Показатели бактериологического анализа питьевой воды

Микробиологический анализ питьевой воды нужен для того, чтобы проверить, есть ли в воде опасные микроорганизмы. В воде могут находиться яйца паразитов, бактерии и вирусы, вызывающие различные инфекционные заболевания. Они попадают в воду либо естественным путем, из природных источников (из других источников воды, в том числе подземных, из почвы, от случайно оказавшихся в воде больных животных, их трупов или продуктов жизнедеятельности и т.д.), либо в результате деятельности человека (например, после неправильной утилизации бытовых отходов или испражнений).

Анализ воды на микробиологию состоит из бактериологического анализа воды и паразитологического исследования воды.

Бактериологическое исследование воды поможет выявить болезнетворных микробов и правильно подобрать способ очистки, чтобы избавиться от них. Паразитологическое исследование позволяет обнаружить паразитов, представляющих опасность для здоровья человека. Бактериологический анализ воды часто проводят в рамках инженерно-экологических изыскания для строительства.

1. Возьмите стерильную бутылку объемом 500 мл в нашей лаборатории.

2. Обожгите водопроводный кран.

3. Слейте воду в течение 5-10 минут.

4. Наберите полбутылки воды, чтобы при транспортировке вода не касалась пробки.

5. Плотно закройте стерильную бутылку стерильной пробкой.

6. Привезите пробу к нам в лабораторию в течение 1,5 часов.

Бактериологический анализ питьевой воды включает показатели, приведенные в таблице ниже.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВОДЫ В УРАЛЬСКОЙ КОМПЛЕКСНОЙ ЛАБОРАТОРИИ ПРОМЫШЛЕННОГО И ГРАЖДАНСКОГО СТРОИТЕЛЬСТВА

Сделать бактериологический анализ воды вы можете в нашей лаборатории по доступной цене. Стоимость гидробиологического анализа воды определяется индивидуально, в зависимости от перечня показателей для исследования. Результат исследования будет известен чрез 3-7 рабочих дней. Подробности по телефону 8(351)735-97-17 (старший специалист Алёна Михайловна).

Предназначен для измерения атмосферного давления в диапазоне от 80 до 106 кПа, Используется для контроля условий проведения лабораторных испытаний

Предназначен для измерения относительной влажности и температуры воздуха в диапазоне 20-90 % и 15-40 град С. Применяется для контроля микроклиматических условий проведения лабораторных испытаний

Дозаторы пипеточные предназначены для забора и точного дозирования малых объемов жидкостей с минимальной погрешностью (0,5-2%). При работе с дозаторами используются одноразовые наконечники из обесцвеченного полипропилена, который считается материалом свободным от контаминации.

Предназначен для получения и поддержания внутри рабочей камеры стабильной температуры с погрешностью не более 0,4 град С, необходимой для проведения бактериологичесих исследований. Время непрерывной работы термостата не менее 500 часов.

Предназначен для сушки стеклянной, металлической посуды, чашек Петри, колб, лабораторных инструментов, термостойких порошков и других материало. Шкаф обеспечивает непрерывное поддержание температуры внутри рабочей камеры от 50 до 350 град С.

Центрифуга лабораторная предназначена для разделения суспензий, шламов, эмульсий на составляющие под действием центробежных сил. Центрифуга обеспечивает центрифугирование в диапазоне от 1000 до 8000 оборотов в минуту. Применяется для подготовки проб в соответсвии с методиками выполняемых измерений.

Аквадистиллятор предназначен для получения высококачественной дистиллированной воды по принципу конденсации тщательно отсепарированного пара.

Микроскоп предназначен для исследований препаратов в виде мазков бактерий, грибов, яиц гельминтов и цист простейший и прочих абсорбирующих объектов по методу светлого поля. Исследования объектов по методу темного поля позволяют различать тонкие неокрашенные структуры, невидимые в светлом поле. микроскоп также может применяться и для морфометрии. Микроскоп обеспечивает увеличесние объектов от 40 до 1000 раз.

Орбитальный шейкер является вспомогательным оборудованием, предназанченным для перемешивания жидкостей в лабораторной посуде в сответствии с используемой методикой выполнения измерений. Благодаря автоматическому перемешиванию обеспечивается необходимая степень контакта реагирующих веществ, более эффективны процессы экстракции, адсорции и др. Исключается человеческий фактор.

Стерилиатор паровой обеспечивает стерилизацию и дезинфекцию горячим паром под давлением инструментов, лабораторной посуды, обезвреживание одноразового инвентаря, медицинских пречаток и ветоши. Данные процедуры предназначены для обеспечения чистоты пробоотборных емкостей, предотвращения вторичной контаминации во время выполнения анализа, защиты персонала от возбудителей заболеваний различной природы. Стерилизация и дезинфекция — неотъемлимые части работ, связанных с проведением токсикологических, паразитологически и бактериологических анализов.

Предназначены для высокоточного статического взвешивания грузов в различных лабораториях

Предназначен для вакуумной фильтрации проб воды питьевого назначения при контроле качества по микробиологическим показателям в соответствии с СанПин 2.1.4.1074-01

источник

С эпи­демиологической точки зрения при гигиенической оценке воды имеет значение наличие в ней патогенных микроорганизмов. Однако исследование воды с целью их выявления — сложный и длительный процесс. В связи с этим используют косвенные бактериологи­ческие показатели.

В основе применения этих показа­телей лежит наблюдение, свидетельствующее о том, что чем меньше загрязнена вода кишечной палочкой, тем меньше она опасна в эпидемиологическом отноше­нии.

Поскольку кишечная палочка поступает в воду с испражнениями человека и животных, ее повышенное содержание сигнализирует о фекальном загрязнении воды и, следовательно, о возможном наличии в ней патогенных микроорганизмов. При исследовании воды на наличие бактерий группы кишечных палочек результаты анализа выражают вели­чинами коли-титра и коли-индекса. Коли-титр — это наименьшее количество воды, в котором обнару­живается одна кишечная палочка. Чем ниже коли-титр, тем сильнее фекальное загрязнение воды. Коли-индекс — число кишечных палочек, содержа­щихся в 1 л воды. Экспериментальные исследования показали, что если после обеззараживания воды коли-индекс снизился до 3 (а коли-титр превысил 300 мл), то существует га­рантия, что патогенные микроорганизмы тифо-паратифозной группы, лептоспиры и возбудители туляремии погибли.

Исходя из требований стандарта к качеству водо­проводной воды в отношении ее бактериального состава число сапрофитных бактерий в 1 мл водопроводной воды (микробное число) не должно превышать 100, коли-индекс — 3, а коли-титр должен быть не меньше 300 мл.

При оценке качества воды в шахтных колодцах, ис­пользуемых в местном водоснабжении, руководствуются следующими требованиями: прозрачность должна быть не меньше 30 см, цветность — не больше 40°, вкус и запах — не выше 2—3 баллов, жесткость — не боль­ше 7 ммоль/л, коли-индекс — не больше 10.

Наряду с этим по оценке качества воды в колодцах, обычно употребляемой для питья без всякой обработ­ки, могут быть использованы и так называемые хими­ческие показатели (индикаторы) загрязнения водоисточника органическими веществами и продуктами их распада (аммонийные соли, нитриты, нитраты). Наличие этих соединений может свидетельствовать о загрязнении водоносного горизонта почвы и о возмож­ном попадании в воду патогенных микроорганизмов.

В отдельных случаях каждый из показателей может иметь и другую природу. Например, органические вещества могут быть растительного происхождения. Вследствие этого водоисточник можно признать за­грязненным в том случае, если в воде присутствует не один, а несколько химических показателей загрязне­ния, если в воде одновременно обнаружены бактери­альные показатели загрязнения, например кишечная палочка, и если возможность загрязнения подтверж­дается санитарным обследованием водоисточника.

О содержании органических веществ в воде судят по перманганатной окисляемости, выраженной в милли­граммах кислорода, который расходуется на окисление органических веществ, содержащихся в 1 л воды. Наименьшую окисляемость имеют артезианские воды — обычно до 2 мг кислорода на 1 л. В воде шахтных ко­лодцев окисляемость может достигать 3—4 мг кис­лорода на 1 л. Повышение окисляемости воды сверх этих количеств часто указывает на загрязнение водо­источника.

Основной источник появления в воде аммоний­ного азота и нитритов — это разложение бел­ковых остатков, трупов животных, мочи и фекалий. При свежем загрязнении отбросами воды, не содер­жавшей до этого аммонийных солей, количество их превышает 0,1—0,2 мг/л. Будучи продуктом биохи­мического окисления аммонийных солей, нитриты в количестве, превышающем 0,002—0,005 мг/л, также являются важным показателем загрязнения водоисточ­ника. Нитраты представляют собой конечный продукт окисления аммонийных солей. Наличие нитратов в воде при отсутствии аммонийных солей и нитритов указы­вает на сравнительно давнее попадание в воду азот­содержащих веществ. В последние годы в связи с обильным применением азотсодержащих минераль­ных удобрений часто наблюдаются в воде, особенно колодезной, высокие концентрации нитратов.

Источники
Растительные масла: подсолнечное, хлопковое, кукурузное; семечки яблок, орехи (миндаль, арахис), турнепс, зеленые листовые овощи, злаковые, бобовые, яичный желток, печень, молоко, овсянка, соя, пшен .

Патологическая стираемость твердых тканей зубов. Классификация, этиология, патогенез. Клинические проявления. Современные методы диагностики и лечения
Патологическая стираемость зубов – это сравнительно быстро прогрессирующий процесс, сопровождающийся рядом морфологических, эстетических и функциональных нарушений. Характеризуется ч .

Планирование сестринского ухода при гипертонической болезни
Гипертония — это патологическое состояние, при котором повышенное артериальное давление обусловлено не естественными реакциями организма на те или иные физиологические ситуации, а является .

источник

Химически чистая вода с формулой Н₂О — это идеал, никогда не достижимый в природных условиях. Главное природное качество воды — универсальный растворитель, поэтому в ней постоянно присутствуют в растворенном виде различные соединения, элементы, ионы и газы. Количественный и качественный состав природной воды зависит от географических условий местности и строения водоносных горизонтов. Некоторое количество растворенной углекислоты из почвы позволяет воде воздействовать на минеральные соли, активно растворяя их по пути своего следования.

Когда вода просачивается через минеральные породы, она обогащается элементами, из которых они состоят. Если на пути воды есть известковые породы, вода обогащается известью, если доломитовые — магнием. Залежи каменной соли или гипса придают воде повышенные концентрации сульфатов и хлоридов, и такая вода считается минеральной.

Любой источник питьевого водоснабжения, в том числе частный колодец, должен быть исследован на показатели качества воды и ее пригодность для использования и питья. По закону «О санитарно-эпидемическом благополучии населения» от 19.04.91 года, санитарным правилам СанПиН 4630-88 и требованию ГОСТа 2874-82 «Вода питьевая» — вода хозяйственно-питьевого назначения относится к пищевым продуктам и должна соответствовать многочисленным санитарно-гигиеническим требованиям.

Показатели качества воды можно разделить на физические, химические и бактериологические.

К ним относят следующие показатели:

• жесткость,
• активная реакция (pH),
• окисляемость (БПК и ХПК),
• минерализация (содержание растворенных солей).

Показатель pH показывает активность ионов водорода (или гидроксид-ионов). При pH=7 вода нейтральная, при pH меньше 7 — кислая, при pH больше 7 —щелочная.

Жесткость — комплексный показатель, в большей степени зависящий от концентрации в воде ионов кальция и магния. Количественно измеряется в мг-экв/л (миллиграмм-эквивалент на литр). Вода глубоких подземных источников имеет более высокую жесткость (8-10 мг-экв/л), а поверхностных источников — относительно небольшую (3-6 мг-экв/л).

Жесткая вода содержит много растворенных минеральных солей, что при нагревании приводит к образованию накипи. Накипь— твердый нерастворимый осадок на внутренних стенках водопроводных труб, котлов, бытовых нагревательных приборов.

Жесткость воды доставляет много проблем в быту: при стирке и умывании моющие средства хуже пенятся, при готовке еды плохо развариваются овощи, ухудшается вкус напитков.

Вода считается пригодной для питья, если ее жесткость не превышает 7-10 мг-экв/л.

