Меню Рубрики

Как делают анализ методом пцр

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее.

Метод ПЦР был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.

Анализ ПЦР в клинике ДИАНА

Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

  • гепатит C, B;
  • уреаплазмоз половых органов;
  • ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
  • хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
  • микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
  • бактериальный вагиноз;
  • кандидоз половых органов;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • туберкулез;
  • сальмонеллез;
  • туберкулез (легочные и внелегочные формы);
  • листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
  • цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную инфекцию;
  • детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
  • ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах.

ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

  • Универсальность . Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
  • Специфичность . ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
  • Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
  • Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
  • Возможность проведения количественного анализа . Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 — 104 КОЕ/тамп. – нет.

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

  • Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
  • Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
  • С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут мазок из влагалища . При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

  • За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
  • За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
  • За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
  • Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
  • За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.

  • За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
  • Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
  • Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
  • Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

  • Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
  • Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
  • Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
  • Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
  • Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:

  • Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
  • Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
  • Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
  • Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
  • Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
  • Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии;
    соскобы и мазки со слизистых для диагностики ЗППП;
    клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.

При одном взятии материала можно обнаружить сразу нескольких возбудителей, попавших в организм. Такая универсальность избавляет пациента от дополнительных обследований и лишних трат.

Обнаружить и идентифицировать участки генетической информации удается при помощи специальных эталонных маркеров ДНК (праймеров) созданных для каждого известного возбудителя. Эталон позволяет найти «свой» фрагмент среди миллионов других. Если это происходит, запускается реакция полимеразной цепи.

» data-medium-file=»https://i1.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/01/ptsr-analiz.jpg?fit=422%2C300&ssl=1?v=1572898832″ data-large-file=»https://i1.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/01/ptsr-analiz.jpg?fit=662%2C471&ssl=1?v=1572898832″ />
ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами.

Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

  • Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
  • Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.

Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:

  • Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
  • Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
  • Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).

Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter

источник

Для успешного лечения самым важным моментом является быстрая и безошибочная диагностика. В последнее время перечень методик и возможностей диагностических центров, поликлиник и больниц в сфере диагностирования постоянно расширяется. После появления относительно новой методики — ПЦР-анализа, этот метод быстро завоевал приверженцев среди медицинских работников, поскольку часто является незаменимым при выявлении инфекционных заболеваний.

Сфера применения метода, основанного на полимеразной цепной реакции, не ограничивается медициной, но самое большое распространение ПЦР-диагностика получила для выявления различных болезней.

За широкий перечень преимуществ автор методики получил Нобелевскую премию, как подтверждение признания специалистов универсальности и высоких возможностей такого способа диагностики.

К неоспоримым достоинствам ПЦР можно отнести следующие:

  • Очень высокая чувствительность. Обычно говорят о чувствительности от 95 до 100%, но это усредненные данные. Этот показатель отличается для разных микроорганизмов. Так, для гепатита С он не бывает ниже 97% (при условии выполнения всех требований), а для определения уреаплазмоза — не менее 99%. Такая чувствительность является самой высокой на данный момент, поэтому способ почти не имеет конкурентов по этой характеристике.
  • Возможность применения на самых ранних стадиях. В то время, когда другие методы диагностики еще не способны выявить возбудителя из-за его малого количества в образце пробы, ПЦР уже выдает корректный результат. Обнаружить присутствие возбудителя можно даже при наличии единственного экземпляра, а в некоторых случаях — только фрагмента микроба. По этой причине способ применяется и при хронических или скрытых течениях патологий, а также в стадии инкубации.
  • Широкий спектр результатов. Анализ способен выявить одновременно несколько возбудителей, для этого не понадобится проводить повторные манипуляции. Иногда удается найти возбудителей, которые даже не предполагались при первичной диагностике.
  • Универсальность образцов. В качестве пробы могут быть представлены образцы крови, слюны, мокроты, волосы, выделения из влагалища, клетки разных тканей.
  • Скорость получения результатов. В большинстве случаев ответ получают через 5-6 часов. Для культурального анализа, приближающегося к полимеразной цепной реакции в плане точности, такой же результат можно получить в срок от нескольких дней до пары недель.
  • Количественное определение возбудителя. Этот параметр позволяет определять титр микробов в материале, а это свойство часто необходимо для оценки эффективности выбранной тактики лечения.
  • Выявление самого микроорганизма, а не определение его реакций. Большинство анализов основаны на ответной реакции возбудителя на химические реактивы, окрашивание и т. д. Этот способ диагностики позволяет обнаруживать непосредственно микроб, а не косвенные признаки, антитела и т. п.

Несмотря на такой широкий перечень преимуществ, у метода есть и некоторые недостатки:

  • Из-за загрязнения пробы предыдущим образцом может произойти ложное выявление микроорганизмов. Такое происходит при загрязнении инструментов или реактивов, участвующих в ходе анализа. Даже в воздухе присутствуют фрагменты микробов, способных отразится на результате, поэтому в таких лабораториях обязательно должен быть установлен биологический фильтр с максимальной степенью очистки воздуха.
  • Ложноотрицательный результат. Даже при всех явных проявлениях болезни иногда получают отрицательные данные. Причина этого – в неверно выбранном месте для взятия образца, поэтому персонал лаборатории должен обладать достаточной квалификацией, знаниями и опытом.
  • Оценка данных должна производиться исключительно лечащим врачом, потому что интерпретация результатов ПЦР-анализа — сложный процесс. Наличие положительного ответа не всегда означает болезнь. Дело в том, что после того, как заболевание успешно пролечено, фрагменты возбудителя долго присутствуют в крови, поэтому заключение может сделать только очень квалифицированный специалист.
  • Высокая стоимость диагностики с применением полимеразной цепной реакции. Цена обусловлена дорогостоящим оборудованием и высокими требованиями к условиям лабораторий и квалификации персонала.

Обязательные условия для получения точных данных в ПЦР-лабораториях:

  • корректный механизм забора проб и их правильная транспортировка в лабораторию;
  • точное соблюдение методик в ходе выполнения анализа;
  • высокая стерильность и максимальная автоматизация процесса;
  • использование одноразовых инструментов;
  • система внутрилабораторного контроля для подтверждения достоверности данных.

При условии выдерживания всех требований на основе данных, полученных при помощи методики ПЦР, можно не только определить болезнь, но сделать прогноз ее течения и составить алгоритм лечения.

Полимеразная цепная реакция позволяет быстро скопировать и воспроизвести ДНК-цепочки микроба, который вызвал заболевание. Для того, чтобы процесс шел быстро, используют специальные ферментные препараты, ускоряющие репликацию и постройку цепочки нуклеотидов.

После того, как процедура происходит в полном объеме, присутствие в пробе возбудителя увеличивается в миллионы раз, после чего его выявление и идентификация не составляют проблемы.

Лаборант может сравнить полученный образец с представленными в базе данных и безошибочно назвать его, а также определить его исходное количество.

Кроме того, методика позволяет клонировать отдельные участки цепи ДНК, вызывать в них необходимые мутации, объединять и комбинировать участки между собой.

Самое большое распространения ПЦР-диагностика получила в медицине. С помощью нее можно определить вирусные, инфекционные, наследственные болезни, причем сделать это можно не только в активной фазе, но и сразу после заражения.

Области медицины, в которых метод ПЦР активно используется для диагностики:

  • урология и гинекология — для обнаружения большинства венерических заболеваний (уреаплазмоз, герпес, сифилис, гонорея, гарднереллез, трихомониаз, хламидиоз, ВИЧ, микоплазмоз, папилломавирус человека, кандидоз и пр.);
  • пульмонология — при туберкулезе или пневмониях бактериальной или вирусной природы;
  • гастроэнтерология — при хеликобактериозе;
  • в гематологии — при цитомегаловирусе, различных онковирусах крови;
  • в области инфекционных болезней — для выявления дифтерии, сальмонеллеза, мононуклеоза, листериоза, гепатитов вирусного происхождения, энцефалита;
  • в онкологии — для определения рака груди, лейкемии, лимфомы.

Этот метод применяют и в неонатологии, педиатрии, офтальмологии, неврологии — практически в любой отрасли медицины он оказался необходим.

На видео подробно рассказано, какие инфекции можно выявить с помощью полимеразной цепной реакции.

Большинство заболеваний, передающихся половым путем, быстро и успешно диагностируются именно благодаря ПЦР-диагностике. Кроме определения возбудителя, этот метод позволяет узнать конкретный штамм микроорганизма, что делает возможным выбор наиболее действенного препарата при лечении.

Помимо медицины способ ПЦР используется и в других сферах:

  • Криминалистика и судебная медицина — помогает установить личность преступника посредством сравнения генетического материала подозреваемого человека с образцами, найденными на месте совершения преступления.
  • Установление отцовства — сравниваются размноженные генетические наборы родителя и ребенка, находятся идентичные фрагменты, на основании чего можно судить о степени их родства.
  • Наука использует методику в ходе экспериментов, применяя генные мутации, устанавливая родство эволюционных веток отдельных организмов и т.д.

Многие инфекции, вызывающие венерические болезни, на начальных стадиях очень сходны по проявлениям и симптоматике, поэтому дифференцировать их достаточно сложно. В то же время раннее определение инфекционного агента позволяет начать лечение как можно раньше и сократить время лечения до минимума, избежав развития возможных осложнений.

