Меню Рубрики

Как стерилизовать посуду для анализа

Соприкосновение с потенциально опасным материалом, который может быть заражен различными инфекциями, диктует необходимость правильной обработки и дезинфекции лабораторной посуды.

Материал, из которого изготавливают изделия для лабораторий (стекло, фарфор, пластик, силикон, металл, резина, латекс) влияет на выбор способа обеззараживания, применяемый к ним.

СанПиН 2.1.3.2630-10 определяет четкую последовательность обработки инструментов и предметов медицинского назначения:

  • дезинфекция;
  • предстерилизационная очистка;
  • стерилизация.

Одноразовые изделия обеззараживают в растворе дезсредства и утилизируют.
Многоразовые инструменты и посуду подвергают тщательной дезинфекции:

  1. Готовят рабочий раствор дезинфицирующего средства («Септолит Тетра») в пластиковой или эмалированной ёмкости необходимой концентрации по инструкции. Работу проводят в специальной одежде, защитных перчатках и респираторе.
  2. Посуду погружают в раствор и выдерживают время экспозиции. Изделия с остатками крови (пробирки, стекла и др.) дезинфицируют в двух ёмкостях: — в первой отмывают от крови, причем во внутренний канал (например, градуированной пипетки) с помощью груши вводят 5-10 мл дез. раствора для удаления биоматериала; — во второй замачивают в дезсредстве на 1 час.
  3. Промывают в проточной и дважды в дистиллированной воде.

Для определения остатков крови используют азопирамовую пробу.

Моют посуду в моечных, где имеется раковина с холодной и горячей водой, нагревательные приборы, необходимый инвентарь (тазы, ведра, кастрюли, сушильные доски с колышками, ерши, щетки).

Работают обязательно в защитных резиновых перчатках, которые затем обрабатывают дезсредством.

Отходы крови и других биологических жидкостей заливают раствором дезсредства, Септолит ДЦХ или Септолит Тетра. Обеззараженные жидкости выливают в канализацию.

Особенности мытья посуды в лаборатории:

  • надписи на пробирках, сделанные воском, снимают щеткой, оттирают содой;
  • белый налёт с посуды хорошо снимается 5-10% раствором соляной кислоты, в которой её замачивают на 30 минут;
  • обезжиривание проводят хромовой смесью, нагретой до 50°, которой заливают изделия;
  • новую (неиспользованную) посуду погружают в моющий раствор, кипятят 15 минут, ополаскивают и подвергают кипячению в 1-2% растворе соляной кислоты, после чего снова тщательно обмывают в проточной и 2 раза в дистиллированной воде;
  • бывшие в употреблении колбы, пробирки, пипетки, предметные и покровные стекла сначала дезинфицируют, затем замачивают на 15 минут в моющем растворе и отмывают ершиком (пипетки баллоном наполняют моющим средством), после этого ополаскивают.
  • при мытье пипеток и другой стеклянной посуды соблюдают осторожность, чтобы не отломать хрупкие части (носик, дно);
  • сушат посуду в сушильном шкафу при температуре 85°, термолабильные предметы (например, из пластика – дозаторы, капельницы, пробирки) – при 40°или при комнатной температуре на досках с колышками;
  • для более эффективной очистки пробирок используют жесткую проволоку с ватным тампоном и мандрен от тонких игл.

Мыть посуду удобно и механическим способом – в специальных моюще-дезинфицирующих машинах, ультразвуковых установках.

Стерилизацию можно проводить кипячением в дистиллированной воде в течение 15 минут (стекло, металл, резина). Паровым способом (водяной насыщенный пар под избыточным давлением при 110°) обеззараживают изделия из стекла, резины, латекса, термостойких полимеров. Воздушной стерилизации с помощью сухого горячего воздуха подвергают стекло и металл. Металлические изделия, не стойкие к коррозии, а также пластик предпочтительно обрабатывать химическим способом (в растворах дезсредств).

Для обеззараживания лабораторной посуды используются дезсредства, обладающие активностью в отношении парентеральных вирусов, с моющими свойствами, хорошо растворимые в воде. Они должны быть допущены к применению в медицинских лабораториях органами санэпиднадзора.

«Септолит Тетра»
Это дезсредство обладает прекрасными моющими свойствами, что позволяет совместить этапы дезинфекции и предстерилизационной очистки, а это значительно упрощает процесс обеззараживания медицинских изделий. Выпускается в концентрированном виде. Экономично, высокоэффективно, убивает большинство патогенных бактерий, грибов и вирусов, а также уничтожает споры.

«Септолит ДЦХ»
Это еще одно эффективное средство дезинфекции на основе активного хлора, выпускается в виде растворимых в воде таблеток. Используется для обработки и стерилизации инструментов, обеззараживания биологических отходов, утилизации крови.

Защитные перчатки DERMAGRIP HIGH RISK
Для работы с дезсредствами, инфицированным биоматериалом необходимо защищать кожу рук. Эти перчатки обладают повышенной прочностью и удлиненной манжетой, сделаны из латекса. Удобны в использовании, не разделяются на правую и левую.

источник

На результат анализа мочи большое влияние может оказать состояние посуды, в которую ее собирают. Даже небольшой налет жира или остатки моющих средств могут показать наличие в моче белка или стать причиной других отклонений от нормы анализа.

Чтобы избежать этого, необходимо правильно подобрать и подготовить посуду. Прежде всего, следует знать, что мочу собирают в ту посуду, в которой сдают анализ. Переливание из одной емкости в другую может ухудшить результат, а в некоторых случаях просто недопустимо, например, если анализ мочи надо сдавать в стерильной посуде.

Для анализов, которые необязательно сдавать в стерильной посуде, можно подготовить баночку самостоятельно. Для этих целей подойдет стеклянная посуда с плотно закручивающейся крышкой объемом 150-250 мл.

И баночку, и крышку необходимо хорошо помыть с моющим средством, а затем тщательно прополоскать под проточной водой. В завершение можно простерилизовать банку (вместе с крышкой), обдав кипятком. Горячая вода удалит остатки жира с внутренних стенок посуды, если они еще остались.

В некоторых лабораториях или для определенных видов анализов использовать домашнюю посуду не допускается, только лишь специальную.

Такая баночка правильно называется контейнером для сбора мочи. Специальная посуда для мочи представляет собой одноразовые пластиковые баночки с плотно закручивающейся крышкой.

Изготавливают их из полипропилена (такие баночки обладают высокой прозрачностью) или полистирола (имеют повышенную механическую прочность). Пластиковые контейнеры выдерживают достаточно широкий диапазон колебаний температуры, поэтому могут находиться в прохладных условиях (при хранении содержимого).

Пластиковые баночки бывают стерильными и нестерильными. Перед сдачей анализа необходимо уточнить, должна ли посуда для его сбора обладать стерильностью. Стерильный контейнер упакован в индивидуальную герметичную упаковку. При сборе мочи в стерильную баночку нельзя прикасаться к ее внутренним стенкам и внутренней поверхности крышки, оставлять открытой на длительное время (после наполнения сразу плотно закрыть крышкой). Внутри стерильной баночки может находиться вакуумная пробирка — это специальный тип контейнера для стерильного отбора мочи в пробирку.

Емкость баночек может быть разной — от 60 до 250 мл. Для сбора мочи взрослого человека лучше брать контейнер большего объема, так как наполнять его рекомендуется на 2/3. Где взять специальную баночку для анализа мочи? Приобрести их можно во многих лабораториях и аптеках.

