Меню Рубрики

Анализ на гаги в моче

Для наследственных коллагенопатий характерна относительно частая встречаемость патологий как в педиатрической, так и в терапевтической практике, проградиентность течения, полиорганность поражения выраженный клинический полиморфизм, ранняя инвалидизация и даже смерть больных в молодом возрасте [4, 9].

Как известно, коллагены являются семейством внеклеточных матриксных белков, играющих важную роль в поддержании целостности органов и тканей, водно-солевого равновесия участвующих в процессах иммунологической защиты организма, заживлении ран, переломов костей, агрегации тромбоцитов и др. [5–7]. Мутации в генах, отвечающих за синтез этих белков, или дефицит активности посттрансляционных ферментов синтеза коллагенов приводят к возникновению таких наследственных болезней, как несовершенный остеогенез, некоторые типы синдрома Элерса – Данлоса, синдром Марфана, синдром Альпорте, дистрофические формы буллезного эпидермолиза, значительное число хондродисплазии, сходные мутации обнаружены также при остеоартрозе, различных вариантах остеопороза и др. [10, 11]. Другой серьезной проблемой практической медицины считаются болезни, сопровождающиеся избыточным синтезом коллагена, что приводит к развитию фиброза легких, печени и почек. В основе этих заболеваний лежат генетические дефекты, сопровождающиеся снижением активности ферментов, принимающие участие в распаде коллагеновых белков [12]. При изучении биохимических показателей коллагенопатии было показано, что уровень оксипролина (ОП) в крови, экскреция его с мочой вместе с его метаболитами коллагенов, а также глюкозамингликанов (ГАГ) в указанных биохимических материалах метаболитов, основного вещества соединительной ткани (СТ), изменяется закономерно в зависимости от возраста клинических и генетических форм заболевания.

Основной диагностический показатель наследственных коллагенопатий глюкозамингликаны (ГАГ) по химической структуре являются линейными полимерами содержащими аминосахар (N-ацетилированный или N-сульфатированный) и уроновую или идуроновую кислоту, образующие специфические для каждого типа дисахаридазные единицы. Посредством цепей глюкозамингликанов и стержневого белка протеогликаны взаимодействуют с коллагеновыми белками, фибронектином, протеиназами, ростовыми факторами, нейромедиаторами, гормонами, липопротеидами, мембранными рецепторами и ионами.

Глюкозамингликаны разделяют на две неоднородные группы – несульфатированные (гиалуроновая кислота, хондроитин) и сульфатированные. Последние представлены гепарансульфатом, который по своим химическим свойствам сходен с гепарином, хондроитин-4-сульфатом, хондроитин-6-сульфатом (для обоих соединений характерно наличие дисахаридазной единицы, состоящей из N-ацетил, Д-галактозамин и Д-глюкуроновой кислоты), дерматансульфатом, в котором повторяющаяся дисахаридазная единица содержит сульфатированный N-ацетил, Д-галактозамин и L-идуроновую кислоту, гепарином и кератансульфатом. Последний, однако, не является истинным глюкозамингликаном, так как не содержит уроновой кислоты. Соотношение глюкозамингликанов в разных типах тканей варьируется.

Другим показателем обмена коллагена является оксипролин. Оксипролин – одна из основных аминокислот коллагена, что позволяет считать его маркером, отражающим катаболизм этого белка. Около 20 % оксипролинсодержащих пептидов, высвобождаемых из коллагеновых молекул, экскретируются с мочой, а 80 % метаболизируются в печени. Практически 90 % оксипролина мочи является компонентом пептидов небольшой молекулярной массы, а около 9 % большой (преимущественно фрагментов N-концевых пропептидов проколлагена I типа). В свободном виде находится только 1,0 % оксипролина. Поэтому увеличение количества свободного и, соответственно, снижение уровня связанного оксипролина может косвенно свидетельствовать о нарушении синтеза коллагена.

Генетические дефекты синтеза коллагена приводят к уменьшению числа легко растворимого коллагена. Именно поэтому у пациентов с наследственными коллагенопатиями отмечается достоверное повышение количества оксипролина в суточной моче, выраженность которого коррелирует с тяжестью патологического процесса.

Изучение наследственных коллагенопатий в Азербайджанской Республике показало распространение этой патологии. В эндемических очагах республики уровень наследственных коллагенопатий составляет 15 %. Поэтому разработка комплексных методов диагностики для нашей республики является очень важной и актуальной [1, 2].

Таким образом, целью данной работы является исследование биохимических показателей метаболитов коллагена и основного вещества СТ среди больных с наследственнными коллагенопатиями.

Материалы и методы исследования

Собственные наблюдения составили 172 больных в основном с диагнозом синдрома Марфана, несовершенного остеогенеза и семейного пролапса митрального клапана в возрасте от 2 до 39 лет – 80 женщин и 92 мужчин из 110 семей, а также их 120 здоровых родственников I и II степени родства. Контрольную группу составили 20 здоровых лиц в возрасте от 2 до 39 лет. Клинический протокол обследования семей включал: данные анамнеза жизни и болезни, анализ первичной медицинской документации пробанда и членов его семьи, составление родословных и результаты лабораторных методов исследования. Клинический диагноз больных был поставлен врачами. Для диагноза наследственных коллагенопатий исследовали определение оксипролина по П.Н. Шараеву (1981) [8]. Количество и различные формы глюкозамингликанов в моче электрофорезом на ацетат и целлюлозных пленках [3]. Количественный анализ глюкозамингликанов исследовали иммуноферментным методом с помощью теста фирмы BlueGene Biotech (China).

Результаты исследования и их обсуждение

В табл. 1 представлены показатели экскреции оксипролина в суточной моче больных с коллагенопатиями. Среди обследованных было выделено три группы: с уровнем анализированных показателей 100 % (I группа); 150 % (II группа) и более 150 % (III группа).

Проведенный анализ выявил у большинства обследованных (у 129 из 172 (75 %)) повышение выделения с суточной мочой ОП, которое отражал процесс катаболизма и синтеза коллагена. Примерно у половины (49,3 %) больных детей экскреция ОП была значительной и превышала должную величину более чем в 2 раза. Практически у трети (29,6 %) пациентов повышение этого показателя было умеренным и составило в среднем 122,1 ± 1,9 мг/сут. У четверти (25,0 %) обследованных выявлено снижение экскреции ОП, что может свидетельствовать об угнетении резорбции коллагена у этих больных. С другой стороны, с увеличением возраста больных и продолжительностью клинического течения болезни наблюдаются более высокие нарушения в обмене коллагена. В табл. 2 представлены данные глюкозамингликанов в суточной моче у больных с коллагенопатиями.

Как видно из таблицы, среди 172 обследованных больных у 140 (81,4 %) экскреция глюкозамингликанов с мочой выше по сравнению с контрольной группой. В этой группе больных полученные данные показывают активацию катаболизма межклеточных соединительной ткани. У 53,5 % больных уровень ГАГ был в 2 раза выше нормы. Однако у 18,6 % обследованных уровень ГАГ по сравнению с контрольной группой было ниже. А это показывает о низком межклеточном катаболизме соединительной ткани. Во второй группе установлено увеличение количества оксипролина и глюкозамингликанов одновременно. В группе больных, где уровень ГАГ был ниже 100 %, наблюдали повышение ОП в суточной моче. Такая комбинация биохимических показателей выявила у больных тяжелое течение заболевания. У больных с высоким содержанием (до > 150 %) ГАГ в суточной моче выявляли также снижение ОП более 100 % и клиническое течение заболевания было более мягким. Наличие достоверной взаимосвязи между изолированным нарушением экскреции ГАГ в суточной моче и тяжестью клинической картины заболевание показывает важность исследования данных биохимических показателей.

В следующей табл. 3 представлены показатели ОП и ГАГ в крови среди обследованных больных.

Количество сывороточного ОП среди больных выявлено в двух диапазонах. Больные, имеющие низкий уровень оксипролина и лица с повышенными показателями. Среди больных низкий уровень оксипролина было 51,1 ± 1,28 мкг % (10,1–109,7). Данный показатель ниже на 4,6 раз по сравнению с контрольной группой. Низкий уровень ОП в крови сопровождается повышенной экскрецией оксипролина в суточной моче. Повышенный уровень ОП в крови колебался от 181,0 до 359,2, в среднем 225,6 ± 4,11. Сравнение этих данных с контрольной группой показало, что здесь изменения незначительные. Уровень ГАГ же среди обследованных было 11,2 ± 4,75 мкг %. Данный показатель был повышен на 1,7 раз по сравнению с контрольной группой. Количество ГАГ в крови было ниже от показателей установленных в суточной моче.