Полимеразная цепная реакция — эффективный механизм для определения таких групп заболеваний половой сферы:

  • бактериальные инфекции (сифилис, донованоз, гонорея, хламидиоз и пр.);
  • вирусные патологии (папилломатоз, кондиломатоз, ВИЧ, половой герпес и т.д.);
  • грибки (молочница, баланопостит и пр.)

В дерматовенерологии особенно полезно свойство данной методики находить инфекционных агентов в периоды ремиссий или при носительстве, когда человек может заражать партнеров, не имея при этом симптомов болезни.

Анализ ПЦР происходит в 4 основных этапа:

  • подготовка материала к копированию;
  • объединение фрагмента ДНК и праймера;
  • копирование генетического набора исследуемого материала;
  • идентификация и оценка полученного ДНК-набора.

Образец подогревают до температуры 94-98°C в специальном приборе — амплификаторе, который программируется на выдерживание точных температур с низкой погрешностью. Заданная температура держится на протяжении минуты-двух. Это необходимо для денатурации ДНК, чтобы двойная спираль разошлась на две отдельные цепочки.

Температура в амплификаторе понижается до 72-75°C для того, чтобы праймер смог распознать сходный с ним участок ДНК-цепи и объединиться с ним.

Праймеры — это специальные реагенты, которые подходят только к одному виду возбудителя. Если необходимо провести анализ на несколько патогенов, то в образец добавляют необходимое количество праймеров.

На этой стадии ДНК реплицирует свою матрицу, используя праймер.

Возможности лаборатории ограничены наличием праймеров для определенных микроорганизмов, поэтому диапазон возможностей определяется наличием таких образцов.

В этом отрезке происходит увеличение генетического материала возбудителя. К праймеру с матрицей приближается фермент и воспроизводит новую цепь ДНК, идентичную той, которая содержалась в первоначальной цепочке.

Когда синтез окончен, завершается один полный цикл полимеразной цепной реакции. По времени он продолжается в среднем до 3 минут. За это время происходит удваивание материала. Дальнейшее увеличение количества цепочек происходит в геометрической прогрессии, и к окончанию анализа успевает пройти 50-80 циклов.

Этап, требующий внимательности и особой тщательности со стороны персонала.

Определение микроорганизма происходит с использованием электрофореза или меток, наносимых окраской. При использовании электрофореза определяющим моментом становится длина фрагментов ДНК, а при использовании меток — развитие окраски в ходе ферментативной реакции.

Вариаций такой ПЦР диагностики существует много. Выбор определенного метода зависит от многих факторов: предположительного диагноза, возможностей доступных лабораторий, метода взятия материала и пр.

Наиболее часто используются такие разновидности ПЦР:

  • вложенная;
  • ступенчатая;
  • с горячим стартом;
  • виртуальная;
  • ассиметричная;
  • в реальном времени и т. д.

Преимущественно используют ПЦР в реальном времени, так как способ характеризуется самыми точными результатами и максимальной скоростью обработки данных. После его применения заключение готово через час-два.

Метод широко используется в педиатрии для выявления вирусов и инфекций крови, генетических заболеваний, TORCH-инфекций. Неонатологи назначают такую диагностику в проблемных случаях буквально с первых дней жизни. Иногда подобная диагностика позволяет обнаружить инфицирование внутриутробных вод, составляющих опасность для развития плода в период активного формирования.

Если врач выдает направление на обследование с применением полимеразной цепной реакции, то он должен уточнить, какой именно биоматериал необходимо предоставить пациенту и каким образом подготовиться к отбору пробы.

Кровь в качестве биоматериала для тестирования берут при подозрении на ВИЧ, вирусный гепатит, токсоплазмы, половой герпес и цитомегалию. Для большинства этих патогенов до использования этого метода диагностика базировалась на выявлении антител к возбудителю, что сильно затягивало время обнаружения микробов в тот период, когда антитела еще не вырабатываются.

Перед сдачей крови для диагностики в данном случае не нужны особые приготовления, но лучше, если проба будет отобрана натощак. Единственное обстоятельство, способное серьезно исказить результаты — прием антибиотиков, поэтому сдаче должен предшествовать временной отрезок после приема подобных лекарств в несколько дней или недель в зависимости от типа антибиотика.

В самых современных клиниках в последнее время для отбора крови на ПЦР используют вакуумные системы, которые минимально повреждают кожные покровы и сводят к минимуму вероятность попадания в пробу загрязняющих агентов из воздуха, инструментов или рук лаборантов.

Используется как в гинекологии, так и в венерологии для определения заболеваний, передающихся половым путем. Часто назначают ПЦР мазка во время беременности для выявления скрытых факторов, способных негативно повлиять на формирование плода или ход беременности.

Читайте также:  Зимницкий анализ мочи как сдавать правильно

Подготовка к отбору материала заключается в том, чтобы полностью исключить половые контакты за несколько суток до процедуры. Проводить спринцевания марганцовкой или настоями трав тоже нельзя. На протяжении критических дней и 2-х дней после них мазок на ПЦР-анализ не берется.

Отбор биоматериала производят в лаборатории из влагалища, шейки матки, цервикального канала или уретры.

ПЦР-анализ мазка позволяет выявить патоген, который устойчив к определенному виду антибиотиков. Кроме того, показаниями к такому виду диагностического обследования выступают:

  • осложненная беременность без видимых причин;
  • острое течение венерической болезни;
  • предположительное хроническое течение венерического заболевания;
  • выявление причин бесплодия или самопроизвольных абортов.

Анализ кала с применением полимеразной цепной реакции назначается специалистом для уточнения наличия инфекции. Подготовка к отбору пробы кала для ПЦР заключается в следующем:

  • исключить за несколько суток слабительные средства в виде любых свечей, масел или оральных медикаментов;
  • не употреблять накануне лекарства или продукты, которые придают калу выраженную окраску.

Материал для ПЦР-определения лучше всего доставить в специальном контейнере для кала с палочкой. Внутреннее пространство контейнера стерильно, поэтому протирать или промывать его не следует. Во время отбора образца важно отслеживать, чтобы не задеть внутреннюю поверхность приемника, также в пробе не должно быть следов мочи. Перед отбором запрещено применение клизм.

Такое исследование с помощью ПЦР позволяет извлечь ДНК образец вируса или бактерии. Забор мочи лучше проводить утром натощак. Лучше всего, если это будет происходить непосредственно в лаборатории.

Обязательные условия подготовки для получения результатов исследования мочи в лаборатории полимеразной цепной реакции:

  • выдержать 3 недели после приема антибиотиков;
  • перед отбором жидкости не пить и не есть;
  • запрет вагинального секса за сутки до сдачи пробы;
  • в контейнер нужно поместить первую порцию материала после пробуждения.

Расшифровку результатов диагностики проводит специалист, направивший пациента на ПЦР-исследование. В протоколе, выданном лабораторией, может фигурировать отрицательный или положительный результат ПЦР:

  • Отрицательный — случай, в котором не обнаружено фрагментов возбудителя предполагаемой болезни, то есть человек здоров и не перенес этого заболевания в недавнем времени.
  • Положительный — в пробе обнаружены РНК или ДНК патогена и человек нуждается в лечении.

Самостоятельно трактовать полученные данные не стоит, так как возрастные нормы могут значительно отличаться, а различные титры — свидетельствовать о совершенно разных стадиях болезни и подходах к терапии.

Вооружившись результатами ПЦР-диагностики, врачу будет легко определить перечень необходимых мер лечения.

Точность ПЦР-диагностики сделала эту методику незаменимой в диагностировании огромного перечня заболеваний и позволила эффективнее выявлять и ликвидировать патогенные процессы, происходящие в организме человека.

источник

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 — 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 — 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 — 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 — 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 — 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 — 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 — 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой — позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

  1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
  2. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. — 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
  3. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы — М.: Наука, 2005 — В 2 т. — ISBN 5-02-033278-X
  4. http://ru.wikipedia.org/wiki

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

источник

Что значит назначение вам ПЦР анализа? Эта аббревиатура расшифровывается как метод полимеразной цепной реакции – это особый способ проведения лабораторных исследований. При данном методе полученный от пациента биологический материал размещается в специальном аппарате. К исследуемой среде прибавляют набор ферментов-реактивов, которые помогают воспроизводить генетический материал возбудителя (вируса или микроба). При реакции воспроизводится большое количество копий ДНК или РНК, что позволяет идентифицировать путем сравнения с базой данных как вирусную, так и микробную инфекцию.

Что означает результат ПЦР анализа? Если в организме человека имеется возбудитель каких-либо инфекций, даже скрытый, при данном анализе будет выявлено не только его наличие, но и в каком количестве данная инфекция присутствует в теле.

Для анализа на инфекции методом ПЦР можно исследовать все биологические жидкости организма – кровь, моча, слюна, выделения половых органов, слизь горла и носа. Для анализа требуется совсем немного материала, так как если возбудители имеются, за счет воспроизведения их копий, концентрация генетической информации доводится до такой, которая выявит микроб или вирус, и определит его вид. Точность анализа ПЦР очень высока, при помощи данного анализа можно на сегодня определить практически все широко распространенные вирусные, микробные и иные инфекции.