Лучшие санатории по лечению почек и мочеполовой системы: методы лечения, условия и цены

Диагностика почек: анализы необходимые для постановки правильного диагноза

  • Посуда для анализа мочи по методу Нечипоренко — должна быть чистой и сухой, без остатков моющих средств, жиров или других загрязнений. Стерильность не требуется. Достаточный объем баночки — 150-250 мл (как сдавать анализ мочи по Нечипоренко).
  • Посуда для общего анализа мочи — должна соответствовать тем же требованиям, что и баночка для анализа по Нечипоренко (как собрать общий анализ).
  • Посуда для бактериологического исследования — основным требованием к контейнерам для бак посева является стерильность. Для определения флоры достаточно небольшого ее количества (порядка 10 мл), поэтому в качестве емкости можно использовать стерильную баночку или пробирку.
  • Анализ по Зимницкому — особых требований к баночкам нет. Главное отличие от сбора общего анализа заключается в количестве таких баночек — их должно быть 8 штук, так как мочу следует собирать каждые 3 часа на протяжении суток. Уже наполненные мочой контейнеры должны находиться в прохладе, без доступа света.
  • Посуда для сдачи суточной мочи представляет собой 2-3 литровую банку с нанесенной на стенку разметкой объема. Она должна быть чистой и снабжаться плотно прилегающей крышкой. Чаще всего, банка для сбора суточной мочи выдается лабораторией, проводящей ее анализ. На протяжении всего времени, когда собирается анализ, банка с мочой должна стоять в прохладном месте, без доступа солнечного или искусственного освещения.

Облегчить сбор мочи младенцев и маленьких детей могут специальные детские мочеприемники. Они подходят как для мальчиков, так и для девочек. Это мягкие, прозрачные мешочки с отверстием, которое с целью фиксации по периметру покрыто липким слоем. Фиксирующий слой обеспечивает надежное прилегание мочеприемника к телу и исключает протекание. После подмывания ребенка кожу надо хорошо просушить, чтобы мочеприемник хорошо держался.

После завершения мочеиспускания такой мешочек легко снимается. Он одноразовый, поэтому повторно его использовать нельзя. Если вы будете собирать мочу в такой мочеприемник первый раз, рекомендуем купить несколько штук, так как с первого раза сбор не всегда выходит удачным.

источник

Стерилизация – обеспложивание; уничтожение в каком-либо материале патогенных и непатогенных микроорганизмов в вегетативной и споровой формах.

Подготовка посуды для стерилизации. Лабораторная посуда должна быть чисто вымытой и простерилизованной. Для мытья используют растворы мыла или химические моющие средства. Новую посуду предварительно кипятят в 1-2%-м растворе соляной кислоты, во избежание последующего выщелачивания стекла. Вымытую в проточной воде посуду ополаскивают дистиллированной водой и высушивают.

Бактериологические пробирки. Конические, матровые колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, состоящими из плотно скрученных валиков ваты, покрытых слоем марли. Для бактериологических пробирок также разработаны металлические пробки в виде наружных колпачков. Следует учитывать, что стерилизация ватных пробок при высокой температуре приводит к выделению из ваты веществ, ингибирующих рост некоторых чувствительных бактерий, например бруцелл.

При монтаже пипеток в верхний конец вставляют ватный тампон. У пипеток Пастера должен быть запаян капилляр. Каждую мерную пипетку заворачивают длинной полоской бумаги шириной 4-5 см, начиная с носика, винтообразно по всей длине. Пипетки Пастера заворачивают в бумагу по 10-20 штук, пробирки – по 15-20 штук. Все виды пипеток лучше хранить до и после стерилизации в специальных металлических пеналах. Пробки на колбах дополнительно покрывают колпачками из бумаги.

Чистые чашки Петри в собранном виде перед стерилизацией заворачивают в бумагу по 3-4 штуки. После стерилизации бумага предохраняет стерильную посуду от загрязнения микрофлорой.

Посуду перед стерилизацией размещают в сушильном шкафу не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха, и следят, чтобы температура не превышала 180˚С, так как при более высокой температуре бумага и вата будут обугливаться. После окончания стерилизации сушильный шкаф не открывают до тех пор. Пока температура в нем не снизится до 70-80˚С, поскольку резкий перепад температур может привести к разрушению стекла.

Если посуда предназначена для стерилизации в ней питательных сред автоклавированием под давлением не менее 1 атм, то ее предварительно не стерилизуют. При стерилизации сред текучим паром или в автоклаве под давлением не более 0,5 атм необходимо использовать стерильную посуду.

Стерилизация сухим нагретым воздухом. Метод применяют для стерилизации чистой стеклянной посуды. Для этого используют печь Пастера – специальный сушильный шкаф с двойными стенками. Снаружи он облицован теплонепроницаемым материалом. В верхней его части находится термометр. Между теплонепроницаемой обшивкой и внутренним металлическим корпусом на дне помещен автоматический электронагревательный элемент. При включении сушильного шкафа в электросеть воздух внутри него нагревается. По достижении заданной температуры отмечают время начала стерилизации. Режим стерилизации: при температуре 155-160˚С – экспозиция 2 ч, при 165-170˚С – 1-1,5 ч, при 180˚С – 1 ч. По истечении времени стерилизации нагревание прекращают.

Автоклавирование. Это стерилизация паром под давлением в сочетании с высокой температурой в специальном аппарате – автоклаве. При встрече насыщенного пара с более холодным объектом пар конденсируется, превращаясь в воду, в результате чего выделяется большое количество тепла. Кроме того, уменьшается объем пара, что способствует его проникновению во внутренние части стерилизуемого материала. Обязательное условие – поступление действительно насыщенного пара, чтобы его соприкосновение с холодным предметом вело к немедленной конденсации и нагреванию. Промышленность выпускает вертикальные и горизонтальные автоклавы.

Вертикальный автоклав – это двустенный металлический котел цилиндрической формы, закрываемый герметично крышкой. Между стенками через специальный кран с воронкой заливают воду до определенного уровня. Внутренняя стенка котла в верхней части снабжена отверстиями, в нижней – краном, через который при нагревании воды пар вытесняет воздух из котла. Сверху на автоклав надевают металлический защитный каркас, причем между ним и самим автоклавом должно быть свободное пространство. Автоклав нагревают включением в электросеть.

Автоклав загружают стерилизуемым материалом, закрывают крышку и кран, через который заливали воду, нижний кран временно отваляют открытым. Нагреваемая вода между стенками автоклава кипит, образующийся пар поднимается вверх и через верхние отверстия внутренней стенки проходит внутрь котла, толчками вытесняя воздух через нижний открытый кран. Когда воздух весь вытеснен, и пар начинает выходить ровной струей, нижний кран закрывают. В результате давление пара внутри автоклава повышается. Началом стерилизации считают момент, когда давление достигает заданной величины (по показателям манометра). Нагрев регулируют на протяжении всей стерилизации, поддерживая давление пара на одном уровне. При чрезмерном повышении давления внутри автоклава предусмотрен предохранительный клапан, через который избыток пара автоматически выходит наружу.

При повышении давления пара соответственно повышается и температура в автоклаве.

Манометр показывает давление пара без учета окружающего атмосферного давления (760 мм рт. ст.). По истечении времени стерилизации автоклав отключают. После остывания при нулевом показании манометра открывают кран для спуска пара.

Горизонтальный автоклав отличается от вертикального конструкцией, но принцип действия у него такой же.

