Камеры горяева в анализе мочи

Анализ мочи по Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче. Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи. По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи.

Специальной подготовки для исследования мочи по методу Нечипоренко не требуется.

Для анализа мочи по методу Нечипоренко собирается только средняя порция (в середине мочеиспускания) первой утренней мочи (достаточно 15 – 20 мл). На это обязательно следует указать пациенту. При этом необходимо соблюдать основные правила сбора мочи. Моча сразу же доставляется в лабораторию.

В стационаре для уточнения топической диагностики для исследования мочи по методу Нечипоренко может быть использована моча, полученная при раздельной катетеризации мочеточников.

• мерная центрифужная пробирка,
• пипетка на 10 мл,
• счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера),
• стеклянная палочка,
• микроскоп.

Доставленную мочу хорошо перемешивают, отливают 5 – 10 мл в центрифужную градуированную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3 500 об/мин, отсасывают верхний слой мочи, оставляя 1 мл вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок и заполняют камеру Горяева или любую счетную камеру. Обычным способом во всей сетке камеры подсчитывают число форменных элементов (раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров) в 1 мм 3 осадка мочи (x). Установив эту величину и подставив ее в формулу, получают число форменных элементов в 1 мл мочи:
N = x*(1000/V), где
N – число лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мл мочи,
x – число подсчитанных лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мм 3 (1 мкл) осадка мочи (при подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 – объем камеры, а при подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм 3 ),
V – количество мочи, взятой для исследования (если моча берется катетером из лоханки, то V обычно меньше 10), 1000 – количество осадка (в кубических миллиметрах).

Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи.

Для метода Нечипоренко нормальным считается содержание в 1 мл мочи лейкоцитов до 2000, эритроцитов — до 1000, цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного на камеру Фукса-Розенталя или на 4 камеры Горяева. Цифры одни и те же для взрослых и детей, для лоханочной и пузырной мочи.

• технически прост, удобен, доступен;
• не обременителен для обследуемого и персонала, так как не требует дополнительной подготовки пациента, сбора мочи за строго определенное время;
• для исследования может быть использована средняя порция мочи (что исключает необходимость катетеризации мочевого пузыря) и моча, полученная из почек при раздельной катетеризации мочеточников для уточнения топической диагностики;
• не требует большого количества мочи — определение лейкоцитурии можно проводить в небольшом количестве мочи, полученной из почки;
• по количественным показателям не уступает другим методам;
• легко выполним в динамике;
• является унифицированным методом.

При исследовании мочи по методу Нечипоренко не учитываются суточные колебания выделения форменных элементов с мочой.

Анализ мочи по Нечипоренко позволяет выявить скрытую лейкоцитурию, которая часто наблюдается при хронических, скрытых и вялотекущих формах гломерулонефрита и пиелонефрита и не обнаруживается при ориентировочной микроскопии осадка мочи.

Метод используется для диагностики заболеваний почек. Так, преобладание эритроцитов над лейкоцитами характерно для хронического гломерулонефрита и артериосклероза почек, а преобладание лейкоцитов – для хронического пиелонефрита. Необходимо помнить, что при наличии калькулезного пиелонефрита в осадке могут преобладать эритроциты.

Неоднократное проведение исследования мочи по методу Нечипоренко в процессе лечения позволяет судить об адекватности назначенной терапии и помогает в случае необходимости скорректировать ее.

При диспансерном наблюдении метод Нечипоренко позволяет следить за течением заболевания и своевременно назначать терапию в случае обнаружения отклонений от нормы.

В детской и урологической практике, при диспансеризации широко применяется метод Нечипоренко в модификации Пытель А. Я. Сбор мочи и оборудование те же, что и при обычном методе Нечипоренко, отличие заключается в самом подсчете форменных элементов (подсчет форменных элементов осуществляется в камере Горяева, но не во всей, а только в 100 больших квадратах), в связи с чем нормальное количество лейкоцитов для данного метода отличается от такового при классическом методе Нечипоренко и это следует учитывать врачу при интерпретации полученных данных.

Мочу хорошо перемешивают, наливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин. Удаляют верхний слой, оставляя 1 мл мочи вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок, заполняют камеру Горяева и производят подсчет раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров в 100 больших квадратах (1600 малых квадратов). Учитывая, что объем малого квадрата равен 1/4000 мм 3 . Подсчет форменных элементов в 1 мм 3 производят по следующей формуле:

где:
x – количество форменных элементов в 1 мм3 мочи,
a – количество форменных элементов в 100 больших квадратах,
b – количество малых квадратов, в которых производился подсчет,
c – количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах).

При умножении полученного числа на 1000, узнают количество форменных элементов в 1 мл мочи:

K = (a*4000*1000)/(1600*10) = a*250,

где:
K – количество форменных элементов в 1 мл мочи,
a – количество форменных элементов в 100 больших квадратах.

При получении небольшого количества мочи в случае катетеризации мочеточника число форменных элементов подсчитывают в 1 мл нецентрифугированной мочи, используя ту же формулу, но исключая в знаменателе c. Тогда формула будет иметь следующий вид:

K = (a*4000*1000)/b = (a*4000*1000)/1600=a*2500.

В норме при подсчете форменных элементов в моче по методу Нечипоренко в модификации Пытель в 1 мл мочи содержится лейкоцитов – до 4000, эритроцитов – до 1000, цилиндров – до 20.

• Иванова В. Н., Первушин Ю. В. и соавторы, «Методы исследования мочи и клинико-диагностическое значение показателей состава и свойств мочи» — Методические рекомендации, Ставрополь, 2005 г.
• Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. Москва «Медицина» 1975 г.
• Козловская Л. В., Николаев А. Ю. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования — Москва, Медицина, 1985 г.
• Краевский В. А. Атлас микроскопии осадков мочи. Москва, «Медицина», 1976 г.
• Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике под редакцией Базарновой М. А., Морозовой В. Т. — Киев, «Вища школа», 1988 г.
• Справочник «Лабораторные методы исследования в клинике» под ред. проф. В. В. Меньшикова. Москва, «Медицина», 1987 г

Метод Каковского-Аддиса является унифицированным методом количественного определения форменных элементов в суточном объеме мочи. Этот наиболее трудоемкий и имеющий много недостатков метод все реже применяется на практике в последнее время.

Раздел: Анализ мочи

Метод Амбурже относится к методам количественного определения форменных элементов в моче. При этом определяется количество форменных элементов, выделенных с мочой за 1 минуту.

Раздел: Анализ мочи

Методы количественного определения форменных элементов в моче позволяют определить точное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров, выделенных с мочой.

Раздел: Анализ мочи

Микроскопическое исследование осадка мочи является неотъемлемой частью общеклинического исследования и часто служит основным методом диагностики заболеваний почек и мочевыводящих путей.

Раздел: Анализ мочи

Сбор мочи проводится после тщательного туалета наружных половых органов, чтобы в мочу не попали выделения из них. Лежачих больных предварительно подмывают слабым раствором марганцевокислого калия, затем промежность вытирают сухим стерильным ватным тампоном в направлении от половых органов к заднему проходу. Собирая мочу у лежачих больных, необходимо следить, чтобы сосуд был расположен выше промежности во избежание загрязнения из области анального отверстия. Правильный сбор мочи нужен для получения достоверного результата анализа.

