Нормы иммуноферментного анализа для детей

Высокоточные методы анализа — неотъемлемая часть современной медицины и, в частности, диагностики. Доступные в наше время методы диагностики дают возможность своевременно выявить не только сам факт наличия, но и количество паразитов в организме пациента.

Сейчас, как правило, пациентам предлагается пройти всего один тест — иммуноферментный анализ.

Иммуноферментный анализ — узкоспециализированный вид анализа, который проводится в условиях лаборатории. Анализ основан на реакции организма, обычно называемой «антиген-антитело».

Метод анализа, основанный на данном показателе, даёт точность в 99%. Это самый точный из известных сейчас методов. В практике почти не было случаев, когда такой анализ выдавал ложные результаты.

Этот метод позволяет выявить:

• значительное количество инфекционных болезней, вызываемых паразитами;
• наличие разных видов онкомаркеров;
• в репродуктивной медицине — наличие белков, гормонов и пептидов, необходимых для оценки фертильности пациента;

Достоверность результатов теста зависит от нескольких факторов:

• конкретная разновидность паразита;
• количество паразитов в организме;
• скорость их размножения.

Иммуноферментный анализ широко используется в диагностике самых разных заболеваний. Главная его ценность в том, что он позволяет с высокой точностью выявлять болезни, протекающие бессимптомно.

Как известно, такие болезни нередко бывает проблематично обнаружить на ранней стадии и, соответственно, вовремя начать лечить.

Какие заболевания диагностируют при помощи иммуноферментного анализа:

• онкологические заболевания;
• инфекции, передающиеся половым путём (ВИЧ, хламидиоз, сифилис, уреаплазмоз, герпес и другие заболевания);
• туберкулёз, корь, токсоплазмоз, гепатиты и так далее;
• гормоны щитовидной железы;
• половые гормоны;
• различные аутоиммунные расстройства;
• аллергические реакции и непереносимость отдельных продуктов питания.

Данная процедура помогает выявить:

• заражение организма бактериями и вирусами;
• белковую основу;
• глистные инвазии;
• инородные тела.

Собственно, процедура ИФА складывается из двух частей:

1. иммунный ответ;
2. ферментативная реакция.

Суть принципа «антиген-антитело» заключается в том, что возбудитель заболевания или инородное тело, то есть антиген, поступает в организм постепенно вместе с источником заражения. Этот процесс вызывает так называемый иммунный ответ, предназначенный для защиты организма от инородных элементов.

Проявления такой защиты зависят от самого антигена и от симптомов вызванной им болезни. Данная схема и получила название «антиген-антитело».

Для большей достоверности диагностики вся процедура иммуноферментного анализа проводится только в лабораториях и медицинских центрах. С пробой крови взаимодействуют различные антигены и антитела.

С целью выявления как вида, так и количества паразитов в организме пациента применяется иммуноглобулин классов «А» и «Е», который реагирует на паразитарные инвазии.

Такой анализ должен выявить:

Иммунная реакция показывает биологические связи в молекулах клеток микробов, на наличие которых и проводится анализ. Иммунная реакция как таковая — это только один из компонентов комплексной программы ИФА, второй же компонент — это ферментная реакция.

Узнавание антигена происходит в процессе контакта клетки иммунной системы (иммуноцита) с чужеродной клеткой. Индивидуальные особенности антигенов служат для иммунной системы средством распознавания «свой-чужой».

Фактически, антитело:

• Это просто молекула, расположенная на поверхности иммуноцита.
• Эта молекула и используется для распознания чужеродных клеток.

Передача полученной информации об антигене происходит на клеточном уровне. Связь разрушается, если клетка иммунная, если же нет — организм запускает естественную защитную реакцию.

Современной науке известны 5 классов антител, иначе называемых иммуноглобулинами или белковыми структурами.

Для обозначения антител используются латинские буквы: A, D, E, G и M.

В результатах анализов эти обозначения выглядят так:

В первую очередь необходимо подготовить специальные планшеты из полистирола, которые содержат 96 лунок. Перед анализом стенки каждой ячейки обрабатывают адсорбирующим антигеном.

В обработанные ячейки капают сыворотку крови. Гомологичные антитела и антигены реагируют друг с другом, образуя прочные связи. Не прикрепившиеся тельца вымываются. Затем в лунки добавляются антитела иммуноглобулинов вместе с помеченными особым образом ферментными элементами.