источник

В бактериологической лаборатории для проведения иссле­дований, хранения реактивов, взятия и транспортирования биологических материалов и других задач используют самую разнообразную посуду. Она может быть изготовлена как из стекла, так и из различных полимерных материалов. Все чаще вместо традиционной стеклянной посуды используют пласти­ковую посуду промышленного изготовления (как правило, од­нократного применения и в индивидуальной упаковке).

Читайте также:  Какие анализы сдавать на иммунитет

Мытье и обработка лабораторной посуды. Посуда для бакте­риологических исследований должна быть чистой и в боль­шинстве случаев стерильной, так как использование загрязненной, плохо вымытой посуды может привести к получению искаженных или неправильных результатов. Пластиковая по­суда однократного применения, как правило, поступает в лабораторию чистой, в индивидуальной упаковке и в большин­стве случаев в стерильном виде. Следует ориентироваться на применение такой посуды для ежедневных работ. После использования и дезинфекции пластиковая посуда однократного применения подлежит утилизации.

Для мытья лабораторной посуды многократного примене­ния из стекла и пластмасс в микробиологических лабораториях отводят отдельное помещение – моечную комнату или специальное рабочее мес­то, которое оборуду­ется большой рако­виной с подводом го­рячей и холодной воды, нагревательными приборами – газовой или электрической плитой. В моечной комнате необходимо иметь кастрюли, тазы, ведра, ерши, щет­ки и доски (или пластины из поли­мерных материалов) с колышками для сушки чистой посуды. На дно раковины кладут густую металлическую или инертную полимерную сетку, чтобы предупредить засорение канализации частицами агара, ватой, бумагой, попадающими в воду при мытье посуды. Для мытья посуды может быть использована специальная моечная машина (рис. 5.1), которая также разме­щается в моечной комнате. Мытье лабораторной посуды в такой машине осуществляется в соответствии с инструкцией производителя используемой моечной машины.

В процессе мытья на посуду воздействуют химическими и механическими факторами. К числу последних относится уда­ление загрязнений с помощью щеток и ершей. При отсутствии ершей или невозможности их использования, например в случае несоответствия ерша размеру сосуда, посуду моют с помо­щью мелко нарезанных кусочков бумаги. При этом загрязне­ние, имеющееся на внутренних стенках, удаляется механичес­ки. Наилучшие результаты мытья посуды отмечаются в тех случаях, когда воздействие механических факторов сочетается с действием химических веществ. Поэтому ерши, которыми моют посуду, предварительно погружают в соду, полужидкое мыло, мыльный раствор или раствор моющего средства. Для мытья посуды не следует применять абразивные материалы, царапающие стекло, так как поцарапанное стекло утрачивает присущую ему прочность и во время стерилизации на месте едва заметных изъянов – царапин – могут образоваться трещины, посуда может разрушиться. Для мытья посуды необхо­димо применять нейтральные моющие средства, лучше всего жидкое моющее средство «Прогресс». Можно также использовать нейтральные синтетические моющие средства, не содер­жащие биодобавок (например, «Лотос», «Кристалл», «Эра»).

Надписи, сделанные на стекле восковым карандашом или маркером, удаляются щеткой либо кусочком влажной марли с меловым порошком или содой.

Для устранения налета белого цвета, нередко появляюще­гося на стекле, посуду помещают на 30–40 мин в 5–10 % раствор хлористоводородной кислоты.

Сильно загрязненную стеклянную посуду со следами жиро­вых отложений обрабатывают в хромовой смеси. Хромовая смесь, будучи сильным окислителем, разрушает органические вещества с образованием растворимых в воде или газообразных продуктов. Перед использованием хромовую смесь подогрева­ют до температуры 45–50 °С, а затем заливают ею загрязнен­ную посуду.

Мытье новой лабораторной посуды из стекла. Новую посуду из стекла перед использованием моют мыльной водой или 0,5 % раствором моющего средства. После этого посуду опо­ласкивают проточной водопроводной водой и кипятят в 1– 2 % растворе соляной кислоты в течение 15–20 мин. После кипячения в растворе кислоты посуду прополаскивают водо­проводной, а затем дистиллированной водой.

При мытье стеклянной посуды, предназначенной для поста­новки серологических реакций, кислоты и щелочи использо­вать не следует, так как даже следовые количества этих ве­ществ, оставшиеся на стенках, могут исказить результат реак­ции. Такую посуду моют горячей водой, кладут на сетки, чтобы из нее стекла вода, затем несколько раз ополаскивают дистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу.

Мытье и обработка посуды, бывшей в употреблении. Загряз­ненная посуда, а также посуда, в которой содержался инфи­цированный материал, поступает в мойку после предваритель­ной дезинфекции, гарантирующей гибель находящихся в ней патогенных микроорганизмов. Загрязненная посуда помещает­ся в специальные биксы или ведра с крышками, после чего автоклавируется при 126 °С в течение 60 мин или при 132 °С в течение 20 мин. Нельзя освобождать от содержимого исполь­зованную посуду без предварительного обеззараживания. В ис­ключительных случаях допускается обеззараживание материа­лов кипячением в 2 % растворе пищевой соды или 0,5 % рас­творе нейтрального моющего средства в течение 60 мин с момента закипания. Кипячение в этом случае должно проис­ходить в закрытой емкости с полным погружением в раствор. Отработанные пипетки обеззараживают в высоком сосуде с полным погружением в дезинфицирующий раствор. Продол­жительность обеззараживания зависит от типа применяемого дезсредства.

При выборе методов обеззараживания следует руководствоваться СП 1.2.731–99 «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности и гельминтами». Допускают­ся также к использованию новые дезинфицирующие средства, получившие разрешение Министерства здравоохранения РФ на применение. В этих случаях следует руководствоваться ре­комендациями производителя.

Перед мытьем из пробирок, чашек, матрацев и т.п. обезза­раженные материалы по возможности выливают в канализа­цию. Для облегчения дальнейшего процесса мытья после автоклавирования обеззараженную посуду замачивают в 1 % растворе моющего средства «Прогресс» в горячей воде на 1–2 ч, тщательно промывают при помощи щеток и ершей и ополас­кивают в проточной водопроводной воде (8–10 раз при ис­пользовании моющего средства «Прогресс» и до 15 раз при использовании других средств). Не слишком загрязненную по­суду моют ершом в горячей воде с мылом или содой. Посуду со следами агара, желатина или иных компонентов питатель­ных сред за сутки перед мытьем можно залить 2–5 % раство­ром едкого натра или едкого кали. Очень загрязненную жир­ную посуду, не поддающуюся мытью обычным способом, сле­дует залить на 30–40 мин хромовой смесью, а затем обильно промыть проточной водопроводной водой и ополоснуть дис­тиллированной водой (3–4 раза). Затем посуду сушат при комнатной температуре или в сушильном шкафу.

Мытье градуированной посуды. Градуированная посуда долж­на быть абсолютно чистой и хорошо обезжиренной. На стенках плохо обезжиренной посуды при вливании в нее жидкости остается большое количество капель, вследствие чего слитый объем жидкости не будет соответствовать той величине, кото­рая указана на шкале деления. Это особенно важно при мытье градуированных пипеток объемом 1–2 мл и менее.

