Меню Рубрики

Как сдают анализ методом пцр

Анализ на ПЦР инфекции – один из самых часто используемых методов диагностики венерических заболеваний.

Он имеет ряд преимуществ по сравнению с другими методиками.

Тест очень чувствительный и высокоспецифичный.

Он занимает минимум времени, недорого стоит и может найти ДНК инфекционного агента в любом биоматериале.

  • Принцип ПЦР анализа
  • ПЦР диагностика половых инфекций
  • Когда анализы ПЦР положительные после заражения
  • Какие инфекции можно выявить в ПЦР мазке
  • Какие инфекции можно сдать в ПЦР крови
  • ПЦР мочи на инфекции
  • ПЦР анализы: контроль после лечения
  • Как подготовиться к ПЦР мазку и крови
  • Больно ли сдавать мазок на ПЦР
  • Анализ ПЦР на инфекции с количественной оценкой
  • Ложноположительный анализ ПЦР
  • Ложноотрицательный анализ ПЦР
  • Отличия ПЦР от ИФА крови
  • Анализ ПЦР на 12 инфекций

Анализы на инфекции методом ПЦР позволяют обнаружить ДНК или РНК возбудителя в исследуемом материале.

В основе лежит реакция многократного копирования участка ДНК.

После чего он сравнивается с эталоном.

Таким образом, в процессе исследования можно понять, присутствует ли в клиническом материале образец ДНК определенного микроорганизма.

Исследование проводится целенаправленно для выявления определенного участка нуклеиновой кислоты.

Например, если врач берет анализ ПЦР на хламидии, то невозможно случайно выявить в образце трихомонаду.

Потому что лаборант не сравнивает участок генома трихомонады с той ДНК, что содержится в пробе.

Обычно пациента обследуют сразу на несколько инфекций.

Например, взяв мазок из уретры, в нем ищут ДНК хламидии, трихомонады, полового герпеса, гонококка.

На какие инфекции нужно обследовать пациента, врач определяет, исходя из выявленных симптомов, данных анамнеза и других факторов.

Методика широко применяется в венерологии.

Потому что она позволяет выявить любые виды патогенных микроорганизмов, провоцирующих воспалительный процесс урогенитального тракта.

Для исследования в основном используются:

  • уретральные соскобы;
  • сперма;
  • моча;
  • сок простаты;
  • вагинальные и цервикальные мазки.

Многие инфекционные заболевания могут поражать структуры глаза, глотку, анус.

Поэтому из этих органов тоже берутся мазки.

Некоторые половые инфекции выявляются при помощи ПЦР в крови.

Преимущества диагностики инфекций методом ПЦР в венерологии:

  • возможность выявления заболеваний на ранней стадии;
  • можно диагностировать даже субклинические формы (без выделений и других симптомов);
  • почти не встречаются ошибочные результаты;
  • выявляется точный вид микроорганизма, что облегчает подбор терапии;
  • могут определяться количественные показатели.

ПЦР диагностика инфекций может применяться для выявления инфекционных заболеваний на ранних стадиях.

Обнаружить вирусную или бактериальную ДНК можно ещё в инкубационном периоде.

Симптомов ещё нет, но выделение возбудителя во внешнюю среду уже есть.

Иногда выявить при помощи ПЦР инфекции можно уже через несколько дней после незащищенного полового акта.

Тем не менее, сдавать анализы сразу не рекомендуется.

Потому что в этот период бактериальных клеток в урогенитальном тракте очень мало.

Они могут не попасть в мазок.

Соответственно, в этом случае не будут обнаружены эти инфекции методом ПЦР.

Чтобы снизить риск ложноотрицательного результата, сдавать анализы желательно:

  • через 2 недели после незащищенного полового контакта;
  • сразу после появления симптомов, если они возникли раньше, чем через 2 недели.

Для диагностики большинства инфекций берут мазок или соскоб из различных участков тела.

Их берут оттуда, где имеется воспалительный процесс.

Либо данные анамнеза указывают, что инфекция могла попасть в соответствующую область тела.

Например, при наличии в анамнезе анального полового контакта доктор возьмет мазок из ануса.

Если же таких данных нет, ограничится уретральными и вагинальными мазками.

В большинстве случаев инфекции, которые передаются половым путем, первично поражают уретру.

Хотя возможны и другие локализации.

Например, у женщин трихомонада и кандида чаще вызывают воспаление во влагалище.

Хламидия первично поражает шейку матки.

У мужчин кандида или гарднерелла могут инфицировать головку пениса, но при этом не колонизировать уретру.

Герпетическая и папилломавирусная инфекциям может вызвать воспаление где угодно: не только на гениталиях, но и возле них – в паху, на лобке и т.д.

Поэтому в каждом случае врач в индивидуальном порядке решает, откуда взять мазки.

Он учитывает:

  • данные анамнеза – чем болен партнер, от которого могло произойти заражения, какие виды секса практиковала пара;
  • жалобы – где у пациента болит, зудит, откуда появились выделения;
  • данные объективного исследования – доктор смотрит, где располагается сыпь, участки покраснения или отечности.

Например, если при осмотре горла венеролог заметит покраснение, то он может взять мазок для исследования ПЦР на инфекции.

В том числе в случаях, когда пациенты отрицают оральные половые контакты.

Кровь тоже может быть исследована методом ПЦР.

Таким способом выявляются некоторые вирусные инфекции.

В первую очередь к ним относятся:

Исследование может проводиться на сифилис.

Но оно информативно только начиная со вторичного периода.

В первичном для обнаружения ДНК бледной трепонемы используют соскоб с первичной сифиломы.

Не только мазки, но и моча может быть использована для выявления инфекций.

Правда, не все патогены могут быть обнаружены таким способом.

Вирусы, паразитирующие внутриклеточно, выявляются только в соскобе эпителиальных клеток.

Поэтому, если нужно провериться, к примеру, на вирус папилломы человека, то моча не подходит.

Не используется она также, если очаги воспаления расположены в других участках (не в уретре).

Например, если при трихомониазе у женщин наблюдаются симптомы со стороны влагалища, то у неё берут вагинальный мазок.

То же самое касается хламидиоза, который часто поражает цервикс, и при этом может не обнаруживаться в уретре.

Нежелательно исследовать мочу на кандидоз, особенно если основная область поражения у мужчин – головка, а у женщин – влагалище.

Кроме того, мочу не всегда целесообразно использовать при необходимости получения количественных показателей (концентрация копий ДНК).

Но в ряде случаев моча вполне подходит как материал для диагностики.

В этом клиническом материале при помощи ПЦР могут обнаруживаться ряд инфекций:

Чаще моча исследуется у мужчин, чем у женщин.

Её берут в основном при преобладании симптомов уретрита в клинике инфекции мочеполовой системы.

ПЦР используют не только для первичной диагностики венерических инфекций.

Методика также применяется с целью контроля излеченности.

Под ним подразумевается оценка результатов лечения.

Критериями выздоровления пациента являются:

  • устранение клинических симптомов;
  • эрадикация возбудителя или уменьшение его количества до безопасного уровня.

Для подтверждения излеченности анализы обычно сдаются спустя 2-4 недели после завершения курса антибиотикотерапии.

Раньше сдавать анализы нет смысла.

Потому что будет высокая вероятность ложноотрицательных результатов.

После курса антибиотиков количество бактерий, грибков или простейших значительно уменьшается.

Они не всегда могут быть обнаружены.

Бывают и обратные ситуации.

Ложноположительные результаты ПЦР могут быть обусловлены тем, что обнаруживается ДНК погибших микроорганизмов.

Они больше не представляют угрозы.

Тем не менее, все равно определяются, и человек может получить повторно курс терапии, который на самом деле ему не нужен.

Поэтому необходимо выждать необходимый период времени, прежде чем сдать анализы для контроля излеченности.

К анализу крови готовиться не нужно.

А вот для сдачи мазка нужна определенная подготовка.

Есть некоторые запреты, которых должен придерживаться человек, если он хочет, чтобы результаты были достоверными.

Эти запреты соблюдаются для того, чтобы не допустить:

  • попадание в урогенитальный тракт бактерий или других микроорганизмов от другого человека;
  • угнетение флоры, результатом чего становится снижение её количества в верхних отделах урогенитального тракта и повышение риска ложноотрицательного анализа ПЦР.

Необходимо за 2 суток до взятия мазка для ПЦР прекратить любые половые контакты.

