.п.);
— при выявлении источников загрязнения в водотоках (проточных водоемах) точки располагают до источника загрязнения и ниже (не далее 500 м) по течению, в створе полного смешения (исходя из данных гидрологического режима); на непроточных водоемах (озерах, водохранилищах, морях) точки отбора проб располагают во все стороны от источника загрязнения (в радиусе 500 м) и, в первую очередь, вдоль берега;
— влияние загрязнения на зону рекреации оценивают отбором проб на расстоянии 1 км выше по течению от зоны рекреации на водотоках и на расстоянии 0,1-1 км в обе стороны на непроточных водоемах и в море, а также в границах зоны рекреации;
— при отборе проб в нижних бьефах плотин гидроэлектростанций следует учитывать возможность обратно направленных течений при смене режима работы станции, при перепадах сброса воды через плотину;
— для контроля технологических режимов очистки и обеззараживания на станциях водоподготовки питьевой воды и обезвреживания сточных вод пробы отбирают до и после каждого этапа технологического процесса и обязательно на выходе с очистных станций. При исследованиях эффективности обеззараживания точки отбора проб должны быть выбраны до и после полного завершения процесса обеззараживания (например, по истечении требуемого времени контакта воды с обеззараживающим средством).
4.3 Принимая во внимание неоднородность гидравлической системы, следует учитывать возможность различия результатов анализа при отборе проб в точках с нестабильными условиями, например:
— при отборе поверхностных и глубинных проб, при загрязнении проб поверхностной пленкой на воде. В некоторых случаях (например озеро, бассейн) содержание микроорганизмов в поверхностной пленке воды может быть в 1000 раз выше, чем воды под пленкой;
— в водопроводной сети с интенсивным и низким разборами воды, в том числе тупиковых участках, застойных зонах и т.п.;
— в пробах воды, отобранных из хорошо перемешанной массы воды в резервуаре и на входе в резервуар.
4.4 При выборе точки отбора проб следует учитывать влияние физических факторов (температуры, скорости течения и др.) и химических факторов (рН, возможное наличие токсичных для микроорганизмов веществ и др.), которые могут отрицательно влиять на выживаемость и стабильность физиологического состояния исследуемых организмов.
_______________
* Наименование раздела 5 в бумажном оригинале выделено курсивом. — Примечание изготовителя базы данных.
5.1 Общие требования к отбору проб — по ГОСТ 31861 , ГОСТ 31862.
Примечание — В приложении А приведены полученные из литературных источников [1] рекомендуемые и допускаемые значения времени хранения проб от отбора до анализа и температуры хранения проб. Указанные в приложении А сроки хранения являются экспериментальными и зависят от типа воды, физиологического состояния микроорганизмов под влиянием различных факторов (например дезинфекции) и метода анализа. Поэтому в практической работе следует руководствоваться значениями максимального срока хранения пробы, включая транспортирование, и температуры хранения, установленными в ГОСТ 31861 , ГОСТ 31862 и в стандартах на определение конкретного показателя ( при их наличии ).
Не допускается:
— пробу воды, предназначенную для микробиологического анализа, использовать для измерения температуры или другого измеряемого на месте отбора проб показателя;
— ополаскивать емкости для отбора проб перед отбором проб.
При отборе проб должны быть обеспечены асептические условия (чистые руки или стерильные перчатки) и защита проб от пыли и попадания брызг.
5.2 Количество и частоту отбора проб устанавливают в зависимости от цели анализа. Примеры расчетного количества анализируемых проб, необходимого для определения средней концентрации микробов в воде с заданным отклонением при количественном определении методом культивирования микроорганизмов, приведены в приложении В.
5.3 Для отбора проб применяют чистые стерильные емкости, изготовленные из стекла или полимерных материалов ( например полипропилена, полистирола, полиэтилена, поликарбоната), не оказывающих влияние на жизнедеятельность микроорганизмов . Для многократного применения предпочтительны емкости из стекла; емкости из полимерных материалов используют как одноразовые.