Мытье новых, не бывших в употреблении, градуированных пипеток нужно проводить следующим образом. С помощью резинового баллона, надетого на пипетку, всасывают в нее горячую мыльную воду, а затем помещают пипетку целиком в сосуд с таким же мыльным раствором. Чтобы вода из пипеток не вытекала, уровень жидкости в сосуде должен соответство­вать высоте пипеток. Выдержав пипетки в мыльном растворе в течение 20–30 мин, их следует прополоснуть проточной водопроводной водой и перенести в сосуд с 1–2 % раствором соляной кислоты. Сосуд затем нужно поставить на слабый нагрев и постепенно довести раствор до кипения. Затем пи­петки обрабатывают аналогично остальной стеклянной посуде.

Перед мытьем бывших в употреблении обеззараженных пи­петок из них удаляют «ватики» (внутреннюю поверхность пи­петок можно протереть при помощи плотно накрученного на конец тонкой упругой проволоки кусочка ваты или марли в виде оливы, закупорившийся канал пипетки прочищают мандреном от тонких игл шприцев или тонкой упругой проволо­кой), промывают теплой водопроводной водой под давлением и кипятят в 1% растворе бикарбоната натрия в течение 45 мин, многократно промывают водопроводной, затем дистиллиро­ванной водой. После этого пипетки высушивают, вставляют новые «ватики» и, поместив в оберточную бумагу или пенал, стерилизуют в суховоздушном стерилизаторе.

Сильно загрязненные пипетки также очищают вначале ер­шом с раствором моющего средства или соды, а затем погру­жают в хромовую смесь, налитую в ванночку или высокий сосуд. Объем смеси по высоте должен соответствовать длине обрабатываемых пипеток. В хромовой смеси пипетки выдер­живают 20–30 мин, затем в течение нескольких минут промы­вают проточной и дважды ополаскивают дистиллированной водой.

Для наиболее ответственных работ можно также использо­вать импортные градуированные пипетки однократного при­менения из пластмасс. Такие пипетки, как правило, упакованы индивидуально и уже простерилизованы производителем при помощи ионизирующего излучения.

Мытье предметных и покровных стекол. Предметные и покров­ные стекла должны иметь абсолютно чистую поверхность и быть хорошо обезжиренными. Капля воды, нанесенная на обезжирен­ную поверхность стекла, растекается равномерно. Если же стекло недостаточно обезжирено, то капля распадается на мно­жество мелких капель. Предметные и покровные стекла реко­мендуется мыть и ополаскивать в резиновых перчатках, чтобы не загрязнять их жиром, находящимся на поверхности кожи.

Покровные и предметные стекла, не бывшие в употребле­нии, моют в теплой мыльной воде и после ополаскивания заливают смесью Никифорова. Если стекла, вынутые через 2–3 дня из смеси Никифорова, сохраняют следы жира, то их складывают в фарфоровую чашечку, заливают 2–5 % раство­ром гидрокарбоната натрия или едкого натра, ставят на слабый нагрев и кипятят в течение 20–30 мин после закипания. Затем стекла ополаскивают проточной водопроводной водой, опус­кают на 10–15 мин в 5–10 % раствор хлористоводородной кислоты и затем промывают проточной водой.

Предметные и покровные стекла, бывшие в употреблении и загрязненные краской и иммерсионным маслом, обрабаты­вают следующим образом:

  • опускают на 2 ч в концентрированную серную кислоту или хромовую смесь, затем тщательно промывают проточной водопроводной водой;
  • заливают стекла 5 % раствором гидрокарбоната натрия или щелочи (едкий натр или едкое кали), ставят на слабый нагрев и кипятят в течение 30–40 мин.

Силиконирование лабораторной посуды. Силиконирование посуды, пробок и т.п. осуществляют с целью придания поверхности посуды водоотталкивающих (парафиноподобных) свойств. Тщательно вымытую и обезжиренную посуду высуши­вают и при комнатной температуре заливают на несколько Минут раствором силиконовой эмульсии (например, КЭ-10-16, ПМС-200А или ПМС-400, с массовой долей силикона 0,05– 0,5 %). После этого жидкость сливают (силиконовую эмульсию можно использовать многократно) и подсушивают посуду в речение 20–30 мин при комнатной температуре. При этом на поверхности стекла образуется тончайшая органосиликоновая Пленка с хорошими гидрофобными свойствами. Обработанную таким образом посуду помещают на 1,5 ч в сушильный шкаф при температуре 120–140 °С. Затем промывают посуду дистил­лированной водой и сушат в течение 1,5 ч при указанных выше условиях. После этого посуда готова к использованию. Пленка не смывается водой и не разрушается кислотами. Для ее уда­ления необходимо в течение 2 ч кипятить посуду в 10 % рас­творе щелочи. Качество силиконирования во многом зависит от качества мытья посуды и ее обезжиривания. Работу по силиконированию посуды проводят в лабораторном вытяжном шкафу.

Обработка резиновых пробок. Новые пробки кипятят 30 мин в 2 % растворе бикарбоната натрия, многократно промывают горячей проточной водопроводной водой (кипячение и промы­вание проводят дважды). Затем пробки кипятят 30 мин в дис­тиллированной воде, промывают и высушивают.

Пробки, бывшие в употреблении, после кипячения в 2 % растворе бикарбоната натрия ополаскивают проточной водо­проводной водой, кипятят 30 мин в дистиллированной воде, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают.

Резиновые пробки для флаконов заворачивают в крафт-бу­магу (или плотную упаковочную бумагу) либо фольгу и стери­лизуют автоклавированием.

Проверка качества мытья лабораторной посуды. Контроль чистоты мытья посуды осуществляют путем осмотра и выбо­рочного проведения тестов. Стекло вымытой и высушенной посуды должно быть прозрачным, без подтеков, пятен и по­сторонних включений. Перед сушкой для проверки чистоты посуды ее ополаскивают водой. Вода должна стекать, оставляя на поверхности стекла равномерную пленку. Плохо обезжирен­ную посуду обязательно моют повторно. Наличие остаточных жировых загрязнений может быть определено при помощи реактива, содержащего судан III (в 70 мл 90 % этилового спир­та, нагретого до 60 °С, растворяют по 0,2 г измельченной краски судан III и метиленового синего, затем добавляют 10 мл 20–25 % раствора аммиака, 20 мл дистиллированной воды и взбалтывают; такой раствор пригоден для использования в течение 6 мес.). Для этого внутреннюю поверхность вымытой и подсушенной посуды смачивают 3–5 мл красящего раствора, распределяют его по исследуемой поверхности в течение 10 с, затем быстро смывают обильной струей воды. На внутренней поверхности посуды не должно оставаться желтых пятен и подтеков.

При обработке и мытье стеклянной посуды используются моющие и дезинфицирующие средства, содержащие вещества, которые могут повлиять на рост микроорганизмов, поэтому контроль на наличие остаточных количеств моющих средств также имеет большое значение. Качество удаления моющих и моюще-дезинфицирующих средств оценивают по величине рН. Для этих целей используют рН-индикаторную бумагу с шагом измерительного диапазона не более 0,3 единицы. Предвари­тельно определяют рН воды, применяемой для ополаскивания посуды на конечном этапе. Контрольные измерения рН про­водят путем прикладывания рН-индикаторной бумаги к по­верхности вымытого мокрого стекла, прошедшего обработку. Для контроля произвольно выбирают 3–10 емкостей. Значение рН воды, полученное в результате контроля, должно соответ­ствовать рН дистиллированной воды, применяемой для опо­ласкивания.

При использовании нового моющего средства методика проверки качества мытья посуды от моющих средств и подбор режима мытья посуды осуществляется в соответствии со стандартом ИСО 9998:1991Е.

