Меню Рубрики

Анализ на легионеллу в воде

ЭКСПЕРТИЗА ЛЕГИОНЕЛЛЫ В ВОДЕ

«Профилактика легионеллеза»

На основании СП 3.1.2.2626-10 «Профилактика легионеллеза» ФГУЗ ЦГиЭ №118 ФМБА России установлено:

Легионеллы устойчивы во внешней среде. Легионеллы могут выживать в водопроводной воде до 1 года, в дистиллированной 2-4 месяца. Микроорганизмы быстро погибают под воздействием:

  1. 70 0 спирта, 1% раствора формалина, 0,002% раствора фенола — в течение 1 минуты
  2. 3% раствора хлорамина – в течение 10 минут.

Легионеллы являются сапрофитами и широко распространены в природе. Обитают в пресноводных водоемах, где они паразитируют на водных амебах и других простейших. Размножение легионелл активно идет в теплой воде в диапазоне температур 20-45 0 , хотя их выделяют и из холодной воды. Условия для выживания легионелл в искусственных сооружениях более благоприятны, чем в естественных, что приводит к накоплению в них возбудителя в высоких концентрациях. Легионеллы активно колонизируют синтетические и резиновые поверхности водопроводного, промышленного, медицинского оборудования с образованием так называемых биопленок, в которых легионеллы значительно более устойчивы к действию дезинфицирующих веществ по сравнению с планктонными формами (в природе).

При колонизации легионеллами искусственных водных систем, к которым относятся системы горячего и холодного водоснабжения, централизованные системы кондиционирования воздуха с водным охлаждением, градирни, вихревые бассейны и джакузи массового пользования в аквапарках и спортивно-восстановительных центрах, увлажнители воздуха, фонтаны и т.д. концентрация легионелл значительно возрастает, что представляет эпидемическую опасность.

Легионеллез является сапронозной инфекцией, протекающей с поражением органов дыхания, часто в форме тяжелых пневмоний. Механизм передачи легионеллеза – аэрозольный. Путь передачи – воздушно-капельный. Факторами передачи инфекции являются мелкодисперсионный водный аэрозоль и вода, контаминированные легионеллами. Аспирация контаминированной водопроводной воды без образования аэрозоля считается альтернативным путем передачи инфекции.

В последнее время он приобретает все большую актуальность. В тех случаях, когда температура воды в системе горячего водоснабжения не превышает 50 градусов, создаются благоприятные условия для активного размножения возбудителя. В процессе водопользования, при наличии восприимчивых к легионеллезу лиц, происходит формирование эпидемических очагов с единичными или множественными случаями заболеваний.

Легионеллез выявляют, как правило, у людей среднего и пожилого возраста, на фоне действия таких факторов риска, как курение, злоупотребление алкоголем, сопутствующие заболевания, в первую очередь, диабет и сердечно-сосудистые заболевания, иммуно-супрессивная терапия, первичные и вторичные иммунодефициты. В то же время легионеллезная инфекция, включая тяжелые формы заболевания, может возникать и у совершенно здоровых людей.

У детей легионеллез выявляется редко, обычно на фоне сопутствующих заболеваний. Болезнь легионеров чаще поражает мужчин, чем женщин (соотношение заболевших составляет 2-3:1).

Случаи легионеллеза выявляют круглогодично, но пик заболеваемости приходится на летние месяцы.

Профилактические и противоэпидемические мероприятия.

В территориальных органах, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, должен быть перечень водных систем, потенциально опасных в отношении распространения легионеллезной инфекцией и требующих периодического мониторинга.

Основа профилактики легионеллеза на потенциально опасных объектах общественного пользования, заключается в соблюдении соответствующих инструкций, режимов и требований нормативно-технической документации при эксплуатации данных объектов.

Возбудитель легионеллеза является широко распространенным водным микроорганизмом, присутствующим в большинстве пресных водоемов. Низкие концентрации легионелл в природных водоемах не превышают 10 3 КОЕ/ на литр и не представляют опасности для человека.

В системах водоснабжения, связанных с циркуляцией воды в диапазоне от 20 0 до 50 0 С, концентрация возбудителя резко возрастает за счет образования биопленок на поверхности оборудования, что является ключевым фактором накопления потенциально опасных концентраций легионелл.

К водным системам, потенциально опасным в отношении распространения легионеллезной инфекции и требующим периодического исследования на наличие возбудителя легионеллеза, относятся и системы горячего и холодного водоснабжения .

Данные системы могут быть контаминированны в диапазоне температур от 25 0 до 60 0 С. При наличии застойных зон, участков труб с низкой скоростью потоков воды, в накопительных баках воды при данной температуре вероятно образование биопленок, содержащих высокую концентрацию легионелл. При температуре горячей воды выше 60 0 С планктонные формы легионелл погибают, но в составе ранее сформировавшихся биопленок в ассоциации с другими микроорганизмами и водорослями микроорганизмы сохраняют жизнеспособность и при более высоких температурах.

При снижении температуры в системах горячего водоснабжения до температуры менее 50 0 С условия для размножения легионелл наиболее благоприятны. Микробиологические исследования данных систем на наличие легионелл надо осуществлять не реже 2 –х раз в год. Отбор проб воды рекомендуется проводить:

  • В аккумуляторном баке котельной
  • На выходе воды в распределительную сеть – в систему горячего водоснабжения
  • На выходе в учреждение
  • В резервуаре – хранилище – в системе холодного водоснабжения.

Микробиологическое исследование в отношении контаминации легионеллами осуществляется в соответствии с требованиями НД и проводится в рамках производственного контроля

Профилактические мероприятия включают:

  • общую чистку и промывку системы;
  • физическую и химическую дезинфекцию;
  • резкое повышение температуры воды в системе до 65 0 С и выше до 80 0 С;
  • применение дезинфицирующих средств, обладающих способностью разрушать и предотвращать образование новых микробных биопленок.

Из вышесказанного вытекает:

Условия образования и размножения легионелл в сетях открытой системы тепловодоснабжения самые благоприятные, так как данные системы могут быть контаминированны легионеллами, при несоблюдении температурного режима и снижении температуры в системе горячего водоснабжения до температуры менее 50 0 происходит размножение легионелл.

Особенностей образования и приспособления легионелл в районах Крайнего Севера, в частности в городе Полярные Зори Мурманской области нет, так как возбудителем легионеллеза является широко распространенным водным микроорганизмом и присутствует в большинстве пресных водоемов и присутствует в большинстве пресных водоемов повсеместно.

Какой минимальный период определенной температурной среды для размножения легионелл и других микроорганизмов необходим в сетях открытого тепловодоснабжения при условии, что число бактерий достигнет уровня, опасного для жизни и здоровья потребителей ФГУЗ ЦГиЭ №118 ФМБА России такими данными не располагает.

На Ваш запрос в 2010 году проведены микробиологические исследования воды по следующим показателям: ОКБ — общие колиформные бактерии, ТКБ- термо-толерантные колиформные бактерии, КМАФАнМ – общее микробное число, колифаги – косвенный показатель вирусного загрязнения воды, горячая вода – сульфитредуцирующие клостридии.

Лабораторный производственный контроль качества горячей воды по температурному показателю ФГУЗ ЦГиЭ №118 ФМБА России не проводился, так как в соответствии с программой производственного контроля ответственным является ОАО «Тепловодоснабжение».

источник

Отбор проб на легионеллы при обследовании водных объектов (СП 3.1.2.2626-10 «Профилактика легионеллеза»

Обследованию подлежат все градирни, используемые в производственном процессе. При обследовании градирен исследуют образцы воды из чаши градирни (не менее 2-х образцов объемом 1 литр). В зависимости от конструкции градирни и наличия доступа аналогичное количество образцов воды отбирают из насоса и отстойника градирни. При визуальном обнаружении биопленки на поверхности чаши градирни для исследования берут не менее 2-х проб из различных участков поверхности с помощью стерильного скальпеля или шпателя размером 5 x 5 см. Из биопленки готовят суспензию в 100 мл воды той же градирни, предварительно стерилизованной фильтрацией. Градирни, используемые на непроизводственных объектах, обследуются аналогичным образом.