Но, что же чаще всего выявляет анализ ПЦР? К списку инфекций, которые можно выявить данным методом можно отнести инфекционные, в том числе и социально опасные инфекции по типу туберкулеза или гепатитов В и С. Этим же методом можно выявить ВИЧ-инфекцию, хламидийную и уреаплазменную инфекции, микоплазмоз как респираторной системы, так и генитальный. При помощи данного анализа выявляют молочницу, бактериальный вагиноз, трихомониаз. Возможности данного метода позволяют выявлять скрытые инфекции – герпес разных типов, ВПЧ (папилломавирус), а также выявление особого микроба, ответственного за развития язв желудка – хеликобатера.

Сегодня сдать анализ методом ПЦР можно практически в любой частной или государственной лаборатории. Данные виды анализов проводят всем, детям и взрослым. В зависимости от того, какую цель преследует анализ, в зависимости от пола проводятся анализ разного биологического материала.

Так, анализ ПЦР у мужчин проводит по крови или моче, секрету уретры, слизи из глотки или носа, соку простаты или даже сперме. Проведение анализа ПЦР у женщин возможно в крови и моче, влагалищном секрете, выделениях из уретры, слизи носа и глотки.

Очень часто применяют анализ ПЦР при беременности, с его помощью во влагалищном секрете или крови выявляют скрытые инфекции, требующие особого наблюдения в этот период, а иногда и адекватного лечения.

Анализ на инфекции данным методом назначает врач, зачастую сбор материала проводится сразу в кабинете доктора – уролога или гинеколога. Как делается анализ ПЦР?

Исследуемый материал в лаборатории смешивают с реактивами и ждут реакции. При наличии возбудителей, копии их ДНК или РНК размножаются. Выявленные фрагменты генетического материала аппарат сравнивает с базами данных и точно выявляет возбудителя инфекции. Пи необходимости, также указывается и количество возбудителя в тех или иных жидкостях тела. Обычно исследование длится не более 1-2 суток, при необходимости – проводят экспресс-анализы.

Откуда берут анализ ПЦР? Это будет зависеть от того, какие виды возбудителя предполагаются. Если это ВИЧ или гепатиты – берется кровь, если это половые инфекции – берется мазок с уретры или влагалища. При подозрении на мононуклеоз или герпес берут мазок с горла. Также могут использоваться моча, спинномозговая жидкость, отделяемое из ран, мокрота и тд.

Для точных результатов и диагностики инфекций важно сдавать кровь в утренние часы натощак. Анализ крови методом ПЦР способен выявить возбудителей опасных заболеваний – ВИЧ, гепатиты, сифилис. В периоды обострения и активности вируса в крови могут быть выявлены вирусы герпеса, папилломы и некоторые другие.

Для абсолютной точности анализа важна правильная к нему подготовка. Проще всего подготовиться к анализу крови, никаких ограничений в диете или активности нет, кровь нужно сдать утром, натощак. Анализ мочи сдают после подмывания гениталий, из средней порции в специальный стерильный контейнер. Анализ ПЦР из половых путей заслуживает особого внимания, поэтому важно знать, как подготовиться. За сутки до обследования запрещается секс, перед исследованием рекомендовано не мочиться. При менструации у женщин, дата анализа переносится на 3-5 дней с момента последних выделений.

Анализ в зависимости от возможности лаборатории может готовиться от нескольких часов до нескольких дней. В среднем, сколько дней делается анализ ПЦР? Обычно это одни –двое суток. При экстренной ситуации анализ может быть выполнен в этот же день, через несколько часов.

Данные этого анализа очень точные, в отличие от многих других методов. Что показывает ПЦР анализ? Положительный результат говорит о наличии в организме и отдельных биологических жидкостях того или иного возбудителя. Отрицательный результат указывает на отсутствие инфекции. Результаты ПЦР анализа максимально точны, при нем практически не бывает ложно-положительных или ложно-отрицательных результатов. Если микроб или вирус есть (даже в очень минимальном количестве), при реакции их ДНК или РНК размножится. Если же возбудителей нет, тогда и реакции просто не будет.

источник

В современном мире существует множество способов обнаружить возбудителей заболеваний на разных этапах развития заболевания. Одним из таких методов является PCR (метод ПЦР или полимеразная цепная реакция), позволяющий выявить инфекцию на самом раннем этапе. Буквально одна единица ДНК или РНК уже могут указать на наличие того или иного возбудителя в организме при должном уровне подготовки пациента и профессионализма лаборантов медицинского учреждения.

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма. Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя. Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

  • микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды,трихомонады,гонококки);
  • бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
  • иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром. Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования. Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи.

Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ (вирус папилломы человека). Мочи достаточно 10 мл, мокроты – субстанции, размером со спичечную головку.

Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования:

  • кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак;
  • мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена;
  • как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0.9% наружное отверстие уретры. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором (своеобразный питательный агар для бактерий);
  • из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке;
  • как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 – 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры;
  • из ротоглотки забор происходит натощак. Придерживая кончик языка, зондом производят мазок с задней стенки глотки, по миндалинам или по небным дужкам. Не соприкасаясь со слизистой ротовой полости и зубами, зонд выводится и отправляется на пцр-исследование;
  • из конъюнктивы, предварительно очистив физиологическим раствором гнойные выделения, производят соскоб слизистой нижнего века от латерального к медиальному краю. Веко при этом придерживается медицинским работником во избежание соприкосновения зонда со слизистой глаза и ресницами.

Анализ на ПЦР является самым быстрым и достоверным способом на ранних этапах обнаружить инфекцию, но бывают и ложноположительные/ложноотрицательные результаты.

Для сохранения нервной системы как своей, так и сотрудников медицинского учреждения, следует правильно подготовиться к исследованию.

Перед исследованием ПЦР мужчинам следует помнить, чего делать нельзя:

  • мочиться за 3 часа до исследования;
  • производить спринцевание и стерильную обработку члена;
  • мыть член мылом, содержащим антибиотик;
  • заниматься сексом за двое суток до ПЦР на ИППП;

Женщинам перед тем как сдать мазок на ПЦР запрещено:

  • при соскобе из уретры запрещено мочиться за 3 часа до исследования;
  • использовать вагинальные растворы с дезинфицирующими свойствами;
  • за двое суток до исследования применять суппозитории для влагалища;
  • использовать антибиотики местно, в том числе и мыло с антибиотиком;
  • занятия сексом за 48 часов до исследования;
  • применять антибиотик внутрь влагалища и уретры;
  • спринцеваться;
  • принимать антибиотики. После последнего приема антибактериального препарата должно пройти не менее 4 недель;
  • сдавать ПЦР во время менструации.

Следует сдать на анализ первую мочу утром, ее среднюю порцию. Другими словами начинать мочиться следует в унитаз. Затем остановить акт мочеиспускания, подставить под уретру баночку для сбора мочи, продолжить мочиться в течении 2-3 секунд, затем снова остановить мочеиспускание и, убрав контейнер, закончить акт мочеиспускания в унитаз.

Женщинам и мужчинам перед тем как сдать ПЦР следует хорошо вымыть наружные половые органы для исключения попадания в мочу смегмы (смесь секрета сальных желез крайней плоти) и выделений из влагалища.

Баночка для мочи должна быть стерильной. Попросите контейнер в клинике, где вы сдаете анализ, либо заранее приготовьте баночку с плотно закрывающейся крышкой и прокипятите их не менее 10 минут.

Непосредственно перед сдачей ПЦР запрещено:

  • мочиться (необходима самая первая порция мочи за день);
  • изменять количество выпитой за сутки до исследования жидкости. Это необходимо, чтобы поддерживать обычный водно-электролитный баланс организма, в котором себя комфортно чувствует потенциальный возбудитель инфекции;
  • использовать уросептики;
  • применять мыло, содержащее в себе антибиотик;
  • заниматься сексом за 12 часов до исследования;
  • при менструации желателен забор мочи уретральным катетером для исключения попадания крови в контейнер с мочой;

Если один из пунктов был нарушен:

Следует воздержаться от проведения диагностики инфекций методом ПЦР. Если же все-таки анализ был сдан, следует его повторить через двое суток. Если при использовании антисептиков и антибиотиков результат оказался «хорошим» – не стоит радоваться. Скорее всего, при наличии определенных жалоб, это ложноположительный результат.

Расшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования. Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген. Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна. То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники. Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Метод ПЦР относится к группе обширных анализов. С помощью ПЦР анализа можно определить практически любое заболевание. К сожалению, это не самый дешевый метод исследования, поэтому его не назначают всем пациентам поголовно. Цены могут варьироваться в зависимости от клиники и количества исследований.

Существует полимеразная цепная реакция (анализы ПЦР) на 12 инфекций. Какие инфекции входят в ПЦР 12:

  • микоплазмы гениталиум (mycoplasma genitalium) и гоминис (hominis);
  • трихомонады (trichomonas);
  • хламидии (chlamydia trachomatis);
  • уреаплазмы (ureaplasma, включающая ureaplasma parvum (уреаплазмы парвум));
  • кандиды (candida);
  • гарднереллы (gardnerella vaginalis);
  • гонококк (neisseria gonorrhoeae);
  • антитела IgG, IgM;
  • герпеса двух типов.

Также есть упрощенная ПЦР 6 диагностика. Она исключает уреаплазму парвум, кандиды, гонококк, IgG, IgM, герпес обоих типов.