Реагенты помечаются для облегчения идентификации антител в анализируемой сыворотке. Хромогенный элемент, который ускоряет реакцию и подкрашивает лунки, добавляется после промывания. Интенсивность окраски по сравнению с изучаемым ферментом показывает примерное процентное содержание антигена в пробе крови.

Затем лаборант использует оптическую жидкость, чтобы:

• замерить концентрацию антител в лунках;
• сравнить полученный результат с контрольной пробой, то есть эталоном;
• подсчитать концентрацию антител при помощи специальной шкалы.

Для анализа на глистные инвазии используется особый вариант системы тестирования, со своим набором показателей нормы и отклонений от неё.

Забор сыворотки крови для иммуноферментного анализа проводится только в условиях лаборатории. Берут кровь из вены, удаляют оттуда элементы, способные повлиять на процесс анализа и точность его результатов. Сдают анализ утром на голодный желудок.

Качество и количество антител говорит о присутствии чужеродных элементов в организме пациента, в том числе болезнетворных микроорганизмов. Эти же признаки указывают на то, что в организме начался воспалительный процесс.

Пример расшифровки результатов ИФА:

Сам по себе количественный анализ, проведённый данным методом, ещё не даёт возможность точно диагностировать болезнь, назначить курс лечения и определить дозировку препаратов.

У всех методик тестирования, даже самых передовых и высокоточных, к сожалению, кроме преимуществ, есть и свои недостатки.

Преимущества иммуноферментного анализа:

• Специализация метода диагностики;
• Повышенная чувствительность этого метода;
• Применение новейших технологий.

Чувствительность метода диагностики — это высокая вероятность обнаружить искомое, даже если его концентрация в исследуемом материале крайне мала.

Специфичность методики означает:

высокую степень достоверности, то есть отсутствие риска получить ложный результат. Если результат положительный, то пациенту гарантировано, что обнаружен именно тот вид паразитов, от которого он страдает;

влияние на результат «человеческого фактора», то есть возможных ошибок лаборанта, сведено к нулю, что также способствует повышению точности.

Возможные недостатки данного метода анализа:

1. Он предполагает определение природы болезни, то есть интуитивно «угадать» правильный диагноз в данном случае невозможно;
2. Высокая стоимость анализа.

В процедуре ИФА напрямую используется способность антител находить антиген, образуя связи с метками. Данный способ анализа считают промышленным, время ожидания результата составляет не более часа.

Особая метка-субстрат проявляется после ферментации. Уровень антител соответствует доле антигенов в исследуемом биоматериале.

Существует также дуоденальный (иначе — непрямой) метод исследования на паразитарные инвазии, который широко применяется, несмотря на высокую точность ИФА.

Дуоденальный (непрямой) иммуноферментный анализ проводится в 2 этапа:

1. Сначала сопоставляют помеченные антитела с искомыми антигенами;
2. Применяют помеченные антитела к непомеченным, обнаруженным на предыдущей стадии.

Таким образом достигается двойной контроль антигенов и антител, увеличивающий достоверность анализа.

При непрямом ИФА в лаборатории антиген фиксируют на поверхности лунки, он образует связи с немеченной частью антител.

Достоинства дуоденального метода:

• Двойной контроль изучаемого биоматериала, что значительно повышает точность;
• Повышенная точность и специфичность самого метода анализа.

Однако, данный способ занимает много времени и предполагает некоторое количество дополнительных действий. Тем не менее, точность исследования настолько высока, что она оправдывает этот недостаток. По этой причине большинство врачей рекомендуют именно дуоденальный метод анализа.

При наличии всего необходимого инструментария и расходных материалов можно будет получить результат уже через 2 дня после сдачи. Если в лаборатории есть услуга экспресс-анализа, то обработать пробу могут всего за 3-5 часов.

Где можно сдать ИФА:

• в государственной поликлинике;
• в частных клиниках.

Расценки на иммуноферментный анализ напрямую зависят от уровня цен в конкретной клинике, в среднем его цена составляет не менее 4000 рублей.

Сведения, полученные в результате этого исследования, могут стать полезным вкладом в медицинскую науку, однако, пациенту следует помнить, что, поскольку стоимость иммуноферментного анализа так высока, разумнее будет доверить эту процедуру надёжной проверенной временем клинике.

К сожалению, государственные медицинские учреждения не всегда бывают оборудованы по последнему слову науки. Необходимых приспособлений для качественного забора биоматериала и его обработки в районной поликлинике может и не быть.