Не только вагинальные, но и все прочие.

За 2 недели нельзя использовать антибиотики.

За 3 дня нельзя применять любые лекарственные средства местного действия.

И не только лекарства, но и косметику, лубриканты и т.д.

Женщинам запрещено пользоваться тампонами, делать любые интравагинальные процедуры (в том числе диагностические) в течение 2 суток.

Кроме того, анализы не сдаются в период менструаций.

Некоторые пациенты, особенно мужчины, переживают, что сдавать мазок – это больно.

Действительно, процедура – не из приятных.

Врач помещает внутрь уретры на несколько сантиметров щеточку.

Ею выполняют вращающие движения.

В результате щеточка соскабливает клетки эпителия с поверхности слизистой.

Этот процесс может сопровождаться болевыми ощущениями.

Многие врачи делают процедуру неосторожно, не обращая внимания на её переносимость.

Но в нашей клинике в лечебном процессе главное не только результат.

Мы следим, чтобы диагностические и терапевтические процедуры хорошо переносились пациентами.

Поэтому принимаем необходимые меры, чтобы мазок из уретры был для мужчины безболезненным.

С этой целью мы применяем местную аппликационную анестезию.

Мы наносим специальный крем.

Он содержит в составе анестетики, которые выключают чувствительные нервные окончания на некоторое время.

В результате мужчина ничего не чувствует во время взятия мазка.

ПЦР может быть количественной и качественной.

Чаще применяется качественный тест.

Потому что для большинства инфекций вполне достаточно ответа «да или нет», чтобы принять решение о назначении терапии или оценить её эффективность.

То есть, если микроорганизм есть в урогенитальном тракте, то человек болен.

Никаких промежуточных вариантов быть не может.

Это касается многих возбудителей: сифилиса, гонореи, трихомониаза, хламидиоза и т.д.

Их не должно быть в урогенитальном тракте вообще.

Поэтому лечение проводится до тех пор, пока результаты анализов ПЦР на инфекции будут отрицательными.

Но иногда требуются количественные данные.

В ПЦР диагностике инфекций расшифровка концентрации помогает понять:

  • нужно ли пациенту лечение;
  • насколько высока вероятность, что именно этот микроорганизм вызывал появление симптомов;
  • эффективно ли проходит лечение;
  • можно ли прекращать терапию или её нужно продолжать дальше.

Результат измеряется в копиях ДНК.

Считается, что некоторые микроорганизмы становятся патогенными, только если количество их больше 10 в 4 степени.

К ним относятся кандиды, гарднереллы, микоплазмы, уреаплазмы.

Врач может назначить лечение при концентрации ДНК свыше 10 в 4 степени, даже если симптомов воспаления нет.

Если же они есть, терапия назначается и при выявлении патогена в меньших количествах.

Но лишь при условии, что не обнаружены другие бактерии или грибы, способные вызывать аналогичные симптомы.

Количественные показатели также используются для оценки излеченности.

Например, кандид не обязательно уничтожать полностью.

Если их количество уменьшилось до 10 в 3 степени и меньше, при этом симптоматика отсутствует, то лечение прекращают.

Ложноположительным называется результат ПЦР, при котором у человека обнаруживают инфекцию, если на самом деле её нет.

Встречаются подобные явления достаточно редко.

Это возможно лишь в таких ситуациях:

  • исследуемый материал загрязнен (произошла контаминация);
  • в биоматериале выявляется ДНК бактерий, которые имеют генетическое сходство с искомым возбудителем (например, при гонококковой инфекции в мазке изо рта могут быть выявлены непатогенные нейссерии).

Ложноотрицательным называют такой результат, при которой ПЦР не выявляет инфекцию, которая на самом деле есть в организме.

Встречается это очень редко.

Потому что ПЦР обладает высокой чувствительностью.

Обычно достаточно 100 копий ДНК или даже меньше, чтобы ПЦР дала положительный результат.

Но все же ложноотрицательные анализы встречаются.

Их причины могут быть следующими:

  • мутации – изменения генома микроорганизма (мутантные штаммы встречаются редко);
  • применение антибиотиков до забора мазка;
  • очень низкое количество бактерий в материале (ниже порога чувствительности теста);
  • неправильное взятие мазка (не из зоны воспалительного процесса, там может не оказаться возбудителя).

Так как результаты ПЦР могут быть в некоторых случаях неправильными, для их уточнения могут использоваться дополнительные тесты.

Одним из них является ИФА.

Метод основан на определении уровня антител в крови.

Антитела – это иммунные белки, выделяющиеся лимфоцитами в ответ на заражение инфекцией.

Метод сам по себе не обладает высокой достоверностью.

Обычно он лишь дополняет или уточняет результаты ПЦР.

ИФА имеет определенные преимущества.

Они состоят в следующем:

  1. Возможность выявления инфекции, вне зависимости от её локализации.

Не важно, поразила хламидия уретру, глаза или глотку.

В любом случае ИФА покажет положительный результат.

Потому что антитела вырабатываются и попадают в кровь, где и обнаруживаются.

  1. Оценка стадии заболевания.

На основе количества и динамики различных антител можно выявить, давно ли произошло заражения.

А также провести дифференциальную диагностику первичной инфекции от рецидива.

  1. Выявление осложнений половых инфекций.

Например, при кандидозе поверхностном ИФА крови дает отрицательные результаты.

Но если болезнь осложняется, развивается инвазивный кандидоз, то в крови появляются иммуноглобулины.

В нашей клинике можно сдать анализы ПЦР на 12 инфекций по доступной цене.
Это комплексное обследование на все часто встречающиеся венерические болезни.

Оно предполагает выявление в мазке:

  • хламидий;
  • гонококков;
  • 2 видов уреаплазм;
  • 2 видов микоплазм;
  • герпеса;
  • трихомонады;
  • гарднереллы;
  • кандиды;
  • папилломавируса;
  • цитомегаловируса.

Это исследование проводится чаще всего при появлении симптомов воспаления урогенитального тракта.

Его также можно делать с профилактической целью людям, которые имеют в течение года более 2 половых партнеров.

Если вам необходимо сдать анализ на ПЦР инфекции, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

  • ВИЧ
  • Гарднереллез
  • Кондиломатоз
  • Молочница
  • Сифилис
  • Трихомониаз
  • Баланопостит
  • Герпес
  • Гонорея
  • Микоплазмоз
  • Уреаплазмоз
  • Уретрит
  • Хламидиоз
  • ЗППП

источник

Не так давно был разработан надежный, высокочувствительный и быстрый метод диагностики различных инфекционных заболеваний человека. Такой способ имеет название «анализ ПЦР». Что это такое, в чем его сущность, какие он может выявить микроорганизмы и как правильно его сдавать, мы расскажем в нашей статье.

Изобрел способ полимеразной цепной реакции (ПЦР) американский ученый Кэри Мюллис в 1983 г. Изначально запатентован метод диагностики компанией «Цетус Корпорейшн», в которой и работал его создатель. Но в 1992 г. все права и патенты были проданы компании «Хоффман-Ля Рош». После чего оказалось, что параллельно похожие исследования проводились и были зафиксированы другими американскими биологами, такими как Элис Чен, Дэвид Эдгар, Джон Трел. В 1980 г. занимались данной проблемой и советские ученые А. Слюсаренко, А. Каледин и С. Городецкий. Поэтому определить единственного правообладателя оказалось невозможным. Многие выдающиеся биохимики внесли определенный вклад в разработку методики полимеразной церной реакции и запатентовали свои нововведения. На данный момент анализ методом ПЦР проводят повсеместно в специально оборудованных лабораториях.

Анализ ПЦР: что это такое и как он работает? Сущность метода заключается в том, чтобы с помощью специального фермента ДНК-полимеразы в искусственных условиях увеличить в объеме определенную микробную среду. Для этого многократно преумножают имеющийся ДНК-материал. Таким образом, при наличии патогенного микроорганизма в образце его количество будет увеличено за счет биохимических лабораторных манипуляций, и бактерию не составит труда обнаружить в микроскоп.

Для проведения анализа требуется:

  • ДНК-матрица;
  • праймеры, соединяющие концы фрагмента материала;
  • термоустойчивый фермент ДНК-полимеразы;
  • химические вещества, обеспечивающие правильную работу ферментов;
  • буферный раствор, необходимый для создания соответствующих условий для роста и развития ДНК-материала.
Читайте также:  Какие анализы нужно принести гастроэнтерологу

Для выполнения ПЦР выполняют 25-30 повторов, состоящих из трех стадий: денатурации, отжига и элонгации.