Сушка и хранение чистой лабораторной посуды. Вымытую посуду не вытирают, а сушат при комнатной температуре (хо­лодная сушка) или горячим воздухом в сушильном шкафу при температуре 80–105 °С. Для холодной сушки в лаборатории используются специальные доски из дерева или пластмассы с колышками, прикрепленными к ним под углом. Высушенную посуду просматривают на свет, поверхность стекла должна быть совершенно прозрачной, без матового налета и пятен.

Чисто вымытую и высушенную посуду, закрытую ватно-марлевыми (с бумажными колпачками или без них), резино­выми, силиконовыми пробками или металлическими крышка­ми-колпачками, хранят в местах, надежно защищенных от пыли. Для этих целей лучше всего подходят шкафы с плотно закрывающимися дверцами, ящики столов. Для размещения чистой сухой посуды на полках шкафов можно использовать фанерные ящики или клееные коробки из плотного картона, внутрь которых следует положить фильтровальную бумагу. По­суду также следует укрыть фильтровальной бумагой от попада­ния пыли и грязи.

Читайте также:  Как сделать анализ анкетирования пример

Стерилизация и подготовка лабораторной посуды к использо­ванию. Лабораторную посуду (флаконы, пробирки, бутыли, колбы и т.п.) закрывают пробками, поверх которых надевают бумажные (или фольгированные) колпачки. Колпачки обвязы­вают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновым кольцом. Перед стерилизацией чистую посуду при необходи­мости монтируют в крафт-бумагу (плотную оберточную бума­гу). Чашки Петри и пипетки стерилизуют, завернув в оберточ­ную или крафт-бумагу, либо в пеналах.

При выборе режима стерилизации специальной посуды и расходных материалов (флаконы с завинчивающимися проб­ками, металлические или силиконовые колпачки, выдержи­вающие автоклавирование, микробиологические пробки много­кратного применения и другие материалы) следует руководст­воваться рекомендациями производителя.

Стерилизацию посуды осуществляют сухим жаром в сушильном шкафу при 160 °С в течение 2 ч (или 180 °С в течение 60 мин) или текучим паром под давлением (1 атм) при темпе­ратуре 121 °С в течение 30 мин с последующим подсушиванием в сушильном шкафу при отсутствии в автоклаве вакуумной сушки.

После стерилизации посуду хранят до использования в за­крытом шкафу или ящиках с крышками не более 10 сут при ненарушенной упаковке или невскрытом пенале.

Контроль обсемененности лабораторной посуды для отбора проб. Цель – выборочный контроль качества подготовки посу­ды в отношении различных по устойчивости микроорганизмов, учитываемых при проведении анализа. При проведении кон­троля режимов суховоздушной стерилизации в полном объеме биологический, термический, химический) с рекомендуемой периодичностью контроль обсемененности стеклянных флако­нов для отбора проб в зависимости от объема стерилизуемых партий проводят не реже 1 раза в квартал. Контролю подвер­гаются все емкости, используемые для отбора проб: стеклян­ные многоразового использования после стерилизации, а также пластиковые одноразового использования, поступающие в сте­рильном виде от производителя. Контролируется общая обсемененность (стерильность) посуды и наличие спор сульфитредуцирующих клостридий.

Условия проведения испытаний в значительной мере обу­словливают качество данного вида контроля. В связи с этим его неотъемлемой частью является следующий комплекс меро­приятий:

  • анализ проводят в боксе для разливки сред или в посевных комнатах (боксах);
  • непосредственно перед исследованием проводят дезинфек­ционную обработку помещения (мытье бокса). После дез-обработки включают дополнительно бактерицидные лампы на 1,5–2 ч;
  • спецодежду для проведения анализа (халат, шапочку, четырехслойную марлевую маску) стерилизуют. Режим стерили­зации спецодежды: автоклавирование при 120±1 °С в тече­ние 45 мин или при 132±2 °С в течение 20 мин.

Перед входом в бокс сотрудник, проводящий испытания, тщательно моет руки теплой водой с мылом и щеткой, выти­рает их стерильным полотенцем, надевает стерильный халат, шапочку, маску, надевает перчатки, обрабатывает их 70 % эти­ловым спиртом. При наличии ламинарного бокса исследование выполняют в спецодежде с использованием стерильных перча­ток.

Во время испытаний обязательно проводят контроль воздуха на обсемененность микроорганизмами.

Для каждого вида анализа отбирают не менее 1 % флаконов от общего количества партии простерилизованной посуды. Партией флаконов считают все флаконы, прошедшие стерили­зацию за один цикл работы одного стерилизатора.

В случае получения результата, свидетельствующего о не­стерильности хотя бы одного флакона, все партии флаконов, прошедшие обработку в данном стерилизаторе, бракуют. За­бракованные партии флаконов подлежат повторной стерили­зации. Выясняют возможные причины нарушения стерильнос­ти. Проводят комплексную проверку стерилизатора с одновре­менным использованием химического, термического (в 5 точ­ках) и биологического контроля.

При проведении контроля используются следующие мате­риалы:

  • жидкая полноценная неселективная среда (питательный бу­льон, ГРМ-бульон и др.) проверенной ранее серии;
  • плотная полноценная неселективная среда (питательный агар, ГРМ-агар и др.) проверенной ранее серии;
  • железосульфитный агар, приготовленный согласно МУК 4.2.10181–01, либо зарубежные аналоги;
  • стерильные чашки Петри диаметром 90 мм;
  • стерильная водопроводная вода;
  • спирт ректификат 96° для фламбирования;
  • спирт ректификат 70° для дезинфекции.

Питательный бульон предварительно проверяют на стериль­ность. Для этого две пробирки от приготовленной партии бульона инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 ч – учитывают наличие (отсутствие) пророста среды. При наличии пророста партию среды выбраковывают. Контроль стерильнос­ти питательного агара и железосульфитного агара проводят в процессе исследования путем постановки отрицательного кон­троля.

Контроль на общую обсемененность. В исследуемые флаконы вносят питательный бульон в количестве 20 % от объема флакона (например, во флакон 500 мл вносят 100 мл бульона). Флаконы закрывают стерильными резиновыми (силиконовы­ми) пробками. Переворачиванием или встряхиванием флако­нов трехкратно омывают всю внутреннюю поверхность флако­на, включая пробку. Инкубацию посевов проводят в этих же флаконах при температуре 37±1 °С в течение 48±2 ч. При ви­димом росте (помутнение бульона) в каком-либо флаконе ре­зультат учитывают как «не стерильно». При сохранении про­зрачности бульона проводят контроль пророста бульона: из каждого флакона отбирают по 1 мл содержимого, вносят в две Стерильные чашки Петри и заливают питательным агаром. Параллельно для контроля стерильности используемого пита­тельного агара стерильную чашку Петри заливают тем же пи­тательным агаром (отрицательный контроль). Чашки с посева­ми инкубируют при 37 °С в течение 48 ч. Наличие пророста при условии отсутствия роста микроорганизмов в отрицатель­ном контроле свидетельствует о нестерильности флакона. Ре­зультаты заносят в протокол исследования.

