Меню Рубрики

Норма рнк гепатита с количественный анализ

Ведущий метод диагностики воспаления печени — количественный анализ на гепатит С. Определение болезни подразумевает проведение количественного, качественного анализа с проверкой генотипа вируса, что дает возможность определить основные параметры течения заболевания. Ввиду способности к мутации требуется точное и своевременное диагностирование с правильно расшифровкой данных для разработки терапевтической схемы.

С 2012 года болезнь гепатита C официально считается полностью излечимым заболеванием. Но для этого важна своевременная диагностика.

Полимеразная цепная реакция или же ПЦР — метод, позволяющий выявить гепатит на начальных стадиях. Чувствительность немного ниже ИФА. Метод определяет ДНК- фрагменты вируса в пробе крови пациента даже в малых количествах. Исходя из этого врач правильно вычисляет именно возбудителя инфекции, а не его продукты жизнедеятельности. По результатам анализа ПЦР есть возможность выявить даже следы вируса и его генотип.

В ПЦР выделяют 3 вида анализа:

  • Качественный. ПЦР гепатита С, который основывается на поиске иммуноглобулинов (антител) типа M и G, характеризующих факт заражения. Анализ может выдать — «не обнаружено», что будет считаться нормой.
  • Количественный. Подтверждает диагноз, позволяет контролировать лечение, указывает на риск заражения других людей. Определяется количество в международной системе единиц — МЕ/мл. Показатель рассчитывается из количества РНК-вируса в 1 мл пробы крови. Высокий результат указывает на повышенный риск инфицирования других людей.
  • Генотипирование. Метод, основывающийся на выявлении генотипов HCV, которых насчитывается 7.

Перед сдачей крови на проверку важно придерживаться правил:

  • За 8 часов до анализов в последний раз покушать.
  • Не пить спиртного за 2 дня, желательно не курить в это время или хотя бы за 1—2 часа до.
  • Сообщить о приеме лекарств.

Вернуться к оглавлению

Для проведения количественного метода исследования нужен ряд показаний, без которых эта диагностика невозможна. К ним относится:

  • выявление качественным анализом антител РНК-вируса;
  • присутствие хронического или острого вида заболевания;
  • планирование тактики лечения;
  • обнаружение микст-гепатитов при диагностировании.

Вернуться к оглавлению

Определение концентрации патогена — суть исследования. Диагностика определяет степень тяжести заболевания, что позволяет полностью увидеть клиническую картину болезни. С помощью это вида ПЦР обнаруживают, какая вирусная нагрузка при гепатите С. После проведения расшифровки полученных данных анализа, врачи назначают лечение, в ходе которого делают забор крови на 4, 12, 16 и 24-й неделях. По завершении 12-й должно быть улучшение, в обратном случае метод лечения стоит заменить.

Найденное в крови количество HCV, влияет на вероятность, с которой вирус гепатита передается окружающим — чем выше, тем больше вероятность. За счет этой процедуры составляется правильный план дальнейшего лечения. Полученные в ходе процедуры результаты измеряются в единицах МЕ/мл и копий/мл. Расшифровать показатели можно только после пересчета полученного количества с учетом коэффициента (КП). Есть 2 метода:

  • HCV Monitor с КП в МЕ — 2,7;
  • LCX HCV RNA с КП — 3,8.

источник

Гепатит С — это заболевание, способное размножаться в здоровых клетках печени и провоцировать появление пролиферативных болезней. В современном мире, когда вирус гепатита прошел определенную мутацию, человеческая иммунная система стоит под угрозой, так как по сравнению с инфекцией, она ничтожна. Также стоит отметить, что не у всех больных будут наблюдаться первые признаки заболевания, тем более на ранних стадиях.

РНК анализ вируса гепатита С — это количественное исследование, норма которого заключается в умеренном количестве присутствия вирусных клеток в крови пациента. Согласно статистике, около 31% больных полностью излечиваются от данного недуга, если он находится на начальной стадии.

Во врачебной практике доктора отмечают, что у 4 млн инфицированных симптомы и первые признаки вовсе не появляются, хотя запущенная форма гепатита может привести к циррозу печени или раку.

В настоящий момент при проведении процедуры “переливание крови”, данную кровь проверяют на наличие вируса гепатита С, так как данное заболевание передается через донорскую кровь.

На сегодняшний день, в мире уже появились препараты от гепатита С с эффективностью приближенной к 100% Современная фарм промышленность создала лекарства, которые практически не имеют побочных эффектов. Многие пациенты получают первые результаты в виде облегчения симптомов и снижения вирусной нагрузки уже через неделю приёма. Подробнее о препаратах от гепатита с индийского производства читайте в нашей отдельной статье.

На рынке компаний по перевозке индийского лекарства от гепатита С «GalaxyRus (Galaxy Super Speciality)» отлично зарекомендовала себя. Данная компания успешно помогает людям излечиться от недуга больше 2-х лет. Отзывы и видео довольных пациентов вы можете посмотреть здесь. На их счету более 4000 людей, которые выздоровели благодаря купленным препаратам. Не откладывайте свое здоровье в долгий ящик, перейдите на сайт www.galaxyrus.com или позвоните по номеру 8-800-3500-695 , + 7 (495) 369 00 95

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это наиболее современный и действенный метод изучения гена вируса и его возможностей. Такая диагностика способна установить разновидность заболевания и определить его дальнейшую мутацию в организме больного.

Анализ проводится путем забора крови, которую в последующем помещают в специальные реактивы, в которых происходит клонирование клеток.

Из одной клетки получается две, и так далее. В итоге появляются сотни ДНК, благодаря которым можно диагностировать возбудитель и выявить вирус на ранней стадии.

Поэтому ПЦР делится на несколько видов:

  • качественный анализ — распознает гены инфекция в крови. Если при проведении качественного анализа у пациента подтверждается заболевание, то следует провести количественный анализ, устанавливающий степень инфекции. В результате проведения данной диагностики специалисты пишут “обнаружено/ не обнаружено”. “Обнаружено” — говорит о том, что недуг присутствует в организме и выявлен уже его РНК. “Не обнаружено” — свидетельствует об отсутствии в пробе гена вируса, то есть РНК гепатита отсутствует. Но врачи рекомендуют провести повторное исследование через 10 дней.
  • количественный анализ — определяет объем генетического материала инфекции в крови. Такая диагностика помогает установить тяжесть болезни и всю клиническую историю. В результате такого анализа может быть написано только: “Положительно/Отрицательно/Недействительный”. “Положительно” — изображает инфекционную нагрузку. Доктора такой метод диагностики болезни назначают для определения действенности проводимого лечения на 4, 12, 16 и 24 неделях болезни.Если показатель вируса находится в диапазоне 8х10т МЕ/мл, то лечение эффективно, если показатели выше — то нет. “Отрицательно” — ген инфекции не обнаружен. “Недействительный” — такое бывает, если ген вируса обнаружили при качественном, но при этом не выявили при количественном анализе. Встречается подобное при условии, что объем инфекции ниже уровня.

Вирус гепатита С — диагностируется прежде всего путем проведения количественного анализа, расшифровка которого необходима для правильной интерпретации болезни. Но несмотря на это, качественный и количественный метод диагностики имеют свои отличия, например: роль и поставленные задачи перед исследованиями — качественный — подтверждает присутствие инфекции после обнаруженных антител вируса, а количественный — вторичный метод, опровергающий или подтверждающий болезнь, чтобы поставить правильный и единственный диагноз.

После проведения диагностики, интерпретировать полученный результат могут только врачи, так как он изображен должен быть не в цифрах, а в словах. Согласно статистике, количественный ПЦР — это самый чувствительный анализ. Для того чтобы понять присутствует ли в организме вирус ,необходимо понимать и знать, что количественный анализ на гепатит С расшифровывается с помощью цифрового обозначения (норматива) инфекции:

Показания Прогноз/интерпретация
  • это предельная норма здорового человека
до 1,8х10 000 МЕ/мл
  • определено но уровня очага инфекции
до 8х10 (5) МЕ/мл
  • определено в очаговом уровне инфекции, но лечении будет эффективно
> 8х10 (5) МЕ/мл
  • определен вирус вне допустимой зоны очага вируса
> 2,4х10(7) МЕ/мл
  • превышены все нормативные показатели очага вируса, при котором лечение будет эффективным

Стоит отметить, что несмотря на критерии стандартов, случаются исключения, при которых врачам удавалось при результате > 2,4х10(7) МЕ/мл поставить человека на ноги. Следовательно, итог зависит и от иммунной системы человека, положительная динамика которой стала редкостью в современном мире.