Для анализа полимезарной цепной реакции используют специальный прибор – амплификатор. Современное оборудование позволяет устанавливать необходимую программу нагревания и охлаждения пробирок для устранения ошибок во время проведения диагностики.

Метод полимезарной цепной реакции используют в различных областях медицины:

  • криминалисты с его помощью идентифицируют генетический материал, например волосы, слюну или кровь;
  • анализ крови ПЦР помогает при генотипировании, например для обнаружения индивидуальной генетически заложенной реакции на определенный лекарственный препарат;
  • с помощью такого метода устанавливают наличие родственных связей между людьми;
  • самым востребованным ПЦР-метод стал в медицинской диагностике для определения различных инфекционных заболеваний.

Итак, медицина давно и успешно использует анализ ПЦР. Что это такое, мы уже узнали. А каких возбудителей можно обнаружить с его помощью? Методом ПЦР диагностируются следующие инфекционные заболевания:

  • гепатиты А, В, С;
  • уреаплазмоз;
  • кандидоз;
  • хламидиоз;
  • микоплазмоз;
  • гарднереллез;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • трихомониаз;
  • папилломавирусная инфекция;
  • туберкулез;
  • герпесная инфекция 1-го и 2-го типов;
  • хеликобактериоз;
  • цитомегаловирус;
  • дифтерия;
  • сальмонеллез;
  • ВИЧ-инфекция.

Также методы ПЦР используются в диагностике онкозаболеваний.

Диагностика ПЦР обладает рядом преимуществ:

  1. Высокая чувствительность. Даже при наличии всего нескольких молекул ДНК микроорганизма анализ ПЦР определяет наличие инфекции. Поможет метод при хронических и латентно протекающих заболеваниях. Часто в таких случаях микроорганизм является некультивируемым иными способами.
  2. Для исследования подходит любой материал, например слюна, кровь, половые выделения, волосы, клетки эпителия. Наиболее распространенным является анализ крови и урогенитального мазка на ПЦР.

Чтобы результаты были достоверными при проведении исследования ПЦР, сдать анализ нужно, соблюдая рекомендации по предварительной подготовке к диагностике:

  1. Перед сдачей слюны следует воздержаться от приема пищи и лекарств за 4 часа до забора материала. Непосредственно перед процедурой прополощите рот кипяченой водой.
  2. Вышеуказанными правилами нужно руководствоваться и при взятии образца с внутренней поверхности щеки. После полоскания рекомендуют провести легкий массаж кожи для выделения секрета железы.
  3. Мочу обычно собирают в домашних условиях. Для этого нужно провести тщательный туалет половых органов. В стерильный пластиковый контейнер необходимо собрать 50-60 мл мочи. Для обеспечения чистоты материала рекомендуется женщинам вставить тампон во влагалище, а мужчинам максимально оттянуть кожную складку. Нельзя сдавать материал в период менструальных выделений.
  4. Для сдачи спермы нужно воздержаться от полового акта в течение 3 дней до забора материала. Также врачи советуют отказаться от посещения сауны и принятия горячей ванны, употребления алкоголя и острой пищи. За 3 часа до анализа нужно воздержаться от мочеиспускания.
  5. Для сдачи урогенитального мазка, например если проводится анализ на хламидии ПЦР, как женщинам, так и мужчинам рекомендуется половой покой в течение 3 дней. За 2 недели до анализа нельзя принимать антибактериальные препараты. За неделю нужно прекратить использование интимных гелей, мазей, влагалищных свечей, спринцевание. За 3 часа до исследования нужно воздержаться от мочеиспускания. Во время менструаций забор материала не проводится, лишь спустя 3 дня после прекращения кровяных выделений можно взять урогенитальный мазок.

В период ожидания малыша многие инфекционные заболевания, передающиеся половым путем, являются крайне опасными для нормального развития плода. ЗППП могут спровоцировать внутриутробную задержку развития, выкидыш или преждевременные роды, врожденные пороки ребенка. Поэтому крайне важно пройти на ранних сроках беременности обследование методом ПЦР. Сдать анализ необходимо при постановке на учет – до 12 недель.

Забор материала происходит из канала шейки матки с помощью специальной щеточки. Процедура безболезненная и не представляет опасности для малыша. Обычно во время беременности проводят анализ на хламидии ПЦР-методом, а также на уреаплазмоз, микоплазмоз, цитомегаловирус, герпес, папилломавирус. Такой комплекс обследования называют ПЦР-6.

В связи с тем, что метод полимеразной цепной реакции очень чувствителен к изменениям в организме и условиям проведения диагностики, многие факторы могут повлиять на результат. Поэтому анализ ПЦР на ВИЧ-инфекцию не является достоверным методом, его эффективность — 96–98 %. В остальных 2-4 % случаев тест дает ложноположительные результаты.

Но в некоторых ситуациях без ПЦР-диагностики ВИЧ не обойтись. Обычно ее проводят людям с ложноотрицательным результатом ИФА. Такие показатели говорят о том, что у человека еще не выработались антитела к вирусу и их невозможно выявить без многократного увеличения количества. Именно этого можно достичь, проведя анализ крови ПЦР-методом.

Также необходима такая диагностика детям первого года жизни, рожденным от ВИЧ-позитивной матери. Метод является единственным способом достоверного определения статуса ребенка.

Метод полимеразной цепной реакции позволяет обнаружить ДНК вируса гепатитов А, В, С задолго до образования антител к инфекции или появления симптомов болезни. Особенно эффективным является анализ ПЦР на гепатит С, так как в 85 % случаев такое заболевание протекает бессимптомно и без своевременного лечения переходит в хроническую стадию.

Своевременное обнаружение возбудителя поможет избежать осложнений и длительного лечения.

Комплексный анализ ПЦР: что это такое? Это обследование методом полимезарной цепной реакции, которое включает в себя определение одновременно нескольких видов инфекций: микоплазмы гениталиум, микоплазмы хоминис, гарднереллы вагиналис, кандиды, трихомонады, цитомегаловируса, уреаплазмы уреалитикум, герпеса 1-го и 2-го типов, гонореи, папилломавируса. Цена такой диагностики колеблется от 2000 до 3500 руб. в зависимости от клиники, используемых материалов и оборудования, а также от вида анализа: качественного или количественного. Какой необходим в вашем случае – решит врач. В одних случаях достаточно лишь просто определить наличие возбудителя, в других, например при ВИЧ-инфекции, важную роль играет количественный титр. При диагностике всех вышеперечисленных возбудителей обследование называют «анализ ПЦР-12».

Расшифровка анализа ПЦР не представляет сложности. Есть лишь 2 шкалы показателя — «положительный результат» и «отрицательный результат». При обнаружении возбудителя врачи могут с 99%-й уверенностью подтвердить наличие заболевания и приступить к лечению пациента. При количественном методе определения инфекции в соответствующей графе будет указан числовой показатель обнаруженных бактерий. Только врач может определить степень заболевания и назначить необходимое лечение.

В некоторых случаях, например при определении ВИЧ-инфекции методом ПЦР, при отрицательном результате возникает необходимость проведения дополнительных обследований для подтверждения полученных показателей.

Где сдать ПЦР-анализ: в государственной поликлинике или в частной лаборатории? К сожалению, в муниципальных медицинских учреждениях аппаратура и методы нередко устаревшие. Поэтому лучше отдать предпочтение частным лабораториям с современным оборудованием и высококвалифицированными кадрами. Кроме того, в частной клинике вы получите результаты значительно быстрее.

В Москве многие частные лаборатории предлагают проведение анализа ПЦР на различные инфекции. Например, в таких клиниках, как «Вита», «Комплексная клиника», «Счастливая семья», «Уро-Про», проводят анализ ПЦР. Цена обследования составляет от 200 руб. за определение одного возбудителя.

Можно сделать вывод, что диагностика инфекционных заболеваний методом ПЦР в большинстве случаев является быстрым и достоверным способом обнаружения возбудителя в организме на ранних сроках инфицирования. Но все же в определенных случаях стоит выбрать другие способы диагностики. Определить необходимость проведения такого исследования может только специалист. Расшифровка анализа ПЦР также требует профессионального подхода. Следуйте рекомендациям врача и не сдавайте самостоятельно анализы, в которых нет необходимости.