Экскреция оксипролина в суточной моче больных с коллагенопатиями

источник

Рассмотрены мукополисахаридозы — это группа наследственных болезней соединительной ткани, обусловленных нарушением обмена гликозаминогликанов. Приведены типы мукополисахаридозов, основные подходы к лечению больных, приведен клинический пример.

С 1 января 2012 г. в силу вступил новый Федеральный закон от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации», в котором впервые на государственном уровне введено понятие редких (орфанных) заболеваний. В список орфанных болезней на сегодняшний день внесено 230 наименований, однако в случае выявления новых болезней он будет пополняться. По данным Формулярного комитета Российской академии медицинских наук (РАМН), насчитывается около 300 тыс. россиян с этими болезнями.

Редкие (орфанные) заболевания — это встречающиеся с определенной частотой жизнеугрожающие или хронические прогрессирующие заболевания, при отсутствии лечения приводящие к смерти или пожизненной инвалидизации пациентов.

В разных странах определение и перечень орфанных болезней принимаются на государственном уровне, единого определения для них не существует, также как нет единого критерия отнесения заболеваний к этой группе.

В нашей стране к орфанным относятся заболевания, которые имеют распространенность не более 10 случаев заболевания на 100 000 населения.

Сегодня в мире насчитывается около 7000 редких заболеваний. Примерно половина из них обусловлена генетическими отклонениями. Симптомы могут быть очевидны с рождения или проявляться в детском возрасте.

Одним из заболеваний, включенным в группу орфанных, является мукополисахаридоз (МПС) (код по МКБ-10 Е76.1 — «нарушение обмена гликозаминогликанов», Постановление Правительства № 403 от 26 апреля 2012 г.).

Мукополисахаридоз — это группа наследственных болезней соединительной ткани, обусловленных нарушением обмена гликозаминогликанов (ГАГ) (кислых мукополисахаридов) в результате генетически обусловленной неполноценности 1 из 11 известных ферментов, участвующих в их расщеплении. Относится к лизосомным болезням накопления (табл.).

Для МПС характерно полисистемное поражение: прогрессирующие психоневрологические нарушения, гепатоспленомегалия, сердечно-легочные расстройства, костные деформации [1–3].

В Московской области зарегистрированы и получают лечение 3 ребенка с МПС: 1 девочка с МПС I типа (синдром Гурлер–Шейе) и 2 мальчика с МПС II типа (синдром Хантера). Еще два ребенка в настоящее время находятся в стадии обследования, уточняется тип МПС.

Представляем клиническую и лабораторную характеристику заболевания на примере МПС II типа.

Мукополисахаридоз II типа (синонимы: недостаточность фермента лизосомной идуронат-2-сульфатазы (a-L-идуроносульфатсульфатазы), синдром Гунтера (Хантера) — сцепленное с Х-хромосомой рецессивное заболевание, возникающее в результате снижения активности лизосомной идуронат-2-сульфатазы, участвующей в метаболизме ГАГ. Возникает почти исключительно у мальчиков (XY). У гетерозиготных женщин клинических проявлений синдрома Хантера, как правило, не наблюдается («носители»). К настоящему моменту описано лишь 2 случая заболевания у девочек, связанных с инактивацией второй, нормальной, Х-хромосомы.

Это панэтническое заболевание, частота встречаемости в мире — около 1 на 75 000 живых новорожденных мальчиков. Частота заболевания в популяции варьирует от 1 на 165 000 (Австралия) до 1 на 34 000 (Израиль). Развитие МПС II типа обусловлено мутациями в структурном гене лизосомной идуронат-2-сульфатазы — IDS, расположенном на длинном плече Х-хромосомы в локусе Xq28. В настоящее время описано более 300 различных мутаций в гене IDS. Более 50% мутаций составляют точечные мутации, около 26% — мелкие делеции и вставки, 11% — крупные делеции и перестройки гена IDS. Для пациентов России ДНК-анализ гена IDS показал, что крупные делеции и перестройки гена IDS составляют только 5,4% числа найденных мутаций.

Клинический фенотип гетерогенен и довольно условно подразделяется на тяжелую и легкую формы, различающиеся по тяжести клинических фенотипов. У пациентов с тяжелой формой наблюдают сходные с МПС I типа (синдромом Гурлер) клинические симптомы, но заболевание прогрессирует медленнее (рис.).

Заболевание манифестирует в возрасте от 1 до 3 лет. Отмечается изменение черт лица по типу гаргоилизма, задержка роста, признаки множественного костного дизостоза, огрубление и утолщение кожи, прогрессирующее снижение интеллекта. Специфичными для данного типа МПС являются изменения на коже спины, груди, шеи цвета слоновой кости, «монголоидные пятна» в пояснично-крестцовой области. Нарушения функции органов пищеварения проявляются в виде гепатомегалии, хронической диареи. Среди неврологических нарушений преобладают симптомы прогрессирующей сообщающейся гидроцефалии, спастическая параплегия в результате компрессии спинного мозга и прогрессирующая тугоухость. У детей с синдромом Хантера отмечается тугоподвижность крупных и мелких суставов. Прогрессируют сердечно-легочные расстройства. Летальный исход обычно наступает на втором десятилетии жизни.

Для подтверждения МПС II типа проводится определение уровня экскреции ГАГ с мочой и измерение активности лизосомной идуронат-2-сульфатазы в лейкоцитах или культуре кожных фибробластов. В случае заболевания в моче возрастает суммарная экскреция ГАГ.

Проведение ДНК-анализа — длительная и сложная диагностическая процедура, позволяющая определить молекулярные дефекты, приводящие к болезни Хантера, наиболее часто используется для определения носительства и пренатальной диагностики в семьях, имеющих больного ребенка. Применяются методы косвенной ДНК-диагностики, основанной на исследовании локусов Х-хромосомы, расположенных близко к гену IDS.

Кроме того, пренатальная диагностика проводится путем измерения активности идуронат-2-сульфатазы в биоптате ворсин хориона на 9–11 неделе беременности или определения спектра ГАГ в амниотической жидкости на 20–22 неделе беременности.

Наиболее часто дифференциальная диагностика проводится внутри группы МПС, а также с другими лизосомными болезнями накопления (муколипидозами, галактосиалидозом, ганглиозидозом и др.).

Основным подходом к лечению больных с МПС является проведение пожизненной ферментозаместительной терапии. При МПС II типа используется препарат идурсульфаза (Элапраза) производства компании «Шайер», США, зарегистрированный в странах Европы, США, России для лечения мукополисахаридоза II типа (болезнь Хантера). Препарат вводится еженедельно, внутривенно, капельно, медленно в дозе 2 мг/кг.

В качестве клинического примера приводим выписку из истории болезни.

Никита Б., дата рождения 11.12.2011.

Анамнез жизни. Ребенок от второй беременности (первая беременность окончилась выкидышем на раннем сроке), протекавшей на фоне маловодия, гипоксии плода, угрозы прерывания, отеков. Роды срочные, самостоятельные. Вес при рождении 4040 г, рост 58 см. С рождения на грудном вскармливании.

Формула развития: голову держит с 2 мес, переворачивается с 5 мес, сидит с 9 мес, ходит с 1 г 1 мес. К году — 5 слов. Перенесенные заболевания — острая респираторная вирусная инфекция 2 раза, трахеит.

Анамнез заболевания. С рождения — водянка оболочек яичек, с 5 мес — пахово-мошоночная грыжа, в 7 мес диагностирован кифоз поясничного отдела позвоночника, в 12 мес по данным электрокардиографии (ЭКГ) — синдром ранней реполяризации желудочков, неполная блокада правой ножки пучка Гиса (НБПНГ), в 1 г 3 мес проведена эхокардиография (Эхо-КГ), выявлена аневризма межпредсердной перегородки (МПП).

В 1 г 4 мес ребенок обследован в МГНЦ РАМН, заподозрен и подтвержден биохимическим и молекулярно-генетическим методами МПС II типа.