Примечание — Если емкости изготовлены из иного материала, то следует иметь в виду возможность его влияния на адгезию микроорганизмов к поверхности этого материала, экстракцию веществ из емкости при контакте с водой , критическое значение тангенциального поверхностного натяжения.
5.4 Для отбора проб погружением в чистую воду используют емкости, которые должны быть стерильными как внутри, так и снаружи, и защищены от загрязнений при хранении после стерилизации, например упаковыванием в плотную бумагу, алюминиевую фольгу или пакеты из полимерных материалов, пригодных для стерилизации.
Примечание — Упаковку открывают перед началом отбора пробы. После отбора пробы ее можно использовать в качестве средства защиты при транспортировании пробы.
При использовании емкости, не защищенной снаружи от загрязнений , непосредственно перед погружением в воду необходимо обработать ее внешнюю поверхность дезинфектантом, например 96%-ным этиловым спиртом по ГОСТ 18300 * , и сразу же высушить. Однако этот способ не подходит при анализе спорообразующих бактерий.
________________
* В Российской Федерации применяют спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300-87 или по ГОСТ Р 51652-2000 «Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия» .
5.5 Емкости для отбора проб должны быть оснащены плотно закрывающимися пробками ( силиконовыми, резиновыми ) или пластмассовыми закрывающимися нажатием крышками или завинчивающимися металлическими или пластмассовыми крышками. Пробки и крышки должны выдерживать условия стерилизации.
Горловины емкостей для многократного использования должны быть защищены от внешнего загрязнения колпачками из фольги или плотной бумаги, не разрушающимися после стерилизации.
Примечания
1 Металлические крышки, особенно из алюминия, после стерилизации в автоклаве могут стать токсичными по отношению к микроорганизмам. Это влияние устраняют путем использования термо- и водостойких прокладок.
2 Некоторые виды материалов из хлопка, используемых в качестве пробок для стеклянной посуды, при длительном воздействии высоких температур при стерилизации могут стать токсичными, что при возможном контакте с водой при транспортировании может повлиять на результаты анализа. В связи с этим не допускается применять ватные пробки.
3 Надевающиеся нажатием пластмассовые крышки, прикрепленные к емкости, имеют несколько преимуществ:
— обладают такой же надежностью от протечек, как и закручивающиеся крышки;
— остаются стерильными при заполнении емкости, будучи связанными с емкостью и тем самым защищенными от загрязнения.
5.6 Стерилизацию и контроль емкостей для отбора проб проводят в соответствии с требованиями приложения Д.А.
Простерилизованные емкости должны иметь маркировку с указанием даты стерилизации для последующего учета установленного срока хранения.
5.7 При отборе проб воды, подвергнутой обеззараживанию с помощью дезинфектанта, необходимо проводить его инактивацию в соответствии с требованиями приложения Д.Б.
Если инактивация дезинфектанта невозможна или невыполнима для конкретных условий, то информацию об этом заносят в акт отбора проб .
Емкость, в случае внесения инактивирующего вещества (тиосульфата натрия) до ее стерилизации, должна иметь соответствующую маркировку.
5.8 Вместимость емкости для отбора проб должна соответствовать объему воды, необходимому для определения всех требуемых микробиологических показателей. В большинстве случаев вместимость емкости для отбора проб должна быть не менее 500 см , что, как правило, достаточно для определения 4 -5 индикаторных микроорганизмов. В некоторых случаях необходимо использовать больший объем пробы, например для анализа питьевой воды, расфасованной в емкости.
Если для анализа необходимы очень большие объемы, например , при определении вирусов, цист амеб и Giardia , ооцист Cryptosporidium , анализируют десятки и сотни литров воды, то, чтобы избежать трудностей ручного обращения, охлаждения и перемещения таких объемов, рекомендуется провести концентрирование (флокулированием, центрифугированием или фильтрованием). При этом могут использоваться перистальтические насосы со стерильными шлангами. После концентрирования на точке отбора концентрат пробы транспортируют в лабораторию.