2. Обследование централизованных систем кондиционирования и увлажнения воздуха, используемых для создания микроклимата в общественных зданиях, торговых центрах, ресторанах, клубах, учреждениях, гостиницах, на пассажирских судах и поездах.

Отбор проб воды осуществляют из контура централизованной системы кондиционирования и увлажнения воздуха (не менее 2-х образцов объемом 1 литр). Благоприятные условия для колонизации легионеллами создаются в поддонах или на полу камер орошения, где скапливается конденсат охлаждаемого воздуха. При визуальном обнаружении биопленок берут не менее 2-х проб. В случае сезонного использования системы кондиционирования и увлажнения (летний или зимний период) микробиологическое исследование проводится при запуске системы и в конце периода эксплуатации.

3. Обследование джакузи в местах общественного пользования (бассейны, сауны, аквапарки, фитнес и спа-центры, демонстрационные джакузи в торговых и выставочных центрах и другие).

Отбор проб воды осуществляется после фильтра (2 образца объемом 1 литр). Для исследования в зависимости от конструкции системы берут соскобы из насосных устройств, обеспечивающих циркуляцию воды и подачу воздуха. Визуальному осмотру подлежат места возможной колонизации легионеллами и образования биопленки (пластиковые или резиновые коврики и трапы, сливные и дренажные точки). При выявлении биопленок из данных мест также берутся образцы для микробиологического исследования. В случае длительного перерыва в эксплуатации демонстрационных или декоративных джакузи в торговых, выставочных, офисных центрах при полном или частичном сохранении в них воды необходимо провести микробиологическое исследование до начала эксплуатации.

Микробиологическому исследованию предшествует анализ температуры воды в системе и выявление концевых (наиболее отдаленных от бойлерной), редко используемых участков и «застойных» зон и тупиковых точек системы горячего водоснабжения. При температуре воды выше 70 — 500 C в магистрали или бойлерной и 60 – 500 C и выше в точках потребления воды микробиологическое исследование проводить нецелесообразно. Также нецелесообразно проводить микробиологическое исследование холодной воды при температуре ниже 20 – 50 0C. Для исследования берут образцы воды объемом 0,5 — 1,0 литр и смывы с внутренней поверхности водопроводных кранов, сеток душа, внутренней поверхности труб концевых, редко используемых и «застойных» участков системы горячего водоснабжения. Общее количество проб определяется числом выявленных участков и точек системы, подлежащих исследованию. При отсутствии таковых исследуется вода и смывы в ближайшей и наиболее отдаленных от бойлера точках. Образцы воды берут также на выходе из бойлерной или магистрального водовода в соответствующем диапазоне температур.

В связи с возможностью размножения легионелл и в других водных системах общественного назначения (фонтаны уличные и внутренние, технологические циклы с использованием циркуляции и аэрозолирования воды, аварийные души на производстве, поливальные установки и другие) необходимость и частота их микробиологического мониторинга определяется температурой воды (25 — 50 0C); длительностью циркуляции воды в замкнутом режиме; длительными сроками хранения больших объемов «застойной» воды до начала ее использования, особенно аэрозолирования; обнаружением биопленок.

источник

Название болезни Легионеров связано с Американским легионом, организацией, основанной в 1919 году и объединяющей американцев — участников различных войн. Именно на съезде этой общественной организации в 1976 году, проходившем в городе Филадельфия, и разразилась вспышка непонятной инфекции. В течение месяца болезнь унесла жизни 34 из 220 заболевших делегатов и получила наименование «болезнь легионеров». Для того, чтобы человек заразился, ему необходимо вдохнуть возбудителя, находящегося в водном аэрозоле: в душе, в потоке воздуха из кондиционера, в джакузи, от разнокалиберных теплых фонтанов и фонтанчиков.

Возбудитель болезни — бактерии Легионеллы, широко распространены во всем мире, это часть естественной флоры многих водоемов, как естественных, так и искусственных. Именно последняя особенность принесла этим микроорганизмам дурную славу. Дело в том, что легионелла вызывает у человека довольно тяжелую пневмонию (называемую еще «болезнью легионеров»), и обнаружение малоприятного возбудителя в системах кондиционирования воздуха, вызвало шок как у обитателей многочисленных офисов, так и у производителей кондиционеров. А уж сообщения о том, что легионеллы найдены в обычной теплой водопроводной воде и ваннах-джакузи в салонах SPA, наделало немало шума.

Случаев передачи инфекции от человека к человеку не зарегистрировано. Инкубационный период легионеллеза в среднем составляет 5-7 суток. Наиболее изучена легионеллезная пневмония, то есть заболевание, возникающее при попадании возбудителя в легкие человека. Как правило, болезнь развивается очень быстро. Начинается все с умеренной головной боли и недомогания, а затем — в среднем через сутки — следует резкий подъем температуры до 40°С, сопровождающийся сильным ознобом. Самое грозное осложнение болезни легионеров, которое и приводит к летальному исходу, — дыхательная недостаточность. Летальность составляет от 5 до 30 процентов и очень зависит от возраста и предшествующего болезни состояния пациента. Легионелла буквально «звереет» в условиях сниженного иммунитета, поэтому к группе риска относятся прежде всего люди среднего и пожилого возраста. Кроме того, предрасполагающими факторами является курение и хронический стресс.

Для предотвращения развития бактерий легионеллы необходимо чтобы температура холодной питьевой воды была ниже 20 градусов Цельсия, а температура горячей воды – выше 55 градусов. В таких условия бактерии легионеллы не развиваются.

Но как быть с бассейнами, джакузи, СПА, фонтанами? Есть одна особенность у меди – угнетение бактерий легионеллы. Поэтому в санитарных учреждениях (больницах, поликлинниках и т.д.) рекомендуют делать разводку трубопроводов из медных труб. Но если это уже невозможно осуществить, на помощь придет немецкая разработка компании Necon.

Различные установки Necon предназначены для обеззараживания воды в бассейнах, СПА, системах водоснабжения, системах полива, охлаждения и т.д.

Для определения эффективности дезинфекции с помощью ионов меди и серебра в СПА бассейне с установленной системой NEC-20

провели эксперимент с помощью специального бактериального теста на легионеллу

Тестовую пластину погружаем в воду СПА на 10 секунд и помещаем в инкубатор

На 48 часов при температуре 30 градусов цельсия.

Через двое суток проверяем результат:

Т.е. судя из анализа бактерии легионеллы в СПА отсутствуют. Necon надежно защищает воду от бактерий.

Если бы присутствовали патогенные бактерии в воде анализ бы выглядел приблизительно так:

Из проделанного эксперимента делаем вывод, что ионы меди и серебра справляются с задачей по дезинфекции воды

источник

Легионеллы встречаются и в природных, и в искусственных водных экосистемах. В системах горячего водоснабжения в большинстве случаев речь идет о крайне низкой концентрации легионелл, однако в некоторых случаях возможен резкий рост численности микроорганизмов, именуемый амплификацией. Существует несколько критериев для среды, при которых легионеллы в системе горячего водоснабжения быстро размножаются – температура в пределах от 25 до 42 градусов по Цельсию, застойная вода, наличие осадочных отложений, биопленки, другие микроорганизмы (в особенности амебы). Таким образом, вирус распространяется в микробных сообществах, и потому загрязненная вода становится основной причиной распространения заболевания.