Если человек здоров и его ничего не беспокоит, то итогом проведенной диагностики будет являться “не обнаружено”. А вот у тех, кто уже заболел, но при этом проводит комплексное лечение, то улучшение показателей — это сигнал к выздоровлению. К примеру, самый благоприятный диапазон вирусных рамок колеблется от 1,8х10 (2) до 2,4х10 (7) МЕ/мд, где 600 МЕ/мл — низкая концентрация, 3х10 (4) МЕ/мл — средняя, а более 8х10 (5) мЕ/Мл — уже высокая.

Вероятность ошибки возможна при том случае, если пациент не соблюдает некоторые правила проведения диагностики:

  • сдавать кровь натощак,
  • не увлекаться вредными привычками в течение 2-х дней до исследования,
  • не проводить УЗИ и другие подобные исследования,
  • не пить лекарственные средства перед сдачей анализа,
  • не перенапрягаться (физически),
  • обеспечить полноценный психологический покой.

Все это может влиять на результат исследования и делать его ошибочным. Также проведенная в разных лабораториях диагностика способна дать абсолютно различные показатели. Поэтому врачи следуют проводить контрольный количественный анализ на гепатит С в одной и той же лаборатории, но с разницей в 10 дней.

Если Вы хотите самостоятельно пройти данное исследование буду больным гепатитом С, то мы Вам все-таки рекомендуем посоветоваться с Вашим лечащим врачом, так как информативность вирусного показателя отмечается на 1,4,12 и 24 неделях болезни. Благодаря такому диапазону можно проследить эффективность или неэффективность проводимого лечения. Установить график улучшения или ухудшения состояния больного способен только лечащий врач. Поэтому доверьтесь всецело ему.

источник

Гепатит С часто протекает скрыто, без очевидных клинических проявлений. Чтобы определить наличие вируса в организме и поражение им печени требуется пройти соответствующее исследование — ПЦР количественный на гепатит С.

О чем я узнаю? Содержание статьи.

Количественный ПЦР — исследование крови или другой физиологической жидкости, которое позволяет определить количественную вирусную нагрузку на организм.

Заболевания, в зависимости от тяжести протекания, отражаются присутствием в крови определённого количества (мл на 1 см3) возбудителя инфекции. Каждый живой организм имеет в своём составе белки, рибонуклеиновую (РНК) и дезоксирибонуклеиновую (ДНК) кислоты.

Каждый вирус имеет характерные только для него РНК, ДНК, белки. Суть метода полимеразной цепной реакции в том, что он указывает количество РНК конкретного организма (например, вируса определённого генотипа) в 1 мл жидкости. Таким образом, выясняется степень и тяжесть заболевания.

При гепатите С, количественный ПЦР показывает сколько в исследуемом материале РНК вируса. Предварительно проводят качественный анализ, выясняя его наличие.

Из всех существующих способов определения возбудителя, а также его количества, полимеразная цепная реакция — наиболее точный метод. Он призван обнаружить сам вредоносный организм, а не последствия его пребывания (антитела).

Терапия любого заболевания допустима только после установления точного диагноза. Врач сбирает анамнез, оценивает клинические проявления недомогания, а также назначает дополнительные лабораторные обследования.

Прежде чем доктор поставит диагноз, подберёт лечение, необходимо количественное определение РНК вируса гепатита С. Этот анализ назначается не всем пациентам, а при конкретных показаниях:

  • контакт с больным гепатитом С;
  • симптомы заболевания печени;
  • клинические проявления цирроза;
  • в биохимическом анализе крови показатели активности АЛТ, АСТ выше нормы;
  • подозрение на инфицирование гепатитом С;
  • выявлены антитела к HCV при иммуноферментном исследовании крови;
  • уточнение диагноза;
  • определение вирусной нагрузки, чтобы доктор мог выбрать тактику, правильно составить схему лечения;
  • контроль эффективности проводимой терапии в динамике (1, 4, 12, 24 недели после начала лечения);
  • динамика протекания заболевания;
  • при подозрении на смешанные поражения железы;
  • по окончании лечения гепатита для периодической проверки, чтобы исключить рецидив.

Чтобы сделать количественный ПЦР вирусной РНК гепатита С, надо соблюдать методику выполнения исследования:

  1. Лучше всего для тестирования подходит венозная кровь. Анализы сдаются натощак. Пациенту не рекомендуют есть жирную и жареную пищу, пить спиртное за два дня до манипуляции.
  2. После забора биологического материала, его доставляют в лабораторию, обрабатывают.
  3. ПЦР состоит из трёх этапов (подготовка, увеличение копий ДНК возбудителя, идентификация) на каждом из которых используется определённое оборудование и реактивы.
  4. Образцы, взятые для исследования, маркируются. Из них с помощью реагентов выделяют РНК вируса, обозначенного качественным ПЦР.
  5. Процесс амплификации (создание и увеличение копий) проходит несколько раз посредством изменения температуры материала (нагревания, охлаждения) с использованием реактивов.
  6. На последнем этапе происходит определение вирусной нагрузки. Результат исследования интерпретирует лечащий врач, у которого есть расшифровка, таблица значений и итоги предварительной диагностики.

После количественной полимеразной цепной реакции, данные о вирусной нагрузке на печень и организм в целом отображают в бланке. Количество РНК возбудителя выражается как МЕ/мл (международные единицы/миллилитры). Данные обычно выводятся в виде таблицы, в которой представлены:

  • норма количественного ПЦР при гепатит С;
  • полученный результат;
  • другие параметры.

Значения показателей вирусной нагрузки при гепатите С

Показатель Интерпретация
Отрицательный РНК возбудителя в биологическом материале не обнаружено
0 — 1,8Х10^2МЕ/мл Количество генетического материала вируса ниже установленного референтного значения
1,8Х10^2МЕ/мл — 8Х10^5МЕ/мл Невысокая вирусная нагрузка.
8Х10^5МЕ/мл — 2,4Х10^7МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка
2,4Х10^7МЕ/мл и более Превышена верхняя граница значений.

Показатели отчасти зависят от типа и чувствительности теста. Поэтому расшифровать результат анализа может только доктор, который учитывает все параметры.

Лечащий врач, исходя из результатов анализов, собранного анамнеза, клинических признаков подберёт противовирусную терапию. Интенсивность её будет зависеть от количества найденного генотипа вируса в образце.

Любое лабораторное исследование может иметь погрешность, если не будут соблюдены условия его проведения на всех этапах (от подготовки к процедуре до интерпретации результатов). Количественная полимеразная цепная реакция – один из наиболее достоверных методов определения вирусной нагрузки. Но при нарушении методики она может давать ошибочные результаты, так как присутствует человеческий фактор.

Чтобы максимально избежать ложноположительных или неверных данных, требуется выполнять все необходимые требования диагностики:

  1. Прежде чем проводить количественный ПЦР рекомендуется провести иммунологическое исследование крови на выявление антител к гепатиту С. Кроме этого, требуется определить генотип вируса.
  2. Пациенту важно подготовиться к сдаче анализов в соответствии с рекомендациями. Чтобы уменьшить вероятность ошибки в тесте, надо сообщить лаборанту о приёме лекарств (если такой момент имеет место). На прохождение ПЦР влияет употребление запрещённой пищи, стресс, вредные привычки, физические нагрузки, различные заболевания.
  3. Лаборант, который обрабатывает образец биологического материала должен быть компетентен, знать методику проведения количественного ПЦР, а также работу оборудования. Правильная идентификация, подсчёт копий – основа верного результата
  4. Качество, способ, сроки хранения реактивов должны соответствовать заявленным требованиям.
  5. Соблюдение температурного режима на всех этапах реакции обязательно.

Правила и рекомендации по подготовке, сбору материала, проведения количественного ПЦР необходимо соблюдать для достижения 100% точности полученного результата. Ошибочные данные приводят к неправильному выбору тактики лечения и неэффективности терапии.

При подозрении на инфицирование гепатитом С надо обязательно проконсультироваться с врачом. Если проведена диагностика, а ПЦР положительная или её количественные показатели говорят о наличии вирусной нагрузки, это однозначно повод безотлагательно посетить медучреждение.

Доктор, расшифровав результаты анализов, назначит лечение. Правильно выбранные лекарства, техника терапии, своевременное начало приёма медикаментов помогут избежать патологических изменений структуры и работы печени.

Гепатит С — тяжёлое вирусное заболевание, которое может привести к необратимым последствиям для человека. Ранняя, точная диагностика (количественный ПЦР) даёт возможность увеличить вероятность выздоровления в несколько раз.

