Меню Рубрики

Анализ антитела днк нативной норма

Антитела к двуспиральной ДНК – это разновидность антинуклеарных аутоантител, то есть антител, которые организм вырабатывает против ядерных структур собственных клеток. В большинстве своем антинуклеарные антитела присущи диффузным заболеваниям соединительной ткани. Конкретно антитела класса IgG к нативной ДНК или, как их еще называют, anti-dsDNA IgG, являются специфическим маркером системной красной волчанки (СКВ).

Кто может назначить определение антител к нативной ДНК, где сдают анализ?

Чаще всего этот анализ назначает ревматолог, но направление могут написать терапевт, нефролог, дерматолог. Кровь на антитела сдают в иммунологической лаборатории. Специальной подготовки не требуется. Не рекомендуется только курить за 30 минут перед забором крови на исследование. Анализ берут не ранее чем через 4–6 часов после последнего приема пищи.

Когда назначают анализ на anti-dsDNA IgG?

Анализ используют для первичной диагностики системной красной волчанки. Применяют его для оценки активности заболевания, а также для осуществления контроля эффективности лечения СКВ. В этом случае исследование проводят каждые 4–6 месяцев. Кроме того, исследование выполняют для того, чтобы отличить СКВ от других болезней соединительной ткани.

Заподозрить СКВ можно при появлении у пациента следующих симптомов: кожных высыпаний типичной формы («крылья бабочки») на лице, болей в суставах, лихорадки, поражения почек. Поводом для назначения исследования могут являться изменения в других анализах, например, повышение титра антинуклеарных антител в скрининговом исследовании на наличие системных заболеваний.

Нормальные показатели, интерпретация результатов

В норме в крови здорового человека антител указанного класса содержится не более 20 МЕ/мл, в этом случае результат считается отрицательным. Такой результат говорит об отсутствии СКВ или (при наличии у больного волчаночных симптомов) о лекарственной волчанке.

Показатель выше 25 МЕ/мл является положительным результатом. Многократное превышение нормы свидетельствует о том, что обследуемый болен СКВ. Незначительное повышение уровня антител может отмечаться при синдроме Шагрена, при хроническом вирусном гепатите С или В, при инфекционном мононуклеозе.

При мониторинге лечения СКВ низкий титр антител к нативной ДНК свидетельствует о стойкой ремиссии заболевания и об эффективной схеме терапии.

Клиническое значение показателя, преимущества и недостатки метода

Исследование на антитела класса IgG к двуспиральной ДНК является обязательным в диагностике системной красной волчанке. А сам показатель считается маркером СКВ. Резко положительный результат данного анализа является важнейшим критерием, на основании которого выставляют диагноз.

Метод обладает очень высокой чувствительностью (практически 100 %). Специфичность анализа (более 99 %) позволяет считать его результат основным критерием при дифференциальной диагностике СКВ и других системных заболеваний. У 60 % пациентов с СКВ к моменту постановки диагноза результат этого исследования всегда бывает положительным. Обнаружение этих антител у людей без признаков волчанки не всегда свидетельствует о наличии у них заболевания, но позволяет автоматически отнести их к группе риска.

К особенностям метода относится и тот факт, что концентрация антител к двуспиральной ДНК зависит от степени активности волчаночного процесса. Это позволяет использовать анализ для отслеживания качества проводимого лечения и для коррекции терапии. Своевременное и регулярное назначение этого исследования позволяет не только вовремя диагностировать СКВ, но и держать заболевание под контролем. Недостатков как таковых у этого метода диагностики нет.

Информация размещена на сайте только для ознакомления. Обязательно необходима консультация со специалистом.
Если вы нашли ошибку в тексте, некорректный отзыв или неправильную информацию в описании, то просим вас сообщать об этом администратору сайта.

Отзывы размещенные на данном сайте являются личным мнением лиц их написавших. Не занимайтесь самолечением!

источник

Антитела к двуспиральной ДНК (a-dsDNA) — белковые соединения крови, разрушающие ДНК собственных клеток организма. Они относятся к группе антител, направленных на разрушение ядер своих здоровых клеток — антинуклеарных антител, сопровождающих различные патологии. Характерной особенностью a-dsDNA является то, что их повышенное значение отражает наличие системной красной волчанки.

Системная красная волчанка (СКВ) — одно из самых тяжелых заболеваний, при котором аутоиммунные процессы воздействуют на различные органы, повреждая соединительную ткань всего организма. Современная медицина располагает инструментами для поддержания жизнеспособности пациентов с диагнозом СКВ, но болезнь по-прежнему остаётся неизлечимой.

Одной из отправных точек заболевания служит активизация В-лимфоцитов против собственных клеток организма, которая запускает цепь реакций, последовательно травмирующих ткани органов. Природа этого процесса в большинстве случаев неизвестна, но наиболее вероятными причинами, запускающими аутоиммунный ответ, называют совокупность факторов, включающих:

  • наследственную предрасположенность;
  • воздействие ультрафиолетовых лучей;
  • вирусные инфекции (Эпштейн-Барр, цитомегаловирус, парвовирус);
  • приём медицинских препаратов (Изониазид, Прокаинамид, Гидралазин, Хлорпромазин);
  • гормональные нарушения (выделяют влияние эстрогена);
  • курение и стрессы оказывают провоцирующую роль при наличии иных факторов.

Выявление антител к двуспиральной ДНК проводится на основе высокочувствительного метода лабораторной диагностики — иммуноферментного анализа. Особых требований к подготовке перед изъятием образца крови нет, необходимо воздержаться от курения за 1 час и от принятия пищи за 4 часа до процедуры.

Назначение на проведение анализа выдаётся при подозрении на СКВ и контроле над состоянием пациента с СКВ. Врач может предполагать развитие заболевания при обнаружении косвенных признаков в других диагностических тестах и наличии симптомов у пациента. Признаки патологии могут проявляться не сразу, зачастую на начальных этапах ощущается лишь головная боль и слабость, повышается температура тела. Более специфичные характеристики:

  • Высыпания на кожных покровах начинаются с переносицы, распространяясь на область щёк. Образуется типичная для СКВ форма «бабочки», дальше сыпь может перейти на зону декольте, руки и другие участки тела.
  • Суставная боль, ощущение ломоты в теле. Кожа в области повреждённых суставов обычно покрасневшая и опухшая, температура этих участков выше, чем общая температура тела. У мужчин болевые ощущения могут сосредоточиться в нижней части спины.
  • В ротовой полости образуются язвочки, ногти и волосы становятся ломкими, происходит очаговое выпадение волос. На коже головы появляются плотные бляшки, подобная сыпь может локализоваться на открытых участках тела.
  • Широкий спектр нейропсихиатрических патологий может проявляться двигательными нарушениями, снижением когнитивных функций, спутанностью сознания, тревожными расстройствами и другими явлениями.
  • Обнаружение крови в моче как следствие распространённого симптома СКВ — поражении почечной ткани.
  • Повышенная чувствительность к солнечному свету, выражающаяся в обострении кожных воспалений.
  • Нарушения сердечной ритмичности, болевые ощущения в грудной клетке сопровождают ряд заболеваний сердечно-сосудистой системы, развивающихся при СКВ.

При выявлении СКВ анализ на a-dsDNA является точным маркером, но помимо этого проводится целый комплекс исследований, включающих более 10 видов различных показателей.