5.9 Стерильную емкость для отбора проб открывают непосредственно перед отбором пробы, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Пробка и края емкости не должны касаться посторонних поверхностей.
После наполнения емкость немедленно закрывают стерильной пробкой, обеспечивающей герметичность и не намокающей при транспортировании, и стерильным колпачком. При заполнении емкости должно оставаться пространство между пробкой и поверхностью налитой воды, чтобы пробка не смачивалась при транспортировании и для обеспечения перемешивания пробы перед анализом.
5.10 Отбор проб должен быть выполнен обученным персоналом. Процедура обучения и определения компетентности персонала, отбирающего пробы, должна быть документально оформлена.
5.11 Отбор проб проводят продезинфицированными [например, обработкой этиловым спиртом по Д.В.1.1 (приложение Д.В) или дезинфицирующими салфетками для индивидуального пользования] непосредственно перед отбором руками или в стерильных перчатках.
5.12 Дополнительный к 5.3-5.7 перечень оборудования, материалов и реактивов, необходимых при отборе проб, приведен в приложении Д.В.
6.1 Отбор проб воды из крана
6.1.1 Пробы воды из крана отбирают с целью определения:
а) качества воды в магистральных распределительных сетях, поступающей от производителя;
б) качества воды, поступающей до крана потребителя по внутридомовой распределительной сети, которое может меняться внутри здания;
в) качества воды, фактически потребляемой из крана (возможно загрязненного). Такие пробы отбирают для оценки качества питьевой воды в особых случаях, например, при регистрации инфекционных заболеваний.
6.1.2 В зависимости от цели ( см. 6.1.1 ) перед отбором проб воды проводят подготовительные мероприятия , приведенные в таблице 1.
Таблица 1
Удаление приспособлений и вкладышей
Проведение дезинфекции крана
Спуск воды обильным потоком
Магистральная распределительная сеть
Внутридомовая распределительная сеть
В точке потребления (кран потребителя)
* Необходим минимальный поток воды только для смывания дезинфектанта, которым был обработан кран.
6.1.3 С кранов, предназначенных для отбора проб для целей а) и б), заранее удаляют загрязнения (смазку, окалину, накипь, слизь и т.п. ), которые могут попасть в пробу при заполнении емкости и повлиять на результаты анализа. Для очистки крана используют щетки, ерши или другие средства, чтобы очистить внешнюю и, сколько это возможно, внутреннюю поверхность крана. После механической очистки кран промывают от загрязнений , полностью открывая и закрывая его несколько раз.
Непосредственно перед отбором пробы кран стерилизуют предпочтительно фламбированием (обработка крана горящим тампоном, смоченным 96%-ным этиловым спиртом ). Качество фламбирования определяют появлением шипящего звука при контакте с водой после открытия крана.
Примечание — Поверхностного обжигания крана зажигалкой с целью его дезинфекции недостаточно.
Только в том случае, если стерилизация пламенем не представляется возможной, кран дезинфицируют способами, установленными в ГОСТ 31862 , или , например, горло крана дезинфицируют погружением на 2-3 мин в стакан с раствором гипохлорита, этилового или изопропилового спирта [см. Д.В.1.1 (приложение Д.В)].
Открытую емкость для отбора проб помещают под кран в струю воды и заполняют ее с соблюдением условий по 5.9, избегая контакта поверхности крана с емкостью. Во время наполнения емкости не допускается менять напор воды (закрывая или открывая кран) .
Не допускается отбирать пробы из неисправных кранов, имеющих утечку воды.
6.1.4 Отбор проб воды из магистральных распределительных сетей
Пробы воды для цели а) отбирают из специальных кранов, установленных на основных магистральных распределительных сетях или на участках сети, близких к магистральным, обычно сразу за водомером. Длина водовода, подводящего воду к крану для отбора проб, должна быть как можно короче .