Итак, чем полезен для пациента иммуноферментный анализ крови:

• позволяет обнаружить глистную инвазию ещё на ранней стадии;
• как следствие этого, позволяет своевременно начать лечение;
• устойчивость методов даёт возможность проводить анализ с равной точностью у детей и у взрослых.

Иммуноферментный анализ демонстрирует не только качественный, но и количественный фактор, то есть не только указывает на сам факт наличия гельминтов в организме пациента, но и даёт возможность оценить их число.

источник

Существует множество способов для проверки эффективности какого-либо лечения или диагностики и подтверждения определённого диагноза. В качестве контрольного теста врачи используют исследование крови методом ИФА. Он направлен на определение некоторых антител и антиген, связанных с возбудителями, которые при взаимодействии между собой представляют некий комплекс. Обнаружение такого вещества определяется наличием изменения окраски при добавлении некоторых реактивов.

Другими словами, исследование крови методом ИФА расшифровывается как лабораторный химический анализ на содержание различных антител в крови, при помощи различных реагентов на конкретные возбудители. Точность диагноза напрямую зависит от интенсивности окрашивания: чем ярче цвет, тем больше вероятность заболевания.

Возможность проведения иммуноферментного анализа крови есть только в случае наличия специальной аппаратуры в лабораториях, которая определяет количество антител и чужеродных веществ, то есть антиген. Только они могут подвести иммунную систему к борьбе с инфекцией. Сейчас в медицине широко используются самые разные антигены крови, поэтому с помощью необходимого оборудования можно получить достаточно точный анализ для конкретного возбудителя. Однако важно правильно расшифровать иммуноферментны анализ и полученные данные, а ИФА проводить только при наличии соответствующей нормы или её отклонения.

Обычно процедуру ИФА используют в диагностике различных вирусных заболеваний. Гематит, ИППП, герпес и многие другие заболевания на разных стадиях дадут достаточно высокую точность подтверждения наличия заболевания в организме. Преимущество такого иммуноферментного анализа в том, что можно взять не только венозную кровь, но и спинномозговую жидкость или жидкость стекловидного тела.

Иммуноферментный анализ

Для диагностики разных видов и форм заболеваний в организме иммуноферментный анализ крови использует множество ЭЛИ-тестов. Так, состояние сердца и кровеносных сосудов, определение высокого риска сердечно-сосудистых заболеваний, определяют с помощью ЭЛИ-Анкор-тесту-12, а для оценки состояния печени, почек, кишечника, желудка и других основных органов используют ЭЛИ-Висцеро-16. Можно легко диагностировать сахарный диабет некоторых типов или общее состояние ЦНС.

Есть множество разных тестов, для проверки состояния практически всех органов:

• ЭЛИ-Н-Комплекс-12 – определяет общее состояние нервной системы.
• ЭЛИ-ЖКТ-12 – ИФА для общего состояния пищеварительного тракта человека и возможность его патологий в дальнейшем.
• ЭЛИ-ХГЧ-АФС – показывает нарушение системы половых органов.
• ЭЛИ-П-комплекс-12 –оценивает систему половых органов.

Существует три метода оценки иммуноферментного анализа крови:

1. Непрямой метод. Антитела смешивают со специальным реактивом, в процессе которого показывается определённая метка. Таким способом обнаруживаются практически все заболевания.
2. Прямой метод отличается от непрямого только тем, что к антителу добавляется антиген, с уже имеющейся на нём меткой.
3. Метод сандвич-тип практически идентичен непрямому, однако, в нём на специальном планшете собираются антитела, а не антигены.

Исследование крови методом ИФА считается в норме, когда показатели анализа на гормоны щитовидной железы не превышают показателей:

Результат ИФА

• тироксин (Т4) – 62-145 нмоль/л (51-112 нг/мл);
• трийодтиронин (Т3) – 0,5-1,8 нмоль/л (0,7-3,4 нг/мл);
• тиреоглобулин (ТГ) – 65-75 МЕ/мл.

Нормой ИФА для женщин в исследовании на половые гормоны является наличие лютеинизирующего гормона в пределах:

• фолликулярной фазы – 3-18 мЕд/л; ( первые 13 дней.);
• овуляционной фазы – 25-160 мЕд/л; ( с 13 по 15-е дни);
• лютеиновой фазы – 4-18 мЕд/л. ( с 15 до следующей фолликулярной фазы).