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

Сдавать анализ следует через 14 суток после известного контакта с ВИЧ-инфицированным человеком. Стоит помнить, что заразность этого вируса несколько преувеличена из-за тяжести нелеченного заболевания. Если произошел контакт через кровь, то тут шанс заразиться самый высокий, однако и он не превышает 85%. При остальных контактах вероятность заражения составляет от 1% до 10%.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Читайте также:  Жизнь шла как старая гадалка анализ

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

При отражении плюсов ПЦР следует отметить:

  • чувствительность. Как говорилось выше, даже единичный агент, оставленный возбудителем, позволяет обнаружить инфекцию на ее ранней стадии или если она протекает скрытно;
  • широкий спектр. Например, ПЦР 6 позволяет 1 исследованием выявить целых 6 возбудителей;
  • точность. Ложные результаты при данном методе исследования имеют место быть, но их количество сведено к минимуму;
  • скорость. Как правило, пациент уже на следующий день может забрать готовый результат ПЦР исследования.
  • стоимость. ПЦР-исследование не включено в список исследований в системе ОМС. Дорогое высокоточное оборудование требует оплаты своей работы;
  • требования к соблюдению техники исследования и к профессионализму сотрудников;
  • требования к подготовке.

источник

Диагностика методом ПЦР на сегодняшний день является самым эффективным способом обнаружения и идентификации возбудителей половых инфекций в человеческом организме.

В этой статье мы разберем, что такое анализ ПЦР, как и где сдать этот тест.

Вы узнаете, какова цена этого исследования, где выполняют ПЦР анализы и как готовится, когда требуется сдать ПЦР анализ.

Вы узнаете о методиках забора мазков, какой врач берет анализы на ПЦР и почему медсестра плохо берет мазки на ПЦР анализ.

Разберем ПЦР анализ: что это такое и как выполняют это исследование.

ПЦР анализ: что это такое?

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, представляет собой метод лабораторного исследования различных биологических жидкостей.

В них происходит анализ на предмет присутствия возбудителей инфекционных, паразитарных или вирусных заболеваний.

Суть ПЦР состоит в многократном «клонировании» находящихся в исследуемом материале фрагментов ДНК инфекционного агента.

ПЦР диагностика инфекций считается наиболее быстрым, современным методом.

ПЦР диагностику используют повсеместно.

Все ведущие клиники используют диагностику ПЦР для верификации инфекционных заболеваний.

Часто пациенты спрашивают, какие именно заболевания можно выявить при помощи метода ПЦР диагностики?

Диагностика методом ПЦР используется для выявления широкого спектра возбудителей.

Такое исследование проводится одинаково для диагностики любого заболевания.

Разница может быть лишь в исследуемом субстрате.

Для этого пробирку с биоматериалом помещают в реактор, где с помощью катализаторов происходит процесс копирования молекул ДНК возбудителя инфекции.

ПЦР диагностика: расшифровка

Давайте разберем, как проводится расшифровка ПЦР диагностики.

Метод ПЦР очень быстрый и простой.

В качестве результата, вы получаете заключение врача лаборанта.

В результате четко будет прописано: получен положительный результат или отрицательный.

Ответ приходит на конкретную инфекцию.

Когда вы сдавали палитру инфекции напротив каждого возбудителя будет указано получен положительный или отрицательный результат.

Если вы сомневаетесь в результатах, покажите бланк вашему лечащему врачу.

Доктор поможет интерпретировать результат ПЦР и подберёт правильное лечение.

Помните!Исследование методом ПЦР не всегда можно использовать в медицинской практике.

Такие исследования не проводятся при контрольном тестировании после проведения лечения.

Когда берется ПЦР анализ после лечения, при разных инфекциях, можно получить положительный результат, который будет ложным.

Это связано с тем, что частички убитых возбудителей, уже неактивные, могут давать положительную реакцию.

Если вы сомневаетесь, можно ли вам сдавать ПЦР или нет, проконсультируйтесь с врачом.

Разберем, какие материалы могут быть применены для тестирования ПЦР.

Что может быть использовано в качестве материала для исследования методом ПЦР:

Врач всегда рекомендует определенные анализы.

Тем не менее, существует определенный перечень материалов, которые покажут наиболее точные результаты.

Тем не менее, существует определенный перечень материалов, которые покажут наиболее точные результаты.

  • Соскобы со слизистых оболочек (чаще всего уретры, влагалища, шейки матки). Их исследуют, главным образом, для диагностики половых инфекций. Таким способом во взятом мазке можно обнаружить возбудителей уреаплазменной и микоплазменной инфекций, гонококки, хламидии, трихомонады, гарднереллы, грибки рода Cand >Моча . Ее можно использовать в диагностике урогенитальных инфекций. ПЦР анализ мочи является альтернативой исследованию мазка из уретры для мужчин. Это особенно подходит тем пациентам, которые боятся болезненного взятия уретрального мазка.

  • Бронхиальная слизь . Может исследоваться с целью диагностики респираторных форм хламидийной и микоплазменной инфекций.
  • Кровь. Анализ крови ПЦР – это один из самых точных способов выявления в организме некоторых патогенных вирусов.

Такое исследование позволяет диагностировать:

  • вирусные гепатиты
  • генитальный герпес
  • цитомегаловирусную инфекцию
  • ВИЧ
  • Другие биологические жидкости: секрет предстательной железы, околоплодная жидкость, слюна и др.

источник

Ответить на вопрос: «Что это такое, ПЦР анализ?» – можно в нескольких словах. Полимеразная цепная реакция является методом лабораторных исследований, который используют для определения присутствия ДНК возбудителей болезней в любой из жидких сред организма, куда этот ДНК может проникнуть: кровь, моча, слюна, сопли, выделения из половых органов, кал.

Благодаря этому ПЦР обладает намного большей чувствительностью к патогенам по сравнению с другими методами исследования. Например, иммуноферментный анализ может показывать отрицательный результат на наличие бактерии или вируса, тогда как ПЦР анализ даст положительный в силу большей чувствительности.

Процесс амплификации (так называют увеличение количества копий ДНК) – лишь одна из частей анализа. После того, как произведена реакция, амплифицированные сегменты надо сравнивать с другими нуклеотидными частями, которые принадлежат источнику (например, человеку или патогену).

Это сравнение уникальных сегментов производят в желеобразной среде путём сопоставления нуклеотидных звеньев, которые генерируются анализатором ПЦР с искомыми нуклеотидными звеньями конкретного человека или микроорганизма. После того, как через эту среду пропускают электрический ток, нуклеотидные звенья связываются друг с другом, образуя цепочки ДНК, которые группируются в изучаемой среде, что позволяет произвести их идентификацию.

Особо ценен метод ПЦР при диагностике болезней, обнаружить которые непросто на начальной стадии. Например, возбудители туберкулёза тяжело выявляются простыми методами исследования, тогда как ПЦР способен обнаружить как живых, так и погибших возбудителей болезни.

Очень важно значение метода ПЦР при обнаружении вируса иммунодефицита. Методы анализа, которые использовались ранее для диагностики ВИЧ-инфекции, основывались на присутствии в крови антител.

Такой метод имеет минусы, поскольку антитела против этой опасной болезни могут появиться лишь спустя месяцы после проникновения в организм инфекции.

А если речь идет о грудничках, сложность в идентификации вируса еще и в том, что материнские антитела в крови могут замаскировать наличие ВИЧ-инфекции у новорожденного.

ПЦР диагностирует это заболевание значительно быстрее, поскольку способен обнаружить всего один геном вируса на пятьдесят тысяч клеток. При этом высокая специфичность анализа позволяет нацелиться на определение именно возбудителя вируса иммунодефицита.

Широкое распространение метод ПЦР получил в исследовании функционирования мочеполовой системы женщин и мужчин. Анализ мочи в данном случае представляет собой поиск в урине ДНК возбудителей инфекций.

Огромным преимуществом ПЦР является то, что исследование мочи этим методом способно обнаружить все половые болезни. Кроме того, этот анализ способен выявить возбудителя туберкулёза, который не относится к половым инфекциям.

Стрептококки и некоторые вирусы также определяются по анализу ПЦР во взятом образце мочи.

Исследование анализа мочи само по себе является точным диагностическим показателем. Но гораздо лучше, если он дополняется анализом ПЦР мазка, поскольку изучение мочи показывает возбудителей болезни лишь в том случае, если патоген локализуется в местах, через которые проходит моча. А именно, через:

Если возбудитель болезни находится в предстательной железе или яичках у мужчин или в матке у женщин, проба мочи на ПЦР не покажет присутствие инфекции. В этом случае нужно брать мазок из предстательной железы у мужчин или из шейки матки у женщин.

В целом в лабораториях, которые специализируются по анализу мочи методом ПЦР, возможно определить несколько десятков различных инфекций.

Для анализа сдаётся первая порция мочи, поскольку в это время концентрация бактерий в ней максимальна. К сбору мочи надо приступать с утра.

Перед этим желательно не принимать антибиотики, противовирусные препараты в течение двух недель. Если это невозможно, необходимо посоветоваться с врачом.

ПЦР используется в гинекологии и андрологии как высокоточное средство обнаружения инфекции. Как у женщин, так и у мужчин этот метод применяется для диагностики урогенитальной инфекции. Для анализа со слизистой оболочки органов женщины берётся мазок на ПЦР со слизистой оболочки матки и влагалища, у мужчин – с передней уретры.

Показаниями к проведению ПЦР у женщин и мужчин являются:

  • Выяснение причин бесплодия.
  • Болезни, передающиеся половым путём.

Анализ мазка у женщин и мужчин методом ПЦР позволяет выявить такие инфекционные заболевания, как хламидии, молочница, трихомонады, гепатит, вагиноз, мононуклеоз, микоплазмоз, рак и другие заболевания.