Раздел: Анализ мочи

источник

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

• Подсчет форменных элементов крови
  • Подсчет эритроцитов
  • Подсчет лейкоцитов
  • Подсчет ретикулоцитов
  • И т.п.
• Подсчет форменных элементов мочи
• Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
• Вычисление концентрации спор в вакцине
• Подсчет ооцист в препарате
• И т.п.

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец. Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру. Что конкретно представляет собой сетка? Микроскопическая сетка камеры Горяева расчерчена на большие и маленькие квадраты, сгруппированные различными способами. Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), разграфленных вертикально, горизонтально, крест-накрест и неразграфленных. При этом размеры малых делений клетки сетки составляют 0.05мм, а больших – 0.2мм. Важно, что малый квадрат со стороной 0.05мм во всех сетках является постоянной величиной. Не трудно рассчитать, что площадь малого квадрата равна 0.0025 мм2, а большого квадрата – 0.04мм2 . Тогда получаем, что объем жидкости над квадратом, образованным большими делениями сетки Горяева, составляет 0.004 микролитра.

Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:

где X — количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

1. Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
2. Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a — размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

2. ​ Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

Таблица нормальных значений:

Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:

где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)

источник

Камера Горяева – оптическое устройство для подсчета клеток или иных соизмеримых с ними частиц в заданном объеме жидкости. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н.К. Благодаря увеличенному объему сетки отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами (Тома, Цейса, Тюрка, Бюркера).

Технические характеристики камеры Горяева

Размеры малого квадрата камеры Горяева 0,05×0,05 мм
Размеры большого квадрата камеры Горяева 0,2×0,2 мм
Глубина камеры 0,1 мм
Объем жидкости под 1 малым квадратом 0,00025 мм3 (мкл) = 1/4000 мм3 (мкл)
Объем жидкости под 1 большим квадратом 0,004 мм3 (мкл) = 1/250 мм3 (мкл)
Объем камеры Горяева 0,9 мм3 (мкл)

Описание сетки камеры Горяева

Сетка камеры Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратов.

Рис 1. Сетка камеры Горяева

Рис 2. Большой (1) и малый (2) квадраты сетки камеры Горяева

Рис 3. 225 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 4. 100 больших квадратов сетки камеры Горяева

Рис 5. Большой квадрат камеры Горяева разделенный на 16 малых квадратов.

Обслуживание камеры Горяева

Между работой камера должна храниться в сухом месте. После работы камера дезинфицируется погружением на 30 минут в 70% раствор этилового спирта, или на 60 минут в 4% раствор формалина, после чего камера промывается дистиллированной водой и протирается мягкой салфеткой.

Правило подсчета клеток в квадрате (правило Егорова)

В квадрате считаются клетки, лежащие внутри его, а также касающиеся левой и верхней границ. Клетки, касающиеся правой и нижней границ при подсчете не учитываются.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 20 раз 3–5% раствором уксусной кислоты с метиленовым синим (например, 20 мкл крови и 380 мкл р-ра уксусной к-ты). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать лейкоциты в 100 больших квадратах. Расчет числа лейкоцитов осуществляют, исходя из разведения крови (20) и числа больших квадратов (100), по формуле: X = (a×250×20) / 100, где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови; а – число лейкоцитов, посчитанных в 100 больших квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных лейкоцитов умножают на 50.

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Развести образец исследуемой крови в 200 раз в 0,9% растворе NaCl или растворе Гайема (берется 20 мкл крови и 4 мл раствора). Камеру и покровное стекло насухо протереть марлей. Недопускается использование для протирки ватных тампонов из-за остающихся на стекле волокон. Аккуратно притереть покровное стекло к камере, слегка надавливая на него до появления цветных колец Ньютона. Заполнить камеру разведенной кровью и выдержать 1 минуту для прекращения движения клеток. При малом увеличении (окуляр ×10, объектив ×8) посчитать эритроциты в 5 больших квадратах разделенных на 16 малых (т.е. в 80 малых квадратах). Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали. Расчет числа эритроцитов осуществляют, исходя из разведения крови (200) и числа малых квадратов (80), по формуле: X = (a×4000×200) / 80, где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови; а – число эритроцитов, посчитанных в 80 малых квадратах камеры Горяева. Практически, после сокращений в формуле, количество посчитанных эритроцитов умножают на 10 000.

источник

Камера Горяева представляет из себя простое устройство для визуального подсчета форменных элементов крови под микроскопическим увеличением. Оно сконструировано на основе предметного стекла, имеющего специальные углубления для номинального объема крови, а также покровного стекла с нанесенной сеткой.

Различают несколько конструкций камеры Горяева в зависимости от количества камер (углублений для заполнения кровью), чаще всего в лабораториях применяются двухкамерные или четырехкамерные модели. Над каждой из камер находится специальная счетная сетка, нанесенная на покровное стекло методом лазерной гравировки либо при помощи микронапыления краски.

Приспособление сконструировано таким образом, что все имеющиеся камеры имеют равный объем, который указан в технической документации модели, их глубина и размеры секторов покровной сетки также стандартны. Это делает возможным переводить после подсчета форменных элементов их суммарные значения в единицы концентрации заданных клеток в объеме крови.

Покровное стекло имеет гравировку в виде сетки, большие квадраты которой имеют величину стороны в 1 мм. Чаще всего таких квадратов 9 над каждой счетной камерой, они расположены так, что образуют три столбца по три квадрата в каждом. Те большие квадраты, что располагаются по периферии, разделены на 16 квадратов поменьше, длина и ширина которых равны 0,2 мм. Стандартная глубина камеры под этими квадратами позволяет легко подсчитывать количество клеток в единицах объема, он равен для них 0,1 мм 3 или 10 -4 мл.

Большой квадрат, расположенный посередине, имеет дополнительные разделяющие линии, они нанесены так, что делят каждый из 16 средних квадратов еще на 16 самых маленьких. Их сторона равна 0,05 мм.

Подсчет форменных элементов крови ведется под микроскопом с применением соответствующего увеличения, чаще всего используется окуляр х10. Подсчитывают число клеток в тех больших квадратах, что разделены на 16 средних, начинают считать от верхнего левого и двигаются вниз направо, захватывая при подсчете 5 больших квадратов.

Для того, чтобы верно определить количество клеток в заданном объеме крови, необходимо исключить повторный подсчет тех форменных элементов, что располагаются на границах или узлах сетки. Такая ошибка привела бы к увеличению подсчитываемого показателя, для ее устранения было сформулировано правило Егорова. Оно гласит, что к данному квадрату относятся те элементы, что лежат в его пределах, не касаясь нанесенных линий, а также те клетки, что располагаются на верхней и левой сторонах квадрата. Те клетки, что «касаются» нижней или правой стороны, при подсчете учитываться не должны.

Для подсчета лейкоцитов в крови в современных клинических лабораториях чаще всего используются специальные автоматические анализаторы, методика подсчета при помощи камеры Горяева относится к редко применяемым из-за своей трудоемкости и низкой скорости анализа. Для того, чтобы верно определить концентрацию отдельных видов лейкоцитов, требуется врач лабораторной диагностики или фельдшер-лаборант, владеющий навыками работы с микроскопом.

Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью.

После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели.

После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах. Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100). Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови.

Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение. После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов. Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови.

источник

Определение количества форменных элементов в моче

Определение количества форменных элементов в моче выполняется с целью диагностики и дифференциальной диагностики заболеваний почек, мочевого пузыря, мочевыводящих путей,а также для наблюдения за динамикой патологического процесса и оценки эффективности терапии.

Определение количества форменных элементов (лейкоцитов, эритроцитов, цилиндров) в моче – выполняется с использованием нескольких методик в зависимости от поставленной задачи: определить количество форменных элементов, выделяемых с мочой за сутки, скорость выделения клеток (в мин.) или их количество в определенном объеме мочи (в мл).

Лица, отвечающие за получение, доставку и анализ образцов мочи, должны быть осведомлены о биологической опасности, так как все образцы биологического материала считаются потенциально инфицированными.

Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии: приборы, средства измерения, лабораторное оборудование.

-Микроскоп бинокулярный с осветителем.

Для приготовления осадка мочу центрифугируют при относительном центробежном ускорении 400 G в течение 5 мин.

-Счетчик-калькулятор для подсчета лейкоцитарной формулы крови (для подсчета клеток и цилиндров в образце мочи).

Стеклянные (пластиковые) изделия:

Для центрифугирования мочи используются мерные центрифужные пробирки из cтекла или пластика, которые должны иметь коническую форму для концентрирования осадка, градуировку, закрываться крышками для уменьшения опасности разбрызгивания биологического материала. Пробирки должны быть чистыми и маркированными для правильной идентификации пациента.

Клетки в камере для подсчета клеток в моче должны располагаться в один слой.Счетные камеры представляют собой толстое предметное стекло с нанесенными на них поперечными желобками, которые разделяют три поперечно расположенных плоских площадки. Средняя площадка расположена ниже боковых на 0,1 мм в камере Горяева или 0,2 мм в камере Фукса-Розенталя и разделена поперечным желобком на две половины, на поверхности которых нанесены две одинаковых сетки. Покровное стекло притирается к боковым площадкам до появления «радужных» колец. Каплю исследуемой жидкости наносят на выступающий конец средней площадки, в силу капиллярности капля подтекает под покровное стекло и покрывает соответствующую сетку.

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделенных на 16 малых. Площадь сетки 9 мм 2 , объем камеры примерно соответствует 0,9 мкл.

Сетка камеры Фукса-Розенталя состоит из 16 больших квадратов, каждый из которых разделен на 16 малых. Площадь сетки – 16 мм 2 , глубина камеры – 0,2 мм, объем камеры – 3,2 мкл.

Подсчет форменных элементов в осадке мочи проводят во всем объеме камеры.

Использование камер позволяет получить стандартную толщину препарата, а наличие сетки, нанесенной на поверхность камеры, дает возможность рассчитать количество форменных элементов в определенном объеме биологического материала.

Счетная камера Горяева используется преимущественно для подсчета форменных элементов в моче, а камера Фукса-Розенталя – для подсчета клеток в ликворе. Однако при необходимости они могут использоваться для подсчета клеток в другом жидком биологическом материале.

Количественные характеристики камер представлены в таблице.

Использование пластиковых слайд-планшетов значительно ускоряет и упрощает процедуру анализа.

Пластиковые слайд-планшеты представляют собой прозрачную пластиковую пластину размером с предметное стекло, покрытую тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Она закреплена так, что образуется 10 камер (карманов).

Преимущества исследования биологических жидкостей в слайд-планшетах:

-Комфортность и удобство при работе

-При работе со слайд-планшетами не используются предметные и покровные стекла

-Исследование осадка мочи в слайд-планшете позволяет одновременно определить количество клеточных элементов в 1 мл мочи (число Нечипоренко) и получить представление о количестве форменных элементов в поле зрения или в препарате.

-быстрое и достаточно точное определение увеличенного количества клеток в ликворе (плеоцитоз).

-Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в ликворе и в осадке мочи требуют для каждого анализа пришлифовывать покровное стекло к камере, что вызывает затруднение в работе и отнимает время. Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в камере слайд-планшета производится под фиксированным покровным стеклом.

Расстояние между основой слайд-планшета и «покровным стеклом» стабильно и равно 0,1 мкм, что позволяет клеточным элементам располагаться однослойно.

Слайд-планшет рассчитан для микроскопии мочи 10 пациентов. Изделия не подлежат мытью, а только дезинфекции и утилизации.

В настоящее время предлагается два вида слайд-планшетов – без сетки и с нанесенной на пластинку каждой камеры слайд-планшета сеткой.

Слайд-планшеты без сетки могут использоваться для микроскопии осадка при проведении общего анализа мочи (без подсчета количества клеток в определенном объеме). Слайд-планшеты с нанесенной на пластинку сеткой могут использоваться как для микроскопии осадка при проведении общего анализа мочи, так и для количественного подсчета форменных элементов.

Заполнение слайд-планшета мочой производится через выемку (паз) в верхней пластинке.

Сетки слайд-планшетов отличаются у разных производителей формой и объемом. Каждая сетка слайд-планшета состоит из малых окружностей или квадратов, которые объединены в секции. Секция – это часть сетки слайд-планшета, содержащая определенное количество окружностей или малых квадратов. Границы секций выделены либо формой сетки, либо дополнительной разделительной линией в пределах сетки слайд-планшета и хорошо различимы при микроскопии.

Камера (слайд-планшет) предназначена для микроскопического исследования осадка мочи и других биологических жидкостей. Представляет собой пластиковый планшет на 10 ячеек. Каждая ячейка снабжена сеткой для подсчета (3х3 мм) и покрыта тонкой прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного стекла. Каждая сетка поделена на 5 квадратов (1х1 мм), которые в свою очередь разделены на 9 маленьких квадратов (0,333х0,333 мм). Изготовлена из полиметилметакрилата (ПММА).

В каждой камере слайд-планшета слева расположены две серии окружностей, по 9 в каждой. Они видны в проходящем свете и на малом увеличении микроскопа. На большом увеличении микроскопа (окуляр х10 и объектив х40) одна окружность занимает все поле зрения.

Каждая окружность имеет диаметр 0,376 мм, объем одной окружности — 0,011 мкл. Объем каждой серии окружностей составляет 0.011х 9 = 0,099 мкл или ? 0,1 мкл. Следовательно, если количество клеточных элементов, подсчитанных в 9 окружностях камеры умножить на 10, то получается содержание клеточных элементов в 1 мкл исследуемой жидкости.

Методики выполнения технологии исследования мочи.

-Определение форменных элементов в 1 мл мочи по методу Нечипоренко.

Подсчет количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) в 1 мл мочи производят с помощью счетной камеры или слайд-планшета.

-Определение количества форменных элементов, выделенных за сутки, по

По методу Каковского-Аддиса проводят подсчет количества форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров), выделенных за сутки, с помощью счетной камеры или слайд-планшетов.

-Определение количества форменных элементов, экскретируемых с мочой за 1 мин, по методу Амбурже.

Проводят определение с помощью слайд-планшета количества форменных элементов, выделенных с мочой за 1 мин.

источник

Анализ мочи по Нечипоренко (нормы см. в конце статьи) относится к количественным методам исследования осадка. Результат показывает, сколько форменных элементов содержится в единице объема мочи. Он назначается с целью диагностики и контроля за лечением заболеваний выделительной системы.