На показатели a-dsDNA могут повлиять следующие факторы:

  • Приём лекарственных средств (антиаритмических, антигипертензивных, антибактериальных и др.). При отмене медицинских препаратов уровень антител обычно падает, такую волчанку называют лекарственной.
  • Ряд заболеваний сопровождается незначительным образованием a-dsDNA: синдром Шегрена, первичный холангит, гепатит В и С, болезнь Филатова.
  • Низкие показатели отражаются при достижении стадии ремиссии, как результат оптимально подобранного лечения.
  • Высокие значения в результатах определяются при стадиях обострения СКВ, часто сопровождающиеся развитием патологии почек.

Антитела к нативной ДНК играют ключевую роль в патогенезе СКВ. Процесс разрушения соединительной ткани запускается аутоантителами, атакующими ядерные компоненты клеток. В результате их взаимодействия образуются циркулирующие иммунные комплексы, которые накапливаются в тканях и провоцируют воспалительные реакции.

В-лимфоциты, производящие a-dsDNA, характеризуются нарушением не только своих защитных свойств, но и целым комплексом патологических изменений. Клетки отличаются гиперактивностью, спонтанностью действий, дефектами в восприятии регуляторных сигналов. Но не только В-лимфоциты кардинально меняют свои особенности. При СКВ все элементы иммунной системы приобретают дефекты различного характера.

Макрофаги не корректно выполняют свои функции по очистке крови от погибших клеток, засоряя, таким образом, внутреннюю среду организма, что провоцирует повышенный ответ иммунной системы — ещё большего производства a-dsDNA. Между тем клеточная гибель происходит в ускоренном режиме, характерной особенностью СКВ является повышенный уровень апоптоза.

Нарушение свойств наблюдается у NK-киллеров, Т- хелперов, пептидных информационных молекул, гормонов тимуса, пролиферации стволовых клеток и так далее. Связь между взаимодействием некоторых элементов иммунной системы удалось понять, но большинство механизмов патологических изменений остаются загадкой.

Наличие a-dsDNA при невысоких значениях не означает развитие заболевания, так как антитела могут присутствовать и у здорового человека. При диагностике важна количественная составляющая показателя.

  • Менее 4 Ед/мл — отрицательный результат;
  • От 4 до 10 Ед/мл — сомнительный результат;
  • Более 10 Ед/мл — положительный результат.

При получении положительного результата необходимо исключить факторы, влияющие на показатель (медицинские препараты и ряд заболеваний). Для этого проводятся дополнительные исследования. Если показатели a-dsDNA не относятся к иным факторам, но симптоматика СКВ отсутствует, заболевание не диагностируется. Такой пациент относится к группе риска, ему необходимо будет наблюдаться у ревматолога и периодически обследоваться.

При наличии симптомов и показателях a-dsDNA > 10Ед/мл однозначно ставится диагноз СКВ. На сегодняшний день существует множество препаратов, способствующих достижению глубокой ремиссии. Каждому пациенту необходим индивидуальный подход, так как болезнь отличается высокой вариабельностью своих проявлений. Важной составляющей является не только медицинская, но и психологическая поддержка, которую можно найти в общественных объединениях пациентов, страдающих системной красной волчанкой.

источник

Антитела к ds ДНК (анти-dsDNA) – разновидность антинуклеарных специфических иммуноглобулинов, взаимодействующих с двуспиральными молекулами ДНК. Anti-dsDNA специфичны для системной красной волчанки. Исследование позволяет диагностировать данную патологию, оценивать ее активность, контролировать эффективность лечения. Первично назначается при характерных симптомах, повторно производится с определенной периодичностью не реже 1 раза в полгода. Тест выполняется иммуноферментным методом, уровень АТ определяется в сыворотке венозной крови. В норме результат отрицательный, итоговое значение не превышает 25 МЕ/мл. Сроки выполнения анализа – 1 день.

Антитела к ds ДНК (анти-dsDNA) – разновидность антинуклеарных специфических иммуноглобулинов, взаимодействующих с двуспиральными молекулами ДНК. Anti-dsDNA специфичны для системной красной волчанки. Исследование позволяет диагностировать данную патологию, оценивать ее активность, контролировать эффективность лечения. Первично назначается при характерных симптомах, повторно производится с определенной периодичностью не реже 1 раза в полгода. Тест выполняется иммуноферментным методом, уровень АТ определяется в сыворотке венозной крови. В норме результат отрицательный, итоговое значение не превышает 25 МЕ/мл. Сроки выполнения анализа – 1 день.

Программируемая гибель клеток активизирует иммунную систему – макрофаги переваривают клеточные фрагменты без развития воспаления. При сбое в этом процессе происходит не просто фагоцитоз, а передача информации о структурах погибшей клетки как о чужеродных агентах. Иммунная система запускает производство антител к компонентам ядер, апоптоз приводит к активации системы комплемента, развитию местного воспаления. На фоне активности антител к ds ДНК формируются микроваскулиты, проявляется симптоматика, характерная для системной красной волчанки – поражается кожа, суставы, почки и другие органы. Преимуществом анализа на анти-dsDNA является высокая специфичность (99%) при СКВ, но АТ вырабатываются всего у 50-70% пациентов, поэтому требуется комплексное обследование.

Высокая специфичность исследования сужает круг показаний. Анализ назначается в следующих случаях:

  • Признаки заболевания соединительной ткани. Начальные стадии коллагенозов, стертая клиническая картина, проявляющаяся многосистемностью поражения, требуют проведения дифференциальной диагностики. Тест на anti-dsDNA используется для различения СКВ с системной склеродермией, дерматомиозитом, ревматоидным артритом.
  • Симптомы СКВ. Исследование производится при наличии поражений кожи в виде эритемы-бабочки, высыпаний на лице, предплечьях, груди, суставных болях, признаках пневмонита, перикардита, эпилепсии, гломерулонефрита. Выявление АТ позволяет подтвердить диагноз.
  • Наличие антинуклеарных антител. Положительный результат теста, гомогенное или зернистое свечение ядра при выполнении РНИФ является основанием для назначения исследования. Если клинические признаки системной красной волчанки отсутствуют, делается вывод о высоком риске развития болезни в течение ближайших лет.
  • Диагноз СКВ. Уровень анти-dsDNA отражает активность патологического процесса. Тест выполняется каждые 3-6 месяцев, при тяжелых формах чаще. Итоговые данные используются для составления прогноза, определения стадии болезни, отслеживания эффективности терапии.

Забор крови производится из локтевой вены с утра. Подготовка к процедуре стандартна:

  1. После приема пищи должно пройти не меньше 4 часов. Накануне стоит исключить из рациона жирные блюда. Питьевой режим менять не нужно, чистую негазированную воду разрешено употреблять без ограничений.
  2. За день до процедуры необходимо избегать эмоциональных и физических нагрузок, отказаться от употребления алкогольных напитков.
  3. Физиотерапевтические сеансы, инструментальные диагностические процедуры разрешено проводить после сдачи крови.
  4. Не курить за 30 минут до входа в процедурный кабинет.
  5. Проконсультироваться с лечащим врачом о влиянии принимаемых лекарств на итоговое значение теста.

Кровь забирается методом венепункции, хранится и транспортируется в герметичных пробирках. Перед исследованием она помещается в центрифугу, из полученной плазмы удаляется фибриноген. Сыворотка исследуется иммуноферментным методом. Данные подготавливаются за 1 рабочий день.

