Анализ пцр 12 как сдают

ПЦР диагностика — это методика, основанная на применении полимеразной цепной реакции, с помощью которой можно обследовать человека на инфекционные и наследственные заболевания. Анализы ПЦР на 12 инфекций показывают результат, несмотря на то, остро протекает заболевание или хронически. Некоторые специалисты считают ПЦР 12 обязательным анализом и не ставят без него окончательный диагноз. Результаты могут быть положительными даже задолго до появления симптоматики болезни.

В 20 веке Кэри Мюллис из США открыл явление полимеразной цепной реакции. В настоящее время метод ПЦР является золотым стандартом в некоторых сферах медицины. Метод является максимально эффективным для выявления болезни в активной стадии, поскольку бывают случаи, что в активной стадии обычные методы не дают такого точного результата.

Диагностика инфекционных процессов при помощи ПЦР достаточно актуальна в современном мире. Преимуществами данного вида обследований являются следующие моменты:

Обнаружение инфекционного возбудителя в анализах. Анализ предполагает выявление ДНК или РНК инфекционного агента.
Практически исключены ложные и ошибочные реакции.
Методика ПЦР 12 максимально чувствительная. Благодаря данному методу можно обнаружить даже единичные клетки инфекционных агентов.
Результат ПЦР на скрытые возбудители готов уже через 4 часа после проведения процедуры.
Способность обнаружения инфекционных агентов без отсутствия характерной симптоматики для заболевания. Метод достаточно эффективен и по происшествии конкретной болезни.

В современном мире ПЦР диагностика инфекций развивается ускоренными темпами. Методика активно совершенствуется. Появляются новые подвиды обследования ПЦР. Благодаря развитию данного метода обследования он становится максимально доступным широкому кругу людей, а стоимость при этом постепенно изменяется.

Метод ПЦР проводится исключительно в лабораторных условиях. Для его осуществления используются специальные ферменты, которые увеличивают в несколько раз структуру ДНК и РНК больного. Должно образоваться такое число ДНК и РНК, чтобы можно было провести визуальный анализ. Во время обследования происходит копирование того участка РНК или ДНК, который идеально подходит под требуемые условия.

В лаборатории существует соответствующая база данных, в которой указано точное строение различных инфекционных агентов. Благодаря методу ПЦР можно не просто увидеть возбудителя, но и подсчитать его количественное соотношение.

ПЦР-диагностика предполагает и определенные новшества, среди которых можно выделить следующие:

введение мутаций;
соединение отдельных фрагментов ДНК;
определение отцовства и др.

ПЦР диагностика может выявить следующие инфекционные процессы:

ВИЧ;
гепатиты следующих разновидностей: А, В, С, G;
вирус Эпштейн-Барра, возбудитель инфекционного мононуклеоза;
цитомегаловирус;
микобактерии туберкулеза;
герпес 1 и 2 типа;
многие инфекции, передающиеся половым путем: уреаплазмоз, гарднереллез, хламидиоз, микоплазмоз, трихомониаз.
ВПЧ и его онкогенные подвиды;
клещевой энцефалит и боррелиоз;
кандидозная инфекция;
листериоз;
инфекция хеликобактер пилори.

И это лишь часть наиболее распространенных инфекций, которые можно выявить при помощи ПЦР. ПЦР анализ крови активно применяется в гинекологической сфере медицинской практики, а также в таких областях, как:

пульмонологическая;
фтизиатрическая;
гастроэнтерологическая;
онкологическая;
многие другие разделы медицины.

Чужеродные ДНК и РНК можно выявить, обследовав разнообразные биологические жидкости конкретного человека. Для того чтобы обследовать человека на присутствие определенных инфекций, передаваемых половым путем, необходимо взять на пробу выделения из половых органов (мазок или соскоб) больного и его мочу.

Если возникла необходимость обследовать человека на различного рода инфекции (ВИЧ, герпес, гепатит и другие), то берется ПЦР анализ, для чего используется кровь больного.

Чтобы диагностировать герпетическое поражение, мононуклеоз, нужно взять мазок из полости рта больного. Для подтверждения ЦМВИ для осуществления анализа берется моча больного. Возникают случаи, когда обследуют спинномозговую жидкость для выяснения причин возникших неврологических отклонений.

Врач-пульмонолог при этом обследует методом ПЦР мокроту и жидкость из плевры конкретного больного.

Если у новорожденного ребенка возникло подозрение на внутриутробное инфицирование, врачи берут анализ околоплодных вод у беременной женщины и кусочек тканей плаценты.

Все пациенты, обследуемые по методу ПЦР, получают наиболее достоверный результат. В данном случае возникновение ошибок практически исключено. Результаты данного анализа готовятся достаточно быстро, что облегчает постановку диагноза и обеспечивает своевременное назначение лечебных мероприятий.

Достоверность результата ПЦР напрямую зависит от правильности сдачи материала на обследование. Материал не должен быть загрязнен, иначе результат исследования не будет объективен. К наиболее важным рекомендациям перед сдачей анализа ПЦР относятся следующие требования:

Запрещено проявлять половую активность за сутки до проведения анализа.
Анализ крови на инфекции необходимо сдавать на голодный желудок в утреннее время.
Моча сдается утром в стерильный контейнер.

Результат анализа будет готов через 1,5-2 суток после проведения рассматриваемой процедуры. Встречаются такие ситуации, когда результат может быть подготовлен в тот же день.

Результат данного вида обследования может быть положительным и отрицательным. Отрицательный результат анализа крови говорит о том, что инфекционных элементов в сданном материале нет. Большое количество проведенных анализов ПЦР показывает отрицательный анализ.

Положительный анализ ПЦР подтверждает тот факт, что в сданном материале обнаружены инфекционные агенты и необходимо качественное, максимально эффективное лечение больного.

Результат может быть положительным, но какие-либо проявления заболевания отсутствуют. Это говорит или о начале заболевания, или о его носительстве. Если выявлено носительство болезни, то никакие лечебные мероприятия не требуются. Просто необходимо наблюдаться у специалиста. Примерами таких заболеваний являются:

папилломавирусная инфекция;
герпес и др.

Обычно их обнаруживают в слюне, соскобе из цервикального канала, уретре. Однако необходимо помнить, что больной человек может заразить абсолютно здоровых, несмотря на то, что его данная болезнь никак не беспокоит. Заболевание может перейти в хроническую форму. Следует отметить, что в тех случаях, когда ПЦР анализ крови показал положительный результат, назначение лечебных мероприятий просто необходимо.

Анализ ПЦР имеет еще и количественную характеристику. Количественный результат оценивает только специалист, он индивидуален для разных инфекций. Основываясь на количественной характеристике, врач способен понять, насколько активен данный патологический процесс, поставить точную стадию развития конкретного заболевания. Благодаря анализированию полученных результатов специалист может выбрать необходимый препарат и, возможно, пересмотреть дозировку препарата.

Специалистам дают ПЦР 3 важнейших характеристики, среди которых выделяют:

Диагностика инфекций методом ПЦР имеет большую вероятность обнаружения инфекционных агентов. ПЦР анализ крови и других жидкостей высокоспецифичен. С его помощью можно легко выявить конкретный инфекционный процесс. Диагностика ПЦР обладает высокой чувствительностью. Если в исследуемом материале содержится минимальное количество инфекционных агентов, метод ПЦР будет всегда положителен.

Наиболее редко бывает ложноположительный результат. Если инфекции нет, то и результат отрицателен.

Если у человека подозревают ИППП, то назначают анализ крови на скрытые инфекции. Половые заболевания можно выявить лишь путем обследования больного. Скрыто могут протекать такие заболевания, как:

Вышеперечисленные половые инфекции достаточно распространены и при этом коварны. На начальной стадии развития заболевания они не дают яркой симптоматики, и больные не обращаются за помощью. ПЦР анализ крови, соскобы со слизистой мочеиспускательного и цервикального канала обязательны при подозрении на эти инфекции.

