Анализ питьевой воды на омч

Несоответствие воды микробиологическим нормам, так же как и химическим, делает ее непригодной для питья. Если Ваш источник водоснабжения не защищен от прямого воздействия окружающей среды или коммунальные системы устарели или давно не чистились, то сделать микробиологический анализ воды просто необходимо. От этого зависит Ваше здоровье и безопасность! Особенно это важно для тех, кто пользуется колодцем. Колодезная вода – грунтовая, она на прямую контактирует с почвами, а значит, грозит «напоить» Вас и нитратами, и тяжелыми металлами, и аммиаком, и, конечно, вредными органическими веществами, которые попадают в почву в результате деятельности сельскохозяйственных ферм или угодий.

В таблице 1 представлены микробиологические показатели действующего норматива СанПиН 2.1.4.1074-01 для питьевой воды:

Таблица 1. Микробиологические нормативы для питьевой воды

Показатель	Норматив СанПиН 2.1.4.1074-01
Общая микробная численность	Не более 50 КОЕ в 1 мл
Общие колиформные бактерии	Отсутствие в 100 мл
Термотолерантные колиформные бактерии	Отсутствие в 100 мл
Колифаги	Отсутствие в 100 мл
Споры сульфитредуцирующих бактерий	Отсутствие в 20 мл

Стандартный микробиологический анализ питьевой воды в МГУ включает определение трех показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных и термотолерантных колиформных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ воды включает анализ пяти показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных бактерий, количества термотолерантных колиформных бактерий, титр колифагов и содержание спор сульфитредуцирующих бактерий.

Часто на наших участках или поблизости имеются водоемы, где мы и наши дети с удовольствием любим провести время. Конечно, вода в данных водоемах не является питьевой, но ее безопасность для человека также, как и питьевая, регламентируется. В таблице 2 представлены микробиологические показатели действующего норматива по гигиеническим требованиям к охране поверхностных вод (СанПиН 2.1.5.980-00)

Таблица 2. Микробиологические нормативы для рекреационного водопользования, а также в черте населенных мест

Показатель	Норматив СанПиН 2.1.5.980-00
Общие колиформные бактерии	Не более 500 КОЕ в 100 мл
Термотолерантные колиформные бактерии	Не более 100 КОЕ в 100 мл
Колифаги	Не более 100 БОЕ в 100 мл
Возбудители кишечных инфекций (анализ бактерий из сем. Enterobacteriaceae рода Salmonella)	Вода не должна содержать возбудителей кишечных инфекций (полное отсутствие в 1000 мл)

Микробиологический анализ воды, предназначенной не для питья, включает определение количества двух показателей: общих колиформных и колиформных термотолерантных бактерий.

Помимо двух основных показателей мы предлагаем провести дополнительный анализ на содержание: колифагов, условно-патогенных дрожжей и микромицетов (частых спутников опортунистических заболеваний) и индекса самоочищения водоёма.

При значительном превышении нормативов СанПиН 2.1.5.980-00, а также возможном фекальном загрязнении водоёма, мы предлагаем провести анализ на наличие возбудителей кишечных инфекций (род Salmonella и Enterococcus).

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза. Данный индикатор выявляет потенциальных бактерий, способных причинить вред здоровью человека.

Общие колиформные бактерии (ОКБ) – грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37+1) °С в течение (24-48) часов. Многие представители данной группы являются микроорганизмами нормальной микрофлоры желудка, поэтому превышение данной группы микроорганизмов может говорить о возможно антропогенном (в том числе и фекальном) загрязнении воды.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44±0,5) °С в течение 24 часов. Также, как и ОКБ являются индикаторной группой, однако более устойчивые в окружающей среде: вот почему обнаружение данной группы микроорганизмов в воде может говорить об однозначном загрязнении ее продуктами жизнедеятельности человека.

Колифаги, определяемые стандартным методом (МУК 4.2.1018-01), являются вирусами кишечной палочки (Escherichia coli) и рассматриваются эпидемиологами как дополнительный, а порой и более чувствительный, метод в определении загрязнения воды микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы, и в частности колифаги, более устойчивы к окружающей среде, чем их бактерии-хозяева. В связи с этим, наличие колифагов может служить достоверной меткой о более давнем фекальном загрязнении источника воды. Показана прямая корреляция между содержанием колифагов в воде и опасных для человека энтеровирусов, поэтому наличие колифагов в воде может говорить о вирусном заражении источника. Действующий нормативный документ (СанПиН 2.1.4.1074-01) подразумевает отсутствие колифагов в 100 мл воды.

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, являющиеся дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения водоема. В отличие от относительно неустойчивых колиформных и термотолерантных колиформных бактерий, споры клостридий могут сохраняться в водоемах долгое время. Клостридии встречаются в кишечнике человека и домашних животных, однако, при попадании с водой в большом количестве могут вызвать пищевые отравления. К сульфитредуцирующим клостридиям относятся в том числе и опасные для человека клостридии (Clostridiumbotulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), вызывающие тяжелейшие заболевания. Согласно действующему нормативу (СанПиН 2.1.4.1074-01) споры клостридий должны отсутствовать в 20 мл воды.

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов, способных сапротрофно расти при 37 °С. В нее входят такие представители, как Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые являются частым фактором оппортунистических заболеваний человека, вызывая кандидозы (грибковые заболевания кожи), молочницы и проч. Другие организмы микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) могут являться активными сенсебилизаторами аллергических реакций, а иногда и самими аллергенами. В РФ не нормируется вода по плесеням и дрожжевым организмам в воде.

Общее число микроорганизмов не нормируется в воде водоемов в зонах рекреаций, поскольку уровень этой группы микроорганизмов в большей мере зависит от природных особенностей каждого объекта, времени года и т.п.

Однако при выборе нового источника водоснабжения или места рекреации в воде водоёмов дополнительно следует определять общую микробную численность, вырастающую:

при температуре 37 °С в течение 24 часов;
при температуре 22 °С в течение 72 часов.

ОМЧ при 37 °С представлена большей частью алохтонной микрофлорой (внесенную в водоем в результате антропогенного загрязнения, в том числе фекального);
ОМЧ при 20-22 °С представлена, помимо алохтонной, аборигенной микрофлорой (естественной, свойственной для данного водоёма).

Соотношение численности этих групп микроорганизмов позволяет судить об интенсивности процесса самоочищения. При завершении процесса самоочищения коэффициент ОМЧ 22 °С/ ОМЧ 37 °С. В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми сточными водами численные значения обеих групп близки.

Показатель позволяет получить дополнительную информацию о санитарном состоянии водоемов, источниках загрязнения, процессах самоочищения.

источник

Вода является неотъемлемой составляющей всех живых систем. В среднем, человек потребляет 2,5 литра воды в день. Наряду с полезным кальцием, магнием и калием вода несет в себе и вредные для здоровья человека элементы, такие как нитраты, нитриты, кадмий и тому подобное. Характеристики употребляемой нами жидкости определяют качество и продолжительность жизни. Согласно докладу Всемирной организации здравоохранения (WHO, 2007), около 1,1 миллиарда человек не имеют доступа к безопасным источникам водоснабжения, а около 2 миллиона человек ежегодно умирают от заболеваний, передающихся через питьевую воду. Тошнота и диарея – не самое опасное, что вызывают микроорганизмы. Бактерии и вирусы в прямом смысле могут отравлять нашу жизнь, вызывая болезни с летальным исходом (например, Clostridium botulinum – возбудитель ботулизма) или опосредовано приводя к смертельным случаям (Helicobacter pylori – возможная причина рака ЖКТ). В Российской Федерации состояние воды регламентируются несколькими нормативами в зависимости от предназначения (смотреть таблицу).

Требования к микробиологическим показателям качества воды в Российской Федерации в зависимости от хозяйственной деятельности человека

Показатель	Природная вода 1	Вода бассейнов 2	Нецентр. водоснаб. 3	Центр. водоснаб. 4	Бутилированная вода 5
Общая микробная численность (ОМЧ), КОЕ / 1 мл	–	–	не более 100	не более 50	не более 20
Общие колиформные бактерии (ОКБ), КОЕ / 100 мл	не более 1000 (питьевая вода) не более 500 (рекреационное назначение)	не более 1	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 300 мл
Термо-толерантные колиформные бактерии (ТКБ), КОЕ / 100 мл	не более 100	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 300 мл
Колифаги, БОЕ / 100 мл	не более 10	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 1000 мл
Споры сульфит-редукторов	–	–	–	отсутствие в 20 мл	отсутствие в 20 мл
Возбудители кишечных инфекций	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл
Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa)	–	отсутствие в 100 мл	–	–	отсутствие в 1000 мл
Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus)	–	отсутствие в 100 мл	–	–	–

СанПиН 2.1.5.980-00 «Гигиенические требования к охране поверхностных вод»
СанПиН 2.1.2.1188-03 «Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества»
СанПиН 2.1.4.1175-02 «Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников»
СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества»
СанПиН 2.1.4.1116-02 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества»

Оценка качества по микробиологическим показателям сводится к определению в объекте доли микроорганизмов, связанных с человеком и его продуктами жизнедеятельности.

Прежде всего, определим единицы измерения количества микробов. КОЕ/мл (колониеобразующие единицы) – количество жизнеспособных микробных клеток в миллилитре. Если производится оценка вирусных частиц в среде, то указывается БОЕ/мл (бляшкообразующие единицы) – количество вирусных частиц в миллилитре.

Выявляет бактерии, потенциально способные причинить вред здоровью. Этот показатель достаточно информативен, так как высокая ОМЧ является индикатором загрязнения органическими соединениями (например, содержащихся в фекалиях) и различными формами азота. С другой стороны, в ОМЧ входят как опасные бактерии (например, высокопатогенный штамм кишечной палочки Escherіchіa colі), так и практически безвредные и повсеместно встречаемые сенные палочки (Bacillus subtillis).

Группу ОКБ формируют бактерии семейства Enterobacteriacea (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella). Многие представители этой группы относятся к нормальной микрофлоре желудка, поэтому превышение ОКБ может говорить о возможном фекальном загрязнении, связанном с деятельностью человека. Однако в данной группе могут встречаться и свободноживущие микробы, которые не представляют опасности для здоровья.

ТКБ – более достоверный индикатор загрязнения продуктами жизнедеятельности. Этот показатель свидетельствует о свежем фекальном загрязнении. В большинстве случаев в этой группе обнаруживается кишечная палочка Escherіchіa colі.

Колифаги являются вирусами палочки Escherichia coli и рассматриваются эпидемиологами как более чувствительный метод определения загрязнения жидкости микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы более устойчивы к окружающей среде, чем бактерии, в которых они обитают, поэтому этот показатель качества служит достоверной меткой давнего фекального загрязнения. Содержание колифагов свидетельствует о наличии опасных для человека энтеровирусов в воде.

Рекомендуется проводить исследование этой характеристики в случае, если ранее источник не был проверен, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения воды.

Спорообразующие клостридии (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani) являются дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения. Клостридии встречаются в кишечнике, однако при попадании в организм в большом количестве могут вызывать пищевые отравления и смертельные заболевания, в том числе, ботулизм. В отличие от относительно неустойчивых ОКБ и ТКБ, споры клостридий могут сохраняться долгое время, поэтому этот микробиологический показатель, как и колифаги, свидетельствует о наличии давнего загрязнения. Относительно высокая устойчивость позволяет использовать споры в качестве индикатора эффективности проведения водоподготовки (хлорирования, озонирования и т.п.).

Определение этого микробиологического показателя качества воды рекомендуется проводить при наличии посторонних запахов и образовании чёрного налёта на трубах, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения жидкости.

Pseudomonas aeruginosa – распространённый организм, который встречается практически во всех средах, в т. ч. входит в состав микрофлоры кожи. Однако при снижении иммунитета человека и высоком содержании в воде синегнойная палочка может вызывать серьёзные заболевания, поражая лёгкие и почки и приводя к сепсису. Присутствие Pseudomonas aeruginosa в бассейне или ванне является основанием для полной замены содержимого резервуара. Особенность синегнойной палочки – её чрезвычайная устойчивость к нагреванию, дезинфицирующим средствам и антибиотикам.