Излишне мягкая вода (менее 1,5 мг-экв/л), также неполезна для здоровья. Такая вода при регулярном употреблении способна вымывать из организма жизненно необходимые ионы кальция, что может привести к остеопорозу, кариесу, сердечно-сосудистым заболеваниям. Это относится и к дождевой воде, которая идеальна для стирки и мытья, но не рекомендуется для регулярных пищевых целей.

Окисляемость характеризует содержание в воде растворенных органических соединений. Высокие показатели окисляемости означают, что вода сильно загрязнена бытовыми стоками. Недопустимо, чтобы в колодец попадали сточные воды с содержанием белков, жиров и углеводов, эфиров, органических кислот, фенолов, нефти, спиртов и т.п.

Минерализация воды показывает содержание в питьевой воде растворенных солей и измеряется в мг/л. Минерализация питьевой воды измеряется по сухому остатку. Поверхностные источники водоснабжения характеризуются невысокой минерализацией, а подземные воды имеют более высокое солесодержание. Рекомендуемый предел минерализации питьевой воды — 1000 мг/л.

Повышение солесодержания ухудшает вкусовые качества воды — она становится горькой или излишне соленой.

Органолептический порог ощущений для хлоридов 350 мг/л, для сульфатов 500 мг/л. Нижний предел солесодержания для питьевой воды, при котором не оказывается негативного воздействия на физиологические процессы в организме —100 мг/л.

Оптимальный диапазон солесодержания в питьевой воде 200-400 мг/л. Содержание ионов кальция должно быть не меньше 25 мг/л, ионов магния — не меньше 10 мг/л.

К ним относят следующие показатели:

Температура колодезной воды должны находится в диапазоне 7-12°С. Если вода теплее, она перестает быть освежающей. Вода холоднее 5°С становится опасной для здоровья из-за риска получить простудное заболевание.

Цветность — это посторонняя окраска воды. Цветность является нежелательным органолептическим показателем. Количественно цветность оценивают в градусах платиново-кобальтовой шкалы.

Мутность — видимое содержание в воде взвешенных веществ. Мутность измеряют в мг/л. Как правило, чистая артезианская и колодезная вода имеет малую мутность.

Присутствие в воде растворенной органики отрицательно влияет на органолептические показатели качества воды. Вода может приобретать посторонний неприятный запах — гнили, земли, рыбы, запах нефтепродуктов, хлорфенола и т.п. Одновременно наблюдается увеличение цветности и повышенная вспениваемость, что в итоге оказывает неблагоприятное воздействие на человека и живые организмы.

Исследованиями установлено, что изменения физических свойств питьевой воды оказывают заметное физиологическое воздействие на организмы: изменяется секреция желудочного сока, повышается или понижается острота зрения, изменяется частота сердечных сокращений.

Бактериологические показатели нормируют содержание в воде бактерий и патогенных микроорганизмов. Микробное число — это число бактерий, содержащееся в 1 мл воды. Для водопроводной воды этот показатель не должен превышать 100.

В поверхностные источники водоснабжения бактерии и микроорганизмы попадают вместе со сточными водами и дождевыми стоками, с животными. Вода из артезианских источников отличается низкими показателями бактериального загрязнения (микробное число не более 30).

Бактерии разделяют на патогенные (болезнетворные), и сапрофитные (осуществляющие переработку отмерших растительных или животных организмов).

Косвенный показатель бактериологического загрязнения воды определяется по содержанию в ней бактерии кишечной палочки. Единица измерения — коли-титр или коли-индекс. Коли-титр — это объем воды (в мл) в котором содержится одна единица кишечной палочки. Для питьевой воды коли-титр должен быть равен 300 или более. Коли-индекс — показатель, обратный коли-титру, или число кишечных палочек, содержащихся в 1 л воды. Коли-индекс для питьевой воды — не более 3.

источник

Некоторые из нас лечат простуду самостоятельно, назначают, покупают и принимают таблетки. Это обусловлено тем, что к врачу идти долго и нет уверенности в целесообразности визита. Но что, если речь идет о более серьезных заболеваниях? Вероятно, что в таком случае принимать лекарства без предварительной диагностики — дорогая и опасная затея. Аналогичная ситуация наблюдается для воды. Использование фильтра против свободного хлора для водопровода — безобидно и правильно. Но установка в загородном доме фильтрационной системы, стоимостью более 100 000 рублей без предварительного исследования может стать убыточным проектом. Поэтому действиям по изменению состава предшествует анализ, расчет и консультация — это верный путь к улучшению качества.

Этот блок исследования состоит из показателей, имеющих химическую природу. Их разделяют на обобщенные, металлы или элементы, органические показатели, анионы и другие. В первую очередь контролируют вещества и элементы, оказывающие токсическое действие на организм. При анализе воды из скважины обращают внимание на тяжелые металлы, радиологию. В случае колодца — на перманганатную окисляемость, нитраты, нитриты, ПАВ. В анализ водопровода входят алюминий, окисляемость, pH. Химические анализы разделяются по подробности. Минимальный анализ содержит базовый набор показателей, расширенный набор — полный перечень тяжелых металлов и нефтепродукты, максимальный — в дополнение к расширенному, набор органических веществ, в том числе канцерогенных (способных вызывать рак).

Включает в себя определение базовых обобщенных групп микроорганизмов, таких как ОМЧ — общее микробное число, ОКБ — общие колиформные бактерии, ТКБ — термотолерантные колиформные бактерии по МУК 4.2.1018-01. Общее микробное число выявляет количество микроорганизмов способных образовывать колонии на питательной среде. Эта группа включает как патогенные (опасные для организма), так и условно патогенные микроорганизмы. В ОКБ и ТКБ входят колиформные бактерии, это группа кишечной палочки, которая вызывает расстройства желудочно-кишечного тракта. Эти организмы опасны для пожилых людей и детей, а также для людей с ослабленным иммунитетом.

Если результаты исследований показывают, что присутствуют указанные выше группы — проводят дополнительные исследования или предпринимают меры по очистке воды от микроорганизмов. Подробную статью о методах очистки читайте здесь. Развернутый материал о микрофлоре питьевой воды поможет разобраться в особенностях классификации микроорганизмов и узнать их типичные места обитания.

Требования к качеству питьевой воды зависят от её класса. Источники питьевого водоснабжения делят следующим образом:

• Источники централизованного водоснабжения
  К этой группе относятся водопроводы городов, поселков городского типа, крупных поселений. К ним предъявляются жесткие требования, которые контролируются водоканалом, поставляющим воду в сеть и управляющей компанией, которая обслуживает распределительную сеть жилого строения. Документ, регламентирующий качество в этом случае — СанПиН 2.1.4.1074-01. В отличие от состава бутилированной, в водопроводе содержание показателей регламентируется только сверху, т.е. показатель должен быть не больше определенного числа.
• Бутилированная вода
  Сюда попадает питьевая, расфасованная в ёмкости и не попадает минеральная вода (с минерализацией более одного грамма на литр) и напитки, включая сладкие газированные. Эта группа подразделяется на две части: высшую категорию и первую категорию. Требования к ним различаются в том числе тем, что содержание веществ и элементов в воде высшей категории ограничено как сверху, так и снизу. Т.е. вещества должны находиться в отведенном диапазоне. Это сделано для того, чтобы жидкость в бутылке была физиологически полноценной.

Вода после обратного осмоса не считается физиологически полноценной. Требования к воде, расфасованной в емкости, предъявляются в СанПиН 2.1.4.1116-02.

Микробиологические требования к качеству подробно описаны здесь.

Анализ необходим если вы хотите узнать состояние своего источника водоснабжения и скорректировать его, если что-то не так. Вот несколько примеров:

Вырыли новый колодец или переехали в место, где колодец уже есть. Колодец — один из самых не защищенных от воздействия окружающей среды источников водоснабжения. На состав в нем влияют грунтовая влага, осадки, почвы. В колодезной воде рекомендовано проводить бактериальный анализ в дополнение к химическому.

Пробурили скважину. Состав воды из скважины разнится в зависимости от глубины, местоположения, геологии. Для безопасного употребления в пищу воду стоит проанализировать, убедиться в отсутствии загрязнителей, в случае необходимости, подобрать и установить фильтр, подходящий составу Вашей скважины.

Пользуетесь кулером или накопительными баками. В 83 % случаев образцы бутилированной воды, отобранные из распределительной системы кулера, не проходят проверку по микробиологии. Это связано с нарушением частоты и технологии санобработки. Не моете накопительный бак после обратного осмоса — со временем там образуются биопленки.

Бактериологический анализ воды в офисах Москвы рекомендовано проводить регулярно, поскольку систематические заболевания сотрудников приводят к убыткам.

Чтобы правильно отобрать образец, воспользуйтесь инструкцией. Обратите внимание, что образец для микробиологического анализа отбирают в стерильную тару. Это требование связано с недопустимостью попадания в образец микроорганизмов извне, поскольку это искажает результаты исследования. Для отбора подходит контейнер для биоматериала из аптеки или другая одноразовая стерильная тара вместимостью не менее 100 мл.

Отбор проб питьевой воды для химического анализа регламентирован ГОСТ 31861-2012. Допускается и упрощенный отбор, описание и объем тары смотрите в инструкции. Если Вам требуется расчет тары по ГОСТ — обратитесь к нам, мы предоставим перечень и, если потребуется, саму тару с консервантами. Обратите внимание на условия хранения, большинство показателей требует хранения проб при температуре 3-5 градусов. Так что, после отбора, положите пробу в холодильник.

источник

С водой могут передаваться возбудители холеры, брюшного тифа, сальмонеллезов (паратифов), дизентерии. Именно микробиологический состав является ведущим при оценке качества воды, используемой на предприятиях пищевой промышленности. Неизбежность соприкосновения воды с сырьём, готовыми продуктами и тарой диктует необходимость практически полного отсутствия в ней патогенных бактерий.

Безопасность питьевой воды в эпидемическом отношении определяется её соответствием нормативам по микробиологическим и паразитологическим показателям по СанПиН 2.1.4.1071-01, представленным в таблице 3.

Таблица 3. Бактериологические показатели качества питьевой воды в соответствии с СанПиН 2.1.4.1074-01

Радиоактивные вещества

Особым видом химического загрязнения питьевой воды является присутствие в ней радиоактивных веществ. Влияние природных радионуклидов, присутствующих в питьевой воде, на коллективную дозу облучения населения очень мало, лишь локально имеют место случаи и значительного облучения за счёт радона (одного из газообразных продуктов распада урана), содержащегося в некоторых месторождениях пресных подземных вод. Количество радионуклидов техногенного происхождения в питьевой воде обычно весьма ограничено благодаря проведению технологических циклов и постоянному контролю за источниками радионуклидов. Однако около 250 радиоактивных изотопов попадают в окружающую среду в результате работы ядерных установок. Эти радиоактивные частицы вместе с водой, пылью, пищей и воздухом попадают в организмы животных, людей, вызывая онкологические заболевания, врождённые уродства, снижение функций иммунной системы, и увеличивают общую заболеваемость населения. При попадании радиоактивных веществ в организм человека он подвергается внутреннему и внешнему облучению, различающемуся по своему воздействию: в первом случае доминирующая роль принадлежит a- и b-лучам, во втором g-лучам. Установлена зависимость частоты возникновения злокачественных новообразований при совместном действии этих лучей от уровня облучения и распределения его фазы во времени.

Радиационная безопасность питьевой воды определяется её соответствием нормативам СанПиН 2.1.4.559-96 по показателям a- и b-активности. Нормативные показатели a- и b-активности приведены в табл. 4.

Таблица 4. Нормативные показатели a- и b-активности питьевой воды.

Химические вещества, поступающие и образующиеся в воде в процессе её обработки в системе водоснабжения

До 70-х годов предполагалось, что хлорирование воды не оказывает вредного воздействия на здоровье человека. Однако, впоследствии было установлено, что при этой технологии обеззараживания 90 % хлора участвует в реакции окисления органики, а 10 % образуют галогеносодержащие соединения (ГСС), предшественником которых являются гуминовые кислоты, фульвокислоты, таннины, метаболиты водорослей и т.д. – всего около 80 веществ. ГСС обладают высокой биологической активностью; их воздействие проявляется позднее в образовании злокачественных опухолей, генетических заболеваниях и т.п. Приоритетными хлорорганичесими загрязнителями питьевой воды являются: хлороформ, четырёххлористый углерод, 1,2-дихлорэтан, трихлорэтилен, тетрахлорэтилен и др. Наибольшая концентрация отмечается у хлороформа, в 5-30 раз превышающая содержание всех остальных ГСС.