Для обеспечения достоверных результатов методом Нечипоренко необходимо придерживаться правил сбора материала, так как нормы находятся в достаточно узких пределах, а превышение их может быть связано с нарушением методики его получения.

При назначении анализа врач или медсестра должны объяснить пациенту, что нужно делать:

• Перед сбором мочи по методу Нечипоренко нужно провести тщательный туалет наружных половых органов.
• В специальный контейнер собирается средняя порция утренней мочи объемом не менее 10 мл и доставляется в лабораторию.

Это все, что нужно в норме сделать пациенту, чтобы лаборанты смогли обеспечить корректный подсчет форменных элементов.

1. В лаборатории баночки с анализом и направления маркируются.
2. Биологическая жидкость в контейнере, предназначенном для исследования методом Нечипоренко, тщательно перемешивается, для равномерного распределения элементов осадка по всему объему. Затем ее наливают в мерную коническую пробирку до метки 10 мл.
3. Пробирку центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 минут или при 3000 об/мин в течение 3 минут.
4. После центрифугирования надосадочную жидкость, не перемешивая, осторожно сливают (отсасывают пипеткой с длинным носиком), оставляя в пробирке точно 0,5 мл содержимого. В случае, если осадок получился слишком объемным, то оставляют 1 мл, чтобы он весь попал для исследования. При конечных расчетах будет учтено, сколько было оставлено материала в пробирке.
5. Подготавливают специальную счетную камеру Горяева. Она представляет собой толстое стекло с нанесенной сеткой квадратиков. Сверху притирается более тонкое стекло, настолько тщательно, что по бокам от сетки в местах соприкосновения самой камеры и притирочного стекла появляются радужные пятна.
6. Осадок в пробирке тщательно перемешивается (обычно стеклянной палочкой). Затем эту палочку подносят к краю притирочного стекла, и жидкость под действием капиллярных сил затягивается внутрь счетной камеры.
7. Под микроскопом (увеличение в 400 раз) считают по-отдельности количество лейкоцитов и эритроцитов в 100 квадратах сетки.
8. Делаются расчеты. Если объем оставленной мочи составлял 1 мл, то это число умножают на 0,25 (или делят на 4, результат будет тот же). Это будет количество клеток крови в 1 мкл по методу Нечипоренко.

Как уже говорилось, камера Горяева, которая используется для исследования мочи по Нечипоренко, имеет сетку, которая в норме всегда состоит из 225 квадратов, часть которых расчерчена еще на 16 маленьких квадратиков, а 100 остаются чистыми. Если нормально и плотно притереть верхнее стекло, то объем жидкости над сеткой будет составлять ровно 0,9 мкл.

Теперь считаем, Х – это число элементов осадка, обнаруженных в 100 квадратах. Полностью по всей камере не считают, так как это очень долго. Следовательно, чтобы узнать, сколько форменных элементов во всей камере (в 225 квадратах) нужно Х разделить на 100 и умножить на 225, либо просто умножить Х на 225/100=2,25. Но мы знаем, что объем камеры 0,9 мкл. Следовательно, чтобы узнать, сколько лейкоцитов будет в 1 мкл, нужно полученное число разделить на 0,9. Делим 2,25 на 0,9 и получаем 2,5.

Теперь вспомним, что мы оставили только 1 мл осадка, тогда как элементы его изначально распределялись в объеме 10 мл. Следовательно, в 10 мл мочи их было в 10 раз меньше, чем в 1 мл осадка. 2,5 делим на 10 и получаем 0,25. Вот это и есть коэффициент, на который нужно умножить количество наших лейкоцитов, посчитанных в 100 квадратах, чтобы узнать, сколько их в 1 мкл.

То есть, если мы насчитали в 100 квадратах их 8 штук, то умножив 8 на 0,25 получаем результат 2. В одном микролитре мочи находится 2 лейкоцита. Обычно так результаты не выдаются. Указывают количество форменных элементов в 1 мл или в даже в 1 литре. В нашем случае результат был бы записан: 2 000 в 1 мл (умножили на 1000, так как в 1 мл=1000мкл), либо 2х10 6 на литр (2х10 6 /л).

Если осадка было оставлено 0,5 мл, то соответственно коэффициент будет 0,25х2=0,5.

Нормы мочи по Нечипоренко в разных специализированных источниках немного варьируют.

Лейкоциты: меньше 2000 в 1 мл (или 2,0х10 6 /л). В других источниках – менее 4000 в 1 мл (4,0х10 6 /л).

Эритроциты: меньше 1000 в 1 мл (1,0х10 6 /л)

Цилиндры: меньше 20 в 1 мл

В литературе, касающейся анализов в педиатрии, встречаются следующие нормы мочи по Нечипоренко:

Лейкоциты у мальчиков — до 2000 в 1 мл; у девочек — до 4000 в 1 мл.

Эритроциты у мальчиков и у девочек — до 1000 в 1 мл.

Цилиндры в норме отсутствуют.

По современным представлениям количество цилиндров не имеет диагностического значения, они могут обнаруживаться и в норме, и часто врачей их наличие и количество не интересует.

Количественные методы исследования осадка мочи (чаще всего это анализ по Нечипоренко) помогают выявить заболевания, сопровождающиеся лейкоцитурией и эритроцитурией (появление в моче лейкоцитов и эритроцитов больше нормы). Это могут быть скрытые вялотекущие формы пиелонефрита и нефрита. Эффективны они для прослеживания динамики состояния больного и для контроля лечения.

Справочник по клиническим методам исследования под редакцией Кост Е.А., 1975г.

Кильдиярова Р.Р. Лабораторные и функциональные исследования в практике педиатра, Москва, 2012.

Posted on Июль 20, 2017 by olla
Categories: анализ мочи

источник

Камера Горяева — небольшое приспособление, необходимое для подсчета форменных элементов, полученных из биологических жидкостей человека. Оптическое приспособление выглядит, как стекло, внутрь которого помещается небольшое количество исследуемого материала. Оно широко используется для лабораторных методов исследования в медицинских учреждениях. Осуществляют подсчет лейкоцитов в камере Горяева по методике Нечипоренко, Амбурже.

Устройство представлено толстым стеклом, внутри которого имеется углубление. На нем нанесена сетка, видимая только под микроскопом, по которой врач-лаборант подсчитывает клетки. Сверху камеры помещаются предметные стекла таким образом, чтобы исследуемый материал сдавливался с двух сторон.

Камера Горяева производится в 2 вариантах:

• двухсеточная (состоит из 2 камер);
• четырехсеточная (состоит из 4 камер).

Цена приспособления зависит от его качества. Производитель должен отшлифовать стекло, правильно нанести сетку с помощью лазера или вакуумного напыления.

Сетка Горяева состоит из 225 квадратов. Они бывают большими и малыми. Врач перемещает микроскоп над ними слева направо, вниз, затем справа налево, пока все поля не закончатся.

Чтобы приспособление показывало верные результаты, за ним необходимо ухаживать. Камеру необходимо тщательно протирать перед применением. Для этого используют бинт, который смачивают в спирте. Стерилизующая жидкость должна быть качественная, чтобы на поверхности стекла не осталось осадка. Стекло готово к работе, если на нем появились радужные кольца на обеих поверхностях.