Staphylococcus aureus – тесно связанная с человеком бактерия, которая в основном образует колонии на коже, половых органах, респираторном и желудочно-кишечном трактах. Как и синегнойная палочка, золотистый стафилококк встречается у здоровых людей, однако может вызвать развитие болезни при ослаблении иммунитета.

В действующих нормативных документах не прописаны конкретные возбудители кишечных инфекций. В эту группу входят микроорганизмы, заражение которыми происходит через жидкие среды (Escherichia, Shigella, Vibrio, Salmonella). Процесс определения этого параметра трудоёмок и требует специальной квалификации микробиолога.

Развитие и удешевление технологий и новых методов приводит, с одной стороны, к расширению контролируемых параметров, с другой, к выбору более конкретных микроорганизмов-показателей. Например, руководство ВОЗ рекомендует использовать в качестве индикатора фекального загрязнения наличие кишечной палочки (Escherіchіa colі), а не ОКБ и ТКБ. В странах ЕС помимо палочки определяют наличие энтерококков – специфичной группы микроорганизмов обитателей кишечника человека. Ниже приведены группы микроорганизмов, которые имеют индикаторное значение при оценке микробиологического качества воды.

Enterococcus spp. – широкая группа микроорганизмов, проживающая в кишечнике человека. Наряду с золотистым стафилококком энтерококки являются причиной внутрибольничных инфекций, вызывают у человека (менингит, эндокардит). Ввиду более высокой устойчивости этих микроорганизмов к засолению и температуре, по сравнению с ТКБ, энтерококки – более надежный индикатор фекального загрязнения морей и солёных озёр. Согласно нормативу ЕС, эта группа не должна обнаруживаться в 250 мл. Согласно законодательству США, при превышении содержания Enterococcus spp. 35 КОЕ / 100 мл вводится запрет на купание людей.

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов. В неё входят Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые вызывают оппортунистические заболевания, в т. ч. грибковые заболевания кожи и молочницу. Другие организмы-микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillus niger) усиливают аллергические реакции, а иногда вызывают их. Особенно опасны плесневые грибы (Penicillium spp., Aspergillus spp., Fusariam spp., Alternaria spp. and Claviceps spp), образующие канцерогенные микотоксины (патулин, афлотоксин). Исследователи из Европейского союза пришли к выводу, что водопроводная вода не является распространителем микотоксинов, однако в стоячих источниках (например, накопительных резервуарах) могут создаться условия для благоприятного развития грибов. В некоторых странах ЕС содержание грибов строго регламентируется, например, в Швеции в питьевой воде их не может быть более 100 КОЕ / 100 мл.

Микроорганизмы, содержащие зелёный пигмент хлорофилл – обитатели богатых питательными элементами стоячих водоемов. Сами микроорганизмы не заражают человека, но синтезируют и выделяют в среду цианотоксины, вызывающие поражение внутренних органов млекопитающих: гепатотоксины (Microcystis, Anabaena, Oscillatoria, Nodularia, Nostoc, Cylindrospermopsis и Umezakia), нейротоксины (Aphanizomenon и Oscilatoria), почечные токсины (Cylindroapermopsis raciborski).

Таким образом, микробиологические показатели качества воды отражают несколько важных показателей:

Общее загрязнение микроорганизмами источника воды (ОМЧ).
Наличие фекального загрязнения и продуктов жизнедеятельности (ОКБ, ТКБ, колифаги, сульфитредукторы, энтерококки).
Возможное наличие энтеровирусов (колифаги).
Наличие потенциально опасных микроорганизмов (золотистый стафилококк, синегнойная палочка, условно-патогенные дрожжи, энтерококки, сульфитредукторы).
Наличие потенциальных продуцентов микотоксинов и цианотоксинов (грибы и цианобактерии).
Наличие патогенных микроорганизмов (Shigella, Vibrio, Salmonella).

источник

При этом методе анализа воды определенное количество воды пропускается через специальную мембрану с размером пор порядка 0.45 мкм. В результате, на поверхности мембраны остаются все находящиеся в воде бактерии. После чего мембрану с бактериями помещают на определенное время в специальную питательную среду при температуре 30-37 оС. Во время этого периода, называемого инкубационным, бактерии получают возможность размножиться и образовать хорошо различимые колонии, которые уже легко поддаются подсчету.

В результате можно наблюдать такую: Или даже такую картину:

Так как такой метод анализа воды предполагает только определение общего числа колонии — образующих бактерий разных типов, то по его результатам нельзя однозначно судить о присутствии в воде патогенных микробов. Однако, высокое микробное число свидетельствует об общей бактериологической загрязненности воды и о высокой вероятности наличия патогенных организмов.

При анализе воды надо контролировать не только содержание токсичных химических веществ, но и количество микроорганизмов, характеризующих бактериологическое загрязнение питьевой воды ОМЧ-общее микробное число.В воде централизованного водоснабжения это число не должно превышать 50 КОЕ/мл, а в колодцах, скважинах — не более 100 КОЕ/мл

Санитарно-микробиологическос исследование воды проводится в плановом
порядке с целью текущего надзора, а также по специальным эпидемиологичес-
ким показаниям. Основными объектами такого исследования являются:

— питьевая вода центрального водоснабжения (водопроводная вода);

— питьевая вода нецентрализованного водоснабжения;

— вода поверхностных и подземных водоисточников;

— вода прибрежных зон морей;

— вода плавательных бассейнов.

Основными показателями оценки микробиологического состояния питьевой воды согласно действующим нормативным документам являются:

1. Общее микробное число (ОМЧ) — количество мезофильных бактерий в 1 мл волы.

2. Содержание БГКП свидетельствующих о вероятном фекальном загрязнении воды:

Коли титр— наименьший объем воды (в мл), в котором обнаружена хотя бы одна живая
микробная клетка, относящаяся к БГКП.
Индекс БГКП— количество БГКП в 1 л воды.

3. Количество спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.

4. Число колифагов в 100 мл воды.

Определение ОМЧ позволяет оценить уровень микробиологического загрязнения питьевой воды. Этот показатель является незаменимым для срочного обнаружения массивного микробного загрязнения.

Общее микробное число — это число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать на питательном агаре при гемперазуре 37 °С и течение 24 ч колонии, видимые при двукратном увеличении.

При определении общего микробного числа 1мл исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри и заливают 10-12 мл теплого (44 °С) расплавленного питательного агара. Среду аккуратно перемешивают с водой, равномерно и
без пузырьков воздуха распределяя по дну чашки, после чего закрывают крышкой и оставляют до застывания. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 часов. Подсчитывают общее количество колоний, выросших в обеих чашках, и определяют среднее значение. Окончательный результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой воды. В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ

Определение БГКП
При этом определяют общие колиформные бактерии — ОКБ и термотолерантные колиформные бактерии — ТКБ .

ОКБ – грамамотрицатсльные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 48 часов. ТКБ входят в число ОКБ, облажают их признаками, но ферментирую при 44°С.Для определения энтеробактерий – метод мебранных фильтров или титрационный.

Микробное число — основными критериями оценки микробиологического состояния питьевой воды, исходя из действующих нормативных документов, является ОМЧ (общее микробное число), которое характеризует количество аэробных и анаэробных бактерий в одном миллилитре воды, образующихся за сутки при температуре 37 градусов, в питательной среде. Данный показатель является фактически незаменимым для быстрого обнаружения массового микробного загрязнения.

Для определения общего микробного числа один миллилитр исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают 10-15 мл тёплого (около 44 °С) питательного агара в расплавленном виде. Среду аккуратно смешивают с водой, равномерно и без воздушных пузырьков воздуха распределяют по дну чашки, после этого закрывают крышкой и оставляют в чашке Петри до застывания. Тоже самое проделывают в другой чашке. Посев в термостате инкубируют при температуре 37 °С в течение суток. Затем при двукратном увеличении под микроскопом подсчитывают общее количество колоний, выросших в двух чашках, и определяют среднее значение. В 1 мл питьевой воды не должно быть более 50 КОЕ.

Вернуться в категорию: Болезни

В результате можно наблюдать такую: Или даже такую картину:

— питьевая вода центрального водоснабжения (водопроводная вода);

— питьевая вода нецентрализованного водоснабжения;

— вода поверхностных и подземных водоисточников;

— вода прибрежных зон морей;

— вода плавательных бассейнов.

1. Общее микробное число (ОМЧ) — количество мезофильных бактерий в 1 мл волы.

2. Содержание БГКП свидетельствующих о вероятном фекальном загрязнении воды:

3. Количество спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.

4. Число колифагов в 100 мл воды.

Данный показатель является фактически незаменимым для быстрого обнаружения массового микробного загрязнения.

Вернуться в категорию: Болезни

(основной метод)

Метод основан на фильтрации определенного объема воды (300мл) через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциально-диагностической среде с лактозой (Эндо) и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим признакам.

Мембранные фильтры подготовленные к анализу (кипячёные или стерилизованные другим способом), помещают стерильным пинцетом в воронку фильтровального аппарата. В воронку прибора наливают отмеренный объем воды и создают вакуум. После фильтрования фильтр снимают и, не переворачивая, кладут на поверхность питательной среды Эндо.

На одну чашку можно поместить 3 фильтра. При исследовании питьевой воды фильтруют 3 объема по 100 мл. при анализе воды неизвестного качества целесообразно фильтровать другие объемы воды для получения изолированных колоний на фильтре (10,40, 100 и 150 мл).

Чашки с фильтрами инкубируют вверх дном в термостате при t 37оС в течение 24 часов.

Если на фильтрах нет роста или выросли нетипичные плёнчатые, плесневые, расплывчатые колонии, выдают отрицательный результат. ОКБ и ТКБ в 100 мл исследованной воды отсутствуют.

При росте на фильтрах типичных изолированных лактозоположительных (темно-красных с отпечатками на обратной стороне фильтра) колоний, подсчитывают их число и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.

-проводят микроскопию мазков из 3-4 колоний, окрашенных по Граму (учитывают грамотрицательные);

-определяют наличие оксидазы (учитывают оксидазоотрицательные, т.к. оксидазоположительные грамотрицательные палочки не относятся к энтеробактериям, а могут быть, например, псевдомонадами);

-определяют ферментацию лактозы до кислоты и газа при температуре 37оС, что важно для слабоокрашенных колоний и отношения их к ОКБ, и температуре 44± 0,5оС, чтобы решить вопрос об их принадлежности к ТКБ.

Постановка оксидазного теста

На бумагу, смоченную 1% спиртовым раствором α-нафтола и 1% водным раствором диметилфенилендиамина, наносят платиновой петлей или стеклянной палочкой часть окрашенной колонии. реакцию считают положительной, если в течение 1 минуты, максимум 4-х появляется синее или фиолетовое окрашивание. Оксидазоположительные колонии не учитывают и дальнейшему исследованию не подвергают.

Можно переносить фильтр с колониями на бумагу смоченную реактивом. Можно использовать готовые бумажные системы (СИБы), смоченные дистиллированной водой.

На способность ферментировать лактозу испытывают части колоний грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий. При этом используется полужидкая среда с лактозой и индикатором рН. Посев производится уколом до дна в 2 пробирки. Одна инкубируется при температуре 37±1оС 24-48 часов для подтверждения отношения к ОКБ, другая при температуре 44± 0,5оС 24 часа, возможен учет через 4-6 часов, для подтверждения наличия ТКБ.

При наложении колоний на фильтре, производится их рассев, затем полученные изолированные колонии идентифицируются. Колонии учитывают как ОКБ – если они красные на Эндо, содержат грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, разлагающие лактозу при температуре 37 оС до кислоты и газа. Колонии учитывают как ТКБ, если они содержат грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, ферментирующие лактозу при температуре 44 оС до кислоты и газа (схема № 2 ).