Включение в технологическую схему обработки воды – озонирования для её обеззараживания позволяет использовать хлор (1,2 мг/л) только на последнем этапе водоочистки для предотвращения вторичного микробного загрязнения. Озон является более эффективным окислителем, чем хлор. Он уничтожает не только бактерии, но и вирусы, кроме того, устраняет запахи и обесцвечивает воду. При озонировании воды на 75 % снижается количество хлороформа и других канцерогенных хлорорганических соединений. При этом риск онкозаболеваний населения снижается до минимального уровня. Но в тоже время, одной из наиболее серьёзных проблем, при использовании озона в технологии очистки, является образование побочных продуктов окисления. Продуктами реакции озона с содержащимися в воде органическими веществами являются кетоны, альдегиды, карбоновые кислоты. Чаще всего в озонированнойводе обнаруживаются такие соединения, как формальдегид, ацетальдегид, глиоксаль и метилглиоксаль.__

В таблице 5 представлены нормируемые показатели вредных химических веществ по СанПиН 2.1.4.1074-01, поступающих и образующихся в воде в процессе её обработки в системе водоснабжения.

Таблица 5. Нормативные значения вредных химических веществ по СанПиН 2.1.4.1074-01, поступающих и образующихся в воде в процессе её обработки в системе водоснабжения

Вода — один из важнейших компонентов системы жизнеобеспечения.

В условиях все расширяющегося внедрения в водное хозяйство прогрессивных технических решений в области водоподготовки и очистки сточных вод, научно обоснованный контроль качества воды является одним из важнейших факторов санитарно-эпидемиологического благополучия населенных пунктов, а также предотвращения техногенных и экологических катастроф.

Для поддержания благоприятной экологической обстановки в ближайшие гoды предстоит решить ряд задач как по разработке и внедрению безотходных, энергocберегающих технологий в промышленности, так и по обеспечению населения чистой водой.

Поиск безреагентных наименее энергозатратных и дешевых технологий приводит к новому подходу при выборе способов обработки воды. В настоящее время такими безреагентными технологиями обработки воды являются: электрокоагуляция, озонирование, УФ-обработка, электроразрядная обработка, кавитация, радиационная обработка воды, а также технологии, включающие воздействие нескольких факторов одновременно, так называемые «адвансированные окислительные технологии» (АОТ), магнитная обработка.

Перечисленные методы обработки воды, возможно, вполне перспективны, но требуют дополнительных исследований и научного подхода при описании физики и химии процессов.

Список литературы:

1. СанПиН 2.1.4.1074-01 Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем водоснабжения. Контроль качества (взамен СанПиН 2.1.4.559-96). М., Госкомсанэпиднадзор России, 2001.

Дата добавления: 2018-04-05 ; просмотров: 411 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник

С эпидемиологической точки зрения при гигиенической оценке воды имеют значение патогенные м/о. Однако, исследование воды на их присутствие – сложный и длительный процесс. В связи с этим используют косвенные бактериологические показатели.

В основе этого лежит наблюдение, свидетельствующее о том, что чем меньше загрязнена вода не болезнетворными микробами, в том числе кишечной палочкой, тем меньше она опасна в эпидемиологическом отношении.

Поскольку кишечная палочка выделяется с испражнениями человека и животных, ее присутствие сигнализирует о фекальном загрязнении воды, а следовательно о возможном наличии в ней патогенных м /о.

При исследовании воды на кишечную палочку, результаты анализа выражают величиной коли-титра или коли-индекса.

Коли-титр – это наименьшее количество воды, в которой обнаруживается 1 кишечная палочка, в норме не менее 300 мл.

Коли-индекс – это число кишечных палочек в 1 л воды. В норме не более 3 к.п.

Наряду с этими анализами при оценке качества воды в колодцах, обычно употребляемой для питья без всякой обработки, могут быть использованы так называемые химические показатели загрязнения органическими веществами и продукты их распада (соли аммония, нитриты, нитраты).

О содержании органических в воде судят по окисляемости, выраженной в мг кислорода, который расходуется на окисление органических веществ, содержащихся в 1 л воды. Окисляемость свыше 3-4 мг кислорода на 1 л воды говорит о загрязнении водоисточника.

Появление в воде солей аммония и нитритов свидетельствует о разложении белковых останков, трупов животных, мочи, фекалий. Нитраты представляют собой конечный продукт окисления органических веществ. Наличие их указывает о давнем загрязнении органическими веществами, которые уже успели минерализоваться.

При высоком содержании нитратов в воде (>40мг/л), могут наблюдаться заболевания детей грудного возраста, вскармливаемых питательными смесями, приготовленные на этой воде. Нитраты, связываясь с гемоглобином крови, образуют метгемоглобин. При этом затрудняется перенос кровью кислорода из легких в ткани. У детей наблюдаются диспепсические явления, одышка, цианоз, судороги, смерть.

Методы улучшения качества питьевой воды:

— осветление (устранение мутности);

— обесцвечивание (устранение цветности);

— обеззараживание (освобождение воды от возбудителей заболеваний).

Для осветления и обесцвечивания воду последовательно подвергают коагуляции, отстаиванию и фильтрации.

Для полного исключения эпидемиологической опасности воду на водопроводах после фильтрации обеззараживают.

Для обеззараживания воды на водопроводах используют хлорирование и лишь в отдельных случаях обработку проводят ультрафиолетовыми лучами, озонированием или кипячением.

На крупных водопроводах используют специальные аппараты – хлораторы, дозирующие поступление хлора в обеззараживаемую воду.

Доза хлора должна быть такой, чтобы после обеззараживания в воде осталось 0,3-0,5 мг/л остаточного хлора. Это свидетельствует о качестве и надежности обеззараживания, а с другой не ухудшает органолептические свойства воды и не является вредным для здоровья.

Из других методов улучшения качества воды применяют:

— дезодорацию (устранение запаха, привкуса);

— опреснение (освобождение от избытка солей).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Вода – второй фактор внешней среды после воздуха.

Согласно теории А.И. Опарина жизнь на планете зародилась в водной среде и все биохимические процессы в живых организмах протекают на водной основе, как универсальном растворителе. Вода входит в состав всех биологических тканей и составляет 60-70% его массы. Потеря 20-22% жидкости приводит к смерти. В течение всей жизни происходит постоянное выделение воды из организма с растворёнными в ней продуктами жизнедеятельности и её возмещение из окружающей среды. Дневная потеря воды в зависимости от массы составляет 2,5-3 литра. При тяжёлой физической работе в жаркое время года потеря увеличивается до 10 литров. Велико значение воды в терморегуляции организма. При испарении пота с поверхности кожи можно потерять до 30% тепловой энергии. Значительно больше воды расходуется на гигиенические, хозяйственно-бытовые нужды.

Эпидемиологическое значение воды обусловлено тем, что она может являться одним из важнейших путей распространения инфекционных заболеваний. Водным путём передаются холера, брюшной тиф, паратифы, дизентерия, вирусный гепатит А и многие другие. Кроме патогенных микробов с водой в организм могут проникать возбудители гельминтозов.

Санитарная оценка и гигиенические требования к качеству питьевой воды.

Санитарная оценка воды производится по органолептическим свойствам, химическому составу и бактериологическим показателям.

Органолептические свойства воды.

Прозрачность воды зависит от взвешенных в ней частиц. Питьевая вода должна быть такой прозрачности, что бы через её слой в 30 см можно было прочитать шрифт определённого размера.

Цветность воды оценивают сравнением её с условной шкалой стандартных растворов, и результат выражают в градусах. Цветность воды не должна превышать 20 градусов. Она обусловлена гуминовыми веществами, водорослями, сточными водами.

Вкус и запах воды может быть обусловлен наличием на водозаборе органических веществ растительного происхождения, загрязнением сточными водами, растворёнными минеральными солями. При исследовании воды определяют характер вкуса и запаха и интенсивность, которую выражают в баллах: 0 – отсутствие, 1 – очень слабый, 2 – слабый, не привлекающий внимания, 3 – заметный, 4 – отчётливый, делающий воду неприятной, 5 – очень сильный. Допустима интенсивность запаха или привкуса не больше 2 баллов.

Химический состав воды.

Плотный остаток – остаток после выпаривания 1 литра воды. Он не должен превышать 1000 мг/литр. Из минерального состава воды наибольшее значение имеет содержание железа, кальция, магния, хлоридов, фтора.

Железо, растворённое в подземных водах в виде бикарбоната закиси железа, при контакте с воздухом окисляется, и выпадает в виде бурых хлопьев, что ухудшает её органолептические свойства. Кроме того, повышенное содержание железа в воде портит вкус пищи, уменьшает просвет водопроводных труб. Содержание железа в водопроводной воде должно быть не более 0,3 мг/л, а воде местных источников – 1 мг/л.

Кальций и магний. Эти элементы обеспечивают жёсткость воды. Жёсткость оценивают в градусах или миллиграмм-эквивалентах. Один градус – 10 мг окиси кальция на 1 литр воды. Воду жесткостью до 10градусов называют мягкой, 10-20 градусов – средней жёсткости, выше – жёсткой. Жёсткая вода ухудшает переваривание мяса и бобовых в организме, резкий переход от употребления мягкой воды к жёсткой может вызвать диспептические явления. Имеются основания полагать, что жёсткая вода ухудшает течение мочекаменной болезни.

Хлориды и сульфаты придают воде солёный или горько-солёный вкус и угнетают секреторную деятельность желудка. Норма содержания хлоридов 350 мг/л, сульфатов – 500 мг/л.

Фтористые соединения способствуют минерализации костей и зубов. Содержание фтор-иона не должно превышать 1 мг/л. Превышение содержания фтора приводит прежде всего к поражению эмали зубов. При содержании фтор-иона более 5 мг/л поражается костно-связочный аппарат.

Бактериологические показатели качества воды.

При гигиенической оценке воды с эпидемиологической точки зрения имеет значение содержание патогенных микроорганизмов. Однако определение их содержания в воде дорогостоящее и длительное дело. Поэтому определяют содержание в воде кишечной палочки, количество которой прямо взаимосвязано с содержанием патогенных микроорганизмов.

При исследовании воды на кишечную палочку результат выражают величиной коли-титра или коли-индекса. Коли-титр – наименьшее количество воды, в которой определяется кишечная палочка. Коли-индекс – количество кишечных палочек в одном литре воды. Исследования показали, что если после обеззараживания воды коли-индекс снизился до 3, то имеется полная гарантия, что микроорганизмы тифо-паратифозной группы, лептоспиры, туляримии погибли.

Источники водоснабжения.

Для водоснабжения в основном используются подземные воды и открытые водоёмы.

Подземные воды. Атмосферные осадки медленно фильтруются в глубь через поры водопроницаемых пород и скапливаются над первым водоносным слоем. В зависимости от местности их глубина колеблется от 1-2 метров до нескольких десятков. Фильтруясь через породу, вода освобождается от взвешенных частиц и микробов, обогащается солями. Начиная с глубины 5-6 метров, грунтовые воды почти не содержат микробов. Однако если почва загрязнена отбросами и нечистотами, то существует опасность заражения вод возбудителями заболеваний.

Грунтовые воды могут проникать под первый водоносный слой и располагаться над вторым водоносным слоем. Часто, вода занимает всё пространство между двумя водоупорными слоями и, если прорезать верхний слой, она изливается на поверхность земли и называется артезианской. Глубина залегания артезианской воды от 15 до нескольких сот метров. Она имеет постоянный минеральный состав, прозрачная, бесцветная, отличается бактериальной чистотой. Межпластовые воды являются наилучшим источником водоснабжения.

Открытые водоёмы. В естественных складках местности атмосферные воды и подземные ключи образуют озёра, реки, ручьи. Это открытые водоёмы. Они подвержены загрязнению талыми водами, стекающими из населённых мест. В эпидемиологическом отношении открытые водоёмы в большей или меньшей степени считаются подозрительными.