• Нормой ИФА у мужчин считается, если половой гормон выделяется в пределах 0,4-9 мЕд/л.

Нормальные показатели иммуноферментного анализа у детей:

• Аутоиммунные антитела «-»;
• Антинуклеарный фактор «-»;
• Антистрептолизин – О 0—5 лет — менее 110 Ед/мл; 5—15 лет — 150—300 Ед/мл; 15 и далее – менее 250 Ед/мл.

У беременных:

• При помощи современной диагностики крови методом ИФА у беременных могут быть выявлены какие-либо заболевания ИППП. Женщины обязаны делать биохимию крови 2 раза во время беременности, для того, чтобы в дальнейшем не было осложнений при родах. Но для них допустимой нормой считаются немного завышенные показатели.

Исследование крови методом иммуноферментного анализа крови достаточно увлекательный процесс, однако, по недостающим медицинским знаниям углубляться в него не имеет смысла. После получения результата врач отдаёт их вам на руки, так или иначе, вы получите точный подтверждённый диагноз.

Главное, не придумывать себе несуществующих симптомов и не лечить их народными способами, существующая медицина сама справится с поставленной для неё задачей, такой, как обнаружение различных заболеваний в тех или иных органах.

источник

Своевременное выявление инфекционных патологий помогает избежать развития тяжелых осложнений. Один из наиболее информативных методов диагностики – ИФА. Иммуноферментный анализ крови при беременности необходим для раннего выявления гематологических, аутоиммунных заболеваний, инфекций.

ИФА анализ – что это такое? Это один из методов диагностики, определяет количество и качественное содержание различных антител и антигенов в биологическом материале.

Что используют для иммуноферментного анализа крови при беременности:

Принцип действия основан на способности организма синтезировать специфические антитела в ответ на проникновение чужеродных агентов. В результате образуется комплекс антиген-антитело, который выявляют при проведении ИФА.

Метод ИФА считается одним из наиболее точных методов диагностики, его достоверность – более 90%. Анализ применяют для выявления различных серьезных заболеваний и опасных состояний.

Какие патологии можно выявить:

Иммуноферментный анализ крови при беременности позволяет оценить риск развития некоторых патологий почек, сердца, сосудов.

Диагностику проводят для контроля уровня антител, которые могут вызвать у ребенка серьезные неврологические расстройства.

Строгих противопоказаний для проведения ИФА нет. Но во время беременности часто наблюдается непрерывное изменение гормонов в крови, анализ приходится сдавать повторно несколько раз.

Имуноферментный анализ крови не назначают после переливания крови, взятия пункции и биопсии, гемолиза, оперативного вмешательства.

Чтобы получить достоверные результаты диагностики, к анализу ИФА нужно подготовиться.

1. Кровь сдают только на голодный желудок. Последний прием пищи – за 12 часов до исследования.
2. Непосредственно перед сдачей крови необходимо избегать активных и срезмерных физических нагрузок, постараться не нервничать. Обязательно нужно выспаться перед анализом.
3. За 2 недели до диагностики необходимо прекратить прием антибактериальных и противовирусных лекарственных средств.

Если для исследования необходим мазок со слизистых половых органов, то за 48 часов до сдачи анализа необходимо отказаться от половых контактов. Последнее мочеиспускание – минимум за 2 часа до забора биоматериала.

В день сдачи иммуноферментного анализа крови при беременности нельзя принимать душ или ванну.

Существует несколько методов в микробиологии для ИФА – прямой, непрямой, конкурентный, метод блокирования. Но в основе любого способа лежит алгоритм, который заключается в осуществлении иммунной и ферментативной реакции.

1. Для исследования применяют специальные планшеты, которые содержат 96 ячеек. Перед анализом каждую лунку обрабатывают специальным антигеном.
2. В ячейку капают биологический материал. Антитела и антигены вступают в реакцию, образуют прочные связи.
3. В лунки добавляют антитела иммуноглобулинов и помеченные ферментные элементы.
4. Используют оптическую жидкость для измерения концентрации антител.
5. Подсчитывают концентрацию антител с помощью специальной шкалы.

Непрямой метод считается более точным, поскольку в процессе изучения сыворотка проходит двойной контроль антител и антигенов.

Во время ИФА выявляют наличие в биологическом материале иммуноглобулинов 3 типов – IgA, IgG, IgM, IgE, IgD.