Дата публикования: 2014-11-02; Прочитано: 1811 | Нарушение авторского права страницы

studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2018 год.(0.001 с)…

В результате можно наблюдать такую: Или даже такую картину:

— питьевая вода центрального водоснабжения (водопроводная вода);

— питьевая вода нецентрализованного водоснабжения;

— вода поверхностных и подземных водоисточников;

— вода прибрежных зон морей;

— вода плавательных бассейнов.

1. Общее микробное число (ОМЧ) — количество мезофильных бактерий в 1 мл волы.

2. Содержание БГКП свидетельствующих о вероятном фекальном загрязнении воды:

3. Количество спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.

4. Число колифагов в 100 мл воды.

Тоже самое проделывают в другой чашке. Посев в термостате инкубируют при температуре 37 °С в течение суток. Затем при двукратном увеличении под микроскопом подсчитывают общее количество колоний, выросших в двух чашках, и определяют среднее значение. В 1 мл питьевой воды не должно быть более 50 КОЕ.

Вернуться в категорию: Болезни

Метод основан на накоплении бактерий после посева определённых объёмов воды в жидкие питательные среды, с последующим пересевом на дифференциальную плотную среду с лактозой и идентификации колоний по культуральным и биохимическим тестам.

При исследовании питьевой воды качественым методом засевают три объёма по 100 см3. При исследовании воды с цельк| количественного определения ОКБ и ТКБ (повторный анализ) засевают соответственно 1,10 и 100 см3 — по три объёма каждой серии.

Посевы 10 и 100 см3 воды проводят соответственно в 1 и 10 см3 среды накопления — концентрированной ЛПС без индикатора. Посев 1 см3 пробы проводят в 10 см3 ЛПС обычной концентрации. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 ч. Через 24 ч проводят предварительную оценку посевов в среде накопления. Из ёмкостей, где отмечено наличие роста (помутнение) и образование газа, материал высевают бактериологической петлёй на сектора среды Эндо для получения изолированных колоний. Ёмкости без видимых признаков роста и образования газа оставляют в термостате до 48 ч и ещё раз просматривают для окончательной оценки.

Результаты посевов без признаков роста считают отрицательными, и дальнейшему изучению они не подлежат. Из ёмкостей, где отмечено помутнение и делают высев на сектора среды Эндо. Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре 37 °С 18—20 ч. При появлении помутнения, образовании газа в среде накопления и росте на среде Эндо колоний, типичных для лактозоположительных бактерий: тёмно-красных или красных, с металлическим блеском или без него, выпуклых с красным центром и отпечатком на питательной среде, дают положительное заключение о присутствии ОКБ в данном объёме пробы.

Наличие ОКБ необходимо подтвердить в следующих случаях:

ü в среде накопления отмечено только помутнение;

ü принадлежность к лактозоположительным колониям вызывает сомнение.

Для подтверждения на присутствие ОКБ выполняют следующие действия:

1. проверяют наличие отпечатка на среде Эндо после снятия петлёй подозрительной колонии;

2. выполняют оксидазный тест;

3. проверяют принадлежность к группе по Граму;

4. подтверждают способность к газообразованию при посеве 1—2 изолированных колоний всех типов с каждого сектора в среду подтверждения (ЛПС с индикатором) с последующей инкубацией посевов при температуре 37 °С в течение 24—48 ч.

При отсутствии изолированных колоний проводят рассев на среду Эндо общепринятыми способами. Отрицательное заключение дают, если:

ü в среде накопления нет признаков роста;

ü на секторах среды Эндо нет роста;

ü на секторах среды Эндо выросли нехарактерные для колиформных бактерий колонии (прозрачные, с неровными краями, расплывчатые);

ü все колонии оказались оксидазоположительными;

ü все колонии оказались грамположительными;

ü в подтверждающем тесте на среде ЛПС с индикатором не отмечено газообразования.

Для определения ТКБ работают с секторами среды Эндо, где выросли типичные лактоза+ колонии. Делают посев двух-трёх изолированных колоний каждого типа из каждого сектора в пробирки с любой из лактозных сред накопления, инкубируют при температуре 44 °С в течение суток. При образовании газа в лактозной среде накопления, росте на среде Эндо лактозоположительных бактерий и выявлении способности к ферментации лактозы до кислоты и газа в подтверждающих лактозных средах при температуре 44 °С в течение 24 ч дают положительное заключение о наличии в этом объёме воды ТКБ. При качественном исследовании (при исследовании трёх объёмов по 100 см3 при обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из трёх объёмов делают запись: «Обнаружены ОКБ и ТБК в 100 см3».

При исследовании количественным методом определяют НВЧ, ОКБ и ТКБ по специальным таблицам. При отрицательных результатах исследования на наличие ОКБ и ТКБ во всех исследованных объёмах выдают заключение: «Не обнаружены ОКБ и ТКБ в 100 см3».

Дата добавления: 2016-03-25; просмотров: 477 | Нарушение авторских прав

I. Методы изучения общественного здоровья
Message Driven Beans (MDB), жизненный цикл компонентов. Особенности применения и функционирования, реализующие методы (примеры)
Активные социально-психологические методы и их характеристика
Альтернативные упражнения и методы
Аппаратные методы обследования кожи
Б1.Б.8 Методы оптимальных решений
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ
Безвибрационные методы формования бетонных и железобетонных изделий. Центрифугирование, литьевая технология, вакуумирование, нагнетание, экструзия, торкретирование
Биохимические и молекулярно-биологические методы диагностики
В ГОСТ Р 51871-2002 приведены методы оценки эффективности
В-50 Система управления социальной работой: структура, функции, методы
В. Какие возможности дают экономисту следующие методы?

источник

Цель работы: изучение методов оценки санитарнобактериологического состояния питьевой воды и воды из естественных водоемов.

Вода, используемая на предприятиях пищевой промышленности, должна отвечать требованиям, предъявляемым к питьевой воде действующими нормативными документами. Безопасность воды в эпидемиологическом отношении определяют по общему числу микроорганизмов и количеству бактерий группы кишечных палочек в ее определенном объеме.

Качество воды централизованных систем питьевого водоснабжения определяют в соответствии с санитарными правилами и нормами. Питьевая вода должна быть безопасна в эпидемиологическом и радиационном отношениях, безопасна по химическому составу и иметь благоприятные органолептические свойства (табл. 12.1).

Таблица 12.1. Безопасность питьевой воды в эпидемиологическом отношении (по микробиологическим и паразитологическим показателям) СанПиН 2.1.4.1074-01

Общее микробное число (ОМЧ)

Термотолерантные колиформные бактерии

Число бактерий в 100 см 3

Общие колиформные бактерии

Споры сульфитредуцирующих бактерий

* БОЕ — бляшкообразующие единицы.

12.1. Отбор проб и подготовка их к анализу

Воду для санитарно-бактериологического контроля отбирают в количестве 500 см 3 в бутылки, предварительно простерилизованные в бумажных пакетах, с ватно-марлевой пробкой, покрытой сверху бумажным колпачком.

Перед отбором пробы кран или край трубы обжигают зажженным ватным тампоном, пропитанным спиртом. Открывают кран и в течение 10-15 мин воду спускают, затем производят отбор пробы. Вода подлежит анализу не позже чем через 2 ч после отбора.

Пробы воды из открытых водоемов — колодцев, бассейнов, рек, озер — отбирают с помощью батометров, представляющих собой металлический каркас с массивным свинцовым дном — грузилом. В металлический каркас вставлена бутылка. Батометр погружают на заданную глубину и открывают бутылку, потягивая за веревку, привязанную к пробке. После наполнения бутылки батометр извлекают и закрывают ее стерильной пробкой.

Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором, так как под действием хлора микробы в воде погибают. В качестве дехлоратора используют серноватистый натрий из расчета 10 мг на 500 см исследуемой воды.

К отобранным пробам воды прилагают сопроводительный документ с указанием соответствующих данных. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре от 4 до 10 °С.

12.2. Определение общего микробного числа воды

Общее микробное число (ОМЧ) — это количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, образующих колонии на мясопептонном агаре при посеве 1 см 3 воды с последующей инкубацией посевов при температуре 37±0,5 °С в течение 48 ч. ОМЧ должно быть не более 50 КОЕ/см 3 .

В зависимости от степени предполагаемого загрязнения производят посев не менее двух различных объемов воды, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний. Водопроводную и артезианскую воду засевают в неразведенном виде по 1 см 3 . При бактериологическом исследовании загрязненных вод делают посевы разведенной воды. Разведения готовят так, как указано в разделе 8.3.

Из исследуемого образца и из пробирок с его разведениями в соответствии со степенью предполагаемого микробного загрязнения отбирают по 1 см 3 , вносят в стерильные чашки Петри и заливают 10-12 см расплавленного и остуженного до температуры 45 °С мясопептонного агара. Круговыми движениями руки, вращая чашки по горизонтальной поверхности стола, распределяют их содержимое равномерным слоем по всей площади дна. После застывания агара чашки с посевами помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С. После инкубации подсчитывают число выросших колоний.

Определение микробного числа указанным методом позволяет выявить лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы.

12.3. Определение содержания колиформных бактерий в воде

С эпидемиологической точки зрения особенно важным является обнаружение в воде патогенных микроорганизмов — возбудителей кишечных инфекций (брюшного тифа, дизентерии, холеры и др.) Однако в связи с большой трудностью обнаружения патогенных микроорганизмов при бактериологических анализах ограничиваются определением так называемых санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ). К санитарно-показательным относят микроорганизмы, постоянно находящиеся в естественных полостях человека или животных. Присутствие СПМ в различных объектах внешней среды является индикатором их загрязнения человеком. Чем больше СПМ во внешней среде, тем более вероятным становится присутствие специфических возбудителей инфекционных заболеваний.

В качестве СПМ наибольшее значение имеют бактерии группы кишечных палочек (БГКП). К группе кишечных палочек относят колиформные бактерии родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.

При определении количества СПМ в воде используют следующие характеристики:

• коли-титр — наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка. Для питьевой воды, прошедшей очистку, титр кишечной палочки должен быть не менее 300 см 3 ;

• коли-индекс — количество кишечных палочек в 1 дм 3 воды. Коли-индекс для питьевой воды должен быть не более 3.

Колиформные бактерии определяют в воде методом мембранных фильтров или бродильным методом.

Бродильный метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды, инкубации

посевов при температуре 37 °С в средах накопления с последующим высевом на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1 дм 3 воды.

При исследовании воды централизованного водоснабжения исследуемый материал дважды засевают в три объема: 100, 10 и 1 см 3 . Для исследования речной, озерной, прудовой воды готовят десятикратные разведения 1:10, 1:100, 1:1000 и засевают еще 10 см 3 и 1 см 3 без разведения. Посев воды производят в бродильные сосуды (колбы, бутылки, пробирки с поплавками), заполненные глюкозопептонной средой Эйкмана. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 24 ч.

Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:

а) при отсутствии газообразования и изменения цвета среды дают отрицательный ответ на наличие БГКП в исследуемом объеме воды, дающим право закончить исследование через 24 ч;

б) при образовании кислоты и газа производится высев материала из бродильных сосудов на среду Эндо. Высев делается бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. После инкубации посевы просматривают. Отсутствие на среде Эндо характерных для кишечных палочек колоний дает основание на выдачу отрицательного ответа и окончание исследования;

в) при обнаружении на среде Эндо лактозоположительных темно-красных колоний, с металлическим блеском или без него, необходимо установить принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. С этой целью производится микроскопирование препарата из колоний и постановка оксидазного теста.

Оксидазный тест предложен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonodaceae и других водных сапрофитов, которые, в отличие от кишечных бактерий, вырабатывают фермент оксидазу.

Для постановки оксидазного теста со среды Эндо снимают петлей по 2-3 колонии каждого типа. Микробную массу наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную специальным реактивом (30 г α-д-нафтола растворяют в 2,5 см 3 этанола, прибавляют 7,5 см 3 дистиллированной воды и 40 мг диметил-парафенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением).

При отрицательном результате оксидазного теста бумага при контакте с колонией цвета не меняет. Если же бумага синеет в течение 1 мин при контакте с колонией, то оксидазный тест считают положительным.