источник

Все чаще в медицинской практике стали применять новый метод диагностики инфекционных заболеваний, который имеет аббревиатуру ПЦР. В чем заключается сущность такого метода исследования и какие заболевания можно благодаря ему выявить, а также в чем достоинства ПЦР в сравнении с другими распространенными способами диагностики и как правильно подготовиться к анализу, можно узнать, прочитав данную статью.

Аббревиатура ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Это возможность участка ДНК пропорционально приумножаться при необходимых условиях. Изобретена ПЦР-диагностика инфекций еще в 1980-х годах. Работали над открытием европейские, американские и советские ученые, поэтому определить первоизобретателя инновационного диагностического метода не представляется возможным. Кроме того, начиная с 1983 года, когда был официально зарегистрирован такой метод исследования инфекционных заболеваний, как ПЦР, продолжается работа по усовершенствованию данного способа. На сегодняшний день такой метод диагностики применяют практически в каждой медицинской лаборатории, имеющей современное необходимое оборудование.

Для анализа ПЦР, в зависимости от медицинских показаний, необходимо провести медицинский забор таких материалов, как кровь, слюна, моча, сперма, грудное молоко или половые выделения, эпителиальные клетки. Диагностика инфекций методом ПЦР заключается в том, чтобы обнаружить ДНК возбудителя в исследуемом материале. С помощью специальных лабораторных манипуляций с использованием химических реактивов и оборудования лаборанты проводят полимеразную цепную реакцию. С ее помощью незаметный в микроскоп участок ДНК возбудителя разрастается до заметных в прибор размеров. Именно поэтому можно обнаружить возбудителя инфекции даже при наличии незначительного участка его ДНК в исследуемом материале.

Способна обнаружить целый ряд патогенных микроорганизмов ПЦР-диагностика инфекций. Расшифровка результатов сводится к обнаружению возбудителя и определению его вида. С помощью полимеразной цепной реакции диагностируют различные заболевания человека: от передающихся половым путем до бессимптомных, так называемых скрытых инфекций. С помощью ПЦР находят:

  • вирус гепатита (А, В, С);
  • уреплазму уреалитикум;
  • уреплазму парвум;
  • хламидию трахоматис;
  • кандиду;
  • микоплазму хоминис;
  • микоплазму гениталиум;
  • гарганеллу вагиналис;
  • трихомоназ;
  • микобактерию туберкулеза;
  • вирус герпеса простого 1 и 2 типа;
  • вирус папилломы;
  • вирус Эпшетейна-Барра;
  • хеликобактер пилори;
  • вирус иммунодефицита.

Вышеперечисленные микроорганизмы вызывают такие заболевания, как гепатит, туберкулез, ИППП и СПИД.

ПЦР-диагностика инфекций проводится в виде качественного (то есть определяют наличие или отсутствие возбудителя) и количественного анализа (высчитывают количество микроба в организме – такой подход необходим, например, при диагностике ВИЧ-инфекций и гепатита).

Практически в каждой лаборатории сегодня проводят диагностику инфекций человека с помощью полимеразной цепной реакции. В чем же достоинства такого метода, почему он стал невероятно популярным как среди медиков, так и в среде пациентов за такой короткий промежуток времени? Объясняется такое стремительное распространение инновационной технологии высоким уровнем достоверности, эффективности и чувствительности. Рассмотрим подробнее достоинства метода диагностики ПЦР:

  1. Процесс проведения анализа максимально автоматизирован, что исключает человеческий фактор при проведении исследования и расшифровке результата.
  2. Благодаря современным технологиям культуры выращиваются в течение 4–6 часов, а соответственно, получить результат анализа можно в день сдачи материала для исследования.
  3. ПЦР-диагностика инфекций обладает высокой чувствительностью, что позволяет обнаружить возбудителя даже при наличии незначительного участка ДНК. В некоторых случаях, например, при вялотекущих и бессимптомных заболеваниях, посев культур иным методом является затруднительным или полностью невозможным.
  4. Материалом для исследования методом ПЦР могут стать кровь, слюна, урогенитальные выделения, эпителиальные клетки, моча, сперма, что крайне удобно при невозможности взятия для анализа определенного материала. Для диагностики инфекционных заболеваний обычно используют венозную кровь и урогенитальный мазок.
  5. Методом полимеразной цепной реакции можно определить несколько возбудителей из одного материала. Такой подход не только сокращает время для постановления правильного диагноза, но и экономит затраты на исследование.
  6. Метод ПЦР считается достоверным, так как было отмечено лишь небольшое количество ложноотрицательных результатов. Ложноположительных ответов зафиксировано до сегодняшнего дня не было.

Какими бы достоинствами ни обладала ПЦР-диагностика инфекций, применяют такой метод не всегда. Например, при диагностике токсоплазмоза полимеразную цепную реакцию проводят только в том случае, если анализ ИФА показал сомнительный или спорный результат. С помощью метода ПЦР невозможно проследить динамику заболевания. Отметим следующие случаи, когда данный метод исследования принесет достоверные и эффективные результаты:

  • для определения инфекционных заболеваний, указанных выше, в соответствующем разделе статьи;
  • широко распространена ПЦР-диагностика урогенитальных инфекций;
  • для определения ИППП во время беременности;
  • для диагностики ВИЧ;
  • при спорных медицинских ситуациях для подтверждения или опровержения предварительного диагноза;
  • для определения отцовства и родственных связей;
  • применяют в генотипировании для обнаружения наследственных предрасположенностей;
  • помогает метод ПЦР работникам криминалистического отдела медицины для идентификации генетического материала.

Обследование ПЦР-методом назначается в обязательном порядке беременной женщине при постановке на учет с целью ранней диагностики инфекций, передающихся половым путем. Так как такие заболевания крайне опасны для нормального протекания периода вынашивания ребенка. ИППП провоцируют замирание развитие плода, выкидыши, внутриутробные уродства, мертворождение, врожденные патологии. Своевременное обнаружение и лечение инфекции значительно повышают шансы на благоприятный исход беременности и рождение здорового малыша.

Обычно будущей маме назначается комплексное обследование, которое имеет название «ПЦР 6». Такое исследование включает анализ на 6 разных инфекций. Проводится как в государственных, так и в частных учреждениях ПЦР-диагностика: «Инвитро», «Счастливая семья», «Уро-Про» и другие лаборатории предлагают такую услугу. Более подробно этот вопрос описан ниже.

Таким образом, понадобится лишь один раз провести забор материала для анализа. При проведении ПЦР-диагностики во время беременности необходим урогенитальный мазок, который берется из канала шейки матки гинекологической щеточкой. Такая процедура не вызывает болезненных ощущений у беременной и никак не влияет на плод.

Часто назначают ПЦР-диагностику для обнаружения возбудителя гепатита. Объясняется это тем, что такое заболевание нередко протекает бессимптомно и переходит в хроническую тяжелую трудноизлечимую стадию. С помощью ПЦР определяют гепатит на самых ранних этапах, что способствует благоприятному излечению в максимально короткие сроки. Проводится в большинстве частных лабораторий такая ПЦР-диагностика инфекций. Цена зависит от типа определяемого вируса и вида анализа. Так, простое определение наличия или отсутствия ДНК возбудителя в крови стоит 400–600 р. Количественный метод обойдется в 1200-1500 р.

Для еще более эффективной результативности метода ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний широко применяют комплексное исследование, которое способствует сокращению сроков постановки диагноза и своевременному лечению. Так, лаборатории предлагают анализ «ПЦР-6» и «ПЦР-12». В первый комплекс входит ПЦР-диагностика половых инфекций, таких как:

  • уреплазмоз;
  • хламидиоз;
  • микоплазмоз;
  • папилломавирус человека;
  • простой герпес;
  • цитомегаловирус.

Такое исследование часто назначается женщинам на ранних сроках беременности, а также в период планирования зачатия.

При проведении «ПЦР-12», помимо вышеуказанных заболеваний, диагностируют следующие:

  • гонорею;
  • кандидоз;
  • бактериальный вагиноз;
  • трихомониаз;
  • уреплазмоз;
  • герпес 1 и 2 типа.