источник

Если диагностирован вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого влияет на назначение лечебной схемы, строго обязателен. В отличие от генотипирования, подобное исследование выполняется несколько раз: непосредственно на этапе комплексной диагностики заболевания и в ходе терапии. Доктору важно знать количественное содержание вируса в крови пациента, чтобы назначить адекватное лечение.

Уже на стадии терапии анализ крови на уровень HCV предназначен для оценки эффективности принимаемых лекарств. По данным клинических исследований, на фоне подавляющего большинства противовирусных препаратов прямого действия количественный тест демонстрирует отрицательный результат уже на 21–28 день. Однако о полном выздоровлении речь идет в том случае, если негативные данные сохраняются на протяжении двух лет с последнего дня приема таргетных таблеток.

Для установления числового значения генома возбудителя гепатита С в сыворотке крови обычно пользуются молекулярной технологией ПЦР. Только таким образом можно точно посчитать уровень виремии: данный термин обозначает концентрацию копий (частиц генома) возбудителя гепатита С в определенной единице крови. Прочие методы, например, выявление core-антигена иммуноферментным тестом применяются гораздо реже из-за высоких финансовых затрат и сложностей, касающихся технического выполнения исследования.

Полимеразная цепная реакция до недавнего времени была лишь экспериментальным методом анализа и не была широко распространена в клинической практике. Принцип методики основан на так называемой амплификации – способности определенного участка генома патогена к многократному копированию.

Это достигается при помощи обязательных компонентов выполнения ПЦР:

  • праймера, структура которого практически идентична определенным участкам РНК HCV,
  • фермента, обеспечивающего реакцию амплификации.

Сам процесс лабораторного исследования происходит в буферном растворе, в котором содержится фиксированная комбинация катионов и анионов. Таким образом возможно поддержание оптимального для течения ПЦР уровня рН. Набор для проведения ПЦР содержит и протеины, используемые в качестве своего рода «строительного материала» при амплификации.

Структура праймера такова, что он может взаимодействовать только со строго определенным возбудителем. На этом принципе основана специфичность анализа методом ПЦР. Если иммуноферментные серологические исследования зависят от индивидуальных параметров иммунной системы человека, ПЦР направлена исключительно на выявление РНК возбудителя HCV.

Еще одна особенность проведения подобного исследования состоит в том, что расшифровка ПЦР гепатита С возможна как с использованием компьютерных программ (обычно используется, когда необходимо количественно установить содержание вируса в крови) и микроскопических методов. В норме у здорового в плане вирусного поражения печени человека патоген в крови отсутствует. Выявление возбудителя HCV методом ПЦР, будь то качественное либо количественное исследование, однозначно указывает на инфицирование.

При помощи постановки ПЦР можно не только определить виремию, то есть фактический уровень патогена в кровотоке, но и генотип вируса. Все доступные исследования, выполняемые по такой методике, приведены в таблице.

Перечень тестов Краткое описание
Анализ ПЦР на гепатит С качественный Предназначен для подтверждения результатов серологического теста (ИФА). Используемые тест-системы позволяют только выявить РНК патогена без определения его содержания
Анализ ПЦР вирусное содержание возбудителя патологии Чувствительность исследования составляет 5–10 МЕ/мл. Для удобства расшифровки используют универсальный параметр, так как при определении количества копий могут возникать различные погрешности. Исследование проводится в обязательном порядке и не может заменить ни качественный тест методом ПЦР, ни генотипирование
Генотипирование При исследовании определяется последовательность протеинов, что определяет разновидность возбудителя гепатита С. В настоящее время установлено 6 генотипов, и практически каждый требует индивидуального подхода в терапии

При гепатите С проводится все три исследования ПЦР. Алгоритм диагностики состоит в следующем:

  1. Общие клинические исследования («стандартный набор» – кровь, моча, биохимия и печеночные пробы), дополнительно могут назначать ревматоидные тесты и ряд других анализов при подозрении на аутоиммунные процессы;
  2. Серологическое исследование (ИФА) на выявление антител к возбудителю гепатита С. Изначально показан тест Anti-HCV Total.
  3. Качественная ПЦР, предназначена для подтверждения результатов ИФА.
  4. Количественная ПЦР, выполняется при подтвержденном диагнозе HCV-инфекции.
  5. Генотипирование, также проводится при установленном факте заражения.

Если человек желает самостоятельно обследоваться на гепатит С, рекомендуют сдавать ИФА. Дальнейшие обследования проводят в зависимости от полученных результатов. Если ИФА отрицательный и человек не предъявляет никаких жалоб, повторное тестирование проходят через год. Но при наличии симптомов патологии (в том числе и неспецифических, например, сильная слабость, утомляемость, боли в правом подреберье) следует сдать качественную ПЦР.

В целом, техника выполнения ПЦР по большому счету одинакова, как для качественного, так и количественного исследования. Образец биологического материала смешивают с тест-раствором, который содержит специальные соединения. Их роль состоит в стимуляции деления РНК патогена (причем строго специфичного генетического материала возбудителя).

В результате концентрация HCV достигает лабораторно определяемого уровня. На данном этапе возможно проведение качественного анализа. Однако после сложных подсчетов (обычно для этих целей используют компьютерные программы) устанавливают количественный показатель содержания HCV. После этого полученный результат переводят в Международные Единицы и фиксируют в лабораторном бланке.

В некоторых случаях вместо ПЦР используют другие методики – разветвленной ДНК и транскрипционной амплификации. Но из-за сложности выполнения и более низкой чувствительности большинство специалистов предпочитают выявлять количественные нормы гепатита С именно при помощи ПЦР.

Сейчас практически в любой частной лаборатории пациент может пройти обследования без каких-либо бумаг и направлений от терапевта. Количественное определение вируса гепатита С в крови не является исключением. Вопрос в том, когда целесообразна сдача теста?

Гепатологи рекомендуют проведение исследования в таких случаях:

  • позитивный ИФА + положительная ПЦР;
  • негативный ИФА + положительная ПЦР.

Кроме того, количественное определение HCV показано и в ходе противовирусной терапии. Врач сравнивает результаты виремии, полученные до начала курса приема медикаментов, с результатами тестирования, проведенного уже во время лечения. Нормой считается негативная ПЦР к 12 неделе применения препаратов. А предиктором 100% выздоровления считают отсутствие виремии уже через месяц терапии.

Тестирование продолжают и после окончания лечения для исключения риска рецидива. Пациент должен сдавать такой тест на протяжении еще 2 лет. При отрицательном результате говорят о выздоровлении. Больного снимают с учета у гепатолога или инфекциониста и дают общие рекомендации относительно восстановления состояния печени.

Если спустя 2 года количественный тест на HCV вновь положителен, все исследования повторяют заново. В таком случае предполагают повторное инфицирование и, возможно, другой генотип вируса. Но требуется новая схема лечения, а вероятность благополучного исхода существенно ниже.

Сроки выполнения количественного определения вирусной нагрузки при подтвержденной HCV-инфекции указаны в таблице.

Особенности течения заболевания и лечения Этапы сдачи количественной анализа
Этап первичной диагностики Виремия перед началом приема противовирусных средств – важный параметр определения лечения и контроля эффективности терапии
4 неделя Анализ делают вне зависимости от схемы лечения и применяемых препаратов
12 неделя Исследование выполняется также в любом случае
24 неделя Тестирование делают в том случае, если курс терапии продолжается 24 недели
48 неделя Выполняют при 48-недельном курсе лечения (как правило, при применении интерферонов) и как контрольный тест после 12-недельной терапии
После завершения курса терапии С интервалом в 24 недели на протяжении 2 лет

Сама методика постановки ПЦР менее чувствительна к особенностям функционирования внутренних органов, иммунной системы. Однако это не исключает соблюдения правил подготовки к проведению теста. В большинстве случаев количественный тест проводится при уже подтвержденном диагнозе гепатита С.

Это подразумевает как минимум отказ от алкоголя и соблюдение строгой диеты (по столу №5 или №5а в зависимости от тяжести состояния больного). Лечащий врач уже ознакомлен с анамнезом, знает, какие лекарственные средства принимает пациент и от каких патологий страдает. Это облегчает расшифровку анализа ПЦР и снижает вероятность постановки ошибочного диагноза.

Но чтобы получить максимально точный результат необходимо:

  • сдавать кровь натощак (после ужина должно пройти не менее 12 часов, завтрак противопоказан);
  • посещать лабораторию следует в первой половине дня;
  • до сдачи крови нельзя есть и пить что-либо кроме воды;
  • нельзя курить за 8–10 часов до исследования.