Кровь на ИФА – расшифровка:

1. Иммуноглобулины типа M. Появляются в организме спустя 1-3 недели после начала болезни. Циркулируют в крови в течение 6-12 недель, затем их количество постепенно уменьшается. Наличие в крови IgM свидетельствует об остром первичном патологическом процессе, требуется срочное медикаментозное лечение.
2. Иммуноглобулины типа G. Обнаружить их можно через 4 недели после заражения, присутствуют в организме несколько месяцев. Во время острого течения болезни титр их увеличивается на протяжении 1,5-2 месяцев. Наличие IgG свидетельствует о наличии иммунитета к патогенам, или о перенесенном недавно заболевании. Рост иммуноглобулинов этого типа свидетельствует о повторном заражении.
3. Иммуноглобулины типа A. Появляются через 2-4 недели заражения, циркулируют в организме в течение 4 недель, по их количеству оценивают эффективность лечения. Снижение показателей свидетельствует о начале процесса выздоровления. Появление их в крови после завершения медикаментозного лечения – признак перехода болезни в хроническую стадию.
4. Выявление иммуноглобулинов типа IgE применяют при выявлении аллергических и паразитарных патологий.
5. Иммуноглобулины IgD в небольшом количестве присутствуют у здоровых людей. Увеличение их количества может свидетельствовать о наличии патологий соединительной ткани, бронхиальной астмы, иммунодефицитных состояний. Рост наблюдается и во время беременности.
6. Присутствие в крови одновременно IgA и IgG – признак наличия в организме хронического патологического процесса.
7. Наличие IgG и IgM свидетельствует об обострении хронической болезни, или о том, что первичное заражение произошло не позднее 2-3 месяцев до сдачи анализа.

Если ни один из иммуноглобулинов не обнаружен, это означает отсутствие иммунного ответа.

Положительный результат позволяет не только выявить патологию, но и определить стадию развития и характер течения болезни.

Помимо вида антител, определяют их авидность – прочность связи антител с антигеном. Этот показатель позволяет оценить предполагаемый срок инфицирования.

У иммунохимических анализов много преимуществ, но есть и недостатки.

• невысокая стоимость и доступность;
• возможность выявить заболевания на раннем этапе развития и контролировать динамику их развития;
• минимальные сроки получения результатов.

Недостатки – нельзя выявить конкретный тип возбудителя, нередко бывают ложноположительные результаты. Ложноположительный ответ может быть при заболеваниях соединительной ткани и суставов, диабете, воспалительных болезнях сердца.

Именно у беременных нередко наблюдаются неспецифические ложноположительные результаты ИФА анализа, из-за высокой чувствительности тест-систем.

Иммуноферментный анализ крови при беременности – достоверный и быстрый метод диагностики различных заболеваний. При этом он абсолютно безопасен для матери и ребенка.

Его часто назначают беременным, но, чтобы избежать опасных патологий, делать его рекомендуют на этапе планирования зачатия.

источник

Иммунологическое обследование для детей – специально подобранный обширный комплекс определяемых показателей, позволяющий оценить важные параметры иммунной системы у детей любого возраста. Анализ позволяет определить состояние и напряженность противовирусного иммунитета, оценить наличие и выраженность аутоиммунного, атопического компонентов в течении различных заболеваний. Исследование предназначено для возрастной группы 1-16 лет.

С помощью детской иммунограммы можно понять, в каком состоянии находятся защитные силы организма ребенка. Иногда иммунограмма может быть ключевым анализом, объясняющим причину безуспешного лечения некоторых болезней, например, если ребенок часто болеет и выздоровление проходит долго, несмотря на все принимаемые меры. При скрытой инфекции у ребенка иммунограмма покажет, какие «пробелы» имеются в иммунной системе. Отклонения показателей анализа от нормы укажут на неэффективность работы иммунной системы, а интерпретация врача поможет понять, как и почему нарушен иммунитет. Кроме того, существенные отклонения в иммунограмме могут свидетельствовать о серьезном иммунодефиците, который способен привести к развитию хронических инфекций и воспалениям органов и тканей в организме ребенка.

Иммунитет человека после рождения формируется постепенно, с течением времени, поэтому иммунограмма взрослого и ребенка будет отличаться. В данном специально разработанном комплексе при анализе иммунограммы учитываются особенности детского организма, оцениваются все звенья иммунитета, не только количество клеток, но и их функциональная активность.