В зависимости от лаборатории, перечень исследуемых заболеваний, входящих в комплекс, может различаться. Врач подберет в каждом конкретном случае наиболее подходящий вариант обследования. В любом случае комплексный анализ методом ПЦР займет гораздо меньше времени, сил и материальных затрат.

Подготовка к анализу методом ПЦР заключается в соблюдении рекомендаций по забору определенного вида материала:

  1. Сдавая урогенитальный мазок, следует воздержаться от полового контакта за трое суток до предполагаемого анализа, прекратить прием антибактериальных препаратов и местных мазей, кремов, свеч, нельзя проводить процедуру спринцевания. Во время менструальных выделений забор материала не проводится – необходимо провести анализ не ранее, чем через 3 дня после завершения менструаций. Следует воздержаться от мочеиспускания за 3 часа до анализа.
  2. Венозную кровь лучше сдавать с утра, натощак (хотя это не является правилом). Накануне следует ограничить употребление алкоголя и жирной пищи.
  3. При сдаче спермы необходимо воздерживаться от полового контакта трое суток. Рекомендуется ограничить употребление спиртного, посещение сауны, прием горячей ванны.
  4. Мочу следует сдавать утреннюю, предварительно проведя тщательный туалет половых органов. Лучше собирать материал в специальную стерильную емкость. Материал следует доставить в лабораторию в течение нескольких часов.
Читайте также:  Какие анализы сдавать для уролога

Не вызывает сложностей интерпретация результатов, после того как была проведена ПЦР-диагностика инфекций. Расшифровка качественного метода заключается в оценке наличия или отсутствия в исследуемом материале возбудителя, а также в определении вида патогенного микроорганизма. Если в исследуемом материале был обнаружен участок ДНК микроба, то записывается положительный результат на соответствующем бланке, а также указывается, какой именно вид микроба был определен. При отсутствии патогенного микроорганизма в материале результат будет отрицательным.

Полученные результаты количественного анализа, например при диагностике гепатита, необходимо расшифровывать с помощью норм, указанных лабораторией. Так как единицы измерения и количественный фактор значительно отличаются в разных медицинских диагностических учреждениях. Достоверно, с учетом всех сопутствующих факторов, расшифровать такой анализ может только врач.

На сегодняшний день практически каждая частная лаборатория предлагает такую услугу, как ПЦР-диагностика инфекций.

  1. «Инвитро» — цена проводимых данной лабораторией исследований и качество зарекомендовали себя не только в России, но и в Украине, Казахстане, Белоруси. Отзывы пациентов свидетельствуют о высоком качестве предоставления медицинских услуг, быстром получении достоверных результатов. Но ценовая политика соответствует высокому качеству. Так, за анализ методом ПЦР на одну инфекцию, например гепатит, необходимо будет заплатить около 700 р. За сбор материала берут отдельную плату – это еще 400р. Значительно дешевле обойдется комплексное исследование «ПЦР-6» в данной лаборатории – такой анализ стоит 1445 р., в него входят исследования шести инфекций, передающихся половым путем.
  2. Лаборатория «Хеликс» также заслуживает достойные отзывы потребителей. Современные технологии и оборудование, высококвалифицированный персонал и умеренные цены заслужили положительные отзывы. Стоимость анализа на одну инфекцию методом ПЦР составляет 290 р., дополнительно нужно оплатить забор материала. В зависимости от его вида такой платеж составит от 25 р. (моча) до 550 р. (урогенитальный мазок с секретом простаты).
  3. Лаборатория «СитиЛаб» отличается тем, что выполняет практически любой анализ методом ПЦР в течение суток, в то время как другие предоставляют готовый результат только через 2 дня. Заплатив немного больше, можно получить ответ даже в день сдачи анализа. Ценовая категория приблизительно следующая: анализ на определение хламидий стоит 230 р., «ПЦР-6» обойдется в 1430 р., а количественный анализ гепатита С – 12650 р. Стоит отметить, что в данной лаборатории представлен широкий выбор комплексных анализов методом ПЦР. Это является несомненным достоинством при диагностике заболеваний.

Проводится ПЦР-диагностика и в государственной поликлинике на платной основе. Следует отметить, что стоимость таких анализов незначительно ниже по сравнению с исследованиями в частной лаборатории. А вот оборудование и материалы значительно отличаются – по этому критерию частные клиники явно выигрывают. Проконсультируйтесь с лечащим врачом по поводу выбора лаборатории для сдачи анализа методом ПЦР в вашем регионе.

источник

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – наиболее информативный, точный и современный метод диагностики инфекционных заболеваний, позволяющий обнаружить возбудителя в организме пациента, даже если количество вредоносных клеток исчисляется единицами, и они пока не успели спровоцировать развитие болезни. Еще 25 лет назад врачи не могли даже мечтать о таких возможностях, а сегодня сдать анализ ПЦР можно в любой крупной лаборатории.

ПЦР-диагностика открыла перед людьми многие другие ценные перспективы – с помощью этой методики можно изучать генные мутации, устанавливать отцовство, вычислять риск развития онкологических заболеваний, оценивать возраст и происхождение археологических артефактов и даже доказывать вину преступников, обнаруживая их ДНК в уликах. Но сегодня мы обсудим именно медицинский аспект этого открытия и расскажем вам, какие заболевания можно диагностировать методом ПЦР, как сдавать анализ и что означают его результаты.

Любое живое существо на Земле, будь то человек, животное или микроб, имеет гены – носители наследственной информации, которые представляют собой участки ДНК или РНК с определенной последовательностью нуклеотидов, уникальной для каждого организма. ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота) образует длинные молекулы, состоящие из двух нитей, закрученных в спираль друг относительно друга, и эти нити собираются из нуклеотидов, как из бусинок.

Допустим, требуется увидеть, есть ли в биологическом материале пациента ДНК или РНК инфекционного возбудителя или ее фрагменты. Но как это сделать, если молекулы крошечные и их мало? Методика ПЦР дает ответ: можно искусственно размножить вредоносную ДНК или РНК в лабораторных условиях, чтобы без труда ее обнаружить и идентифицировать.

Суть полимеразной цепной реакции состоит в том, чтобы разъединить нити молекул и попытаться «подсадить» к их противоположным концам фрагменты ДНК или РНК возбудителей – если они подойдут, значит, это и есть искомый микроб. А добавленный в пробирку фермент под названием «ДНК-полимераза» запустит синтез новых копий нужных участков молекул, они многократно размножатся и станут заметны. Далее мы опишем простыми словами, как происходит этот удивительный процесс и для чего это необходимо.

Американский ученый Кэрри Муллис изобрел ПЦР в 1983 году, а спустя десять лет, в 1993 году, получил за свое открытие Нобелевскую премию по химии. Однако методика была несовершенной и требовала существенных доработок. На сегодняшний день существует уже более десятка видов ПЦР для разных диагностических целей.

Итак, мы знаем, что длинная молекула ДНК или РНК образована двумя цепочками нуклеотидов, всего их бывает пять типов:

Ген – это устойчивая, многократно повторяемая уникальная комбинация нуклеотидов, и в одном гене их может быть несколько десятков или даже сотен, но все они располагаются друг напротив друга в строгом соответствии с правилом комплементарности. Это означает, что напротив гуанина в одной нити может стоять только цитозин из другой нити, а напротив аденозина – только тимин, иначе молекула ДНК не сложится и не закрутится в спираль. При этом пары «А – Т», «Т – А», «Г – Ц» и «Ц – Г» могут сочетаться в любых комбинациях: повторяться несколько раз подряд или идти вразнобой.

Схематически это можно представить так:

У РНК вместо тимина есть урацил, и такие молекулы выступают носителями генетической информации у некоторых вирусов, называемых ретровирусами. Например, у вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

Вот это свойство – комплементарность – является ключевым для ПЦР-диагностики. Ведь чтобы началась амплификация (синтез дополнительных копий участков ДНК на родительской матрице), нужно чтобы «подсаженный» фрагмент ей подходил. Такой фрагмент называется праймером или попросту «затравкой» и содержит до тридцати нуклеотидов, расположенных в уникальной для каждого возбудителя последовательности. Праймеры для проведения ПЦР-анализов производятся отдельно и доставляются в лабораторию в готовом виде. На сегодняшний день в распоряжении врачей есть праймеры сотен различных бактерий, вирусов и простейших.