Особенно опасны для женщин болезни, передающиеся половым путём, поскольку они могут оказать негативное влияние на здоровье ребёнка. Поэтому анализ ПЦР при беременности является обязательным в гинекологии.

Перед проведением ПЦР анализа женщина должна хорошо подготовиться. Прежде всего, за месяц перед анализом нужно прекратить употребление лекарственных препаратов. Во время месячных этот анализ не проводят.

Анализ кала методом ПЦР также позволяет изучить немало показателей.

Дело в том, что кал являет собой шлаки, остатки непереваренной пищи, различных продуктов распада, которые организм выводит через кишечник в процессе жизнедеятельности.

Поэтому если кал разложить на составляющие, в нем можно найти вещества, позволяющие исследовать состояние пищеварительного тракта, функционирование жёлчного пузыря, обнаружить кровотечения.

Здесь же присутствуют различные бактерии, гельминты и другие паразитические микроорганизмы. Вот почему не удивительно, что застой кала в толстой кишке способен вызвать отравление организма.

Во время исследования кала преимущество метода ПЦР перед другими анализами в том, что полимеразная цепная реакция способна определить непосредственное присутствие в кале возбудителей болезни по ДНК патогена.

Тогда как остальные способы исследования лишь косвенно, по следам отходов жизнедеятельности обнаруживают их присутствие в кале.

Ещё одним преимуществом метода ПЦР при исследовании кала являются высокая чувствительность и скорость получения результата.

Например, метод ПЦР во время исследования кала быстро позволяет обнаружить у женщин и мужчин такое широко распространённое заболевание, как лямблиоз. Известно, что лямблии даже если присутствуют в организме, могут годами ничем не выдавать своего присутствия.

Во время сдачи кала на ПЦР пациент должен особенно четко придерживаться правил личной гигиены. Во время забора материала он должен проследить, чтобы в образец кала не попали посторонние вещества (например, следует избегать попадания мочи).

Если говорить о расшифровке анализов ПЦР, в первую очередь нужно обратить внимание на то, какая формулировка использована в расшифровке. То есть положительный или отрицательный результат.

Слово «отрицательный» в расшифровке анализа зачастую говорит о том, что в представленном образце биологического материала инфекция не была обнаружена. Таким образом, отрицательный результат анализа ПЦР означает, что ДНК искомого возбудителя болезни в организме нет.

Означает ли это, что при отрицательном результате можно не делать других анализов и проходить обследования? Отвечая на этот вопрос, всегда надо учитывать, что ПЦР может дать ложный, отрицательный результат, если инфекция в латентном или хроническом состоянии. В таком случае другие методы диагностики окажутся более эффективными и способны дать более четкую картину о том, сколько патогенов в изучаемом образце.

Интересно, что хоть иммуноферментный анализ считается менее точным, возможен вариант, когда он будет показывать более достоверные результаты. Например, если на стадии ремиссии ПЦР показывает, как правило, отрицательный результат, ИФА дает положительный ответ, обнаружив антитела к инфекции.

Таким образом, ещё одним фактором, влияющим на расшифровку ПЦР, является сила иммунитета человека. Если иммунная система работает в полную силу, присутствие антител можно зафиксировать уже на начальных стадиях заболевания.

Вместе с тем, если отсутствуют жалобы у пациента и присутствуют антитела при отрицательном результате ПЦР, это говорит о том, что лечение в настоящий момент не требуется.

Но при этом грамотный врач будет учитывать присутствие возбудителей, и при необходимости назначит иные анализы.

Таким образом, подобный случай является примером того, когда отрицательный результат ПЦР требует дальнейшего исследования.

Таким образом, если говорить о положительных и отрицательных сторонах изучения материала методом полимеразной цепной реакции, то можно сказать, что к достоинствам ПЦР можно отнести:

  • Прямое и непосредственное выявление возбудителей болезней, в отличие от других методов, что основываются на косвенных показателях.
  • Специфичность и точность метода, его узкая направленность на конкретного возбудителя.
  • Высокая чувствительность данного метода, обнаружение патологических агентов вне зависимости от того, сколько их есть (даже в единичных случаях присутствия).
  • Универсальность метода позволяет использовать любые вещества жидкой среды организма, такие как мокроты, моча, кровь, слизь и другие.
  • Скорость анализа (если говорить о том, сколько делается анализ ПЦР, то много зависит от лаборатории: от нескольких часов до нескольких суток).

К недостаткам данного метода можно отнести то, что положительный результат возможен даже в том случае, если возбудитель инфекции будет мёртв, что может быть результатом лечения.

Также следует помнить, что любой микроорганизм способен к генетической мутации. Например, каждый год возникают новые штаммы вирусов гриппа.

И теоретически возможна ситуация, что ДНК вируса изменится до такого состояния, когда она уже не будет определяться ПЦР, поскольку не будет образца, с которым он будет сравниваться.

Минусом также может быть цена анализа: не каждый может позволить себе сделать полное обследование.

Вызвано это тем, что аппаратура и химические реактивы производятся и импортируются из США и Европы, что в основном и влияет на то, сколько стоит этот анализ. Цены на ПЦР могут колебаться около одной тысячи рублей за одно исследование.

Однако то, сколько он стоит, с лихвой окупается его повышенной точностью, что очень важно, если в организме развивается опасная патология.

Полимеразная цепная реакция (сокращённо ПЦР) – современный и сверхточный метод диагностики на генетическом и молекулярном уровне. ПЦР-диагностика дает возможность определить у человека наличие инфекции или наследственной болезни.

Сущность метода состоит в том, что ДНК либо РНК взятого на исследование материала подвергается многократному преумножению (амплификации), что возможно при наличии ферментов.

Благодаря этому получают большую массу ДНК либо РНК, по которой делают визуальную оценку.

У специалистов имеется база сведений о строении всех болезнетворных возбудителей и в соответствии с ней дается оценка, какой микроорганизм получили.

Исследуемый материал (слюна, кровь, мокрота, др.) помещают внутрь специального прибора (амплификатор) и добавляют определенные ферменты. Они соединяются с исследуемыми ДНК либо РНК и вызывают синтез их копий. Посредством ПЦР возможно определить тип возбудителя, его количество.

Интересно! Метод ПЦР был изобретён в 1983 году американским учёным Кэрри Мюллисом. За это открытие ему была вручена Нобелевская премия по химии.

Пробирки с исследуемым материалом

Методика ПЦР стала применяться в сфере медицины с недавнего времени и заняла важное место в диагностическом процессе.

  1. Прямое определение возбудителя. Некоторые методы, к примеру, иммуноферментный анализ, даёт возможность выявить выделяемые микробами белки. Это косвенное определение присутствия возбудителей. А посредством ПЦР с высокой точностью выявляется кусочек ДНК, принадлежащий определённой инфекции.
  2. Специфичность методики. Поскольку ПЦР выявляет ДНК, принадлежащему возбудителю, получить ложное заключение практически невозможно (за исключением неизвестного возбудителя). А при иммунологическом методе может произойти ошибка вследствие перекрёстной реакции между антигенами.
  3. Большая чувствительность. Метод определяет присутствие даже очень малого количества бактерий либо вирусов в организме. Достаточно 10 болезнетворных клеток на одну пробу. Для других методов минимальное количество клеток должно быть не менее 105.
  4. Универсальность методики. Процесс исследования в отношении разных микроорганизмов схож из-за подобия всех ДНК, РНК. На основании этого в одной пробе возможно выявить несколько возбудителей.
  5. Быстрое получение заключения. От момента забора пробы до получения результата проходит не более 4-5 часов. При ПЦР не нужен посев культуры, поэтому метод довольно быстрый.
  6. Эффективность диагностирования при скрытых видах инфекций. Метод выявляет те микроорганизмы, которые трудно или вовсе не поддаются культивированию. Такие возбудители встречаются при скрытых формах заболевания.
  7. Широкая сфера использования. ПЦР может быть использована не только в целях диагностики болезней человека, но и для определения микроорганизмах в почве, продуктах, воде и пр.

Но можно столкнуться и с недостатками ПЦР-метода:

  1. Микробы способны изменяться. Возбудители могут меняться и мутировать. Поэтому они могут не поддаваться определению посредством ПЦР.
  2. Возможность умножения ДНК не только живого, но одновременно и мёртвого возбудителя. Чтобы избежать такой ситуации, использовать ПЦР можно только через 1-2 месяца после восстановления от перенесённой ранее болезни.

Метод исследования применяется для различных целей, поэтому ПЦР-методика имеет разновидности:

  1. С обратной транскрипцией – применяется для многократного удвоения и последующего определения того, РНК какого микроорганизма получилось выделить. Для этого используют библиотеку данных о структурах различных возбудителей.
  2. Инвертированная – используется, когда имеется маленький участок внутри конкретной последовательности.
  3. Вложенная – применяют для уменьшения количества нежелательных продуктов реакции. Для этих целей проводят два последовательных исследования.
  4. Асимметричная – применяют в случае, если нужно умножить в большей степени одну из всех имеющихся цепочек ДНК.
  5. Количественная (в реальном времени) – необходима для непосредственного изучения того, как меняется количество получаемого продукта в каждом новом цикле реакции ПЦР.
  6. Цифровая – наиболее современная и точная.
  7. Групп-специфическая – это такое исследование, которое проводится в целях изучения родственных связей.
  8. Ступенчатая – снижает влияние неспецифического взаимодействия праймеров.