Читайте также:  Норма в биохим анализе кальция

Нормальный результат – отрицательный. Референсные значения составляют 0-25 МЕ/мл, одинаковы для детей и взрослых обоих полов. При интерпретации учитываются замечания:

  • Отсутствие anti-dsDNA не служит основанием для исключения СКВ. 30-50% пациентов с данным заболеванием не имеют антител.
  • Нормальный показатель теста в сочетании с повышенным уровнем антинуклеарных антител и признаками волчанки требует исключения лекарственного волчаночного синдрома.
  • При мониторинге СКВ отрицательный результат подтверждает эффективность лечения, достижение ремиссии, низкий риск обострения.

Антитела к ds ДНК ассоциированы с аутоиммунным поражением кожи, суставов, внутренних органов. К причинам повышения итогового показателя теста относятся:

  • Системная красная волчанка. Повышение уровня АТ специфично для данной болезни (99%). Наиболее высокие значения определяются при длительном отсутствии врачебного контроля, обострении, люпус-нефрите.
  • Коллагенозы. Менее чем в 10% случаев анти-dsDNA определяются у пациентов с синдромом Шегрена, смешанным заболеванием соединительной ткани, склеродермией, ревматоидным артритом. Данные теста не учитываются при постановке диагноза и мониторинге состояния пациентов.
  • Инфекции, патологии печени. Редко причиной повышения значения является хронический гепатит В и С, первичный билиарный цирроз, инфекционный мононуклеоз, цитомегаловирусная инфекция.

Снижение показателя исследования при мониторинге СКВ свидетельствует об эффективности лечебных мероприятий, стойкости ремиссии, низком риске развития волчаночного нефрита. В остальных случаях низкие значения не имеют диагностической значимости.

Определение антител к ds ДНК – высокоспецифичный и высокочувствительный метод выявления системной красной волчанки. Данные анализа позволяют проводить дифференциальную диагностику, оценивать течение заболевания и эффективность терапевтических мероприятий, составлять прогноз. Физиологические факторы не влияют на концентрацию АТ, любое отклонение значения от нормы требует интерпретации лечащего врача – ревматолога, нефролога, дерматовенеролога.

источник

Anti-dsDNA (антиДНК) или антитела двухцепочечной ДНК относятся к неоднородной группе антител против ДНК двухспиральной, а также являются лабораторными маркерами СКВ (системная красная волчанка).

Аутоантителами против ДНК, которые расположены внутри ядра, называют антитела к двуспиральной ДНК. Точной причины их появления в крови установлено не было.

Иммунной системой человека производятся антитела, так называемые специальные белки, борющиеся с различными паразитами, вирусами, грибками, бактериями, то есть с инородными элементами на генетическом уровне. В задачу любых антител входит уничтожать инородный материал и не трогать клетки родные, что называется механизмом аутотолерантности.

Бывают случаи, когда ответ иммунной системы направляется против собственных тканей и клеток, а не инородных. Тогда имеет место развитие аутоиммунной болезни, а антитела, вырабатываемые против своих же клеток и их компонентов, специалисты называют аутоиммунными.

Если случается серьезная «поломка» иммунитета, повышается уровень аутоантител, чего становится вполне достаточно для постановки пациенту диагноза.

Антитела к двуспиральной ДНК – это не одно антитело, а целый их комплекс, мишенью которого является ДНК ядра клетки.

Анализ на антитела является высокочувствительным при диагностике СКВ, то есть, при положительном результате можно говорить о подтверждении диагноза. В 70-80% случаев больные выявляются именно этим анализом. Однако в связи с недостаточной чувствительностью исследования требуется большая осторожность при чтении результатов анализа, поскольку, если результат отрицателен, то далеко не факт, что у пациента нет СКВ.

Данные анализы чаще всего назначаются ревматологом. Но может быть выписано направление и терапевтом, и нефрологом, и дерматологом. Все будет зависеть от того, к какому специалисту обратился пациент изначально. Иммунологическая лаборатория — это то место, где проводят исследование на антитела. Специальная подготовка к анализу не нужна.

СКВ является тяжелым аутоиммунным заболеванием, поражающем одновременно несколько систем и органов (системы головного мозга, кожи, почек, суставов, сосудов и сердца). Одновременное присутствие симптомов у всех органов не обязательно. Проявления волчанки достаточно разнообразны: у одного человека будут преобладать кожные симптомы, у другого, например, – почечные.

Антитела к нативной двуспиральной ДНК помогут выявить данное заболевание.

  • Изменения гормонального фона (роды, беременность, менструации), которые вызывают пролактин и эстроген, чем объясняется большая частота, 90%, заболеваний, среди женского населения.
  • Предрасположенность на генетическом уровне, которую подтверждает наличие у родственников пациентов, больных СКВ низкого уровня некоторых антигенов системы HLA и аутоантител.
  • Лекарственные средства – «Метилдопа», «Прокаинамид», «Гидралазин».
  • Вирусная инфекция, запускающая аутоиммунные процессы.
  • Солнечное облучение (ультрафиолетовые лучи приводят клетки кожи к апоптозу, оголяют ДНК, и она становится видима иммунной системе).

Анализ антител к двуспиральной ДНК очень информативен.

Общими признаками проявления можно назвать увеличение лимфоузлов, усталость и слабость, повышение температуры тела, снижение веса, боль в суставах и мышцах.

  • Люпус нефрит или поражение почек (функции почек снижены и присутствует триада лабораторных симптомов).
  • Артралгия и артрит, вызывающие воспаления и болезненные ощущения в суставах запястий, кистей, рентгеновский снимок которых покажет снижение плотности кости вокруг сустава (периартикулярный остеопороз), однако эрозий не будет.
  • Серозит, то есть воспаление серозной оболочки легких и сердца (плеврит, перикардит).
  • Фоточувствительность, вызывающая ухудшение симптомов после пребывания на солнце.
  • Высыпания, в том числе и на лице, бабочкообразная сыпь. Антитела к двуспиральной ДНК будут обнаружены обязательно.
  • Синдром нефритический — 45-65%.
  • Микрогематурия — наличие 80% эритроцитов в осадке мочи.
  • Протеинурия, связана с потерей белка вместе с мочой в объеме больше 0,5 г/с, то есть 100%.
  • Очень редко появление в моче значительного количества лейкоцитов (пиурия), особенно в отсутствие инфекций мочевыводящих путей.
  • На сетчатке образуются ватообразные очаги, также отекает сосочек зрительного нерва.
  • Наличие острого люпус пневмонита, поражения легких, ассоциации кашля и лихорадки с пятнистым альвеолярным инфильтратом.
  • Проявления нейропсихических состояний, начиная от депрессий и заканчивая эпилептиформными пароксизмами, психозами и нарушениями зрения.

    При выявлении у пациента с СКВ антител к двуспиральной ДНК требуется повторный контроль через 1-3-6-12 месяцев. Это зависит от тяжести болезни. У этих пациентов повышается риск развития поражения почек, потому что комплексы антиДНК с комплексами иммунными ведут к повреждению почек.

    • Чтобы спрогнозировать успешность лечения.
    • Когда подозревают наличествующее системное аутоиммунное заболевание.
    • Когда результат ENA антител, исследования антител антинуклеарных положительный.
    • Когда присутствуют симптомы СКВ.
    • Когда подозревают наличие системной болезни, в особенности СКВ.
    • Для дифференциальной диагностики суставного синдрома.
    • Когда положителен результат анализа на антиядерные антитела.
    • Для прогнозирования развития поражения почек.
    • Для контроля протекания СКВ.

    Что с человеком происходит, когда у него повышены антитела к двуспиральной ДНК?