Важно! Нельзя использовать для протирания камеры вату, так как она содержит волокна, которые могут остаться на поверхности стекла, что затруднит исследование.

Камера Горяева идёт в стандартной комплектации, с покровными стеклами. Если они отсутствуют или сломались, возможно использование обычных стекол, соответствующих по размеру.

Во время работы с камерой и предметными стеклами врач-лаборант должен надевать перчатки. Это предотвращает попадание отпечатков пальцев, которые будут мешать в работе с микроскопом.

После завершения работы камера должна быть продезинфицирована. Для этого ее погружают целиком в раствор этилового спирта. Время дезинфекции составляет 30 минут. Если используется другой стерилизатор, время удлиняется до 1 часа. После завершения данного этапа устройство обрабатывают водой и протирают насухо.

Для подсчета лейкоцитов с помощью камеры Горяева необходимо подготовить образец крови и само приспособление. Для этого выполняются следующий пункты:

• разведение биологической жидкости раствором уксусной кислоты с метиленовым синим в пропорции 1:20;
• стекло протирают спиртом и сухой марлевой салфеткой до появления специфических колец, при этом важно не повредить поверхность;
• пустое стекло предварительно просматривают под микроскопом, чтобы предотвратить попадание инородных предметов;
• полученную разведенную кровь добавляют на углубление камеры с помощью стеклянной палочки;
• жидкость должна распределится равномерно, для этого выжидают 1-2 минуты после ее нанесения;
• на предметное стекло направляют микроскоп, подсчитывают все лейкоциты;
• полученную цифру вставляют в формулу, которая подсчитывает общее количество лейкоцитов в объёме жидкости.

Внимание! Если в жидкость попал воздух, подсчет лейкоцитов невозможен. Камеру промывают дистиллированной водой, наливают разведенную кровь повторно.

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева с уксусной кислотой уничтожает все эритроциты, а метиленовый синий дает окрашивание белых кровяных телец.

При получении данных пациентами или врачом следует учитывать, что метод не является достаточно точным. Лаборант может ошибиться в подсчете, пропустить некоторые клетки. Более информативные данные получают при подсчете лейкоцитов с помощью полуавтоматических анализаторов, которые в точности измеряют число клеток в 1 мл биологической жидкости.

Подсчет клеток осуществляет, учитывая что кровь разводилась в 20 раз, клетки считались в 100 квадратах. Поэтому используют следующую формулу:

L=(a×250×20)×10 6 /100

• L – обозначение лейкоцитов, которые необходимо рассчитать;
• a – количество подсчитанных лейкоцитов;
• 250 – число, при умножении на которое получается количество клеток на 1 мкл крови, так как объём большого квадрата составляет 1/250 мкл;
• 20 – разведение материала при подсчете лейкоцитов в камере Горяева;
• 100 – число больших квадратов;
• 10 6 – число мкл в 1 квадрате.

Подробно о том, как правильно подсчитать лимфоциты.

По формуле выводится количество лейкоцитов на 1 литр крови. У здорового человека это число составляет 4-9×10 9 /л. Показатели могут варьировать в норме, слега выходя за пределы значений, в зависимости от следующих факторов:

• возраст;
• прием пищи;
• время суток;
• состояние организма.

Если после подсчета формулы, показатель резко возрастает или снижается, исследования проводят повторно. После подтверждения результата бланк анализа передают пациенту или врачу.

Повышение лейкоцитов происходит при:

• инфекционных, вирусных, грибковых заболеваниях (это означает, что организм борется с болезнью);
• злокачественных и доброкачественных новообразованиях, которые приводят к резкому увеличению количества форменных элементов крови.

Снижение количества лейкоцитов появляется при нарушениях иммунной системы. Возможны следующие состояния:

• врожденный или приобретенный иммунодефицит;
• патологические состояния красного костного мозга, приводящие к снижению продукции форменных элементов крови.

С помощью камеры Горяева исследуется осадок урины. Для этого биологическую жидкость оставляют на некоторое время в пробирке. Форменные элементы, другие вещества осаждаются на дно пробирки. С помощью стеклянной палочки берётся небольшое количество мочи с осадком, добавляется в полость камеры.

Дальнейшие подсчеты аналогичны методу исследования крови. Определяется количество клеток в 100 квадратах, полученный результат подставляется в формулу.

Методика подсчета лейкоцитов в моче с помощью камеры Горяева является недостаточно точной, так как возможны следующие нарушения:

• ошибка в подсчете;
• забор недостаточного количества осадка;
• нахождение большего количества лейкоцитов в другой части мочи.

Поэтому при спорных результатах врачи рекомендуют пройти исследование урины с помощью полуавтоматических анализаторов. Но при подсчете лейкоцитов с помощью камеры Горяева возможно обнаружение врачом лаборантом дополнительных образований:

Полуавтоматический анализатор выявляет только заданный параметр.

В норме лейкоциты не должны находиться в урине. Возможно незначительное их количество, которое отличается по полу:

• 3 клеток у мужчин;
• 5 клеток у женщин.

Если количество показателей повышено, это означает, что образовался воспалительный процесс в одном из отделов мочевыделительного пути.

Камера Горяева — устройство, которое используется в медицинских учреждениях. Метод не даёт стопроцентной гарантии полученных результатов. Но врач может с помощью микроскопа найти другие клетки или образования, которые помогут поставить диагноз.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

источник

Камера Горяева – это приспособление для измерения числа клеток и частиц в определённом объёме жидкости (кровь, моча), состоящее из специального толстого предметного и покровного стёкла.

Предметное стекло имеет углубленную площадку посередине, на которую нанесена сетка из 225 больших квадратов. Из этих квадратов 25 равномерно разделены на 16 меньших квадратов. Благодаря такому объёму сетки подсчёт выполняется точнее, нежели в других ручных счётных устройствах.

После использования инструмента предметное стекло дезинфицируют путём погружения в 4% раствор формалина на час или в 70% раствор этилового спирта на полчаса. После этого камеру тщательно промывают дистиллированной водой. Излишек жидкости убирают мягкой салфеткой. Стоит обратить внимание на то, что камеру нельзя протирать ватным тампоном из-за цепляющихся к ней волокон. Хранится стекло в сухом месте.

Во время использования камеры в подсчитываются те ФЭ, которые располагаются внутри квадрата сетки и на верхней и левой линии его периметра. При этом частицы, касающиеся правой и нижней линии периметра во время расчёта данной клетки не включаются.

Подсчёт количества лейкоцитов начинается с разведения крови в 3-5% растворе этановой кислоты с метиловой синью в 20 раз. Рабочий материал перед применением протирают марлей насухо.

Покровное стекло нужно протереть до возникновения цветных колец Ньютона. Далее, камеру заполняют разведённой кровью, при этом первые две капли выпускают на фильтровальную бумагу. Жидкость попадает в камеру благодаря капиллярному свойству воды. Важно проследить, чтобы в желобки при заполнении ничего не затекало. Если это произошло, жидкость аккуратно убирают фильтровальной бумагой. Затем оставляют сетку в покое на минуту, ожидая, пока ФЭ остановят своё движение.

Подсчёт лейкоцитов осуществляется в пределах ста больших квадратов при малом увеличении, то есть при окуляре 10х и объективе 8х, по правилу Егорова. Полученная цифра используется в формуле.