ИППП очень негативно влияют на репродуктивную систему. Они способны вызвать бесплодие или пороки у плода. В связи с этим перед тем, как планировать беременность, нужно сдать анализ ПЦР.

Популярностью пользуется ПЦР на 12 инфекций. Диагностика методом ПЦР 12 проводится благодаря сдаче мазков из половых органов. Забор материала производится через 2 часа после акта мочеиспускания. За 2 дня до исследования нельзя вводить во влагалище суппозитории и проводить спринцевания. Результат анализа будет готов уже через 2 дня.

Стоимость ПЦР колеблется в зависимости от исследуемой инфекции. Цена находится в диапазоне от 200 до 500 рублей за каждую инфекцию. Войти и обследоваться в частной лаборатории можно и самостоятельно, без направления врача.

источник

В статье рассмотрим, как проводится анализ ПЦР на 12 инфекций.

Современной методикой исследования для определения инфекции в организме считается ПЦР-диагностика. Данный метод основан на использовании полимеразной цепной реакции, позволяющей выявить возбудителей. При этом то, как протекает патологический процесс, в острой или хронической форме, не оказывает влияния на точность полученных результатов. Некоторые врачи не ставят окончательного диагноза без осуществления данного исследования. Сдать анализ ПЦР на 12 инфекций сейчас можно в любой частной лаборатории.

Этот метод пользуется широкой популярностью не только причине того, что результаты данного исследования можно получить примерно через 5 часов, но также и благодаря возможности выявления одновременно нескольких инфекций.

Анализ ПЦР на 12 инфекций включает:

ВИЧ – одну из наиболее опасных инфекций в мире, которая входит в категорию ЗППП.
Гепатиты различных разновидностей.
Вирус Эпштейна — Барр.
Герпес первого и второго типов.
Инфекции, передающиеся половым путем, то есть входящие в группу ЗППП — микоплазмоз, хламидиоз, трихомониаз, уреаплазмоз и др.
Цитомегаловирус.
Листериоз.
Бактерии, провоцирующие развитие туберкулеза.
Инфекция хеликобактер пилори.
Энцефалит клещевой.
ВПЧ и его многие разновидности.
Кандидозная инфекция.

ПЦР очень удобен в применении – результаты исследования известны через 5 часов, чем этот метод очень практичен.

В число патологий, которые выявляются при помощи анализа ПЦР на 12 инфекций, входит много тех, которые передаются половым путем. Поэтому рассматриваемая методика применяется в следующих областях:

онкологическая медицинская практика;
гастроэнтерология;
пульмонология;
гинекология;
урология;
фтизиатрия.

Практически в любых случаях можно проводить анализ ПЦР на 12 инфекций для выявления активной или скрытой формы.

Как было отмечено ранее, диагностика инфекционных процессов является довольно точным методом, который необходимо осуществлять в лабораторных условиях. Немаловажным условием также можно назвать правильность сбора анализов. Определение чужеродных ДНК и РНК происходит при обследовании разных биологических жидкостей. Исключением из такого правила является выявление вируса, проникающего половым путем: в подобном случае проводится анализ выделений из половых путей.

Не все знают, как берут анализ ПЦР на 12 инфекций.

В иных случаях, например, при выявлении возбудителей ВИЧ, герпеса, гепатита и др. берется кровь пациента. Также может потребоваться моча или мазок из полости рта. При опасных патологических состояниях или подозрении на них для исследования могут брать спинномозговую жидкость.

Сдать количественный анализ ПЦР на 12 инфекций довольно просто. Результаты расшифровать может только специалист. В случае когда необходимо получить результат максимально быстро, в течение пяти часов, необходимо проводить именно этот диагностический метод. Важным моментом является то, что исследования на скрытые инфекции могут дать отрицательный или положительный ответ. Отрицательный указывает на то, что инфекционного возбудителя в организме нет. В случае положительного исследования врач должен назначить противовирусную терапию — антибиотики, а также лечение, направленное на усиление работы иммунной системы.

Метод ПЦР дает возможность выявить возбудителей, которые находятся в неактивной фазе своей жизнедеятельности. Такими являются, например, герпес и ВПЧ. Оценивая число клеток возбудителей можно установить тот факт, насколько активен конкретный патологический процесс в организме больного. Количественный результат проводимого анализа позволяет узнать точную стадию развития определенного заболевания.

В некоторых случаях может быть получен сомнительный результат, когда количество определяемых исследованием копий соответствует верхним границам нормы. Чтобы максимально точно выявить причину развития заболевания, необходимо повторить анализ, уделяя особое внимание сбору биологического материала.

Биоматериалом для ПЦР-исследования на 12 инфекций, в котором можно определить чужеродную ДНК болезнетворной бактерии или РНК и ДНК вируса могут служить разные биологические жидкости и среды человека:

Кровь, сыворотка, плазма. Используются для ПЦР вирусов гепатитов B, D, C, G, герпеса, ВИЧ, ЦМВ, исследования человеческих генов.
Моча. Может применяться при инфекционных поражениях женских мочевыделительных органов и мочеполовых каналов мужчин (применение в качестве биоматериала мочи может заменить эпителиальный соскоб).
Мокрота. Ее применяют для диагностики туберкулеза и в некоторых случаях для диагностики респираторных типов микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту в количестве 20 миллилитров собирают в одноразовый стерильный флакон.
Иные биологические жидкости. Плевральная, околоплодная, спинномозговая, суставная жидкости, сок простаты, слюна, бронхоальвеолярный лаваж — забираются исключительно при наличии строгих показаний.
Биоптаты. Чаще всего применяются биоптаты двенадцатиперстной кишки и желудка для определения наличия хеликобактерной инфекции.
Эпителиальные соскобы со слизистых покровов. Обычно они применяются для диагностики патологий, передающихся половым путем, таких как, например, гонорея, микоплазмоз, хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез, трихомониаз, герпетическая и прочие инфекции, поражающие слизистую оболочку.

Чтобы сдать анализ ПЦР на 12 инфекций, нужно предварительно подготовиться.

Достоверность результатов исследования ПЦР зависит непосредственного от правильности сдачи биологического материала. Материал не должен быть загрязненным, иначе результаты лабораторного исследования не будут объективны. К списку наиболее важных рекомендаций перед сдачей лабораторного анализа ПЦР относятся такие:

мочу необходимо сдавать утром в стерильном контейнере;
кровь на наличие инфекций следует необходимо сдавать в утреннее время, натощак;
за сутки до проведения данного исследования не рекомендуется проявлять половую активность.

Результат такого анализа может быть готов через пять часов, однако чаще всего время расшифровки результатов зависит от технической оснащенности медицинской лаборатории и загруженности персонала и составляет от полутора до двух суток после осуществления процедуры. Встречаются также ситуации, когда результаты пациент может получить в тот же день.

Итак, имеет ли смысл сдавать ПЦР?

Методика ПЦР отличается специфичностью, высокой точностью и чувствительностью. Это значит, что данный лабораторный анализ способен:

достоверно определить наличие или отсутствие инфекционного заражения;
точно указать на разновидность инфекционного возбудителя (специфичность);
обнаружить инфекционное заражение даже при крайне низком уровне содержания ДНК патогенных микроорганизмов в биологическом материале, подвергнутом исследованию (чувствительность).

«Гемотест» представляет собой сеть медицинских лабораторий, основанную в 2003 году и занимающуюся предоставлением услуг корпоративным клиентам и частным лицам. На сегодняшний день она является лидером отечественного рынка среди диагностических лабораторий.

Во франчайзинговых и собственных заведениях компании предоставляются такие виды услуг:

проведение анализов ПЦР (в том числе на двенадцать инфекций);
консультации врачей с целью расшифровки необходимых исследований;
забор биоматериалов с персональными штрих-кодами;
регистрация клиентов в общей системе;
выдача результатов по анализам.

Качество лабораторных исследований подтверждено международными сертификатами.

источник

ПЦР на 12 инфекций – это профилактическое исследование.

Его делают для выявления скрытых инфекционных заболеваний.