Чтобы процесс начался, необходимо соблюсти ряд условий: добавить нужные реагенты и создать особый температурный режим. Все это происходит в приборе под названием «амплификатор» или «термоциклер», который может обеспечить нагревание и охлаждение пробирок с точностью до 0,1°C. Современные модификации амплификаторов могут замораживать и хранить готовые материалы, а некоторые даже имеют встроенный флуоресцентный детектор для определения результатов анализа ПЦР в режиме реального времени, когда нужно вычислить вирусную нагрузку (об этом мы расскажем ниже).

Внутри амплификатора взятый у пациента биоматериал проходит несколько десятков циклов, каждый из которых состоит из трех стадий: денатурации, отжига и элонгации. Это самая интересная часть ПЦР-диагностики, давайте рассмотрим весь процесс в подробностях, а начнем с необходимых реагентов.

Стандартный набор выглядит так:

Биоматериал, предположительно содержащий ДНК возбудителя заболевания;

Праймеры, то есть два комплекта нуклеотидов, комплементарных противоположным концам цепочек нужного фрагмента ДНК;

ДНК-полимераза – термостабильный фермент, который выступает катализатором реакции амплификации. К этому ферменту очень серьезные требования: он должен сохранять активность при высокой температуре длительное время – несколько часов, пока повторяются циклы ПЦР. Поэтому для проведения анализа используются ферменты, выделенные из термофильных микроорганизмов: Thermus aquaticus (Taq-полимераза), Pyrococcus woesei (Pwo-полимераза), Thermus thermophilus (Tth-полимераза), Pyrococcus furiosus (Pfu-полимераза) и другие;

Mg2+, то есть ионы магния, двухвалентного металла, необходимого ДНК-полимеразе для эффективной работы;

dATP, dGTP, dCTP и dTTP, четыре дезоксирибонуклеозидтрифосфата, из которых будут строиться новые фрагменты цепочек ДНК;

Буферный раствор, позволяющий поддерживать оптимальные условия – в него входят некоторые соли и сывороточный белок альбумин.

Итак, реагенты помещены в пробирку, она установлена в амплификатор, что же происходит дальше? Запускается повторяющийся цикл из трех стадий, целью которых является амплификация ДНК инфекционных возбудителей, если таковые будут обнаружены в пробе.

Амплификатор нагревает пробирку до 94-98 °C и сохраняет такую температуру на протяжении 30 секунд – 2 минут, чтобы цепочки ДНК разошлись в стороны. Конкретное значение температуры и времени зависит от типа полимеразы и от того, какого именно микроба ищут. По-другому этот период называется стадией плавления. Большинство видов ПЦР-диагностики требуют прогрева пробирки перед первым циклом в течение 2-5 минут.

В игру вступают праймеры – один из них комплементарен первой нити развалившейся надвое цепочки ДНК, а другой подходит ко второй нити, причем, праймеры ограничивают начало и конец того участка молекулы, который необходимо достроить. Праймеры называют «затравкой», потому что фермент полимераза катализирует производство новых копий нужного фрагмента ДНК именно после соединения праймеров с родительской матрицей.

Чтобы это соединения произошло, амплификатор должен понизить температуру пробирки. Как правило, отжиг с праймерами производится при температуре на 5 °C ниже, чем нужно для их денатурации. Если установить слишком высокую температуру, праймеры будут плохо соединяться с матрицей, а если слишком низкую, они могут прикрепиться не в том месте, где нужно. Поэтому лучше показывают себя праймеры с температурой плавления выше 60 °C, ведь они позволяют проводить отжиг и элонгацию одновременно при 60-75 °C. Стадия отжига длится 30 секунд, и за этот короткий период полимераза уже успевает катализировать синтез двух-трех сотен новых нуклеотидов.

Происходит собственно амплификация, то есть размножение нужного участка вредоносной ДНК, если таковая обнаружена. В рамках одного цикла количество участков увеличивается вдвое, каждый последующий цикл опять приводит к двукратному увеличению их числа, то есть действует принцип геометрической прогрессии. А всего за время ПЦР-анализа проводится 30-50 циклов, что по времени занимает 2-3 часа.

Температура элонгации и длительность этой стадии зависит от того, какая полимераза используется и какова длина размножаемого участка ДНК. Например, для Taq и Pfu-полимеразы оптимальна температура 72 °C, при этом фермент произведет 1000 пар оснований за 1 минуту. По окончанию всех циклов ПЦР, как правило, запускают дополнительную, финальную стадию элонгации – она длится около 10 минут и позволяет достроить все оставшиеся участки ДНК.

Существует два способа определения итогов ПЦР-анализа: традиционный – электрофорез, когда в реакции задействуются обычные праймеры, а оценку результатов проводит человек, и более современный – сканирование в режиме реального времени, когда «затравки» меченые, а их свечение регистрирует прибор.

В первом случае все цепочки ДНК сортируются по размерам. У этого способа есть существенные недостатки: во-первых, лаборанту приходится открывать пробирки с материалом, следовательно, в них могут попасть посторонние фрагменты ДНК из соседних пробирок (контаминация ампликонами), и тогда результат анализа ПЦР будет ложноположительным. Во-вторых, оценку производит человек, что называется, «на глаз», поэтому достоверность полученных данных целиком зависит от внимательности и профессионализма специалиста.

В случае с ПЦР-диагностикой в режиме реального времени (Real-Time PCR) влияние человеческого фактора на итоги исследования минимально – пробирки помещаются в современный высокотехнологичный прибор и ни разу не открываются на протяжении всех циклов, включая анализ результатов, который тоже проводит умная машина. У этого способа только два очевидных недостатка – высокая стоимость и ограниченная доступность, поскольку амплификаторами нового поколения оснащена далеко не каждая лаборатория.

ПЦР-диагностика активно используется во многих отраслях клинической медицины:

Урогинекология и дерматовенерология. Это, пожалуй, самые заинтересованные в ПЦР врачебные направления. С помощью соответствующего анализа можно диагностировать любые заболевания, передающиеся половым путем: гонорею, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз, гарднереллез и т. д. Метод ПЦР позволяет обнаружить и вирусы, часто поражающие органы половой сферы человека – например, генитальный герпес или папилломовирус. А эти возбудители, как известно, обладают онкогенной активностью, то есть могут провоцировать развитие злокачественных опухолей (рака шейки матки у женщин, рака предстательной железы у мужчин);

Инфектология и эпидемиология. На втором (а возможно и на первом) месте по частоте использования ПЦР-диагностики находится инфекционная медицина, поскольку обсуждаемая методика позволяет диагностировать все распространенные заразные болезни, некоторые из которых несут смертельную угрозу здоровью людей и представляют эпидемиологическую опасность. Речь идет о ВИЧ, гепатитах, сифилисе, холере, бруцеллезе, токсоплазмозе, дифтерии, туляремии и прочих серьезных заболеваниях;

Донорство и трансплантология. ПЦР-диагностика позволяет службе крови оценивать качество донорского материала: выявлять опасных возбудителей и отсортировывать непригодный материал. А при пересадке органов очень важно оценить совместимость тканей донора и реципиента – тут на помощь тоже приходит методика ПЦР;

Генетика и репродуктология. С помощью специальных разновидностей ПЦР-анализа можно установить отцовство, просчитать риск возникновения опасных генных мутаций у предполагаемого потомства пары, обратившейся в центр планирования семьи, а также изучить взятый у беременной женщины биоматериал (например, амниотическую жидкость) с той же целью – вовремя обнаружить тяжелый порок развития плода;

Акушерство и неонатология. Современные родильные дома тоже часто используют ПЦР-диагностику, а некоторые даже имеют собственную лабораторию. Это нужно для того, чтобы максимально оперативно обследовать новорожденных малышей при подозрении на наличие у них внутриутробной или полученной во время родов инфекции: ВИЧ, сифилиса, хламидиоза, цитомегаловируса, мононуклеоза, краснухи и других;

Пульмонология и фтизиатрия. Метод ПЦР дает возможность специалистам этих врачебных направлений бороться с редкими, устойчивыми штаммами бактерий, вызывающих респираторные заболевания, например, атипичный хронический бронхит. В этом случае успех лечения целиком зависит от того, удастся ли точно идентифицировать возбудителя болезни и назначить адресную терапию. Кроме того, ПЦР-анализ позволяет проводить максимально раннюю диагностику туберкулеза;

Гастроэнтерология и аллергология. Врачи этих двух специальностей тоже крайне заинтересованы в методе ПЦР, поскольку он дает возможность обнаружить главную причину развития гастрита и язвы желудка – коварную бактерию Хеликобактер пилори, а также установить индивидуальную непереносимость продуктов питания у конкретного человека. Существуют врожденные особенности работы пищеварительного тракта, не позволяющие правильно перерабатывать и усваивать некоторые компоненты пищи, например, глютен или лактозу. Эти особенности наследуются генетически, следовательно, могут быть обнаружены методом ПЦР. Кстати, если у кого-то из родителей есть аллергия на определенный продукт (орехи, грибы, цитрусовые), то велика вероятность того, что у ребенка возникнет такая же проблема;

Читайте также:  Простата анализ какие надо сдать

Онкология. Специалисты этого серьезнейшего направления медицины используют ПЦР-диагностику для оценки риска развития злокачественных опухолей у пациента, поскольку те клетки человеческого тела, которые подвергаются мутации и начинают бесконтрольно делиться, меняют структуру своей ДНК и начинают отличаться от здоровых клеток. Необходимо взять пункцию или биопсию подозрительных тканей и изучить материал методом ПЦР, чтобы установить масштабы угрозы.