Х = (n × 250 × 20) / 100 или Х = n × 50

n – число, полученное в результате подсчёта в камере.

Количество лейкоцитов определяют, принимая во внимание число больших квадратов сетки – 100 и разведение крови – 20.

Как происходит подсчет лейкоцитов

Норма лейкоцитов у людей составляет 4,0 – 9,0 × 10⁹/л. Или, по-другому, в 1 кубическом мм крови располагается примерно 6000 белых кровяных клеток.

На отклонения от нормы могут влиять внешние физиологические факторы:

• приём пищи перед сдачей крови;
• стресс;
• беременность или менструация у женщин;
• переохлаждение или перегрев;
• большая физическая нагрузка перед сдачей анализов.

Если количество белых кровяных клеток превышает 9,0 × 10⁹/л (повышены лейкоциты), такое состояние называется лейкоцитозом. Подобную картину можно увидеть при злокачественных заболеваниях крови, инфекциях, поражениях радиацией и отравлениях.

Лекарственные препараты тоже способны увеличить количество лейкоцитов. Некроз тканей, обильные кровотечения, в том числе в результате операций, почечная кома, болезни сердца – всё это может привести лейкоцитозу.

Падение количества лейкоцитов ниже 3,9 × 10⁹/л называется лейкопенией. Однако у некоторых людей фиксируется постоянное число лейкоцитов в количестве 3,5 × 10⁹/л. Принято считать, что у таких людей сохраняется резерв этих клеток в тканях в 50 раз больше, нежели в крови. Еще встречается функциональная лейкопения после введения анальгетиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов, после долгой мышечной работы, в результате поражения инфекциями и вирусами (тиф, грипп, корь).

Все виды лейкоцитов составляют лейкоцитарную формулу. По ней можно выявить определённые патологии. Нормы формулы меняются в зависимости от возраста и периода жизни человека. Сдвиг хорошо заметен у женщин во время беременности или после родов.

Применяются разные способы подсчёта соотношения видов этих клеток, но все они связаны с тем, что более тяжелые клетки (базофилы, например) располагаются ближе к краю мазка, а лимфоциты, как легкие клетки, остаются в середине.

• Метод Филипченко. В данном способе подсчёт осуществляется по поперечной прямой границы одного конца к другому. Мазок при этом мысленно разделяют на три части.
• Метод Шиллинга. Лейкоциты подсчитывают в четырех участках мазка.

Полученные данные записываются в таблицу. Индивидуально количество каждого вида белых клеток крови высчитывается по формулам. Отмечаются те элементы, которые попали в поле зрения. Счёт ведётся до того, момента, пока сумма всех подсчитанных клеток не составит 100.

В моче подсчитывается количество лейкоцитов в камере Горяева по Нечипоренко. Этот анализ нужен для мониторинга заболеваний почек. Периодическое исследование мочи помогает проследить за правильностью лечения и эффективностью назначенной терапии.

В изучение идёт только первая утренняя моча в середине мочеиспускания. Для пациента важно следовать основным правилам сбора этого биоматериала. Специальной дополнительной подготовки для исследования не требуется.

10 мл свежесобранной мочи центрифугируют в течение трёх минут при 2,5 тыс. оборотов в минуту. Перед этим необходимо проследить, чтобы моча, во избежание частичного распада клеток, имела слабокислую реакцию.

При помощи пипетки с узким оттянутым концом убирают верхний слой. В пробирке оставляют от 0,5 мл мочи до 1 мл в зависимости от объёма осадка.

Осадок аккуратно перемешивают с надосадочной жидкостью. Полученным раствором заполняют счётную камеру Горяева по схожему принципу, что используется при подсчёте ФЭ крови. Камеру оставляют в покое от 3 до 5 минут.

Лейкоциты необходимо подсчитать в больших квадратах по всей сетке с окуляром 7х и объективом 40х.

Полученная цифра используется в формуле:

Х = (а/0,9) × (1000/V)

Х – число лейкоцитов в 1 мл мочи.

а – подсчитанное количество, делённое на объём камеры в 1 мкл осадка мочи.

v – Количество мочи, взятой для исследования.

Это важно! Норма лейкоцитов: в 1 мл мочи не более 2 × 10³ белых кровяных клеток.

источник

2.Определение количество форменных элементов:

3-Определение форменных элементов.

1-Т.Б (Техника безопастности).

Характерная черта современного этапа развития клинической медицины- быстрое разрастание роли лабораторной диагностики. Степень развития лабораторной службы, по мнению компетентных экспертов, наряду со службами лучевой диагностики, относится к первостепенным рейтинговым критериям.

Лучшие клиники мира характеризуются хорошо развитыми службами лабораторной диагностики. По данным ВОЗ, доля лабораторных исследований составляет не менее 60% общего количества различных видов исследований, проводимых во всех лечебных учреждениях мира.

Современной клинической лабораторной диагностике присущи следующие особенности:

— глубокое проникновение в существо и механизм патологического процесса на основе всей суммы знаний в различных областях медицинской науки — генетике, молекулярной биологии, иммунологии, биологии клетки, физиологии

— применение разнообразных методологических подходов для выявления расстройств, присущих тем или иным формам патологии.

— стремление к точному учету потребностей клинической практики, в достоверной лабораторной информации, что обуславливает необходимость ее понимания, обобщения и клинической трактовки

Гематологические и общеклинические анализы применяются в практической медицине более 100 лет. Тем не менее, не смотря на такой длительный срок, многие из них не утратили своего значения и в настоящее время. В нашей стране в общей структуре лабораторных исследований на долю гематологических и общеклинических анализов все или почти все сказано и написано. В действительности это не совсем так. Бурное развитие современных технологий позволило добиться значительных успехов в отношении повышения клинической информативности и качества результатов гематологических и общеклинических исследований.

2.Определение количества форменных элементов.

1- Метод Нечипоренко (определение количества форменных элементов в 1 мл мочи). Собирают одноразовую порцию мочи(желательно утреннюю) в середине мочеиспускания, определяют Рн( в щелочной моче могут частично различаться клеточные элементы) 5-10 мл мочи центрифугируют при 2000 об/мин в течении 5-10 минут, отсасывают верхний слой, оставляя 0,5 мл или 1 мл//600 мкл мочи с осадком, перемешивают, заполняют камеру Горяева, подсчитывают отдельные лейкоциты, эритроциты, цилиндры по всей камере. Расчет количества клеток в 1мл осадка проводят по формуле , если оставлено 0,5мл мочи с осадком, или если оставляют 1мл мочи с осадком: , где N- число форменных элементов в 1мкл мочи, х- число форменных элементов в 1мкл мочи, оставленной вместе с осадком, 500 или 1000- объем мочи в мкл вместе с осадком, оставленный для исследования, V- количество мочи. Выделяется до 2000 лейкоцитов, до 1000 эритроцитов, цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более 1 на 4-5 камер Горяева, т.е до 20 в 1мл мочи

Изучение счетной камеры Горяева и подготовка ее к работе.