Наличие в препарате грамотрицательных неспорообразующих палочек, не обладающих оксидазной активностью, позволяет немедленно дать ответ о наличии в воде БГКП.

При обнаружении на среде Эндо розовых и бесцветных колоний ведут подсчет и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 3-4 ч. При образовании кислоты (изменение цвета среды) и газа, накапливающегося в поплавке, результат считается положительным, при отсутствии кислото- и газообразования — отрицательным.

После проведения анализа записывают в лабораторный журнал окончательные результаты (положительные и отрицательные) по каждому засеянному объему и определяют коли-титр и коли-индекс.

Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на среде Эндо при температуре 37 °С, дифференцированием выросших колоний и подсчетом количества БГКП в 1 см 3 воды.

Подготовка мембранных фильтров. Для фильтрования воды отбирают мембранные фильтры № 3, помещают их в подогретую до температуры 80 °С дистиллированную воду и ставят на небольшой огонь для кипячения. Кипячение проводят трижды по 10 мин. После первого и второго кипячения воду сливают, а после третьего фильтры оставляют в воде до употребления.

Подготовка фильтровального аппарата. Фильтровальный аппарат стерилизуют в автоклаве или протирают ватным тампоном, смоченным в спирте, и обжигают в целях стерилизации. На столик фильтровального аппарата стерильным пинцетом помещают мембранный фильтр. Во избежание повреждения фильтра под него подкладывают кружок стерильной фильтровальной бумаги. На фильтровальный столик с положенными на него фильтрами устанавливают и закрепляют верхнюю часть прибора — воронку (рис. 12.1).

Рис. 12.1. Определение количества микроорганизмов методом мембранных фильтров

Фильтрование воды и выращивание микроорганизмов. В воронку фильтровального аппарата стерильно наливают исследуемый объем воды и с помощью водоструйного насоса создают вакуум в приемном сосуде. При анализе питьевой воды, поступающей в водопроводную сеть, необходимо брать объем не менее 333 см 3 . По окончании фильтрования мембранный фильтр профламбированным пинцетом переносят на поверхность питательной среды Эндо в чашки Петри. В настоящее время выпускают фильтры, пропитанные соответствующими питательными средами. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 ч.

Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:

а) отсутствие микробного роста на фильтрах или обнаружение на них колоний, не характерных для БГКП, позволяет закончить исследования на этом этапе анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в анализируемом объеме воды;

б) при обнаружении на фильтре колоний, характерных для БГКП, исследование продолжают. Из нескольких колоний каждого типа готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Отсутствие в мазках мелких грамотрицательных неспороносных палочек является основанием для прекращения анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды;

в) при наличии в мазках грамотрицательных палочек, морфологически сходных с кишечными, ставится оксидазная проба. При обнаружении на мембранных фильтрах однотипных лактозоположительных колоний (темно-красных с металлическим блеском или без него), не вырабатывающих оксидазы, анализ воды на этом этапе заканчивают и подсчитывают число выросших на мембранном фильтре колоний кишечных палочек. Результат выражают в виде коли- индекса в пересчете на 1 дм 3 воды;

г) при обнаружении на мембранных фильтрах розовых и бесцветных колоний подсчитывают их число и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. После инкубации в течение 3-4 ч при температуре 37 °С отмечают изменение цвета среды за счет образования кислоты и накопления газа в поплавке. В этом случае результат считается положительным. Если изменений в среде нет, то дают отрицательный результат на присутствие БГКП.

Пример определения колииндекса: профильтровано три объема воды по 100 см 3 . На первом и втором фильтрах выросло по три колонии, на третьем — девять колоний. Всего выросло пятнадцать колоний. Таким образом, колииндекс исследуемого образца воды равен: (1000 х 15):300 = 50. Колииндекс переводится в колититр следующим образом: 1000:50 = 20.

Контрольные вопросы

1. Какие Вы знаете показатели эпидемиологической безопасности питьевой воды?

2. Что такое общее микробное число, колититр и колииндекс?

3. Какие роды микроорганизмов входят в БГКП?

4. Какими методами определяют колиформные бактерии?

5. Каковы основные критерии, по которым устанавливают присутствие колиформных бактерий в питьевой воде?

6. С какой целью проводят тест на оксидазу?

источник

Методы санитарно-бактериологического анализа для полевых условий

Water. Methods of sanitary-bacteriological analysis for field conditions

Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Обществом с ограниченной ответственностью «Протектор» совместно с Федеральным государственным бюджетным учреждением «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им.А.Н.Сысина» Министерства здравоохранения Российской Федерации и Федеральным бюджетным учреждением науки «Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии» Роспотребнадзора

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии, Техническим комитетом по стандартизации ТК 343 «Качество воды»

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 20 октября 2014 г. N 71 П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Беларусь

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 11 ноября 2014 г. N 1537 межгосударственный стандарт ГОСТ 24849-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 ВЗАМЕН ГОСТ 24849-81

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Настоящий стандарт распространяется на воду, используемую для питьевых и хозяйственно-бытовых целей, воду источников водоснабжения и устанавливает методы санитарно-бактериологического анализа, в том числе ускоренные и сигнальные, по определению содержания колиформных бактерий, бактерий Escherichia coli (далее — Е. coli), бактерий энтерококков и общего числа микроорганизмов (ОМЧ), проводимые в полевых условиях, когда доставка проб воды в стационарную лабораторию невозможна в течение 6 ч после отбора.

Санитарно-бактериологический анализ воды в полевых условиях проводят в передвижной лаборатории или с использованием комплекта оборудования переносной лаборатории. Выбор метода анализа устанавливают в зависимости от цели анализа и оснащенности лаборатории.

Методы настоящего стандарта не применяют для проведения производственного контроля воды централизованных систем питьевого водоснабжения.

Примечание — Персонал, использующий настоящий стандарт, должен иметь подготовку по отбору проб и проведению бактериологических методов исследования воды различного назначения.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 171-81 Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия*
_______________
* В Российской Федерации применяют также ГОСТ Р 54731-2011 «Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия»

ГОСТ 857-95 Кислота соляная синтетическая техническая. Технические условия

ГОСТ 975-88 Глюкоза кристаллическая гидратная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ISO 1042-83, ISO 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 1820-2001 Спички. Технические условия

ГОСТ 2761-84 Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения. Гигиенические, технические требования и правила выбора

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4209-77 Реактивы. Магний хлористый 6-водный. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 6038-79 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9412-93 Марля медицинская. Общие технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия

ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25706-83 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования

ГОСТ 27068-86 Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ISO 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31861-2012 Вода. Общие требования к отбору проб

ГОСТ 31942-2012 (ISO 19458:2006) Вода. Отбор проб для микробиологического анализа

ГОСТ 31955-2012 (ISO 9308-1:2000) Вода питьевая. Обнаружение и количественный учет Escherichia coli и колиформных бактерий. Часть 1. Метод мембранной фильтрации

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 30813, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 полевые условия: Условия проведения санитарно-бактериологического посева и анализа проб воды вне стационарной лаборатории.

3.2 передвижная лаборатория: Средства (мобильного) передвижения и оснащения, предназначенные для проведения санитарно-бактериологического анализа воды в полевых условиях, монтируемые на специально для этого предназначенных передвижных транспортных средствах (железнодорожный подвижной состав, автомобили, суда), функционирующие при автономном режиме энергообеспечения.

3.3 переносная лаборатория: Комплект оборудования для проведения санитарно-бактериологического анализа воды в полевых условиях, который может перенести человек или группа лиц на значительное расстояние или можно перевезти на любом транспортном средстве, не предназначенном специально для этих целей.

3.4 общее микробное число: Число аэробных и факультативно анаэробных гетеротрофных микроорганизмов, использующих для питания органические вещества, обладающих свойством образовывать колонии на питательном агаре, при температуре (36±2)°С в течение 24 ч, видимые при двукратном увеличении.

3.5 колиформные бактерии: Грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, обладающие свойством образовывать колонии в аэробных условиях на селективной дифференциальной лактозной среде с образованием кислоты при температуре (36±2)°С в течение (24±3) ч.

3.6 бактерии семейства Enterobacteriaceae: Грамотрицательные, оксидазоотрицательные, лактозоотрицательные бактерии, обладающие свойством образовывать колонии в аэробных условиях на селективной дифференциальной лактозной среде и способные ферментировать глюкозу с образованием кислоты и газа при (36±2)°С в течение (21±3) ч.

3.7 Esherichia coli: Колиформные бактерии, обладающие свойством ферментировать лактозу при температуре (44,0±1,0)°С в течение 24 ч с образованием кислоты и газа, а также продуцировать индол из триптофана в течение (21±3) ч.

[ГОСТ 30813-2002, статья 65]

3.8 энтерококки: Грамположительные, каталазоотрицательные, полиморфные, круглые или овальные с заостренными концами кокки, располагающиеся попарно или в коротких цепочках, обладающие свойством образовывать колонии на питательных средах, содержащих 0,04% азида натрия и 2,3,5 трифенилтетразолиум хлорид (ТТХ), способностью роста на питательной среде, содержащей 6,5% NaCl, и образующие характерные колонии на средах с эскулином.

3.9 ускоренные методы: Методы, позволяющие получить результаты в течение 24 ч.

3.10 сигнальные методы: Методы, позволяющие получить результаты только на основе качественной оценки.

3.11 сливной рост: Рост одной или нескольких колоний подвижных бактерий, распространившийся на всю поверхность питательной среды и не позволяющий точно подсчитать общее количество выросших колоний.

В настоящем стандарте применены следующие сокращения:

ОМЧ — общее число микроорганизмов;

КОЕ — колонии образующие единицы;

СИБ — система индикаторная бумажная;

ТСА — триптон-соевый агар неселективный;

ТЖА — триптон-желчный агар.

4.1 Общие требования к отбору проб — по ГОСТ 31861.

4.3 Если проба воды не может быть исследована в течение 2 ч после отбора, допускается хранить ее в чистых продезинфицированных контейнерах не более 6 ч до начала испытаний при температуре от 2°С до 8°С, предохраняя от замерзания, действия прямых солнечных лучей и перегрева.

4.4 Если пробы воды отбирают после обеззараживания, нейтрализацию остаточного количества дезинфектанта проводят по ГОСТ 31942.

4.5 Документирование процедуры отбора проб отражают в акте отбора проб с указанием всех сведений, приведенных в ГОСТ 31942. При отборе проб воды из источников водоснабжения в акте дополнительно указывают погодные условия и температуру воды.

5.1 Средства комплектования передвижной лаборатории

Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности взвешивания ±0,001 г.

Весы лабораторные механические (аптечные равноплечные) с пределами допускаемой погрешности при полной нагрузке ±10 мг.

Весы лабораторные механические (аптечные равноплечные) с пределами допускаемой погрешности при полной нагрузке ±50 мг.

РН-метр, обеспечивающий измерение водородного показателя рН с пределами допускаемой абсолютной погрешности ±0,1 единиц рН .

Автоматические дозаторы бактериологические или пипетки однократного или многоразового применения 1-1-2-1, 1-1-2-10 по ГОСТ 29227.

Стерилизатор паровой с режимом стерилизации от (105+3)°С до (134+3)°С при рабочем давлении от 19 до 230 кПа .

Стерилизатор суховоздушный, обеспечивающий поддержание температуры 200°С, с пределами абсолютной допускаемой погрешности ±3°С .

Термостат для инкубации посевов, обеспечивающий поддержание температуры 36°С, с пределами абсолютной допускаемой погрешности измерения температуры ±2°С.

Термостат для инкубации посевов, обеспечивающий поддержание температуры 44°С, с пределами абсолютной допускаемой погрешности измерения температуры ±1°С.

Холодильник портативный, например автомобильный, поддерживающий температуру от 1°С до 10°С, или термоконтейнер с емкостями (например, для льда).

Аппарат для мембранной фильтрации под вакуумом с диаметром фильтрующей поверхности 37 или 47 мм.

