Меню Рубрики

Какой анализ точнее пцр или количественный

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее.

Метод ПЦР был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.

Анализ ПЦР в клинике ДИАНА

Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

  • гепатит C, B;
  • уреаплазмоз половых органов;
  • ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
  • хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
  • микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
  • бактериальный вагиноз;
  • кандидоз половых органов;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • туберкулез;
  • сальмонеллез;
  • туберкулез (легочные и внелегочные формы);
  • листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
  • цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную инфекцию;
  • детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
  • ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах.

ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

  • Универсальность . Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
  • Специфичность . ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
  • Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
  • Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
  • Возможность проведения количественного анализа . Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 — 104 КОЕ/тамп. – нет.

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

  • Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
  • Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
  • С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут мазок из влагалища . При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

  • За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
  • За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
  • За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
  • Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
  • За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.

  • За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
  • Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
  • Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
  • Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

  • Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
  • Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
  • Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
  • Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
  • Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:

  • Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
  • Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
  • Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
  • Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
  • Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
  • Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии;
    соскобы и мазки со слизистых для диагностики ЗППП;
    клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.

При одном взятии материала можно обнаружить сразу нескольких возбудителей, попавших в организм. Такая универсальность избавляет пациента от дополнительных обследований и лишних трат.

Обнаружить и идентифицировать участки генетической информации удается при помощи специальных эталонных маркеров ДНК (праймеров) созданных для каждого известного возбудителя. Эталон позволяет найти «свой» фрагмент среди миллионов других. Если это происходит, запускается реакция полимеразной цепи.

» data-medium-file=»https://i1.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/01/ptsr-analiz.jpg?fit=422%2C300&ssl=1?v=1572898832″ data-large-file=»https://i1.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/01/ptsr-analiz.jpg?fit=662%2C471&ssl=1?v=1572898832″ />
ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами.

Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

  • Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
  • Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.

Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:

  • Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
  • Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
  • Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).

Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter

источник

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови. При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя. Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

  • отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
  • положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

  • если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
  • нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
  • за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии. Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С). При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР. Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С). Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР). После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые. Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Читайте также:  Какие анализы сдавать на иммунитет

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

  1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
  2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

источник

Анализ ПЦР на гепатит С: где и как правильно сдать, что означает положительный и отрицательный результат

ПЦР на гепатит С – обязательный анализ при обследовании пациента с симптомами поражения печени. Исследование назначают для подтверждения диагноза и получения максимально полной информации о возбудителе болезни, активности вирусной инфекции. Результаты служат основанием для назначения противовирусной терапии, определения ее продолжительности и оценки эффективности.

Диагностика с применением методики полимеразной цепной реакции получила распространение сравнительно недавно. Исследования на эту тему велись с середины 1970-х годов. Но первые публикации относительно возможности использования ПЦР в практической медицине появились только в середине 1980-х гг.

При объяснении, что такое ПЦР, врачи подчеркивают, что это самый надежный и достоверный анализ при гепатите С. Данный тест позволяет не только выявить частицы РНК вируса, но и установить его концентрацию (указывает на активность инфекционного процесса) и генотип. Полученные результаты играют ключевую роль для определения тактики и схемы дальнейшей терапии.

В чем состоит суть постановки реакции? При помощи определенных биологически активных веществ добиваются увеличения количество частиц РНК вируса в небольшом объеме крови. Впоследствии участки генома определяются разнообразными физико-химическими методами.

Постановка ПЦР осуществляется при помощи нескольких компонентов:

  • Праймер. Это искусственно синтезированное соединение, в котором последовательность нуклеотидов полностью идентична конкретному участку РНК вируса, не подвергающегося мутациям и изменением в зависимости от генотипа. Определение РНК вируса гепатита С выполняется с использованием строго специфичного праймера.
  • РНК-полимераза. Фермент, отличающийся устойчивостью и структурной стабильностью на фоне изменений температуры, необходимых для правильного протекания химической реакции. Обеспечивает построение цепочки РНК на одном из этапов ПЦР.
  • Смесь протеинов. Для построения дополнительных участков РНК необходим «строительный материал», для чего к биологическому образцу добавляют определенные соединения белковой структуры.
  • Буфер. Смесь, поддерживающая оптимальный уровень рН для обеспечения протекания полимеразной цепной реакции.
  • Образец биологического материала, предположительно содержащий образец РНК HCV (Hepatitis C Virus).