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

• Состояние клеточного звена иммунитета — о пределение содержания основных субпопуляций лимфоцитов, а также углубленный анализ малых популяций В-клеток и расширенный анализ NK-клеток (Natural killers – «натуральные киллеры»)
• Определение уровня основных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови (IgA, IgE, IgG, IgM)
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
• С3, С4 компоненты комплемента
• Лейкоцитарная формула

Иммунограмма, иммунный статус ребенка, детский иммунный статус, иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии.

Синонимы английские

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.

Проточная цитометрия (для клеточного звена), иммуноферментный анализ – ИФА (для ЦИК), турбидиметрия (для иммуноглобулинов).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
• Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

В современном понимании иммунный статус человека – это совокупность лабораторных показателей, характеризующих ко­личественную и функциональную активность клеток иммунной системы на данный момент. Оценка иммунного статуса проводится с помощью иммунологического лабораторного обследования – иммунограммы. Иммунограмма крови не отража­ет избирательно состояние патологически измененного органа или системы, но позволяет оценить иммунную систему в целом (сум­марный эффект изменения активности иммунной системы в ответ на чужеродный антиген).

Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлуориметрии.

Иммунофенотипирование – характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флуоресцентно-меченные моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии подсчитать содержание лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флуоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов:

• Т-лимфоциты (CD3 + CD19 — ),
• Т-хелперы/индукторы (CD3 + CD4 + CD45 + ),
• Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3 + CD8 + CD45 + ),
• истинные «натуральные киллеры» (NK-клетки) (CD3 — CD56 + CD45 + ),
• В-лимфоциты (CD19 + CD3 — ),

– но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

• Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3 + CD56 + CD45 + ),
• NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3 — СD8 + CD45 + ),
• NK-клетки цитолитические (CD3 — CD16 +( or high ) CD56 dim CD45 + ),
• NK-клетки цитокинпродуцирующие (CD3 — CD16 -( or low ) CD56 bright CD45 + ),
• истинные «натуральные киллеры» (NK-клетки) (CD3 — CD16 + CD45 + ),
• В-1-клетки (CD19 + CD5 + CD27 — CD45 + ), связанные продукцией аутоантител,
• активированные В-лимфоциты (CD3 — CD25 + CD45 + ),
• В-2-клетки (CD19 + CD5 — CD27 — CD45 + ),
• В-клетки памяти (CD19 + CD5 — CD27 + CD45 + ),
• активированные Т-лимфоциты (CD3 + HLA-DR + CD45 + ) и активированные цитотоксические лимфоциты (CD8 + HLA-DR + CD45 + ),
• В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3 — HLA-DR + CD45 + ),
• активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3 + CD25 + CD45 + ),
• регуляторные Т-хелперные клетки (CD4 + CD25 bright CD127 neg CD45 + ), выполняющие иммуносупрессорную функцию.

Такое всестороннее изучение клеточного состава лимфоцитов в совокупности с результатами анализа основных классов сывороточных иммуноглобулинов, определением циркулирующих иммунных комплексов, клиническим анализом крови, анализом С3, С4 компонентов комплемента позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений. Они про­водятся для уточнения степени и глубины поражения иммунной системы и подбора препарата для проведения последующей адек­ватной иммунокорректирующей терапии, оценки эффективности проводимого лечения, определения прогноза течения заболевания.

Когда назначается исследование?

Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по аутоиммунному иммунопатологическому синдрому. Это пациенты с такими заболеваниями, как:

• ревматоидный артрит;
• рассеянный склероз;
• диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
• аутоиммунный тиреоидит;
• неспецифический язвенный колит и т. д.

С3 компонент комплемента: 0.90 — 1.80 г/л

С4 компонент комплемента: 0.10 — 0.40 г/л

Суммарные иммуноглобулины класса A в сыворотке (IgA): 0.20 — 1.00 г/л

Суммарные иммуноглобулины класса G в сыворотке (IgG): 4.53 — 9.16 г/л

Суммарные иммуноглобулины класса M в сыворотке (IgM): 0.19 — 1.46 г/л

Суммарные иммуноглобулины класса E в сыворотке (IgE): 0.00 — 60.00 МЕ/мл

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК): 0.0 — 120.0 у.е.

источник

Методика иммуноферментного анализа применяется в различных отраслях медицины. Но в большинстве случаев данным методом диагностируют широкий круг инфекционных заболеваний, таких как вирус иммунодефицита человека, гепатит, герпес и прочих инфекций половых органов. Также иммуноферментный анализ применяют для выявления онкомаркеров различного происхождения, определения гормонов и при диагностике репродуктивной функции организма. Материалом для иммуноферментного исследования является кровь человека.