Для того, чтобы предотвратить попадание легионелл в систему горячего водоснабжения, необходимо обеспечить надежную водоочистку – это позволит снизить численность микроорганизмов, а значит, для легионелл не будет питательной среды для размножения. В системах, обеспечивающих водоснабжение, существует достаточно много объектов, которые могут выступать в качестве амплификаторов – это горячее, питьевое и аварийное водоснабжение, все многообразие декоративных фонтанчиков и водопадов, системы башенного охлаждения, испарители, системы очистки и увлажнения воздуха.

На сегодняшний день против легионеллы в системе горячего водоснабжения используется преимущественно предварительное хлорирование. Тем не менее, если речь идет об автономной системе, не исключено, что легионеллы будут активно размножаться на открытых участках системы – например, в накопительных емкостях. Если вода не используется на протяжении долгого времени, количество вредоносных микроорганизмов в воде может стать избыточным, вследствие чего возникнет угроза распространения инфекционного заболевания.

Читайте также:  Анализы на питьевую воду из скважины

В связи с тем, что размножение бактерий характеризуется экспоненциальной зависимостью, риск заражения может быть снижен за счет слива некоторого объема воды, однако более эффективное средство – это химическая чистка теплообменников или установка обеззараживающего устройства на выходе из системы горячего водоснабжения. В качестве такого устройства может быть использован угольный фильтр, бактерицидная ультрафиолетовая установка или же комбинированная система. В то же время обратный осмос в большинстве случаев не может рассматриваться как эффективное средство в виду того, что легионеллы могут накапливаться в концентрате.

Для того, чтобы исключить риск появления легионеллы в системе горячего водоснабжения, применяется хлорирование. Тем не менее, легионелла обладает значительной устойчивостью к хлору, и в низкой концентрации присутствует в системах, обеспечивающих центральное водоснабжение. Следовательно, они попадают и в систему горячего водоснабжения, где температура воды в большинстве случаев находится на уровне 25 градусов по Цельсию, что соответствует условиям, благоприятным для амплификации. Чтобы предотвратить размножение микроорганизмов, температура должна превышать 42 градуса.

Итак, чтобы легионелла не размножалась в системах горячего водоснабжения, необходимо прибегнуть к тщательному температурному контролю воды; в противном случае будет необходима дорогостоящая промывка системы отопления. Например, хранение холодной воды должно осуществляться при температуре, не превышающей 20 градусов. Что касается горячей воды, то для нее рекомендуемая температура составляет 60 градусов. Для рециркуляции температурный режим ниже – 51 градус. Важнейшее условие профилактики размножения легионеллы в системе горячего водоснабжения – нагрев воды в резервуаре должен быть равномерным. Для этого нагреватель размещают непосредственно под резервуаром, или же используют в накопительной системе встроенный теплообменник, имеющий большую площадь контакта с нагреваемой средой. Естественно, что термостаты должны находиться под постоянным контролем, что достигается за счет регулярного обследования системы. Если проектируемая система предполагает высокую степень риска, необходимо воспользоваться замкнутыми контурами водоснабжения. Риск заражения будет ниже, если в трубопроводе не будет продолжительных участков.

источник

1.1 . Настоящие методические указания устанавливают методику проведения лабораторных исследований объектов окружающей среды по выявлению в них бактерий Legionella pneumophila — возбудителя болезни легионеров.

Проведение мониторинга объектов окружающей среды на наличие Legionella pneumophila позволит определить степень их контаминации возбудителем и дать оценку эффективности принимаемых мер в целях профилактики болезни легионеров и обеспечения безопасности здоровья населения.

1.2 . Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации, осуществляющих контроль за объектами окружающей среды; в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право осуществления контроля безопасности объектов окружающей среды на наличие возбудителя болезни легионеров.

1.3 . Методические указания являются обязательными:

• в порядке надзора за соблюдением установленных требований в области обеспечения безопасности объектов окружающей среды, в т.ч. в соответствии с СанПиН 2.1.2.1331-03 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды аквапарков», СанПиН 2.1.2.1188-03 «Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества»;

• в ходе проведения противоэпидемических мероприятий и при эпидемиологическом расследовании возможных эпидемических вспышек и спорадических случаев болезни легионеров.

1.4 . Предлагаемый метод выявления бактерий Legionella pneumophila в окружающей среде согласуется с международным стандартом ISO 11731 и руководством ВОЗ « Legionella and the prevention of legionellosis » (2006 г.).

2.1 . Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ.

2.2 . Постановление Правительства Российской Федерации от 24 июня 2000 г. № 554 «Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании».

2.3 . СанПиН 2.1.2.1331-03 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды аквапарков».

2.4 . СанПиН 2.1.2.1188-03 «Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества».

2.5 . МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно-эпидемиологический анализ воды поверхностных вод».

2.6 . Методические рекомендации МЗ СССР «Эпидемиология, клиника, лечение и профилактика легионеллеза», 1988.

2.7 . Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтов».

2.8 . Методические указания МУ 1.3.1888-04 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III — IV групп патогенности».

2.9 . Методические указания МУ 3.5.5.1034-01 «Обеззараживание исследуемого материала, инфицированного бактериями I — IV групп патогенности, при работе методом ПЦР».

2.10 . European Guidelines for Control and Prevention of Travel associated Legionnaires Disease, 2002.

2.11 . ISO 1998.ISO 11731:1998 Water Quality-detection and enumeration of Legionella.

2.12 . Legionella and the prevention of Legionellosis. — WHO guidelines. 2006.

L egionella pneumophila — грамотрицательная бактерия, возбудитель острых тяжелых пневмоний с высоким процентом летальных исходов (5 — 10 %) и респираторных заболеваний. В природных условиях легионеллы обитают повсеместно в пресноводных водоемах, преимущественно в некультивируемой форме, и паразитируют в амебах и других простейших, не представляя серьезной опасности для человека. Размножение легионелл активно идет в теплой воде в диапазоне температур 25 — 45 °С, хотя их выделяют и из холодной воды.

Высокие адаптивные способности легионелл позволяют им успешно колонизировать искусственные водные системы — системы охлаждения и кондиционирования, градирни, компрессорные устройства, джакузи, фонтаны, медицинское оборудование и др. Условия для размножения легионелл в искусственных водных системах более благоприятны, чем в естественных, что приводит к накоплению в них возбудителя в высокой концентрации. Легионеллы активно колонизируют синтетические и резиновые поверхности промышленного, водопроводного, медицинского оборудования с образованием биопленок, в которых легионеллы значительно более устойчивы к действию дезинфицирующих веществ. В состав естественных биопленок помимо легионелл входят бактерии рода Pseudomonas , Klebsiella , Acinetobacter и др. Важная роль в персистенции легионелл в биопленках принадлежит амебам в которых легионеллы активно размножаются перед образованием сложных биопленок в ассоциации с другими микроорганизмами.

Эпидемические вспышки и спорадические случаи болезни легионеров преимущественно выявляют в местах общественного назначения: у посетителей и персонала гостиниц; торговых, спортивных и выставочных комплексов; промышленных предприятий, больниц, учреждений; круизных судов и др. Фактором передачи служит водный мелкодисперсный аэрозоль, содержащий возбудителя и генерируемый системами водных коммуникаций.

Сочетание высокой концентрации легионелл в водной среде с источниками мелкодисперсного аэрозоля позволяет возбудителю инфекции вследствие ингаляции микробного аэрозоля попадать в нижнюю часть респираторного тракта и легкие человека, где происходит контакт с альвеолярными макрофагами, в которых вирулентные штаммы возбудителя активно размножаются.

При спорадическом легионеллезе и отдельных нозокомиальных вспышках заболевания возможна аспирация воды, контаминированной легионеллами без образования аэрозоля (бассейны, емкости для хранения и транспортирования воды и др.). Это обусловлено возрастанием восприимчивости к легионеллезу лиц со сниженной иммунологической реактивностью на фоне сопутствующих заболеваний, иммунодепрессивной терапии и др.