    • Увеличивается температура тела, лимфатические узлы, снижается вес, появляется усталость.
    • При артрите, воспалении сустава, проявляемом отечностью, болью, повышением температуры на этом участке, покраснением кожи и нарушением подвижности.
    • При появлении атипичных психических и неврологических симптомов.
    • При плеврите или перикардите неясного происхождения.
    • При синдроме Рейно, то есть периодическом изменении цвета пальцев кистей и стоп (покраснение, бледность, посинение), нарушением их чувствительности и болями.
    • При заболеваниях почек, имеющих иммунный генез или изменениях результатов анализа мочи (гематурия, протеинурия).
    • При кожных симптомах – утолщении кожи, сыпи, особенно после солнечных ванн.
    • При гемолитической анемии, разрушении эритроцитов при повышении уровня билирубина в моче и крови.
    • При нейтропении, сниженном количестве нейтрофилов в лейкоцитарной формуле.
    • При тромбоцитопении, снижении числа тромбоцитов в крови.

    В норме результат анализа должен быть отрицателен, а концентрация 0-25 МЕ/мл.

    Если результат положителен, можно говорить о: первичном билиарном циррозе; СКВ; инфекционном мононуклеозе; эффективности лечения (СКВ в стадии ремиссии); хроническом гепатите С и В; синдроме Шегрена; смешанном заболевании соединительной ткани.

    ДНК двуспиральная и антитела (IgG и IgM иммуноглобулины) образуют иммунный комплекс. Он и обуславливает определенную симптоматику, характерную для СКВ.

    Если результат отрицателен, говорят о лекарственной волчанке или об отсутствии СКВ.

    • Высокие показатели антиДНК ассоциируются с люпус нефритом, обострением заболевания или отсутствием контроля за болезнью.
    • Низкие показатели антиДНК ассоциируются с эффективностью проводимой терапии и достижением стадии ремиссии заболевания.
    • АнтиДНК является специфическим показателем СКВ, но может наблюдаться также и при других болезнях (аутоиммунных, хроническом гепатите С и В).
    • Если антиДНК отсутствует, это не исключает диагноз СКВ.
    • Обнаружение антиДНК у больного без каких-либо симптомов и прочих критериев этой болезни не трактуют в пользу постановки диагноза СКВ.

    Анализ крови на антитела к двуспиральной ДНК проводится вместе с нижеприведенными исследованиями:

    • бета-2-микроглобулином;
    • общим анализом крови;
    • антицентромерными антителами;
    • общим анализом мочи;
    • антигистоновыми антителами;

    Кроме того, антиДНК появляется в крови в связи со следующими причинами:

    • миеломной болезни;
    • СКВ, критерием диагноза которой является получение положительного результата исследования;
    • правовирусной инфекции;
    • лекарственно инуцированной СКВ;
    • ВИЧ;
    • синдроме Шегрена;

    Поэтому кровь на антитела к двуспиральной ДНК берут довольно часто.

    источник

    Антитела к двухцепочечной ДНК – аутоантитела, направленные против собственной двуспиральной ДНК, наблюдаемые при системной красной волчанке. Исследуются для диагностики, оценки активности и контроля лечения этого заболевания.

    Антитела к двуспиральной ДНК, антитела к нативной ДНК, антиДНК.

    Antibody to ds-DNA, Native double-stranded DNA antibody, Anti-DNA, Double stranded DNA antibody.

    Ед/мл (единица на миллилитр).

    Какой биоматериал можно использовать для исследования?

    Как правильно подготовиться к исследованию?

    Не курить в течение 30 минут до исследования.

    Общая информация об исследовании

    Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA) относятся к группе антинуклеарных антител, то есть аутоантител, направленных организмом против компонентов собственных ядер. В то время как антинуклеарные антитела характерны для многих болезней из группы диффузных заболеваний соединительной ткани, анти-dsDNA считаются специфичными для системной красной волчанки (СКВ). Обнаружение анти-dsDNA является одним из критериев постановки диагноза «СКВ».

    Обнаружить анти-dsDNA можно с помощью иммуноферментного анализа. Высокая чувствительность (около 100 %) этого теста необходима при исследовании образцов с низким количеством антител. Учитывая, что в сыворотке крови больных системными заболеваниями соединительной ткани одновременно могут присутствовать несколько разновидностей аутоантител, а также тот факт, что зачастую дифференциальная диагностика этих заболеваний строится именно на выявлении какого-либо определенного типа антител, при выборе лабораторного теста чрезвычайно важно учитывать высокую специфичность. Специфичность анализа на анти-dsDNA составляет 99,2 %, что делает это исследование незаменимым в дифференциальной диагностике СКВ.

    Анти-dsDNA обнаруживаются у 50-70 % пациентов на момент постановки диагноза «СКВ». Считается, что иммунные комплексы, состоящие из двухцепочечной ДНК и специфических к ней антител (иммуноглобулинов IgG и IgM), участвуют в развитии микроваскулитов и обуславливают характерную симптоматику СКВ в виде поражения кожи, почек, суставов и многих других органов. Анти-dsDNA настолько типичны для СКВ, что позволяют диагностировать это заболевание даже при отрицательном результате скринингового теста на антинуклеарные антитела. Следует, однако, отметить, что отсутствие анти-dsDNA не исключает наличия СКВ.

    Обнаружение анти-dsDNA у пациента без клинических признаков и других критериев этого заболевания не трактуется в пользу диагноза «СКВ», но такие пациенты относятся к группе риска развития СКВ в будущем и нуждаются в наблюдении у ревматолога, так как появление анти-dsDNA может предшествовать возникновению заболевания в течение нескольких лет.

    Концентрация анти-dsDNA меняется в зависимости от особенностей течения болезни. Как правило, высокий показатель свидетельствует о высокой активности СКВ, а низкий – о достижении ремиссии заболевания. Поэтому измерение концентрации анти-dsDNA используется для контроля лечения и прогноза заболевания. Нарастание концентрации указывает на недостаточный контроль болезни, на ее прогрессирование, а также на возможность развития люпус-нефрита. Наоборот, стабильно низкая концентрация антител является хорошим прогностическим признаком. Необходимо отметить, что такая зависимость наблюдается не во всех случаях. Уровень анти-dsDNA измеряют регулярно, каждые 3-6 месяцев, в случае легкой степени тяжести СКВ и через более короткие интервалы при отсутствии контроля за болезнью, при подборе терапии, на фоне беременности или послеродового периода.

    Особый клинический синдром представляет лекарственная волчанка. Несмотря на значительное сходство клинической картины этого состояния с СКВ, лекарственная волчанка имеет ряд отличий: провоцируется приемом лекарственных препаратов (прокаинамида, гидралазина, пропилтиоурацила, хлорпромазина, лития и др.) и полностью проходит после их отмены, редко вовлекает внутренние органы и поэтому имеет более благоприятный прогноз, а также реже сочетается с наличием анти-dsDNA. Поэтому при отрицательном результате анализа на анти-dsDNA у пациента с клиническими признаками аутоиммунной волчанки и наличием антинуклеарного фактора следует исключать лекарственную волчанку.

    Несмотря на то что высокий показатель анти-dsDNA характерен для СКВ, их низкая концентрация также обнаруживается в крови пациентов и с некоторыми другими диффузными заболеваниями соединительной ткани (синдромом Шегрена, смешанным заболеванием соединительной ткани). Кроме того, тест может быть положительным у пациентов с хроническим гепатитом В и С, первичным билиарным циррозом и инфекционным мононуклеозом.