Примечание — Допускается использовать одноразовые стерильные фильтровальные аппараты.

Устройство электрическое или ручное для создания разрежения.

Фильтры мембранные со средним диаметром пор 0,45 мкм и диаметром диска 35-37 мм или 45-47 мм, стерильные от производителя или простерилизованные и упакованные в лаборатории.

Емкости из нержавеющей стали или эмалированные с крышкой для стерилизации мембранных фильтров методом кипячения .

Лампа ультрафиолетовая с длиной волны 254 нм.

Примечание — При работе с ультрафиолетовой лампой используют защитные очки и перчатки, т.к. ультрафиолетовое облучение вызывает раздражение глаз и кожи.

Лампа бактерицидная.

Лупа по ГОСТ 25706 с увеличением 2 .

Устройство нагревательное для расплавления питательного агара и приготовления питательных сред из сухих препаратов .

Лабораторный пистолет для фламбирования.

Зажигалки или спички по ГОСТ 1820.

Емкости для отбора проб однократного или многократного применения вместимостью 500 см и другое оборудование, необходимое для отбора проб воды, приведенное в ГОСТ 31942.

Пробирки бактериологические одноразового или многоразового использования по ГОСТ 25336.

Штативы для пробирок.

Чашки (Петри) бактериологические одноразовые или стеклянные многократного применения по ГОСТ 23932.

Посуда мерная лабораторная стеклянная 2-го класса точности вместимостью 500 и 1000 см по ГОСТ 1770.

Пробки силиконовые, выдерживающие стерилизацию сухим жаром . Силиконовые колпачки многоразового использования.

Спиртовки стеклянные или металлические с подставкой по ГОСТ 25336.

Пинцеты по ГОСТ 21241.

Петли бактериологические.

Палочки стеклянные.

Ножницы.

Емкости стеклянные или эмалированные для приготовления сред .

Вата хлопчатобумажная гигроскопическая медицинская по ГОСТ 5556.

Марля медицинская по ГОСТ 9412.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Фломастер-маркер для маркировки посуды.

Контейнеры для хранения стерильной посуды.

Герметичные контейнеры или мешки для сбора и хранения отработанного материала.

Средства защиты (очки для защиты глаз от УФ-излучения, латексные перчатки, маски и шапочки одноразового использования).

Средство дезинфекционное, допущенное к применению в установленном порядке.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233 .

D-глюкоза по ГОСТ 6038.

Бриллиантовый зеленый (С Н N О ), с массовой долей основного вещества — не менее 98%.

Магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198.

Натрий серноватистокислый по ГОСТ 27068.

Бромтимоловый синий (C H Br О S), с массовой долей основного вещества — не менее 98% .

Натрия азид.

Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552.

Кислота соляная синтетическая техническая по ГОСТ 857.

Спирт этиловый ректификованный 96%-ный по ГОСТ 18300.

Жидкость горючая для спиртовок (например, спирт этиловый технический по ГОСТ 17299).

Агар микробиологический питательный по ГОСТ 17206 (сухой препарат или агар, приготовленный в стационарной лаборатории по приложению А и разлитый в емкости или пробирки).

Растворы для разведений, приготовленные по приложению А.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Полоски индикаторные бумажные для измерения рН .

Системы индикаторные бумажные для проведения оксидазного теста (диски или полоски).

Реактив для индольного теста.

Реактив Ковача.

Полоски реактивные бумажные для определения индола.

L-триптофан (C H N О ), с массовой долей основного вещества — не менее 98% .

2, 3, 5 — Трифенилтетразолиум хлорид (ТТХ), с массовой долей основного вещества — не менее 99,5% .

Гептадецилсульфат натрия (тергитол 7), с массовой долей основного вещества- не менее 98% .

Тетраметил п -фенилендиамин гидрохлорид (CH ) NC H N(CH ) ·2H CI или диметил- п — фенилендиамин дигидрохлорид (С Н N ·2НСl), с массовой долей основного вещества — не менее 99%.

-нафтол (С Н ОН) для приготовления оксидазного реактива при использовании диметил- п -фенилендиамин дигидрохлорида, с массовой долей основного вещества — не менее 98%.

пара -диметиламинобензальдегид ((CH ) NC H CHO), с массовой долей основного вещества — не менее 99,2%.

Экстракт дрожжевой, сухой или приготовленный из хлебопекарных прессованных дрожжей по ГОСТ 171.

Среда Эндо (сухой препарат) или приготовленная по приложению А или другая селективная дифференциальная лактозная среда (например, среда с тергитолом 7 по ГОСТ 31955 или приготовленная по приложению А).

Сухой препарат с индикатором ВР и глюкозой или полужидкая среда, приготовленная по приложению А, или готовые к использованию тест-системы, например СИБ-глюкоза.

Сухой препарат с индикатором ВР и лактозой или полужидкая среда с лактозой и триптофаном, приготовленная по приложению А, или готовые к использованию тест-системы, например СИБ-лактоза.

Энтерококкагар (сухой препарат) или приготовленный по приложению А или другая азидная среда с ТТХ (например, азидная среда Сланеца-Бертли по приложению А).

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805 .

Триптон — желчный агар (ТЖА).

Триптон — соевый агар неселективный (ТСА).

Готовые питательные среды для определения колиформных бактерий, Е. coli, энтерококков и ОМЧ сигнальными методами, поставляемые на коммерческой основе и снабженные сертификатом, выданным в установленном порядке.

Примечания

1 Допускается использовать оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды, диагностические препараты и системы идентификации с аналогичными характеристиками, разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке.

2 Комплект средств лаборатории формируется исследователем из приведенного перечня в зависимости от выбранного метода анализа.

4 Помещение передвижной лаборатории, в котором проводят посев воды, должно быть оборудовано бактерицидными лампами для соблюдения правил асептики, а также средствами для утилизации и обеззараживания отработанного материала в соответствии с установленными требованиями безопасности проведения работ.

5 При отсутствии автоклава или условий для кипячения отработанного материала лаборатория комплектуется специальными герметичными контейнерами или мешками для сбора и доставки отработанного материала в стационарную лабораторию с целью его последующей инактивации.

6 В случае возникновения нештатных ситуаций обеззараживание отработанного материала проводят с помощью дезинфекционных средств в концентрациях, эффективных по отношению к патогенным микроорганизмам семейства Enterobacteriaceae и разрешенных к использованию в установленном порядке.

5.2 Средства комплектования переносной лаборатории

Дозаторы автоматические или пипетки стерильные одноразового применения объемом 1 и 10 см .

Переносной термостат для инкубации посевов проб воды, обеспечивающий поддержание температуры 36°С. В зависимости от энергообеспечения, имеющегося на месте выполнения анализа, допускается использовать термоконтейнеры с нагревающими элементами.

Установка для мембранной фильтрации с отметкой объема воды 100 см для фильтрования под вакуумом с диаметром фильтрующей поверхности 35-37 или 47-50 мм и с приспособлением для создания разрежения (например, ручной вакуумный насос; шприцевые фильтрующие насадки, позволяющие фильтровать до 2 дм воды и т.п.).

Фильтры мембранные со средним диаметром пор 0,45 мкм и диаметром фильтрующей поверхности 35-37 мм или 47-50 мм стерильные от производителя или подготовленные и простерилизованные в стационарной лаборатории.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 стерильная, нарезанная кружочками диаметром немного большим, чем мембранный фильтр, упакованная в стерильную емкость или плотный пакет.

Пробирки бактериологические стерильные одноразового или многоразового применения.

Спиртовки стеклянные или металлические с подставкой по ГОСТ 25336.

Штатив для пробирок.

Лабораторный пистолет или другое оборудование для фламбирования.

Петля бактериологическая.

Лупа по ГОСТ 25706 с увеличением 2 .

Пинцеты по ГОСТ 21241.

Вата хлопчатобумажная гигроскопическая медицинская по ГОСТ 5556.

Емкости для отбора проб многоразового или одноразового использования вместимостью 500 см и другое оборудование, необходимое для отбора проб воды, приведенное в ГОСТ 31942.

Чашки Петри одноразового применения.

Питательный агар, приготовленный по приложению А в стационарной лаборатории, разлитый в емкости (например, пробирки), удобные для быстрого расплавления агара.

Чашки Петри с готовыми дифференциально-диагностическими и селективными питательными средами для определения колиформных бактерий и энтерококков, приготовленные в стационарной лаборатории (приложение А) и помещенные в пенал или специальные пакеты.

Готовые питательные среды для определения колиформных бактерий, Е. coli, энтерококков сигнальными методами, поставляемые на коммерческой основе и снабженные сертификатом, выданным в установленном порядке.

Пробирки с полужидкой средой с индикатором ВР и глюкозой или готовые тест-системы.

Реактивы для оксидазного теста: при работе с тетраметил-п-фенилендиамин гидрохлоридом — сухой препарат, при работе с диметил-п-фенилендиамин дигидрохлоридом — 1%-ные растворы, приготовленные по приложению А, или готовые бумажные индикаторные системы, заменяющие фильтровальную бумагу и реактивы для оксидазного теста.

Реактив Ковача или УФ лампа с длиной волны 254 нм.

Вода дистиллированная стерильная.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300.

Жидкость горючая для спиртовки по ГОСТ 17299.

Примечания

1 Комплектование лаборатории зависит от выбранного метода анализа.

2 Допускается использовать другое оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды, диагностические препараты и системы идентификации с аналогичными характеристиками, разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке.

3 Рекомендуется использовать переносные лаборатории промышленного производства для проведения бактериологического анализа в полевых условиях.

4 Используют только заранее стерилизованную посуду, расходные материалы, заранее приготовленные и разлитые питательные среды в условиях стационарной лаборатории или приобретенные на коммерческой основе, готовые к употреблению и снабженные сертификатом среды.

5 Посевы воды в полевых условиях проводят между пламенем двух спиртовок с целью обеспечения условий асептики.

5.3 Средства комплектования лаборатории для посева проб воды на месте отбора проб с последующей доставкой в стационарную лабораторию

Дозаторы автоматические или пипетки стерильные одноразового применения вместимостью 1 и 10 см .

Переносной термостат для инкубации посевов, обеспечивающий поддержание температуры 36°С, или термоконтейнер с нагревающими элементами.

Фильтры мембранные со средним диаметром пор 0,45 мкм и диаметром фильтрующей поверхности 35-37 или 47-50 мм, стерильные от производителя или подготовленные и простерилизованные в стационарной лаборатории.

Чашки Петри одноразового применения.

Лабораторный пистолет для фламбирования.

Вода дистиллированная стерильная.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300.

Жидкость горючая для спиртовки.

Спиртовки стеклянные или металлические с подставкой по ГОСТ 25336.

Пинцеты по ГОСТ 21241.

Вата хлопчатобумажная гигроскопическая медицинская по ГОСТ 5556.

Чашки Петри с готовыми питательными средами для определения колиформных бактерий и энтерококков, приготовленные в стационарной лаборатории по приложению А, помещенные в пенал или специальные пакеты, или готовые питательные подложки для определения ОМЧ, колиформных бактерий, Е. coli, или готовые питательные среды в чашках Петри, поставляемые на коммерческой основе и имеющие сертификат, выданный в установленном порядке.

6.1 Подготовка посуды

Для проведения анализа используют стерильную одноразовую посуду (чашки Петри, пипетки, пробирки, мерные емкости, емкости для отбора проб, в том числе с тиосульфатом натрия).

Допускается комплектовать лабораторию стерильной посудой многократного применения, подготовленной в стационарной лаборатории в соответствии с требованиями ГОСТ 31942. Стерилизованная посуда должна иметь маркировку с указанием даты стерилизации для последующего учета срока хранения.

Емкости для отбора проб питьевой воды, обеззараженной хлорированием или другими окислителями, должны быть стерилизованы с тиосульфатом натрия и соответствующим способом маркированы.