При невозможности установки специальных кранов для оценки качества воды в магистральной сети могут быть использованы краны внутри здания, которые должны быть подготовлены к отбору и продезинфицированы фламбированием (см. 6.1.3). Перед отбором пробы с крана удаляют насадки, шланги, сетки и т.п.
Отбор проб проводят в соответствии с требованиями 6.1.3 .
После стерилизации кран полностью открывают, чтобы обеспечить максимальный поток воды в течение 5-10 с, затем уменьшают напор до половины и промывают обильно текущей струей воды достаточно долго ( не менее 10 мин или до достижения постоянной температуры).
Примечание — Эта процедура необходима для того, чтобы минимизировать попадание в пробу микроорганизмов, которые могут оказаться в воде при разрушении биопленок и ресуспендировании отложений осадков в системе трубопроводов (в том числе в тупиковых зонах и местах соединений трубопроводов и их колен-изгибов) при увеличении потока воды и колебаний давления в сети.
Длительность сливания воды определяется также необходимостью исключения влияния качества воды, находящейся внутри помещения. При этом учитывают планировку внутренней сети, наличие и объем резервуаров или баков. Стабилизация температуры воды при сливе служит подтверждением этой цели.
6.1.5 Отбор проб воды из внутридомовой распределительной сети
Отбор проб проводят в соответствии с требованиями 6.1.3. Перед отбором пробы с крана удаляют насадки, шланги, сетки и т.п .
После фламбирования крана сливают небольшой объем воды, достаточный для снятия последствий его дезинфекции.
6.1.6 Отбор проб воды из точки потребления (крана потребителя)
При определении качества воды из крана потребителя (например, при вспышках инфекционных заболеваний для выявления источника микробного загрязнения воды , возможно внесенного потребителем) отбор проб проводят с учетом загрязнения внешней поверхности крана, а также всех приспособлений и устройств, используемых потребителем. Все приспособления и устройства следует оставить на месте.
В этом случае не допускается:
— подвергать дезинфекции кран, а также приспособления и устройства перед отбором проб;
— проводить предварительный слив воды из крана перед отбором проб .
6.1.7 Отбор проб воды на станциях водоподготовки и в резервуарах для хранения
На станциях водоподготовки и резервуарах для хранения питьевой воды должны быть предусмотрены специальные краны для отбора проб воды на каждом выходящем трубопроводе и в других точках отбора проб.
Краны должны быть приспособлены к стерилизации фламбированием, содержаться в чистом состоянии, четко маркированы и использоваться исключительно для отбора проб.
Отбор проб для контроля различных этапов водоподготовки (например коагуляции, фильтрации, обеззараживания) проводят на входе и выходе из водоочистных устройств.
Отбор проб из резервуара для хранения питьевой воды обычно проводят из выходного крана. При необходимости отбора проб из самого резервуара используют емкости, стерильные как внутри, так и снаружи.
6.1.8 Конкретные требования к отбору проб — по ГОСТ 31862.
6.2 Отбор проб воды из скважин, родников и колодцев
6.2.1 Отбор проб из скважин, родников и колодцев проводят с целью определения:
а) качества воды в водоносном горизонте ;
б) качества воды в водопункте (скважине , колодце);
в) качества потребляемой воды.
6.2.2 Способы отбора проб из скважин и колодцев для целей по 6.2.1 с использованием стационарно установленного насоса и постоянно установленного металлического крана приведены в таблице 2.
Таблица 2
предварительной откачки воды насосом
В водопункте (скважина, колодец)
Система подачи воды из скважин и колодцев, в которых стационарно установлен насос, должна иметь металлический кран или выходное отверстие. При наличии крана отбор проб проводят в соответствии с требованиями 5.1.3.
Использование насоса при отборе проб для цели а) означает, что насос должен работать до тех пор, пока не установится постоянное значение температуры спускаемой воды и ее электрической проводимости или не будет откачено не менее трех- пяти объемов столбов воды в водопункте, после чего проводят отбор проб воды .