    Спектр аутоантител при СКВ также включает другие антинуклеарные (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B), антиплазматические и антифосфолипидные антитела. Обнаружение их в сыворотке крови пациента с клиническими признаками СКВ наряду с анти-dsDNA также помогает в постановке диагноза. Кроме того, определение концентрации анти-dsDNA должно быть дополнено некоторыми общеклиническими анализами.

    Для чего используется исследование?

    • Для диагностики, оценки активности и контроля лечения системной красной волчанки;
    • для дифференциальной диагностики диффузных заболеваний соединительной ткани.

    Когда назначается исследование?

    • При симптомах системной красной волчанки: лихорадке, поражении кожи (эритема-бабочка или красные высыпания на лице, предплечьях, груди), артралгии/артрите, пневмоните, перикардите, эпилепсии, поражении почек;
    • при выявлении в сыворотке антинуклеарных антител, особенно если получен гомогенный или зернистый (крапчатый) тип иммунофлуоресцентного свечения ядра;
    • регулярно, каждые 3-6 месяцев, при легкой степени тяжести СКВ или чаще при отсутствии контроля за болезнью.
    • системная красная волчанка;
    • эффективная терапия, ремиссия системной красной волчанки;
    • синдром Шегрена;
    • смешанное заболевание соединительной ткани;
    • хронический гепатит В и С;
    • первичный билиарный цирроз;
    • инфекционный мононуклеоз.
    • отсутствие системной красной волчанки;
    • лекарственная волчанка.

    Что может влиять на результат?

    • Эффективная терапия и достижение ремиссии заболевания ассоциированы с низкими показателями анти-dsDNA;
    • отсутствие контроля за болезнью, обострение заболевания, люпус-нефрит ассоциированы с высокими показателями анти-dsDNA.

    

    • Отсутствие анти-dsDNA не исключает диагноза «СКВ».
    • Обнаружение анти-dsDNA у пациента без клинических признаков и других критериев этого заболевания не трактуется в пользу диагноза «СКВ».
    • Анти-dsDNA являются специфическим маркером СКВ, но могут наблюдаться при некоторых других заболеваниях (хронический гепатит В и С, аутоиммунные заболевания).

    Кто назначает исследование?

    Ревматолог, дерматовенеролог, нефролог, врач общей практики.

    источник

    Антитела — различного рода иммуноглобулины, состоящие из гликопротеинов, в биологическом отношении представляют собой рецепторы, располагающиеся на мембране В-лимфоцитов, определяются в межклеточной жидкости и сыворотке крови, образуются в организме при воздействии на него конкретного антигена, проявляя свойство специфичности иммунитета. Определяют и нейтрализуют инородные объекты, запуская соответствующую ветвь иммунного ответа.

    ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) — молекула, которая состоит из последовательной цепи нуклеотидов, отвечает за хранение и передачу генетической информации. Находится в составе хромосом в ядре клетки, а также определяется в некоторых органеллах.

    Аутоиммунные антитела к 2-спиральной (нативной) ДНК — класс аутоантител, формирующийся к собственной двуспиральной ДНК при поражении соединительных тканей организма. Способны проникать в места хранения ДНК и приводить к их разрушению и образованию антинуклеарных антител. Высокие титры ANA в совокупности с комплексом симптомов свидетельствуют о системной красной волчанке (СКВ) , для которой характерно образование LE-клеток — лейкоцитов с мёртвыми поглощёнными частичками ядер других клеток. В связи с чем титр анти-dsDNA (комплекс ДНК с Ig класса G и M, приводящий к образованию микроваскулитов и проявлению клинических симптомов), используется в диагностике, определении степени активности и прогноза, контроле над эффективностью лечения СКВ. Обнаружение анти-dsDNA позволяет поставить диагноз «СКВ» в случае первичного отрицательного ответа скринингового теста на антинуклеарные антитела. Заболевание имеет хроническое течение с периодами обострения и ремиссии и прямолинейной зависимостью от титра антител.

    1. Выявленные симптомы системной красной волчанки:

    • покраснения и высыпания на лице по типу «митральной бабочки», на груди и предплечьях;
    • повышенная температура тела;
    • болевой синдром в суставах;
    • астенический синдром;
    • ломота в мышцах;
    • рецидивирующий стоматит и хейлит;
    • немотивированная потеря веса;
    • нарушение мочеиспускания с признаками почечной недостаточности;
    • судороги.

    2. Случайное обнаружение антинуклеарных антител, особенно при полученном зернистом типе свечения ядра. Первые клинические симптомы могут появиться с опозданием на несколько лет.
    3. Контроль бессимптомного течения заболевания.
    4. Каждый квартал при лёгком течении СКВ, подборе терапии, отсутствии контроля над болезнью, при беременности и в послеродовой период.

    Цель проведения анализа:

    • дифференцировка СКВ от иных системных заболеваний соединительной ткани;
    • неонатальный скрининг у младенцев, рождённых от матерей, страдающих СКВ, для определения степени риска развития патологий.

    Для определения антител к нативной ДНК используют иммуноферментный анализ (ИФА) , основанный на проведении реакции «антиген-антитело» с помощью определённых биохимических реакций. Специфичность метода приближается к 100%, что является важным фактором в исследовании образцов с низким титром антител.

    Материалом для исследования является кровь, взятая из периферической вены.

    Специальной подготовки перед забором не требуется, условия стандартны:

    • анализ сдается натощак;
    • за полчаса исключить курение, физическую нагрузку;
    • максимально возможное исключение приёма любых лекарственных препаратов.

    источник

    При нарушении иммунной регуляции в организме возникают сбои. Ранняя диагностика состояния организма, имеет важное значение, выявляя изменения в крови, следует учитывать разновидность инородных тел и динамику их роста. Они направлены против ДНК, собственное ядро молекулы сдвигается к периферии, и данные исследования ведутся для определения недуга.

    Антитела к нативной ДНК можно обнаружить различными методами степени распространенности, она составляет большой процент. Обнаруживаются у страдающих, пораженных инфекционными заболеваниями. Иногда встречаются, на первый взгляд, у здоровых людей, но отягощенных наследственностью, развиваются часто в молодом возрасте. Поражается ядра клетки, образуется нуклеиновая кислота. После обнаружения изменений структуры молекулы здоровых людей, по истечении пяти лет, как правило, развивается красная волчанка. Происходят изменения на кожном покрове, и нарушается функция почек. Выявление в сыворотке, связано с активностью процесса или может предполагать врачебный прогноз. Положительный результат подтверждается данными обследования.
    Действие лекарственных препаратов является побочным эффектом лекарственно-индуцированной волчанки. Синдромы могут провоцировать лекарства, на фоне приема фенитоина, такие препараты как хинидин, хлорпромазин, гидралазин. Отменяя прием препарата, уровень инородных тел снижается. На протяжении, шести месяцев происходит полное исчезновение из сыворотки.
    При системных сбоях организма, вырабатываются антитела, направленные на нативную двухспиральную ДНК. При этом ухудшается иммунитет, страдает работа почек, мозга, воспаляются и повреждаются кровеносные сосуды. Поражение сосудов, непосредственно связано, с непременным присутствием поражения соединительной ткани, ему подвержены пожилые люди, возможно при сенсорных невропатиях.