Самоочищение водоемов происходит в результате оседания взвешенных частиц на дно, разрушении и минерализации органических веществ в результате жизнедеятельности микроорганизмов. При небольшом загрязнении вода в значительной степени самоочищается на 3-4 сутки. Способность к самоочищению имеет приделы. При сильном загрязнении органическими веществами ведет к снижению содержания в воде анаэробной флоры и развитию гнилостных процессов. При необходимости использования открытых водоёмов для водоснабжения предпочтение отдаётся крупным и проточным водоёмам. При этом необходимо охранять водоём от сточных вод и производить очистку воды.

Для улучшения качества воды применяют осветление и обесцвечивание воды обеззараживание. Осветление и обесцвечивание воды достигается длительным отстаиванием и медленной фильтрацией воды или коогуляцией химическими реагентами с последующим отстаиванием и быстрой фильтрацией. Обеззараживание воды проводится в основном методом хлорирования. В последнее время стали применять озонирование воды.

Список используемой литературы:

1. Верхозин В.Р. С/х животные. Содержание и уход. – М.: Аквариум, 1999

2. Габович Р.Д. , С.С. Познанский, Г.Х. Шахбазян «Гигиена»

3. КамлюкЛ.В. Гигиена воды. – М.: Колос, 1990

4. Петровский К.С. «Гигиена питания» — М.:КолоСС, 2000

Дата добавления: 2016-11-24 ; просмотров: 2244 | Нарушение авторских прав

источник

Цель работы: изучение методов оценки санитарнобактериологического состояния питьевой воды и воды из естественных водоемов.

Вода, используемая на предприятиях пищевой промышленности, должна отвечать требованиям, предъявляемым к питьевой воде действующими нормативными документами. Безопасность воды в эпидемиологическом отношении определяют по общему числу микроорганизмов и количеству бактерий группы кишечных палочек в ее определенном объеме.

Качество воды централизованных систем питьевого водоснабжения определяют в соответствии с санитарными правилами и нормами. Питьевая вода должна быть безопасна в эпидемиологическом и радиационном отношениях, безопасна по химическому составу и иметь благоприятные органолептические свойства (табл. 12.1).

Таблица 12.1. Безопасность питьевой воды в эпидемиологическом отношении (по микробиологическим и паразитологическим показателям) СанПиН 2.1.4.1074-01

Общее микробное число (ОМЧ)

Термотолерантные колиформные бактерии

Число бактерий в 100 см 3

Общие колиформные бактерии

Споры сульфитредуцирующих бактерий

* БОЕ — бляшкообразующие единицы.

12.1. Отбор проб и подготовка их к анализу

Воду для санитарно-бактериологического контроля отбирают в количестве 500 см 3 в бутылки, предварительно простерилизованные в бумажных пакетах, с ватно-марлевой пробкой, покрытой сверху бумажным колпачком.

Перед отбором пробы кран или край трубы обжигают зажженным ватным тампоном, пропитанным спиртом. Открывают кран и в течение 10-15 мин воду спускают, затем производят отбор пробы. Вода подлежит анализу не позже чем через 2 ч после отбора.

Пробы воды из открытых водоемов — колодцев, бассейнов, рек, озер — отбирают с помощью батометров, представляющих собой металлический каркас с массивным свинцовым дном — грузилом. В металлический каркас вставлена бутылка. Батометр погружают на заданную глубину и открывают бутылку, потягивая за веревку, привязанную к пробке. После наполнения бутылки батометр извлекают и закрывают ее стерильной пробкой.

Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором, так как под действием хлора микробы в воде погибают. В качестве дехлоратора используют серноватистый натрий из расчета 10 мг на 500 см исследуемой воды.

К отобранным пробам воды прилагают сопроводительный документ с указанием соответствующих данных. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре от 4 до 10 °С.

12.2. Определение общего микробного числа воды

Общее микробное число (ОМЧ) — это количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, образующих колонии на мясопептонном агаре при посеве 1 см 3 воды с последующей инкубацией посевов при температуре 37±0,5 °С в течение 48 ч. ОМЧ должно быть не более 50 КОЕ/см 3 .

В зависимости от степени предполагаемого загрязнения производят посев не менее двух различных объемов воды, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний. Водопроводную и артезианскую воду засевают в неразведенном виде по 1 см 3 . При бактериологическом исследовании загрязненных вод делают посевы разведенной воды. Разведения готовят так, как указано в разделе 8.3.

Из исследуемого образца и из пробирок с его разведениями в соответствии со степенью предполагаемого микробного загрязнения отбирают по 1 см 3 , вносят в стерильные чашки Петри и заливают 10-12 см расплавленного и остуженного до температуры 45 °С мясопептонного агара. Круговыми движениями руки, вращая чашки по горизонтальной поверхности стола, распределяют их содержимое равномерным слоем по всей площади дна. После застывания агара чашки с посевами помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С. После инкубации подсчитывают число выросших колоний.

Определение микробного числа указанным методом позволяет выявить лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы.

12.3. Определение содержания колиформных бактерий в воде

С эпидемиологической точки зрения особенно важным является обнаружение в воде патогенных микроорганизмов — возбудителей кишечных инфекций (брюшного тифа, дизентерии, холеры и др.) Однако в связи с большой трудностью обнаружения патогенных микроорганизмов при бактериологических анализах ограничиваются определением так называемых санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ). К санитарно-показательным относят микроорганизмы, постоянно находящиеся в естественных полостях человека или животных. Присутствие СПМ в различных объектах внешней среды является индикатором их загрязнения человеком. Чем больше СПМ во внешней среде, тем более вероятным становится присутствие специфических возбудителей инфекционных заболеваний.

В качестве СПМ наибольшее значение имеют бактерии группы кишечных палочек (БГКП). К группе кишечных палочек относят колиформные бактерии родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.

При определении количества СПМ в воде используют следующие характеристики:

• коли-титр — наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка. Для питьевой воды, прошедшей очистку, титр кишечной палочки должен быть не менее 300 см 3 ;

• коли-индекс — количество кишечных палочек в 1 дм 3 воды. Коли-индекс для питьевой воды должен быть не более 3.

Колиформные бактерии определяют в воде методом мембранных фильтров или бродильным методом.

Бродильный метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды, инкубации

посевов при температуре 37 °С в средах накопления с последующим высевом на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1 дм 3 воды.

При исследовании воды централизованного водоснабжения исследуемый материал дважды засевают в три объема: 100, 10 и 1 см 3 . Для исследования речной, озерной, прудовой воды готовят десятикратные разведения 1:10, 1:100, 1:1000 и засевают еще 10 см 3 и 1 см 3 без разведения. Посев воды производят в бродильные сосуды (колбы, бутылки, пробирки с поплавками), заполненные глюкозопептонной средой Эйкмана. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 24 ч.

Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:

а) при отсутствии газообразования и изменения цвета среды дают отрицательный ответ на наличие БГКП в исследуемом объеме воды, дающим право закончить исследование через 24 ч;

б) при образовании кислоты и газа производится высев материала из бродильных сосудов на среду Эндо. Высев делается бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. После инкубации посевы просматривают. Отсутствие на среде Эндо характерных для кишечных палочек колоний дает основание на выдачу отрицательного ответа и окончание исследования;

в) при обнаружении на среде Эндо лактозоположительных темно-красных колоний, с металлическим блеском или без него, необходимо установить принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. С этой целью производится микроскопирование препарата из колоний и постановка оксидазного теста.

Оксидазный тест предложен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonodaceae и других водных сапрофитов, которые, в отличие от кишечных бактерий, вырабатывают фермент оксидазу.

Для постановки оксидазного теста со среды Эндо снимают петлей по 2-3 колонии каждого типа. Микробную массу наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную специальным реактивом (30 г α-д-нафтола растворяют в 2,5 см 3 этанола, прибавляют 7,5 см 3 дистиллированной воды и 40 мг диметил-парафенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением).

При отрицательном результате оксидазного теста бумага при контакте с колонией цвета не меняет. Если же бумага синеет в течение 1 мин при контакте с колонией, то оксидазный тест считают положительным.

Наличие в препарате грамотрицательных неспорообразующих палочек, не обладающих оксидазной активностью, позволяет немедленно дать ответ о наличии в воде БГКП.

При обнаружении на среде Эндо розовых и бесцветных колоний ведут подсчет и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 3-4 ч. При образовании кислоты (изменение цвета среды) и газа, накапливающегося в поплавке, результат считается положительным, при отсутствии кислото- и газообразования — отрицательным.

После проведения анализа записывают в лабораторный журнал окончательные результаты (положительные и отрицательные) по каждому засеянному объему и определяют коли-титр и коли-индекс.

Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на среде Эндо при температуре 37 °С, дифференцированием выросших колоний и подсчетом количества БГКП в 1 см 3 воды.

Подготовка мембранных фильтров. Для фильтрования воды отбирают мембранные фильтры № 3, помещают их в подогретую до температуры 80 °С дистиллированную воду и ставят на небольшой огонь для кипячения. Кипячение проводят трижды по 10 мин. После первого и второго кипячения воду сливают, а после третьего фильтры оставляют в воде до употребления.

Подготовка фильтровального аппарата. Фильтровальный аппарат стерилизуют в автоклаве или протирают ватным тампоном, смоченным в спирте, и обжигают в целях стерилизации. На столик фильтровального аппарата стерильным пинцетом помещают мембранный фильтр. Во избежание повреждения фильтра под него подкладывают кружок стерильной фильтровальной бумаги. На фильтровальный столик с положенными на него фильтрами устанавливают и закрепляют верхнюю часть прибора — воронку (рис. 12.1).

Рис. 12.1. Определение количества микроорганизмов методом мембранных фильтров

Фильтрование воды и выращивание микроорганизмов. В воронку фильтровального аппарата стерильно наливают исследуемый объем воды и с помощью водоструйного насоса создают вакуум в приемном сосуде. При анализе питьевой воды, поступающей в водопроводную сеть, необходимо брать объем не менее 333 см 3 . По окончании фильтрования мембранный фильтр профламбированным пинцетом переносят на поверхность питательной среды Эндо в чашки Петри. В настоящее время выпускают фильтры, пропитанные соответствующими питательными средами. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 ч.

Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:

а) отсутствие микробного роста на фильтрах или обнаружение на них колоний, не характерных для БГКП, позволяет закончить исследования на этом этапе анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в анализируемом объеме воды;

б) при обнаружении на фильтре колоний, характерных для БГКП, исследование продолжают. Из нескольких колоний каждого типа готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Отсутствие в мазках мелких грамотрицательных неспороносных палочек является основанием для прекращения анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды;

в) при наличии в мазках грамотрицательных палочек, морфологически сходных с кишечными, ставится оксидазная проба. При обнаружении на мембранных фильтрах однотипных лактозоположительных колоний (темно-красных с металлическим блеском или без него), не вырабатывающих оксидазы, анализ воды на этом этапе заканчивают и подсчитывают число выросших на мембранном фильтре колоний кишечных палочек. Результат выражают в виде коли- индекса в пересчете на 1 дм 3 воды;

г) при обнаружении на мембранных фильтрах розовых и бесцветных колоний подсчитывают их число и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. После инкубации в течение 3-4 ч при температуре 37 °С отмечают изменение цвета среды за счет образования кислоты и накопления газа в поплавке. В этом случае результат считается положительным. Если изменений в среде нет, то дают отрицательный результат на присутствие БГКП.

Пример определения колииндекса: профильтровано три объема воды по 100 см 3 . На первом и втором фильтрах выросло по три колонии, на третьем — девять колоний. Всего выросло пятнадцать колоний. Таким образом, колииндекс исследуемого образца воды равен: (1000 х 15):300 = 50. Колииндекс переводится в колититр следующим образом: 1000:50 = 20.

Контрольные вопросы

1. Какие Вы знаете показатели эпидемиологической безопасности питьевой воды?

2. Что такое общее микробное число, колититр и колииндекс?

3. Какие роды микроорганизмов входят в БГКП?

4. Какими методами определяют колиформные бактерии?

5. Каковы основные критерии, по которым устанавливают присутствие колиформных бактерий в питьевой воде?