Использование насоса при отборе проб для цели б) означает, что требуется минимальное время работы насоса только для обеспечения потока воды, необходимого для смывания дезинфектанта, которым был обработан кран, после чего проводят отбор проб воды .
Отбор проб воды для цели в) проводят без предварительного спуска воды (при производственном режиме работы насоса) и дезинфекции крана.
6.2.3 Способы отбора проб из скважин и колодцев для целей по 6.2.1 с применением временно установленного насоса или при его отсутствии приведены в таблице 3.
Таблица 3
емкостей, стерильных внутри и снаружи
В водопункте (скважина, колодец)
После продолжительной откачки воды .
Только для обеспечения минимального спуска воды .
Отбор проб из скважин и колодцев, не имеющих стационарно установленного насоса, проводят:
— для цели а) с использованием временно установленного насоса. При этом отбор проб проводят только после продолжительной откачки воды ( см. 6.2.2 );
— для цели б) предпочтительно с использованием стерильного устройства ( батометра ) для отбора проб с прикрепленным грузом. Допускается использовать временно установленный насос, при этом отбор проб проводят после предварительного минимального спуска воды ( см. 6.2.2 ) перед отбором проб;
— для цели в) с использованием ведра, бидона или ковша и т.п., которые заполняют водой, после чего воду переливают в стерильные емкости. При этом отбор проб воды проводят с применением стационарного или временно установленного водоподъемного оборудования (ворота, «журавля» и т.п.).
6.2.4 Отбор проб из бездействующих (неиспользуемых) скважин и колодцев проводят с применением временно установленного насоса или водоподъемного оборудования и откачки воды, соответствующей трем-пяти объемам столба воды в водопункте.
Пробы отбирают в самом начале откачки для определения качества воды в самом водопункте и в конце откачки для определения качества воды в водоносном горизонте.
6.2.5 Отбор проб воды из фонтанирующих скважин проводят из устья скважины.
Отбор проб воды из родников проводят на выходе из каптажного сооружения или, если такового нет — в месте выхода головки родника («грифона») на поверхность земли.
Проба воды из фонтанирующей скважины и родника характеризует качество подземных вод в водоносном горизонте.
6.3 Отбор проб воды плавательных бассейнов
Отбор проб воды в плавательных бассейнах осуществляют с целью оценки качества воды:
а) поступающей (для бассейнов всех типов);
б) до и после фильтров (для бассейнов рециркуляционного типа и с морской водой);
в) после обеззараживания (при наличии этапа обеззараживания);
г) в ванне плавательного бассейна.
Отбор проб для целей а)-в) проводят из специальных пробоотборных кранов, врезанных на коротком расстоянии от труб, чтобы избежать застоя воды. Стерильные емкости для отбора проб заполняют водой так же, как из распределительных сетей (см. 6.1.3, 6.1.4).
При исследовании воды, поступающей в плавательный бассейн после очистки и обеззараживания , пробу отбирают в местах трубопровода, удаленных от места ввода дезинфектанта, там, где его остаточное содержание стабильно.
Отбор проб воды в ванне плавательного бассейна проводят на расстоянии 10-30 см от поверхностного слоя воды не менее чем в двух точках (например, напротив выпускного отверстия, после очередной смены купающихся, когда вода хорошо перемешана, в глубокой и мелкой части ванны бассейна). При этом используют чистые, стерильные внутри и снаружи емкости. Емкость для отбора проб вводят горизонтально, чтобы избежать потери тиосульфата, затем поворачивают вертикально до тех пор, пока не будет собрано необходимое количество воды.
Примечание — На поверхности воды плавательного бассейна, в спокойных условиях, микроорганизмы типа стафилококков аккумулируются в верхнем слое воды, в связи с этим поверхностное загрязнение воды может быть также оценено путем отбора проб с поверхности воды бассейна или из дренажа бокового перелива.