Анализ ПЦР 12 необходим пациентам, которые:

обнаружили у себя подозрительные симптомы и желают убедиться, что у них нет половых инфекций
ведут активную половую жизнь (если за последний год было больше 2 партнеров, желательно обследоваться на инфекции)
недавно сменили постоянного партнера (часто двое людей сдают анализы, перед тем как начать совместную жизнь, чтобы убедиться, что они ничем друг друга не заразят)
готовятся к беременности
обследуются по поводу бесплодия, чтобы найти причину нарушения репродуктивной функции
готовятся к ЭКО, донорству ооцитов или спермы, суррогатному материнству
готовятся к операциям на органах малого таза

Сдать анализ ПЦР 12 стоит, если недавно был половой контакт с потенциальным источником половой инфекции.

Признаки, указывающие, что вы могли заразиться от этого человека:

он часто меняет половых партнеров
злоупотребляет алкоголем или наркотиками
имеет симптомы венерических болезней (выделения, сыпь на половых органах, увеличение паховых лимфоузлов и т.д.)
низкий социальный статус

Обращаться для профилактического обследования в подобных ситуациях стоит через 2 недели после контакта.

Часто люди сомневаются, нужно ли сдавать ПЦР на 12 ИППП.

Основные аргументы, которые они приводят:

У меня нет симптомов венерических заболеваний.

Симптомов нет не менее чем у 50% пациентов.

Возможно, на стадии осложнений.

Некоторые осложнения необратимы.

Лечить запущенные половые инфекции гораздо труднее, дольше и дороже, чем свежие.

Аргумент из детского сада.

Часто детей нельзя затащить в кабинет, чтобы сделать прививку, потому что это больно.

Но ум взрослых людей в большинстве случаев отличается от разума пятилетних детей.

Они понимают, что неприятные ощущения продолжительностью в несколько секунд – ничто, по сравнению с теми рисками, что несут в себе инфекционные заболевания.

К тому же, в нашей клинике используется авторская безболезненная методика забора мазков для ПЦР.

Поверьте, лечиться от запущенных форм половых инфекций в разы, а то и в десятки раз дороже.

Некоторые заболевания дают тяжелые осложнения, их приходится месяцами лечить в стационаре.

Другие приводят к бесплодию.

На лечение или преодоление этого состояния люди тратят десятки тысяч долларов (реконструктивные операции на маточных трубах, многочисленные попытки ЭКО).

Нужно куда-то идти, тратить время…

Вы потратите не более 1 часа вашего времени.

Нужно просто прийти и сдать мазок.

Возвращаться за результатами не обязательно – вы получите их на электронную почту.

Вернуться придется, только если будет обнаружена какая-то инфекция.

Сдавать анализы на половые инфекции стыдно.

У нас их можно сдать анонимно.

В случае обнаружения ЗППП можно анонимно вылечиться.

Такая возможность предусмотрена российским законодательством.

Государство понимает, что без возможности анонимного лечения люди будут меньше обращаться, что плохо с точки зрения эпидемиологии.

Невыявленный носитель инфекции разносит ИППП, увеличивая заболеваемость в популяции.

В перечень 12 штук могут входить разные инфекции.

Всё зависит от лаборатории.

Не обязательно их должно быть именно 12.

Но в качестве примера давайте рассмотрим лабораторию Инвитро, ПЦР на 12 ЗППП здесь включает определение ДНК таких возбудителей:

герпес 1 и 2 типа
цитомегаловирус
ВПЧ 2 типов (16 и 18) – самых опасных, являющихся основными причинами цервикального рака
гонококк
гарднерелла
микоплазма хоминис
микоплазма гениталиум
уреаплазма парвум
уреаплазма уреалитикум
хламидия
кандида
трихомонада

Метод хорош тем, что выявляет любые патологии, в том числе вирусные.

ПЦР – очень точный способ диагностики.

Перечисленные патогены будут выявлены даже при их минимальном количестве.

Поэтому ПЦР информативна на ранних стадиях или при субклиническом течении инфекционных заболеваний.

Есть два вида тестов ПЦР:

качественные – отвечают на вопрос, есть инфекция или её нет
количественные – определяют концентрацию бактерий (копий ДНК в мл.)

В некоторых случаях достаточно качественного определения.

В частности, для тех бактерий, которые являются однозначно патогенными.

Даже минимальные концентрации таких микроорганизмов опасны.

При их обнаружении в любом случае назначают лечение.

Причем дозы препаратов и их выбор не зависит от количественных показателей.

Схема лечения определяется лишь давностью инфицирования и топикой поражения структур репродуктивной системы.

К таким болезням относятся:

сифилис
хламидиоз
микоплазма гениталиум
трихомониаз
гонорея

Кроме того, обнаружение вирусов семейства герпеса говорит о том, что инфекция в данный момент активная.

Потому что во время ремиссии количество вирусов уменьшается до неопределяемого уровня.

Зачем нужны количественные результаты при определении других возбудителей?

Причин несколько:

возбудители могут проявлять патогенность, только при достижении определенного количества (кандида, вирус папилломы)
при малом количестве бактерий человека не лечат
врачу нужно оценить тенденции, чтобы понять, работает ли лечение, либо болезнь прогрессирует
количественные показатели позволяют оценить роль того или иного микроорганизма в протекающем воспалительном процессе урогенитального тракта (микоплазма хоминис, уреаплазма)

Количественные показатели часто влияют на решение врача.

Например, у женщины в ходе обследования на 12 инфекций может обнаружиться ВПЧ.

Если вирус содержится в малой концентрации, то он не опасен.

Но если концентрация клинически значимая, с высокой вероятностью инфекция:

станет персистирующей
вызовет диспластические изменения шейки матки
повысит вероятность развития рака

При малом количестве вируса за женщиной достаточно установить наблюдение.

Её просят вернуться через полгода и сдать анализы повторно.

С высокой вероятностью к этому времени вируса в её организме уже не будет.

Но если концентрация высокая, необходимо противовирусное лечение.

Женщине назначают иммуномодуляторы, противовирусные препараты.

Она повторно сдает анализы, чтобы оценить, уменьшается ли концентрация вируса.

Часто такое лечение приводит к элиминации возбудителя.

При этом уже начавшиеся неопластические процессы в матке могут регрессировать даже без инвазивного лечения («прижигания» патологически измененных участков эпителия).

Другая ситуация: в урогенитальном тракте начался воспалительный процесс.

Помимо прочих бактерий, выделена уреаплазма.

В малых количествах она считается не опасной.

Как узнать, принимает ли она участие в воспалительном процессе, или болезнь спровоцирована другими бактериями?

Для этого делают количественное исследование.

Если концентрация уреаплазм больше 10 в 4 степени копий ДНК в мл, скорее всего, она принимает активное участие в патологическом процессе урогенитального тракта.

Количественные показатели имеют значение для допуска женщины к инвазивным процедурам.

Операции на органах малого таза, ЭКО (требующее на определенном этапе проведения пункции фолликулов) или гистеросальпингография не могут быть проведены при большом количестве микоплазм, уреаплазм, кандид.

Потому что в этом случае присутствует высокий риск инфекционных осложнений.

Часто врачи назначают ПЦР на 12 инфекций пациентам, у которых уже диагностированы венерические заболевания.

Например, у человека появляются обильные выделения из урогенитального тракта.

Тот берет мазок и смотрит под микроскопом.

Сразу же выясняется, что у больного гонорея.

Казалось бы: диагноз очевиден, можно приступать к лечению, а затем оценивать его результаты и отпускать человека домой.

Но вместо этого врач назначает анализ ПЦР на 12 инфекций.

Зачем, если диагноз уже установлен?

Потому что наличие одной инфекции не исключает другой.

Более того, вероятность обнаружить других возбудителей в клинически значимых концентрациях у пациента с уже выявленным венерическим заболеванием очень высокая.

То есть, риск обнаружения патогенов гораздо больше, чем у человека, который приходит обследоваться с профилактической целью без каких-либо симптомов.