При некоторых способах постановки ПЦР дополнительно используются РНК-зонды и другие внутренние контроли, используемые в качестве контрольных образцов при выявлении результатов.

Сам процесс увеличения участков вирусной РНК при помощи матрицы именуют амплификацией. Реакция протекает в несколько этапов:

  1. Денатурирование. Процесс «раскручивания» нитей РНК обеспечивается повышением температуры до определенного уровня.
  2. Отжиг. После снижения температуры до необходимых показателей происходит присоединение праймеров к РНК. Данная стадия возможна только при наличии в образце крови искомых вирусных частиц.
  3. Непосредственный синтез участков вирусной РНК с участием ферментов.

Перечисленные циклы постановки ПЦР повторяются несколько десятков раз, что обеспечивает многократное увеличение количества участков РНК возбудителя гепатита С уровня, определяемого лабораторными способами.

Перед проведением анализа образец забора крови соответствующим образом подготавливается. Содержащиеся РНК адсорбируются на буфере-носителе, затем смываются и используется для постановки полимеразной цепной реакции.

Детекция результатов проводится либо методом электрофореза (горизонтального или вертикального), либо способом гибридизации. Способ расшифровки результатов реакции выбирается исходя из целей проведения исследования (просто выявление РНК, либо определение ее ориентировочного количества).

Перечень предлагаемых исследований на HCV включает несколько пунктов, отличающихся по стоимости, срокам готовности и способу выполнения.

Если обратиться к протоколам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), порядок диагностики инфекции включает несколько последовательных этапов.

Для начала сдают:

  • общий анализ крови и мочи;
  • биохимия крови;
  • исследование на содержание глюкозы (строго натощак);
  • анализ на ВИЧ;
  • флюорография;
  • иммунограмма (при подозрении на наличие аутоиммунных патологий).

При отклонении показателей биохимического анализа крови от физиологической нормы пациенту назначают тест, основанный на обнаружении специфических антител, вырабатываемых при контакте вируса с кровью (ИФА).

Но подобный анализ крови на гепатит С имеет существенный недостаток. Процесс синтеза антител зависит от функционирования и выработки иммунокомпетентных клеток. Индивидуальные особенности организма могут стать причиной как ложноотрицательного, так и ложноположительного ответа.

Перед назначением теста ИФА врач рассказывает пациенту о возможной ошибке, что вызывает ответный вопрос: «Какой анализ крови показывает гепатит С с минимальным риском получения неверных результатов?» Для подтверждения или опровержения диагноза самым точным лабораторным тестом является проведение ПЦР методом real time.

Дальнейшая тактика действий зависит от того, что покажет исследование. В случае подтверждения диагноза, пациенту сразу же назначают гепатопротекторы, предупреждают о важности правильного питания и здорового образа жизни. Но таргетная терапия невозможна без определения уровня вирусной нагрузки и генотипа гепатита С.

Некоторые лекарственные препараты могут спровоцировать обострение гепатита В. Поэтому для исключения осложнений, дополнительно назначают анализы на HBsAg. HCV лечат только после получения отрицательного результата исследования.

При первичной диагностике гепатита С серологическим методом определяется титр вырабатываемых антител. Такой результат приблизительно показывает активность патологического процесса. Но максимально точную информацию доктор может получить только после изучения данных ПЦР.

В настоящее время практически во всех лабораториях анализ выполняют ультрачувствительным методом. Таким образом диагностика HCV возможно уже через 10–14 дней после заражения, реже – спустя 2,5–3 недели. В зависимости от целей, преследуемых в ходе исследования, доктор назначает конкретный тип теста.