Эпидемические вспышки и спорадические случаи легионеллеза выявляют повсеместно. Особое значение в последние годы уделяется случаям болезни легионеров, возникающим во время поездок, путешествий и диагностируемым после возвращения из них. Инкубационный период составляет от 2 до 10 дней. Более 30 % случаев спорадического легионеллеза, многочисленные эпидемические вспышки в гостиницах, на круизных судах послужили причиной создания международной системы эпидемиологического надзора за случаями легионеллеза, связанного с поездками.

В настоящее время известно около 50 видов легионелл, преимущественно выделенных из окружающей среды, из которых собственно болезнь легионеров вызывает вид Legionella pneumophila , насчитывающий 16 серогрупп. Причем более 80 % случаев заболевания вызывают штаммы 1-й серогруппы. Среди других представителей рода Legionella в качестве микробов-оппортунистов, вызывающих заболевание при нарушении клеточного иммунитета и\или на коморбидном фоне, следует отметить L . micdadei, L . longbeachae , L . dumqffii и L . bozemanii. Остальные виды Legionella spp . не патогенны для человека.

рН метр — рН 410; диапазон рН от — 1 до 14, точность 0,01 рН, температура анализируемой среды от — 10 до 100 °С (Белоруссия)

Весы Adventurer ™ — прецизионные одночашечковые электронные цифровые с функцией обнуления тары и другими вспомогательными функциями, стандартного уровня, максимальная загрузка — 210 г, погрешность при измерении — 0,001 г ( OHAUS , США)

Весы ScoutPro — портативные одночашечковые электронные цифровые с функцией обнуления тары, максимальная нагрузка — 2000 г, погрешность при измерении — 0,1 г ( OHAUS , США)

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П, поддерживающий температуру плюс (160 ± 5) °С (Россия)

Термостат суховоздушный ТС-1/80, объем 80 л с температурой до 60 °С (Россия)

СО2 инкубатор МСО 5АС, персональный, объем 49 л, тепловая рубашка, ТС-датчик СО2 (Sanyo) или анаэростат GasPak 100 (на 11 чашек), GasPak 150 (на 36 чашек)

Стерилизатор паровой ВК-30 с вертикальной камерой, объем 150 л

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды

Облучатель бактерицидный настенный УФИК 1 ´ 30

Холодильник бытовой электрический с температурой в камере плюс 4 — 6 °С

Морозильная камера с температурой в камере до -20 °С

* Указанное оборудование и расходные материалы могут быть заменены на аналогичные по характеристикам производства других фирм.

Водяная баня TW 2.03, автоматическое регулирование температуры до 85/90 °С, объем 8,5 л, внутренняя и внешняя циркуляция ( Elmi , Латвия)

Батометр Молчанова ГР-18, предназначенный для взятия проб воды с различной глубины водоемов, с одновременным измерением температуры воды исследуемого слоя, при температуре окружающей среды от 1 до 40 °С (Россия)

Прибор для мембранной фильтрации под вакуумом с диаметром фильтрующей поверхности 35 или 47 мм и устройство для создания разрежения 0,5 — 1,0 атм. (САРТОГОСМ, Россия)

Прибор для подсчета колоний бактерий ( Schuett )

Мешалка магнитная BioMMS -3000, без подогрева, максимальный объем 2 л, скорость вращения 0 — 3000 об./мин, размер платформы 150 ´ 150 мм

Универсальная центрифуга для пробирок до 50 мл «Ева 21» с роторами 6 ´ 50 мл (угловая скорость — до 6000 об./мин), 12 ´ 15 мл (угловая скорость — до 6000 об./мин), 30 ´ 2 мл (угловая скорость — до 12000 об./мин) ( Hettich — Zentrifugen , Германия)

Микроцентрифуга/встряхиватель ТЭТА 2 (Биоком, Россия)

Малогабаритная высокоскоростная лабораторная микроцентрифуга «МиниСпин®», угловая скорость — до 13400 об./мин, 12 ´ 1,5 (2,0) мл (Ер pendorf , Германия)

Твердотельный термостат Термо 24-15 с диапазоном рабочих температур от 0 до 120 °С (Биоком, Россия)

Охладитель проб ОП-1 с диапазоном температур от -4 до 30 °С (Биоком, Россия)

Амплификатор Терцик МС-2 (ДНК-Технология, Россия)

Амплификатор iCycler для проведения ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени, оптический и реакционный модули, комплект фильтров iQ 5 Optical System ( BIORAD , США)

Источник тока Эльф-4 (ДНК-технология, Россия)

Камера для горизонтального электрофореза SE -2 (Хеликон, Россия)

Фотодокументирующая система GelDoc 2000 ( BIORAD , США)

4.3. Вспомогательные изделия и расходные материалы

Пинцет для работы с мембранными фильтрами

Скальпель хирургический, 15 см

Термометр ртутный с диапазоном измерений от 0 до 100 °С

Часы механические сигнальные

Пробки различных размеров: силиконовые, резиновые и другие, выдерживающие стерилизацию сухим жаром или автоклавированием

Тампоны (свабы) в полипропиленовой пробирке в упаковке с аппликатором-палочкой

Вата хлопковая медицинская гигроскопическая

Бумага плотная для упаковки посуды

Газогенераторные пакеты CampyPak для факультативных анаэробов, 10 шт./уп.

Индикаторные полоски СО2, 50 шт./уп.

Мембранные фильтры поликарбонатные с диаметром пор не более 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм

Чашки Петри пластиковые микробиологические, стерильные (Россия)

Стекла предметные для микропрепаратов

Бутыли стеклянные градуированные с крышкой автоклавируемые или пластиковые флаконы (одноразовые), емкостью 500 и 1000 мл ( Wheaton , США)

Пакеты полиэтиленовые стерильные для отбора проб воды на 100 мл типа «вихрь»

Центрифужные пробирки, объемом 50 и 15 мл

Микроцетрифужные пробирки, объемом 0,2, 0,6 и 1,5 мл ( QSP, США)

Автоматические пипетки переменного объема автоклавируемые «Ленпипет» серия Дигитал: 1 — 10, 5 — 40, 40 — 200, 200 — 1000 мкл (Россия)

Автоматические пипетки переменного объема Eppendorf 500 — 5000, 1000 — 10000 мкл

Наконечники до 10 мкл (QSP, США)

Наконечники до 200 мкл с фаской ( QSP , США)

Наконечники до 1000 мкл ( QSP , США)

Наконечники до 5000 мкл ( Eppendorf , Германия)

Наконечники до 10000 мкл ( Eppendorf , Германия)

Наконечники с фильтром до: 10, 100, 200, 1000 мкл ( QSP, США)

Штативы для центрифужных пробирок, объемом 50 и 15 мл (Германия)

Штатив «рабочее место» для микропробирок, объемом 1,5 мл (Хеликон, Россия)

Штатив «рабочее место» для микропробирок, объемом 0,6 мл (Хеликон, Россия)

Штатив «рабочее место» для микропробирок, объемом 0,2 мл (Хеликон, Россия)

Штатив для пипеток переменного объема (Ленпипет, Россия)

Штатив для хранения микропробирок, объемом1,5 мл (Хеликон, Россия)

Штативы для наконечников до: 10, 200, 1000 мкл (Россия)

4.4. Реагенты, реактивы и питательные среды

источник

Шлейфовая разводка внутридомовых систем водоснабжения – большой шаг к повышению гигиены питьевой воды

Каждый домовладелец думает о том, чтобы сделать свой дом максимально безопасным. С этой точки зрения особенно пристального внимания требуют системы водоснабжения, которые являются местом обитания возбудителей целого ряда серьезных заболеваний. В этом мастер-классе нашей Академии с помощью специалистов компании REHAU мы расскажем, как повысить гигиену питьевой воды при помощи шлейфовой разводки внутридомовой системы водоснабжения и рассмотрим:

  • Чем опасны бактерии Legionella, и при каких условиях они начинают бурно размножаться в системе водоснабжения.
  • Какими могут быть пассивные методы борьбы с легионеллами.
  • Какими могут быть активные меры борьбы с легонеллами.
  • Как сделать шлейфовую разводку системы водоснабжения.