Причин несколько:

С высокой вероятностью человек, у которого обнаружена половая инфекция, ведет активную и разнообразную сексуальную жизнь.

Поэтому не исключено, что он нахватался и других ЗППП.

Возможно, некоторые из них протекают в скрытой форме.

Но сейчас отличное время, чтобы выявить их и пролечиться.

Носитель инфекции мог иметь целый «букет» венерических заболеваний.

Допустим, человек нечасто меняет партнеров.

Возможно, у него всего один постоянный партнер.

Тем не менее, гонорея не появилась из ниоткуда.

Она пришла из определенного источника: от больного человека.

Вполне вероятно, что у этого же человека есть и другие инфекции.

Их передача тоже могла произойти при половом акте.

Особенно высок риск, если больной несколько раз вступал с ним в интимную связь.

Часто происходит активизация «дремлющей» инфекции после заражения новым ЗППП.

Вполне вероятно, что в организме долго живёт и никого не трогает микоплазма хоминис.

Бактерий мало, они чрезмерно не размножаются, так как сдерживаются иммунитетом.

Но тут присоединяется гонококк.

В результате нарушается работа иммунной системы, создаются благоприятные условия для роста других микроорганизмов.

«Дремлющие» инфекции просыпаются и усугубляют воспалительные реакции в урогенитальном тракте.

Если врач не назначает ПЦР на 12 или другое количество инфекций после выявления одного из возбудителей венерических заболеваний, это чревато неудачами в лечении.

Симптомы могут не исчезать после курса антибактериальной терапии.

Гонококк исчезает, но другие бактерии сохраняются.

К тому же, часть гонококков могут «прятаться» внутри трихомонад, если это заболевание сопутствует гонорее.

Тогда патология рецидивирует после лечения или переходит в скрытую форму.

Таким образом, каждому пациенту, который обратился к венерологу, стоит сдать анализы на несколько основных ЗППП.

В том числе в случаях, когда какие-то возбудители уже были обнаружены другими методами.

Возможно, вы приняли решение сдать ПЦР на 12 инфекций.

Вы уже нашли лабораторию или клинику в Москве, где делают этот анализ.

Но насколько правильные результаты покажут диагностические тесты, во многом зависит от качества вашей подготовки.

Вот несколько простых правил, которые помогут снизить риск ложноположительного или ложноотрицательного результата:

не вступайте в половые контакты за 2-3 суток до сдачи анализов
не принимайте антибиотиков 2 недели
не используйте местные препараты, не делайте спринцеваний или лечебных ванночек
утром в день исследования можно не мыться вообще, либо использовать только воду без моющих средств

за 3 часа до забора мазков нельзя мочиться

Это позволит с одной стороны не уничтожить бактерий, которые находятся в верхних отделах урогенитального тракта.

С другой – не занести контаминационную флору, которая на самом деле не ваша, но может дать положительные результаты ПЦР.

Сдавать этот анализ совершенно недорого.

В разных лабораториях предлагают разный набор исследований.

Дополнением к ПЦР может быть бактериоскопическое исследование урогенитального мазка.

Поэтому цена ПЦР на 12 инфекций бывает разной.

Но в среднем это обходится в сумму от 50 до 100 долларов.

Причем, обычно это ближе к 50, чем к 100.

Даже для людей с небольшими доходами эта сумма совершенно не отягощает семейный бюджет.

Тем более что раз у вас возникла необходимость в сдаче подобных анализов, то вы явно сэкономили на презервативах.

В любом случае лечиться от запущенных хронических инфекций – гораздо дороже.

Не говоря уже о серьезных рисках для здоровья, которые несут некоторые возбудители ЗППП.

Чтобы сдать ПЦР на 12 инфекций, мы приглашаем вас в нашу клинику.

Наши преимущества:

Мы работаем с несколькими лабораториями, и всегда знаем, куда лучше отправить ваши анализы, чтобы получить максимально точные результаты.
Врач возьмет мазок совершенно безболезненно, по особой авторской методике.
Идеальные соблюдения правил асептики и антисептики, поэтому не развиваются осложнения после взятия мазков.
Возможность анонимного обследования.
По результатам анализов вы можете получить консультацию врача-венеролога.

Если какие-то инфекции будут обнаружены, вы сможете пройти курс терапии в нашей клинике.

Многие венерические болезни лечатся легко, буквально одной таблеткой или одним уколом.

Главное – вовремя обратиться за помощью и не ждать, пока свежая инфекция перейдет в хроническую форму.

Для того, чтобы быстро и безболезненно сдать анализ ПЦР на 12 инфекций, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

источник

Метод ПЦР пользуется популярностью не только по той причине, что результат можно получить через 5 часов, но из-за возможности выявления сразу нескольких инфекций. ПЦР 12 какие инфекции входят:

ВИЧ – одна из самых опасных инфекций, которые есть в мире. Она входит в группу ИППП.
Гепатиты различных групп.
Вирус Эпштейн-Барра.
Инфекции, которые передаются половым путем, то есть входят в группу ИППП. В группу ИППП входят микоплазмоз, трихомониаз, хламидиоз.
Герпес первого и второго типа.
Цитомегаловирус.
Бактерии, вызывающие туберкулез.
Листериоз.
Инфекция хеликобактер пилори.
ВПЧ и его многие подвиды.
Энцефалит клещевой.
Кандидозная инфекция.

Группа ИППП состоит из инфекций, которые передаются через половой путь. Вышеприведенный список лишь небольшая часть вирусных и бактериальных заболеваний, которые могут диагностироваться методом ПЦР.

В число заболеваний, которые выявляются при ПЦР, входит довольно много тех, что могут передаваться половым путем. Именно поэтому рассматриваемый метод применяется в нижеприведенных областях:

Онкологические исследования.
Гастроэнтерологические обследования.
Пульмонологические исследования.
Фтизиатрическая сфер медицины.

В общем, практически во всех случаях можно проводить ПЦР исследование для выявления скрытой или активной инфекции.

Врач-пульмонолог при этом обследует методом ПЦР мокроту и жидкость из плевры конкретного больного.

Профилактика ИППП является задачей не только самого пациента, но и государства и общества. Намеренное заражение ИППП подлежит уголовному наказанию.

На государственном уровне профилактические меры заключаются в следующем:

Проведение просветительской работы с молодежью по вопросам предотвращения таких болезней, как ВИЧ, гепатит, папиллома.
Пропаганда защищенных половых актов.
Вакцинация девочек против ВПЧ.
Регулярные профосмотры работников общепита, медицинских и педагогических учреждений.
Обследование всех беременных на ИППП и торч-инфекции.
Создание анонимных кабинетов для обследования на ИППП.

Также профилактика этих болезней — задача лично каждого человека. Безусловно, никто не застрахован от заражения, однако использование средств барьерной контрацепции и избегание случайных половых связей существенно снижает риск инфицирования.

Высокий уровень распространения ИППП является огромной проблемой. Согласно данным ВОЗ, за последнее время снизилось число заболевших сифилисом и гонореей. Однако стремительно растет количество случаев хламидиоза, уреаплазмоза. Тревожной остается ситуация с ВИЧ. Уберечься от ИППП возможно при условии разборчивости в половых контактах и использования средств индивидуальной защиты.

*Все статьи на сайте проходят проверку на корректность и актуальность у дипломированных медицинских сотрудников согласно нашей .

Внимание: комментарий будет опубликован после проверки модератором

Доктор порекомендует сдать несколько анализов, для чего потребуется соответствующая подготовка и забор материала. Как правило, их можно сдать в любой лаборатории, кожновенерологическом диспансере или частной клинике.

Используется для обнаружения антител к возбудителям половых инфекций, а также последующего наблюдения за состоянием пациента и ходом лечения. Именно так выявляют гепатиты В и С, сифилис, ВИЧ-инфекцию.

Чтобы правильно сдать кровь, достаточно явиться в лабораторию натощак, не употребляя с утра ничего, кроме обычной воды. За 2-3 дня лучше исключить из рациона жирную пищу, алкоголь, курение.