Перечисленные правила нужно соблюдать перед каждой проверкой на количественное содержащие патогена. Если исследование проводят после лечения и врач разрешил ослабления в диете, за 7–10 дней до проведения тестирования необходимо вновь вернуться к строгому режиму питания. Что касается спиртного, ограничения сохраняются на протяжении всей жизни.

Ранее отечественные специалисты делили виремию на несколько групп: очень низкую, низкую, умеренную, высокую и очень высокую. Но в настоящее время расшифровка анализа крови на гепатит С проводится в соответствии с международными нормами. Сейчас виремию делят только на 2 группы. В таблице указаны вероятные данные количественного анализа на гепатит С (окончательная расшифровка вне зависимости от показателей должна проводиться врачом).

Результаты анализов Уровень вирусной нагрузки
7,9×105 МЕ/мл и ниже Низкая виремия
7,9×105 МЕ/мл и выше Высокая вирусная нагрузка
HCV не обнаружен Уровень РНК патогена ниже определяемого тест-системой порога (как правило, 5–10 МЕ/мл) либо полностью отсутствует. Виремия отрицательна

Но только специалист может грамотно расшифровать количественное исследование на HCV и отличить показатели нормы от критических, свидетельствующих об отсутствии результата от противовирусной терапии либо о рецидиве инфекции. Все анализы должны быть подшиты в амбулаторную карту, чтобы у доктора была полная информация об активности вирусной инфекции и ответной реакции на прием таргетных медикаментов.

Показатели нормы при расшифровке количественного анализа на гепатит С бывают только тогда, когда результат ПЦР отрицателен, то есть РНК вируса во взятом образце крови отсутствует. В остальных случаях наличие патогена свидетельствует о заражении.

При подтверждении диагноза количественные показатели крови при гепатите С служат основой для оценки степени активности вирусного процесса. Высокая виремия повышает вероятность осложнений и сокращает срок наступления необратимых изменений в печени.

Вирусологическая нагрузка, превышающая 800 000 МЕ/мл служит основанием для проведения ряда инструментальных обследований:

  • эластографии – диагностического метода для определения степени фиброза (разрастания и размеров очагов соединительной ткани);
  • томографии – подробное рентгенологическое исследование, позволяющее исключить либо подтвердить наличие злокачественных или доброкачественных новообразований;
  • биопсии печени, которая дает максимально полную информацию о структурных изменения в органе.

Низкая вирусная нагрузка говорит о медленно развивающейся вирусной инфекции. Такой процесс не исключает прогрессирования поражения печени, но вероятность возникновения тяжелого декомпенсированного цирроза или гепатоцеллюлярной карциномы низка. У такой категории пациентов редко возникают внепеченочные проявления гепатита С (кардиоваскулярные расстройства, аутоиммунные нарушения), что также повышает шансы не только успешной противовирусной терапии, но и быстрого общего восстановления.

При постановке диагноза назначают несколько исследований, таким образом ошибка в проведении тестирования исключается.

Основными маркерами при гепатите С служат:

  1. Положительный результат иммуноферментного анализа. Но ИФА во многом зависит от состояния иммунной системы человека, поэтому на этапе первичной диагностики не исключают ложноположительный либо ложноотрицательный результат.
  2. Коэффициент позитивности при гепатите С выше 1. Рассчитывается по титру антител. Иногда референсные значения могут отличаться в зависимости от используемой тест-системы, но физиологическая норма всегда указывается в бланке с результатами.
  3. Положительный результат качественного теста ПЦР. Обнаружение РНК возбудителя патологии однозначно указывает на инфицирование.
  4. Определяемая виремия методом количественной ПЦР.

Косвенными лабораторными признаками гепатита С служат:

  • повышение уровня печеночных ферментов, билирубина;
  • изменение уровня лимфоцитов, в некоторых случаях, лейкоцитов, ускорение СОЭ.

Но при ответе на вопрос, какие показатели крови указывают на гепатит С, доктора руководствуются результатами ПЦР, так как ИФА может быть непоказательным при наличии определенных заболеваний (ВИЧ, аутоиммунных расстройств). Также неверные результаты вероятны при беременности, приеме некоторых лекарств. Не последнюю роль играет и анамнез.

При гепатите С антитела, как и РНК обнаруживаются при помощи тест-систем не сразу, а спустя как минимум 10–14 дней. ИФА может дать достоверный результат позже – через 4–6 недель после инфицирования. Поэтому если есть серьезные основания предполагать контакт с кровью больного, при негативном результате все анализы имеет смысл повторить через 1–1,5 месяца.

В современных лабораториях тестирование проводят с соблюдением всех норм (в соответствии с требованиями отечественного и зарубежного законодательства), но исключить вероятность ошибок и ложных результатов нельзя.

Если на выполнение ИФА оказывает влияние состояние иммунной системы человека, правильность выполнения ПЦР зависит от:

  • соблюдения стерильности при заборе, транспортировке и работе с образцами крови пациента, чтобы исключить возможный контакт с контаминированными образцами;
  • соблюдения температурного режима и других правил при хранении и перевозке пробирок с кровью;
  • правильности постановки ПЦР (начиная от работы лаборанта и заканчивая функционированием автоматических диагностических систем);
  • качества используемых лабораторных материалов.

Но количественный анализ проводится на основании уже выполненных исследований, которые однозначно указывают на наличие HCV (ИФА и качественная ПЦР). Поэтому при отрицательном результате на фоне подтвержденного диагноза исследование повторяют. Кроме того, обращают внимание, как обозначается гепатит С в анализах.

В некоторых клиниках могут пользоваться устаревшей системой, когда виремия указывается не в международных единицах, а в количестве копий. Иногда путаница возникает с подсчетом нулей в указанных цифрах. Именно поэтому расшифровкой обозначений в бланке результатов должен заниматься врач.

Определение вирусной нагрузки возможно и с использованием других методик, включая серологические. Так, исследование на антиген core считают альтернативой количественной ПЦР.

Но большинство врачей отдают предпочтение ПЦР благодаря:

  • доступности и качеству тест-систем: их производством занимаются ведущие мировые фармацевтические и медикотехнологические корпорации;
  • быстроте и простоте выполнения;
  • высокой чувствительности: современные методики ПЦР позволяют обнаружить РНК патогена в количестве 5 МЕ/мл;
  • универсальности: количественное определение проводится одинаковыми методиками вне зависимости от генотипа HCV;
  • объективности вне зависимости от состояния здоровья пациента (в отличие от ИФА), что позволяет проводить исследования на разных этапах диагностики и лечения;
  • отсутствию влияния на результаты принимаемых лекарств.

Сейчас ПЦР остается основным методом количественного определения виремии. Тест используется повсеместно практически во всех лабораториях и больницах. Но во избежание ошибок, перед сдачей анализа нужно поинтересоваться, по какой технологии будет проводиться исследование, чтобы соотнести результаты дальнейших анализов.

источник

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Проводимое исследование Цели выполнения
Биохимический анализ крови и печеночные пробы Позволяет оценить функциональную активность печени, уровень билирубина, показатели печеночных трансаминаз. Превышение нормы в 2 раза и более указывает на наличие заболевания
Клинические анализы крови, мочи и кала Данные исследования неспецифичны, но по результатам можно установить наличие воспалительного процесса, оценить общее состояние пациента. Обнаружение билирубина в моче, изменение оттенка кала говорит в пользу поражения печени
Иммуноферментный анализ (ИФА) Позволяет определить как наличие вирусной инфекции в организме, так и ее форму (острую или хроническую). Недостатком исследования является вероятность ложных результатов
Полимеразная цепная реакция Дорогостоящий, сложный в проведении, но вместе с тем наиболее точный метод диагностики HCV. Позволяет подтвердить наличие вируса в организме человека, количественно установить уровень копий РНК, определить генотип HCV
Инструментальные обследования печени Необходимо проведение УЗИ органов брюшной полости, установление стадии фиброза, оценка тяжести цирроза, исключение гепатоцеллюлярной карциномы

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

  1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
  2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
  3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

  1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
  2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
  3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

  • вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
  • эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
  • риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
  • риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

  • положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
  • положительный результат качественной ПЦР;
  • контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

  • до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
  • 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
  • последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
  • 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

  • сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
  • процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
  • в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
  • за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
  • если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Значение показателя Уровень вирусной нагрузки
РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы) Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии
1,8×102–7,9×105 МЕ/мл Низкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов
8×102–2,3×107 МЕ/мл Умеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача
2,4×107 МЕ/мл и выше Высокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени)

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

  • самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
  • раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
  • при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

  • позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
  • позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
  • определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

Вирус гепатита С способен размножаться в клетках крови и вызывать лимфопролиферативные болезни. Благодаря множественным мутациям иммунная защита организма ослабевает, возникают генотипы и субтипы вируса.