Иммуноферментный анализ крови – это лабораторное иммунологическое исследование крови, при котором происходят качественные и количественные измерения антител (антигенов), а также гормонов. Этот метод предоставляет до 90% точности при установлении диагноза заболевания.

Медицинские лаборатории используют несколько вариантов его проведения, что влияет на срок готовности результатов. Но в среднем выдача результатов исследования происходит в период 1-10 дней после сдачи крови.

При данном виде анализа крови устанавливаются антитела разных видов – это иммуноглобулины класса M, A, G (JgM, JgA, JgG). Их накопление происходит в различные временные промежутки. Первыми начинают проявляться иммуноглобулины класса М (пятый день после начала болезни). Такие иммуноглобулины задерживаются в организме пять-шесть недель, после чего начинают исчезать из крови организма. Именно в данный период времени выявляются антитела класса М.

Вторыми проявляются иммуноглобулины класса G (через три-четыре недели). Они задерживаются в организме несколько месяцев или лет. Во время проведения иммуноферментного анализа крови и расшифровки его результата можно обнаружить возрастание антител класса G. Это свидетельствует о наличии инфекции или реинфекции.

Антитела класса А проявляются в крови на протяжении двух-четырех недель. Но всего лишь 20% из них присутствуют в сыворотке крови. Остальные же входят в состав секрета слизистых оболочек. Иммуноглобулины класса А начинают исчезать в промежутке времени от двух недель до двух месяцев. Данный процесс является свидетельством уничтожения инфекции в организме. Если после выздоровления человека проводился повторный иммуноферментный анализ крови и расшифровка результата показала наличие антител класса А – это свидетельство хронической инфекции.

Расшифровка результатов анализа может принимать такие значения:

• JgM (-), JgG (-), JgA (-) – отсутствие иммунитета к инфекции;
• JgM (-), JgG (+), JgA (-) – наличие поствакционного или постинфекционного иммунитета;
• JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) – наличие острой инфекции;
• JgM (+), JgG (+), JgA (+) – наличие обострения хронической инфекции;
• JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) – наличие хронической инфекции;
• JgM (-) – выздоровление.

В расшифровке (+) является положительным результатом, а (–) – отрицательным результатом.

Помимо уточнения классов антител в расшифровке встречаются количественные их показатели. Но обширное их объяснение может предоставить только лечащий врач.

Сыворотка крови – это прозрачная жидкость с желтым оттенком. После свертывания крови она отделяется от кровяного сгустка. Не содержит фибрина и форменных элементов.

Иммуноферментный анализ сыворотки крови основан на взаимодействии антигена с антителом, причем один из них содержит в своей структуре фермент. При взаимодействии двух компонентов содержимое пробирки должно менять свой цвет. Результаты сравниваются со стандартной цветовой шкалой, и далее устанавливается антиген, который присутствует в материале. Другими словами принцип иммуноферментного анализа сыворотки крови можно объяснить так:

1. подготавливаются наборы антигенов (например, возбудители инфекционных заболеваний, аллергены или гормоны);
2. пациент сдает кровь на анализ, из которой в лаборатории выделяется сыворотка;
3. материал для исследования добавляется в лунки готовых наборов, после чего возникает реакция антиген-антитело;
4. оставшаяся сыворотка крови убирается, а обнаруженные антитела распознаются при помощи индикаторов.

Иммуноферментный анализ сыворотки крови считается достоверным. Но в тех случаях, когда произошло неправильное взятие крови для анализа, или была нарушена техника проведения исследования, или же имеются у человека скрытые системные заболевания, результаты иммуноферментного анализа сыворотки крови могут оказаться ложными.

Иммуноферментный анализ сыворотки крови исследует практически все гормоны щитовидной железы, онкомаркеры и различные виды инфекций.

К гормонам щитовидной железы относятся тиреоглобулин (ТГ), тироксин (Т4), трийодтиронин (Т3), свободный тироксин (Т4), свободный трийодтиронин (Т3).

Иммуноферментный анализ крови в норме считается, если присущи такие допустимые нормы гормонов щитовидной железы:

• тиреоглобулин (ТГ) – допустимые границы 70 МЕ/мл;
• тироксин (Т4) – 64-146 нмоль/л (50-113 нг/мл);
• трийодтиронин (Т3) – 1,8-2,8 нмоль/л (0,8-2,0 нг/мл);
• свободный тироксин (Т4) – 11-25 пмоль/л (10-27 пг/мл);
• свободный трийодтиронин (Т3) – 4,49-9,3 пмоль/л (2,5-5,8 пг/мл).