При поступлении в клинику состояние ребенка средней тяжести. Вес 15 кг. Рост 93 см. Волосы жесткие, тусклые, макростомия, макроглоссия, короткая шея, легкие черты гаргоилизма, камподактилия 4,5 пальца справа, широкое пупочное кольцо, кифоз поясничного отдела позвоночника, килевидная деформация грудной клетки, пахово-мошоночная грыжа слева, кожа — плотная на ощупь. Гипертрофия миндалин 2–3 ст. Дыхание через нос не затруднено. Дыхание везикулярное. Тоны сердца ритмичные, акцент второго тона. Частота сердечных сокращений (ЧСС) 120 уд./мин. Живот увеличен в объеме, печень +3,5 см, +4 см верхняя треть. Селезенка не пальпируется. Стул оформленный. Дизурических явлений нет.

Неврологический статус: в сознании, гиперактивен, быстро возбудим, говорит отдельные слова. Общемозговых, менингеальных знаков нет. Окружность головы = 50 см. Глазные щели OD = OS. Зрачки OD = OS. Движение глазных яблок в полном объеме. Низкий тембр голоса. Быстро истощается, ходит самостоятельно, легкая атаксия. Мышечная гипотония. Сухожильные рефлексы живые.

Читайте также:  100 мл мочи хватит для анализа

Общий анализ крови и мочи без патологических изменений.

Биохимический анализ крови — умеренное повышение уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ) (42 Ед/л), аспартатаминотрансферазы (АСТ) (49 Ед/л).

ЭКГ: вертикальное положение электрической оси сердца (ЭОС), выраженная синусовая тахикардия 182–200 на фоне беспокойства. В ортостазе ЧСС 111–166 уд./мин.

Ультразвуковое исследование (УЗИ) брюшной полости: печень увеличена, правая доля 100 мм, левая — 45 мм. Структура однородная, стенки сосудов и протоков уплотнены. Эхогенность повышена. Поджелудочная железа 14 × 8 × 15 мм, структура неоднородная, эхогенность не изменена. Желчный пузырь — форма обычная, просвет чистый, стенки не утолщены. Селезенка не увеличена, 62 × 32 мм. Структура однородная. Почки без патологических изменений. Яички в мошонке, вагинальный отросток брюшины расширен с обеих сторон до 3 мм.

Электроэнцефалография (ЭЭГ): диффузные общемозговые изменения биоэлектрической активности по органическому типу в виде доминирования дельта-активности частотой 3–4 Гц по всем отделам конвекса безградиентно в сочетании с отдельными группами низкочастотных тета-колебаний. Эпилептиформная активность, фотопароксизмальная реакция не выявлены.

На основании комплексного исследования установлен диагноз: «Мукополисахаридоз II типа (синдром Хантера). Дегенеративное заболевание нервной системы. Задержка речевого развития. Синдром гипервозбудимости. Множественный костный дизостоз. Порок развития L1-L2 позвонков, врожденный кифоз. 2-стороннее гидроцеле. Пупочная грыжа».

По жизненным показания ребенку назначено внутривенное введение Элапразы в дозе 0,5 мг/кг еженедельно (15 кг × 0,5 = 7,5 мг на введение).

Ребенок с июля 2013 г. (возраст 1 г 7 мес) получает ферментозаместительную терапию в условиях детского отделения ГБУЗ МО МОНИКИ. В комплексную терапию включены занятия с логопедом, дефектологом, курсы физиотерапии, лечебная физкультура, L-карнитин (Элькар), Кудесан, глицин, церебролизин, Магне В6.

  1. Meikle P. J. et al. Prevalence of lysosomal storage disorders // JAMA. 1999. 281: 249–254.
  2. Neufeld E. F., Muenzer J. The mucopolysaccharidoses. In: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, et al (eds). The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease. New York: McGraw-Hill; 2001: 3421–3452.
  3. Fenton C. L., Rogers W. Mucopolysaccharidosis type II. eMedicine Journal [serial online]. 2006. www.emedicine.com/ped/topic1029.htm. Accessed on April 3, 2006.

Т. А. Бокова 1 , кандидат медицинских наук
Е. В. Лукина
Н. В. Шестериков

ГБОУ МО МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского, Москва

источник

Официальный сайт ГБУЗ ПК «КДКБ»

Почтовый адрес: 614066 , г. Пермь , ул. Баумана, 22

Государственное бюджетное учреждение
здравоохранения Пермского края
«Краевая детская клиническая больница»

Приемное отделение №1
Баумана, 17
тел. +7 (342) 221-71-16
График работы: круглосуточно

Приемное отделение №2
Баумана, 22
тел. +7 (342) 221-82-32
График работы: круглосуточно

Реорганизация ГБУЗ ПК «КДКБ»

10 июля завершилась процедура реорганизации в форме слияния ГБУЗ ПК «КДКБ» с ГБУЗ ПК «Детский пульмонологический санаторий «Светлана» и ГБУЗ ПК «Детский санаторий «Орлёнок».

Самое новейшее оборудование для проведения любых видов операций

Компьютерная и магнито-резонансная томография

Снимки самого высокого разрешения во всех плоскостях и разрезах

Реорганизация ГБУЗ ПК «КДКБ»

10 июля завершилась процедура реорганизации в форме слияния ГБУЗ ПК «КДКБ» с ГБУЗ ПК «Детский пульмонологический санаторий «Светлана» и ГБУЗ ПК «Детский санаторий «Орлёнок».

Самое новейшее оборудование для проведения любых видов операций

Компьютерная и магнито-резонансная томография

Снимки самого высокого разрешения во всех плоскостях и разрезах

Лаборатория проводит около 1500 анализов в год на наследственные нарушения обмена аминокислот, углеводов, мукополисахаридозы, проводит потовый тест на аппарате «Nanoduct» для диагностики муковисцидоза. Для обследования в лабораторию направляются дети – пациенты неврологического, пульмонологического, гастроэнтерологического отделений больницы, отделения патологии новорождённых и раннего возраста КДКБ и других учреждений Перми, а также дети и взрослые по направлению врачей-генетиков.

  • Скринирование мочи на НБО (качественные реакции)
  • Потовая проба по Гибсону-Куку (определение концентрации хлоридов в поте)
  • Потовый тест на аппарате «Nanoduct» (определение проводимости пота)
  • Тонкослойная хроматография углеводов
  • Количественное определение гликозаминогликанов в моче
  • Качественное определение гликозаминогликанов методом электрофореза
  • Определение аммиака в плазме крови

ВНИМАНИЕ! ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ВРАЧЕЙ!

При несоблюдении следующих рекомендаций лабораторное отделение МГК не гарантирует качество выполняемых анализов.

ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ НА ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ ОБРАЗЦА

На каждый образец исследуемого материала и каждый вид исследования должно быть оформлено отдельное направление в свободной форме с указанием ФИО, даты рождения пациента и направляющего отделения/врача. Также желательно указывать причину направления материала на исследование (клиническая картина кратко) и принимаемые на момент обследования лекарственные препараты, если отменить лек. терапию невозможно. Без направления образцы биоматериалов не могут быть приняты для проведения исследования! Баночку с биоматериалом тоже необходимо подписать (фамилия).

Образец мочи, поступающий в лабораторию, должен быть первой утренней порцией мочи, взятой натощак (не менее 25 мл). Лекарственная терапия должна быть отменена за 3 суток до исследования. Если медикаментозная терапия не может быть отменена ввиду состояния больного, принимаемые препараты указываются в направлении. Банка для сбора мочи должна быть чистой (приобретается в аптеке), т.к. остатки некоторых моющих средств на стенках могут вызывать ложные результаты анализа. Нельзя собирать мочу в пробирки для крови, содержащие гепарин, ЭДТА и др. наполнители! Баночка с материалом должна быть подписана (фамилия) и сопровождаться направлением в произвольной форме с указанием ФИО, даты рождения и отделения/врача.

За 3 дня до исследования рекомендуется бессолевая диета (не есть солёную пищу, не пить минеральную воду). Накануне исследования тщательно вымыть ребёнку спину мылом и мочалкой. С собой в лабораторию взять очень тёплые вещи (кофту, куртку), горячий чай, сменные сухие вещи – ребёнку необходимо будет вспотеть.