Существуют следующие разновидности ПЦР:

  1. Качественный. При назначении диагностических тестов, у пациентов возникает вопрос, что показывает подобный метод исследования. Качественный анализ способом ПЦР – высокочувствительный тест, определяющий наличие РНК вируса в крови в минимальной концентрации. Обычно подобная разновидность полимеразной цепной реакции ставится по технологии обратной транскрипции. Это один из немногих способов ПЦР, в ходе которого в качестве мишени можно использовать РНК.
  2. Количественный. Количественный анализ на гепатит С позволяет определить точный уровень РНК HCV в крови. Проведение исследования возможно только одним способом – методом real-time. В ходе подготовки материала к постановке ПЦР в образец добавляют краситель. После каждого цикла амплификации проводится автоматизированное количественное исследование в режиме реального времени. Нередко методику проводят в сочетании с обратной транскрипцией. Таким образом возможно качественное определение малого количества копий РНК вируса. Устанавливать уровень РНК HCV количественно имеет смысл, если получен положительный результат качественной ПЦР.
  3. Генотипирование. Анализ сдается проводится на конечной стадии диагностического процесса. Принцип исследования построен на разнице в последовательности нуклеотидов, что отличает один генотип вируса гепатита С от другого. Обычно анализ делают методом мультипраймерной (мультиплексной) ПЦР.

При подозрении на носительство вируса, необходимо выполнить качественную ПЦР. Если результат отрицательный, человек скорее всего здоров. Но для полного исключения заражения рекомендуют повторить исследование через 7–10 дней. Если же РНК вируса обнаружена, проводят дальнейшие тесты (количественный и генотипирование).

Основным показанием к сдаче крови на гепатит С методом полимеразной цепной реакции является положительный результат иммуноферментного анализа (вне зависимости от разновидности: Total, дифференцированный тест на IgG и IgM).

Кроме того, провериться нужно:

  • в период беременности (тест делают дважды – в первом триместре и за 7–10 недель до родов);
  • при работе, связанной с повышенным риском инфицирования (медсестры, лаборанты, работники донорских центров, косметологи и т.д.);
  • при беспорядочных половых связях и незащищенном контакте с малознакомым человеком;
  • на фоне ВИЧ, онкологических заболеваний, приема определенных медикаментозных средств и т.д.;
  • пациентам, зависимым от внутривенных наркотиков;
  • при постоянном проведении инвазивных диагностических или лечебных процедур;
  • при проведенном до 1992 года переливании крови (ранее не существовало достоверных способов проверки донорского биологического материала на наличие вируса).
  • при соприкосновении открытой раны с чужой кровью, нестерилизованным медицинским инструментарием.

Рост заболеваемости растет с каждым годом. Поэтому для раннего выявления инфекции лабораторные тесты на HCV рекомендуют сдавать один раз в год.

При обращении в поликлинику, пациент имеет право на бесплатные анализы. Но сначала сдают тест ИФА. И только при положительном либо сомнительном результате показано исследование методом ПЦР. Поэтому провести срочную диагностику можно обратившись в платную лабораторию, где сдать кровь на ПЦР можно в удобное для пациента время. Одновременно рекомендуют сразу проверить показатели печеночных ферментов, стандартные клинические параметры крови.

Как правило, изучение крови методом ПЦР доступно практически в любой лаборатории. Если пункт забора крови не оснащен должным оборудованием, биологический материал транспортируют для проведения исследования с соблюдением температурного режима и других условий. Проведение ПЦР в поликлинике возможно только после других обследований, результаты которых косвенно укажут на наличие гепатита С.

Перед тем, как сдавать кровь на обнаружения возможного вируса, следует соблюсти ряд правил подготовки к анализу.

Основные аспекты указаны в памятке:

  1. За 5–7 дней отказаться от потребления жирной, жареной пищи, алкоголя. В целом, доктора рекомендуют придерживаться правил питания по диете №5.
  2. За 12–14 часов до проведения исследования не есть. Пить можно только воду.
  3. Сдать кровь лучше в первой половине дня.
  4. До процедуры не курить.

Также следует предупредить доктора о принимаемых лекарственных препаратах, возможных проблемах со здоровьем, хронических заболеваниях.

Забор крови выполняется из вены. После окончания процедуры место прокола медсестра заклеивает стерильным пластырем, предупреждает о необходимости согнуть руку и держать ее в таком положении 10–15 минут. В противном случае высока вероятность появления болезненной гематомы.