6. С какой целью проводят тест на оксидазу?

источник

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды

Методические указания
МУК 4.2.1018-01

1. Разработаны НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А. Н. Сысина РАМН (Недачин А. Е., Доскина Т. В., Дмитриева Р. А., Тишкова Н. Ю., Сидоренко С. Г.), Федеральным научным центром гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана Минздрава России (Трухина Г. М., Мойсеенко Н. Н., Сарафанюк Е. В.), Аналитическим центром контроля качества воды «Роса» (Кашкарова Г. П.), Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Кривопалова Н. С., Сорокина Р. С.), Центром госсанэпиднадзора в г. Москве (Салова Н. Я., Малышева З. Г., Кожевникова Н. А.), Центром госсанэпиднадзора в Московской области (Козлова А. Т.), Московским НИИ генетики (Бовыкина Н. М.), НИИ коммунального водоснабжения и очистки воды (Русанова Н. А.), Российской медицинской академией последипломного образования (Власова И. В.), Российским государственным медицинским университетом (Пивоваров Ю. П.).

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации — Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации 9 февраля 2001 г.

3. С момента ввода данных методических указаний считаются утратившими силу методические указания МУК 4.2.671-97 «Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды» и Информационно-методическое письмо Департамента государственного санитарно-эпидемиологического надзора Министерства здравоохранения Российской Федерации № 1100/1670-98-111 «О дополнительных мерах по осуществлению контроля качества питьевой воды по микробиологическим и паразитологическим показателям».

3. Отбор, хранение и транспортирование проб . 2

3.1. Общие требования к отбору проб . 2

3.2. Хранение и транспортирование проб . 3

4. Оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды .. 3

4.2. Расходные материалы .. 4

4.3. Химические реактивы .. 4

4.5. Тест-культуры микроорганизмов . 6

5. Приготовление питательных сред и реактивов . 6

5.4. Фуксин-сульфитная среда Эндо . 7

5.5. Лактозо-пептонная среда . 7

5.6. Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу до кислоты и газа . 7

5.7. Реактивы для оксидазного теста . 8

5.8. Железо-сульфитный агар . 8

5.9. Реактивы для окраски препаратов по Граму . 8

6. Подготовка к анализу . 9

6.1. Подготовка посуды и материалов . 9

6.2. Подготовка проб воды .. 9

7. Методика работы при использовании мембранных фильтров . 9

7.1. Подготовка мембранных фильтров . 9

7.2. Подготовка фильтровального аппарата . 9

8.1. Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре . 10

8.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод) 10

8.3. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом .. 13

8.4. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий . 15

8.5. Определение колифагов . 16

Главный государственный санитарный врач

Российской Федерации — Первый заместитель

Министра здравоохранения Российской Федерации

Дата введения: 1 июля 2001 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды

Методические указания
МУК 4.2.1018-01

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы санитарно-микробиологического контроля качества питьевой воды в отношении ее эпидемической безопасности по показателям СанПиН 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».

1.2. Методические указания предназначены для лабораторий организаций, предприятий и иных хозяйственных субъектов, осуществляющих производственный контроль, а также органов санитарно-эпидемиологической службы, обеспечивающих государственный и ведомственный санитарно-эпидемиологический надзор за качеством питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения.

2.1. Санитарные правила и нормы. «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества». СанПиН 2.1.4.559-96.

2.2. Санитарные правила «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтами». СП 1.2.731-99.

2.3. ГОСТ 18963-73. Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа.

3.1.1. Отбор проб производит специалист после прохождения инструктажа по технике выполнения отбора проб для микробиологического анализа.

3.1.2. Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не влияющих на жизнедеятельность микроорганизмов.

3.1.3. Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися пробками (силиконовыми, резиновыми или из других материалов) и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги). Многоразовая посуда, в т.ч. пробки, должна выдерживать стерилизацию сухим жаром или автоклавированием.

3.1.4. При отборе проб в одной и той же точке для различных целей первыми отбирают пробы для бактериологических исследований. Если отбирают воду после обеззараживания химическими реагентами, то для нейтрализации остаточного количества дезинфектанта в емкость, предназначенную для отбора проб, вносят до стерилизации натрий серноватисто-кислый в виде кристаллов из расчета 10 мг на 500 мл воды.

3.1.5. Пробу отбирают в стерильные емкости. Емкость открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается.

3.1.6. При исследовании воды из распределительных сетей отбор проб из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 мин при полностью открытом кране. При отборе пробы напор воды может быть уменьшен. Пробу отбирают непосредственно из крана без резиновых шлангов, водораспределительных сеток и других насадок. Если через пробоотборный кран происходит постоянный излив воды, отбор проб производят без предварительного обжига, не изменяя напора воды и существующей конструкции (при наличии силиконовых или резиновых шлангов).

При заполнении емкостей должно оставаться пространство между пробкой и поверхностью воды, чтобы пробка не смачивалась при транспортировании.

После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком.

3.1.7. Отобранную пробу маркируют и сопровождают документом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора, фамилии специалиста, отбиравшего пробу, и другой информации.

3.2.1. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре (4 — 10) °С. В холодный период года контейнеры должны быть снабжены термоизолирующими прокладками, обеспечивающими предохранение проб от промерзания. При соблюдении указанных условий срок начала исследований от момента отбора проб не должен превышать 6 ч.

Если пробы нельзя охладить, их анализ следует провести в течение 2 ч после забора.

Если не может быть соблюдено время доставки пробы и температура хранения, анализ пробы проводить не следует.

Пробы питьевой воды должны доставляться в отдельных продезинфицированных контейнерах.

Термостат для температурного режима (37 ± 1) °С

Термостат для температурного режима (44 ± 1) °С

Термостат или водяная баня для температурного режима (44 ± 0,5) °С

Водяная баня для температурного режима (75 ± 5) °С

Водяная баня или термостат для температурного режима (45 — 49) °С (для питательных сред)

Прибор для мембранной фильтрации под вакуумом с диаметром фильтрующей поверхности 35 или 47 мм и устройство для создания разрежения (0,5 — 1,0) атм

Весы лабораторные общего назначения 4 кл. точности, с пределом взвешивания до 1000 г

Максимальный термометр ртутный с диапазоном измерения от 20 до 200 °С с ценой деления шкалы 1 °С

Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °С с ценой деления шкалы 0,5 °С

рН-метр, обеспечивающий измерение с погрешностью до 0,01

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды не ниже

Стерилизатор суховоздушный для температурного режима (180 ± 5) °С

Холодильник бытовой электрический

Вытяжной шкаф для работы с хлороформом при проведении анализа на колифаги

Нагревательный прибор для варки питательных сред либо магнитные мешалки с подогревом до 300 °С

Прибор для счета колоний бактерий

Лупа с двукратным увеличением

Дозаторы для разлива питательных сред

Оптический стандарт мутности на 10 ед.

Горелки газовые или спиртовки

Пинцеты для работы с мембранными фильтрами

Мембранные фильтры для микробиологических целей с диаметром пор не более 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм и другие фильтрующие мембраны с аналогичной способностью фильтрации, имеющие сертификат качества

Индикаторы бумажные для определения рН в диапазоне 6 — 8 с интервалом определения 0,2 — 0,3

Фольга алюминиевая, колпачки силиконовые, металлические

Пипетки, вместимостью 1,5, 10 мл с ценой деления 0,1 мл многоразового или одноразового использования)

Пробирки (многоразового или одноразового использования)

Цилиндры, вместимостью 100, 250, 500 мл или мензурки, вместимостью 250, 500, 1000 мл

Чашки бактериологические (Петри)

Пробки (силиконовые, резиновые и другие, выдерживающие стерилизацию сухим жаром или автоклавированием)

Бумага фильтровальная лабораторная

Вата хлопковая медицинская гигроскопическая

Карандаши или фломастеры по стеклу

Все химические реактивы должны соответствовать квалификации не ниже ч. д. а.

Железо серно-кислое закисное (7-водное)

Натрий серноватисто-кислый (тиосульфат натрия) 5-водный

Спирт этиловый ректификованный медицинский

Спирт этиловый технический

Натрий сернисто-кислый (сульфит натрия)

Фенилендиаминовые соединения* (тетраметил-п-фенилендиамин гидрохлорид, диметил-п-фенилендиамин соляно-кислый)

Генциан фиолетовый кристаллический

* Вещества обладают канцерогенным и мутагенным действием, работа с ними требует соблюдения мер предосторожности.

Сухой препарат с индикатором ВР и лактозой или среда Гисса с лактозой

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей

Системы индикаторные бумажные (СИБ)

Допускаются к использованию коммерческие питательные среды, диагностические препараты и системы идентификации производства зарубежных фирм, предназначенные для целей описываемых методов. Питательные среды и биологические препараты зарубежного производства должны иметь международный сертификат качества ISO 9000 или EN 29 000.

При использовании следует руководствоваться рекомендациями фирмы-производителя.

Все обезвоженные коммерческие питательные среды и препараты отечественного производства должны иметь сертификат соответствия.

4.5.1. Контрольный колифаг М82, штамм ВКПМ-3254 Е. coli К12 F + Str r получают в ГНИИ Генетика — Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ — Россия, 113545, г. Москва, 1-ый Дорожный проезд, д. 1).

4.5.2. Штамм Е. coli М17-02 и один из штаммов: Pseudomonas aeruginosa или Pseudomonas fluorescens получают в Государственном Национальном Органе контроля медицинских и биологических препаратов им. Л. А. Тарасовича Минздрава России (Россия, 121002, г. Москва, ул. Сивцев-Вражек, д. 41).

В производственных лабораториях, расположенных на территории водопроводных станции, следует использовать штамм Pseudomonas fluorescens .

Предпочтительно использование стандартизованных сухих питательных сред промышленного производства.

При использовании промышленных сухих питательных сред их приготавливают в соответствии с указаниями изготовителя на этикетке.

В этом случае следует соблюдать способ применения и срок хранения питательных сред, указанные на упаковках.

Сухие питательные среды хранят в сухих помещениях, в темноте, при комнатной температуре. Открытые упаковки тщательно закупоривают. Среды с измененным внешним видом (уплотненные, с комками), а также с истекшим сроком годности не используют.

Для приготовления растворов, реактивов и питательных сред применяют воду дистиллированную по ГОСТу 6709-72.

Питательные среды готовят в посуде из инертного материала.

Учитывая возможное изменение рН питательных сред после кипячения и стерилизации, окончательный контроль рН проводят в готовой среде при температуре 25 °С с использованием индикаторной бумаги.

После стерилизации питательные среды оставляют для охлаждения при комнатной температуре. При необходимости розлива в чашки Петри среды охлаждают до температуры (50 — 60) °С.

Температура сред, хранящихся в холодильнике, перед посевом должна быть доведена до комнатной.

5.2.1. Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

5.2.2. Питательный бульон (десятикратный) для колифагов готовят путем увеличения в 10 раз навески сухого препарата, указанной на этикетке.

5.3.1. Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

5.3.2. Питательный агар для определения колифагов прямым методом готовят, увеличивая навеску сухого препарата в 2 раза от прописи.

5.3.3. Питательный агар запрещается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.

5.3.4. Полужидкий питательный агар готовят следующим образом: сухой питательный бульон (15 г) и агар микробиологический (3 г) растворить при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды. Довести рН до 7,0 — 7,2, разлить в пробирки и стерилизовать автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин.

5.3.5. Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 мл питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Стерильно на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 мл. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры (45 — 49) °С, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 мл на 10 мл питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления скошенного агара. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 2 — 3 суток в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.

5.4.2. Повышение дифференцирующих свойств среды

Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до (60 — 70) °С среду перед разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 мл среды 0,2 мл 5 %-ного спиртового раствора основного фуксина. Срок хранения раствора фуксина — не более 1 мес.

5.4.3. Модификация среды с добавлением розоловой кислоты

В случаях, когда мембранные фильтры зарастают микрофлорой, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения раствора розоловой кислоты — не более 1 мес.

Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мембранной фильтрации.

10 г пептона, 5 г натрия хлористого, 5 г лактозы растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды. После растворения ингредиентов устанавливают рН 7,4 — 7,6, разливают по 10 мл в пробирки, стерилизуют при (112 ± 2) °С 12 мин.