Контроль на наличие спор сульфитредуцирующих клостридий проводят при помощи мембранной фильтрации. В исследуемые флаконы вносят стерильную водопроводную воду в количестве 20 % от объема флакона, флаконы закрывают стерильными резиновыми пробками. Переворачиванием или встряхиванием флаконов трехкратно омывают (смачивают) всю внутреннюю Поверхность флакона, включая пробку. Фильтровальную уста­новку фламбируют, после чего производят фильтрацию 100 мл стерильной водопроводной воды (отрицательный контроль), затем через другой мембранный фильтр без дополнительного обжига установки фильтруют весь объем смыва с флакона. Дальнейшие исследования обоих фильтров (смыва и контроля) выполняют аналогично по схеме анализа на выявление спор сульфитредуцирующих клостридий согласно МУК 4.2.1018–01. Наличие роста колоний клостридий при отсутствии роста в отрицательном контроле свидетельствует о нестерильности флакона. Результаты заносят в протокол исследования.

источник

Цель работы:познакомиться с принципами стерилизации микробиологических объектов, питательных сред, лабораторной посуды и инструментов

Оборудование:(см описание)

Стерилизация (от латинского слова sterilis — бесплодный) — обеспложивание, освобождение от всего живого. В микробиологической практике стерилизации подвергают инструменты, посуду, питательные среды и другие материалы, применяемые в работе.

Стерильность может быть достигнута при помощи физических и химических методов.

Стерилизация, в отличие от дезинфекции, предусматривает уничтожение в стерилизуемом объекте всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением, фильтрацией и т. д. Выбор того или иного способа стерилизации определяется качеством и свойствами микрофлоры стерилизуемого объекта.

Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования

Перед стерилизацией лабораторную посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажные колпачки.

Резиновые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют в отдельном пакете, привязанном к горлышку посуды. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1—10 штук. Пастеровские пипетки по 3—15 шт. заворачивают в оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в окружающую среду. При завертывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать запаянные концы капилляров. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

В верхнюю часть градуированных пипеток, как и в пастеровские пипетки, вставляют предохранительную вату и затем заворачивают в плотную бумагу, нарезанную предварительно полосками шириной 2—2,5 см и длиной 50—70 см. Полоску кладут на стол, левый конец ее загибают и завертывают им кончик пипетки, затем, вращая пипетку, навертывают на нее ленту бумаги. Для того чтобы бумага не разворачивалась, противоположный конец ее закручивают или приклеивают. На бумаге надписывают объем завернутой пипетки. При наличии пеналов градуированные пипетки стерилизуют в них.

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 180°С и 160°С соответственно 1 ч и 150 минут.

б) в автоклаве при давлении 1,5 атм. в течение 60 минут, для уничтожения споровой микрофлоры – 90 минут при 2 атм.

Стерилизация шприцев. Шприцы стерилизуют в разобранном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 минут. При работе со спороносной микрофлорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2°С (2 атм.) в течение 20 мин, при 126±2°С (1,5 атм.) — 30 мин. Простерилизованный шприц собирают после того, как он остынет, в цилиндр вставляют поршень, надевают иглу, предварительно вынув из нее мандрен. Иглу, цилиндр и поршень берут пинцетом, который стерилизуют вместе со шприцем.

Стерилизация металлических инструментов. Металлические инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) стерилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомендуется обертывать ватой.

Стерилизация бактериальных петель. Бактериальные петли, сделанные из платиновой или нихромовой проволоки, стерилизуют в пламени спиртовой или газовой горелки. Такой способ стерилизации получил название прокаливания или фламбирования.

Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не произошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. Прокаливание в целом занимает 5—7 с.

Подготовка к стерилизации и стерилизация бумаги, марли и ваты. Вату, марлю, фильтровальную бумагу стерилизуют в сухожаровой печи при температуре 160°С в течение часа от момента показания термометром данной температуры или в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.

Перед стерилизацией бумагу и марлю нарезают кусочками, а вату сворачивают в виде шариков или тампонов нужной величины. После этого каждый вид материала в отдельности по одной или несколько штук заворачивают в плотную бумагу. При разрыве пакета стерилизованный материал следует стерилизовать повторно, так как стерильность его нарушается.

Стерилизация перчаток и других резиновых изделий. Изделия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или текучим паром в течение 30 минут; при загрязнении спороносной микрофлорой—в автоклаве при давлении 1,5—2 атм. в течение 30 или 20 минут. Резиновые перчатки перед стерилизацией внутри и снаружи пересыпают тальком для предохранения их от склеивания. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю и в таком виде помещают в биксы.

Стерилизация патогенных культур микробов. Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для дальнейшей работы, складывают в металлический бак, пломбируют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры патогенных микробов, вегетативные формы, убивают в автоклаве в течение 30 минут при давлении 1 атм. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производится специально выделенным лицом под расписку. Режим стерилизации регистрируется в специальном журнале. При уничтожении культур микробов I и II групп патогенности, а также материала, зараженного или подозрительного на зараженность возбудителями, отнесенными к этим группам, баки с отработанным материалом переносят на металлических подносах с высокими бортами в присутствии сопровождающего лица, допущенного к работе с заразным материалом.

Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторе. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная образует накипь. (Стеклянные предметы погружают в холодную, металлические предметы—в горячую воду с добавлением гидрокарбоната натрия). Стерилизуемые предметы кипятят на слабом огне 30-60 минут. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения инструменты берут стерильным пинцетом, который кипятят вместе с остальными предметами.

Стерилизация сухим жаром производится в печи Пастера. Подготовленный к стерилизации материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают обогрев. Продолжительность стерилизации при температуре 150°С 2 ч, при 165°С – 1 ч, при 180°С – 40 мин, при 200°С – 10-15 мин (при 170°С бумага и вата желтеют, а при более высокой температуре обугливаются). Началом стерилизации считается тот момент, когда температура в печи достигнет нужной высоты. По окончании срока стерилизации печь выключают, но дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование трещин на горячей посуде.

Стерилизация паром под давлением.

Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. Автоклав состоит из двух котлов, вставленных один в другой, кожуха и крышки. Наружный котел называют водопаровой камерой, внутренний — стерилизационной камерой. В водопаровом котле происходит образование пара. Во внутренний котел помещают стерилизуемый материал. В верхней части стерилизационного котла имеются небольшие отверстия, через которые проходит пар из водопаровой камеры. Крышка автоклава герметически привинчивается к кожуху. Кроме перечисленных основных частей, автоклав имеет ряд деталей, регулирующих его работу: манометр, водомерное стекло, предохранительный клапан, выпускной, воздушный и конденсационный краны. Манометр служит для определения давления, создающегося в стерилизационной камере. Нормальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.) принимается за нуль, поэтому в неработающем автоклаве стрелка манометра стоит на нуле. Между показаниями манометра и температурой имеется определенная зависимость (табл.1).

Таблица 1. Соотношения показаний манометра и температуры кипения воды

Показания манометра, атм. t кипения воды,°C Показания манометра, атм. t кипения воды,°C
0,0 100° 0,8 117°
0,2 105° 0,9 119°
0,4 110° 1,0 121°
0,5 112° 1,5 127°
0,6 114° 2,0 134°
0,7 116°

Красная черта на шкале манометра определяет максимальное рабочее давление, которое допускается в автоклаве. Предохранительный клапан служит для предохранения от чрезмерного повышения давления. Его устанавливают на заданное давление, то есть, давление, при котором нужно производить стерилизацию, при переходе стрелки манометра за черту клапан автоклава автоматически открывается и выпускает лишний пар, замедляя тем самым дальнейший подъем давления.