Рекомендуют метод обследования женщинам в положении и планирующим беременность. Благодаря своевременно поставленному анализу и вовремя начатому лечению при наличии инфекции, можно будет снизить риск рождения больного малыша. В случае если ребенок все же заразился, то это поможет избежать серьезных осложнений.

Для лабораторного ПЦР-исследования используют различный биоматериал в зависимости от предполагаемого заболевания. Подробнее о материалах и правилах забора, смотрите таблицу ниже.

Материал Правила забора Объем материала
Эпителиальный соскоб или мазок При использовании специального ёршика. Попадание крови недопустимо.Возможно брать с поверхностей:
  • уретры;
  • конъюнктивы;
  • слизистых дыхательных путей;
  • цервикального канала
Моча Собирать только проснувшись в стерильно чистую ёмкость 50 мл
Мокрота В стерильную баночку Примерно 20 мг
Кровь и её компоненты Берётся из вены, пациент должен прийти натощак Около 1,5 мл
Биологические жидкости Материал берётся стерильным инструментом.Могут быть исследованы:
  • слюна;
  • околоплодные воды;
  • спинномозговая и суставная жидкости;
  • сок простаты
Примерно 1,5 мл
Биоптата (материал, получаемый при биопсии) Обычно берут из желудка, двенадцатипёрстной кишки До 3 мг

Метод применяется в диагностике следующих инфекционных болезней:

  • ВИЧ;
  • инфекции мочевыводящих путей;
  • гепатит;
  • листериоз;
  • цитомегаловирус;
  • туберкулёз;
  • вирус папилломы (ВПЧ);
  • клещевой энцефалит;
  • заражение глистами;
  • половые болезни;
  • хеликобактерная инфекция;
  • герпес.

На видео можно увидеть процесс исследования и его преимущества. Снято каналом Dixi dailydiary.

Для получения корректного результата необходимо придерживаться определённых правил. Тест делают в момент обострения болезни. За 3 суток до исследования необходимо приостановить прием лекарств, особенно антибиотиков. Повторить анализ нужно через месяц после выздоровления. Забор делают при помощи стерильных одноразовых инструментов.

Подготовка к ПЦР-должна быть следующей.

По поводу какой болезни проводится исследование Пол пациента Меры по подготовке
Гепатиты (берётся кровь) Мужчины, женщины
  • прийти натощак;
  • избегать излишних физических нагрузок;
  • не курить за час до сдачи крови;
  • за два дня не пить алкоголь и не употреблять жирное
Инфекции мочевыводящих и половых органов Женщины
  • не использовать вагинальные препараты;
  • за 5 дней до ПЦР не делать кольпоскопию и трансвагинальное УЗИ;
  • не сдавать анализ во время месячных;
  • воздержаться от интимной жизни за 3 дня до обследования;
  • подмываться простой водой без применения моющих средств;
  • не делать спринцевания;
  • не мочиться за 2 часа до ПЦР
Мужчины
  • за 3 дня воздержаться от интимных отношений;
  • мыть половые органы простой водой без мыла;
  • не ходить в туалет «по-маленькому» за 3 часа до сдачи анализа
ЛОР инфекции (мазок носо- и ротоглотки) Мужчины, Женщины
  • не применять лекарства для носа и полости рта;
  • не курить за час;
  • за 2-3 часа не есть;
  • не чистить зубы

Анализ делается в специализированных лабораториях. Порядок проведения исследования описан в специальном медицинском протоколе.

Весь процесс осуществляется в несколько основных этапов:

  1. Сбор материала. Его осуществляют в процедурном кабинете конкретного профиля. Инструменты и посуда должны быть стерильными.
  2. Хранение и доставка биологического материала. При температуре около 20 градусов держать пробу можно не более двух часов. В охлаждённом состоянии материал допускается хранить одни сутки. Пробу можно заморозить на срок до двух недель. Если требуется транспортировка, осуществлять её необходимо при использовании термоконтейнеров.
  3. Выделение ДНК. Проводится разными способами в зависимости от вида имеющегося материала и исследуемых микроорганизмов.
  4. ПЦР. Немного материала переносят в специальную ёмкость, добавляют амплификационную смесь. Этот сосуд устанавливают внутрь программируемого прибора, где происходит автоматическое удвоение ДНК. Процесс может длиться до 3 часов. Параллельно с этим проводят ещё два исследования — положительное (содержит исследуемое ДНК) и отрицательное.
  5. Регистрация полученного результата. Участок ДНК выделяют при помощи электрофореза при добавлении бромистого этидия. Когда он соединяется с ДНК, то образуются светящиеся полосочки. Образец анализируют в ультрафиолете. Если имеются светящиеся полосы оранжевой окраски, то получен положительный результат. При наличии современного анализатора ПЦР этапы по выделению ДНК, амплификации и определению возбудителя могут быть выполнены прибором в автоматизированном режиме. Участия человека при этом не требуется.
  6. Интерпретация результатов. Положительный итог исследования говорит о присутствии инфекции. Количественная оценка может показать степень тяжести заболевания.
Читайте также:  Знавал я нищего как тень анализ

Наполнение пробирок образцами крови

В заключении исследования даётся однозначный ответ о наличии возбудителя, который бывает:

  • отрицательным, это означает, что инфекции нет;
  • положительным – она есть.

Выявление инфекции может произойти и при отсутствии симптомов болезни у человека. Это начальная стадия заражения. Иногда можно получить ложноположительный ответ (на грани отрицательного и положительного результата). В этом случае анализ необходимо сделать повторно. Особое внимание нужно уделить тому, чтобы материал был собран при полном соблюдении всех требований.

На практике результат исследования можно получить через 2 дня. Иногда его могут сделать быстрее – в день сдачи.

Стоимость ПЦР определяется тем, какую инфекцию будут исследовать. Также она зависит от методики проводимого тестирования. Средняя цена анализа находится в пределах от 200 до 850 руб. В стоимость входит и плата за забор материала — около 400 руб.

Ориентировочные цены на исследование ПЦР.

Исследуемая инфекция Цена, руб
ВПЧ 360-1920
Хламидия 800
Краснуха 830
Микоплазма хоминис 560
Кандида 590
Микоплазма гениталиум 370
Герпес 360-610
Гонококк 370
Уреплазма 360

Зачастую медицинские учреждения предлагают провести анализ одновременно на несколько инфекций, чтобы выявить нужную. Такое обследование будет стоить дороже, но оно избавит от необходимости дополнительных исследований, что сэкономит время пациента.

В ролике рассказывается о сущности метода ПЦР и его преимуществах. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.

Инфекционные заболевания представляют угрозу для человечества. Они способны годами разрушать организм без внешних проявлений. Инфекции запускают изменения в клетках и тканях – развиваются воспаления, образуются атипичные клетки.

ПЦР анализ относительно недавно стал использоваться в практической медицине, но завоевал славу самого результативного.

С его помощью можно констатировать заражение патологическими микробами задолго до проявления клинических симптомов инфекционного заболевания.

Методика ПЦР (полимеразной цепной реакции) разработана микробиологом Кери Мюллисом. В 1993 ученый получил за нее Нобелевскую премию.

С тех пор метод стали активно внедрять в работу медицинских лабораторий, как самый перспективный, точный и универсальный способ обнаружения различных инфекционных агентов.

ПЦР продолжают использовать и в научных целях, для исследования малоизученных микроорганизмов.

Методика базируется на законе природы и микробиологии – все живые существа имеют уникальную ДНК или РНК, состоящую из цепочек нуклеотидов, расположенных в особой последовательности. Зная ее, можно выявить любой микроорганизм. Единственная проблема – его необходимо найти.

В организме человека прячутся несметные количества микроскопических организмов. Иногда заражение происходит при контакте с единицами микробов. До создания ПЦР-диагностики выявить их было практически невозможно.

Метод подразумевает создание условий для усиленной репликации (деления) чужеродных фрагментов ДНК. Чем их больше – тем проще определить вид возбудителя. Для проведения анализов применяют специальное оборудование и ферментные системы. В комплексе они обеспечивают быстрое размножение искомой ДНК до того момента, пока ее можно будет обнаружить.

Сферы применения ПЦР-диагностики чрезвычайно обширны. По описываемому принципу можно найти любой микроб. Будь то грибок, бактерия, вирус или простейшие. Анализ используют для выявления:

  • всех типов вируса гепатита;
  • вирусов герпеса;
  • микроорганизмов, провоцирующих половые инфекции (уреоплазма, гарднерелла, микоплазма, трихомонады, хламидии);
  • ВИЧ;
  • микобактерии туберкулеза;
  • хеликобактер пилори;
  • грибков;
  • энцефалитного клеща;
  • листерий;
  • ВПЧ.

Характерной особенностью для ПЦР выступает возможность выявления единичных фрагментов генетического материала возбудителя, на что не способны другие типы лабораторной диагностики.

Для проведения ПЦР-диагностики необходим биоматериал – биологическая жидкость или ткань, в которой (теоретически) «селятся» микроорганизмы сразу после попадания в человеческое тело. Используют мокроту, частички эпителиальной ткани, соскобы со слизистых оболочек (мазки), кровь, мочу, мокроту, выделения из желез.

Сразу после забора биоматериал помещают в специальную стерильную транспортную среду. Это важно для профилактики обсеменения другими микроорганизмами из воздуха. К полученному материалу добавляют ферментные системы.