6.4 Отбор проб поверхностной воды
6.4.1 Поверхностные пробы отбирают с глубины 10-30 см от поверхности воды или от нижней кромки льда. Придонные пробы отбирают с глубины 30-50 см от дна.
Отбор проб проводят с использованием различных плавучих средств, мостов, помостов и других приспособлений в местах, где глубина водоема не менее 1,0-1,5 м. Не допускается проводить отбор проб с берега.
Пробы воды рекомендуется отбирать специальным батометром, предназначенным для этих целей, например:
— поверхностные пробы отбирают батометром, состоящим из штанги длиной около 1 м, к которой прикрепляется площадка для установки стерильной емкости для отбора проб и подвижное устройство для крепежа емкостей разных размеров;
— глубинные пробы отбирают батометром, состоящим из платформы с грузом, к которой прикрепляется стерильная емкость для отбора проб с пробкой (при этом пробка открывается с помощью прикрепленной к ней веревки при достижении нужной глубины).
Допускается использование других систем, например специального устройства, состоящего из стеклянной емкости под вакуумом, которая оснащена резиновой пробкой и стеклянной трубкой, запаянной и закрепленной недалеко от троса. Когда емкость для отбора проб находится на необходимой глубине, по тросу посылается груз, он разбивает трубку, и емкость заполняется водой.
Для изучения барофильных бактерий используют шприцевые системы и другие разнообразные устройства, наиболее сложные из которых поддерживают в пробе воды давление.
Устройства, применяемые для отбора проб, должны быть стерильными или стерилизованы после каждого отбора.
Когда используют устройства для отбора проб или при движении плавучих средств используют багор, следует сводить к минимуму взмучивание донных отложений.
Любые возможные загрязнения стерильных устройств для отбора проб за счет средств крепления (веревки, каната, троса) должны быть сведены к минимуму, например использованием проволоки из нержавеющей стали или цепочки на нижнем конце троса.
6.4.2 Рекреационные воды
Воды для купания оценивают после серии анализов воды в течение купального сезона.
Следует строго определить точки отбора. Точки отбора проб должны быть представительными для характеристики качества воды в местах, используемых большинством купальщиков, или в местах предполагаемого загрязнения в зависимости от цели отбора проб.
Пробы отбирают в соответствии с требованиями 6.4.1.
При отсутствии специального батометра чистую стерильную емкость для отбора проб вводят вверх дном в воду на заданную глубину и заполняют емкость водой, поворачивая ее в разные стороны. При наличии потока воды емкость следует держать против течения (вверх по течению).
Если в местах купания глубина воды менее 1,0 м, то допускается отбирать пробы на меньшей глубине, о чем указывают в актах отбора проб. Следует принять меры к минимизации взмучивания донных отложений.
Примечания
1 Одна из главных причин изменения качества воды на пляже — ресуспендирование бактерий, адсорбирующихся на глине, иле или органических осадках. Грубый песок, гравий, присутствующие в гидродинамических зонах, значительных загрязнений не адсорбируют.
2 Следует обратить внимание на различные естественные и технические источники ресуспендирования, которые могут увеличивать санитарные риски, например весенние паводки, шторм, судоходство.
3 Неправильно проведенный отбор проб может также привести к ресуспендированию бактерий , например, заполнение емкостей водой слишком близко ко дну, взмучивание осадков, движение, создаваемое судном, с которого проводят отбор проб.
6.4.3 Моря, озера, реки
Отбор проб для оценки качества природной морской, озерной и речной воды проводят с целью:
— выбора места расположения глубоководных и прибрежных выпусков сточных вод;
— выбора места расположения водозаборов для централизованного питьевого водоснабжения;
— водозаборов для плавательных бассейнов;
— в черте населенных мест;
— определения мест рекреационного водопользования;
— опреснения природной морской воды и других целей.