Читайте также:  Географический язык какие анализы сдать

На боковой стенке автоклава имеется водомерное стекло, показывающее уровень воды в водопаровом котле. На трубке водомерного стекла нанесены две горизонтальные черты — нижняя и верхняя, обозначающие соответственно допускаемый нижний и верхний уровень воды в водопаровой камере. Воздушный кран предназначен для удаления воздуха из стерилизационной и водопаровой камер в начале стерилизации, так как воздух, являясь плохим проводником тепла, нарушает режим стерилизации. На дне автоклава находится конденсационный кран для освобождения стерилизационной камеры от конденсата, образующегося в период нагревания стерилизуемого материала.

Правила работы с автоклавом.

Перед началом работы осматривают автоклав и контрольно-измерительную аппаратуру. В автоклавах с автоматическим регулированием пара на электровакуумном манометре водопаровой камеры стрелки устанавливают в соответствии с режимом стерилизации: нижнюю стрелку ставят на 0,1 атм. ниже, верхнюю—на 0,1 атм. выше рабочего давления, водопаровую камеру заполняют водой до верхней отметки мерного стекла. В период заполнения водой вентиль на трубе, по которой пар поступает в камеру, держат открытым для свободного выхода воздуха из котла. Стерилизационную камеру автоклава загружают стерилизуемым материалом. После этого крышку (или дверцу) автоклава закрывают, плотно закрепляя центральным затвором или болтами; чтобы избежать перекоса, болты завинчивают крест-накрест (по диаметру). Затем включают источник подогрева (электрический ток, пар), закрывая вентиль на трубе, соединяющей источник пара со стерилизационной камерой. С началом парообразования и создания давления в водопаровой камере производят продувку (удаление воздуха из стерилизационного котла). Способ удаления воздуха определяется конструкцией автоклава. Вначале воздух выходит отдельными порциями, затем появляется ровная непрерывная струя пара, указывающая, что из стерилизационной камеры воздух полностью вытеснен. После удаления воздуха кран закрывают, и в стерилизационной камере начинается постепенное повышение давления.

Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. После этого интенсивность подогрева уменьшают, чтобы давление в автоклаве в течение нужного времени оставалось на одном уровне. По окончании времени стерилизации подогревание прекращают. Закрывают вентиль в трубопроводе, подающем пар в стерилизационную камеру, и открывают вентиль на конденсационной (нисходящей) трубе для снижения давления пара в камере. После падения стрелки манометра до нуля медленно ослабляют прижимные приспособления и открывают крышку автоклава.

Температура и продолжительность стерилизации определяются качеством стерилизуемого материала и свойствами тех микроорганизмов, которыми он заражен.

Контроль температуры в стерилизационной камере осуществляется периодически с помощью бактериологических тестов. Биотесты изготовляются бактериологическими лабораториями ЦСЭН. В случае непрохождения данных тестов производят проверку технического состояния автоклава.

Стерилизация текучим паром.

Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха или в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Аппарат Коха представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном. Пространство между верхней и нижней пластинками дна заполняют на 2/3 водой (для спуска оставшейся после стерилизации воды есть кран). Крышка аппарата имеет в центре отверстие для термометра и несколько небольших отверстий для выхода пара. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего контакта его с паром. Началом стерилизации считается время с момента закипания воды и поступления пара в стерилизационную камеру. В текучепаровом аппарате стерилизуют, главным образом, питательные среды, свойства которых изменяются при температуре выше 100°С. Стерилизацию текучим паром следует проводить повторно, так как однократное прогревание при температуре 100°С не обеспечивает полного обеззараживания. Такой метод получил название дробной стерилизации: обработку стерилизуемого материала текучим паром проводят по 30 минут ежедневно в течение 3 дней. В промежутках между стерилизациями материал выдерживают при комнатной температуре для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях.

Тиндализация—дробная стерилизация с применением температуры ниже 100°С, предложенная Тиндалем. Прогревание стерилизуемoгo материала производят в водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу при температуре 60—65°С в течение 5 дней или при 70— 80°C в течение 3 дней. В промежутках между прогреваниями обрабатываемый материал выдерживают при температуре 25°С для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях. Тиндализацией пользуются для обеспложивания питательных сред, содержащих белок.

Механическая стерилизация с помощью бактериальных ультрафильтров. Бактериальные фильтры применяют для освобождения жидкости от находящихся в ней бактерий, а также для отделения бактерий от вирусов, фагов и экзотоксинов. Вирусы бактериальными фильтрами не задерживаются, и поэтому ультрафильтрацию нельзя рассматривать как стерилизацию в принятом значении этого слова. Для изготовления ультрафильтров применяют мелкопористые материалы (каолин, асбест, нитроцеллюлоза и др.), способные задерживать бактерии.

Асбестовые фильтры (фильтры Зейтца) представляют собой асбестовые пластинки толщиной 3—5 мм и диаметром 35 и 140 мм для фильтрации малых и больших объемов жидкости. В нашей стране асбестовые фильтры, изготовляют двух марок: «Ф» (фильтрующие), задерживающие взвешенные частицы, но пропускающие бактерии, и «СФ» (стерилизующие), более плотные, задерживающие бактерии. Перед употреблением асбестовые фильтры монтируют в фильтровальные аппараты и вместе с ними стерилизуют в автоклаве. Асбестовые фильтры используются однократно. Мембранные ультрафильтры изготавливаются из нитроцеллюлозы и представляют собой диски белого цвета диаметром 35 мм и толщиной 0,1 мм.

Бактериальные фильтры различаются по величине пор и обозначаются порядковыми номерами (табл. 2).

Таблица 2 Бактериальные фильтры

N фильтра Средний диаметр пор, мкм N фильтра Средний диаметр пор, мкм
0,3 0.9
0,5 1,2
0,7

Непосредственно перед употреблением мембранные фильтры стерилизуют кипячением. Фильтры помещают в дистиллированную воду, подогретую до температуры 50— 60°С, чтобы предупредить их скручивание, кипятят на слабом огне в течение 30 минут, меняя 2—3 раза воду. Простерилизованные фильтры во избежание их повреждения вынимают из стерилизатора фламбированным и остуженным пинцетом с гладкими кончиками.

Для фильтрации жидкостей бактериальные фильтры монтируют в специальные фильтровальные приборы, в частности, в фильтр Зейтца.

Он состоит из 2-х частей: верхней, имеющей форму цилиндра или воронки, и нижней—опорной части аппарата, с так называемым фильтровальным столиком из металлической сетки или чистой керамической пластинки, на которую помещают мембранный или асбестовый фильтр. Опорная часть аппарата имеет форму воронки, суживающаяся часть которой находится в резиновой пробке горлышка колбы Бунзена. В рабочем состоянии верхнюю часть прибора фиксируют на нижней с помощью винтов. Перед началом фильтрации места соединения различных частей установки для создания герметичности заливают парафином. Отводную трубку колбы присоединяют толстостенной резиновой трубкой к водоструйному, масляному или велосипедному нacocy. После этого в цилиндр или воронку аппарата наливают фильтруемую жидкость и включают насос, создающий вакуум в приемном сосуде. В результате образующейся разности давлений фильтруемая жидкость проходит через поры фильтра в приемник. Микроорганизмы остаются на поверхности фильтра.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Как то на паре, один преподаватель сказал, когда лекция заканчивалась — это был конец пары: «Что-то тут концом пахнет». 8454 — | 8060 — или читать все.