Сколько делается анализ, зависит от лаборатории. Средний срок выполнения колеблется в пределах 1–3 дней. Некоторые клиники предоставляют платную услугу быстрой постановки ПЦР, однако время проведения ограничивается возможностями медицинской аппаратуры.

В поликлинике результаты могут передаваться врачу в течение 7–10 дней. Это связывают с большим наплывом пациентов. При этом биологический материал хранится в соответствии со всеми требованиями.

Как правило, расшифровка качественной ПЦР не представляет сложности. Но во избежание ошибочной трактовки, с полученным из лаборатории бланком следует обратиться к врачу. Варианты, что означает та или иная разновидность ПЦР, приведены в таблице.

Отрицательный: человек здоров либо концентрация вирусной РНК в крови слишком мала для детекции.

Положительный: человек инфицирован

Проводится, если обнаружено РНК вируса качественным методом исследования.

В зависимости от того, какие результаты анализов получены, определяется уровень вирусной нагрузки

Проводится при гепатите С, подтвержденном другими методами исследования.

Анализ позволяет установить точный генотип возбудителя патологии

Но нередко возникает ситуация, когда ИФА на гепатит С положительный, а ПЦР отрицательный. Расшифровать такие результаты анализов может только врач.

Однако подобные данные возможны в следующих случаях:

  • беременность;
  • перенесенный в острой форме гепатит С;
  • пройденный курс лечения от HCV;
  • наличие инфекций, повышающих вероятность ложноположительного результата ИФА.

Только полимеразная цепная реакция показывает точное наличие вирусной инфекции в организме. На фоне отрицательной ПЦР положительный ИФА в большинстве случаев говорит о том, что человек не инфицирован. Но врачу следует точно установить причину ложноположительного результата.

Анализ ПЦР качественный на гепатит С подтверждает присутствие возбудителя заболевания в крови. Если РНК вируса не обнаружена, человек здоров. Но при подозрении на инфицирование рекомендуют повторно пройти исследование. Положительный результат свидетельствует об инфицировании. Но этот анализ не позволяет дифференцировать хронический гепатит С от острого, и не может показать, насколько активен патологический процесс.

Количественный анализ методом ПЦР проводится после подтверждения диагноза и его расшифровка важна для определения тактики лечения. В зависимости от концентрации частиц возбудителя гепатита С выделяют несколько степеней вирусной нагрузки: средняя, высокая и низкая. Чем больше показатель, тем тяжелее протекает инфекция и сложнее терапия. В норме вирусная РНК отсутствует в крови.

Многие лаборатории проводят генотипирование в комплексе с количественной ПЦР, что позволяет сэкономить. Подобное исследование делают только один раз, перед началом лечения. Обычно выполняют анализ на один из четырех наиболее распространенных генотипов (1, 2, 3 или 4). Одновременно определяют и подтип HCV. Генотипирование на 5 и 6 подвид гепатита С возможно не в каждой лаборатории.

Диагностика методом ПЦР получила широкое распространение благодаря:

  • высокой точности (при условии использования тест-систем последнего поколения);
  • простоте забора биоматериала;
  • быстроте получения результатов (максимум 5 дней).

Но основное преимущество состоит в широких диагностических возможностях исследования. Анализ позволяет не только выявить вирус, но и точно определить его концентрацию в организме и установить генотип инфекции. Кроме того, количественное исследование необходимо для оценки эффективности противовирусной терапии. Основная цель лечения – достижение нормы анализов (т. е. неопределяемого уровня РНК HCV) на 4, 12 или 24 неделе противовирусного курса и сохранение этого результата.

Стоимость анализа ПЦР колеблется в зависимости от региона. Так, в Москве цены выше. Качественная ПЦР обойдется в 600–800 рублей, количественная – в 2200–3000 рублей, генотипирование – от 1000 рублей. Узнать точно, сколько стоит конкретное исследование, можно непосредственно в лаборатории, на сайте медицинской организации или по телефону.

источник

Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.

По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.

Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты.

Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев.

Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса.

В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя.