При невозможности комплектования передвижной лаборатории стерильными емкостями для отбора проб и посудой для всего объема анализа, допускается проводить в условиях передвижной лаборатории следующие операции:

— мытье, подготовку к стерилизации и стерилизацию лабораторной посуды в суховоздушном стерилизаторе в соответствии с требованиями ГОСТ 31942;

— обеззараживание отработанного материала полученного после санитарно-бактериологического анализа в паровом стерилизаторе при температуре (126±2)°С, или кипячением в течение 30 мин, или дезинфицирующими средствами в соответствии с инструкцией по их применению.

Сведения о проведении стерилизации и обеззараживания в условиях передвижной лаборатории вносят в журнал испытаний.

6.2 Приготовление питательных сред и реактивов

6.2.1 Приготовление питательных сред и реактивов проводят в стационарной лаборатории или полевых условиях в соответствии с требованиями ГОСТ 31955 и приложением А. Питательный агар как основу большинства плотных питательных сред готовят в соответствии с инструкцией производителя (А.1, приложение А).

6.2.2 Питательные среды, которые в соответствии с указанием производителя не требуют стерилизации автоклавированием, а также среды с коротким сроком хранения после розлива в чашки Петри, могут быть приготовлены непосредственно перед анализом. Такие среды готовят в эмалированной или стеклянной емкости или емкости из нержавеющей стали. Допускается использовать заранее приготовленные в стационарной лаборатории навески из сухого препарата и соответствующий объем стерильной дистиллированной воды. Навески сухого препарата при хранении должны быть защищены от воздействия влаги и света.

6.2.3 Сведения о приготовлении сред и реактивов в условиях передвижной лаборатории должны быть внесены в журнал испытаний.

Примечания

1 Подготовленные заранее стерильные емкости, питательные среды, лабораторная посуда, реактивы должны храниться в условиях, предусмотренных для каждого средства, среды и реактива с соблюдением условий стерильности и предельных сроков хранения. При этом емкости и пробирки с готовыми средами должны быть закрыты силиконовыми пробками и защищены колпачками из силикона или жароустойчивой бумаги. Чашки Петри с готовыми средами должны быть помещены в специальные пакеты или завернуты в плотную бумагу, защищающую среду от высыхания и воздействия света.

2 При вскрытии упаковок и емкостей, удалении пробок (крышек) непосредственно перед проведением анализа пробка (крышка) и края емкости не должны касаться посторонних поверхностей.

3 Операции по подготовке и проведению анализа выполняют чистыми и продезинфицированными руками (например, после обработки рук 70%-ным этиловым спиртом или дезинфицирующими салфетками для индивидуального пользования) или в стерильных перчатках.

6.3 Подготовка мембранных фильтров

Подготовку мембранных фильтров проводят в соответствии с рекомендациями производителя. Если производитель поставляет нестерильные фильтры, их стерилизуют до начала анализа. Целесообразно стерилизовать мембранные фильтры в условиях стационарной лаборатории. После стерилизации фильтры высушивают в асептических условиях и упаковывают стерильно в чашки Петри или стерильные пакеты. Срок хранения фильтров, стерилизованных в лаборатории, — 10 сут.

Перед началом проведения анализа стерильные сухие фильтры смачивают в стерильной дистиллированной воде, накладывая стерильным пинцетом отдельно каждый фильтр на поверхность воды, налитой в стерильную чашку Петри.

Допускается проводить стерилизацию мембранных фильтров в условиях передвижной лаборатории.

7.1 Определение колиформных бактерий и Е. coli

7.1.1 Определение колиформных бактерий ускоренным методом с использованием мембранной фильтрации

7.1.1.1 Проведение анализа

При анализе питьевой воды системы централизованного водоснабжения и подземных источников 1-го класса по ГОСТ 2761 анализируют 300 см воды, пропуская этот объем не менее чем через два мембранных фильтра.

При исследовании питьевой воды нецентрализованного водоснабжения и поверхностных источников водоснабжения анализируют не менее 100 см воды, пропуская ее не менее чем через три мембранных фильтра, например пробы воды 1,0, 10 и 100 см .

При фильтровании воды неизвестного качества целесообразно увеличивать количество фильтруемых объемов для получения изолированных колоний (например, выполняя посев по 1 см из 1-го и 2-го десятикратных разведений). При этом объем воды для посева выбран правильно, если на одном — двух мембранных фильтрах выросли изолированные колонии, среди которых не более 30 колоний относятся к числу колиформных бактерий.

Для фильтрования используют стерильные мембранные фильтры, подготовленные по 6.3. Отмеренные объемы воды фильтруют через мембранные фильтры с использованием аппарата для фильтрования и соблюдением процедуры по 6.4.

После фильтрования анализируемой воды мембранные фильтры размещают посевом вверх на одну из селективных дифференциальных питательных сред (например, на фуксин-сульфитную среду Эндо) (А.3, приложение А), разлитых в чашки Петри, добиваясь полного прилегания фильтров к среде без пузырьков воздуха. Вместо среды Эндо допускается использовать лактозный агар с тергитолом 7 (А.4, приложение А).

Примечание — Лактозный агар с тергитолом 7 допускается использовать только при исследовании воды, в которой фоновая посторонняя водная микрофлора не мешает росту изолированных колоний колиформных бактерий на фильтре.

На одну чашку допускается помещать несколько фильтров с условием, чтобы фильтры не соприкасались. Маркировку профильтрованного объема воды наносят под фильтром с наружной стороны дна чашки Петри.

Чашки с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (36±2)°С в течение 18-24 ч.

7.1.1.2 Учет результатов

После окончания инкубации посевов регистрируют в журнале испытаний отсутствие или наличие на мембранных фильтрах колоний микроорганизмов.

Учитывают в качестве лактозоположительных все выросшие на мембранных фильтрах характерные колонии независимо от их размера:

— на среде Эндо — с темно-красной окраской и металлическим блеском или без него, слизистые с красным центром и отпечатком на оборотной стороне фильтра;

— на среде с тергитолом 7 с желто-оранжевой, кирпично-красной окраской, иногда с ржаво-окрашенным центром, образующим желтую окраску в среде под мембраной (ГОСТ 31955).

Для подтверждения принадлежности колоний к колиформным бактериям проводят оксидазный тест одним из способов, указанных в приложении Б, с использованием реактива для оксидазного теста (А.5, приложение А). При этом исследованию подлежат только те мембранные фильтры, на которых выросло не более 30-50 изолированных характерных колоний.

При использовании способа 3 определения оксидазной активности проводят проверку всех (до 10) колоний или выборочно 3-4 колонии разной морфологии.

Если при выборочной проверке колоний каждого типа получают неодинаковые результаты, то число оксидазоотрицательных колоний рассчитывают по формуле (2), 7.1.1.4.

Выборочную проверку колоний не проводят, если оксидазный тест выполняют по способу 1 или 2. Оксидазную активность одновременно всех колоний на фильтре учитывают через 1-4 мин после контакта с реактивом, что исключает субъективную оценку результатов исследования.

Подсчитывают сумму (А) всех колоний лактозоположительных оксидазоотрицательных бактерий, подтвержденных как колиформные бактерии.

Результаты подсчета регистрируют в журнале испытаний.

7.1.1.3 С целью повышения надежности оценки эпидемической безопасности воды при отсутствии роста колиформных бактерий, но наличии роста лактозоотрицательных оксидазоотрицательных колоний разной морфологии — розовых, розовых с центром подтверждают принадлежность бактерий к семейству Enterobacteriaceae по ферментации глюкозы. Для этого на всех фильтрах подсчитывают число указанных колоний каждого типа отдельно и регистрируют в журнале испытаний. Проводят посев двух-трех колоний каждого типа в бактериологические пробирки на полужидкую среду с индикатором ВР и глюкозой (А.6, приложение А).

Пробирки с посевами помещают в термостат и инкубируют при температуре (36,0±2,0)°С в течение 4-5 ч.

По истечении 4-5 ч инкубации посевов проводят учет реакции ферментации глюкозы:

— отсутствие в пробирках кислоты и газа подтверждает отсутствие бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae;

— образование в пробирках кислоты и газа подтверждает принадлежность бактерий к семейству Enterobacteriaceae.

Если при выборочной проверке реакции ферментации глюкозы, проведенной на колониях каждого типа, получены неодинаковые результаты, то число подтвержденных колоний рассчитывают по формуле (2), 7.1.1.4.

Подсчитывают число колоний лактозоотрицательных, не обладающих оксидазной активностью бактерий и ферментирующих глюкозу с образованием кислоты и газа, что подтверждает их принадлежность к семейству Enterobacteriaceae.

В журнале испытаний регистрируют число бактерий, относящихся к семейству Enterobacteriaceae.

где — общее число колоний, подсчитанных на всех фильтрах, которые подтверждены и зарегистрированы как лактозоположительные оксидазоотрицательные по 7.1.1.2;

— объем воды, пропущенный через все фильтры, на которых проводился учет числа колоний , см .

Если на мембранных фильтрах зарегистрирован рост колоний разного типа (разной морфологии) и при выборочной проверке колоний одного типа получены неодинаковые результаты, то число подтвержденных колоний бактерий этого типа ( ) рассчитывают по формуле:

где — общее число колоний одного конкретного типа, по которому проведен учет;

— число проверенных колоний из общего числа ;

— число колоний, подтвержденных на принадлежность к конкретному виду микроорганизмов.

Результаты учета колоний по каждому типу рассчитывают по формуле (2), суммируют и обрабатывают по 7.1.1.4, формула (1).

При наличии в пробе воды колиформных бактерий результат испытаний выражают числом КОЕ колиформных бактерий в 100 см пробы воды.

При отсутствии в пробе воды колиформных бактерий и бактерий E. coli в протоколе испытаний записывают: «Колиформные бактерии и бактерии E. coli в 100 см пробы воды не обнаружены».

При необходимости получения количественного результата определения в пробе воды оксидазоотрицательных бактерий, ферментирующих глюкозу до кислоты и газа, для которых по 7.1.1.3 установлена принадлежность к семейству Enterobacteriaceae, расчёт проводят по формуле (1) аналогично определению в пробе воды колиформных бактерий.

7.1.1.5 Оформление результатов

Результаты анализа вносят в протокол испытаний, оформленный в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО/МЭК 17025. Протокол должен содержать:

— ссылку на настоящий стандарт;

— информацию, необходимую для идентификации пробы анализируемой воды;

— определяемый показатель, используемый метод и результаты анализа;

— любые отклонения, которые могли повлиять на результаты анализа.

7.1.2 Определение бактерий Е. coli

7.1.2.1 Проведение анализа

Для определения Е. coli используют посевы, которые получены на мембранных фильтрах при проведении анализа на определение колиформных бактерий (см. 7.1.1.1 и 7.1.1.2).

Если на мембранном фильтре в течение 24 ч не обнаружен рост колоний или выросли колонии не характерные для лактозоположительных колиформных бактерий, в журнале испытаний регистрируют сведения об отсутствии Е. coli в пробе воды.

При наличии на мембранных фильтрах характерных колоний на среде Эндо или на среде с тергитолом 7 проводят их дальнейшую идентификацию на наличие бактерий Е. coli. Все указанные колонии (но не более 15) засевают в бактериологические пробирки с полужидкой средой с индикатором ВР и лактозой с добавлением триптофана (А.7, приложение А), предварительно нагретой до температуры 43°С-44°С.

В засеянные пробирки под пробку вставляют полоски, пропитанные реактивом (А.8, приложение А), для обнаружения продуцирования индола. Пробирки немедленно помещают в термостат и инкубируют при температуре (44±1)°С в течение 18-20 ч.

По истечении срока инкубации посева в журнале испытаний регистрируют результаты ферментации лактозы и наличие или отсутствие индола. Подтверждением наличия Е. coli является ферментация лактозы с образованием кислоты и газа и ярко малиновый цвет полоски, пропитанной реактивом, указывающий на наличие индола.

7.1.2.3 Оформление результатов — по 7.1.1.5.

Примечание — Метод применяют в передвижной лаборатории при наличии термостата, поддерживающего температуру (44±1)°С.

7.1.4 Определение Е. coli ускоренным методом с использованием среды с желчью

Для определения Е. coli используют две среды — триптон-желчный агар (ТЖА) и триптон-соевый агар (ТСА) (А. 10, приложение А).