При выборе точек отбора проб необходимо учитывать характер прибрежных течений, вертикальную стратификацию, переформирование дна, силу господствующих ветров, приливы и отливы и другие природные особенности, в том числе сезонные.
Допускается использовать любые устройства для отбора поверхностных и глубинных проб ( см. 6.4.1 ), за исключением емкостей, которые не пригодны для стерилизации.
Примечание — Существует много устройств для отбора поверхностных или глубинных проб вдали от берега. Следует иметь в виду, что используемые для физико-химических исследований океанографические бутыли не стерилизуются и не пригодны для отбора проб на микробиологические показатели.
При движении плавучих средств (корабля, лодки, судна и т.п. ) пробы воды следует отбирать с подветренного борта; со стоящего на якоре плавучего средства — с носа.
6.5 Отбор проб сточных вод
С целью минимизации риска инфицирования персонала при отборе проб следует использовать одноразовые перчатки или стерильные приспособления для удерживания стерильной емкости при отборе проб.
После отбора проб удаляют загрязнения с внешней поверхности емкости и упаковывают емкость в чистый пакет или заворачивают в чистую плотную бумагу.
Транспортируют емкости с отобранной пробой сточной воды в промаркированных контейнерах отдельно от емкостей с пробами питьевой воды.
Для отбора проб пригодны устройства по 6.4.1.
6.6 Поверхностно-ассоциированные микроорганизмы
Образцы биопленки отбирают путем механического соскабливания с поверхности стерильным шпателем, лопаткой, лезвием или тампоном. Образец биопленки помещают в стерильную емкость и анализируют после гомогенизации.
Примечание — Процедура механического соскабливания разрушает пространственное соотношение микроорганизмов.
Коррозионно-активные бактерии определяют в осадках, полученных после фильтрования жидких проб, или путем декантирования и центрифугирования. Продукты коррозии металла отбирают соскабливанием или действием «водного молотка» за счет резкого изменения давления в водной трубе.
Сульфатредуцирующие бактерии иногда обнаруживаются в воде, но их роль в коррозии металла более надежно доказывается взятием мазка из влажных каверн на поверхности металлических конструкций, находящихся в воде .
* Слово «проб» в наименовании раздела 7 в бумажном оригинале выделено курсивом. — Примечание изготовителя базы данных.
7.1 Транспортирование
Общие требования к транспортированию проб — по ГОСТ 31861.
Транспортирование проб осуществляют в чистых продезинфицированных контейнерах, обеспечивающих их сохранность. Крышка контейнера не должна соприкасаться с пробками емкостей.
Условия транспортирования должны быть документально оформлены.
При транспортировании емкости с пробами должны быть упакованы таким образом, чтобы:
— защитить их от внешнего воздействия (солнечного излучения, нагревания, загрязнения, замораживания);
— исключить непосредственный контакт проб с аккумуляторами холода , чтобы избежать замораживание пробы;
— отрегулировать количество и объем аккумуляторов холода и их расположение в зависимости от количества проб, их массы и исходной температуры пробы;
— предусмотреть раздельное размещение в контейнерах неохлажденных и охлажденных проб.
Для транспортирования предпочтительно охладить пробы до температуры (5±3) °С (например используя аккумуляторы холода ), если в стандартах на определение конкретного микробиологического показателя не установлено иное.
Пробы воды для вирусологического исследования допускается замораживать и хранить при температуре минус 70 °С при добавлении к пробе соответствующего криопротектора.
Примечания
1 В интервале температур от 0 °С до 45 °С число бактерий может меняться пропорционально температуре. Если микрофлора способна к размножению, то с увеличением температуры процесс ускоряется. Если микроорганизмы находятся в отмирающем состоянии, то этот процесс также ускоряется при нагревании. В бактериологии обычно предполагается, что увеличение температуры на 10 °С в два раза увеличивает скорость как размножения, так и процесса гибели бактерий. При транспортировании следует охлаждать пробы, но не замораживать их, так как образование льда в емкостях может приводить к гибели большинства клеток (>99%).