Застой в системах водоснабжения домов в последние десятилетия стал довольно частым явлением. Требования к уровню комфорта растут, и в ответ на них современная архитектура меняется таким образом, что количество мест разбора питьевой воды в доме постоянно увеличивается. А это неизбежно приводит к тому, что каждая точка водопотребления в отдельности используется реже.

В результате в отдельных частях системы водоснабжения происходит застой воды, что представляет риск с точки зрения гигиены.

Наибольшую опасность для людей в этом отношении представляют бактерии легионелла (Legionella pneumophila и Legionella longbeachae). Эта бактерия была обнаружена только в 1976 году, после первой вспышки легионеллеза, или легионнелезной пневмонии, тяжелого заболевания, плохо поддающегося лечению антибиотиками. Тогда ученые выявили целые колонии бактерий в жидкости системы кондиционирования отеля, в котором остановились участники съезда американского легиона. В России самая страшная вспышка заболевания была зафиксирована в Верхней Пышме на Урале 25 июля 2007 года: было госпитализировано около 170 человек, и пятеро из них умерло (это заболевание может стать смертельным для пожилых людей, детей и людей с ослабленным иммунитетом).

Все разновидности бактерии обитают в пресной воде и прекрасно адаптируются в водопроводных системах, душевых комнатах, джакузи и т.п.

Читайте также:  Анализы на промышленной сточной воде

Все зависит от качества воды. В некоторых случаях в водопроводных трубах разводится легионелла.

Легионеллы становятся опасными, когда их содержание в воде достигает определенного уровня. Для взрывного размножения им необходимо всего одно условие: температура воды от +25 до +35 °С.

В свежей холодной или свежей горячей воде эти бактерии практически отсутствуют. А вот если холодная вода застоится в трубах и нагреется, а горячая остынет, то в ней начинается размножение легионнел, и их концентрация в течение нескольких часов достигает опасного для здоровья человека значения.

Заразиться легионеллезом можно, просто принимая душ или расслабляясь в джакузи – для этого достаточно вдохнуть воздух, содержащий микроскопические капельки воды с размером менее 5 мкм.

Согласно нормам СанПиН 2.1.4.2496 и СП 30.13330.2016, горячей считается вода с температурой не ниже 60°С (эта температура выбрана как раз с целью недопущения размножения бактерии Legionella pneumophila). Холодной считается вода с температурой не выше 20°С.

Вот почему температура ГВС в домах по САНПИНу не должна быть ниже 60 градусов. Хотели, было, наши законодатели опустить ниже – Минздрав не дал.

Источники легионеллы невозможно полностью ликвидировать: они размножаются в телах амеб, а амебы устойчивы и к термической дезинфекции, и к облучению ультрафиолетом. Амебы, «пряча» легионеллы в своих телах, не позволяют выявить их анализами и обезвредить.

Масштабная проверка целого ряда вполне респектабельных европейских отелей выявила, что 50% из них потенциально опасны с точки зрения легионеллеза. Как уже говорилось, к заражению опасной инфекцией может привести простое мытье под душем.

Для борьбы с болезнетворными бактериями в питьевой воде наши эксперты советуют использовать сначала пассивные методы.

Начинать нужно с усиленной теплоизоляции трубопроводов и фасонных частей. Это делается для того, чтобы в отсутствие водоразбора горячая вода дольше не остывала, а холодная вода продолжительное время не нагревалась.

При конструировании системы следует обращать внимание на правильную прокладку трубопроводов горячего и холодного водоснабжения.

На схеме выше изображены трубопроводы холодной и горячей воды, расположенные в одной шахте. Как видим, по прошествии восьми часов холодная вода нагрелась до недопустимых 31-33°С. В этой температуре неизбежно начинается размножение бактерий Legionella pneumophila.

Простое конструктивное решение с расположением трубопровода холодного водоснабжения за канализационным стояком предотвращает рост температуры холодной воды до критического значения в отсутствии водоразбора холодной воды в течение этих же восьми часов. Это показано на схеме.

С точки зрения гигиены питьевой воды особенно критично будет располагать водопроводные коммуникации под греющими контурами электрического или водяного теплого пола. Отсутствие водоразбора в системе холодного водоснабжения в течение нескольких часов приведет к недопустимо высокому росту температуры в застойных участках и бурному росту численности бактерий в воде даже при эффективной теплоизоляции трубопроводов.

При устройстве в доме или в квартире систем напольного отопления коммуникации холодного водоснабжения следует прокладывать в обход греющих контуров, стен и каналов, а также за фальш-стенами. Это продлит допустимое отсутствие водоразбора.

Самым действенным активным методом борьбы с развитием легионелл вследствие застоя воды в системе водоснабжения станет шлейфовая разводка.

Это такой способ прокладки трубопроводов, при котором настенные угольники (также называемые водорозетками) делаются проточными и последовательно соединяются между собой в ветке. В результате при закрытом смесителе на данной точке водоразбора вода обновится, если откроется водоразборная арматура на следующей по ходу точке водоразбора.

Для квартир с индивидуальными узлами водоучета подойдет шлейфовая разводка с последним тупиковым участком. При этом целесообразно к первым по ходу движения воды точкам водоразбора присоединять души, гидромассажные ванны и других аналогичных потребителей, где человек непосредственно контактирует с водой, а к последним по ходу движения воды точкам водоразбора присоединять стиральные, посудомоечные машины, смывные бачки унитазов, где отсутствует прямой контакт человека с водой.

При пользовании последними точками водоразбора вода в первых по ходу движения точках будет постоянно обновляться.

Данная разводка по своим параметрам (расходам на участках и диаметрам) не будет отличаться от традиционной тройниковой схемы. Если трубопроводы прокладываются по полу, то длина подводок увеличится за счет подъема и спуска. Если же магистраль проложить по оси настенных угольников, то необходимо использовать проточные угольники с отводами под 90°.

В детских садах, школах, отелях, домах отдыха, санаториях, больницах, домах престарелых или других учреждениях с одним общим прибором водоучета на все здание или в индивидуальном жилом доме последнюю точку водоразбора можно также сделать проточной. Закольцевать всю ветку холодной воды на стояк холодной воды, а ветку горячей воды закольцевать на циркуляционный стояк.

При этом для установки на стояках потребуются специальные тройники с повышенным сопротивлением на проходе.

Эти тройники отклоняют поток воды, движущийся по стояку, и заставляют его пройти по горизонтальной ветке. Таким образом, где бы в здании ни открылась точка водоразбора на холодной линии, вода во всех точках водоразбора обновится. Причем, к точкам водоразбора свежая вода может подходить как с одной, так и с другой стороны.

На ветках же горячей воды циркуляция будет идти постоянно. Это повысит комфорт пользователей, т.к. буквально через пару секунд после открытия крана горячей воды из него будет выходить вода требуемой температуры (+60-+75°С). В тупиковых же ветках время ожидания выхода воды с требуемой температурой может доходить до 30 секунд (максимальное время по нормам).

Циркуляционная линия устраивается, если объем воды в ветви более трех литров. Такие системы должны рассчитываться, как кольцевые. Это означает, что каждый участок должен быть рассчитан на пропуск расчетного суммарного расхода с коэффициентом неодновременности. Диаметры ветвей в этом случае окажутся значительно больше, чем в традиционных тройниковых схемах, а значит, затраты на материалы окажутся выше.