При правильном и своевременном определении конкретного вида зависит эффективность противовирусной терапии. Опасность инфицирования состоит в том, что болезнь протекает бессимптомно.

Всего в 15 процентах из 100 могут наблюдаться тошнота и рвота, похудением и повышением температуры.

Стандартная норма гепатита С – это размеры от 40 до 60 нм, с большинством липидов, поражение печени в результате острого или хронического течения болезни.

Гепатит С, а именно РНК-вирус семейства Togaviridae, крайне стойкий, передается путем переливания крови или использования нестерильных предметов, неправильная гигиена ванных принадлежностей и др.

Количественный анализ позволяет исследовать кровь и выявить генетическую структуру инфицируемого вируса.

Чтобы гепатит С и его генотипы были определены, проводят количественный анализ. В зависимости от анализатора могут определить три уровня заболеваемости РНК-вирусом.

Исследование на гепатит С будет точнее при изучении таких показателей:

Обратив внимание на результаты этих показателей и общее состояние организма, выводится результат, показывающий степень зараженности, форму, а также количество клеток гепатита С в крови. Это способствует процессу выздоровления и эффективности противовирусной терапии.

Полиразмерная цепная реакция (ПЦР) дает представление о количестве частиц ДНК во взятых у пациента анализах, при этом правильно определит возбудителя инфекции.

При том, что длительное время симптомы вируса могут маскироваться, человек может не ощущать начала течения болезни.

Но при тщательном обследовании в 60–70% случаев выявляется гепатит С, первоочередный анализ, при котором – это ИФА, затем следует ПЦР диагностика.

Анализ проводится в определенные периоды, чтобы определить стадию заболевания и назначить соответствующее лечение. Обойтись без этого, не применяя все эти процедуры, можно, прививаясь от гепатита.

Анализ, включающий ПЦР-диагностику, предоставляет картину болезни, то, насколько активен вирус в разные периоды развития.

Сначала идет качественный анализ, который лишь подтверждает гипотезу насчет инфицирования, а затем количественный, определяющий нагрузку на печень. Идеальным вариантом будет отрицательный результат на гепатит С в генетическом материале пациента.

Качественный и количественный анализ

При обнаружении вируса делают количественный анализ, другими словами, вирусную нагрузку, определяющую концентрацию вируса в крови и тяжесть заболевания.

Вирусная РНК, находящаяся в определенном количестве крови, определяется как норма из расчета 1 мл на 1 сантиметр кубический. После количественного определения вирусной нагрузки можно судить о степени заражения еще неинфицированного окружения. Как только концентрация гепатита С повышается в крови, от окружения нужно изолироваться.

  • Задача определения количества вирусной нагрузки в крови пациента – это выявление степени заражения для окружающих.
  • Анализ на гепатит С
  • позволяет оценить эффективность противовирусной терапии, уровень заразности и количество инфицированных тканей.

Важно не допустить прогрессирования болезни, вовремя принять меры по профилактике, назначить правильное лечение на основе ПЦР-диагностики. Если по результатам уровень вирусной нагрузки менее 400 тысяч МЕ/мл, значит концентрация может быть минимальной, что говорит о возможном полном выздоровлении.

Норма для положительного результата – это отсутствие инфекции.

Ответ положительный означает наличие в биологическом материале инфекции. Анализ позволяет определить точное количество инфицированных клеток. Отрицательный ответ говорит об отсутствии инфекции, которую тщательно искали в организме.

Метод количественного определения на гепатит С является точным и информативным, проводится на оборудовании с высокой чувствительностью. Расшифровка результатов анализа позволяет узнать есть ли инфекция и ее специфику, увидеть наименьшее количество инфицированных клеток на высокочувствительных анализаторах.

  1. Ложноположительные или противоположные результаты анализ редко выдает, чаще это случается при исследованиях иммуноферментного исследования.
  2. Рекомендуем прочитать:

Гепатит С — это одно из самых опасных и трудно диагностируемых вирусных заболеваний. Для определения болезни используют метод ПЦР гепатита С.

Это новая высокотехнологичная методика, что позволяет исследовать генетический материал на существование жизни в мельчайших частицах (молекулах) и наименьших количествах.

Вирус гепатита очень стойкий, он способен долго жить в окружающей среде и отлично приживается в организме человека.

Нынче существует огромное количество самых различных болезней. И не меньшее число методов их определения.

Так как агенты инфекций научились с легкостью приживаться в окружающей среде и эволюционировать, то чтобы их диагностировать, применяются новейшие технологии.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это более быстрый и точный метод, что направлен на поиск возбудителя заболевания, путем существенного повышения части ДНК вируса гепатита в образце. О нем часто пишут: ищет иглу в стогу сена, а потом из игл строит стог.

Выделяют качественный и количественный анализ на гепатит. Чтобы определить, находится ли вирус в организме, и тем, у кого нашли антитела к гепатиту С, проводят качественное тестирование. Расшифровка анализа выдает итог: «положительно»; «отрицательно». Негативное значение означает: либо человек здоров, либо агентов в крови еще недостаточно и их невозможно найти. Поэтому стоит провести повторное исследование через некоторое время.

Положительный результат говорит о существовании инфекции. Это практически всегда точное значение. Ошибочные результаты зависят обычно от человеческого фактора (неправильное хранение или несоблюдение правил проведения методики). Когда норма, итог — отрицательный. Перед проведением тестирования особых правил нет, просто берут кровь с вены.

Ежели нашли, проводят количественный анализ (вирусная нагрузка) — он дает числовые значения: сколько РНК вируса гепатита находится на данное время в установленном объеме исследуемого материала. При активном развитии инфекции ее можно обнаружить на 1−2 неделе у зараженного человека. Обычно исследуют также кровь, потому что агенты в ней свободно циркулируют.

Отличием количественного анализа есть то, что не все его проходят. Качественный — определяет наличие, а количественный — помогает с подтверждением заключения «вирус гепатита», прогнозом протекания болезни и определения хода лечения. Насколько эффективна терапия, смотрят по числу РНК до и во время лечения. Также с его помощью определяют назначение доз препаратов.

Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть:

определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией;качественный ПЦР нашел антитела гепатита С;нахождение острого и хронического гепатита С;существование микст-гепатитов;при планировании лечения;если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии.

Также смотрят, какая вирусная нагрузка при гепатите: низкая — терапия проводится успешно; повышенная — лечение не эффективно и его нужно менять.

На разных фазах заболевания исследование проводят, чтобы дать рецензию пользы лечения и планированию срока его дальнейшего проведения. При хороших ответах на терапию срок ее сокращают. В противном случае, при медлительном уходе вируса, курс лечения продлевают. ПЦР на гепатит делают на 1,4, 12, 24 неделе терапии. Когда показатели не падают по истечении 12 недель, то делают вывод, что терапия не подходит этому организму. Этот анализ используют для установления, насколько активна инфекция и какая вероятность ее передать. Например, при беременности есть риск заразить малыша. После терапии выявляют риск возобновления болезни.

После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена. «Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему. Таблица 1. Расшифровка количественного анализа РНК вируса

Цифровое обозначение числа вируса, МЕ/мл Описание итога
Не обнаружено Норма для здорового человека. Вирус не найден или исход ниже грани чувствительности методики.
До 1.8*10^2 Обнаружено в концентрации ниже линий границы.
До 8*10^5 Обнаружен вирус при хорошем прогнозе болезни и эффективном лечении. Низкая вирусная нагрузка.
Больше 8*10^5 Обнаружено вирус и большая вирусная нагрузка.
Больше 2,4*10^7 Обнаружен вирус в концентрации выше линейного диапазона.

Когда человек здоров, норма есть — «не обнаружено». У заболевших людей нормой будет снижение дозы вируса в результатах на логарифмическую единицу, что проявляется убыванием числа нулей в анализе на один (например, с 1*106 МЕ/мл до 1*105 МЕ/мл). Рамки диапазона концентрации вируса, что определяет амплификатор, находятся в границах 1,8*102 — 2,4*107 МЕ/мл. Трактовка исхода:

низкая концентрация — от 600 МЕ/мл до 3*104 МЕ/мл;средняя — от 3*104 МЕ/мл до 8*105 МЕ/мл;высокая — выше 8*105 МЕ/мл.

Для определения степени поражения печени назначают биопсию.