А вот лишь неполный список тех вредоносных микроорганизмов, которые можно обнаружить с помощью ПЦР-анализа:

Обширное семейство герпес-вирусов, в том числе цитомегаловирус, варицелла-зостер, вирус Эпштейна-Барра и другие;

источник

Среди современных методов диагностики одним из наиболее точных и информативных считается мазок на ПЦР. Преимуществом метода полимеразной цепной реакции является возможность использования любого биологического материала. Чаще всего соскоб для лабораторного исследования берут из половых органов мужчин и женщин с целью обнаружения и профилактики инфекций, передающихся половым путем.

Метод ПЦР применяется не только в медицине. Его используют в археологии, генетике, криминалистике. Разработчиком этого вида диагностики является американский химик Кэри Мюллис – лауреат Нобелевской премии. Кстати, самую престижную международную награду он получил за открытие метода ПЦР.

Благодаря полимеразной цепной реакции у ученых появилась возможность определять сходство ДНК, устанавливать отцовство и родственные связи. И все же основным предназначением мазка методом ПЦР принято считать диагностику инфекционных заболеваний у человека.

Полимеразная цепная реакция представляет собой высокоточный способ молекулярно-генетического исследования, проведение которого позволяет выявлять вирусные, генетические и наследственные патологии. Преимущество данной методики заключается в возможности определения болезнетворных агентов не только на острой или хронической стадии заболевания, но и в инкубационный период, то есть до того, как проявятся первые симптомы патологии.

Мазок на ПЦР никогда не дает ложноположительного ответа. Этим и отличается данный метод диагностики от других. Если инфекции в организме нет, пациент не получит положительный результат – в этом можно не сомневаться. Сегодня анализ на полимеразную цепную реакцию сдают с целью определить тип возбудителя и его количество.

Ни один из методов исследования не способен найти возбудителя непосредственно в гене, содержащемся в исследуемых материалах. ПЦР – это максимально точный и достоверный анализ на венерические заболевания и латентные вирусы в организме. В отличие от иных способов диагностики, анализ полимерной цепной реакции имеет ряд преимуществ:

  • он нацелен на обнаружение возбудителя инфекции;
  • является универсальным, поскольку позволяет выявлять сразу несколько типов инфекционных агентов;
  • при этом достаточно использования только одного биологического образца пациента;
  • обладает сверхчувствительностью, за счет чего вероятность возможных перекрестных реакций равняется нулю.

В сравнении с методом бактериологического посева, мазок на ПЦР считается самым надежным и быстрым диагностическим способом. Сама процедура лабораторной диагностики не занимает более четырех часов. Для получения результата бакпосева требуется не менее семи дней. Суть этого метода состоит в следующем: образец биоматериала помещают в благоприятную среду и наблюдают за активностью возбудителей, если таковые обнаруживаются, на протяжении всего периода исследования.

Анализ мазка на ПЦР способен раскрыть любое количество инфекционных возбудителей в организме, включая «скрытые» вирусы, не проявляющие себя никакой симптоматикой в течение длительного времени. Этот диагностический метод применяют тогда, когда необходимо подтвердить или опровергнуть наличие у пациента:

  • вирусного гепатита;
  • уреаплазмоза;
  • хламидиоза половых путей;
  • вируса папилломы человека;
  • герпеса;
  • злокачественных клеток;
  • микоплазмоза;
  • вагиноза;
  • мононуклеоза;
  • трихомониаза;
  • ВИЧ-инфекции.

В качестве исследуемого материала для анализа на ПЦР используют кровь, слюну, мокроту, мочу. Перед процедурой взятия соскоба пациенту необходимо подготовиться к нему. О том, как подготовиться перед анализом ПЦР-мазка, пациенту сообщит лечащий врач. Как правило, специалисты проводят с больными соответствующую консультацию. Например, кровь сдают натощак, а непосредственно перед соскобом шейки матки нежелательно проводить гигиенические процедуры.

Материалом для ПЦР-анализа могут быть практически любые биологические жидкости человека. Чужеродные ДНК болезнетворных микроорганизмов способны проникать в любую среду. Чаще всего в качестве образца для исследований применяется кровь и ее отдельные компоненты (плазма или сыворотка). В жидкой ткани могут присутствовать РНК вирусного гепатита, простого герпеса, цитомегаловируса, ВИЧ.

Широкие показания к исследованию имеют биологические жидкости. К ним относятся:

  • сок простаты;
  • сперма;
  • вагинальный секрет;
  • спинномозговая (ликвор);
  • амниотическая;
  • бронхоальвеолярный лаваж;
  • суставная жидкость;
  • слюна.

Для диагностики венерических заболеваний типа гонореи, хламидиоза, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомониаза, гарднереллеза, герпетических форм и др., у пациентов берут эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. У мужчин берут мазок ПЦР из уретры, а у женщин – из влагалища или шейки матки.

Отдельная категория – биоптаты. Чаще всего биоптаты исследуют с целью определения природы новообразования, подтверждения его злокачественности. Биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки требуются для выявления бактерии Хеликобактер пилори и ее количественной нагрузки.

Моча как биоматериал используется при инфекционных поражениях мочевыделительной системы. У мужчин мазок ПЦР нередко заменяют исследованием мочи, поскольку уретра у представителей сильного пола является универсальным элементом мочеполового тракта.

Для диагностики туберкулеза и обструктивных болезней легких исследуется мокрота. Материал могут собирать в стерильный флакон (15-20 мл) или брать мазок из зева. ПЦР-анализ также используют для выявления осложненных форм микоплазмоза и хламидиоза – при отсутствии лечения и других неблагоприятных факторов данные виды инфекции способны поражать респираторную систему человека.

Способ подготовки зависит от того, какой именно биоматериал необходимо сдать на исследование:

  • Если для анализа требуется образец слюны, то процедуру проводят натощак. За несколько часов до исследования нельзя принимать лекарственные препараты. Кроме того, нежелательно пить много жидкости, тем более горячей, чтобы не нарушить естественный состав микрофлоры ротовой полости.
  • Мочу для ПЦР необходимо собирать с утра. Для этого необходимо подготовить стерильный контейнер и тщательно подмыться. Материал не должен содержать посторонних примесей, поэтому мужчинам во время мочеиспускания необходимо оттянуть крайнюю плоть, а женщинам – закрыть влагалище ватным тампоном.
  • За три дня до сдачи спермы мужчине необходимо отказаться от сексуальных контактов. В период подготовки нежелательно посещать баню, принимать горячую ванну, употреблять алкоголь, острые блюда. Перед сбором биоматериала нельзя мочиться, поэтому за сутки до анализа желательно ограничить потребление жидкости.
  • Кровь, как уже было отмечено, сдавать нужно с утра, натощак. За 2-3 дня до анализа желательно отказаться от жирной пищи, алкоголя и сильнодействующих медикаментов.

При подозрении на то или иное заболевание, передающееся половым путем, врач может назначить женщине мазок на ПЦР. В лабораториях, которые относятся к бюджетным поликлиникам, такие анализы обычно не делают. Прежде чем выбирать место для исследования, необходимо убедиться, что там проводят необходимую диагностику.