С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Различают три вида ПЦР-анализа:

  1. Качественный анализ ПЦР. Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.
  2. Количественный анализ ПЦР. Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.
  3. Генотипирование. Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.

ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

  • контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
  • положительный результат иммуноферментного анализа;
  • признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
  • появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
  • повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
  • перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
  • с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
  • после окончания лечения для контроля за рецидивами;
  • при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

Вид исследования Возможный результат и предполагаемая расшифровка
Качественная ПЦР
Обнаружено В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.
Не обнаружено Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности.
Не обнаружено Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования.
До 1,8*10^2 МЕ/мл Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование.
До 8*10^5 МЕ/мл Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно.
Больше 8*10^5 МЕ/мл Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким.
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови.
Обнаружена РНК определенного генотипа В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа.
Обнаружена РНК вируса гепатита С В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования.
Не обнаружено Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала.

Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

  • кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
  • образец биоматериала был загрязнен;
  • в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
  • в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

  1. Диагностика на ранних стадиях. ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.
  2. Низкая вероятность ошибки. В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.
  3. Высокая чувствительность. ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.

Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

  • анализ крови сдают с утра;
  • перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
  • за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
  • в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции.

В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента.

Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Проводимое исследование Цели выполнения
Биохимический анализ крови и печеночные пробы Позволяет оценить функциональную активность печени, уровень билирубина, показатели печеночных трансаминаз. Превышение нормы в 2 раза и более указывает на наличие заболевания
Клинические анализы крови, мочи и кала Данные исследования неспецифичны, но по результатам можно установить наличие воспалительного процесса, оценить общее состояние пациента. Обнаружение билирубина в моче, изменение оттенка кала говорит в пользу поражения печени
Иммуноферментный анализ (ИФА) Позволяет определить как наличие вирусной инфекции в организме, так и ее форму (острую или хроническую). Недостатком исследования является вероятность ложных результатов
Полимеразная цепная реакция Дорогостоящий, сложный в проведении, но вместе с тем наиболее точный метод диагностики HCV. Позволяет подтвердить наличие вируса в организме человека, количественно установить уровень копий РНК, определить генотип HCV
Инструментальные обследования печени Необходимо проведение УЗИ органов брюшной полости, установление стадии фиброза, оценка тяжести цирроза, исключение гепатоцеллюлярной карциномы

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

  1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
  2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
  3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно.

Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения.

При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

  1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
  2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
  3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

  • вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
  • эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
  • риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
  • риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

  • положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
  • положительный результат качественной ПЦР;
  • контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

  • до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
  • 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
  • последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
  • 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

  • сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
  • процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
  • в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
  • за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
  • если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Значение показателя Уровень вирусной нагрузки
РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы) Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии
1,8×102–7,9×105 МЕ/мл Низкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов
8×102–2,3×107 МЕ/мл Умеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача
2,4×107 МЕ/мл и выше Высокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени)

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

  • самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
  • раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
  • при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

  • позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
  • позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
  • определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.

ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.

Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл.

При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл.

Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн.

МЕ, то результат выглядит следующим образом — 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель — число копий на 1 мл крови (1 МЕ — это 4 копии РНК).

Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.

При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.

Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:

  • У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
  • Проводятся скрининговые профилактические исследования.
  • Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
  • Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
  • Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
  • У пациента диагностирован цирроз.
  • Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

  • Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
  • Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
  • Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
  • Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

Качественный анализ. Расшифровка

Обнаружено Пациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса.
Не обнаружено Пациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности.

Количественный анализ. Расшифровка

Не обнаружено Человек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/мл Концентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование.
До 8*10^5 МЕ/мл Низкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении.
Больше 8*10^5 МЕ/мл Высокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С.
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл Поскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови.
Обнаружена РНК определенного генотипа В биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3.
Обнаружена РНК вируса гепатита С В биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования.
Не обнаружено Человек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса.

Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.

В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:

  1. Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
  2. Загрязнение образца крови.
  3. Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
  4. Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса.

ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины).