источник

Для работы в бактериологической лабо­ратории используют Лабораторную посуду: Чашки Петри, пробирки различного размера, пастеровские пипетки, колбы, бактериологичес­кие петли, инструменты, предметные и покровные стекла, карандаш по стеклу (стеклограф), стерилизаторы, дистилляторы и т. п.

Посуду моют в специально оборудованных мойках. Новую посуду кипятят в 1 %-ном растворе пищевой соды или мыльной воде в течение 15-20 мин, промывают водой, помещают на несколько часов в слабый раствор соляной кислоты, затем тщательно ополаскивают дистиллиро­ванной водой. Посуду, бывшую в употреблении, выдерживают в течение 2 ч в смеси серной кислоты с дихроматом калия (100 частей кислоты, 50 частей дихромата калия на 1000 частей воды), затем моют ершами в горячей воде, кипятят в мыльной воде или в 1 %-ном растворе гидрокарбоната натрия и тщательно прополаскивают. Вымытую посуду помещают в сушильный шкаф. Предметные стекла после мойки протирают чистой полотняной салфеткой и хранят в склянках с при­тертой пробкой в смеси спирта и эфира или хорошо завернутыми в чистую бумагу.

Посуду для стерилизации готовят следующим способом. Пробирки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, завертывают по 10— 15 шт. в бумагу. На колбы надевают бумажные колпачки, перевязы­вают от попадания пыли.

В один конец градуированных пипеток вставляют ватный тампон, затем вращательным движением обматывают длинной тонкой полос­кой бумаги шириной 4-5 см. При этом концы пипеток должны быть тщательно завернуты бумагой.

В концы пастеровских пипеток вставляют ватные тампоны, а затем по несколько штук завертывают в бумагу или помещают в специаль­ные пеналы.

Чашки Петри завертывают по 3-4 шт. в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или в автоклаве.

Колбы и пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками, мясо-пептонного бульона, агара и других сред помещают в стерилизующий аппарат.

Лабораторную посуду, питательные среды и другие материалы стерилизуют.

Стерилизация Это полное уничтожение всех микроорганизмов (патогенных и сапрофитных) на стерилизуемом объекте.

Стерилизацию проводят различными методами: кипячением, паром под давлением (в автоклавах), текучим паром (в аппаратах Коха), сухим жаром (в печах Пастера), фильтрованием материала через бактериальные фильтры, прокаливанием на пламени горелки и др.

Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторах. Кипяче­нием обычно стерилизуют инструменты в течение 30-40 мин. Однако при этом методе не всегда достигают полного уничтожения микробов. Споры некоторых микроорганизмов выдерживают кипячение бо­лее 3 ч.

Прокаливание на пламени применяют для стерилизации бакте­риологических петель, игл, скальпелей, ножниц, пинцетов и др.

Пастеризация — Это термическая обработка продуктов при темпе­ратуре ниже 100 °С с последующим быстрым охлаждением до 6-9 °С.

При пастеризации погибают неспоровые микроорганизмы, умень­шается общее количество микробов. Пастеризацию проводят при различных режимах: длительная при 63-65 «С в течение 20-30 мин; кратковременная при 75 °С от нескольких секунд до 5 мин; моменталь­ная при 90-93 °С без выдержки. Охлаждение стерилизуемого продукта необходимо для того, чтобы предотвратить прорастание в вегетатив­ные клетки спор, сохранивших жизнеспособность после однократного прогревания.

Стерилизацию и пастеризацию проводят в различных стерили­зующих аппаратах.

источник

Стерилизация — это уничтожение в материалах, продуктах, жидкостях, на поверхностях посуды и оборудования всех видов микроорганизмов и их спор. Мы уже рассказывали о таком способе стерилизации, как автоклавирование, упоминали другие способы стерилизации. Сегодня расскажем о самых популярных из них подробнее.

Стерилизация сухим теплом

Часто применяется в лабораторной практике. Для этого используются суховоздушные термостаты или сушильные шкафы. Высокие температуры гораздо эффективнее убивают живые клетки микроорганизмов, чем низкие температуры. Многие бактерии способны пережить обработку даже жидким кислородом при температуре -252 °С.

Обработка сухим теплом менее эффективна, чем влажным. Для полного уничтожения микроорганизмов в условиях влажного тепла нужно выдержать материал около 30 минут при +110-130 °С, а в суховоздушном шкафу — 45 минут при +180 °С.

Сухим теплом стерилизуют лабораторную стеклянную посуду (колбы, пипетки, пробирки, чашки Петри и пр.) при +160-200 °С. Чем ниже температура, тем дольше длится стерилизация: от 2 часов при +160 °С до 15 минут при +200 °С.

Стерилизация влажным теплом

Процедуру проводят в аппаратах Коха, похожих на бытовую пароварку. Вода кипит в нижнем отделении и пар стерилизует материалы, помещенные в верхнее отделение. Такой стерилизации обычно подвергают микробиологические среды, которые нельзя нагревать выше +100 °С.

Часто применяют дробную стерилизацию: выдерживают обрабатываемый раствор в течение часа при температуре около +70 °С, потом снижают температуру до оптимального для микроорганизмов уровня на сутки и опять нагревают, уничтожая все проросшие клетки. Так повторяют три-четыре раза.

Кипячением стерилизуют медицинские металлические инструменты, шприцы, резиновые перчатки, пинцеты, резиновые груши и т.п. Время процедуры отсчитывают от того момента, когда закипела вода.

Металлические инструменты кипятят в слабом (двухпроцентном) растворе гидрокарбоната натрия, который не оказывает на металл коррозионного действия.

Уничтожать микроорганизмы можно рентгеновским, альфа-, бета- и гамма, нейтронным, УФ-излучением. Обычно этот метод применяется на производствах. В лабораториях и медицинских учреждениях часто применяют бактерицидные лампы и установки типа «Амбилайф» для очистки воздуха и поверхностей в помещении.

Применяется для обработки продуктов питания и некоторых лабораторных образцов. Она подразумевает уничтожение многих живых микроорганизмов, грибковых спор при температуре не более 80 °С, в течение 10 минут или менее. При этом вкусовые качества продуктов не изменяются. Кроме этого, сохраняются некоторые виды полезных бактерий.

Этим методом стерилизуют микробиологические петли и иглы, концы пинцетов, сверла для пробок и т. п., иногда стеклянные принадлежности. Прокаливание производится в пламени газовой горелки. Более технологичный способ — прокаливание при температуре до +850 °С в электрическом стерилизаторе. В этом случае удается избежать загрязнения инструментов продуктами горения пламени.

Для стерилизации питательных сред или жидкостей, разрушающихся при нагревании, используется фильтрование под вакуумом через специализированные фильтры. Фильтры подбирают таким образом, чтобы диаметр отверстий был меньше размера бактерий. Применяются фильтры фарфоровые, стеклянные, из глинозема, асбестовые, мембранные и др. Для того, чтобы оптимизировать процесс фильтрации, выпускаются специальные приборы со встроенным вакуумным насосом, например, система вакуумной фильтрации Lafil 400-LF 30.

Для химической дезинфекции применяются самые разнообразные вещества:

  • этиловый и изопропиловый спирты;
  • соединения хлора (гипохлорит натрия, хлорамины) и йода;
  • соединения тяжелых металлов, например, ртути, серебра;
  • производные фенола;
  • микробоцидные (убивающие микробы) газы, к которым относят пары формальдегида, пропиолактона, оксид этилена.

Химическая стерилизация используется в лабораториях для оперативной обработки, а также в тех случаях, когда невозможно использовать другие методы.

источник