С помощью общего анализа мочи выявляют воспалительный процесс в мочевыводящих путях. Могут быть назначены также проба Нечипоренко, трехстаканная проба. За пределами России первая порция утренней мочи также используется для ПЦР-диагностики, в нашей стране это практически не используется.

Необходим для диагностики генитального герпеса, трихомониаза, гонореи, уреаплазмоза, микоплазмоза, хламидиоза. За 3 дня до предстоящей процедуры не рекомендуется спринцеваться, смазывать пораженные места, использовать какие-либо антисептики. Процедура практически безболезненная, при подготовке к ней также следует воздерживаться несколько дней от половых контактов.

В некоторых случаях врач перед взятием материала может использовать провокации, чтобы обострить вялотекущую инфекцию – инъекции пирогенала, гоновакцины.

Могут использоваться для ПЦР и простой микроскопии.

Перед их сдачей необходима небольшая подготовка:

1За 3-4 дня необходимо воздерживаться от половых контактов, нужно исключить переохлаждение.
2Прием антибактериальных препаратов должен быть закончен за 4 недели до анализа.
3Антисептики и спринцевания должны быть исключены за три дня до сдачи материала.

Анализ позволяет обнаружить возбудителей хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, микоплазмоза, трихомониаза.

Материал	Как его берут?
Кровь	Одноразовым шприцом венозную кровь, утром, натощак
Мазок из носоглотки	Стерильной ватной палочкой из носовой полости и зева
Соскоб, мазок из половых путей и уретры	С помощью специальных инструментов врач соскабливает материал в исследуемой зоне: уретра (у мужчин и женщин), задний свод влагалища, цервикальный канал (у женщин)
Секрет простаты	После массажа предстательной железы
Моча, сперма	Пациент собирает самостоятельно в стерильный контейнер

Таблица 1 — Как происходит забор материала для анализов на половые инфекции

Таким образом, для выявления ИППП могут использоваться следующие лабораторные методы:

Микроскопический (бактериоскопия). Небольшое количество взятого материала (соскоб, мазок) помещают на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Позволяет выявить гонококки, трихомонады. Минусом является малоинформативность в диагностике хламидиоза, микоплазмоза.
ПЦР (полимеразная цепная реакция). В настоящее время является одним из самых точных, чувствительных и доступных методов, позволяющих идентифицировать как бактерии, так и вирусы. В зависимости от количества выявляемых инфекций выделяют ПЦР-12, ПЦР-18 и так далее.
Культуральный (посев на питательные среды). В этом случае взятый биоматериал помещают на специальные среды, благоприятствующие росту и размножению микроорганизмов, а через некоторое время оценивают результат. Существенный минус – длительное время ожидания окончательного результата: от 4 дней до 1,5 недели. Метод используется достаточно редко.

В случае забора материала из уретры или канала шейки матки подготовка к анализам на ИППП подразумевает:

отсутствие половых контактов на протяжении трех дней перед забором материала;
отсутствие мочеиспускания на протяжении трех часов перед забором материала;
отсутствие какого-либо лечения (использования вагинальных свеч, дезинфицирующих средств, растворов для спринцевания) и туалета половых органов непосредственно перед забором материала.

Правильно сдать анализы на ЗППП у мужчин – задача сложная, но выполнимая. Накануне забора материала желательно устроить провокацию – употребить алкоголь, соленую или копченую пищу. При соблюдении вышеперечисленных правил диагностика ЗППП у мужчин будет вполне достоверной.

Как правило, анализ на ЗППП у женщин отличается от мужского только способом забора материала. Кроме того, стоит учесть, что анализ на ЗППП будет более информативен в период, начавшийся сразу по окончании менструации. Меры, которые необходимо соблюсти перед сдачей анализа, и объяснение того, как сдавать женщине ИППП анализ, описаны выше.

Анализ очень эффективен для выявления разного рода патологий. Он отображает половые, грибковые и кишечные инфекции, поможет в диагностировании у пациента ВИЧ и других опасных заболеваний.

Одинаково эффективно исследование крови определяет наличие любых отклонений как у детей, так и у взрослых.

Поскольку определить по симптомам, что именно – вирус или инфекция – стало причиной ухудшения состояния, очень сложно, пациенту для постановки диагноза обычно назначают биохимический анализ крови, который и помогает установить, чем именно был атакован организм.

Нужно понимать, чем отличаются бактерии от вирусов.

Бактериями называют клетки, имеющие собственный обмен веществ, размножающиеся делением. То есть чем позже будет замечена бактериальная инфекция, тем сложнее с ней будет справиться.

Бактерии делятся на кокки (имеют круглую форму) и палочковидные клетки.

Вирусная инфекция – более опасная, чем бактериальная, т. к. в этом случае происходит заражение здоровых клеток. Вирус может быть как в острой, так и в хронической стадии.

Некоторые вирусы, например, ВИЧ, папиллома и др. существуют в организме всю жизнь человека, т. к. уничтожить их медикаментами или иммунной системой невозможно.

Лечение инфекции в этом случае будет направлено лишь на то, чтобы не допустить прогрессирования заболевания.

Оба вида инфекций могут быть обнаружены как у детей, так и у взрослых. Расшифровка анализа крови легко поможет врачу определить, вирусная или бактериальная инфекция находится в организме пациента.

Вирусные патологии характеризуются незначительными изменениями в лейкоцитарной формуле и в скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

Также может наблюдаться снижение лимфоцитов, независимо от того, какие именно бактерии атаковали организм.

Нередко бактерии начинают размножаться после заражения вирусом и ослабления иммунитета.

В отличие от вирусных заболеваний, которые проявляются практически сразу же, бактериальные инфекции имеют достаточно большой инкубационный период, который может доходить до двух недель.

Обследование на ИППП включает в себя следующие диагностические методы:

Микроскопическое исследование мазка из уретры и влагалища. Может быть простым и люминесцентным. Полученный образец обрабатывают специальными красителями или флюорохромами. Затем биоматериал изучают под микроскопом.
Культуральное исследование. Образец помещают в специальную питательную среду, где вирусы и бактерии активно размножаются.
Иммуноферментный анализ крови. Выявляет специфические антигены к определенному возбудителю. Основан на том, что антитела связываются исключительно со своими антигенами и ни с какими другими. Таким образом удается определить вид возбудителя.
Анализ крови на torch-инфекции. Проводят в обязательном порядке всем беременным. Аббревиатура torch составлена из первых букв английских названий следующих инфекций: токсоплазмоз, сифилис, гепатит, краснуха, цитомегаловирус, герпес. Эти болезни оказывают негативное влияние на плод, вызывая неправильное внутриутробное развитие. У женщины берут кровь и исследуют ее на антитела к торч-инфекциям. Количество антител показывает, болеет ли женщина в данный момент или когда-то перенесла эти заболевания. В последнем случае опасности для ребенка нет. Если будущая мама заразилась во время беременности, то ей предлагают прервать беременность.

Копирование ДНК происходит только при условии его присутствия в данном образце. ПЦР на ИППП применяют к инфекциям, которые протекают скрыто. К плюсам данного метода относятся: быстрота, точность, информативность.

Методом ПЦР исследуются такие заболевания, как:

Хламидиоз.
Цитомегаловирус.
ВИЧ.
Гепатит.
Уреаплазма.
Гарднереллез.

Как проводится расшифровка результатов ПЦР на ИППП?

Вариантов здесь может быть только 2: положительный и отрицательный. Если результат положительный, а симптомы отсутствуют, то доверяют ПЦР, это значит, что болезнь протекает латентно или находится на доклиническом этапе. Также для диагностики ИППП используют специфические тесты, например, реакцию Вассермана для диагностики сифилиса. При гепатите проводят печеночные пробы.

Если есть подозрения на осложнение ЗППП, то назначают дополнительно инструментальные методы диагностики:

УЗИ органов малого таза у женщин, предстательной железы у мужчин.
Анализ крови на онкомаркеры (в случае заражения вирусом папилломы человека).
УЗИ печени при обнаружении гепатита.