Для приготовления концентрированной лактозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 мл в пробирки и по 10 мл во флаконы.

5.6.1. Полужидкая среда с лактозой из сухого препарата

Готовят по способу, указанному на этикетке.

Срок хранения — не более 2 недель при комнатной температуре.

Посев производят уколом до дна пробирки. При образовании кислоты цвет питательной среды изменяется в соответствии с использованным индикатором. При газообразовании газ скапливается или по уколу, или на поверхности, или в толще среды появляются разрывы. При инкубации посевов более 5 ч газ может улетучиться. В таких случаях на присутствие газа указывают оставшиеся в толще среды «карманы» — потемнения среды на месте бывшего пузырька газа.

5.6.2. Полужидкая среда с лактозой

Готовят при отсутствии сухого препарата.

В 1 л дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г натрия хлористого, (4 — 5) г агар-агара, доводят до кипения, устанавливают рН 7,2 — 7,4, добавляют 1 мл 1,6 %-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Стерилизуют при (120 ± 2) °С 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы, нагревают до кипения, разливают в стерильные пробирки на высоту (3 — 5) см и стерилизуют при (112 ± 2) °С 12 мин. Срок хранения — не более 2 недель при комнатной температуре.

Правильно приготовленная среда зеленого цвета с синеватым оттенком (цвет бутылочного стекла). При Образовании кислоты цвет среды изменяется на желтый.

5.6.3. Лактозо-пептонная среда

Готовят по п. 5.5 с добавлением 1 мл 1,6 %-ного спиртового раствора бромтимолового синего на 1 л и разливают по (3 — 5) мл в пробирки с поплавком.

Готовят по прописи завода-изготовителя.

1 %-ный водный раствор тетраметил-п-фенилендиамина гидрохлорид. Готовят перед употреблением.

Реактив № 1. 1 %-ный спиртовой раствор α-нафтола.

Реактив № 2. 1 %-ный водный раствор фенкпендиаминового соединения.

Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками:

1 — до одного месяца, 2 — до одной недели. Перед употреблением к трем частям первого раствора добавляют семь частей второго раствора.

Могут быть использованы коммерческие тест-системы для постановки оксидазного теста (СИБ-оксидаза или аналоги).

Перед работой с каждой серией проб реактивы или тест-системы на оксидазу следует испытывать с тест-культурами микроорганизмов, дающих положительную ( Ps . aeruginosa , Ps . fluorescens ) и отрицательную оксидазную реакцию (E. coli).

В 1000 мл стерильного расплавленного питательного агара (по п. 5.4) добавляют 10 г глюкозы, нагревают до растворения, разливают мерно во флаконы, автоклавируют при (112 ± 2) °С 12 мин (основная среда).

20 %-ный раствор сульфита натрия ( Na ₂ SO ₃ ) и 8 %-ный раствор железа серно-кислого закисного ( FeSO ₄ ) или железа хлористого ( FeCl ₂ ) готовят непосредственно перед употреблением в стерильной посуде на стерильной дистиллированной воде. Раствор сульфита натрия нагревают до полного растворения. Перед выполнением анализа в 100 мл расплавленной основной среды вносят 5 мл 20 %-ного раствора сульфита натрия, перемешивают, затем вносят 1 мл 8 %-ного раствора сернокислого железа, перемешивают и стерильно разливают в пробирки высоким столбиком (12 — 15) см для работы методом мембранной фильтрации или во флаконы для работы методом прямого посева.

5.9.1. Карболовый раствор генциана фиолетового готовят следующим образом: 1 г генциана фиолетового, 10 мл ректификованного этилового спирта, 5 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды.

5.9.2. Раствор Люголя готовят следующим образом: 1 г йода, 2 г йодистого калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды. Хранить во флаконе из темного стекла.

5.9.3. Фуксин Циля готовят следующим образом: 1 г основного фуксина, 10 мл спирта этилового ректификованного, 54 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды.

Лабораторную посуду моют, ополаскивают сначала водопроводной, затем дистиллированной водой и высушивают.

Пробирки, колбы, бутылки, флаконы закрывают силиконовыми или ватно-марлевыми пробками и колпачками (силиконовые, металлические, из фольги или плотной бумаги).

Пипетки со вставленными тампонами из ваты укладывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу.

Чашки Петри укладывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу. Бумага, используемая для обертывания лабораторной посуды, не должна разрушаться при стерилизации.

Подготовленную посуду стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 160 °С в течение 2 ч или 180 °С 1 ч, считая с момента достижения указанной температуры. Стерильную посуду вынимают из стерилизационного шкафа после его охлаждения ниже 60 °С. Срок хранения стерильной посуды — не более 10 дней.

Материалы и лабораторную посуду, разрушающиеся при температуре (160 — 180) °С (резина и т.п.), следует стерилизовать в паровом стерилизаторе при температуре (121 ± 2) °С 20 мин.

Новые резиновые пробки кипятят в 2 %-ном растворе натрия двууглекислого 30 мин и 5 раз промывают водопроводной водой (кипячение и промывание повторяют дважды). Затем пробки кипятят в дистиллированной воде 30 мин, высушивают, заворачивают в бумагу или фольгу и стерилизуют в паровом стерилизаторе. Резиновые пробки, использованные ранее, обеззараживают, кипятят 30 мин в водопроводной воде с нейтральным моющим средством, промывают в водопроводной воде, высушивают, монтируют и стерилизуют.

После выполнения анализа все использованные чашки, пробирки и пипетки обеззараживают в автоклаве при (126 ± 2) °С в течение 60 мин, в исключительных случаях допускается обеззараживание кипячением в 2 %-ном растворе пищевой соды или 0,5 %-ном моющего средства в течение 60 мин с момента закипания (в закрытой емкости с полным погружением в раствор).

Перед посевом пробу тщательно перемешивают и фламбируют горящим тампоном край емкости. Используемые пробирки и чашки маркируют.

Перед каждым отбором новой порции воды для анализа пробу перемешивают стерильной пипеткой.

Мембранные фильтры должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указаниями изготовителя.

Воронку и столик фильтровального аппарата обтирают марлевым (ватным) тампоном, смоченным спиртом ректификованным, и фламбируют. После охлаждения на столик фильтровального аппарата кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его воронкой.

В воронку прибора для фильтрования наливают отмеренный объем воды, затем создают вакуум.

При посеве нескольких объемов одной пробы следует фильтровать через один фильтровальный аппарат без обеззараживания сначала меньшие, а затем большие объемы воды, меняя каждый раз фильтры. Перед фильтрованием каждой новой пробы прибор обеззараживают.

Следует начинать с фильтрования проб обеззараженной воды или тех проб, которые предположительно не загрязнены, а затем фильтровать загрязненные пробы.

При фильтровании 1 мл исследуемой воды следует в воронку налить предварительно не менее 10 мл стерильной воды, а затем внести анализируемую воду.

После окончания фильтрования и осушения фильтра отключают вакуум, воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на питательную среду, разлитую в чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.

Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, номера пробы и даты посева. На одну чашку можно поместить 3 — 4 фильтра с условием, чтобы фильтры не соприкасались.

8.1.1. Определение понятия показателя

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза.

Из каждой пробы делают посев не менее двух объемов по 1 мл.

После тщательного перемешивания пробы воды вносят по 1 мл в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышки. После внесения воды в каждую чашку вливают (8 — 12) мл (на чашку диаметром 90 — 100 мм) расплавленного и остуженного до (45 — 49) °С питательного агара после фламбирования края посуды, в которой он содержится. Затем быстро смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки. Эту процедуру производят на горизонтальной поверхности, где чашки оставляют до застывания агара.

Расплавленный агар на период проведения анализа помещают в водяную баню или термостат, поддерживающие температуру (45 — 49) °С.

После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч.

Подсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Учитывают только те чашки, на которых выросло не более 300 изолированных колоний.

Количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на два. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды.

Если на одной из 2 чашек подсчет невозможен, результат выдают на основании учета колоний на одной чашке. Если на двух чашках имеет место рост расплывчатых колоний, не распространяющийся на всю поверхность чашки, или выросло более 300 колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают сектор чашки с последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе отмечают «число КОЕ/мл — ориентировочно».

Если подсчет колоний на чашках невозможен, то в протоколе отмечают «сплошной рост».

8.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод)

8.2.1. Определение понятия показателя

Общие колиформные бактерии (ОКБ) — грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37 + 1) °С в течение (24 — 48) ч.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44 ± 0,5) °С в течение 24 ч.

Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциальной питательной среде с лактозой и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим свойствам.

8.2.3.1. Порядок исследования

При исследовании питьевой воды анализируют 3 объема по 100 мл.

При получении стабильных отрицательных результатов допустима фильтрация 300 мл воды через один фильтр.

При фильтрации воды неизвестного качества целесообразно увеличение количества фильтруемых объемов для получения изолированных колоний на фильтре (например, 10, 40, 100, 150 мл воды).

Отмеренный объем воды фильтруют через мембранные фильтры с соблюдением требований, изложенных в п. 7.

Фильтры помещают на среду Эндо, приготовленную по п. 5.4. Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч.

Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, выдают отрицательный ответ: отсутствие ОКБ и ТКБ в 100 мл исследуемой воды. Анализ заканчивают через 24 ч.

Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобного типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра, подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.

Для подтверждения наличия ОКБ исследуют:

· все колонии, если на фильтрах выросло менее 5 колоний;

· не менее 3 — 4 колоний каждого типа.

Для подтверждения наличия ТКБ исследуют все типичные колонии, но не более 10.

Каждую выбранную изолированную колонию исследуют на:

· наличие оксидазной активности;

· принадлежность к Граму (микроскопия окрашенного по Граму препарата или постановка теста Грегерсена);

· ферментацию лактозы до кислоты и газа.

8 2.3 2. Постановка оксидазного теста

Полоску фильтровальной бумаги помещают в чистую чашку Петри и смачивают 2 — 3 каплями реактива для оксидазного теста по п. 5.7. Готовые бумажные системы смачивают дистиллированной водой. Часть изолированной колонии стеклянной палочкой или платиновой петлей (металлическая петля из нихрома может дать ложноположительную реакцию) наносят штрихом на подготовленную фильтровальную бумагу. Реакция считается положительной, если в течение 1 мин появляется фиолетово-коричневое ( п. 5.7.1 вариант 1) или синее ( п. 5.7.2 вариант 2 и СИБ-оксидаза) окрашивание штриха. При отрицательной реакции цвет в месте нанесения культуры не меняется. При положительном результате эту колонию из дальнейшего исследования исключают.

Если при исследовании колоний, окрашенных в темно-красный цвет, получают недостаточно четкий результат, необходимо пересеять культуру со среды Эндо на питательный агар. После инкубации тест повторяют.

8.2.3.3. Определение принадлежности к Граму

Из оксидазоотрицательной колонии делается мазок, окрашивается по Граму и микроскопируется.

На обезжиренное спиртом предметное стекло наносят петлей 1 каплю дистиллированной воды, вносят небольшое количество культуры из анализируемой колонии и распределяют по поверхности стекла. Мазок высушивают при комнатной температуре и фиксируют трехкратным проведением через пламя горелки. На препарат накладывают полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают карболовый раствор генциана фиолетового на (0,5 — 1) мин, снимают бумагу, наливают раствор Люголя на (0,5 — 1) мин, сливают раствор Люголя и стекло промывают в этиловом спирте в течение (0,5 — 1) мин, пока не перестанет отходить краситель. Затем стекло тщательно промывают водой и докрашивают в течение (1 — 2) мин фуксином Циля, разведенным 1:10 дистиллированной водой. После промывания и просушивания препарата мазок микроскопируют.

Приготовление реактивов для окраски по Граму изложено в п. 5.9.

Грамотрицательные микроорганизмы имеют розовую окраску, грамположительные окрашиваются в синий цвет. Колиформные бактерии являются грамотрицательными палочками.

Окраска по Граму может быть заменена тестом Грегерсена, не требующим использования оптики.