Лекарственная терапия отменяется за 3-7 суток до исследования во избежание получения ложных результатов. При отсутствии противопоказаний и с разрешения лечащего врача за день до сбора мочи рекомендуется углеводная нагрузка (молоко, овощи, фрукты).

Для анализа используют разовые и суточные образцы мочи. Разовые образцы мочи, должны быть первой утренней порцией мочи. Сбор суточной мочи: сбор мочи производится в течение суток с 7:00 часов одного дня до 7:00 часов следующего дня, моча собирается в одну чистую ёмкость без каких-либо наполнителей. В 7 часов утра сходить в туалет, но мочу не собирать. Следующие порции мочи собирать в одну и ту же ёмкость, которую необходимо хранить в прохладном месте (+2-+8 С) в течение всего времени сбора. Банка для сбора мочи должна быть чистой, т.к. остатки некоторых моющих средств на стенках могут вызывать ложные результаты анализа. Нельзя собирать мочу в пробирки для крови, содержащие гепарин, ЭДТА и др. наполнители! Последнюю порцию мочи собрать в 7 часов утра следующего дня. Тщательно перемешать собранную мочу за сутки. Отобрать из общего количества суточной мочи не более 50 мл и перелить в специальный контейнер для сбора мочи. Не нужно нести всю суточную мочу в лабораторию!

Для анализа используют разовые и суточные образцы мочи. Разовые образцы собирают в промежутке между 9 и 18 ч, так как моча, собранная в это время, имеет такое же количественное отношение ГАГ к креатинину, как и в суточной моче. Сбор суточной мочи см. выше . Суточные образцы собирают на холоду во избежание бактериального пророста. Инфицированные образцы и образцы с низким содержанием креатинина анализу не подлежат. Необходимый объём 10 мл. Банка должна быть подписана и сопровождаться направлением в произвольной форме с указанием ФИО, даты рождения и отделения/врача.

Для выполнения этого исследования необходимо предварительно договориться о времени проведения анализа с врачом-лаборантом МГК. Кровь берётся натощак из вены в вакуумную пробирку с ЭДТА (фиолетовая крышка) непосредственно в КДКБ. Пробирку желательно наполнить полностью, положить в лёд и сразу передать в лабораторию. Если транспортировка пациента в КДКБ невозможна, кровь берётся в другом учреждении, после чего её необходимо сразу поместить в лёд и незамедлительно (в течение получаса) доставить в лабораторию, где она сразу будет протестирована. Пробы с признаками гемолиза анализу не подлежат.

источник

Для решения поставленных задач В. Г. Шахмалова определяла содержание метаболитов соединительной ткани (оксипролин и гликозаминогликаны) и мышечной ткани (креатипин) в суточной моче у здоровых детей. В результате удалось установить, что в комплексной оценке физического развития детей большая роль принадлежит таким показателям, как оксипролин (ОП), креатинин (КР) и кислые гликозаминогликаны (ГАГ).

При этом оказалось, что процесс увеличения роста детей в большей степени отражает почечная экскреция оксипролина, а нарастание массы тела — почечная экскреция креатинина. Автором установлены возрастные границы почечной экскреции метаболитов соединительной ткани в процессе роста и развития детей, отмечено их неуклонное увеличение у детей до 13-летнего возраста и последующее снижение.

Наиболее интенсивное увеличение роста, развития скелета и почечной экскреции оксипролина обнаруживается у детей в возрасте 8—11 лет, причем у девочек больше, чем у мальчиков. Суточная экскреция с мочой ОП нарастала к 13 годам жизни, составляя в среднем 103,2+17,51 мг, а далее снижалась более чем в два раза, и у детей 14-летнего возраста была равна 47,5+7,32 мг.

У здоровых взрослых 30—42 лет суточная экскреция ОП была 21,9±5,5 мг, т. е. более чем в 3 раза меньше, чем у детей старшего возраста (70,3+8,9 мг). Наряду с уменьшением почечной экскреции свободного оксипролина у здоровых детей, с возрастом увеличивается экскреция пептидосвязанного ОП. Это может свидетельствовать об изменениях обмена коллагеновых белков с возрастом и, в определенной мере, о функциональной незрелости организма новорожденных детей (несовершенство функции почек или недостаточная активность ферментов, принимающих участие в распаде ОП).

При определении основного компонента межуточного вещества соединительной ткани — гликозаминогликанов — установлено, что в процессе роста ребенка и увеличения объема основного вещества соединительной ткани повышается содержание ГАГ в моче, которое, однако, после 13 лет у здоровых детей уменьшается.

Суточная экскреция с мочой ГАГ у здоровых детей 13 лет составляла 8,8+0,66 мг, а у детей 14 лет — 5,6+0,81 мг. У здоровых взрослых людей суточная экскреция ГАГ была почти в два раза меньше, чем у детей старшего возраста: у взрослых — 3,37+0,88 мг и у детей 12—15 лет — 6,02+0,42 мг.

Следует заметить, что содержание ГАГ в моче у девочек было также выше, чем у мальчиков. Найденная взаимосвязь позволила предположить наличие более интенсивного метаболизма всех структур соединительной ткани у девочек этого возраста. Поскольку скелетная зрелость наступает раньше у девочек, то вполне закономерно, что в периоды наибольших прибавок в росте (критические периоды роста) экскреция ОП и ГАГ у них значительно выше, чем у мальчиков.

Одним из важных вопросов биохимии соединительной ткани является степень сульфатации ее биологически активных веществ — гликозаминогликанов, которая в совокупности с изменением размеров молекул белка и углеводного компонента, а также с учетом степени полимеризации может дать представление о гетерогенности структур ГАГ (Varadi и соавт.).

Кроме того, согласно мнению ряда авторов, определение уровня сульфатов может отражать степень соматической зрелости детского организма. Исследования В. Г. Шамхаловой показали, что с возрастом у детей нарастает степень сульфатации ГАГ. Так, у детей 4—7 лет отношение молярных концентраций сульфатных групп (SО4) и уроновых кислот составляло 2,14+0,53, у детей 8—11 лет оно изменялось незначительно — 2,76+0,62, а у детей 12—15 лет повышалось в два раза — 5,35+1,45.

Происходило как абсолютное, так и относительное повышение сульфатных групп. Таким образом, выявлены достоверные различия степени сульфатации ГАГ у детей 4—7 и 12—15 лет, причем заслуживает внимания факт более выраженных колебаний коэффициента SО4-уроновые кислоты у детей старшего возраста. Действительно, диапазон колебаний этого коэффициента у детей 4— 7 лет был от 0,16 до 11,0, а у детей 12—15 лет — от 0,3 до 25,4. Итак, наибольшее содержание сульфатных групп ГАГ отмечалось в период полового созревания детей, что в определенной степени может свидетельствовать о довольно выраженной гетерогенности ГАГ в этом возрастном периоде.

При определении качественного состава ГАГ в суточной моче удалось также установить, что здоровые дети независимо от возраста и уровня физического развития имели 3 типа распределения фракций ГАГ мочи: I тип — преимущественное содержание хондроитин-4-6-сульфата, II тип — преобладание гепарансульфата, хондроитин-4-6-сульфата и дерматансульфата над остальными фракциями ГАГ и III тип — преимущественное содержание дерматансульфата (в основном у детей 12—15-летнего возраста). Наличие у здоровых детей нескольких типов хроматограмм ГАГ мочи может быть использовано как дополнительное доказательство существования генетически обусловленной гетерогенности ГАГ, на что указывают Spranger и соавт..

Основываясь на результатах проведенных исследований, В. Г. Шамхалова при оценке уровня физического развития детей, наряду с общепринятыми данными антропометрии, использовала дополнительные биохимические критерии, отражающие рост и развитие соединительной ткани. Ею были предложены соответствующие индексы:
Индекс №1 = ОП (мкмоль/мл)/1,73 м2,
Индекс №2 = ГАГ (мкмоль/мл)/1,73 м2,
Индекс №3 = ОП (мкмоль/мл)/КР (мкмоль/мл) х масса тела (кг),
Индекс №4 = ГАГ (мкмоль/мл)/КР (мкмоль/мл) х масса тела (кг).

У детей первых трех лет жизни отмечена самая высокая почечная экскреция ОП в пересчете па стандартную поверхность тела (1,73 м2): среднее значение индекса № 1 у них составило 1,44+0,27. У детей 12—15 лет индекс № 1 несколько меньше — 0,92±0,45, но статистически недостоверно. У взрослых средняя величина индекса № 1 составила 0,19+0,05, т. е. экскреция ОП, отнесенная к стандартной поверхности тела, у них была почти в 5 раз ниже, чем у детей подросткового возраста.