При изменениях результатов анализов вне нормы, это может свидетельствовать о возвращении болезни и размножении вируса. На получение недостоверного результата могут повлиять отдельные факторы, например, загрязнение образцов; присутствие в крови гепарина и веществ, замедляющих действие компонентов ПЦР; ошибки лабораторий; несоблюдение правил проведения теста.

Также результат в нескольких лабораториях может различаться, возможно, была другая методика проведения исследований. Чтобы узнать, насколько поражена печень и опасность болезни, недостаточно провести количественный ПЦР гепатита. Дополнительно проходят биохимические процедуры и биопсию.

Планируя лечение, проводят генотипирование вируса. В связи с тем, что гепатит С способен изменяться, существует несколько групп. Для разных типов лечение может отличаться. Бывают ситуации, когда присутствует несколько видов, но анализ находит один, тот, что преобладает. Тогда тест пересдают.

Методика ПЦР дает возможность дать заключение и назначить правильное лечение. Плюсы методики:

Быстрота результатов — не требует разграничения и выращивания видов возбудителя. Автоматизация процесса позволяет обрабатывать и изучать материал с получением результата за 4−5 часов.Прямота определения возбудителя — найдя особую часть ДНК, прямо указывает на наличие недуга.

Например, ИФА — находит белки-маркеры (продукты жизнедеятельности бактерий), что не дает точного подтверждения наличия болезни.Специфичность — исследуется вещество, характерное только для конкретного возбудителя, что исключает реакцию на ложные совместно-реагирующие агенты.

Восприимчивость — может обнаружить самое малое количество вируОписание итогаса.Универсальность — основывается на нахождении фрагментов ДНК или РНК конкретных организмов. Это дает возможность провести диагностику для любых агентов из одного биоматериала, если другие методы бессильны.

Выявляет не только явные, но и скрытые инфекции — эффективен для изучения агентов трудно выращиваемых, не выращиваемых, стойких.https://www.youtube.com/watch?v=lBi-d6jAKxQ

Посредством этого исследования провести диагностику могут каждому для удостоверения факта отсутствия болезни. Но для достоверных фактов нужно четко соблюдать инструкции. ПЦР используют в разных отраслях: криминалистике, для установления отцовства, для диагностирования различных вирусов, для выявления аллергии на лекарства, клонировании генов, мутагенезе, секвенирование ДНК.

Анализ ПЦР гепатит С – это исследование, основной целью которого является идентификация генетического материала возбудителя. Анализ выявляет возбудитель заболевания методом использования полимеразной цепной реакции. Данная диагностика отличается высокой степенью точности, специфичностью к выявлению отсутствия или наличия вирусной инфекции.

Чтобы провести ПЦР анализ на определение вируса гепатита С у пациента берётся венозная кровь, которая потенциально содержит в себе РНК (рибонуклеиновая кислота) HCV искомого вируса.

Тест ПЦР на гепатит С подразумевает порядок действий, когда в частицы крови пациента добавляют:

  • праймеры (короткие искусственно-синтезируемые участки необходимо гена);
  • специальный фермент (РНК-полимераза).

После забора биологический материал отправляется на исследования в лабораторию. Одна порция крови нужна для проведения непосредственно ПЦР анализа, вторая – отправляется на исследование по методу ИФА.

Фермент способен за короткое время увеличить численность генетического материала вируса возбудителя. В специальном аппарате проводится несколько циклов тепловых и охлаждающих процессов.

На конечном этапе полученный материал сопоставляется с генами вируса и делается заключение о наличии или отсутствии патологии в организме пациента.

Суть и проведение ПЦР анализа в лаборатории. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.

Существует 3 вида диагностики, дающие возможность определять наличия вируса гепатита С в организме человека:

  • генотипирование;
  • качественный;
  • количественный.

Диагностика гепатита С качественным методом применима для пациентов, у которых в анализе крови определены антитела к вирусу. В случае наличия острой фазы РНК ВГС подобные диагностические мероприятия позволяют определить наличие заболевания за 1-2 недели после инфицирования. В этот период антитела к гепатиту С могут быть ещё не выработаны.

Количественный метод диагностики используется для определения концентрации вируса в образцах крови. Подобный тест на виремию (степень концентрации) даёт возможность точно определить количество единиц вирусной РНК. Конечный результат выражается в соответственном объёме. Если речь идёт о количественном анализе, тогда показатели измеряются в 1 мл (1 куб. см).

Параметр вирусной нагрузки означает уровень инфекционности заболевания, то есть отображает степень «заразности» пациента. На практике это значит, что чем выше концентрация вируса в крови, тем больше шансов у пациента заразить окружающих гепатитом С. Количественный метод исследования также позволяет установить качество и результативность проведённого лечения.

Генотипированием выявляют мутации возбудителя заболевания. Перед назначением лечебного плана определяют генотип вируса: от этого зависит качество и продолжительность терапии. Так, например, при лечении заболевания I-типа эффективность составляет 60%, в случае II, III-типа – около 80%.

Среди основных достоинств проведения процедуры выделяют:

  1. Возможность ранней диагностики. ПЦР анализ способен определить наличие вируса на ранних стадиях заражения.
  2. Низкая погрешность результатов. Исследуемый биологический ресурс позволяет диагностировать участок генетического материала, который является характерным только для одного типа вирусной инфекции. Это обстоятельство позволяет не допустить ложных результатов диагностики.
  3. Высокая степень чувствительности. Анализ ПЦР способен выявлять РНК вируса в небольших количествах, что также дает возможность вовремя отследить скрытые инфекции.

Сдавать анализ ПЦР на гепатит C нужно, если есть:

  • наличие контактов с больными людьми, которое могло бы привести к заражению;
  • симптомы заболевания цирроза печени (увеличение селезенки, нехарактерные изменения размеров печени, обнаружение на животе венозного сплетения под кожей);
  • положительные результаты ИФА;
  • увеличение активности АСТ и АЛТ (проявляется в биохимическом анализе крови);
  • необходимость контроля ведения антивирусной терапии;
  • проведение начального этапа лечения для необходимости установления вирусной нагрузки;
  • проведение завершающего этапа терапии для исключения возможных рецидивов;
  • наличие у пациента гепатита В, чтобы исключить вариант развития смешанного поражения печени.

Подготовка к ПЦР анализу включает следующие рекомендации:

  • забор крови проводится утром;
  • анализ проводится натощак, поэтому желательно выдержать перерыв между последним приёмом пищи 8-10 часов;
  • за несколько дней до проведения диагностики следует исключить жирную, острую и жареную пищу, алкогольные напитки и курение;
  • за сутки до анализа следует воздержаться от тяжёлых физических нагрузок, исключить занятия в спортзале или бассейне.

Сам анализ делается недолго, а расшифровывает результаты ПЦР на гепатит С высококвалифицированный специалист гепатолог или инфекционист. На основании результатов анализа пациенту выставляется диагноз.

Чтобы правильно расшифровать результаты обследования, учитывают показатели:

  • биохимического анализа крови;
  • данные ультразвукового исследования;
  • результаты биопсии.

При получении результатов количественного анализа ПЦР учитываются следующие показатели:

Показатель Характеристика
Не обнаружено Норма здорового человека.Данный показатель обозначает, что в организме человека не присутствует генетический материал вируса или его концентрация ниже порога чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/мл Значение подобных результатов изучается с повышенной осторожностью, так как необходимо соотношение информации с другими видами диагностирования. Такой результат требует повторного проведения процедуры, ввиду того, что концентрация РНК возбудителя ниже порога количественного определения.
До 8*10^5 МЕ/мл Вирусная нагрузка данного параметра считается низкой. Снижение концентрации вируса говорит о том, что лечебные мероприятия проводятся эффективно.
Больше 8*10^5 МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка, следует пересмотреть подход к лечению.
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл В этом случае концентрация РНК возбудителя достигает запредельных отметок, поэтому делать выводы об уровне вирусной нагрузке нет смысла. Чаще всего при таком результате назначается повторный тест с разведение частиц крови.

В заключении качественного анализа ПЦР на гепатит С могут присутствовать следующие данные:

Показатель Характеристика
Обнаружено Если зафиксирован положительный ответ, это значит, что в исследуемом образце крови присутствует генетический материал вируса. Простыми словами – подтверждается факт заражения человека.
Не обнаружено Если в конечном итоге выходит отрицательный ответ, значит, заражение не произошло или количество РНК вируса недостаточно для определения чувствительности.