Они состоят из специфических цепочек ДНК или РНК, способных «распознать» родственные им фрагменты.

Обработанный материал помещают в специальное оборудование, где он выдерживается на протяжении определенного времени при максимально благоприятном температурном режиме.

После смешивания с ферментной системой, инфекционные фрагменты ДНК восстанавливают целостность и приобретают способность к делению. Размножение материала происходит в геометрической прогрессии.

Средний цикл цепной реакции занимает около 3 минут. Это значит, что спустя 3 часа пребывания в устройстве, в биоматериале будет то количество цепочек ДНК или РНК, которое позволит найти и идентифицировать возбудителя.

ПЦР-диагностика на любую инфекцию дает 2 варианта результатов – положительный или отрицательный. Анализ только подтверждает или исключает наличие чужеродного агента в организме.

То есть, опираясь на результаты диагностики, врач может констатировать или опровергнуть факт заражения. Судить о давности развития инфекции или интенсивности деления микроорганизмов не приходится.

Для этого применяются ИФА-тесты, базирующиеся на выявлении и подсчете количества антител, сформировавшихся при иммунном ответе.

Поскольку ПЦР-диагностику проводят для выявления патогенных микроорганизмов, факт заражения означает только одно – будет проведено дообследование и назначено лечение. Отрицательный результат также однозначен – организм пациента не пребывал в контакте с инфекцией.

Расшифровывать результат анализа должен врач. Пребывание инфекции в теле не всегда означает болезнь. Возбудитель может сосуществовать с человеком латентно (скрыто) и никак не беспокоить «хозяина».

Метод полимеразной цепной реакции считается самым прогрессивным способом лабораторной диагностики и используется практически во всех сферах медицины. Способствует тому множество преимуществ методики.

ПЦР дает достоверные результаты. Точность метода на сотые доли превышает 99.9%. Мизерную часть сомнений можно оставить на случай форс-мажора в лаборатории, что бывает крайне редко.

Более того, в отличие от остальных методов диагностики, ПЦР срабатывает практически сразу после заражения. Вероятность ложноотрицательного результата при ВИЧ присутствует на протяжении 2 недель после контакта с носителем инфекции (усредненный показатель).

Однако даже если возбудитель не активизировался сразу, а начал бессимптомно «жить» в организме, ПЦР его «увидит».

Полимеразная цепная реакция подразумевает выявление только искомого возбудителя инфекции. Для этого используются высокоспецифичные ферментные системы, способные активизировать отдельные гены микроорганизмов. При исследовании мазков со слизистых, не учитываются показатели условно-патогенной микрофлоры, а находятся только болезнетворные микробы.

Методика постоянно совершенствуется. Некоторые лаборатории предлагают провести ПЦР диагностику сразу на несколько болезнетворных микробов. Это добавляет к специфичности анализа характеристику универсальности.

С данной целью применяют унифицированные ферментные системы, способные запустить деление нескольких типов инфекции. Наиболее востребованы комплексные анализы в урологии и гинекологии.

В данных сферах часто встречаются опасные инфекции, способные вызвать необратимые изменения в организме инфицированного человека. Мазки из урогенитального тракта исследуют одновременно на 3, 5, 9 и даже 13 микроорганизмов.

Однократный забор биоматериала для изучения, позволяет выявить сразу все микробы, которые потенциально могут присутствовать в исследуемой среде.

Результаты ПЦР-тестов обычно готовы на следующий день после забора биоматериала. Некоторые лаборатории предоставляют их уже через несколько часов (в печатном, устном, электронном форматах). Сроки готовности результатов зависят от технических возможностей медицинского учреждения. Чем оно «богаче», тем лучше и современнее технологическая база и, тем быстрее готовятся результаты анализов.

Несмотря на все «дифирамбы» у методики есть и недостатки. По сравнению с количеством и важностью достоинств, они менее существенны.

Первый недостаток кроется в стоимости. Анализ нельзя отнести к дорогим или доступным. Все зависит от того, каким оборудованием пользуется лаборатория. Технологическое оборудование для проведения ПЦР-анализов дорогостоящее.

Потребуются специальные агрегаты, очистительные приспособления для воздуха и биоматериала, устройства для его хранения, транспортировки, ферментные системы. Лаборатория понесет затраты на обучение медицинского персонала. При заборе проб важно обеспечить их стерильность, минимизировать риск обсеменения в процессе транспортировки и исследования.

Для этого медицинский персонал изучает четкие инструкции. Только после специального обучения сотрудников допускают к работе с аппаратурой.

Специалисты рекомендуют сдавать ПЦР-анализы в лабораториях с многоуровневой проверкой качества результатов. Это сводит риск ошибки почти к нулю.

Забор материала и его первичную обработку перед аппаратным исследованием проводит человек, поэтому нельзя исключаться человеческий фактор ошибки. Вероятность контакта минимальна и даже исключена, если забор выполняет обученный человек. Однако сотые доли риска нарушений все равно присутствуют.

Сдавать биоматериал для анализа необходимо по рекомендации лечащего или семейного врача. Если доктор подозревает пребывание пациента в очаге инфекции или контакт с ее носителем, он посоветует незамедлительно сдать анализ. Заблаговременное обследование поможет диагностировать инфекцию как можно раньше.

В частных лабораториях можно сдать целые «панели» ПЦР-анализов без назначения врача. Пациенты могут обследоваться по собственному желанию (анонимно), а также в профилактических целях. Ответственный подход к своему здоровью приветствуется, однако расшифровкой результатов диагностики должен заниматься специалист.

Врачи рекомендуют сдавать некоторые анализы на регулярной основе – ВИЧ, сифилис, гепатиты. Заражение может произойти незаметно. В начале развития заболевания симптомы возникают не всегда. Чем раньше выявить возбудителя, тем скорее можно начать лечение и предотвратить неисправимый ущерб для здоровья.

Комплексную ПЦР-диагностику можно (и нужно) проходить на этапе планирования беременности, после незащищенных сексуальных контактов (с малоизвестной личностью, при изнасиловании), пребывания в местах, где зарегистрирована вспышка инфекции.

ПЦР – современный и качественный способ выявления инфекционных заболеваний.

Анализы этого типа назначают перед определением окончательного диагноза, при постановке на диспансерный учет, перед проведением хирургических вмешательств. Чтобы получить достоверные результаты нужно подготовиться.

Кровь сдают утром натощак, мазки урогенитального тракта – при условии 3 дней полового воздержания, мокроту и частицы эпителия – в стерильных лабораторных условиях.

воскресенье, апреля 3, 2016 — 00:08

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР анализ, является методом диагностирования инфекционных возбудителей в организме. Применяется в гинекологии для выявления инфекций, которые передаются половым путем. Данное исследование было предложено в 1983 американским ученым Мюллисом, который изначально применял его для исследовательских целей, а позже ввел и в практическую медицину.

За открытие данного метода ученый был награжден Нобелевской премией. Преимущество данного исследования состоит в том, что в отличие от других диагностических методов, ПРЦ анализ очень редко дает ложноотрицательные и ложноположительные результаты.

ПЦР исследование основано на принципе определения ДНК. Как известно, каждый живой организм содержит генетический код, за который отвечает дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК). Она состоит из нуклеотидов, которые соединяются, соблюдая правило комплементарности.

Для определения инфекции в организме хватает малого участка генетической информации того или иного возбудителя. Принцип работы анализа ПЦР как раз и построен на выявлении небольшого генетического фрагмента микроорганизма.

Для разных возбудителей создан определенный детектор, который, соблюдая правило комплементарности, точно находит свой фрагмент, поэтому определить таким образом, какой микроорганизм вызвал инфекцию, не составит огромного труда.

С помощью анализа ПЦР успешно выявляют:б

  • Гепатит вирусной этиологии
  • Сальмонеллу
  • Дифтерийную палочку
  • Холеру
  • Токсоплазмоз
  • Цитомегаловирус
  • СПИД
  • Хламидии и уреаплазмы
  • Микоплазмоз
  • Кандидоз и гарднерелез
  • Трихомонаду
  • Папилломавирусную инфекцию
  • Герпесная инфекция, которая является довольно опасным заболеванием и долгое время может находиться в спящем состоянии.
  • Хеликобактер
  • Вирусы гриппа группы А и В

Для определения заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), в гинекологии анализ ПЦР является необходимой процедурой при исследовании болезней женских половых органов.

Данная диагностическая процедура назначается для определения:

  • Причин хронических воспалений мочеполовых путей
  • В случае тяжелой беременности
  • Острые стадии ЗПП
  • Хронические фазы ЗППП
  • Определения причин бесплодия
  • Проверка результативности лечения антибиотиками
  • Выявление чувствительности или иммунитета к определенным видам антибиотика
  • Контроль донорской крови

Анализ ПЦР стал незаменимым, поскольку позволяет определить и изучить заболевания в хронической стадии, а также редкие и плохо изученные инфекции.

Для определения возбудителя разных инфекций забор материала может отличаться.

У женщин для определения заболеваний, которые передаются половым путем, анализ берется из шейки матки, мочеиспускательного канала, а также исследуются выделения из влагалища и моча.

Для определения гепатита С вирусной этиологии, а также ВИЧ и СПИДа на исследование берут кровь из вены. У мужчин для определения ЗППП берется мазок из мочеиспускательного канала, выделения, если таковые присутствуют, и моча.