Аналогичные изменения отмечались в динамике индекса № 2, величина которого снижалась с 0,1 ±0,013 у детей 1—3 лет до 0,046 + 0,001 у детей 12-15 лет.
При пересчете почечной экскреции ОП и ГАГ на экскрецию креатинина и на 1 кг массы тела (индексы № 3 и № 4) удалось установить, что средние значения данных индексов с возрастом также постепенно уменьшались. Так, индекс № 3 у детей 1—3 лет составил 0,066+0,008, а у детей старшего возраста (12—15 лет) — 0,020+0,002, индекс № 4 в период первых 3 лет жизни был равен 0,008+0,001, а у детей 12—15 лет — 0,0017+ + 0,0002, т. е. уменьшился почти в 5 раз. Следовательно, при оценке физического развития ребенка может быть использован любой из четырех индексов.

Однако изменение индекса № 1 у детей первых трех лет жизни было статистически недостоверным, и поэтому пользоваться этим индексом при оценке физического развития детей раннего возраста нельзя. Использование индекса № 1 целесообразно только у подростков старше 15 лет.

Читайте также:  100 анализ мочи по нечипоренко

Известно, что здоровый человек в течение суток с мочой выделяет около 10 мг кислых ГАГ и около 100 мг ОП. Больные же с наследственной патологией обмена веществ соединительной ткани могут выделять с мочой значительно большие количества этих метаболитов. Среди этих генетически детерминированных заболеваний можно назвать мукополисахаридозы, синдром Марфана, несовершенный остеогенез, болезнь Олье и др.

— Вернуться в оглавление раздела «генетика»

источник

Комплексное исследование, направленное на определение содержания аминокислот и их производных в моче в целях диагностики врождённых и приобретенных нарушений аминокислотного обмена.

Состав комплекса: Аланин • Аргинин • Аспарагиновая кислота • Цитруллин • Глутаминовая кислота • Глицин • Метионин • Орнитин • Фенилаланин • Тирозин • Валин • Лейцин • Изолейцин • Гидроксипролин • Серин • Аспарагин • Alpha-аминоадипиновая кислота • Глутамин • Таурин • Гистидин • Треонин • 1-метилгистидин • 3-метилгистидин • Gamma-аминомасляная кислота • Alpha-аминомасляная кислота • Пролин • Лизин • Цистин • Триптофан • Гомоцистин • Фосфоэтаноламин • Фосфосерин • Этаноламин

Аминокислотный профиль, скрининг аминоацидопатий.

Синонимы английские

Amino acid profile, screening of aminoacidopathy.

Высокоэффективная жидкостная хроматография.

Мкмоль / л (микромоль на литр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Среднюю порцию утренней мочи.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
  • Исключить прием мочегонных препаратов в течение 48 часов до сбора мочи (по согласованию с врачом).

Общая информация об исследовании

Аминокислоты – это органические соединения, которые являются основными структурными компонентами белков. В свободном или связанном состоянии они участвуют в ферментативных реакциях, гормональных процессах, выполняют роль нейротрансмиттеров, участвуют в метаболизме холестерола, регуляции рН, контроле воспалительных реакций.

Всего в составе белковых молекул в организме человека было обнаружено 20 аминокислот, из которых часть является незаменимыми, то есть они не синтезируются в организме и должны постоянно присутствовать в употребляемой человеком пище. К незаменимым аминокислотам относятся лизин, гистидин, аргинин, треонин, валин, метионин, триптофан, фенилаланин, лейцин, изолейцин. К заменимым относятся аланин, аргинин, цистин, цистеин, гистидин, глицин, серин, аспарагиновая кислота, тирозин, пролин, оксипролин, глутаминовая кислота. Помимо этого, известен ряд аминокислот, которые являются производными и важными биологическими компонентами других аминокислот.

Анализ аминокислот в моче позволяет оценить их качественный и количественный состав, получить информацию об имеющемся дисбалансе, что может свидетельствовать о пищевых и метаболических нарушениях, лежащих в основе большого числа заболеваний. Следует отметить, что снижение количества той или иной аминокислоты в моче происходит раньше, чем в плазме крови. Учитывая эти обстоятельства и доступность исходного биоматериала, определение аминокислот в моче может быть рекомендовано для оценки ранних изменений аминокислотного состава.

Для определения качественного и количественного состава аминокислот в моче используется метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Он относится к современным хроматографическим методам анализа. Хроматография – это метод разделения и определения веществ, основанный на распределении компонентов между двумя фазами – подвижной и неподвижной. Жидкостная хроматография – метод разделения и анализа сложных смесей веществ, в котором подвижной фазой является жидкость. Он позволяет разделить и выявить количественно более широкий круг веществ с различной молекулярной массой и размерами, в данном случае аминокислот в моче. Исследуются следующие аминокислоты и их производные.

Аланин является одним из источников синтеза глюкозы и регулятором уровня сахара в крови, а также важным энергетическим компонентом для органов центральной нервной системы.

Аргинин участвует в ряде ферментативных реакций и выведении из организма остаточного азота в составе мочевины, креатинина, орнитина, в репаративных процессах.

Аспарагиновая кислота участвует в реакцияхцикла переаминирования и мочевины, синтезе пуриновых и пиримидиновых оснований, регуляции синтеза иммуноглобулинов.

Цитруллин участвует в стимуляции процессов иммунной системы, в процессах детоксикации в печени.

Глутаминовая кислота является нейромедиаторной аминокислотой, стимулирующей передачу возбуждения в синапсах центральной нервной системы. Участвует в обмене белков, углеводов, окислительно-восстановительных процессах, детоксикационных процессах и выведении аммиака из организма. Также принимает участие в синтезе других аминокислот, ацетилхолина, АТФ (аденозинтрифостфата), в переносе ионов калия, входит в состав скелетной мускулатуры.

Глицин является нейромедиаторной аминокислотой, регулирующей процессы торможения и возбуждения в центральной нервной системе. Участвует в выработке порфиринов, пуриновых оснований. Повышает обменные процессы в головном мозге, улучшает умственную работоспособность.

Метионин – это аминокислота, которая необходима для синтеза адреналина, холина. Участвует в обмене жиров, фосфолипидов, витаминов, активирует действие гормонов, ферментов, белков. Является источником серы в выработке серосодержащих аминокислот, в частности цистеина. Метионин также обеспечивает процессы детоксикации, способствует пищеварению, является одним из источников синтеза глюкозы.

Орнитин участвует в синтезе мочевины, снижении концентрации аммиака в плазме крови, регулирует кислотно-щелочной баланс в организме человека. Необходим для синтеза и высвобождения инсулина и соматотропного гормона, для нормального функционирования иммунной системы.

Фенилаланин необходим для синтеза нейромедиаторов: адреналина, норадреналина, допамина. Улучшает работу центральной нервной системы, функционирование щитовидной железы.

Аминокислота тирозин необходима в биосинтезе меланинов, дофамина, адреналина, гормонов щитовидной железы. Улучшает работу надпочечников, щитовидной железы, гипофиза.

Валин является важным источником для функционирования мышечной ткани, участвует в поддержании баланса азота в организме, регулирует восстановительные процессы в поврежденных тканях.

Лейцин является важным компонентом в синтезе холестерина, других стероидов и гормона роста и, следовательно, участвует в процессах регенерации тканей и органов.

Изолейцин участвует в энергетических процессах организма, регулирует уровень глюкозы в крови, необходим для синтеза гемоглобина и также участвует в регенерации кожи, мышечной, хрящевой и костной тканей.

Гидроксипролин является компонентом большинства органов и тканей организма человека, входит в состав коллагена.

Аминокислота серин необходима для синтеза пуриновых и пиримидиновых оснований, а также для ряда других аминокислот (цистеина, метионина, глицина). Участвует в обмене жирных кислот и жиров, в функционировании некоторых ферментов.

Аспарагин является важным регулятором процессов, происходящих в центральной нервной системе (возбуждение-торможение), участвует в метаболизме и синтезе аминокислот в печени.

Альфа-аминоадипиновая кислота является одним из продуктов конечного обмена аминокислот.