При получении анализов на генотипирование вируса можно обнаружить следующие варианты показателей:

Показатель Характеристика
Обнаружена РНК конкретного генотипа Данный результат показывает то, что в биологическом материале пациента найден вирус гепатита С конкретного генотипа и субтипа. Обозначается каждый генотип цифрой и латинской буквой.
Обнаружена РНК вируса гепатита С При подобных результатах назначается повторное исследование, так как данный параметр обозначает наличие вируса гепатита, который не относится к 1,2,3 типу. Подобные случаи считаются редкими в России.
Не обнаружено Данный результат считается нормой и свидетельствует о том, что человек здоров или концентрация вируса ниже порога определения.

Ложно положительные и ложноотрицательные результаты ПЦР исследования получаются в таких случаях:

  • при недостаточной квалификации медицинского персонала, которые проводят диагностику;
  • ошибки в работе лаборантов, когда кровь транспортируется в лабораторию ненадлежащим способом или биоматериал загрязнён;
  • случаи ненамеренной подмены проб крови;
  • нарушения в процессе подготовки биологического материала;
  • воздействие на исследуемые образцы повышенной температурой.

Среди других причин получения неточных результатов выделяют такие:

  • кровь пациента содержит остаточные частицы гепарина и прочих коагулянтов;
  • в образце присутствуют вещества-ингибиторы, способствующие замедлению или остановке полимеразной цепной реакции.

Подобные исследования проводятся:

  • в частных медицинских центрах;
  • в КДВ;
  • в государственных поликлиниках.

Государственные поликлинники проводят анализ ПЦР на гепатит С бесплатно на основаниях наличия у пациента направления от гепатолога или инфекциониста.

Диагностика заболевания на платной основе проводится во всех крупных городах России.

Стоимость диагностики зависит от:

  • качества оборудования клиники;
  • скорость выполнения работы;
  • типа теста.

Цена на изучение крови методом ПЦР колеблется в следующих пределах:

  • качественный ПЦР анализ — 600-900 рублей (в Москве и Санкт-Петербурге);
  • качественный ПЦР анализ — 300-800 рублей (регионы);
  • определение вирусной нагрузки — 17000-22000;
  • определение других видов инфекции количественного анализа 1200-10000 рублей.

Суть исследования Диагностика гепатита С Загрузка …

Ошибочные анализы на гепатит С. Снято каналом Гепатит С побежден.

Когда необходимо определить наличие вируса гепатита С в организме, следует провести анализ РНК, расшифровка которого и даст нужную информацию.

С помощью этого анализа можно выяснить, есть ли у пациента следы заболевания, а также определить, как далеко оно зашло, о каком именно типе патологии идет речь.

После выяснения этой информации можно назначать терапию наиболее подходящего вида.

Когда необходимо определить наличие вируса гепатита С в организме, следует провести анализ РНК, расшифровка которого и даст нужную информацию

РНК вируса гепатита С представляет собой генетическую структуру заболевания, которое поражает, в первую очередь, печень. Процесс заражения происходит, как правило, через кровь, поэтому наиболее часто заражение этим заболеванием происходит во время операций, проведенных плохо стерилизованными инструментами, или при переливаниях, если не были проведены все необходимые анализы.

Выясняя, что такое РНК гепатита и как можно заразиться этим заболеванием, нужно также отметить, что опасны все биологические жидкости. Поэтому при плотном контакте с больным нужно соблюдать большую осторожность.

Случаются и ситуации, когда анализ выявляет следы такой патологии у новорождённых детей, если их матери страдали этим заболеванием.

Для печени опасность вируса зависит от того, какой формой патологии страдает пациент.

  1. Острая форма. Характеризуется болями в печени, резкими изменениями цвета кожи на желтоватый, рвотой, повышением температуры, часто приступ начинается после употребления алкогольных напитков или вредной пищи, особенно жирной и острой.
  2. Хроническая форма. На начальном этапе эта форма заболевания никак не проявляется и потому считается гораздо более опасной, чем острая. Именно пациенты, страдающие от хронического гепатита С, чаще всего сталкиваются с раком или циррозом печени.

При этом около 70% людей, столкнувшихся с острой формой болезни, рано или поздно приобретают и хроническую. Это зачастую характеризуется злокачественными изменениями структуры печени.

Основным анализом, определяющим содержание в крови РНК гепатита С, является HCV. Для него берётся кровь из вены, и такой метод называется также ПЦР. Определение методом ПЦР обнаруживает нуклеиновые элементы в крови, принадлежащие С-вирусу.

Существует два вида исследований РНК заболевания:

Определение методом ПЦР обнаруживает нуклеиновые элементы в крови, принадлежащие С-вирусу

  1. Качественное исследование. Позволяет определить, заражен ли пациент вообще инфекцией. Определение РНК этого заболевания почти всегда возможно, если болезнь зашла достаточно далеко. Ошибки могут возникнуть только на самом начальном этапе развития патологии, когда содержание её частиц в крови ещё слишком мало, чтобы быть обнаруженным и определенным.
  2. Количественное HCV-исследование. Это второй этап анализа, когда качественное исследование уже показало, что у пациента возникли проблемы. Количественный анализ позволяет определить, как сильно развилась болезнь.

Кроме того, после количественного проводится генотипическое исследование, с помощью которого можно также выяснить, каким именно видом болезни страдает пациент. В России активно распространены всего три, и схемы лечения различаются.

Когда анализируется РНК, результаты HCV, необходимые для правильного лечения, включают в себя три основных пункта:

  1. Положительный или отрицательный результат дал качественный анализ на гепатит РНК. В этом случае, что значит получение положительного результата: в первую очередь, вероятность заражения для окружающих. При этом положительный HCV может указывать также на недавно перенесённый острый приступ заболевания, при котором в организме ещё остались следы. Однако, если результаты показывают, что не обнаружено следов этой патологии, это почти всегда значит, что пациент здоров. Иногда на начальном этапе болезнь может быть не выявлена. Это происходит из-за того, что тест может демонстрировать результат «РНК гепатита не обнаружено», если его содержание в крови крайне мало.
  2. Количество рибонуклеиновых кислот, когда тест все же дал положительный результат. Он позволяет определить то, насколько сильно успело развиться заболевание.
  3. Конкретный вид заболевания. Если расшифровываются тесты на гепатит, определение его вида — одно из важнейших условий для правильного лечения. Даже существующие в России типы этой болезни требуют разницы в подходе, и терапия в каждом отдельном случае будет выглядеть по-разному. Особенно сложной ситуация станет, если пациент болен каким-либо экзотическим видом. В результатах это часто отмечается прочерком в графе определения типа и требует дополнительного осмотра.

Для получения точных результатов, соответствующих ситуации, необходимо перед началом осмотра и передачи материалов на исследование соблюдать некоторые правила:

  • за трое суток до сдачи отказаться от вредной пищи, алкоголя, приёма лекарств;
  • отказаться от ультразвука, рентгена и прохождения других видов осмотра за две недели до сдачи;
  • сдавать кровь натощак, желательно утром.

Только в этом случае полученные результаты будут достаточно точными для того, чтобы поставить по ним правильный диагноз.

Определение РНК гепатита С с помощью качественного теста требуется в каждом случае, когда в организме пациента есть антитела к этому заболеванию.

Результат может быть представлен только в крайне простой форме: «вирус гепатита С обнаружен» или «не обнаружен»

При этом результат может быть представлен только в крайне простой форме: «вирус гепатита С обнаружен» или «не обнаружен». Если результат положителен, то это означает, что болезнь активно развивается или, как минимум, находится в хронической стадии.

Выявление вируса происходит при помощи теста, который настроен на определённый уровень восприятия частиц. Он способен уловить только РНК болезни в диапазоне от 10 МЕ/мл до 500.

Если его содержание в крови ниже этого уровня, то тест покажет отрицательный результат.

Кроме того, вероятность искажения результатов как в случае качественного, так и в случае количественного тестов увеличивают следующие факторы:

  • плохо взятая для теста кровь (например, в недостаточно очищенной пробирке или с неправильной техникой забора крови);
  • использование средств, содержащих гепарин и другие вещества, способствующих свертываемости крови (они уменьшают эффективность теста);
  • неправильная перевозка материалов до лаборатории.

Важно соблюдать и обычные правила сдачи крови для анализа, перечисленные выше.

Когда анализируется гепатит С и его РНК, и получен положительный ответ на результаты качественного теста, следующим будет проведен количественный ВГС. Его расшифровка указывает на то, какова концентрация заболевания в организме.

Норма при количественном исследовании выглядит следующим образом:

Количество вируса в организме пациента, МЕ/мл
Расшифровка результата
Вирус не обнаружен
Обычное состояние человека, не больного гепатитом, или того, у которого содержание вируса в крови минимально и не может быть определено качественным тестом
Уровень не превышает 1.8*102 Низкий уровень заражения (количество содержания гепатита проходит по минимальной границе) Уровень не превышает 8*105 Уровень заражения все ещё достаточно низок, и допустимо быстрое и эффективное излечение пациента
Уровень превышает 8*105 Уровень заражения высок Уровень превышает 2,4*107 Уровень заражения существенно превышает норму, допускающую лёгкое излечение

Резкие изменения уровня вируса в крови могут указывать на обострение и стремительное развитие заболевания.