Для того, чтобы получить наиболее достоверные результаты, перед сдачей мазка нужно подготовиться. За неделю прекратить принимать антибиотики, вагинальные свечи, спреи. Исключаются половые контакты за 3 дня до исследования. У женщин мазок берут после окончания менструации. Нельзя мочиться за 3 часа до анализа.

Для проведения анализа методом ПЦР или ИФА специфической подготовки не требуется.

Провести исследования ПЦР можно только в лабораторных условиях, так как при нестерильной обстановке есть вероятность искажения полученных результатов. Рассматривая вопрос, что такое ПЦР, следует отметить – метод предусматривает использование специальных ферментов, которые увеличивают структуру РНК и ДНК. При добавлении специального вещества увеличивается количество ДНК и РНК, что позволяет провести исследование под микроскопом.

В целом можно сказать, что рассматриваемый метод основан на сравнении полученного результата структуры РНК и ДНК с хранящимися образцами. Метод позволяет не только определить структуру, но и количество клеток инфекции. Реакция проходит в течение 5 часов, что позволяет получить результат за минимально короткий срок.

Инфекции, передающиеся половым путем, могут давать яркую симптоматику, но могут протекать скрыто. Зачастую пациент не подозревает, что является носителем ИППП, служа при этом источником заражения.

Безусловно, для каждой болезни существуют специфические признаки, но большинство проявлений имеют схожий характер.

Жжение, зуд, отечность, покраснение наружных половых органов.
Язвочки, эрозии, пятна, пузырьки в паху и на гениталиях.
Выделения с неприятным запахом, зеленоватым цветом, творожистой или слизистой консистенции.
Боли, жжение при мочеиспускании, частые позывы в туалет.
Дискомфорт, болевые ощущения во время полового акта.
Увеличение и болезненность паховых лимфатических узлов.
Повышение температуры.

Скрытым течением отличаются следующие инфекции:

Уреаплазма.
Микоплазмоз.
Вирус папилломы человека.
Генитальный герпес.
Цитомегаловирус.
Кандидоз (у мужчин).
Сифилис.

Также скрыто могут протекать другие болезни, перешедшие в хроническую форму вследствие некорректного лечения.

Список скрытых симптомов ИППП:

Небольшое увеличение объема выделений.
Незначительный зуд в области гениталий.
Дискомфорт при мочеиспускании, который быстро проходит.

Стоимость ПЦР колеблется в зависимости от исследуемой инфекции. Цена находится в диапазоне от 200 до 500 рублей за каждую инфекцию. Войти и обследоваться в частной лаборатории можно и самостоятельно, без направления врача.

Обнаружение инфекционного возбудителя в анализах. Анализ предполагает выявление ДНК или РНК инфекционного агента.
Практически исключены ложные и ошибочные реакции.
Методика ПЦР 12 максимально чувствительная. Благодаря данному методу можно обнаружить даже единичные клетки инфекционных агентов.
Результат ПЦР на скрытые возбудители готов уже через 4 часа после проведения процедуры.
Способность обнаружения инфекционных агентов без отсутствия характерной симптоматики для заболевания. Метод достаточно эффективен и по происшествии конкретной болезни.

Обследование на ИППП методом ПЦР способно обнаруживать все скрытые урогенитальные инфекции. Заболевания мочеполовой системы, протекающие без симптомов, определить больше никак не представляется возможным, виду отсутствия клинической картины.

Чаще всего наблюдается скрытое течение инфекций, которые имеют половой путь передачи, таких как:

По причине безответственной половой жизни, урогенитальные инфекции представляют собой довольно распространенное явление в настоящий момент. Они обладают коварной особенностью — это слабовыраженные симптомы или их полное отсутствие вплоть до перехода болезни в тяжелую стадию, когда уже присутствуют ее последствия.

Вот почему так важно своевременное проведение анализа ПЦР на ИППП. В комплексе с забором крови берется мазок с мочеиспускательного и цервикального канала шейки матки

Соскоб с мочеиспускательного канала производится спустя два часа после мочеиспускания. Перед сдачей мазков необходимо сутки воздерживаться от половой близости, использования вагинальных суппозиторий, спринцеваний

В комплексе с забором крови берется мазок с мочеиспускательного и цервикального канала шейки матки. Соскоб с мочеиспускательного канала производится спустя два часа после мочеиспускания. Перед сдачей мазков необходимо сутки воздерживаться от половой близости, использования вагинальных суппозиторий, спринцеваний.

Анализы на скрытые вирусные инфекции помогают выявить заболевание и предотвратить патологии развития плода. ПЦР мазок при беременности может выявить скрытую инфекцию гепатита, причем, другие методы диагностики не способны справиться с задачей. Анализ выделений организма беременной позволяет выявить наличие скрытых паразитирующих микроорганизмов, которые внешне себя не проявляют.

Данный вирус, раз попав в тело человека, остается там навсегда. Во время снижения иммунной защиты, вирус переходит из спящей фазы в активную. Во время беременности защита иммунитета снижается, поэтому вероятность агрессии герпеса увеличивается.

Чем опасен герпес для беременных? Крайней степенью агрессии вируса является поражение внутренних органов тела. Причем, опасна любая форма герпеса — оральная и генитальная. Анализ крови берут у всех беременных женщин.

Герпес способен проникать через плаценту и поражать плод. Известны случаи самопроизвольного выкидыша, гибели младенца после рождения и преждевременных родов, вызванные активностью герпеса. Малыш может заразиться во время прохождения по родовым путям матери.

Анализ полимеразной цепной реакции способен обнаружить вирус герпеса даже в малых количествах в слизистых оболочках органов, а также установить его вид — оральный/генитальный.

Диагностику на наличие герпеса необходимо проводить в следующих случаях:

перед планированием оплодотворения;
при предшествующих новому зачатию выкидышах;
при наличии высыпаний на наружных половых органах;
при определении причин бесплодия.

В случае хронического течения инфекции анализ позволит установить степень опасности заражения вирусом полового партнера.

Особенно опасной считается цитомегаловирусная инфекция, попавшая в тело матери в первые 10 недель формирования плода. Нередко цитомегаловирус приводит к прерыванию беременности и выкидышу.

Инфицирование в срок от трех месяцев до полугода приводит к различным отклонениям в развитии плода, замедлению роста и дисплазии внутренних органов. Заражение на последних месяцах вынашивания приводит к поражению органов ребенка, которое можно увидеть уже после рождения.

Передается вирус разными способами:

в организм матери вирус попадает при общении с зараженным человеком и во время полового контакта;
от матери плоду бактерии передаются через плаценту, в процессе родов и при грудном вскармливании.

Цитомегаловирус может проявить себя через два месяца после проникновения в тело женщины, симптомы похожи за простудное заболевание:

гипертермия и озноб;
головные боли;
бронхит и кашель;
боли в мышцах и костях.

Нельзя приписывать расстройство здоровья беременной ее особому состоянию. Нельзя назначать лечение самостоятельно без консультаций с гинекологом. Проявления заболеваний могут носить одинаковый характер, но различную этимологи.

К мерам защиты от цитомегаловируса относится:

защищенный секс с постоянным партнером;
использование индивидуальной посуды;
использование индивидуальных предметов личной гигиены;
дозированная физическая нагрузка на организм;
сбалансированная диета, прием витаминов;
позитивный настрой и прогулки на улице.

ПЦР мазок на цитомегаловирус способен защитить мать и плод от тяжелых последствий развития недуга.

Правильная подготовка к анализу ПЦР на ИППП гарантирует получение достоверных результатов анализов. Перечень обязательных правил прост, главное, не пренебрегать ни одним пунктом, чтобы не пришлось выполнять процедуру повторно. Соблюдение всех условий правильной подготовки к диагностике позволит сэкономить усилия, время и денежные средства.