Тест Грегерсена: в капле 3 %-ного водного раствора КОН на предметном стекле эмульгируют бактерийную массу, взятую с плотной среды. После нескольких секунд перемешивания петлей взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, что указывает на принадлежность испытуемой культуры или колонии к грамотрицательному виду. У грамположительных бактерий слизистые нити не образуются — реакция отрицательная.

8.2.3.4. Определение ферментации лактозы

Оставшуюся часть оксидазоотрицательной грамотрицательной изолированной колонии засевают параллельно в две пробирки с лактозной средой ( п. 5.6):

· для подтверждения наличия ОКБ посев инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение 48 ч;

· для подтверждения наличия ТКБ посев осуществляют в среду, предварительно прогретую до температуры (43 — 44) °С, и инкубируют при температуре (44 ± 0,5) °С в течение 24 ч.

Первичный учет образования кислоты и газа на подтверждающих полужидких средах и СИБ ( п. 5.6) возможен через (4 — 6) ч. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ. При отсутствии кислоты и газа или при наличии только кислоты пробирки с посевами для окончательного учета ТКБ оставляют до 24 ч. Пробирки с посевами для подтверждения наличия ОКБ после просмотра через 24 ч и получения отрицательного результата оставляют для окончательного учета до 48 ч.

Если колония, подлежащая исследованию, незначительных размеров, ее пересевают на скошенный питательный агар и после инкубации в течение (18 — 24) ч выполняют все необходимые подтверждающие тесты.

8.2.3.5. Постановка подтверждающих тестов при наложении колоний или сплошном росте

Если на части или на всей поверхности фильтра наблюдается наложение колоний или сплошной рост, выполняют оксидазный тест путем помещения мембранного фильтра на кружок фильтровальной бумаги большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченный реактивом, или на диск СИБ-оксидаза, смоченный дистиллированной водой. При появлении первых признаков реакции, но не более чем через 5 мин, мембранный фильтр переносят обратно на среду Эндо. После четкого проявления реакции определяют результат. При появлении фиолетово-коричневого или синего окрашивания (в зависимости от примененного реактива) оксидазный тест считают положительным.

Если на фильтрах все колонии оксидазоположительные, они не учитываются и выдают ответ об отсутствии ОКБ и ТКБ и завершают анализ.

При отрицательной оксидазной реакции проводят рассев до получения изолированных колоний и подтверждают их принадлежность к ОКБ и ТКБ по п. п. 8.2.3.3 — 8.2.3.4 (анализ качественный).

8.2.4.1. Грамотрицательные колонии учитываются как ОКБ при отрицательном оксидазном тесте и ферментации лактозы при температуре 37 °С с образованием кислоты и газа.

Грамотрицательные колонии учитываются как ТКБ при отрицательном оксидазном тесте и ферментации лактозы при температуре 44 °С с образованием кислоты и газа.

8.2.4.2. При отсутствии общих и термотолерантных колиформных бактерий на всех фильтрах результат записывают «не обнаружено КОЕ ОКБ в 100 мл» и «не обнаружено КОЕ ТКБ в 100 мл».

8.2.4.3. В случае идентификации всех выросших подозрительных колоний число колониеобразующих единиц ОКБ и ТКБ подсчитывают на всех фильтрах и выражают результат анализа КОЕ в 100 мл воды.

Вычисление проводят по формуле:

, где

Х — число колоний в 100 мл;

V — профильтрованный объем воды через фильтры, на которых велся учет;

а — число подсчитанных на этих фильтрах колоний в сумме.

1. При посеве 3 фильтров по 100 мл выросло две колонии в 100 мл, на остальных двух фильтрах нет роста. Число общих или термотолерантных колиформных бактерий будет:

КОЕ ОКБ (ТКБ) в 100 мл

2. При посеве 10, 40, 100 и 150 мл на фильтрах с профильтрованным объемом 40 мл выросло 4 изолированные колонии, с профильтрованным объемом 100 — 3 ОКБ. Фильтры с объемами 10 мл и 150 мл заросли и учету не подлежат. Суммируют общее число колоний ОКБ (ТКБ) на тех фильтрах, где получены изолированные колонии, и пересчитывают на объем 100 мл.

КОЕ в 100 мл

8.2.4.4. Если при выборочной проверке колоний одного типа получены неодинаковые результаты, то вычисляют числа ОКБ или ТКБ среди колоний этого типа по формуле:

, где

Х — число подтвержденных бактерий одного типа;

а — общее число колоний этого типа;

b — число проверенных из них;

с — число колоний с положительным результатом.

Полученные результаты учета по каждому типу колоний суммируют и далее подсчитывают по п. 8.2.4.3 — 8.2.4.4.

8.2.4.5. Окончательный результат выдают: количество КОЕ ОКБ в 100 мл, из них количество КОЕ ТКБ в 100 мл.

Ориентировочный результат может быть выдан при обнаружении типичных колиформных колоний на среде Эндо, образованных грамотрицательными оксидазоотрицательными бактериями. Окончательный ответ подтверждается по результатам ферментации лактозы.

8.2.4.6. При наложении колоний или сплошном росте на всех фильтрах ( п. 8.2.3.5) в случае подтверждения принадлежности к ОКБ и ТКБ выдается качественный результат «обнаружено ОКБ в 100 мл».

Если все колонии на фильтре оксидазоположительные или не подтвердилась их принадлежность к ОКБ и ТКБ, анализ завершается, в протоколе отмечают «зарост фильтров».

В обоих случаях анализ повторяют.

8.3.1. Определение понятия показателя

Определение понятия показателей ОКБ и ТКБ по п. 8.2.1.

Титрационный метод может быть использован:

· при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализа методом мембранной фильтрации;

· при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ;

· в случае преобладания в воде посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний общих колиформных бактерий.

Метод основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды в жидкую питательную среду, с последующим пересевом на дифференциальную плотную питательную среду с лактозой и идентификации колоний по культуральным и биохимическим тестам.

При исследовании питьевой воды качественным методом (текущий санэпиднадзор, производственный контроль) засевают 3 объема по 100 мл.

При исследованиях воды с целью количественного определения ОКБ и ТКБ при повторном анализе производят посев: 3 объемов по 100 мл, 3 объемов по 10 мл, 3 объемов по 1 мл.

Каждый объем исследуемой воды засевают в лактозо-пептонную среду, приготовленную по п. 5.5. Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лактозо-пептонной среды, посев 1 мл пробы проводят в 10 мл среды обычной концентрации.

Посевы инкубируют при (37 ± 1) °С в течение 48 ч. Не ранее 24 час инкубации проводят предварительную оценку посевов. Из емкостей, где отмечено наличие роста (помутнение) и образование газа, производят высев бактериологической петлей на сектора среды Эндо ( п. 5.4.1) для получения изолированных колоний.

Емкости без наличия роста и образования газа оставляют в термостате и окончательно просматривают через 48 ч. Посевы без признаков роста считают отрицательными и дальнейшему исследованию они не подлежат. Из емкостей, где отмечено помутнение и образование газа или только помутнение, делают высев на сектора среды Эндо.

Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (18 — 20) ч.

При образовании помутнения и газа в среде накопления и росте на среде Эндо колоний, типичных для лактозоположительных бактерий: темно-красных или красных, с металлическим блеском или без него, выпуклых с красным центром и отпечатком на питательной среде, дают положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий в данном объеме пробы.

Наличие ОКБ требуется подтвердить:

· если в среде накопления отмечено только помутнение;

· если принадлежность к лактозоположительным колониям вызывает сомнение у исследователя.

· проверяют наличие отпечатка на среде Эндо после снятия петлей подозрительной колонии;

· выполняют оксидазный тест по п. 8.2.3.2;

· подтверждают принадлежность к Граму по п. 8.2.3.3;

· подтверждают способность к газообразованию при посеве изолированных 1 — 2 колоний каждого типа с каждого сектора на среду с лактозой по п. 5.6 с последующей инкубацией посевов при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 — 48) ч.

При отсутствии изолированных колоний проводят рассев на среду Эндо общепринятыми бактериологическими методами.

Отрицательный ответ дают, если:

· в среде накопления нет признаков роста;

· на секторах среды Эндо нет роста;

· на секторах среды Эндо выросли не характерные для колиформных бактерий колонии (прозрачные с неровными краями, расплывчатые и т.п.);

· все колонии оказались оксидазоположительными;

· все колонии оказались грамположительными;

· если в подтверждающем тесте на среде с углеводом не отмечено газообразования.

Для определения термотолерантных колиформных бактерий работают с секторами среды Эндо, где выросли типичные лактозоположительные колонии. Делают посев 2 — 3 изолированных колоний каждого типа с каждого сектора в пробирки с любой из лактозных сред, приготовленных по п. 5.6.

Среду перед посевом нагревают на водяной бане или в термостате до 44 °С. Немедленно после посева пробирки помещают в термостат и инкубируют при температуре (44 ± 0,5) °С в течение 24 ч. Допускается просмотр посевов через (4 — 6) ч.

При образовании газа в среде накопления, росте на среде Эндо лактозоположительных бактерий и выявлении способности этих бактерий ферментировать лактозу до кислоты и газа в течение 24 ч при температуре 44 °С дают положительный ответ на наличие в этом объеме пробы воды ТКБ. Во всех остальных случаях дают отрицательный ответ.

Допустимо для ускорения выдачи ответа на присутствие ТКБ производить высев 1 мл из объемов среды накопления, где отмечено помутнение и газообразование в пробирке с лактозо-пептонной средой с поплавком по п. 5.6 и прогретой предварительно до температуры 44 °С. Посевы выдерживают в термостате при температуре (44 ± 0,5) °С в течение 24 ч. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ.

При исследовании 3 объемов по 100 мл результаты оцениваются качественно и при обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из 3 объемов, делается запись в протоколе «обнаружены в 100 мл».

При исследовании количественным методом определяют наиболее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ по табл. 1.1 приложения 1.

Результат сообщают без доверительного интервала.

При отрицательном ответе на наличие ОКБ и ТКБ во всех исследованных объемах выдают заключение в протоколе «не обнаружены в 100 мл».

8.4.1. Определение понятия показателя

Сулъфитредуцирующие клостридии — спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железо-сульфитном агаре при температуре (44 ± 1) °С в течение (16 — 18) ч.

Метод основан на выращивании посевов в железо-сульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.

8.4.3.1. Пробу воды 20 мл прогревают на водяной бане в пробирках при температуре (75 ± 5) °С в течение 15 мин для исключения вегетативных форм.

При исследовании хлорированной воды прогревание пробы можно не производить.

Из каждой пробы питьевой воды делают посев или фильтруют 20 мл. При необходимости подбирают объемы с таким расчетом, чтобы в посевах (на фильтрах) выросло не более 10 — 15 колоний. При этом ориентируются на результаты предыдущих исследований.

Фильтрование воды производят в соответствии с требованиями, изложенными в п. 7.

8.4.3.2. Определение методом фильтрования в пробирках

Перед посевом пробирки с железо-сульфитным агаром, приготовленным по п. 5.8, расплавляют на водяной бане (не кипятить!). В течение посева поддерживают среду нагретой до (70 — 80) °С в водяной бане.

После фильтрования установленного объема воды мембранный фильтр фламбированным пинцетом берут за два противоположных края и согнутый в виде трубочки помещают в пробирку с горячим агаром. Сторона фильтра с осевшими бактериями обращена внутрь. При этом фильтр распрямляется и располагается по стенке пробирки.

Сразу же после посева пробирку с агаром и фильтром для создания анаэробных условий быстро охлаждают, помещая в емкость с холодной водой. Культивируют посевы при (44 ± 1) °С в течение (16 — 18) ч.

8.4.3.3. Определение методом фильтрования в чашках Петри

Чашки Петри диаметром (55 — 60) мм заливают тонким слоем железо-сульфитного агара. После фильтрации фильтр поместить фильтрующей поверхностью вниз на застывшую питательную среду так, чтобы под фильтром не было пузырьков воздуха. Затем заливают расплавленным железо-сульфитным агаром до верхнего края чашки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэробных условий. Культивируют посевы при (44 ± 1) °С в течение (16 — 18) ч.

8.4.3.4. Определение прямым посевом

Железо-сульфитный агар во флаконах и пробу воды готовят, как это описано в п. 8.4.3.1.