Для подсчета количества эритроцитов и лейкоцитов используют счетную камеру Горяева. Она представляет собой толстое прямоугольное прозрачное стекло обычно с двумя сетками, выгравированными нанесенные основные показатели и название счетной камеры. Сетки отделены от стеклянных прямоугольных пластинок, которым притирают шлифованные покровные стекла; поверхность этих стеклянных прямоугольных пластинок находится на 0,1мм выше участков камеры, на которых нанесена сетка. Сетка камеры Горяева образована системой разграничительных линий, проведенных взаимно перпендикулярно. В ней имеются 3600 малых квадратов:сторона 1/20мм, площадь 1/400 , объем 1/400 мкл; 225 больших квадратов: сторона 1/5 мм, площадь 1/25 , объем 1/250 мкл.

Сторона всей сетки 3 мм, площадь 9 , объем 0,9 мкл; высота камеры, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла- 0,1 мм. Сетку камеры Горяева изучают при увеличении(окуляр 10х, объектив 8х) с опущенным конденсором. Камеру устанавливают на предметный столик микроскопа. Наблюдая в окуляр, отыскивают сетку камеры, четко фокусируют ее изображение, устанавливают в поле зрения верхний левый угол сетки. Передвигая стекло левой рукой, последовательно изучают отдельные малые и большие квадраты, рассматривают их группировки ,при этом должна быть изучена вся площадь сетки.

Техника заполнения камеры Горяева

Камеру перед заполнением моют водопроводной водой, насухо вытирают, так же точно подготавливают шлифованное покровное стекло. Камеру Горяева берут в левую руку. На участок камеры, где нанесены сетки, укладывают шлифованное покровное стекло. Теперь стекло берут и правой рукой. При этом нижняя поверхность камеры находится на двух III пальцах, и придерживают ее спереди. Свободными двумя I пальцами притирают шлифованное покровное стекло, продвигают его по поверхности прямоугольных стеклянных пластин плавно до появления цветных колец Ньютона в месте соприкосновения покровного стекла с поверхностью прямоугольных пластинок камеры.

Микроскоп выпускается в различных вариантах комплектации. Микроскопы базируются на едином штативе и различаются составными частями, такими как визуальные насадки, предметные столики, конденсоры, осветители, объективы, окуляры, светофильтры. Комплектность вариантов и технические характеристики микроскопа указаны в его паспорте.

Микроскоп может быть использован в различных областях медицины(гематологии, дерматологии, урологии и т.д) при диагностических исследованиях в клиниках и больницах.

Микроскоп является безопасным для здоровья, жизни, имущества потребителя и для окружающей среды при правильной его эксплуатации и соответствует требованиям ГОСТР 50267.0-92

2-Метод Каковского-Аддиса позволяет учесть количество эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров, выделенное за сутки. Собирают ночную порцию мочи за 10-12 часов. В день сбора ограничивают прием жидкости и назначают белковую диету для поддержания постоянных величин плотности и рН мочи. Обследуемый мочится перед сном, отмечает время мочеиспускания, затем собирает мочу утром, желательно через 10-12 часов, но можно и за более короткий срок. Доставленную в лабораторию мочу размешивают и измеряют объем. Рассчитывают количество мочи, выделенное за 12 минут(1/5часа) по формуле: , где — объем мочи в мл, выделенной за 12 минут, х- объем мочи, доставленной в лабораторию, — время сбора мочи, — коэффициент персчета. Отмеривают рассчитанное количество мочи, центрифугируют в мерной центрифужной пробирке при 2000об/мин в течении 5 минут, отсасывают верхний слой, оставляют 0,5-1мл мочи с осадком. Осадок перемешивают и заполняют счетную камеру Фукса-Розенталя. По всей камере подсчитывают раздельно лейкоциты, эритроциты и цилиндры, рассчитывают их количество в 1мкл мочи по формуле

, где — количество форменных элементов в мкл мочи, — число форменных элементов по всей камере, 32- объем камеры Фукса-Розенталя.

Количество форменных элементов, выделенных с мочой за сутки определяют по формуле , если для исследования оставлено 0,5мл(500мкл) мочи. При исследовании 1мл(100мкл) мочи с осадком: , где — число форменных элементов, выделенных за сутки, — число форменных элементов в 1мкл мочи.

Умножением на 5 и 24 определяют количество клеток, выделенное за 24 часа. Нормальные величины суточной экскреции форменных элементов с мочой: до 2000000 лейкоцитов, до 1000000 эритроцитов, до 20000 цилиндров. Цилиндры подсчитывают в 2-3 камерах Фукса-Розенталя.

3-Элементы организованного осадка мочи .

Эритроциты в осадке мочи бывают неизмененные и измененные. Неизмененные- в виде дисков желтовато-зеленоватого цвета, обнаруживаются в моче слабощелочной и щелочной(Рн6,5-8,0). В кислой моче (Рн4,5-5,0) с относительной плотностью 1,002-1,009 эритроциты теряют гемоглобин и представлены в виде одно- или двухконтурных колец. При относительной плотности 1,030-1,040- сморщенные(звездчатые) эритроциты. В моче с низкой относительной плотностью и резко щелочной реакцией(Рн8,5-10,0) эритроциты крупные бледно-желтые диски в 1,5 раза больше нормальных.

Эритроциты дифференцируют с кристаллами оксалата кальция овоидной формы и дрожжевыми клетками. Дрожжевые клетки овальной формы, голубоватого цвета и резко преломляют свет. Микрохимические реакции проводят на предметном стекле, смешивая одну каплю осадка и одну каплю уксусной или соляной кислоты. Добавленная к осадку 30% уксусная кислота гемолизирует эритроциты и не изменяет оксалаты и дрожжевые клетки. Азур-эозин окрашивает эритроциты в розовато-сиреневый цвет, дрожжевые клетки в черный. Овоидные оксалаты растворяются полностью при добавлении к осадку капли концентрированной соляной кислоты.

Лейкоциты — бесцветные мелкозернистые клетки круглой формы, в 1,5-2 раза больше неизмененного эритроцита и представлены обычно нейтрофилами.

В моче с низкой относительной плотностью, щелочной или резкощелочной реакцией(рН 8,0-9,5). Нейтрофилы увеличиваются в размерах, разбухают, в цитоплазме может быть обнаружено броуновское движение нейтрофильных гранул, при длительном нахождении в моче с бактериями нейтрофилы разрушаются.

Эозинофилы дифференцируют по равномерной сферической зернистости в цитоплазме, резко преломляющей свет.

Лимфоциты диагностируют только в окрашенных краской Романовского препаратах. При ориентировочной изучении осадка мочи у мужчин в норме обнаруживается 0-2 лейкоцита, у женщин до 2-3 в поле зрения.

Дифференциация лейкоцитов в окрашенных препаратах мочи(«мочевая лейкоцитарная формула»). Проводится в свежевыделенной моче. Мочу центрифугируют в течении 10 минут при 1500-2000 об/мин.Над осадком мочу сливают. Для прочной фиксации на предметном стекле к осадку добавляют 1-2 капли бесцветной сыворотки крови. Каплю осадка наносят на край предметного стекла и шлифованным стеклом делают тонкий мазок, высушивают на воздухе, фиксируют и красят как препарат крови. Считают(ок Х10, об Х90) 200 лейкоцитов, выражая количество различных форм в процентах.