Глутамин участвует в синтезе углеводов, других аминокислот, нуклеиновых кислот, ферментов. Обеспечивает поддержание кислотно-щелочного равновесия, необходим для синтеза белков скелетной и гладкомышечной мускулатуры, обладает антиоксидантной активностью.

Таурин способствует увеличению энергетической активности клеток, участвует в процессах заживления и регенерации, нормализует функциональное состояние клеточных мембран.

Гистидин является исходным веществом при синтезе гистамина, мышечных белков, большого числа ферментов. Входит в состав гемоглобина, участвует в процессах регенерации и роста тканей.

Треонин необходим в синтезе коллагена и эластина, регулирует обмен веществ за счет участия в функционировании работы печени, белковом и жировом обмене.

1-метилгистидин и 3-метилгистидин являются одними из показателей распада белков мышечной ткани.

Гамма-аминомасляная кислота в основном содержится в центральной нервной системе и головном мозге. Участвует в обменных процессах в данных органах, в процессах нейромедиаторной передачи импульсов, оказывая тормозящее действие на нервную активность, а также играет роль в метаболизме глюкозы.

Альфа-аминомасляная кислота участвует в синтезе некоторых белков и является продуктом биосинтеза офтальмовой кислоты, являющейся структурным компонентом хрусталика глаза.

Пролин входит в состав большинства белков, а также является компонентом инсулина, адренокортикотропного гормона, коллагена. Способствует восстановлению кожи, соединительной ткани.

Лизин входит в состав большинства белков, необходим дляроста, восстановления тканей, синтеза гормонов, ферментов, антител, синтеза коллагена.

Цистин является компонентом множества белков и донором тиольных групп для пептидов, что играет важную роль в их метаболизме и биологической активности. Входит в состав инсулина, соматотропного гормона.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики аминокислотного состава мочи;
  • Для диагностики врождённых и приобретенных нарушений аминокислотного обмена;
  • Для диагностики первичных аминоацидопатий;
  • Для скрининговой диагностики вторичных аминоацидопатий;
  • Для контроля проводимой лекарственной терапии;
  • Для оценки нутритивного статуса.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на нарушение аминокислотного обмена, аминоацидопатии;
  • При нарушении питания, диете, приеме белковых препаратов, гормональных веществ;
  • При подозрении на нарушение обмена, состава аминокислот в организме человека;
  • При подозрении на врождённые и приобретенные аминоацидопатии.

Референсные значения (мкмоль/л)

Референсные значения,
ммоль/моль
креатинина

источник

Применение: медицина. Сущность изобретения: определяют соотношение между содержанием гликозаминогликанов в сыворотке , крови и в моче. Системное заболевание соединительной ткани диагностируют при значении этого соотношения 0,07 и выше . Цель изобретения — повышение точности диагностики нарушений метаболизма соединительной ткани.

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4737438/14 (21) 14.09.89 (46) 23.02.93. Бюл. М 7 (71) 2-й Московский государственный медицинский институт им. Н,И.Пирогова (72) Ю.А.Князев, Л,Ф.Марченко и И.В.Хамага нова (56) СИп. СЫп1. Acta, 1975, v. 62, р. 195-202. (54) СПОСОБДИАГНОСТИКИ СИСТЕМНЫХ

ЗАБОЛЕВАНИЙ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ

Изобретение относится к медицине и применяется для определения патологических изменений со стороны соединительной ткани при различных системных заболеваниях, Способ диагностики системных заболеваний соединительной ткани путем исследования сыворотки крови заключается в том, что для повышения точности и сокращения времени исследования в сыворотке крови и в моче определяют содержание гликозаминогликанов (ГАГ).

Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани исследуются различные параметры, в частности исследуется соотношение между белковыми фракциями, для чего применяется электрофоретическое разделение на бумаге, Принцип определения основан на различной скорости перемещения фракций в электрическом поле. Для системных заболеваний характерна гипергаммаглобулинемия, наиболее выраженная s активной стадии, при тяжелом течении патологического процесса. В то же время диспротеинемия может отсутствовать у 40-707;,, Ы„„1797062 А1 (57); медицина. Сущность изобретения; определяют соотношение между содержанием гликозаминогликанов в сыворотке крови и в моче. Системное заболевание соединительной ткани диагностируют при значении этого соотношения 0,07 и выше. Цель изобретения — повышение точности диагностики нарушений метаболизма соединительной ткани.

l ь больных. Данный признак рассматривается как неспецифический.

В диагностике также используется опре- 2 деление содержания С-реактивного белка унифицированным методом кольцпреципитации в капиллярах, Принцип метода основан на том, что сыворотка крови, содержащая белок острой фазы, образует хлоп ьевидн ый и реципитат при взаимодействии со специфической преципитирующей иммун- 0 ной сывороткой к этому антигену. При низ- ( кой активност и процесса, нетяжелом Я . течении С-реактивный белок может отсутствовать. Покааатель не выявляется у бб-бб больнык, также является неспецифическим.

Отсутствие корреляции между указан° вий ными показателями и точностью диагностики ограничивает их значимость, Известен способ диагностики системных заболеваний путем исследования ГАГ в сыворотке крови.

Метод состоит из этапов: 1) ферментативный протеолиз сыворотки крови, осуществляемый добавлением к 1,5 мл свежей сыворотки 0,3 мл раствора проназы с последующим инкубированием в течении 4 ч при

45 С; 2) депротеинизация полученного гид. ролизата с последующим выделением и очисткой полученных ГАГ; 3) определение

ГАГ по уроновым кислотам карбазоловым методом, Данная. работа принята за прототип, По сравнению с предлагаемой она менее точна, Цель изобретения — повышение точности и ускорения способа диагностики нарушений метаболизма соединительной ткани.

Поставленная цель достигается тем, что определяют ГАГ в сыворотке крови и в моче, причем исследование ГАГ в моче проводят после ее фильтрования и инкубации 2-2,5 мл с цетилпиридинийхлоридом в течении 25-35 минут, определяют соотношение между содержанием ГАГ в сыворотке крови и в моче и путем увеличения данного коэффициента диагностируют системное заболевание соединительной ткани, Новым в представленном способе является определение соотношения между содержанием ГАГ в сыворотке крови и в моче.

Дополнительно разработан тест по выявлению степени тяжести патологического процесса, активности системных заболеваний соединительной ткани. В определении содержания ГАГ, зкскретируемых с мочой, после фильтрации исследуемого материала и, инкубирования с цетилпиридинийхлоридом, производится измерение на ФЭКе..

Сущность изобретения поясняется следующим образом, Пример, Больной Ю., 16 лет, поступил с диагнозом: генерализованная бляшечная склеродермия, с жалобами на неприятные ощущения типа легкого жжения, покалывания в области пораженного участка кожи на наружной поверхности правого бедра, стянутость в области голеней, Считает себя больным около 2 месяцев, когда после переохлаждения стали появляться сиреневатые пятна на коже груди, живота, бедер. Ранее лечение не проводилось, При поступлении общее состояние— удовлетворительное. Со стороны внутренних органов патологических изменений не выявлено, На коже шеи, груди, живота, предплечий, плеч, голеней имеются распространенные, сливающиеся очаги поражения, сиреневато-фиолетового цвета, уплотненные, с частично атрофированной поверхностью, занимающие большую часть кожного покрова. В области наружной поверхности правого бедра имеется белесовато-желтый уплотненный очаг до 6 см в диаметре, окруженный розовато-сиреневым венчиком до 0.3 см шириной, постепенно переходящей в неизмененную кожу, У больного взяли 4 мл крови из локтевой вены, 2,5 мл мочи для определения содержания

Кровь оставляли для коагуляции на 45 мин при 4 С, затем центрифугировали при

500 g 45 мин при 4 С. Добавляли 0,2 мл раствора проназы, содержащей 15 мл про.назы Е (на 1 мл 0,05 М трисацетатного буфера при рН 8). После протеолиза в тече10 ние 4 ч при 45 С добавляли 2,4 мл водяного раствора 17″-,ь NaCI, а затем 60 мл 3 и уксусной кислоты; заткнули пробирку пробкой и нагревали, выдерживая при100 С втечение

5 мин и охлаждали в водяной бане, Центри15 фугировали при 30 000 g в течение 20 мин, затем брали 3 мл чистого супернатанта и помещал встеклянную пробирку,,Добавляли 9 мл этанол/ацетата при 4 С (0,2 r ацетата к 250 мл этанола), встряхивали, 20 выдерживали 1 ч при 4 С и центрифугировали при 3000 g 20 мин при 4 С. Декантировали супернатант, оставляли пробирку перевернутой на фильтрованной бумаге в течение 5 мин, добавляли 6 мл 0,015 цетилпиридинийхлорида при 37 С в 0,02 M

NaCl. Смешивали энергично до полного ресуспендирования осадка и. оставляли на 15 ч при 4 С. Нагревали пробирку до 20 С и .центрифугировали при 3000 g 20 мин при

30 комнатной температуре. Осторожно удаляли супернатант и оставляли пробирку перевернутой на фильтровальной бумаге в течение 5 мин. Добавляли к осадку 0,25 мл

0,15N серной кислоты и переносили в 37 С.