2 В оптимальных условиях одно деление бактерий E.cоli происходит за 20 мин и через 10 ч количество бактерий увеличивается до 10 клеток. Однако в воде определяемые микроорганизмы находятся под влиянием биоценоза ( в том числе антагонистического действия ), физических и химических факторов, а также недостаточного количества питательных веществ, поэтому при данных условиях такое интенсивное размножение не может иметь место. С другой стороны, число микроорганизмов может уменьшиться вдвое менее чем за 20 мин, а при наличии в пробе дезинфектанта без инактиватора — в течение нескольких секунд.
3 Большинство экспериментов, выполненных в области хранения проб воды для бактериологического исследования, показывает положительный эффект охлаждения ниже 10 °С. Идеальный температурный диапазон (5±3) °С достигается путем помещения емкостей с пробами воды в контейнер с аккумуляторами холода . Температура воды в емкости не сразу после помещения в контейнер достигает значения (5±3) °С. Период установления температурного равновесия зависит от:
— контейнера (объема, эффективности изоляции);
— внешней (наружной) температуры;
— массы проб воды и их исходной температуры;
— типа аккумуляторов холода и их количества.
7.2 Продолжительность времени от отбора проб до анализа
Время хранения проб воды от отбора до начала их анализа включает продолжительность транспортирования, регистрации и подготовки проб к анализу.
Время хранения должно быть минимальным, насколько возможно, и задокументировано.
Анализ проб воды должен быть начат в тот же рабочий день, в который осуществлен отбор проб. Максимальный срок хранения проб — по ГОСТ 31862 и ГОСТ 31861. Увеличение этого срока может уменьшить достоверность результатов. Поэтому лицо, ответственное за отбор проб, и лицо, ответственное за проведение испытаний, должны работать во взаимодействии.
Примечание — По согласованию с заказчиком допускается увеличение максимального срока хранения проб до 8 ч , как установлено в [2].
* Слова «Документирование процедуры» в наименовании раздела 8 в бумажном оригинале выделены курсивом. — Примечание изготовителя базы данных.
8.1 До отбора проб или сразу же после отбора следует нанести маркировку на емкость и заполнить акт отбора пробы.
8.2 Маркировка емкостей должна быть четкой, сохраняющейся в течение всего времени хранения пробы, и должна содержать следующую информацию:
— место отбора пробы;
— дату и время отбора.
Допускается кодирование проб с отражением номера в акте отбора проб.
8.3 В акте отбора проб должно быть указано:
— наименование и адрес ( юридический и фактический ) заказчика;
— объект исследования ;
— перечень определяемых при анализе показателей или сс ылку на стандарт, их определяющий;
— дата, время и место отбора проб;
— метод отбора проб со ссылкой на стандарт по отбору проб;
— условия транспортирования, включая продолжительность транспортирования, средства транспортирования — сумка-холодильник и т.д.;
— должность, фамилия, инициалы и подпись лица, проводившего отбор проб , с указанием лиц, присутствующих при отборе проб;
— цель исследования: в плановом порядке или по внеплановым мероприятиям (рекомендации органов, уполномоченных осуществлять санэпиднадзор; сигналы об изменении органолептических качеств воды, поступающие от населения и т.п.).
8.4 Для правильной интерпретации результатов анализа могут быть необходимы и другие сведения, например:
— температура;
— использованный дезинфектант;
— любые другие факторы и отклонения от установленных процедур, которые могут повлиять на результаты микробиологического анализа (см. 4.4).
_______________
* Слово «проб» в наименовании Приложения А в бумажном оригинале выделено курсивом. — Примечание изготовителя базы данных.
А.1 Максимальный срок хранения пробы воды, включая продолжительность транспортирования , а также значения температуры хранения пробы, приведены в таблице А.1.
Таблица А.1
Максимальный срок хранения пробы, включая транспортирование, ч
источник