С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

  • В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
  • Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
  • Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

Количественная ПЦР – молекулярно-биологический анализ, при котором подсчитывается количество генетического материала возбудителя в крови. Исследование на гепатит С (количественно) выполняется после подтверждения диагноза для определения вирусной нагрузки. Полимеразная цепная реакция характеризуется высокой специфичностью и чувствительностью. Поэтому анализ считается золотым стандартом в диагностике гепатита С.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – анализ, который основан на определении участков РНК или ДНК, специфичных для возбудителя инфекции. В качестве исследуемого материала чаще используется венозная кровь. Тест обладает высокой специфичностью, так как при исследовании плазмы выявляется генетический материал конкретного вируса.

Метод полимеразной цепной реакции впервые был запатентован в 1983 году Кэри Мюллисом. Внедрение в клиническую практику молекулярно-биологического анализа совершило переворот в диагностике бактериальных, грибковых и вирусных болезней.

ПЦР количественный при гепатите С – исследование, при котором подсчитывается количество РНК ВГС (HCV RNA). По результатам определяют вирусную нагрузку, от которой зависят:

  1. дозировка медикаментов;
  2. продолжительность противовирусной терапии (ПВТ);
  3. вероятность осложнений;
  4. успешность лечения.

РНК вируса гепатита С (ВГС) обнаруживается спустя 10-12 суток после заражения, когда до первых симптомов еще далеко. Поэтому исследование применяется для ранней диагностики HCV-инфекции.

Молекулярно-биологический анализ назначается при положительном результате скринингового обследования на гепатит – ИФА и качественной ПЦР. Исследование применяется для:

  • определения уровня виремии (вирусной нагрузки);
  • прогнозирования течения болезни;
  • оценки результативности лечения;
  • диспансерного обследования после ПВТ.

ПЦР-диагностика рекомендована всем людям с вирусным гепатитом. Точность исследования варьируется в пределах 97-99%, поэтому риск ложных результатов минимален.

  • обнаружение антител к вирусу гепатита С (anti-HCV);
  • признаки воспаления печени;
  • качественное выявление РНК ВГС;
  • острый и вялотекущий гепатит;
  • микст-гепатиты.

Количественный тест выполняется на всех этапах заболевания. Чтобы оценить результативность терапии, вирусную нагрузку определяют перед, во время и после ПВТ. Если уровень виремии высокий, увеличивается риск цирроза и рака печени. Поэтому для профилактики осложнений назначают антивирусные средства в больших дозах.

Количественный анализ ПЦР проводится в лабораторных условиях. Домашних тестов для выявления числа вирусов в крови не существует.

Объективность результатов зависит от правильности подготовки к исследованию. Чтобы снизить вероятность погрешностей, нужно:

  1. сдавать венозную кровь натощак;
  2. выполнять процедуру до 12 часов дня;
  3. не есть за полсуток до визита в лабораторию;
  4. отказаться от газированных напитков и кофе в день обследования.

Забор крови у женщин рекомендуется выполнять за 1-2 дня до менструации. В этот период иммунная защита ослабевает, поэтому сывороточная концентрация возбудителя максимальная.

За 5-7 суток до анализа исключают алкогольные напитки, жирную и острую пищу. Врачи не советуют курить за 2-3 часа до забора крови.

Точность ПЦР-диагностики на гепатит С во многом зависит от правильности сбора и транспортировки биоматериала:

  • забор крови осуществляют в условиях процедурного кабинета;
  • пользуются только одноразовыми стерильными шприцами;
  • для исключения заражения биоматериала соблюдают правила асептики и антисептики.

Контейнер с пробой маркируют в присутствии пациента, после чего отправляют в лабораторию.

Во время количественной ПЦР возбудителя идентифицируют путем обнаружения РНК в плазме крови. Это возможно за счет удвоения участка нуклеиновой кислоты вируса в среде фермента РНК-полимеразы. Во время анализа копируются (амплифицируются) только определенные участки генома.