Эксплуатационные затраты при этом тоже возрастут, ведь при циркуляции горячей воды по ветвям потребуется больший расход тепла на ее подогрев. Выходит, что за повышенную гигиену и комфорт придется заплатить.

Зарубежные исследователи отмечают, что устройство шлейфовых разводок в ветвях горячего водоснабжения с замыканием на циркуляционную линию при коротких подводках к водоразборной арматуре может привести к нагреву последней.

В этом случае водоразборная арматура начнет играть роль теплообменника и будет подогревать холодную воду, что может негативно сказаться на гигиене и потребительском качестве холодной воды.

Случаи заражения легионеллезом от контакта с застоявшейся водой из систем водоснабжения, которые приводят к тяжелым заболеваниям и даже смертельным случаям, свидетельствуют о том, что требования к гигиене питьевой воды должны быть ужесточены. Рассмотренные решения по устройству шлейфовых разводок способны, в сочетании с другими мероприятиями, значительно повысить гигиену питьевой воды за счет уменьшения застойных зон в системах внутридомового водоснабжения и уменьшить риск заражения человека легионеллезом при пользовании водой.

источник

Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды централизованного водоснабжения

При проведении исследований определяют:

Общее число микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре

Содержание общих и термотолерантных колиформных бактерий (ОКБ и ТКБ)

Содержание спор сульфитредуцирующих клостридий

Содержание колифагов

Пробу (в объеме 500 см3 ) отбирают в стерильную емкость, снабженную пробкой и колпачком, после предварительной стерилизации крана обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 минут при полностью открытом кране. При отборе пробы напор воды уменьшают.

1.1.1. Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре.

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 оС в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.

Проведение анализа. Из каждой пробы делают высев не менее двух объемов по 1см3. Вносят по 1 см3 воды в две стерильные чашки Петри, затем в каждую чашку вливают 8-12 см3 расплавленного и остуженного до 45-49 оС питательного агара. Быстро смешивают содержимое чашек на горизонтальной поверхности. После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют 24 часа при 37 оС.

Учет результатов. Подсчитывают все выросшие на чашках колонии, наблюдаемые при двукратном увеличении. Количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на два. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды. Если на двух чашках наблюдается рост расплывчатых колоний или выросло более 300 колоний, подсчитывают сектор чашки с последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе отмечают «число КОЕ / см3 — ориентировочно». Если подсчет на чашках невозможен, то в протоколе отмечают «сплошной рост».

Норматив: в 1 см3 питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ.

1.1.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий.

1.1.2.1. Метод мембранной фильтрации (основной метод). Общие колиформные бактерии (ОКБ) представлены грамотрицательными, оксидаза-отрицательными, не образующими спор палочкиами, способными расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре 37 оС в течение 24-48 часов.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают их признаками и, кроме того, они способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при 44 оС в течение 24 часов.

Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивание посевов на дифференциальной питательной среде с лактозой и последующей идентификацией колоний по культуральным и биохимическим свойствам.

Проведение анализа. При исследовании питьевой воды изучают три пробы объемом по 100 мл. При получении стабильных отрицательных результатов допустима фильтрация 300 см3 воды через один фильтр.

При фильтрации воды неизвестного качества целесообразно увеличить количество фильтруемых объемов для получения изолированных колоний на фильтре (например, 10, 40, 100, 150 см3 воды).

Фильтры помещают на чашки со средой Эндо и затем ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы 24 часа при 37 оС. Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, расплывчатые, выдают отрицательный ответ, свидетельсвующий об отсутствии ОКБ и ТКБ в 100 мл исследуемой воды. Анализ заканчивают через 24 часа.

Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактоза-положительных колоний: темно-красных; красных с металлическим блеском или без него или других подобного типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра, подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.

Каждую отобранную изолированную колонию исследуют на:

а) наличие оксидазной активности; б) отношение к окраске по Граму (микроскопия окрашенного по Граму препарата или постановка теста Грегерсена); 3) ферментацию лактозы до кислоты и газа.

.Постановка оксидазного теста. Полоску фильтровальной бумаги помещают в чистую чашку Петри и смачивают 2-3 каплями реактива для оксидазного теста (например, 1% водным раствором тетраметил-n-фенилендиамина гидрохлорида) или используют СИБ-оксидазу. Готовые бумажные системы смачивают дистиллированной водой. Часть изолированной колонии стеклянной палочкой или платиновой петлей наносят штрихом на подготовленную фильтровальную бумагу. Реакция считается положительной, если в течение 1 мин появляется фиолетово-коричневое или синее (СИБ-оксидаза) окрашивание штриха. При отрицательной реакции цвет в месте нанесения культуры не меняется. При положительном результате эту колонию их дальнейшего исследования исключают.

Определение отношения к окраске по Граму. Из оксидаза-отрицательной колонии делают мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Окраска по Граму может быть заменена тестом Грегерсена: в капле 3% водного раствора КОН на предметном стекле эмульгируют бактерийную массу, взятую с плотной среды. После нескольких секунд перемешивания петлей взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, что указывает на принадлежность испытуемой культуры к грамотрицательному виду. У грамположительных бактерий слизистые нити не образуются – реакция отрицательная.

Определение ферментации лактозы. Оставшуюся часть оксидаза-отрицательной грамотрицательной колонии засевают параллельно в две пробирки с лактозной средой;

— для подтверждения наличия ОКБ посев инкубируют при 37 оС 48 часов (просматривают через 24 часа);

— для подтверждения наличия ТКБ посев осуществляют в среду, предварительно прогретую до 43-44 оС, и инкубируют при 44 оС 24 часа.

Учет результатов. При отсутствии ОКБ и ТКБ на всех фильтрах результат записывают «не обнаружено КОЕ ОКБ в 100 см3» и «не обнаружено КОЕ ТКБ в 100 см3». В случае идентификации всех выросших подозрительных колоний число КОЕ ОКБ и ТКБ подсчитывают на всех фильтрах и выражают результат анализа КОЕ в 100 см3 воды.

Вычисление проводят по формуле X = , где Х – число колоний в 100 см3 воды; V – профильтрованный объем воды через фильтры, на которых велся учет; a – число подсчитанных на этих фильтрах колоний в сумме.

Окончательный результат выдают: количество КОЕ ОКБ в 100 см3 воды, из них количество КОЕ ТКБ в 100 см3.

1.1.2.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий

Метод основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды на жидкую питательную среду с последующим пересевом на дифференциальную плотную питательную среду с лактозой и идентификацией колоний по культуральным и биохимическим тестам.

Проведение анализа. При исследовании питьевой воды качественным методом засевают 3 объема по 100 см3. При исследовании воды с количественным определением ОКБ и ТКБ при повторном анализе производят посев: 3 объемов по 100 см3, 3 объемов по 10 см3, 3 объемов по 1 см3. Посев 100 см3 и 10 см3производят соответственно в 10 и 1 см3 концентрированной лактозо-пептонной среды, посев 1 см3 пробы проводят в 10 см3 среды обычной концентрации. Посевы инкубируют 48 часов при 37 оС. Из емкостей, где отмечено наличие роста (помутнение) и образование газа или только помутнение, производят высев бактериологической петлей на сектора среды Эндо для получения изолированных колоний. Посевы на среде Эндо инкубируют 18-20 часов при 37 оС.

При образовании помутнения и газа в среде накопления и росте на среде Эндо колоний, типичных для лактоза-положительных бактерий: темно-красных или красных, с металлическим блеском или без него, выпуклых с красным центром и отпечатком на питательной среде, дают положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий в данном объеме пробы.

Факт наличия ОКБ необходимо подтвердить если: в среде накопления отмечено только помутнение; принадлежность к лактоза-положительным колониям вызывает сомнение.