Перечень обязательных условий перед сдачей ПЦР в реальном времени:

Несколько дней перед забором крови требуется ограничивать употребление жирной, жареной, острой, соленой, копченой и другой тяжелой, неполезной пищи.
В день анализа крови нужно прийти на пустой желудок, питьевая вода допускается.
В протяжении недели нельзя принимать алкоголь, а за несколько часов перед взятием крови не курить.
О приеме медикаментов, надо сообщить врачу, выписывающему направление на обследование. Возможно их придется отменить или ограничить.
Физиотерапевтические процедуры (рентген, флюорография, УЗИ и тому подобные) влияют на изменение состава крови. Их лучше сделать в несовпадающее с проведением анализа время.
Физические нагрузки и эмоциональные напряжения непосредственно влияют на состояние организма и на форменные составляющие крови, в том числе. Поэтому, чтобы эти факторы не отразлись на показателях, их понадобится ограничить.
Сдавать соскобы из половых органов требуется без присутствия посторонних внешних составляющих таких, как препараты для местного использования, наличие семенной жидкости. И с сохранением микрофлоры — это значит, что нужно исключить спринцевание и подмывание в течение определенного периода, рекомендованного врачом.
Чтобы сдать анализ женщине, ей понадобится придерживаться фаз менструального цикла. Обычно исследование допускается перед менструацией и спустя 1–5 дней после ее окончания.

Для проведения комплексных анализов ПЦР на 12, 13, 14, 15 инфекций или более видов надлежит учитывать дополнительно особенности выявляемых болезней. К примеру, когда дело касается исследования ПЦР на 15 инфекций, в числе которых находится гепатит, передающийся через контакт с кровью. То помимо вышеперечисленных правил, незадолго до обследования понадобится исключить из рациона желтые овощи и фрукты, содержащие каротин.

Анализы ПЦР 13 и 12 относятся к особенно распространенным, ввиду стандартного набора инфекций.

Далее, по числовому возрастанию, в зависимости от того сколько надо провести диагностик, лишь добавляются специфические виды заболеваний и так вплоть до ПЦР на 18 видов инфекций.

Инфекционный анализ ПЦР обладает неоспоримыми преимуществами перед многими видами лабораторных исследований, по причине точности результатов и скорости их получения. Благодаря способности определять болезнь, не только в острой фазе, но и латентной форме, исследование посредством полимеразной цепной реакции стало одним из основных диагностических методов. Но главным достоинством универсальной диагностики ПЦР остается способность обнаружить практически любой вирус, передаваемый как половым, так и иными путями.

источник

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – наиболее информативный, точный и современный метод диагностики инфекционных заболеваний, позволяющий обнаружить возбудителя в организме пациента, даже если количество вредоносных клеток исчисляется единицами, и они пока не успели спровоцировать развитие болезни. Еще 25 лет назад врачи не могли даже мечтать о таких возможностях, а сегодня сдать анализ ПЦР можно в любой крупной лаборатории.

ПЦР-диагностика открыла перед людьми многие другие ценные перспективы – с помощью этой методики можно изучать генные мутации, устанавливать отцовство, вычислять риск развития онкологических заболеваний, оценивать возраст и происхождение археологических артефактов и даже доказывать вину преступников, обнаруживая их ДНК в уликах. Но сегодня мы обсудим именно медицинский аспект этого открытия и расскажем вам, какие заболевания можно диагностировать методом ПЦР, как сдавать анализ и что означают его результаты.

Любое живое существо на Земле, будь то человек, животное или микроб, имеет гены – носители наследственной информации, которые представляют собой участки ДНК или РНК с определенной последовательностью нуклеотидов, уникальной для каждого организма. ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота) образует длинные молекулы, состоящие из двух нитей, закрученных в спираль друг относительно друга, и эти нити собираются из нуклеотидов, как из бусинок.

Допустим, требуется увидеть, есть ли в биологическом материале пациента ДНК или РНК инфекционного возбудителя или ее фрагменты. Но как это сделать, если молекулы крошечные и их мало? Методика ПЦР дает ответ: можно искусственно размножить вредоносную ДНК или РНК в лабораторных условиях, чтобы без труда ее обнаружить и идентифицировать.

Суть полимеразной цепной реакции состоит в том, чтобы разъединить нити молекул и попытаться «подсадить» к их противоположным концам фрагменты ДНК или РНК возбудителей – если они подойдут, значит, это и есть искомый микроб. А добавленный в пробирку фермент под названием «ДНК-полимераза» запустит синтез новых копий нужных участков молекул, они многократно размножатся и станут заметны. Далее мы опишем простыми словами, как происходит этот удивительный процесс и для чего это необходимо.

Американский ученый Кэрри Муллис изобрел ПЦР в 1983 году, а спустя десять лет, в 1993 году, получил за свое открытие Нобелевскую премию по химии. Однако методика была несовершенной и требовала существенных доработок. На сегодняшний день существует уже более десятка видов ПЦР для разных диагностических целей.

Итак, мы знаем, что длинная молекула ДНК или РНК образована двумя цепочками нуклеотидов, всего их бывает пять типов:

Ген – это устойчивая, многократно повторяемая уникальная комбинация нуклеотидов, и в одном гене их может быть несколько десятков или даже сотен, но все они располагаются друг напротив друга в строгом соответствии с правилом комплементарности. Это означает, что напротив гуанина в одной нити может стоять только цитозин из другой нити, а напротив аденозина – только тимин, иначе молекула ДНК не сложится и не закрутится в спираль. При этом пары «А – Т», «Т – А», «Г – Ц» и «Ц – Г» могут сочетаться в любых комбинациях: повторяться несколько раз подряд или идти вразнобой.

Схематически это можно представить так:

У РНК вместо тимина есть урацил, и такие молекулы выступают носителями генетической информации у некоторых вирусов, называемых ретровирусами. Например, у вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

Вот это свойство – комплементарность – является ключевым для ПЦР-диагностики. Ведь чтобы началась амплификация (синтез дополнительных копий участков ДНК на родительской матрице), нужно чтобы «подсаженный» фрагмент ей подходил. Такой фрагмент называется праймером или попросту «затравкой» и содержит до тридцати нуклеотидов, расположенных в уникальной для каждого возбудителя последовательности. Праймеры для проведения ПЦР-анализов производятся отдельно и доставляются в лабораторию в готовом виде. На сегодняшний день в распоряжении врачей есть праймеры сотен различных бактерий, вирусов и простейших.

Чтобы процесс начался, необходимо соблюсти ряд условий: добавить нужные реагенты и создать особый температурный режим. Все это происходит в приборе под названием «амплификатор» или «термоциклер», который может обеспечить нагревание и охлаждение пробирок с точностью до 0,1°C. Современные модификации амплификаторов могут замораживать и хранить готовые материалы, а некоторые даже имеют встроенный флуоресцентный детектор для определения результатов анализа ПЦР в режиме реального времени, когда нужно вычислить вирусную нагрузку (об этом мы расскажем ниже).

Внутри амплификатора взятый у пациента биоматериал проходит несколько десятков циклов, каждый из которых состоит из трех стадий: денатурации, отжига и элонгации. Это самая интересная часть ПЦР-диагностики, давайте рассмотрим весь процесс в подробностях, а начнем с необходимых реагентов.

Стандартный набор выглядит так:

Биоматериал, предположительно содержащий ДНК возбудителя заболевания;

Праймеры, то есть два комплекта нуклеотидов, комплементарных противоположным концам цепочек нужного фрагмента ДНК;

ДНК-полимераза – термостабильный фермент, который выступает катализатором реакции амплификации. К этому ферменту очень серьезные требования: он должен сохранять активность при высокой температуре длительное время – несколько часов, пока повторяются циклы ПЦР. Поэтому для проведения анализа используются ферменты, выделенные из термофильных микроорганизмов: Thermus aquaticus (Taq-полимераза), Pyrococcus woesei (Pwo-полимераза), Thermus thermophilus (Tth-полимераза), Pyrococcus furiosus (Pfu-полимераза) и другие;

Mg2+, то есть ионы магния, двухвалентного металла, необходимого ДНК-полимеразе для эффективной работы;

dATP, dGTP, dCTP и dTTP, четыре дезоксирибонуклеозидтрифосфата, из которых будут строиться новые фрагменты цепочек ДНК;

Буферный раствор, позволяющий поддерживать оптимальные условия – в него входят некоторые соли и сывороточный белок альбумин.