В случае исследования половых гормонов иммуноферментный анализ крови в нормедля женщин считается, если в организме выделяется лютеинизирующий гормон (ЛГ) в таких пределах:

• фолликулярная фаза цикла (с первого дня месячных до двенадцатого-четырнадцатого) – 2-14 мЕд/л;
• овуляционная фаза цикла (с двенадцатого дня по четырнадцатый день) – 24-150 мЕд/л;
• лютеиновая фаза цикла (с пятнадцатого-шестнадцатого дня и до начала следующих месячных) – 2-17 мЕд/л.

В норме для мужчин принимается, если половой гормон вырабатывается в пределах 0,5-10 мЕд/л.

При исследовании хронического гонадотропина (ХГ) референсные значения зависят от пола человека.

• У взрослых мужчин и небеременных женщин нормой считается уровень ХГ ниже 5мЕд/мл.
• У беременных женщин результат зависит от срока беременности и может колебаться в пределах 25-49000 мЕд/мл.

Иммуноферментный анализ крови исследует множество онкологических показателей. К ним можно отнести наличие пролактина, эстрадиола, прогестерона, тестостерона, стероид связывающего глобулина (ССГ) и других маркеров. Но интерпретация результата анализа и норм этих показателей должна проводиться только лечащим врачом.

Кроме того, данный метод диагностирует инфекционные (например, краснуха, корь, туберкулез, герпес, сифилис, гепатит, псевдотуберкулез) и аутоиммунные заболевания разного вида, а также устанавливает иммунный статус человека. Но все показатели и полученные результаты должны расшифровываться квалифицированным специалистом.

источник

ИФА анализ — что это такое, расшифровка иммуноферментного анализа крови на паразитов, сифилис, ВИЧ, туберкулез. Норма в таблице, результаты

Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.

Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.

ИФА анализ — это такое лабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.

Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.

ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.

Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.

Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.

Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.

Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:

Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A.

ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным.

Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как:

• вирусный гепатит;
• ВИЧ-инфекция;
• цитомегаловирус,
• вирус Эпштейна-Барр,
• вирус герпеса,
• корь
• краснуха,
• туберкулез,
• сальмонеллёз,
• дизентерия,
• клещевой энцефалит,
• бактерии хеликобактер,
• боррелиоз,
• столбняк,
• сифилис,
• дифтерия,
• лептоспироз,
• хламидиоза,
• уреаплазмоз,
• микоплазмоз,
• коклюш.

Так же анализ позволяет определить инфицирование паразитами:

• плоскими червями
• аскаридами
• гистолическими амебами,
• печеночными тремадами,
• лямблиями,
• токсоплазмами,
• трихинеллами,
• двуусткой,
• цестодозами.

ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований.

При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил:

• за сутки до забора крови нельзя курить и употреблять алкоголь,
• не заниматься спортом или другими физическими нагрузками,
• стараться не допускать стрессов,

Перед тем как сдать ИФА анализ, нужно избегать стрессов.

прекратить употребление лекарственных средств не позже чем за 10 дней до манипуляции.

Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок.

Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается.

В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови.

Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты.

Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки.

Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала.

Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С.

После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены.

Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так:

• Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag).
• Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab).
• Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе.

В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора.

Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА.

При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей.

Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном.

После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей.

При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию.

Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете.

Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами.

Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате.

Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий.

На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител.

Возможны различные интерпретации результатов:

1. IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления;
2. IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология;
3. IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям;
4. IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс;
5. IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет;
6. IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения.

Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний:

• вирусный гепатит;
• цитомегаловирус;
• герпес;
• ветряная оспа;
• хламидиозом;
• стафилококковая или стрептококковая инфекция.

Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице:

ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом.

ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных.

Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования:

• иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания;
• IgA — пациент заразился более 30 дней назад;
• IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно.

В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование.

Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев).

В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода).

При получении положительных проб далее следует:

• если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом;
• повторный положительный результат предполагает пересдачу материала,
• при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг.

Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга.

ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы.

ИФА анализ — это такое исследование, позволяющее обнаружить у пациента заражения паразитами и простейшими, в ходе диагностики можно определить даже время заражения.