Эпителиальные клетки . Клетки многослойного плоского эпителия полигональной и округлой формы в 3-5 раз больше лейкоцита, бесцветные с маленькими, пикнотическими ядрами, располагаются в препаратах пластами или отдельными экземплярами. Эпителиальные клетки попадают в мочу в результате смыва их при мочеиспускании из нижней трети уретры и наружных половых органах. У женщин они часто покрыты бактериями.

Клетки переходного эпителия полиморфные по величине(в 3-6 раз больше лейкоцита) и форме( округлые, цилиндрические) окрашены мочевыми пигментами в более или менее интенсивный желтый цвет. В цитоплазме переходного эпителия обнаруживаются дистрофические изменения в виде грубой зернистости, вакуолизации капель, жира. Переходный эпителий попадает из мочевых чашечек, лоханок, мочеточников, мочевого пузыря, крупных протоков предстательной железы и начальной части простатического отдела мочеиспускательного канала у мужчин. На морфологию клеток влияет длительность пребывания в моче, рН среды, относительная плотность, аммиачно-бактериальное брожение. Клетки переходного эпителия в моче здоровых людей встречаются в виде единичных экземплярах препарата клетки.

Почечный эпителий (тубулярный эпителий) неправильной округлой, угловатой или четырехугольной формы, в 1,5-2 раза больше лейкоцита, окрашены мочевыми пигментами в светло-желтый, желтый или коричневожелтый цвет. В цитоплазме клеток присутствуют дистрофические изменения в виде мелкозернистого белкового, жирового перерождения, вакуолизации, ядра клеток обычно не видно.

В нативных препаратах располагаются группами, цепочками и накладываются на гиалиновые цилиндры. При усиленном отторжении образуют эпителиальные цилиндры. В состоянии жировой дистрофии клетки более крупных размеров(в 4-6 раз больше лейкоцита), круглой формы и резко преломляют свет. Липоиды диагностируются с помощью поляризационного микроскопа или поляризационной насадки в виде белых крестиков на черном фоне, двояко преломляющих свет. В период олигурической стадии острой почечной недостаточности. Клетки почечного эпителия крупные, располагаются на цилиндрах, а также комплексами, в виде железисто-подобных структур, что характеризует выраженный нефронекроз. Эта пролиферация почечного эпителия развивается под влиянием гормонов нефронекроза.

Различают несколько видов цилиндров :

—гиалиновые цилиндры гомогенные, полупрозрачные, с нежными контурами, закругленными концами. На их поверхности могут откладываться кристаллы(ураты), бактерии, лейкоциты, эритроциты, почечный эпителий.

-зернистые цилиндры-мелко-или грубозернистой структуры, желтоватого цвета или почти бесцветные, образуются при распаде клеток почечного эпителия, нейтрофилов или зернистой коагуляции растворенного в моче белка.

—восковидные цилиндры имеют резко очерченные контуры, бухтообразные вдавления, обломанные концы; всегда окрашены в желтоватый или желтый цвет, их структура может быть гомогенной, плотной крупнозернистой. Они образуются из гиалиновых и зернистых цилиндров при их длительном пребывании в канальцах.

—пигментные цилиндры -зернистой структуры желто-коричневого или бурого цвета. Образуются при коагуляции гемоглобина или миоглобина. Располагаются на фоне зернистых масс пигмента. Реактивом Адлера окрашиваются в синий цвет.

—эпителиальные цилиндры состоят из клеток почечного эпителия, всегда более или менее интенсивно окрашены мочевыми пигментами и располагаются на фоне этих же клеток.

— жировые цилиндры образуются из капель жира(липоидов) в почечных канальцах. Располагаются на фоне жироперерожденного почечного эпителия, кристаллов холестерина и игл жирных кислот. Резко преломляют свет и на малом увеличении микроскопа кажутся черными, как и жироперерожденный почечный эпителий.

—лейкоцитарные цилиндры — образования серого цвета, состоят из лейкоцитов и располагаются на их фоне. Образуются в просвете канальцев при пиурии.

—эритроцитарные цилиндры — розоватого-желтоватого цвета, образуются в канальцах при почечной гематурии, состоят из массы эритроцитов и располагаются на их фоне.

Слизь- вырабатывается эпителием мочевых путей и всегда присутствует в небольшом количестве в осадке мочи. Иногда встречаются образования из слизи-цилиндроиды, которые отличаются от цилиндров большей длиной, резкими контурами, продольной тяжистостью и отсутствием четких концевых очертаний.

Приведенные методы количественного исследования элементов мочевого осадка могут быть использованы для распознавания скрытой( не обнаруживаемой при ориентировочной микроскопии осадка) лейкоцитурии, для выяснения вопроса о преобладании лейкоцитурии или гематурии и оценки их степени, для динамического наблюдения за этими симптомами в течение терапии. В практике отечественных лечебных учреждений наибольшее распространение получил метод, разработанный А.З. Нечипоренко.

При отрицательных результатах количественного исследования лейкоцитурии у пациентов с подозрением на латентно текущий хронический пиелонефрит повторный подсчет лейкоцитов следует проводить провокационной пробы: наибольшее распространение получил преднизолоновый тест.

1) К работе в лаборатории клинической диагностики допускают лица не моложе 18 лет, обученные на 1 группу по электробезопасности и не имеющих противопоказаний по состоянию здоровья.

2) Персонал лаборатории должен проходить обязательный периодический медицинский осмотр не реже 1 раза в год.

3) В процессе работы на персонал лаборатории могут воздействовать следующие опасные и вредные производственные факторы:

· Повышенное напряжение в электрической цепи, замыкание которой может произойти через тело человека;

· Опасность травмирования осколками лабораторной посуды, используемой в лаборатории;

· Опасность заражения при работе с инфицированными материалами;

· Повышенное напряжение органов зрения

4) Персонал лаборатории должен быть обеспечен следующими видами санитарно-гигиенической одежды и средств индивидуальной защиты:

— Фартук прорезиненный(пластиковый) с нагрудником для санитарок.

5) В своей работе персонал должен руководствоваться требованиями санитарного режима, должностными инструкциями по эксплуатации оборудования, приборов, аппаратов, правилами охраны труда и пожарной безопасности.

6) Каждый работник обязан немедленно извещать непосредственного руководителя о любой ситуации, угрожающей жизни и здоровью людей, о каждом несчастном случае на производстве или об ухудшении состояния своего здоровья.

7) Персонал лаборатории несет ответственность за нарушение требований настоящей инструкции. Лица, допустившие невыполнение или нарушение требований охраны труда, могут быть подвергнуты дисциплинарному взысканию в соответствии с Правилами внутреннего трудового распорядка и, при необходимости, внеочередной проверки знаний вопросов охраны труда.

— В.С.Ронин, Г.М.Старобинен. «Руководство по практическим занятиям по методам клинических лабораторных исследований» издательство «Медицина» 1989 год

— А.П.Никольченко, «Анализы, все ,что нужно знать», издательство «Вектор» 2010год,

— В.В.Меньщиков, «Клиническая лаборатория аналитика», издательство «Лабинформ»РАМАД Москва 1999год

— В.В.Долгов, «Биохимические исследования в клинико-диагностических лабораториях ЛПУ первичного звена», издательство «Лабинформ» 2003 год

— И.И.Миронова, Л.А.Романова-«Атлас осадков мочи», издательство КЛД Москва 2007 год

источник