Проводят фильтрование отмеренных объемов воды, установленных по 7.1.1.1, через мембранные фильтры, подготовленные по 6.3 с соблюдением требований 6.4.

После фильтрования отмеренных объемов воды мембранные фильтры с посевами накладывают на среду ТСА и инкубируют в термостате при температуре (36,0±2,0)°С в течение 4-5 ч. Затем фильтры переносят на среду ТЖА. Инкубацию посевов продолжают при температуре (44±1)°С в течение 19-20 ч.

После инкубации посевов регистрируют в журнале испытаний наличие или отсутствие на фильтрах роста колоний. При росте на фильтрах изолированных колоний белого, палевого, кремового цвета мембранный фильтр помещают на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для индольного теста (А.11, приложение А) и облучают ультрафиолетовой лампой в течение 10-30 мин в зависимости от скорости окрашивания. Все колонии микроорганизмов красного цвета на мембранном фильтре учитывают как колонии Е. coli и подсчитывают их число.

Обработку результатов проводят по 7.1.1.4 аналогично обработке результатов по определению колиформных бактерий.

Е. coli в пробе воды рассчитывают по формуле (1), 7.1.1.4.

Результат испытаний выражают числом КОЕ бактерий Е. coli в 100 см анализируемой пробы воды.

При отсутствии роста колоний на фильтрах или наличии отрицательной реакции на образование индола (отсутствие изменения цвета колоний) в протоколе испытаний записывают: «Бактерии Е. coli в 100 см пробы воды не обнаружены».

Оформление результатов — по 7.1.1.5.

Примечания

1 Использование коммерческого реактива Ковача на водной основе дает более четкие и быстрые результаты без применения ультрафиолетового облучения.

2 Неравномерное распределение колоний микроорганизмов на фильтре или обильный рост сопутствующих микроорганизмов могут мешать идентификации колоний микроорганизмов с положительной реакцией на образование индола из-за диффузии окраски в прилегающие колонии микроорганизмов.

7.1.5 Определение колиформных бактерий и Е. coli ускоренными методами с использованием готовых питательных сред на подложке

Для ускоренного определения колиформных бактерий и Е. coli применяют готовые питательные подложки, например петрифильмы серии Aqua по методическим указаниям [1] и другие тест-системы, имеющие сертификат и разрешение на применение.

Примечание — Необходимо перед использованием петрифильмов в полевых условиях проверить сопоставимость результатов в сравнении с методами, применяемыми в стационарной лаборатории. В случае получения достоверных различий по критерию Стьюдента более чем в 80% полученные результаты следует отнести к ориентировочным.

7.1.5.2 Учет, обработка и оформление результатов — по 7.1.1.4 и 7.1.1.5.

Примечания

1 Готовые тест-системы используют в полевых условиях при необходимости проведения анализа воды с небольшим микробным загрязнением; их использование при работе в полевых условиях существенно сокращает перечень необходимого оборудования при комплектовании лабораторий.

2 Использование тест-систем сокращает продолжительность анализа за счет исключения этапов подготовки посуды и приготовления питательных сред, стерилизации, розлива, разогрева и хранения питательных сред, упрощает процедуру посева, в ряде случаев исключает процесс идентификации бактерий, способствует защите персонала от вредного микробного воздействия и исключает контаминацию помещения, сокращает трудозатраты при утилизации.

7.1.6 Определение колиформных бактерий и бактерий Е. coli сигнальным методом

Метод не требует фильтрования воды и наличия в комплекте лаборатории чашек с питательными средами. Метод обеспечивает возможность получения только качественной оценки результатов. Для проведения анализа используют навеску соответствующей среды для определения колиформных бактерий или Е. coli в соответствии с прилагаемой инструкцией производителя.

В стерильные емкости наливают 100 см исследуемой воды, вносят навеску сухой среды и тщательно перемешивают до полного растворения. Посевы инкубируют в течение 10-24 ч при температуре 36°С.

Примечание — Допускается при отсутствии в комплекте лаборатории термостата инкубировать посевы при температуре 20°С-25°С в течение 48 ч.

После инкубации посевов проводят учет результатов, при этом считают, что:

— колиформные бактерии и Е. coli отсутствуют, если цвет среды не изменился или отмечено помутнение без изменения цвета среды;

— бактерии обнаружены, если среда приобрела зелено-голубой цвет во всем объеме или верхнем слое. При перемешивании цвет среды не должен измениться.

Для подтверждения наличия Е. coli в емкостях, в которых отмечено изменение цвета среды, вносят 2,5 см реактива Ковача (А.11, приложение А). Красное кольцо на поверхности среды подтверждает образование индола, что свидетельствует о наличии Е. coli в пробе воды. Наличие Е. coli можно подтвердить также по свечению содержимого емкости в УФ-свете при использовании УФ-лампы (при наличии флюорогенного субстрата в составе среды).

Оформление результатов — по 7.1.1.5.

Примечания

1 Представленные методики позволяют в течение 24 ч оценить санитарное состояние водных объектов при использовании минимально необходимого набора лабораторного оборудования, питательных сред и расходных материалов в полевых условиях.

2 Вода в изучаемом объекте, в которой выявлено бактериальное загрязнение с использованием сигнальных методов и результат превышает допустимые нормативы, подлежит дальнейшему анализу по 7.1.1 и 7.1.2 после повторного отбора пробы.

При расследовании нештатных ситуаций эпидемического характера, а также при использовании водоема для питьевого и хозяйственно-бытового водопользования или в качестве поверхностного источника воды для централизованного водоснабжения помимо определения колиформных бактерий и бактерий Е. coli проводят исследование отобранных проб воды на наличие патогенных энтеробактерий (сальмонелл) используя экспедиционный метод посева в магниевую среду накопления по методическим указаниям [2]. Для этого все компоненты магниевой среды в соответствии с прописью А.12, приложения А, вносят в две емкости, содержащие по 500 см исследуемой воды. Каждый компонент тщательно перемешивают до полного растворения и инкубируют в течение 24 ч при температуре (36±2)°С.

После инкубации посевов из емкостей с признаками роста проводят высев на одну из плотных сред: XLD-агар (А.13, приложение А) или хромогенную дифференциально-диагностическую среду Рамбах-агар (А.14, приложение А) или другую разрешенную к применению среду. Посевы инкубируют в течение 24 ч при температуре (36±2)°С.

На дифференциально-селективной среде XLD сальмонеллы образуют колонии красного цвета с черным центром за счёт образования сероводорода (H S).

На среде Рамбах-агар сальмонеллы образуют колонии красного цвета. Колиформные бактерии растут в виде сине-зеленых или сине-фиолетовых колоний. Остальные энтеробактерии и грамотрицательные бактерии, такие как Proteus, Pseudomonas, Shigella вырастают в виде бесцветных или желтоватых колоний.

Дальнейшую идентификацию выросших колоний при необходимости проводят по методическим указаниям [2] в стационарной лаборатории.

7.2 Определение бактерий энтерококков

7.2.1 Определение бактерий энтерококков с использованием мембранной фильтрации

7.2.1 1 Проведение анализа

Фильтруют 100 см пробы воды через мембранные фильтры с соблюдением требований 6.3 и 6.4. После фильтрования фильтры переносят, не переворачивая, на агаризованную плотную азидную среду Сланеца-Бертли (А.15, приложение А) или энтерококкагар (А.16, приложение А) и добиваются полного прилегания его к среде без образования пузырьков воздуха. Чашки с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (36±2)°С в течение 24 ч.

При отсутствии роста колоний инкубацию посевов продолжают до 48 ч.

После инкубации посевов учитывают колонии, характерные для бактерий энтерококков, — выпуклые, с ровными краями, темно-малиновые, розовые, светло-розовые, равномерно окрашенные или с темно-красным не четко оформленным центром и подсчитывают их число.

Очень мелкие (на пределе видимости невооруженным глазом), плоские разных оттенков, ярко-малиновые с четко выраженным малиновым центром и бесцветным ободком колонии не учитывают.

Регистрируют число колоний бактерий энтерококков или их отсутствие в журнале испытаний.

7.2.1.2 При необходимости подтверждают наличие бактерий энтерококков одним из способов, указанных ниже.

Для этого по 2-3 колонии каждого типа пересевают секторами на солевой агар с ТТХ (А.17, приложение А) и инкубируют при температуре (36±2)°С в течение 24 ч. Бактерии энтерококков на указанной среде дают равномерный нежный рост на протяжении всего штриха. Иные бактерии на этой подтверждающей среде не растут или растут на платформе штриха.

При наличии в комплектации лаборатории термостата, обеспечивающего температуру 44°С, мембранный фильтр с выросшими колониями стерильным пинцетом, не переворачивая, переносят на поверхность желчь-эскулин-азидного агара (А.18, приложение А), предварительно нагретого до 44°С, и инкубируют в течение 2 ч. В течение этого времени энтерококки гидролизируют эскулин с образованием характерных продуктов, что проявляется окрашиванием типичных для кишечных энтерококков колоний от коричневого до черного цвета.

7.2.1.4 Оформление результатов — по 7.1.1.5.

7.2.2 Определение бактерий энтерококков ускоренными методами с использованием готовых питательных сред на подложках

Подготовку подложки перед посевом, фильтрование пробы воды, инкубацию посевов проводят по 7.1.5.1.

Идентификацию бактерий энтерококков среди выросших колоний проводят по морфологии, цвету колоний в соответствии с технической документацией производителя в зависимости от используемой питательной среды.

Обработка и оформление результатов по 7.1.1.4 и 7.1.1.5.

7.2.3 Определение бактерий энтерококков сигнальным методом

Анализ проводят по 7.1.6, применяя среду для определения бактерий энтерококков в соответствии с прилагаемой инструкцией производителя. Навеску среды вносят в 100 см исследуемой воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Посевы инкубируют в течение 18-24 ч при температуре 36°С.

Примечание — Производитель среды допускает возможность инкубировать посевы при температуре 20°С-25°С в течение 48 ч.

После инкубации посевов проводят учет результатов, при этом считают, что:

— бактерии энтерококков отсутствуют, если цвет среды не изменился или отмечено помутнение среды без изменения цвета;

— бактерии энтерококков обнаружены, если среда приобрела цвет, описанный в инструкции производителя во всем объеме или верхнем слое. При перемешивании цвет среды не должен изменяться.

Оформление результатов по 7.1.1.5.

7.3 Определение общего числа микроорганизмов

7.3.1 Определение ОМЧ методом заливки питательным агаром

7.3.1.1 Проведение анализа.

При анализе питьевой воды, прошедшей обеззараживание, или воды подземных источников в каждую из двух чашек Петри вносят по 1 см пробы без разведения.

При анализе проб воды нецентрализованного водоснабжения, поверхностного водоема или воды неизвестного уровня микробного загрязнения из каждой пробы делают посев по 1 см воды без разведения и по 1 см из 1-го и 2-го десятикратных разведений (но не менее двух объемов с разным содержанием исходной анализируемой воды), выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках Петри выросло от 20 до 300 колоний. При этом ориентируются на результаты предыдущих исследований и санитарную обстановку в месте отбора пробы.

Разведения готовят с использованием любого из растворов, указанных в А.2 приложения А.

Посев воды проводят после тщательного перемешивания пробы. При посеве вносят по 1 см воды из пробы или соответствующих разведений в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышку. Сразу же после внесения воды в каждую чашку Петри наливают небольшое количество (5-6 см на одну чашку Петри диаметром 90 мм) расплавленного и остуженного до температуры 45°С-48°С питательного агара (А.1, приложение А) предварительно фламбируя край емкости, в которой он находился. После внесения агара содержимое чашки Петри быстро перемешивают, равномерно распределяя его по дну чашки, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки и помещают на горизонтальную поверхность.

Посев и заливку посевов питательным агаром проводят между пламенем двух спиртовок с целью обеспечения условий асептики.

Не допускается применять посев разведений, приготовленных заранее.