    Антитела к нативной ДНК можно определить, проведя диагностику СКВ необходимо сделать иммуноферментный анализ, сдают его в один рабочий день. Исследование проводится 2, 5 часа. Подготовка проведения анализа не требуется, забирается на голодный желудок, особенного ограничения в режиме питания не требуется. После венепунктуации набирают кровь в стеклянную пробирку. Анализ проводится с сывороткой венозной крови, которая очищается от пептидов и белков. Проводится твердофазный иммуноферментный анализ.
    Если в сыворотке повышенное содержание посторонних включений, то это указывает на волчаночный нефрит. Положительное исследование, является основанием постановки диагноза СКВ. Важным считается установление постороннего включения, которые говорят о нарушении в работе ДНК. Для подтверждения положительного результата, проводятся дополнительные изучения. Серийное назначение анализов, проводят для оценки лечения. Назначает исследование врач дерматолог, нефролог, дерматовенеролог.

    Нуклеосома образуется соединением нити ДНК с гистоновыми белками, является частью хромосомы. Нуклесом обнаруживается при септических состояниях, онкологических заболеваниях и больных СКВ. При апоптозе эндонуклеозы разрывают ДНК и нуклеосомы попадают в кровеносную систему.

    Положительные результаты анализа присутствуют у большинства больных волчанкой и пациентов страдающих нефритами. Они взаимодействуют с белком циклином, который разрушается после деления клетки. У 3% болеющих красной волчанкой обнаруживаются изменения. Специфичность аутоантител к PCNA для СКВ составляют 99%. У страдающих волчанкой обнаруживается поражение ЦНС и тромбоцитопения.
    Аутоантитела к рибосомальным белкам высокоспецифичны для СКВ. Встречается у пациентов с гепатитом, с нарушением ЦНС, у пациентов с психозами.

    Антитела к рибонуклеопротеинам – подсемейство АНА, они часто встречаются при СКВ.
    При более агрессивном течении болезни волчаночных психозов, поражения ЦНС обнаруживают наличие Sm-антител. Распространенность от 5 до 40%.

    Треть больных с признаками прогрессирующего склероза или полимиозита, встречаются антитела к U1-nRNP. Заболевание носит название синдром Шарпа.
    При СКВ аутоантитела к SS бывают с выраженной симптоматикой кожных проявлений. Такие больные фоточувствительны излучению ультрафиолетовых волн. Для пациентов характерна длительность излечения болезни.
    При диффузной склеродермии встречаются антитела к топоизомеразе. Антицентромерные включения не проявляются у здоровых людей, при обнаружении таких антител развивается синдром Рейно.

    Пациенты с антителами к PM-Scl, требуют особого внимания к работе легких — фиброзе легкого и фиброзном альвеолите. Антимитохондриальные антитела М2 присутствуют у страдающих билиарным цирозом.
    У пациентов страдающих склеродермией, ревматическими заболеваниями присутствуют антитела к Ro-52.
    Учитывая разновидность исследований, история заболеваний строится на основе полученных результатов. Иммунные нарушения влияют на поражения кожи, кровеносной системы, соединительной ткани, почек, суставов и других органов. Фракции волчаночного антикоагулянта могут спровоцировать прогресс геморрагического синдрома. Присутствие инородных тел в крови, меняется с течением болезни. Большое количество свидетельствует о прогрессирующем недуге. Но, такая последовательность происходит не всегда. Повышенный уровень характерен для лекарственной волчанки, заражениях гепатитом В и С.

    На результат активно влияет эффективная терапия, потеря контроля за ходом лечением. Важно подчеркнуть, что обнаружение отрицательного результата, не гарантирует диагностику СКВ. Обнаружение посторонних микрочастиц, без клинических изменений, не является основанием для вынесения диагноза. Необходимо внимательно относится к состоянию здоровья, проводить иммунологическое обследование. Есть много нарушений организма, которые никак не проявляют себя, иногда оказывается, что лечить их поздно. Для поддержания здорового духа и здорового тела, врачи рекомендуют проходить ежегодно медицинские обследования.

    источник

    Антитела к двухцепочечной ДНК – аутоантитела, направленные против собственной двуспиральной ДНК, наблюдаемые при системной красной волчанке. Исследуются для диагностики, оценки активности и контроля лечения этого заболевания.

    Антитела к двуспиральной ДНК, антитела к нативной ДНК, антиДНК.

    Antibody to ds-DNA, Native double-stranded DNA antibody, Anti-DNA, Double stranded DNA antibody.

    Иммуноферментный анализ (ИФА).

    МЕ/мл (международная единица на миллилитр).

    Какой биоматериал можно использовать для исследования?

    Как правильно подготовиться к исследованию?

    Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

    Общая информация об исследовании

    Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA) относятся к группе антинуклеарных антител, то есть аутоантител, направленных организмом против компонентов собственных ядер. В то время как антинуклеарные антитела характерны для многих болезней из группы диффузных заболеваний соединительной ткани, анти-dsDNA считаются специфичными для системной красной волчанки (СКВ). Обнаружение анти-dsDNA является одним из критериев постановки диагноза «СКВ».

    Обнаружить анти-dsDNA можно с помощью иммуноферментного анализа. Высокая чувствительность (около 100 %) этого теста необходима при исследовании образцов с низким количеством антител. Учитывая, что в сыворотке крови больных системными заболеваниями соединительной ткани одновременно могут присутствовать несколько разновидностей аутоантител, а также тот факт, что зачастую дифференциальная диагностика этих заболеваний строится именно на выявлении какого-либо определенного типа антител, при выборе лабораторного теста чрезвычайно важно учитывать высокую специфичность. Специфичность анализа на анти-dsDNA составляет 99,2 %, что делает это исследование незаменимым в дифференциальной диагностике СКВ.

    Анти-dsDNA обнаруживаются у 50-70 % пациентов на момент постановки диагноза «СКВ». Считается, что иммунные комплексы, состоящие из двухцепочечной ДНК и специфических к ней антител (иммуноглобулинов IgG и IgM), участвуют в развитии микроваскулитов и обуславливают характерную симптоматику СКВ в виде поражения кожи, почек, суставов и многих других органов. Анти-dsDNA настолько типичны для СКВ, что позволяют диагностировать это заболевание даже при отрицательном результате скринингового теста на антинуклеарные антитела. Следует, однако, отметить, что отсутствие анти-dsDNA не исключает наличия СКВ.

    Обнаружение анти-dsDNA у пациента без клинических признаков и других критериев этого заболевания не трактуется в пользу диагноза «СКВ», но такие пациенты относятся к группе риска развития СКВ в будущем и нуждаются в наблюдении у ревматолога, так как появление анти-dsDNA может предшествовать возникновению заболевания в течение нескольких лет.

    Концентрация анти-dsDNA меняется в зависимости от особенностей течения болезни. Как правило, высокий показатель свидетельствует о высокой активности СКВ, а низкий – о достижении ремиссии заболевания. Поэтому измерение концентрации анти-dsDNA используется для контроля лечения и прогноза заболевания. Нарастание концентрации указывает на недостаточный контроль болезни, на ее прогрессирование, а также на возможность развития люпус-нефрита. Наоборот, стабильно низкая концентрация антител является хорошим прогностическим признаком. Необходимо отметить, что такая зависимость наблюдается не во всех случаях. Уровень анти-dsDNA измеряют регулярно, каждые 3-6 месяцев, в случае легкой степени тяжести СКВ и через более короткие интервалы при отсутствии контроля за болезнью, при подборе терапии, на фоне беременности или послеродового периода.

    Особый клинический синдром представляет лекарственная волчанка. Несмотря на значительное сходство клинической картины этого состояния с СКВ, лекарственная волчанка имеет ряд отличий: провоцируется приемом лекарственных препаратов (прокаинамида, гидралазина, пропилтиоурацила, хлорпромазина, лития и др.) и полностью проходит после их отмены, редко вовлекает внутренние органы и поэтому имеет более благоприятный прогноз, а также реже сочетается с наличием анти-dsDNA. Поэтому при отрицательном результате анализа на анти-dsDNA у пациента с клиническими признаками аутоиммунной волчанки и наличием антинуклеарного фактора следует исключать лекарственную волчанку.