В этих случаях: проверяют наличие окрашенных отпечатков на среде Эндо после снятия петлей подозрительной колонии; выполняют оксидазный тест; подтверждают принадлежность к Граму; подтверждают способность к газообразованию при посеве изолированных 1-2 колоний каждого типа с каждого сектора на среду с лактозой с последующей инкубацией посевов при 37 оС в течение 24-48 часов.

Читайте также:  Анализы на тощак если выпить воды

Для определения ТКБ делают посев 2-3 изолированных колоний каждого типа с каждого сектора среды Эндо в пробирки с лактозной средой, нагретой до 44 оС и инкубируют в термостате 24 часа при 44 оС. Допускается просмотр посевов через 4-6 часов.

При образовании газа в среде накопления, росте на среде Эндо лактоза-положительных бактерий и выявлении их способности ферментировать лактозу до кислоты и газа в течение 24 часов при 44 оС дают положительный ответ на наличие в этом объеме пробы воды ТКБ. Во всех остальных случаях дают отрицательный ответ.

Учет результатов. При исследовании 3 объемов по 100 см3 результаты оценивают качественно и при обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из них, делается запись в протоколе «обнаружены в 100 см3». При исследовании полуколичественным методом определяют наиболее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ по таблице «Расчет НВЧ бактерий в 100 см3 питьевой воды» в методических указаниях 4.2.1018-01. Результат сообщают без доверительного интервала. При отрицательном ответе – «не обнаружены в 100 см3».

Норматив: ОКБ и ТКБ должны отсутствовать в 100 см3 воды.

1.1.3.Определение спор сульфитредуцирующих клостридий

Сульфитредуцирующие клостридии — спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, восстанавливающие сульфит натрия на железосульфитном агаре при 44 оС в течение 16-18 часов.

Метод основан на выращивании посевов в железосульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным и подсчете черных колоний.

Проведение анализа. Пробу воды 20 см3 прогревают на водяной бане в пробирках 15 минут при 75 оС для уничтожения вегетативных форм. При исследовании хлорированной воды прогревание пробы можно не проводить.

Из каждой пробы питьевой воды делают посев или фильтруют 20 см3. При необходимости подбирают объемы с таким расчетом, чтобы в посевах (в фильтрах) выросло не более 10-15 колоний.

Определение методом фильтрования в пробирках. Перед посевом железосульфитный агар в пробирках расплавляют на водяной бане при 70-80 оС. После фильтрования установленного объема воды мембранный фильтр стерильным пинцетом берут за два противоположных края и согнув в виде «трубочки» помещают в пробирку с горячим агаром. Пробирку с агаром быстро охлаждают в холодной воде. Посевы культивируют 16-18 часов при 44 оС.

Определение методом фильтрования в чашках Петри. Чашки Петри заливают тонким слоем железо-сульфитного агара. После фильтрации фильтр помещают на застывшую питательную среду фильтрующей поверхностью вниз. Затем заливают расплавленным железо-сульфитным агаром до верхнего края чашки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэробных условий. Посевы культивируют 16-18 часов при 44 оС.

Определение прямым посевом. В стерильные пробирки вносят по 5 или 10 см3 исследуемой пробы воды, заливают горячим железо-сульфитным агаром в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. Пробирку быстро охлаждают. Посевы инкубируют при 44 оС в течение 16-18 часов.

Учет результатов. Количественному учету подлежат только посевы, в которых получены изолированные колонии. Подсчитывают черные колонии, выросшие как на фильтрах, так и в толще питательной среды. Результат анализа выражают в колониеобразующих единицах спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 см3 воды. При отсутствии роста черных колоний на всех фильтрах дают ответ «не обнаружены в 20 см3 воды». При невозможности учета колоний из-за сливного роста результат оценивается как качественный, в протоколе отмечают «обнаружено в 20 см3».

Норматив: споры сульфитредуцирующих клостридий должны отсутствовать в 20 см3 питьевой воды.

1.1.4. Определение колифагов.

Колифаги — бактериальные вирусы (бактериофаги), заражающие Escherichia coli и, в результате, формирующие зоны лизиса (бляшки) бактериальной культуры, засеянной «газоном» на питательном агаре через 18 часов инкубирования при 37 оС.

Титрационный метод определения колифагов. Определение колифагов в питьевой воде включает предварительное накопление колифагов в среде обогащения на культуре E.coli и последующее выявление зон лизиса (просветления) газона E.coli на питательном агаре. Метод предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды.

Проведение качественного анализа. В исследуемую пробу воды объемом 100 см3 вносят питательный бульон и подготовленный смыв тест культуры E.coli, помещают в термостат и инкубируют 18 часов при 37 оС. Затем из исследуемой пробы воды отливают в пробирку 10 см3, добавляют хлороформ, пробирку закрывают стерильной резиновой пробкой, встряхивают и оставляют при комнатной температуре до полного осаждения хлороформа. В предварительно расплавленный и остуженный до 45-49 оС питательный агар добавляют приготовленный смыв культуры E.coli. В стерильную чашку Петри пипеткой из пробирки переносят 1 см3 обработанной хлороформом пробы, заливают смесью расплавленного и остуженного до 45-49 оС питательного агара и осторожно покачивают для равномерного перемешивания пробы воды и агара. После застывания чашку переворачивают и инкубируют в термостате 18 часов при 37 оС. Параллельно проводят контроль культуры E.coli.

Учет результатов. Просмотр посевов проводят в проходящем свете. Проба считается положительной при наличии полного лизиса, просветлении нескольких бляшек, одной бляшки на чашке с пробой воды при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке. В протоколе анализа отмечается: колифаги обнаружены или не обнаружены в 100 см3 воды. При наличии зон лизиса в контроле культуре результат считается недействительным.

Проведение количественного анализа. Исследуемую пробу воды в количестве 100 см3 разделяют на шесть порций: 1 флакон с 50 см3 и 5 пробирок с 10 см3. К 50 см3 пробы добавляют 5 см3 десятикратного питательного бульона и 0,5 см3 смыва E.coli. В каждые 10 см3 пробы вносят по 1 см3 десятикратного питательного бульона и по 0,1 см3 смыва бактерий.

Для контроля культуры 0,1 см3 смыва E.coli помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром. Посевы инкубируют 18 часов при 37 оС.

Затем из объема 50 см3 отливают в пробирку 10 мл. Во все исследуемые 6 объемов добавляют по 1 см3 хлороформа. Пробирки закрывают резиновыми пробками, энергично встряхивают и оставляют при комнатной температуре для осаждения хлороформа.

В предварительно расплавленный и остуженный до 45-49 оС питательный агар добавляют смыв E.coli. Приготовленную смесь разливают в две чашки Петри: одну чашку для контроля культуры E.coli на лизогенность и одну чашку для исследуемой пробы воды. После застывания агара чашки, предназначенные для посева проб, разделяют на 6 секторов и маркируют в соответствии с исследуемыми объемами. На каждый сектор из соответствующей пробирки наносят пастеровской пипеткой (или бактериологической петлей продольным штрихом) по 1 капле надосадочной жидкости. После подсыхания капель чашки с исследуемыми пробами и контрольную чашку помещают в термостат при 37 оС на 18 часов.

Учет результатов. Просмотр результатов осуществляют в проходящем свете. Учитывают наличие зон просветления (лизиса) на секторах газона E.coli. При применении капельного способа посева пипеткой образуется зона лизиса в виде округлого пятна или отдельных бляшек. При посеве продольным штрихом бактериологической петлей отмечается лизис по ходу штриха. Пробу считают положительной при наличии зоны лизиса хотя бы на одном секторе при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке. Оценку проводят по таблице наиболее вероятного числа (НВЧ) бляшкообразующих единиц (БОЕ). В протоколе анализов указывают наиболее вероятное количество колифагов в 100 мл воды в диапазоне возможных колебаний: НВЧ БОЕ (нижний предел – верхний предел) колифагов в 100 см3. Результат полуколичественный. При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат считают недействительным.