Большинство из тех заболеваний, которые передаются половым путем, могут не проявлять себя в течение нескольких месяцев, поэтому отсутствие симптомов не является гарантией того, что девушка не заражена. Будучи носителем инфекции и не догадываясь о болезни, женщина может не только заразить партнера, но и упустить время для успешного лечения. Венерические заболевания могут приводить к бесплодию, воспалению органов малого таза и прочим осложнениям.

Мазок ПЦР на инфекцию назначается женщине в том случае, если имел место контакт с малознакомым партнером. Если венерический статус последнего неизвестен, значит, присутствует риск инфицирования. Сдача мазка на ПЦР целесообразна в случае, если:

  • женщина сомневается в «чистоте» своего нового партнера, так как во время полового акта не использовался презерватив;
  • в течение года у женщины было несколько половых партнеров;
  • у пациентки ранее было выявлено венерическое заболевание;
  • наступила беременность.

Обследование на половые инфекции является обязательным для будущих матерей, поскольку некоторые из них, даже если протекают скрыто и не дают о себе знать, могут нести серьезную опасность жизни и здоровью плода.

Соскоб у женщин берет врач-гинеколог. Сама процедура взятия соскоба на полимеразную цепную реакцию ничем не отличается от обычного гинекологического исследования на влагалищную флору. Процедура взятия мазка ПЦР на хламидии, трихомониаз, вирус папилломы человека, гонорею и другие половые инфекции происходит по стандартной схеме:

  1. Пациентка подготавливается к процедуре и занимает место на гинекологическом кресле.
  2. Для сбора материала гинеколог надевает одноразовые стерильные перчатки и производит осмотр наружных половых органов.
  3. Далее во влагалище женщины вводят специальный расширитель, который позволяет с помощью зеркала осмотреть внутренний эпителий.
  4. Для забора биоматериала используется специальная щетка, которая не обладает впитывающими свойствами и не способна повредить слизистые оболочки. С ее помощью берут соскоб с цервикального канала, стенок влагалища. Обыкновенная ватная палочка для этой цели не подходит.
  5. Использованный медицинский прибор, содержащий вагинальный секрет, вставляют в пробирку, закрывают и отправляют в лабораторию.

Процедура взятия соскоба обычно безболезненна, но иногда пациентки испытывают неприятные ощущения из-за контакта чувствительной слизистой с гинекологическими инструментами. Боль в процессе забора биоматериала может свидетельствовать о протекающем воспалительном процессе.

  • Вступать в интимную связь перед процедурой нельзя – после последнего контакта должно пройти не менее двух суток.
  • Если женщина проходит лечение антибиотиками или применяет вагинальные суппозитории, за три недели до взятия мазка ПЦР курс терапии необходимо завершить. В противном случае результат анализа может оказаться ложным.
  • Во время менструации мазок не берут.
  • Непосредственно перед забором биоматериала нельзя спринцеваться или использовать антибактериальное мыло.
  • Перед процедурой нельзя посещать туалет, последний раз помочиться можно за три часа до процедуры.

Как уже было сказано, мазок ПЦР у мужчин берут из мочеиспускательного канала. Чтобы получить необходимый биоматериал, врач-уролог использует специальный тонкий зонд и вводит его на глубину 3-4 см. Процесс взятия мазка ПЦР на уреаплазму, гонорею и другие распространенные возбудители может принести боль и значительный дискомфорт. Но придется потерпеть. Нередко у мужчин мазок на ПЦР вызывает жжение и зуд, поэтому перед введением зонда с целью уменьшить дискомфортные ощущения пациентам рекомендуют массажировать уретру. Поэтапно процедура взятия соскоба выглядит так:

  • Мужчина освобождает половые органы от одежды.
  • Прежде чем вводить зонд в уретру, врач надевает одноразовые перчатки и осуществляет визуальный осмотр кожных покровов, слизистых оболочек на предмет высыпаний.
  • Затем с помощью инструмента уролог берет мазок методом ПЦР из мочеиспускательного канала. Зонд вводится на 3-4 см в глубину уретры и несколько раз прокручивается.
  • После извлечения зонда врач делает мазок на предметном стекле, которое впоследствии и отправит в лабораторию.

Помимо болезненных ощущений, процедура взятия соскоба вызывает у мужчин психологический дискомфорт. У тех, кто посещает уролога регулярно, подобных проблем не возникает. Кроме того, имеет значение правильная подготовка к мазку ПЦР. Она заключается в соблюдении следующих условий:

  • За несколько дней до анализа мужчине нужно отказаться от интимных связей.
  • Мазок берут в утренние часы.
  • Перед процедурой мужчине не нужно проводить гигиену половых органов, лучше всего принять душ с вечера.
  • За три часа до взятия образца биоматериала нельзя посещать туалет.

Так же, как и у женщин, сильнодействующие препараты могут исказить результат анализа на полимеразную цепную реакцию.

В принципе для того, чтобы разобраться в результатах лабораторного исследования на полимеразную цепную реакцию, не нужно обладать медицинским образованием. Расшифровать заключение экспертов достаточно просто. В ответах, которые выдают пациенту на руки, содержится информация о типе инфекции. Если возбудитель обнаружен, в заключении будет отмечен положительный результат. Он свидетельствует о наличии в организме исследуемого человека ДНК или РНК вируса.

Для эффективного лечения некоторых заболеваний необходимо иметь точные данные о количественной нагрузке, которая означает присутствие РНК-копий возбудителя на 1 мл крови. В большей степени определение количественной нагрузки важно при болезнях, спровоцированных условно-патогенной микрофлорой, поскольку инфекционные агенты активизируются и негативно воздействуют на организм человека только в том случае, если их количество превышает установленные пороги. Такой анализ ПЦР имеет особое значение для составления плана лечения и наблюдением за динамикой пациентов, инфицированных вирусным гепатитом или ВИЧ-инфекцией.

Исследования на ПЦР отличаются максимальной точностью, специфичностью и чувствительностью. Мазок на полимеразную цепную реакцию позволяет узнать, есть ли в организме обследуемого конкретный тип инфекции, определить ее штамм и количество РНК-копий. Метод ПЦР позволяет выявлять возбудителя даже при минимальном содержании ДНК вируса в представленных образцах биоматериала.

Сроки выполнения анализа во многом зависят от того, какой из существующих методов полимеразной цепной реакции применяется в конкретной лаборатории. Самым простым способом изучения биологического материала считается микроскопический. Обычно этот метод исследования не занимает много времени. За срочность пациентам приходится платить дополнительно, но если по каким-либо причинам есть необходимость в проведении экстренного исследования, результаты могут выдать пациенту на руки спустя час. Быстрее всего ответы анализов получают те, кто обращается в специализированные медучреждения, оснащенные собственной лабораторией. Иначе необходимо учитывать время, которое будет потрачено на доставку биоматериала.

Конечная стоимость анализа будет зависеть от того, на какую инфекцию необходимо проверить пациента. В Москве на лабораторные исследования методом ПЦР установлены такие цены:

  • заболевания, передающиеся половым путем – анализ выполняется в среднем за 1-2 дня, стоимость составляет 300-500 руб. (за обнаружение одного возбудителя);
  • такие же сроки и цены установлены на диагностику методом ПЦР вируса Эпштейна-Барра, папилломы человека, герпеса, цитомегаловирусной инфекции;
  • обследование на гепатит A, B, C, D, G обойдется пациенту в 650-800 руб., за уточнение количественной нагрузки придется заплатить еще 2000 руб. (на выполнение исследования потребуется 4-5 дней);
  • подтверждение наличия в желудочном или кишечном биоптате бактерии Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) – 400-600 руб.;
  • антитела и антигены ВИЧ— 400-500 руб.;
  • количество РНК ВИЧ в образцах крови – более 10 тыс. руб.

С целью экономии врачи рекомендуют выбирать пакеты анализов — такие исследования обходятся дешевле. Услуги со скидками предоставляются в большинстве сетевых клиник, где делают анализы по методу ПЦР («СМ-Клиника», «Инвитро», «ОН-Клиник») и многопрофильных медцентрах.

Если в мазке обнаружились патогенные возбудители, не нужно отчаиваться. Главное – это как можно скорее начать терапию. Сегодня существует немало препаратов, благодаря которым даже пациенты с неизлечимыми болезнями имеют все шансы на высокое качество и нормальную продолжительность жизни. Выбор тактики лечения должен осуществлять врач. Самолечение при инфекционных заболеваниях недопустимо.

источник