В стерильные пробирки вносят:

· по 10 мл в 2 пробирки (объемом не менее 30 мл) или

· по 5 мл в 4 пробирки (объемом по 15 мл).

Посевы заливают горячим железо-сульфитным агаром в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. Среду заливать по стенке пробирки, избегая образования пузырьков воздуха. После этого пробирку быстро охлаждают, помещая ее в емкость с холодной водой для создания анаэробных условий. Посевы инкубируют при (44 ± 1) °С в течение (16 — 18) ч.

Количественному учету подлежат только те посевы, где получены изолированные колонии. Подсчитывают черные колонии, выросшие как на фильтрах, так и в толще питательной среды.

Результат анализа выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.

При отсутствии роста черных колоний на всех фильтрах дают ответ «не обнаружено в 20 мл воды».

При невозможности учета колоний из-за сливного роста результат оценивается как качественный, в протоколе отмечают «обнаружено в 20 мл». При необходимости получения количественного результата анализ повторяют.

8.5.1. Определение понятия показателя

Колифаги — бактериальные вирусы, способные лизировать E. coli и формировать при температуре (37 ± 1) °С через (18 ± 2) ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питательном агаре.

8.5.2. Титрационный метод определения колифагов

Определение колифагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении колифагов в среде обогащения на культуре E. coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E. coli на питательном агаре.

Метод предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды.

8.5.2.3. Подготовка тест-культуры E. coli К12 Str R .

На всех этапах исследования используют бактериальную взвесь, приготовленную следующим образом: культуру E. coli засевают в пробирку со скошенным питательным агаром со стрептомицином ( п. 5.3.5). Через (18 ± 2) ч инкубации при температуре (37 ± 1) °С произвести смыв бактерий с косяка 5 мл стерильного физиологического раствора (0,85 %-ный раствор NaCl ) и по стандарту мутности готовят взвесь E. coli в концентрации 10 9 бактериальных клеток в 1 мл.

Допускается использование 4-часовой бульонной культуры E. coli, полученной путем подращивания в термостате при температуре 37 °С. Концентрация 10 9 бактериальных клеток E. coli содержится в 2 мл.

8.5.2.4. Проведение качественного анализа

В исследуемую пробу воды объемом 100 мл вносят 10 мл 10-кратного питательного бульона (приготовленного по п. 5.2.2) и 1 мл подготовленного смыва тест-культуры или 2 мл 4-часовой бульонной культуры ( п. 8.5.2.3).

Для контроля культуры 0,1 мл смыва бактерий Е. c oli (или 0,2 мл 4-часовой бульонной культуры) помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

Исследуемую пробу воды (100 мл) и чашку Петри с контролем E. coli помещают в термостат и инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (18 ± 2) ч.

После инкубации из исследуемой пробы воды отливают в пробирку 10 мл и добавляют 1 мл хлороформа.

Пробирку закрывают стерильной резиновой или силиконовой пробкой, энергично встряхивают для равномерного распределения хлороформа по объему пробы и оставляют при комнатной температуре не менее 15 мин до полного осаждения хлороформа.

В предварительно расплавленный и остуженный до (45 — 49) °С питательный агар добавляют приготовленный смыв бактерий E. coli ( п. 8.5.2.3) из расчета 1,0 мл смыва (или 2 мл 4-часовой бульонной культуры) на 100 мл агара.

В стерильную чашку Петри пипеткой из пробирки переносят 1 мл обработанной хлороформом пробы (не касаясь хлороформа) и заливают смесью расплавленного и остуженного до (45 — 49) °С питательного агара объемом (12 — 15) мл, а также одну дополнительную чашку Петри для контроля культуры E. coli и осторожно покачивают для равномерного перемешивания пробы воды и агара. Для полного застывания чашки оставляют на столе при комнатной температуре на 10 мин. После застывания чашки переворачивают и помещают в термостат на (18 ± 2) ч при 37 °С.

При выполнении серии проб ставится общий контроль для всей серии.

Просмотр посевов осуществляют в проходящем свете.

Проба считается положительной при наличии полного лизиса, просветления нескольких бляшек, одной бляшки на чашке с пробой воды при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке.

В протоколе анализа отмечается: колифаги обнаружены или не обнаружены в 100 мл воды (результат качественный).

При наличии зон лизиса в контроле культуры результат считается недействительным.

8.5.2.5. Проведение количественного анализа

Исследуемую пробу воды в количестве 100 мл разлить на 6 объемов: 1 флакон 50 мл и 5 пробирок по 10 мл. В 50 мл пробы добавить 5 мл десятикратного питательного бульона (по п. 5.2.2) и 0,5 мл смыва (или 1 мл 4-часовой бульонной культуры) бактерий E. coli ( п. 8.5.2.3). В каждые 10 мл пробы внести по 1 мл десятикратного питательного бульона и 0,1 мл смыва (или 0,2 мл 4-часовой бульонной культуры) бактерий E. coli.

Для контроля культуры 0,1 мл смыва бактерий (или 0,2 мл 4-часовой бульонной культуры) E. coli помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение 18 ± 2 ч.

После инкубации из объема 50 мл отлить в пробирку 10 мл. Во все исследуемые 6 объемов добавить по 1 мл хлороформа. Пробирки закрыть стерильными резиновыми или силиконовыми пробками, энергично встряхнуть для равномерного распределения хлороформа по объему пробы и оставить при комнатной температуре не менее 15 мин для осаждения хлороформа.

В предварительно расплавленный и остуженный до (45 — 49) °С питательный агар добавить приготовленный смыв бактерий E. coli ( п. 8.5.2.3) из расчета 1,0 мл смыва (или 2 мл 4-часовой бульонной культуры) на 100 мл агара. Приготовленную смесь разлить в чашки Петри: 1 чашку для контроля культуры E. coli на лизогенность и по одной чашке на каждую исследуемую пробу воды. При одновременном анализе нескольких проб воды ставится один контроль культуры E. coli.

После застывания агара чашки, предназначенные для посева проб, разделить на 6 секторов, промаркировать их в соответствии с исследуемыми объемами. На каждый сектор из соответствующей пробирки нанести пастеровской пипеткой (микропипеткой или бактериологической петлей продольным штрихом) по 1 капле надосадочной жидкости (без хлороформа).

После подсыхания капель чашки с исследуемыми пробами и контрольную чашку поместить в термостат при (37 ± 1) °С на (18 ± 2) ч.

Просмотр результатов осуществляется в проходящем свете.

Учет проводится по наличию зон просветления (лизиса) на секторах газона E. coli.

При применении капельного способа посева пипеткой образуется зона лизиса в виде округлого пятна или отдельных бляшек. При посеве продольным штрихом бактериологической петлей отмечается лизис по ходу штриха.

Проба считается положительной при наличии зоны лизиса хотя бы на одном секторе при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке.

Оценка проводится по таблице наиболее вероятного числа (НВЧ) бляшкообразующих единиц (БОЕ) (табл. 1.2). В протоколе анализа указывается наиболее вероятное количество колифагов в 100 мл воды и диапазон возможных колебаний: НВЧ БОЕ (нижний предел — верхний предел) колифагов в 100 мл. Результат полуколичественный.

При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат считать недействительным.

8.5.3. Прямой метод определения колифагов

Определение колифагов в питьевой воде заключается в исследовании нормируемого объема воды (100 мл) путем его прямого посева и последующего учета зон лизиса (бляшек) на газоне E. coli в чашках Петри с питательным агаром.

Прямой метод выделения колифагов из воды проводят параллельно с титрационным при исследованиях по эпидемическим показаниям.

В питательный агар двойной концентрации ( п. 5.3.2), расплавленный и остуженный до (45 — 49) °С, добавить смыв E. coli ( п. 8.5.2.3) из расчета 2,0 мл смыва (или 4 мл 4-часовой бульонной культуры) на каждые 100 мл агара, перемешать. Исследуемые 100 мл воды разлить по 20 мл в большие пробирки, нагреть до (35 — 44) °С и немедленно (не более чем через 5 мин по достижении требуемой температуры) разлить в 5 чашек Петри и сразу же внести в каждую чашку по 20 мл смеси агара с культурой E. coli.

Для контроля культуры E. coli в одну чашку Петри внести 20 мл стерильной водопроводной воды, предварительно прогретой до (35 — 44) °С, залить 20 мл приготовленного агара с E. coli и осторожно перемешать.

Содержимое чашек осторожно перемешать и оставить при комнатной температуре до застывания. Чашки с застывшим агаром поместить дном вверх в термостат и инкубировать при температуре (37 ± 1) °С в течение (18 ± 2) ч.

Просмотр посевов осуществляется в проходящем свете.

Учет результатов проводят путем подсчета и суммирования бляшек, выросших на 5 чашках Петри. Результаты выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 мл пробы воды. В контрольной чашке бляшки должны отсутствовать.

Наиболее часто зоны лизиса выглядят прозрачными пятнами на фоне газона тест-культуры питательного агара в виде круглых изолированных бляшек (от 1 до 5 — 7) мм в диаметре с четко выраженными либо стертыми границами.

При высоких концентрациях фага наблюдается разная картина лизиса.

Слияние негативных колоний дает «ажурный» газон E. coli, рост единичных колоний E. coli на фоне сплошного лизиса, либо полное отсутствие роста на чашке.

При прямом посеве возможен лизис, маскируемый негомогенно застывшим агаром, а также закрытый сопутствующей микрофлорой. Капли конденсата и негомогенно застывший при прямом посеве агар могут приводить к образованию артефактов на газоне E. coli, визуально напоминающих лизис.

Предварительный учет результатов можно проводить через (5 — 6) ч инкубации. На этом этапе при наличии четких зон лизиса может быть выдан предварительный ответ о присутствии колифагов в воде.

Окончательный количественный учет прямого посева проводится через (18 ± 2) ч. Результаты выражают количеством бляшкообразующих единиц (БОЕ) на 100 мл пробы воды.

Если отмечен сливной рост бляшек и счет затруднителен, то по данным прямого посева может быть выдан качественный результат: «обнаружено в 100 мл воды».

При получении отрицательного результата при работе прямым методом окончательный ответ выдается по результатам титрационного метода.

При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат исследования считается недействительным.

8.5.4.1. Отрицательный контроль

Отрицательный контроль подтверждает отсутствие контаминации фагом питательных сред, лабораторной посуды, оборудования на этапах подготовки и проведения анализа, а также позволяет оценить способность тест-культуры E. coli давать равномерный газон.

Отрицательным контролем служит исследование стерильной водопроводной воды, проводимое аналогично анализируемой пробе воды. Так, при анализе воды титрационным методом 10 мл стерильной водопроводной воды вносят в дополнительную пробирку. При анализе воды прямым посевом в дополнительную шестую чашку Петри вносят 20 мл стерильной водопроводной воды.

Дополнительные посевы исследуются на колифаги аналогично основным пробам.

При анализе серии проб отрицательный контроль может быть один на каждый вид анализа: титрационный и прямой. В этом случае постановка отрицательного контроля поэтапно осуществляется после обработки всех проб данной серии.

В случае обнаружения бляшек колифагов в чашках с отрицательным контролем результаты исследования всей серии проб воды недействительны.

Следует проверить стерильность лабораторного оборудования, посуды, питательных сред, а также повторить контрольный посев на чистоту тест-штамма E. coli К12 F + Str R .

Кратность проведения отрицательного контроля — 1 раз в день.

8.5.4.2. Методика подтверждения фаговой природы лизиса

В сомнительных случаях при работе как титрационным, так и прямым методами необходимо провести контрольный посев на подтверждение фаговой природы лизиса.

С этой целью бактериологической петлей извлекают участок агара, подозрительный на колифаги, помещают его в 5 мл питательного бульона, куда добавляют каплю тест-культуры E. coli и инкубируют при 37 °С в течение (16 — 18) ч. Полученную культуру обрабатывают хлороформом и исследуют на наличие фага. Высев осуществляют петлей или пипеткой на сектора питательного агара аналогично способу, описанному в п. 8.5.2.5. Лизис на любом из секторов расценивается как подтверждение наличия фага.

Таблицы расчета наиболее вероятного числа микроорганизмов

Расчет наиболее вероятного числа бактерий в 100 мл питьевой воды

источник