Когда врач назначает ПЦР анализ, многие пациенты отказываются от него, аргументируя тем, что он достаточно дорогой, а точность результата неизвестна. Это большое заблуждение. Рассмотрим, каковы же минусы и плюсы данного вида диагностики.

  • Универсален.Данный анализ позволяет выявить различные ДНК и РНК тогда, когда другие методы исследования не работают. Позволяет определить не только наличие возбудителя, его тип, а также количественное соотношение данного микроорганизма.
  • Высокая специфика (точность 100%).Это значит, что в процессе исследования определяется последовательность нуклеотидов, характерная для отдельно взятого микроорганизма. К тому же, оборудование позволяет определить наличие других возбудителей в том же материале, и это никак не влияет на точность и качество ответа.
  • Высокая чувствительность к выявлению возбудителей инфекции. Выявить микроорганизм возможно даже при минимальном содержании ДНК в биологическом материале
  • Быстрота проведения диагностики. Процесс занимает всего несколько часов, поэтому результат пациент сможет получить уже на следующий день.
  • ПЦР анализ выявляет именно наличие инфекции, а не реакцию организма на нее. Поэтому определить наличие патогенных организмов можно еще в состоянии сна инфекции или в инкубационном периоде.

Минусы диагностики с помощью ПЦР анализа:

  • Результат анализа во многом зависит от того, как проводилось исследование и в каком помещении. Из-за высокой чувствительности в материал могут проникнуть чужеродные микроорганизмы из внешней среды, поэтому в лабораториях обязательны биологические фильтры воздуха с высокой степенью фильтрации.
  • Брать анализ и оценивать результаты должен исключительно лечащий врач. Это важно потому что не всегда положительный результат является заболеванием. Возможно, пациент уже прошел курс лечения, а инфекция и возбудители удаляются из организма не сразу.
  • И, конечно, от правильности взятия анализа зависит точность ответа. Проводить анализ обязан только врач, который имеет квалификацию и четкие инструкции от лаборатории по взятию материала для пцр анализа.

Данное исследование назначает специалист в случае жалоб пациента на необычные и симптомы:

  • Зуд и жжение в области половых органов
  • Обильные выделения с неприятным запахом, изменившейся консистенцией и цветом.
  • Боли внизу живота, а также при мочеиспускании
  • Также Вы можете попросить врача провести обследование, если имел место незащищенный половой контакт с неизвестным партнером.

Также данное исследование назначают молодым парам, которые хотят родить здорового малыша, и беременным.

Как подготовиться к сдаче анализа ПЦР:

  • Исключены половые контакты за 36 часов
  • Нельзя мочиться 3 часа до забора материала
  • Запрещен прием антибиотиков и использование вагинальных бактерицидных свечей
  • Запрещено спринцевание и сдача анализа во время месячных
  • Запрещено использовать антибактериальное мыло

ПЦР анализ на сегодняшний день является одним из самых эффективных и мощных методов исследования. В большинстве случаев он используется для выявления инфекций, передающихся половым путем.

Новейшее оборудование позволяет за одно исследование выявить от 5 до 13 инфекций, что весьма облегчает жизнь, как пациентам, так и врачам, которые основываясь на результаты, могут установить правильный и точный диагноз и назначить эффективное лечение.

Несмотря на универсальность исследования ПЦР, необходимо использовать и другие методы, для того чтобы определить и правильно оценить ответ иммунной системы организма. Зачастую анализ комбинируют с серологическими методами исследования.

В случае, если вы сдаете анализ ПЦР, самостоятельно обратившись в лабораторию, при положительных результатах исследования не стоит откладывать посещение врача, так как большинство возбудителей способны негативно сказываться как на репродуктивной системе, так и на здоровье организма в целом.

ПЦР, Бесплодие, ДНК, анализы

Анализ пцр — это инновационная лабораторная диагностическая методика, конечной целью которой выступает обнаружение патогенных микроорганизмов, вирусов и инфекций.

Полимеразная цепная реакция понятна далеко не каждому, ведь в ее сути способен разобраться только специалист.

Главное, что данная методика дает хорошие результаты и позволяет выявить труднодоступные и скрытые патологии.

Анализ пцр относительно молодой, ему около 30-ти лет. Данная методика исследования прошла все этапы эволюции и сегодня является одной из самых информативных. Смысл заключается в многократном увеличении ДНК искусственным образом. Осуществляется повторение той части, которая имеется лишь у определенной разновидности патогенного возбудителя.

Время воздействия составляет три минуты. Достаточно около тридцати таких этапов, чтобы вышло нужное число молекул для четкого выявления агента способом электрофореза.

Кроме этого медики сращивают части ДНК, выполняют различные мутации, что позволяет применять анализ пцр диагностику не только с целью выявления инфекционных и генетических нарушений, но и для подтверждения или опровержения родственных связей, клонирования и прочее.

Проведение пцр анализа осуществляется в специальных медицинских учреждениях с применением специализированной техники.

Значения могут носить отрицательный либо положительный характер. В первом случае можно говорить о том, что никаких инфекций и патологий не выявлено, во втором, они обнаружены и человек заражен.

Часто позитивный результат наблюдается у носителей инфекций, но при этом люди себя абсолютно нормально чувствуют, ни на что не жалуются. Нужно отметить, что это ранняя стадия болезни, которая пока себя не проявила, нужна консультация доктора. Когда недуг был обнаружен, нужно обязательно предпринять терапевтические меры.

Пцр диагностика инфекций выступает на сегодняшний день самым точным исследованием и позволяет безошибочно определить наличие вредителя.

Все зависит от разновидности изучаемого материала. Анализ крови пцр сдается в утреннее время на голодный желудок. Анализ кала на пцр и мочи сдается аналогично, материал берут чистыми приспособлениями и кладут в стерильный контейнер.

Если нужно исследовать мазок либо соскоб, тогда следует исключить половую связь за несколько суток до мероприятия, в том числе и спринцевания. Воздержитесь от сдачи анализа в период месячных и еще на протяжении двух дней после их окончания.

Выполняется данное исследование в лабораторных условиях. Мероприятие состоит из нескольких этапов:

  1. Забор материала выполняется в кабинете медицинского учреждения. Все оборудование и принадлежности должны быть стерильными.
  2. Материал хранится под определенной температурой, не дольше двух часов по времени. При более продолжительном сбережении пробирка помещается в холодильник. Если нужно сохранить материал на две недели, тогда его замораживают. Перевозится в специально отведенных для этой цели контейнерах.
  3. Выделение ДНК. Все зависит от типа интересующего представителя патогенной флоры. Применяются методики твердофазной сорбции и др.
  4. Материал помещают в специальную центрифугу. Автоматически делается амплификация. Длится манипуляция от двух до трех часов. Число циклов колеблется от 30 до 40-ка.
  5. Фиксирование полученных данных. Фрагменты выделяются способом электрофореза. Образцы изучаются в ультрафиолетовом свечении. Появление оранжевой полосы говорит о позитивном результате.
  6. Трактовка полученных данных. Бывает положительной и отрицательной, количество интерпретирует доктор. На его основании делают выводы о прогрессировании болезни, и определяется тактика лечения.

Анализ днк методом пцр применяется в самых разных сферах. Сегодня это один из самых популярных диагностических способов, который является приоритетным:

  • в гинекологии. Позволяет определить ряд инфекций: ВПЧ, хламидиоз, гарднереллы и многое другое. Обнаружение вирусов и инфекций позволяет предпринять своевременно меры по предотвращению рака шейки матки;
  • в неонатологии. Известно множество патологий, которые способны вредить плоду еще в материнской утробе;
  • в службе крови. Пациенты с тяжелыми диагнозами типа сифилиса, ВИЧ и др., проходят пцр диагностику. Она определяет даже скрытые инфекции, которые невозможно выявить с помощью обычных серологических методов;
  • при подозрении инфекций, также делается пцр анализ на зппп. С помощью него удается выявить вирусы гепатита, нередко назначают делать анализ пцр на вич и другие инфекции;
  • в пульмонологии назначается при подозрении на воспаление легких, наличие бронхитов. Делается также анализ крови пцр на туберкулез, что позволяет определить недуг на начальном этапе развития.

В мед учреждениях обычно предлагается комплексный пцр анализ для определения целых групп инфекций.

В период вынашивания любой недуг может негативно повлиять на внутриутробное развитие плода. Чем быстрее врачу удастся определить возбудителя, тем быстрее можно будет назначить эффективную тактику терапии. Нельзя ждать и использовать малоинформативные методы, так как это может привести к прогрессированию заболевания и даже гибели ребенка.

Мазок у мужчин чаще всего берут из мочеиспускательного канала. Необходимо его сдать в случае подозрения на наличие инфекций, заболеваний с вялотекущей клиникой, а также в случае обнаружения патологий у партнерши.

Предпосылками для назначения данного исследования служат:

  • наличие выделений;
  • болезненные ощущения при мочеиспускании;
  • покраснения и отеки;
  • сыпь;
  • постоянные позывы в туалет;
  • воспаления мочеполовой сферы;
  • подозрения на любые зппп;
  • проблемы с репродуктивной функцией;
  • профилактика.

Сдают такой анализ по рекомендации доктора.

Стоимость зависит от того, на какой именно тип инфекции человек желает провериться. Также есть два способа проведения исследования: качественная и количественная методика. К тому же в разных клиниках действует своя ценовая политика, которую необходимо уточнять.

источник