Прямой метод определения колифагов. Определение колифагов в питьевой воде включает исследование нормируемого объема воды (100 см3) путем его прямого посева и последующего подсчета зон лизиса (бляшек) на газоне E.coli в чашках Петри с питательным агаром. Прямой метод выделения колифагов из воды проводят параллельно с титрационным методом при исследовании по эпидемическим показаниям.

Проведение анализа. В питательный агар, расплавленный и остуженный до 45-49 оС добавляют смыв E.coli и перемешивают. Исследуемые 100 см3 воды разливают по 20 см3 в большие пробирки, нагревают до 35-44 оС и немедленно разливают в 5 чашек Петри. Затем в каждую чашку сразу же вносят по 20 см3 смеси агара с культурой E.coli. Для контроля культуры E.coli в одну чашку Петри вносят 20 см3 стерильной водопроводной воды, предварительно прогретой до 35-44 оС, заливают 20 см3 приготовленного агара с E.coli. Содержимое чашек осторожно перемешивают. Чашки с застывшим агаром помещают вверх дном в термостат и инкубируют в течение 18 часов при 37 оС.

Учет результатов. Просмотр посевов проводят в проходящем свете. Учет результатов осуществляют подсчета и суммирования числа бляшек, выросших на 5 чашках Петри. Результаты выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 см3 пробы воды. В контрольной чашке бляшки должны отсутствовать.

Наиболее часто зоны лизиса выглядят прозрачными пятнами на фоне газона тест-культуры питательного агара в виде круглых изолированных бляшек (от 1 до 5-7 мм в диаметре) с четко выраженными либо стертыми границами.

При высоких концентрациях фага можно наблюдать «ажурный» газон Е. coli, рост единичных колоний Е. coli на фоне сплошного лизиса, либо полное отсутствие роста на чашке.

Окончательный количественный учет прямого посева проводят через 18 часов. Результаты выражают количеством бляшкообразующих единиц (БОЕ) на 100 см3 пробы воды. Если отмечен сливной рост бляшек и подсчет затруднителен, то по данным прямого посева может быть выдан качественный результат: «обнаружено в 100 см3воды». При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат исследования считается недействительным.

Норматив: В 100 см3 исследуемой воды должны отсутствовать БОЕ колифагов.

Выявление Legionella pneumophila в объектах окружающей среды

В настоящее время род Legionella включает около 50 видов бактерий, обитающих в пресноводных водоемах в ассоциациях с сине-зелеными водорослями и в организмах свободноживущих простейших. Большинство видов не представляет опасности для человека.

В воде легионеллы размножаются происходит в диапазоне температур, равных 25-45 оС. Условия для размножения легионелл в искусственных водных системах (системы охлаждения и кондиционирования, градирни, компрессорные устройства, джакузи, медицинское оборудование и др.) более благоприятны, чем в естественные, что и приводит к накоплению высоких концентраций бактерий. Основной фактор передачи – водный мелкодисперсный аэрозоль, образуемый системами водных коммуникаций.

Болезнь легионеров (острая пневмония с токсическим синдромом) вызывает L. pneumophila. Поражения респираторного тракта также спорадически вызывают L. micdadei и L. bozemanii. Оппортунистические заболевания могут вызывать L.micdadei, L.longbeachae, L.dumoffii и L.bozemanii, особенно при нарушениях клеточного иммунитета. Остальные виды не патогенны для человека.

Санитарно-микробиологическому исследованию на обнаружение возбудителя болезни легионеров (L. pneumophila) подлежат в порядке надзора:

1. Системы кондиционирования и вентиляции, водонагревательные и охладительные системы

2. Медицинское оборудование и инструментарий

Выявление L. pneumophila проводят также в ходе проведения противоэпидемических мероприятий и при эпидемиологическом расследовании вспышек болезни легионеров.

Отбор проб. Пробы воды объемом 0,5-1,0 дм3 отбирают в стерильные емкости. Для дехлорирования воды используют кристаллы гипосульфита натрия.

Поверхностные и глубинные пробы отбирают специальными батометрами.

Смывы с объектов (оборудования для кондиционирования и вентиляции, водонагревательных и охладительных систем, медицинского инструментария) забирают тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором и помещают в ту же пробирку.

Поскольку легионеллы способны к образованию биопленок на синтетической и резиновой поверхности водопроводного, промышленного, лабораторного и иного оборудования, связанного с циркуляцией и хранением воды, биопленки также забирают для исследования. Соскобы влажных биопленок с поверхности, находящейся под водой или на границе воды и воздуха, берут сухими тампонами и помещают во флакон или в пробирку. С высохшей поверхности биопленки забирают тампонами, увлажненными стерильным физиологическим раствором и помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором. Доставку проб осуществляют при температуре 6-24 оС.

Подготовка проб к исследованию. В случае сильной загрязненности образцы воды фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр с помощью стеклянной воронки. Затем воду пропускают через мембранный фильтр, который переносят после фильтрации в стерильный флакон с 10 см3 физиологического раствора. Содержимое флакон 1-2 мин перемешивают на встряхивателе или 10 мин на качалке и затем центрифугируют 30 мин при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. К осадку добавляют 1 см3 стерильного физиологического раствора и переносят в стерильную пробирку.

Для снижения уровня загрязненности сконцентрированной пробы посторонней микрофлорой одну её часть прогревают 30 мин при 50 оС, а другую обрабатывают кислотным буфером КСl-HCl (рН 2,2) в течение 4 мин.

Образцы биопленок, смывы с поверхностей концентрируют с помощью центрифугирования, кислотной и термической обработок.

Проведение анализа. Концентрированные, обработанные кислотным буфером и прогретые образцы засевают по 0,1 см3 на чашки с буферным угольно-дрожжевым агаром (БУДРАГ) с ростовой и селективной добавкой. Помещают в термостат при 37 оС до 10 дней во влажной атмосфере в присутствии СО2. Исследование посевов начинают с 2 суток. Колонии легионелл на селективной среде имеют вросший центр, зернистую или блестящую поверхность; окрашены в серовато-голубоватый или зеленоватый цвет. Идентифицируют легионеллы по морфологическим, тинкториальным (грамотрицательные палочки), антигенным свойствам (реакция латекс-агглютинации с моновалентными и групповыми сыворотками, иммунофлуоресцентная микроскопия с мечеными антителами), а также идентификацией ДНК бактерий в полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Определение количества легионелл в исследуемом материале. Для определения количества легионелл проводят посев исследуемой концентрированной пробы без тепловой и кислотной обработки. Подсчитывают число колоний легионелл, выросших на чашке. Количество легионелл определяют по формуле

Х — количество легионелл на литр в исследуемой пробе

a — количество колоний легионелл, выросших на чашке

b — объем концентрата пробы (по завершении этапов фильтрации и центрифугирования) в см3

c — объем, высеянный на чашку, в см3мл

s — объем исходной пробы в дм3

Рекомендуемые значения для оценки уровня контаминации Legionella pneumophila объектов окружающей среды.

1. Присутствие L. pneumophila в воде различных объектов окружающей среды, воде бассейнов, аквапарков, джакуззи, систем кондиционирования воздуха и др. в концентрации менее 1 х 102 микробных клеток на дм3 является допустимым и не требует проведения профилактических мероприятий.

2. Концентрация легионелл в диапазоне от 1 х 102 до 9 х 103 микробных клеток на дм3 не представляет эпидемической опасности, но требует ежемесячного микробиологического контроля и проведения профилактических мероприятий.

3. При обнаружении легионелл в концентрации 1 х 104 микробных клеток на дм3 и выше делают вывод о колонизации данного объекта легионеллами в концентрации, представляющей эпидемическую опасность и требующей дезинфекционных и профилактических мероприятий.

источник