После застывания агара чашки Петри с посевами помещают вверх дном в термостат и инкубируют в термостате при температуре (36±2)°С в течение (24±4) ч.

После инкубации посевов чашки с посевами извлекают из термостата, подсчитывают число всех выросших на чашках колоний микроорганизмов ( N ), видимых при двукратном увеличении, и регистрируют в журнале испытаний. Подсчет проводят только на тех чашках, на которых выросло от 20 до 300 колоний.

Результат допускается представлять на основании подсчета колоний на одной чашке, если на другой ползучий рост колоний распространился на всю поверхность чашки или число колоний превышает 300.

Если на всех чашках имеет место рост расплывчатых колоний, который не распространился на всю поверхность чашки, подсчитывают колонии на секторе с изолированным ростом колоний с последующим пересчетом на всю площадь чашки.

Если на чашке выросло более 300 изолированных колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают колонии на двух секторах, выбранных на участках чашки с максимальным и минимальным ростом, и пересчитывают на всю площадь чашки.

В этих случаях в протоколе испытаний записывают: «Число КОЕ микроорганизмов в 1 см пробы воды ориентировочное».

Если подсчет колоний на чашках невозможен за счет сплошного роста изолированных колоний, в журнале испытаний записывают: «Сплошной рост». Если на всех засеянных чашках рост расплывчатых колоний бактерий распространился на всю поверхность чашки, то в журнале испытаний делают запись: «Сливной рост».

Если ни на одной из засеянных чашек не выросло ни одной колонии, в протоколе испытаний записывают: «КОЕ микроорганизмов в 1 см пробы воды не обнаружено».

Примечание — Если рост колоний на чашках с посевами через 24 ч не обнаружен, то продолжают инкубацию посевов до 48 ч.

где — суммарное число колоний, подсчитанных на чашках и зарегистрированных по 7.3.1.1.

— общий объем исходной анализируемой воды, использованный для посева на чашки Петри, на которых велся учет, в том числе включающий объемы исходной анализируемой воды, использованной при разведении (7.3.1.1), см .

Результат округляют до двух значащих цифр и выражают числом КОЕ микроорганизмов в 1 см пробы воды.

7.3.1.3 Оформление результатов — по 7.1.1.5

7.3.2 Определение ОМЧ ускоренными методами с использованием готовых к употреблению питательных подложек

Подложку с питательной средой готовят к анализу в соответствии с технической документацией производителя и соблюдением правил стерильности.

Для определения ОМЧ анализируемую воду объемом 1 см вносят на поверхность подложки (в центр при использовании петрифильма и аккуратно опускают верхнюю пленку). Посевы инкубируют при температуре 36°С в течение 18-24 ч.

Подсчет колоний микроорганизмов на питательной подложке проводят по 7.3.1.1.

Число КОЕ микроорганизмов в 1 см анализируемой пробы воды рассчитывают по 7.3.1.2.

Оформление результатов — по 7.1.1.5.

8 Проведение посева проб воды на месте отбора проб с последующей доставкой в стационарную лабораторию

8.1 Проведение посева

Посев проб воды на месте отбора для определения колиформных бактерий, Е. coli, энтерококков и ОМЧ проводят по 7.1-7.3.

Посевы помещают в переносной термостат или термоконтейнер с температурой внутри камеры не ниже 30°С и доставляют для дальнейшего анализа в стационарную лабораторию в течение 24 ч.

В стационарной лаборатории посевы переносят в термостат при температуре (36±2)°С. Через 24 ч инкубации посевов проводят учет выросших колоний. При отсутствии роста колоний общая продолжительность инкубации посевов должна составлять 48 ч.

8.2 Подсчет и идентификацию обнаруженных микроорганизмов в посеве проб воды, учет, обработку и оформление результатов проводят в стационарной лаборатории по методам, установленным в [2]-[4].

8.3 Доставка посевов проб воды в стационарную лабораторию должна сопровождаться передачей акта отбора проб воды и документа, включающего информацию о процедуре посева: условия посева (температуру и влажность воздуха), дату и время посева, фамилию, имя и отчество лица, проводившего отбор и посев проб воды.

А.1 Приготовление питательного агара

Питательный агар готовят в стеклянной емкости из сухого препарата в соответствии с инструкцией производителя.

Емкости с готовым питательным агаром должны быть закрыты силиконовыми или ватными пробками, а сверху защищены колпачками из бумаги, пластика или фольги.

Питательный агар допускается хранить не более 1 мес при температуре не ниже 2°С и не выше 23°С.

А.2 Приготовление растворов для разведений

А.2.1 Приготовление солевого (физиологического) раствора

8,5 г хлорида натрия растворяют в 1000 см дистиллированной воды. Значение рН раствора должно быть равно 7,0±0,1. Значение рН раствора контролируют с использованием рН-метра. Раствор разливают в термостойкие стеклянные емкости и стерилизуют при температуре (120±2)°С в течение 15 мин. После стерилизации при необходимости корректируют рН раствора: значение рН раствора должно быть 7,0±0,1.

Срок хранения раствора при температуре не ниже 2°С и не выше 23°С — не более 1 мес.

А.2.2 Приготовление пептонного раствора

1 г пептона растворяют при кипячении в 1000 см дистиллированной воды. Значение рН должно быть равно 7,0±0,1. Значение рН раствора контролируют с использованием рН-метра. Раствор разливают в стеклянные емкости и стерилизуют при температуре (120±2)°С в течение 20 мин. После стерилизации при необходимости корректируют рН раствора: значение рН раствора должно быть 7,0 ±0,1.

Срок хранения раствора при температуре не ниже 2°С и не выше 23°С — не более 1 мес.

А.2.3 Приготовление пептонно-солевого раствора

8,5 г хлористого натрия и 1 г пептона растворяют при кипячении в 1000 см дистиллированной воды. Значение рН должно быть равно 7,0±0,1. Значение рН раствора контролируют с использованием рН-метра. Раствор разливают в стеклянные емкости и стерилизуют при температуре (120±2)°С в течение 20 мин. После стерилизации при необходимости корректируют рН раствора: значение рН раствора должно быть 7,0 ±0,1.

Срок хранения раствора при температуре не ниже 2°С и не выше 23°С — не более 1 мес.

А.3 Приготовление среды Эндо

Среду Эндо готовят из сухого препарата по способу, указанному производителем.

Приготовленную и охлажденную до температуры 60°С-70°С среду Эндо после тщательного перемешивания разливают в стерильные чашки Петри.

Среда, готовая к употреблению, не должна содержать следов влаги на поверхности.

Срок хранения чашек Петри со средой Эндо в стерильных светоизолирующих упаковках (например, пеналах или обернутыми плотной стерильной бумагой) при температуре 4°С-10°С — не более 7 сут.

А.4 Приготовление среды с тергитолом 7

Приготовление среды с тергитолом 7 проводят по ГОСТ 31955 (В1, приложение В) или из готового препарата по способу, указанному производителем. Готовую среду в чашках Петри хранят в защищенном от света месте при (5±3)°С не более 10 сут.

А.5 Приготовление реактивов для оксидазного теста

Реактивы для оксидазного теста готовят по одному из вариантов:

Вариант 1:

тетраметил- п -фенилендиамин гидрохлорид — 0,1 г;

дистиллированная вода — 10 см .

Реактив нестабилен и его необходимо готовить непосредственно перед испытаниями и сразу же использовать. Хранить реактив не допускается.

Вариант 2:

1%-ный спиртовой раствор -нафтола (раствор N 1).

1%-ный водный раствор диметил- п -фенилендиамина дигидрохлорида (раствор N 2).

Срок хранения растворов в емкостях из темного стекла с притертыми пробками составляет: не более 1 мес — раствора N 1; не более 7 сут — раствора N 2.

Перед использованием к 2,5 частям раствора N 1 добавляют 7,5 частей раствора N 2.

Примечания

1 Реактивы являются канцерогенными. Работу по приготовлению реактивов следует выполнять, используя маску и защитные перчатки, избегая контакта реактива с кожей.

2 Для постановки оксидазного теста допускается использовать готовые тест-системы.

А.6 Приготовление полужидкой среды с индикатором ВР и глюкозой

Полужидкую среду с глюкозой по ГОСТ 975 готовят из сухого препарата в соответствии с инструкцией производителя.

Приготовленную среду разливают в небольшие бактериологические пробирки, закрывают силиконовыми или ватными пробками, обернутыми фольгой, и стерилизуют при температуре 112°С в течение 10-12 мин.

Срок хранения приготовленной полужидкой среды при температуре 22°С-25°С — не более 20 сут.

А.8 Приготовление реактивных полосок для определения образования индола

Из фильтровальной бумаги нарезают полоски такого размера, чтобы полоска подходила для размещения под пробку бактериологической пробирки с готовой полужидкой средой с лактозой и триптофаном (см. А.7) и не касалась поверхности среды.

Готовят реактив следующим образом: в стерильную стеклянную колбу вместимостью 100 см вносят 50 см 96%-ного этилового спирта, добавляют до растворения 4 г пара -диметиламинобензальдегида, затем прибавляют 50 см ортофосфорной кислоты (очищенной концентрированной).

Нарезанные полоски из фильтровальной бумаги на 1/3 их длины опускают в колбу с реактивом и выдерживают не более 1 мин для полного смачивания реактивом указанного участка полоски. Затем полоски высушивают и упаковывают в стерильные емкости из темного стекла с притертой пробкой или плотные пакеты из черной бумаги.

Срок хранения высушенных реактивных полосок в темном месте — не более 40 сут.

Цвет обработанного участка поверхности готовой к применению реактивной полоски должен быть желтым.

Примечание — Чувствительность реактивных полосок увеличится, если этиловый спирт заменить на амиловый или изоамиловый.

А.9 Приготовление хромокульт колиформ агара для ускоренного одновременного определения Е. coli и колиформных бактерий в одном посеве

Хромокульт колиформ агар (далее — агар) готовят из сухого препарата в соответствии с инструкцией производителя.

Навеску агара помещают в стекляную или эмалированную емкость с дистиллированной водой и нагревают на кипящей водяной бане, периодически помешивая, до полного растворения препарата в течение 35 мин. Не допускается автоклавировать и перегревать.

Готовую среду охлаждают до 45°С-50°С и разливают в чашки Петри.

Срок хранения питательной среды при температуре 2°С-8°С в защищенном от света месте — не более 21 сут.

Для предотвращения от высыхания чашки со средой рекомендуется поместить в пластиковые мешки.

Готовая среда должна быть желтоватого цвета.

А.10 Приготовление сред для ускоренного определения Е. coli

А.10.1 Приготовление триптон-желчного агара (ТЖА)

Приготовление среды ТЖА проводят по ГОСТ 31955 (В.1, приложение В) или из готового препарата в соответствии с инструкцией производителя. Приготовленную среду охлаждают до температуры (50±5)°С и разливают в чашки Петри. Срок хранения — не более 10 сут в защищенном от света месте при температуре (5±3)°С.

А.10.2 Приготовление неселективного триптон-соевого агара (ТСА)

Приготовление среды ТСА проводят по ГОСТ 31955 (В.1, приложение В) или из готового препарата в соответствии с инструкцией производителя. Приготовленную среду охлаждают до температуры (50±5)°С и разливают в чашки Петри. Срок хранения — не более 10 сут в защищенном от света месте при температуре (5±3)°С.

А.11 Приготовление реактива Ковача для индольного теста для ускоренного определения Е. coli

Реактив готовят в стационарной лаборатории по ГОСТ 31955.

Состав:

пара -диметиламинобензальдегид — 0,5 г;

соляная кислота молярной концентрации 1 моль/дм — 100 см .

Реактив готовят путем растворения лара-диметиламинобензальдегида в соляной кислоте.

Срок хранения реактива — в защищенном от света месте при герметично закрытой капельнице — 1 год; после вскрытия капельницы и частичного использования — 2 мес.

Готовый раствор должен быть светло-желтого цвета; если цвет становится коричневато-желтым, реактив не используют.

А.12 Магниевая среда накопления в экспедиционной модификации

Состав:

источник