    Несмотря на то что высокий показатель анти-dsDNA характерен для СКВ, их низкая концентрация также обнаруживается в крови пациентов и с некоторыми другими диффузными заболеваниями соединительной ткани (синдромом Шегрена, смешанным заболеванием соединительной ткани). Кроме того, тест может быть положительным у пациентов с хроническим гепатитом В и С, первичным билиарным циррозом и инфекционным мононуклеозом.

    Спектр аутоантител при СКВ также включает другие антинуклеарные (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B), антиплазматические и антифосфолипидные антитела. Обнаружение их в сыворотке крови пациента с клиническими признаками СКВ наряду с анти-dsDNA также помогает в постановке диагноза. Кроме того, определение концентрации анти-dsDNA должно быть дополнено некоторыми общеклиническими анализами.

    Для чего используется исследование?

    • Для диагностики, оценки активности и контроля лечения системной красной волчанки;
    • для дифференциальной диагностики диффузных заболеваний соединительной ткани.

    Когда назначается исследование?

    • При симптомах системной красной волчанки: лихорадке, поражении кожи (эритема-бабочка или красные высыпания на лице, предплечьях, груди), артралгии/артрите, пневмоните, перикардите, эпилепсии, поражении почек;
    • при выявлении в сыворотке антинуклеарных антител, особенно если получен гомогенный или зернистый (крапчатый) тип иммунофлуоресцентного свечения ядра;
    • регулярно, каждые 3-6 месяцев, при легкой степени тяжести СКВ или чаще при отсутствии контроля за болезнью.
    • системная красная волчанка;
    • эффективная терапия, ремиссия системной красной волчанки;
    • синдром Шегрена;
    • смешанное заболевание соединительной ткани;
    • хронический гепатит В и С;
    • первичный билиарный цирроз;
    • инфекционный мононуклеоз.
    • отсутствие системной красной волчанки;
    • лекарственная волчанка.

    Что может влиять на результат?

    • Эффективная терапия и достижение ремиссии заболевания ассоциированы с низкими показателями анти-dsDNA;
    • отсутствие контроля за болезнью, обострение заболевания, люпус-нефрит ассоциированы с высокими показателями анти-dsDNA.
    • Отсутствие анти-dsDNA не исключает диагноза «СКВ».
    • Обнаружение анти-dsDNA у пациента без клинических признаков и других критериев этого заболевания не трактуется в пользу диагноза «СКВ».
    • Анти-dsDNA являются специфическим маркером СКВ, но могут наблюдаться при некоторых других заболеваниях (хронический гепатит В и С, аутоиммунные заболевания).

    Кто назначает исследование?

    Ревматолог, дерматовенеролог, нефролог, врач общей практики.

    • Guidelines for referral and management of systemic lupus erythematosus in adults. American College of Rheumatology Ad Hoc Committee on Systemic Lupus Erythematosus Guidelines. Arthritis Rheum. 1999 Sep;42(9):1785-96.
    • Fauci et al. Harrison’s Principles of Internal Medicine/A. Fauci, D. Kasper, D. Longo, E. Braunwald, S. Hauser, J. L. Jameson, J. Loscalzo; 17 ed. – The McGraw-Hill Companies, 2008.
    • Nossent HC, Rekvig OP.Is closer linkage between systemic lupus erythematosus and anti-double-stranded DNA antibodiesa desirable and attainable goal? Arthritis Res Ther. 2005;7(2):85-7. Epub 2005 Feb 10. Review.
    • Egner W. The use of laboratory tests in the diagnosis of SLE. J Clin Pathol. 2000 Jun;53(6):424-32. Review.

    Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed

    источник

    Нарушение функциональной активности Т- и В-лимфоцитов отражается в развитии разнообразных форм иммунонедостаточности.

    Системная красная волчанка (СКВ) и ревматоидный артрит (РА) — это хронические аутоиммунные заболевания (АИЗ) с неясной этиологией и обширной картиной иммунопатогенеза, снижают качество и продолжительность жизни населения, поэтому входят в число важных биомедицинских и социальных проблем современности [4; 3].

    Для больных СКВ характерно повышение уровня IgG-АТ к нДНК, которые обладают ДНК-гидролизующей активностью [4; 5] и, вероятно, являются участниками патологического процесса. Но на сегодняшний день среди исследователей нет единого мнения о вкладе АТ к нДНК в развитие и течение АИЗ.

    При РА также наблюдается повышение уровня ДНК-гидролизующих АТ, но клинические признаки отличаются от СКВ [3; 7]. Следовательно, течение патологического процесса может определяться не только уровнем АТ к ДНК, но и их свойствами, различающимися при разнообразных АИЗ.

    Исследования последних лет показали, что некоторые АТ к ДНК проникают внутрь клеток и влияют на внутриклеточные процессы [9].

    Можно высказать предположение, что IgG-АТ к нДНК, взаимодействуя с ДНК клеток и изменяя структуру хроматина, приводят к нарушению апоптоза иммунокомпетентных клеток, следствием чего является увеличение апоптотического материала и времени его циркуляции в кровотоке, что наблюдается при СКВ и усугубляет течение аутоиммунного процесса.

    Целью работы явилось исследование генотоксичности антител класса IgG к нативной ДНК в первичной культуре лимфоцитов здоровых лиц.

    Материалы и методы исследования

    Выделение IgG-АТ к нДНК из сыворотки крови человека

    Все этапы очистки выделения и очистки IgG-АТ к нДНК из сывороток доноров и больных СКВ и РА проводили по ранее разработанной методике [4]. В работе использовали АТ к ДНК сывороток крови лиц женского пола — 20 сывороток здоровых доноров, 7 сывороток больных СКВ и 20 сывороток больных РА в период обострения заболевания, полученные в медицинских учреждениях г. Казани. Диагноз СКВ и РА был поставлен квалифицированными ревматологами ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

    Выделение лимфоцитов из цельной крови здоровых лиц проводили по стандартной методике на фиколл-верографине — плотность 1.077 мг/мл [10].

    Культивирование лимфоцитов в присутствии IgG-АТ к нДНК

    К клеткам (2•10 4 клеток/лунку), разведенным полной средой RPMI-1640 рН 7.4 (Gibco, Scotland), содержащей 10% инактивированной эмбриональной бычьей сыворотки, 2 мМ глутамина («Serva», Germany), 100 ед/мл пенициллина (Россия), 100 мкг/мл стрептомицина (Россия), добавляли очищенные субфракции IgG-АТ к нДНК до конечной концентрации 1 мкг/мл. Каждый опыт повторяли трижды. Клетки инкубировали при 37 ºС, 0.5% СО2 в течение 72 часов.

    Общее количество и количество жизнеспособных лимфоцитов после выделения из цельной крови и инкубации с субфракциями IgG-АТ к нДНК определяли методом исключения трипанового синего.

    Определение уровня повреждения ядерной ДНК клеток после культивирования с субфракциями IgG-АТ к нДНК проводили методом флуоресцентной спектрофотометрии по изменению интенсивности флуоресценции комплекса ЭБ-ДНК хроматина лимфоцитов [2].