Итак, реагенты помещены в пробирку, она установлена в амплификатор, что же происходит дальше? Запускается повторяющийся цикл из трех стадий, целью которых является амплификация ДНК инфекционных возбудителей, если таковые будут обнаружены в пробе.

Амплификатор нагревает пробирку до 94-98 °C и сохраняет такую температуру на протяжении 30 секунд – 2 минут, чтобы цепочки ДНК разошлись в стороны. Конкретное значение температуры и времени зависит от типа полимеразы и от того, какого именно микроба ищут. По-другому этот период называется стадией плавления. Большинство видов ПЦР-диагностики требуют прогрева пробирки перед первым циклом в течение 2-5 минут.

В игру вступают праймеры – один из них комплементарен первой нити развалившейся надвое цепочки ДНК, а другой подходит ко второй нити, причем, праймеры ограничивают начало и конец того участка молекулы, который необходимо достроить. Праймеры называют «затравкой», потому что фермент полимераза катализирует производство новых копий нужного фрагмента ДНК именно после соединения праймеров с родительской матрицей.

Чтобы это соединения произошло, амплификатор должен понизить температуру пробирки. Как правило, отжиг с праймерами производится при температуре на 5 °C ниже, чем нужно для их денатурации. Если установить слишком высокую температуру, праймеры будут плохо соединяться с матрицей, а если слишком низкую, они могут прикрепиться не в том месте, где нужно. Поэтому лучше показывают себя праймеры с температурой плавления выше 60 °C, ведь они позволяют проводить отжиг и элонгацию одновременно при 60-75 °C. Стадия отжига длится 30 секунд, и за этот короткий период полимераза уже успевает катализировать синтез двух-трех сотен новых нуклеотидов.

Происходит собственно амплификация, то есть размножение нужного участка вредоносной ДНК, если таковая обнаружена. В рамках одного цикла количество участков увеличивается вдвое, каждый последующий цикл опять приводит к двукратному увеличению их числа, то есть действует принцип геометрической прогрессии. А всего за время ПЦР-анализа проводится 30-50 циклов, что по времени занимает 2-3 часа.

Температура элонгации и длительность этой стадии зависит от того, какая полимераза используется и какова длина размножаемого участка ДНК. Например, для Taq и Pfu-полимеразы оптимальна температура 72 °C, при этом фермент произведет 1000 пар оснований за 1 минуту. По окончанию всех циклов ПЦР, как правило, запускают дополнительную, финальную стадию элонгации – она длится около 10 минут и позволяет достроить все оставшиеся участки ДНК.

Существует два способа определения итогов ПЦР-анализа: традиционный – электрофорез, когда в реакции задействуются обычные праймеры, а оценку результатов проводит человек, и более современный – сканирование в режиме реального времени, когда «затравки» меченые, а их свечение регистрирует прибор.

В первом случае все цепочки ДНК сортируются по размерам. У этого способа есть существенные недостатки: во-первых, лаборанту приходится открывать пробирки с материалом, следовательно, в них могут попасть посторонние фрагменты ДНК из соседних пробирок (контаминация ампликонами), и тогда результат анализа ПЦР будет ложноположительным. Во-вторых, оценку производит человек, что называется, «на глаз», поэтому достоверность полученных данных целиком зависит от внимательности и профессионализма специалиста.

В случае с ПЦР-диагностикой в режиме реального времени (Real-Time PCR) влияние человеческого фактора на итоги исследования минимально – пробирки помещаются в современный высокотехнологичный прибор и ни разу не открываются на протяжении всех циклов, включая анализ результатов, который тоже проводит умная машина. У этого способа только два очевидных недостатка – высокая стоимость и ограниченная доступность, поскольку амплификаторами нового поколения оснащена далеко не каждая лаборатория.

ПЦР-диагностика активно используется во многих отраслях клинической медицины:

Урогинекология и дерматовенерология. Это, пожалуй, самые заинтересованные в ПЦР врачебные направления. С помощью соответствующего анализа можно диагностировать любые заболевания, передающиеся половым путем: гонорею, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз, гарднереллез и т. д. Метод ПЦР позволяет обнаружить и вирусы, часто поражающие органы половой сферы человека – например, генитальный герпес или папилломовирус. А эти возбудители, как известно, обладают онкогенной активностью, то есть могут провоцировать развитие злокачественных опухолей (рака шейки матки у женщин, рака предстательной железы у мужчин);

Инфектология и эпидемиология. На втором (а возможно и на первом) месте по частоте использования ПЦР-диагностики находится инфекционная медицина, поскольку обсуждаемая методика позволяет диагностировать все распространенные заразные болезни, некоторые из которых несут смертельную угрозу здоровью людей и представляют эпидемиологическую опасность. Речь идет о ВИЧ, гепатитах, сифилисе, холере, бруцеллезе, токсоплазмозе, дифтерии, туляремии и прочих серьезных заболеваниях;

Донорство и трансплантология. ПЦР-диагностика позволяет службе крови оценивать качество донорского материала: выявлять опасных возбудителей и отсортировывать непригодный материал. А при пересадке органов очень важно оценить совместимость тканей донора и реципиента – тут на помощь тоже приходит методика ПЦР;

Генетика и репродуктология. С помощью специальных разновидностей ПЦР-анализа можно установить отцовство, просчитать риск возникновения опасных генных мутаций у предполагаемого потомства пары, обратившейся в центр планирования семьи, а также изучить взятый у беременной женщины биоматериал (например, амниотическую жидкость) с той же целью – вовремя обнаружить тяжелый порок развития плода;

Акушерство и неонатология. Современные родильные дома тоже часто используют ПЦР-диагностику, а некоторые даже имеют собственную лабораторию. Это нужно для того, чтобы максимально оперативно обследовать новорожденных малышей при подозрении на наличие у них внутриутробной или полученной во время родов инфекции: ВИЧ, сифилиса, хламидиоза, цитомегаловируса, мононуклеоза, краснухи и других;

Пульмонология и фтизиатрия. Метод ПЦР дает возможность специалистам этих врачебных направлений бороться с редкими, устойчивыми штаммами бактерий, вызывающих респираторные заболевания, например, атипичный хронический бронхит. В этом случае успех лечения целиком зависит от того, удастся ли точно идентифицировать возбудителя болезни и назначить адресную терапию. Кроме того, ПЦР-анализ позволяет проводить максимально раннюю диагностику туберкулеза;

Гастроэнтерология и аллергология. Врачи этих двух специальностей тоже крайне заинтересованы в методе ПЦР, поскольку он дает возможность обнаружить главную причину развития гастрита и язвы желудка – коварную бактерию Хеликобактер пилори, а также установить индивидуальную непереносимость продуктов питания у конкретного человека. Существуют врожденные особенности работы пищеварительного тракта, не позволяющие правильно перерабатывать и усваивать некоторые компоненты пищи, например, глютен или лактозу. Эти особенности наследуются генетически, следовательно, могут быть обнаружены методом ПЦР. Кстати, если у кого-то из родителей есть аллергия на определенный продукт (орехи, грибы, цитрусовые), то велика вероятность того, что у ребенка возникнет такая же проблема;

Онкология. Специалисты этого серьезнейшего направления медицины используют ПЦР-диагностику для оценки риска развития злокачественных опухолей у пациента, поскольку те клетки человеческого тела, которые подвергаются мутации и начинают бесконтрольно делиться, меняют структуру своей ДНК и начинают отличаться от здоровых клеток. Необходимо взять пункцию или биопсию подозрительных тканей и изучить материал методом ПЦР, чтобы установить масштабы угрозы.

А вот лишь неполный список тех вредоносных микроорганизмов, которые можно обнаружить с помощью ПЦР-анализа:

Обширное семейство герпес-вирусов, в том числе цитомегаловирус, варицелла-зостер, вирус Эпштейна-Барра и другие;

источник