35 Затем добавляли 1,5 мл 0,0125 M Na тетрабората в концентрированной серной кислоте. Охлаждали этот раствор до 4 С и вливали медленно по стенке пробирки. Смешивали, пробирку помещали в ледяную ба40 ню, затем накрывали и нагревали 5 мин при

100 С, Охлаждали до комнатной температуре, перемешивали и переносили в спектрофотометрическую кювету, измеряли абсорбцию при 520 нм. Вычисление произ45 водили по формуле:

А текс оновые кислоты сыво отки 1 2

A гексуроновые кислоты сыворотки — абсорбция сыворотки

Читайте также:  1025 sg в анализе мочи

50 А стандарт — абсорбция стандарта

1,22 — фактор корреляции, соответствующий потере объема 1 мл сыворотки в процессе теста стандарт: 10 мг глюкуроновой кислоты в

55 0,25 мл 0,15 N серной кислоты

A гек DHHOebl9 кислоты CblSO OOOTKKMM

Для определения экскретируемых ГАГ в качестве контрольной пробы взяли 1 мл и рофильтрованной мочи и 1 мл 0,1 М цитратного буфера. в качестве опытной пробы — 1 мл профильтрованной мочи и 1 мл цетилпиридинийхлорида; одновременно с опытной и контрольной пробами ставился стандарт: в пробирке вмешивали 0,1 мл основного стандарта, приготовленного из расчета 0,02 г хондроитинсульфата на 100 мл 0,1 М цитратного буфера, 0,9 мл HzO, 1 мл 0,1%-ного цетилпиридинийхлорида. Во всех пробирках содержимое перемешивали, после 25 мин пребывания при комнатной температу ре вновь перемешивали и производили измерение на ФЭКе-56 против HgO в кюветах

0,5 см. синий светофильтр N .3. Содержание

ГАГ определялось иэ расчета на количество креатинина, исследуемого следующим образом: в качестве контрольной пробы взяли

0,5 мл свежей профильтрованной мочи, 3 мл

2%-ного раствора пикриновой кислоты, тщательно перемешзли и добавили 0,2 мл l0%-ной NaOH, после 10 мин при комнатной температуре добавили Н20 да объема

100,мл; в качестве контрольной пробы: к 3 мл 2%-ного раствора пикриновой кислоты добавяли 0,2 мл f 0% ИаОН и довели до 100 мл Н20; в качестве стандартной пробы: 3 мл

2%-ной пикриновой кислоты, 0,2 мл 10% йаОН добавили к 0,5 мл основного раствора стандарта креатинина, после f0 мин при комнатной температуре добавили Н20 до

100 мл; измерили против контроля опытную и стандартную пробы на ФЗКе 56 с синим светофильтром М 3. Получили содержание креатинина,. рассчитанное по формуле

Е 2л, — экстинкция опытной пробы

Е ст. — экстинкция стандартной пробы

Содержание ГАГ рассчитывали по формуле:

Е ст.к. х = E o 20 а» г гаетгхреат

= 30 r ГАГ/кг креат., где Е o. — экстинкция опытной пробы

Е ст.к. — экстинкция стандартной пробы для креатинина

Е ст. — экстинкция стандартной пробы

Е о.к. — экстинкция опытной пробы креатинина

20 — коэффициент корреляции, соответствующий потере объема.

Так как показатели содержания ГАГ в сыворотке крови и в моче могут колебаться в сравнительно больших пределах, но в организме постоянно поддерживается баланс между синтезируемыми и экскретируемыми

ГАГ, произвели определение соотношения между содержанием ГАГ в сыворотке крови и в моче, используя для удобства умножение коэффициента на 10 . У больного Ю. коэффициент составил:

Для сравнения у здоровых доноров ко20 эффициент составляет в среднем

0,04 + 0,009 г гГАГ л кг креат, Пример. Больная К., 16 лет, поступила с диагнозом: системная склеродермия, с жа25 лобами на общую слабость, недомогание, неприятные ощущения типа легкого жжения, «бегания мурашек» по коже, уплотнения кожи кистей, предплечий, изъязвления на коже кистей, ограничение подвижности мелких суставов кисти, локтевых, коленных, потерю массы тела. Ранее лечение не проводилось.

При поступлении общее состояние — от.. носительно удовлетворительное. Больная пониженного питания, отмечается анемия лица, сужение ротовой щели, диффузное уплотне.we кожи, более выраженное на кистях, предплечьях, диффузная гиперпигментация, выражены сгибательные контрактуры в мел0 ких суставах кисти, объем движений в локтевых и коленных суставах ограничен. В легких дыхание — везикулярное, тоны сердца — приглушены; ритмичны, живот — мягкий, безболезненный, печень. не увеличена, симптом

Пастернацкого — отрица.тельный с обеих сторон. У больной взяли 4 мл крови из локтевой вены, 3 мл мочи для определения содержания ГАГ.

Кровь оставляли для коагуляции на 45

50 минпри4 С,азатемцентрифугировали при

500 g 45 мин при 4 С. Добавили 0,2 мл раствора. проназы, содержащей 15 мл проназы Е (на 1 мл 0,05 М трисацетатного буфера при рН 8). После протеолиза в течение 4 ч при 45 С добавляли 2,4 мл водного раствора 17%-ной HaCI, а затем 60 мл 3 N уксусной кислоты, заткнули пробирку пробкой и нагревали, выдерживая при 100 С в течение 5 мин и охлаждали в водяной бане.

Центрифугировали при 30000 g втечение 20 мин, затем брали 3 мл чистого супернатанта и помещали в стеклянную пробирку, Добавляли 9 мл этанол/ацетата при 4 С (0,2 г ацетата к 250 мл этанола), встряхивали, вы- 5 держивали 1 ч при 4 С и центрифугировали при 3000 g 20 мин при 4 С. Декантировали супернатант, оставляли пробирку перевернутой на фильтровальной бумаге в течение 5 мин, добавляли 6 мл 0,0147ь цетилпиридиний- 10 хлорида при 370 С в 0,02 M NaCI, Смешивали энергично до полного ресуспендирования осадка и оставляли на15мин при4 С. Нагревали пробирку до 20 С и центрифугировали при

3000g 20 мин при комнатной температуре. Ос- 15 торожно удаляли супернатант и оставляли пробирку перевернутой на фильтровальной бумаге в течение 5 мин. Добавляли к осадку

0,25 мл 0,15 N серной кислоты и переносили в

370 С. Затем добавляли 1,5 мл 0,0125 M тетра- 20 бората в концентрированной серной кислоте. Охлаждали этот раствор до 4 С и вливали медленно по стенке пробирки. Смешивали, пробирку помещали в ледяную баню, затем накрывали и нагревали 5 мин при 25

100 С. Охлаждали до комнатной температуры, перемешивали и переносили в спектрофотометрическую кювету, измеряли абсорбцию при 520 нм. Вычисление производили по формуле: 30

А гекс оновые кислоты сыво отке х 1,22

10 мг глюкуроновой кислоты в 0,25 мл

Для определения экскретируемых ГАГ в качестве контрольной пробы взяли 1 мл профильтрованной мочи и 1 мл 0,1 М цитратного буфера, в качестве опытной пробы — 1, мл профильтрованной мочи и 1 мл цетилпиридинийхлорида; одновременно с опытной и контрольной пробами ставился стандарт: в пробирке смешивали 0,1 мл основного стандарта, приготовленного иэ расчета 0,02 r хондроитинсульфата на 100 мл 0,1 M цитратного буфера, 0,9 мл Н2О, 1 мл 0,1$ мл цетил50 пиридиниЙхлорида. Во всех пробирках содержимое перемешивали, после 35 мин пребывания при комнатной температуре вновь перемешивали и производили измерение на ФЭКе 56 против Н О в кюветах 0,5 см; синий светофильтр М 3. Содержание