    Определение уровня повреждения ядерной ДНК методом гель-электрофореза лизированных единичных клеток — «ДНК-комет»

    Использовали 1%-ный раствор легкоплавкой агарозы («Fermentas», Canada) в ФСБ. На предметное стекло, покрытое полилизином («ApexLab», Россия), наносили 60 мкл агарозного геля с клетками (2•10 4 — 5•10 4 ), равномерно распределяли и оставляли на 30 минут при +20 °С. Лизис клеток (10 мM Tris-HCl pH 10, 2.5 M NaCl, 100 мM EDTA-Na2, 1% Triton X-100, 5% DMSO, +4 °С) проводили в течение 1 часа. Затем стекла переносили в электрофорезный буфер (300 мM NaOH, 1 мM EDTA-Na2, pH>13, +4 °С) и оставляли на 20 минут. Электрофорез проводили 20 минут при 1 В/см и 300 мА. По окончании препараты переносили в раствор для фиксации (70%-ный этиловый спирт) на 15 минут, после чего высушивали при +20 °С (1-2 часа). В качестве положительного контроля для визуализации деградации ДНК использовали клетки, инкубированные в течение 5 минут при -20 °С в присутствии 100 мкМ Н2О2. Препараты окрашивали акридиновым оранжевым (20 мкг/мл) в течение 30 минут и анализировали на флуоресцентном микроскопе (AxioScope A1, «Сarl Zeiss», Germany) с соответствующими фильтрами (возбуждающий фильтр 490 нм, дихроичное зеркало 510, отсекающий фильтр 530 нм), увеличение 40х.

    Статистическая обработка данных

    Из полученных данных изменения жизнеспособности и интенсивности флуоресценции ЭБ-ДНК клеток вычисляли медиану, 97,5 и 2,5 перцентили, используя стандартный пакет программ Excel Office 2003, дополнительно использовали критерий Даннета [1].

    РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

    Повышение уровня ДНК-гидролизующих АТ наблюдается при СКВ и РА, но клиническая картина заболеваний отличается [4; 7]. Предположительно, IgG-АТ к нДНК являются индукторами и участниками воспалительного процесса при АИЗ, но что определяет их патогенетический потенциал и каким образом он реализуется в организме, до конца не выяснено.

    Поэтому для более глубокого понимания роли АТ к нДНК в индукции и течении аутоиммунного синдрома была оценена зависимость генотоксичности IgG-АТ к нДНК от их физико-химических и иммуно-химических свойств.

    Из каждой сыворотки было получено по 4 субфракции свободных от иммунных комплексов IgG-АТ к нДНК, различающихся зарядом (фракции I, характеризующиеся общим положительным зарядом, и фракции II с общим отрицательным зарядом) и аффинностью к нДНК — субфракции а, элюированные с нДНК-целлюлозы буфером, содержащим 1М NaCl, и субфракции б, элюированные с сорбента буфером Gly-HCl с рН 2.3, что позволяет сделать предположение об их большей аффинности к антигену.

    Показано, что в присутствии положительно заряженных IgG-АТ к нДНК доноров снижается общее количество и количество жизнеспособных лимфоцитов по сравнению с контролем (ФСБ) (рис 1). IgG-АТ к нДНК больных СКВ на стадии обострения заболевания оказывают сходное с АТ доноров влияние на лимфоциты здоровых лиц, но их воздействие более выражено, что, вероятно, связано с их высокой ДНК-гидролизующей активностью.

    Отсутствие у доноров клинических признаков заболевания при аналогичном воздействии на клетки IgG-АТ к нДНК доноров и больных СКВ на стадии обострения заболевания объясняется тем, что уровень IgG-АТ к нДНК в крови здоровых людей значительно ниже, чем у больных СКВ. Кроме того, большая часть IgG-АТ к нДНК в крови здоровых лиц находится в составе иммунных комплексов с антиидиотипическими АТ [4] или отрицательно заряженными биополимерами сходной с ДНК конформации.

    В процессе выделения IgG-АТ к нДНК из сывороток происходит разрушение иммунных комплексов АТ-ДНК с образованием свободных АТ к нДНК, а в опытах на лимфоцитах мы использовали равные концентрации всех исследуемых АТ, получив таким образом возможность наблюдать потенциальный негативный эффект на клетки in vitro АТ доноров.

    Рис. 1. Изменение общего количества и количества жизнеспособных лимфоцитов здоровых лиц после 72 часов инкубации при 37 °С в присутствии субфракций IgG-АТ к нДНК:

    Iа — положительно заряженные низкоаффинные IgG-АТ к нДНК;

    IIа — отрицательно заряженные низкоаффинные IgG-АТ к нДНК;

    Iб — положительно заряженные высокоаффинные IgG-АТ к нДНК;

    IIб — отрицательно заряженные высокоаффинные IgG-АТ к нДНК.

    Вероятно, патологические СКВ-АТ к нДНК могут происходить от естественных АТ, выполняющих в организме защитные функции, но вопрос о причинах подобного аномального переключения остается открытым.

    Впервые показано, что спектр цитотоксичных субфракций IgG-АТ к нДНК в сыворотках крови больных РА отличается от нормы и СКВ. Наряду с положительно заряженными низкоаффинными АТ к ДНК, характерными для доноров и больных СКВ, высокоаффинные положительно и отрицательно заряженные субфракции IgG-АТ к нДНК больных РА приводят к заметному снижению пролиферации и количества жизнеспособных лимфоцитов здоровых лиц in vitro.

    Изменение конденсации хроматина лимфоцитов после воздействия субфракций IgG-АТ к нДНК было исследовано методом флуоресцентной спектрофотометрии. Образование разрывов в ДНК приводит к декомпактизации хроматина, увеличению мест связывания ЭБ с нуклеиновой кислотой и усилению флуоресценции комплекса ЭБ-ДНК [2].

    Дополнительно генотоксичность IgG-АТ к нДНК была оценена методом «ДНК-комет». При наличии разрывов в ДНК нарушается структурная организация хроматина и утрачивается сверхспирализация, что приводит к релаксации молекул. В электрическом поле релаксированные петли и фрагменты ДНК вытягиваются по направлению к аноду, что и придает наблюдаемым объектам вид «комет». По длине и структуре «хвоста комет» можно судить о степени деградации ДНК клеток.

    Повышение интенсивности флуоресценции комплекса ЭБ-ДНК в образцах, инкубированных с положительно заряженными IgG-АТ к нДНК (Iа, Iб) доноров, свидетельствует об изменении структуры ДНК хроматина клеток — снятии суперспирализации и возможном образовании разрывов (таблица 1). На типичных микрофотографиях объектов после инкубации клеток с положительно заряженными IgG-АТ к нДНК обнаружено образование «хвостов комет» (рис 2В), что не наблюдается в отрицательном контроле ФСБ (рис. 2А) и является отражением генотоксичности АТ к ДНК. Вероятно, некоторые ДНК-связывающие АТ доноров, проникая в клетки, могут достигать ядра, связываться с ДНК и изменять ее конформацию. Например, показано, что АТ в сайте связывания с ДНК значительно усиливают её разрушение гидроксил-радикалами [8]. Вероятно, АТ к нДНК способствуют окислительному разрушению нДНК, изменяя её структуру, делая доступным для гидроксил-радикалов сайты рестрикции.

    Таблица 1Изменение уровня флуоресценции ЭБ-ДНК хроматина лимфоцитов после 72 часов инкубации при 37 °С с субфракциями IgG-АТ к нДНК

    IgG-АТ к нДНК

    Интенсивность флуоресценции комплекса ЭБ-ДНК, единиц/клетку

    источник