Подсчет количества РНК вируса гепатита осуществляют в 3 этапа:

  1. Выделение генетического материала. Чтобы очистить вирусную РНК от крови и белковых включений, биоматериал пропускают через сорбенты, отмывают в растворе, центрифугируют, а потом обезвоживают. В результате остается осадок с вирусными частицами, который растворяют в специальной жидкости. На выходе получается РНК вируса гепатита в элюенте.
  2. Амплификация. Анализ выполняется в приборе-термостате, в котором периодически подогревают и охлаждают пробирки. При одном исследовании делают до 35 циклов, состоящих из 3 фаз: денатурация (разрушение) РНК, отжиг и синтез нуклеиновых кислот матричной цепи. За несколько десятков циклов в пробирке образуется множество фрагментов РНК, достаточное для подсчета количества генетического материала.
  3. Электрофорез. Пробирку с копиями вируса гепатита помещают в агарозный гель. Образец подключают к источнику тока, под действием которого фрагменты РНК разделяются. Благодаря электрофорезу копии нуклеиновых кислот становятся различимыми в свете ультрафиолета. Затем с применением специального оборудования подсчитывают количество РНК вируса.

В настоящее время для определения уровня виремии все чаще проводят ПЦР-диагностику в реальном времени (Real-Time PCR). В отличие от стандартного анализа, в образец крови вводят раствор с флуоресцентными метками. Благодаря этому удается подсчитать количество амплифицированной РНК ВГС в реальном времени после каждого цикла.

Количественная оценка позволяет судить об уровне виремии, то есть активности вирусного процесса. С учетом результатов анализа гепатолог подбирает дозу лекарства, определяет продолжительность терапии гепатита С.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С:

Данные количественной ПЦР, в МЕ/мл Трактовка
не обнаружено вариант нормы, вируса в крови нет
менее 150 содержание РНК ниже линейного диапазона концентраций, минимальная вирусная нагрузка
150-3*104 низкий уровень виремии
от 3*104 до 8*105 средняя вирусная нагрузка
более 8*105 содержание РНК ВГС выше линейного диапазона концентраций

Вирусная нагрузка – важный показатель, который учитывается при разработке схемы терапии. Если уровень виремии минимальный или низкий, прогноз течения гепатита и результативности ПВТ благоприятный. Ситуация ухудшается при средней и высокой вирусной нагрузке. Такие пациенты подвержены осложнениям – фиброзу, жировому гепатозу, циррозу.

Уровень виремии не отражает степень повреждения печеночной паренхимы или тяжесть течения гепатита. Чтобы определить серьезность изменений в печени, прибегают к инструментальному обследованию – фибросканированию, биопсии и гистологическому анализу.

Чтобы провести исследование на гепатит С (качественный и количественный ПЦР-анализ), посетите лабораторное отделение поликлиники, частную клинику или лабораторию. Стоимость диагностики в Москве зависит от:

  1. типа анализируемого биоматериала;
  2. чувствительности применяемой тест-системы;
  3. количества определяемых инфекций.

Примерная стоимость лабораторного анализа

Тип анализа Цена в рублях
забор крови 170-200
качественная ПЦР 750-1000
количественная ПЦР (реал-тайм) 3800-4000
генотипирование 1350-1400

Анализ ПЦР на гепатит С делается не более 3 часов. Забрать окончательные результаты можно уже в течение 1-2 суток.

Генетический материал возбудителя гепатита выявляется в крови спустя 1.5 недели после заражения. До этого периода содержание РНК ВГС в крови так мало, что ее нельзя обнаружить в лабораторных условиях. Для оценки вирусной нагрузки рекомендуется пользоваться высокочувствительными тест-системами: 150-1*108 МЕ/мл.

ПЦР-диагностика – исследование, достоверность результатов которого достигает 97-99%. Искажение данных возможно при:

  1. игнорировании правил подготовки к исследованию;
  2. нарушении требований антисептики;
  3. несоблюдении методики анализа крови;
  4. неправильном заборе и хранении биоматериала.

Перед обследованием пациент должен сообщить врачу о приеме медикаментов, так как их компоненты могут влиять на активность возбудителя и результаты исследования.

ПЦР-диагностика – высокоточное исследование, при котором определяют наличие и количество копий возбудителя инфекции. Получение ложноотрицательных результатов почти невозможно. Погрешности выявляются в единичных случаях при диагностике хронического гепатита вне обострения.

источник