После количественного теста проводится генотипический, определяющий, каким именно вирусом болен пациент.

Тест обладает высокой чувствительностью к РНК вируса гепатита С. Он может выявить даже самый минимальный уровень содержания болезни в крови. При этом количественный анализ способен точно описать, сколько генетической информации об этой проблеме содержится в организме.

Тест проводится несколько раз в течение болезни:

  1. Перед началом терапии для правильного определения состояния организма в целом и молекулярной структуры отдельного вида заболевания. Это позволяет назначить правильное лечение.
  2. В ходе терапии, на 4 неделе, а потом и на 24. Изменение уровня болезни в нужном участке молекулы ДНК является сигналом того, насколько правильно построено лечение.
  3. После терапии, когда подводится итог, и лечащему специалисту необходимо убедиться, что все гены пациента больше не содержат следов патологии.

Иногда приходится также повторять тест через три месяца, полгода и год. Избегать этих проверок не следует — это значит подвергать опасности окружающих.

Репликация вируса гепатита C.

Расшифровка анализа РНК вируса гепатита С Ссылка на основную публикацию

Вирус гепатита С — это вирус, который содержит молекулу РНК. Он способен избегать иммунного ответа организма благодаря высоким способностям к мутации. Различают шесть основных генотипов вируса и множество субтипов. В нашем регионе в основном распространены 1, 2 и 3 генотипы.

У 75–80 % болезнь переходит в хроническую форму, что вызывает фиброз печени — состояние, при котором ткани печени заменяются соединительной тканью. Фиброз, в свою очередь, приводит к раку или циррозу. Основной путь передачи заболевания — через кровь.

Если у человека имеются показания к проведению теста на гепатит С, ему проводят два основных теста. Определяют антитела к вирусу, и при их отсутствии считается, что гепатита у него нет.

Если же в крови обнаруживается наличие антител к вирусу гепатита, проводится анализ методом ПЦР.

РНК таким методом определяется в крови уже через 10–12 дней после инфицирования и свидетельствует о том, что вирус активно размножается в организме. В этот период обнаружить вирус другим способом просто невозможно, так как специфических антител он еще не вырабатывает и поражения печени еще незаметны при биохимических анализах и биопсии.

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

  1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
  2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
  3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Actionteaser.ru – тизерная реклама

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

  • для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
  • для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
  • для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

  • гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
  • при микст-гепатитах;
  • если планируется проведение противовирусной терапии;
  • во время и после лечения от гепатита С;
  • при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом:

Числовое значение количества вируса, МЕ/мл
Расшифровка результатов
Не обнаружено Норма для здоровых людей. Значение вируса ниже предела чувствительности метода или он отсутствует вовсе.
До 1.8*10^2 Концентрация ниже линейного диапазона.
До 8*10^5 Вирус в крови обнаружен. Вирусная нагрузка низкая.
Больше 8*10^5 Вирус обнаружен. Вирусная нагрузка высокая.
Больше 2,4*10^7 Вирус обнаружен. Виремия высокая, выше линейного диапазона.

Результаты количественного анализа могут подаваться как в единицах МЕ/мл, так и в копиях на мл. При этом коэффициент перевода обычно отличается для разных лабораторий и методик. Его значения колеблются в пределах от одного до пяти, принято считать, что в среднем 1 МЕ — это 4 копии на мл.

Метод
Коэффициент пересчета, копий на мл в 1 МЕ
Amplicor HCV Monitor v.2.0 (руч.) 0.9
HCV Monitor v2.0 (полуавт.) 2.7
Versant HCV RNA 3.0 5.2
LCx HCV RNA 3.8
SuperQuant 3.4

Анализ применяется для обнаружения активной инфекции в организме. По его результату можно судить о том, какова вероятность передачи вируса. Это важно, например, при беременности, когда речь идет о возможности заражения ребенка от матери больной гепатитом.

Анализ проводится только после обнаружения наличия в крови антител к вирусу. Он необходим, поскольку до 25 % людей, перенесших острую форму гепатита, выздоравливают сами по себе, и у них не обнаруживается вирус при лабораторных исследованиях. Результаты используются для оценки эффективности проведения лечения и до него.

ПЦР диагностика проводится до лечения, чтобы в последующем определить его эффективность. Вероятность благоприятного исхода лечения обратно пропорциональна этому параметру. Чем он выше — тем хуже прогноз.

Во время лечения анализ проводится на 1, 4, 12, 24 неделях. Лечение дает полный вирологический ответ при условии, что вирусная нагрузка таким анализом не определяется.

Если через 12 недель после начала терапии показатель не снижается на две логарифмические единицы,то вероятнее всего эта терапия не поможет в этом конкретном случае.

В анализах падение вирусной нагрузки на логарифмическую единицу выражается в уменьшении количества нулей результата на один. Например, с 1 000 000 МЕ она должна уменьшится до 100 000 МЕ.

После лечения определяется для обнаружения рецидивов. Так, отклонение этого параметра от нормы говорит о том, что количество вируса в организме растет и, таким образом, болезнь возвращается.

Некоторые показатели, могут оказывать влияние на результат. Прежде всего, это возможная ошибка лаборатории, нарушения норм проведения исследования, норм содержания и подготовки образцов, а также:

  • загрязнение образца биоматериала;
  • наличие в крови остаточных следов гепарина;
  • присутствие в крови ингибиторов — субстанций, которые представляют собой химические соединения или белки, которые оказывают влияние на компоненты ПЦР.

Отличаться результаты исследования могут также для разных лабораторий, что обусловливается применением разных реактивов и других причин. Такое явление абсолютно нормально. Поэтому для правильной оценки эффективности лечения стоит проводить анализ в одной и той же лаборатории.

Важные замечания по поводу методики исследования:

  • По уровню вирусной нагрузки нельзя судить о степени поражения печени или тяжести протекания самого гепатита. Для оценки этих показателей, необходимо проводить дополнительные исследования, такие как биохимический анализ крови, биопсия, эластометрия и другие.
  • При планировании и противовирусной терапии, кроме показателя виремии, важно определить генотип вируса.

HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций РНК HCV, определяемых тест-системой: 150-1*10^8 МЕ/мл.

  • Синонимы русские
  • Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.
  • Синонимыанглийские
  • Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.
  • Метод исследования
  • Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
  • Какой биоматериал можно использовать для исследования?
  • Венозную кровь.
  • Как правильно подготовиться к исследованию?
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень.

Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания.

HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой).

У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов.

У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания.

Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения. При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается.

Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса.

Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

Для чего используется исследование?

  • Для подтверждения диагноза “вирусный гепатит С”.
  • Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
  • Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

  • При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
  • При остром и хроническом вирусном гепатите С.
  • При микст-гепатитах.
  • При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружено.

  • Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (50 МЕ/мл).
  • От 150 до 3*10^4 МЕ/мл – РНК вируса гепатита С обнаружена, низкая виремия.
  • От 3*10^4 до 8*10^5 МЕ/мл – РНК вируса гепатита С обнаружена, средняя виремия.
  • Свыше 8*10^5 МЕ/мл – РНК вируса гепатита С обнаружена, высокая виремия.
  • > 1*10^8 МЕ/мл – РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций РНК вируса гепатита С, определяемых тест-системой, составляет 150-1*10^8 МЕ/мл.

Важные замечания

  • Уровень вирусной нагрузки крови не указывает на степень повреждения печени и тяжесть заболевания. Для их оценки необходимо исследовать биохимические показатели и материалы биопсии.
  • При планировании лечения очень важно определить генотип вируса гепатита С.

Также рекомендуется

  • Anti-HCV, антитела, ИФА
  • Аnti-HCV, антитела
  • Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита
  • HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]
  • HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
  • Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
  • Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
  • Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
  • Фосфатаза щелочная общая
  • Альбумин в сыворотке
  • Билирубин общий
  • Холестерол общий
  • Тромбиновое время
  • Фибриноген
  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
  • Лейкоцитарная формула
  • Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
  1. Кто назначает исследование?
  2. Инфекционист, гепатолог.
  3. Литература
  • Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. – К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 600-690.
  • Кишкун А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. – М.:ООО МИА, 2006. – 471-476 с.
  • Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
  • Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.

источник

Читайте также:  2 скрининг норма по анализу