ГАГ определялось иэ расчета на количество креатинина, исследуемого следующим образом: в качестве контрольной пробы взяли

А гекс оновые кислоты сыво тки х I,22

0,5 мл свежей профильтрованной мочи, 3 мл

2) -ного раствора пикриновой кислоты, тщательно перемешали и добавили 0,2 мл

10 -ной NaOH, после 10 мин при комнатной температуре добавили НгО до объема

100 мл; в качестве контрольной пробы: к 3 мл 2 раствора пикриновой кислоты 0,2 мл

107-ной NaOH и довели до 100 мл HzO; в качестве стандартной пробы: 3 мл 2 пикриновой кислоты, 0,2 мл 10 Ns0H добавили к 05 мл основного раствора стандарта креатинина, после 10 мин при комнатной температуре добавили Н О до 100 мл; измерили против контроля опытную и стандартную пробы на ФЗКе-56 синим светофильтром

В 3. Получили содержание креатинина, рассчитанное по формуле:

Е 0д. 100. — 90мг $, где где Е an. — экстинкция опытной пробы

Е с>. — экстинкция стандартной пробы

Содержание ГАГ рассчитали по формуле:

Е оп . 20 Е ст.к. оп » ê. r ГА У„

0,12 ° 0,270 — 44 г ГАГ/кг креат . где Е О, — экстинкция опытной пробы

Е ст.к. — Экстинкция стандартной пробы для креатинина

Е в y,. — экстинкция опытной пробы креатинина

20 — коэффициент корреляции, Соотношение между содержанием ГАГ в сыворотке крови и в моче составило:

44 л кг креат. г rГАГ л кг креат, Пример. Больная С., 66 лет поступила с диагнозом: склероатрофический лихен, сопутствующее заболевание: сахарный диабет легкой степени тяжести, Предъявляла жалобы на легкий зуд, периодически — чувство покалывания, жжение на различных участках кожного покрова, высыпачия на туловище, конечностях.

При поступлении общее состояние— удовлетворительное. Больная повышенного питания, имеется диффузное поражение кожного покрова в виде белесоватых участков атрофии, с блестящей поверхностью, частично сливающихся. Со стороны внутренних органов на момент осмотра патологических изменений нет. У больной взяли 4 мл крови из локтевой вены, 3,5 мл мочи для определения содержания ГАГ.

Кровь оставляли для коагуляции на 45 мин при 4 С, а затем центрифугировали при

500 g 45 мин при4 С. Добавили 0,2 мл раствора проназы, содержащей 15 мл проназы

Е (1 мл 0,05 М трисацетатного буфера при рН 8), После ротеолиза в течение 4 ч при

45 С добавляли 2,4 мл водного раствора

17 -ной NaCI, а затем 60 мл 3 N уксусной. кислоты, заткнули пробирку пробкой и нагревали, выдерживая при 100 С в течение 5 мин и охлаждали в водяной бане. Центрифугировали при 30 000 g в течение 20 мин, затем брали 3 мл чистого супернатанта и помещали в стеклянную пробирку. Добавляли 9 мл зтанол-ацетата при4 С(0,2 гацетата

Иа к 250 мл этанола), встряхивали, выдерживали 1 ч при 4 С и центрифугировали при

3000 g 20 мин при 4 С. Декантировали супернатант, оставляли пробирку перевернутой на фильтровальной бумаге в течение 5 мин, добавляли 6 мл 0,015% цетилпиридинийхлорида при 37 С в 0,02 М NaCI. Смешивали энергично до полного ресуспендирования осадка и оставляли на 15 ч при 4 С Нагревали пробирку до 20 С и центрифугировали при 3000 g 20 мин при комнатной температуре. Осторожно удаляли супернатант и оставляли пробирку пе ревернутой на фильтровальной бумаге в течение 5 мин.

Добавляли к осадку 0,25 мл 0,15 N серной кислоты и переносили в 37 С. Затем добавляли 1,5 мл 0,0125 M тетрабората Na в концентрированной серной кислоте.

Охлаждали этот раствор до 4 С и вливали медленно по стенке пробирки, Смешивали, пробирку помещали в ледяную баню, затем накрывали и нагревали 5 мин при 100 С.

Охлаждали до комнатной температуры, перемешивали и переносили в спектрофотометрическую кювету, измеряли абсорбцию при 520 нм. Вычисление производили по формуле:

А гекс оновые кислоты сыво отки х 1 22

Для определения зкскретируемых ГАГ в качестве контрольной пробы взяли 1 мл профильтрованной мочи и 1 мл 0,1 M цитратного буфера, в качестве опытной пробы — 1 мл профильтрованной мочи и 1 мл цетилпиридинийхлорида; одновременно с опытной и контрольной пробами ставился стандарт; в пробирке смешивали 0,1 мл основного стандарта, приготовленного из расчета 0,02 хондроитинсульфата на 100 мл 0,1 М цитратного буфера, 0,9 мл HzO 1 мл 0,1 М цетилпиридинийхлорида. Во всех пробирках

0,12 0,225 — 32 г ГАГ/кг креат .

Представленные примеры демонстрируют увеличение соотношения между содержанием ГАГ в сыворотке крови и в моче до 0,07 и выше. Определение данного пара40 метра позволяет повысить диагностическую точность до 81% по сравнению с 63% при использовании прототипа. В 19 случаев увеличения параметра до 0,07 и выше отмечено не было.

П ри мер. Больная Б.,20лет, поступила с диагнозом: бляшечная склеродермия; с жалобами на неприятные ощущения типа легкого жжения, покалывания в области пораженного участка кожи на наружной поверхности правого бедра. Считает себя больной около 5 месяцев, когда на месте сильного удара появилась сиреневая полоса до 2 см в.диаметре, постепенно увеличивавшаяся, Ранее лечение не проводилось, При поступлении общее состояние— удовлетворительное.

Со стороны внутренних органов патологических изменений не выявлено, На наружной поверхности верхней трети правого .бедра имеется белесоватый очаг размером содержимое перемешивали, после 30 минут пребывания при комнатной температуре вновь перемешивали и производили измерение на ФЭКе-56 против Н20 в кюветах 0,5

5 см, синий светофильтр N. 3. Содержание

ГАГ определялось из расчета на количество креатинина, исследуемого следующим образом: в качестве контрольной пробы: 3 мл

2 -ный пикриновой кислоты, 0,2 мл 10%

10 NaOH добавили к 0,5 мл основного раствора стандарта креатинина, после 10 мин при комнатной температуре добавили НгО до

100 мл; измерили против контроля опытную и стандартную пробы на ФЭКе-56 с синим

15 фильтром ¹ 3. Получили содержание креатинина, рассчитанное по формуле

Содержание ГАГ рассчитали по форму20 ле:

А гекс оновые кислоты сыво отки

А стандарт — 2,34 мг ГДГ/100 мл

2,34 10 г ГАГ/кг креат . 10 = 0,052 . х ок. ст Г f ДГ/кг креат . =

1 фильтрования и инкубации 2-2,5 мл мочи с цетилпиридинийхлоридом в течение 25-35 мин, затем рассчитывают соотношение между содержанием гликозаминогликанами в сыворотке крови и в моче и при значении полученного показателя 0,07 и выше диагностируют системное заболевание соединительной ткани.

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор H.Ðåâñêàÿ

Заказ 651 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 до 4 см, плотный, окруженный сиреневой, полосой до 0,3 см шириной, постепенно переходящей в неизмененя1ю кожу. У больной взяли 4 мл крови из локтевой вены, 2,5 мл мочи для определения содержания ГАГ, Кровь оставляли для коагуляции на 45 мин при 4 С, а затем провели определение содержания ГАГ по приведенной выше методике. Вычисление проводили по формуле: сыворотки = 2,34 10 гlл .

Для определения экскретируемых ГАГ контрольную, опытную и стандартную пробу ставили в соответствии с описанием, приведенным а примере 1. Во всех пробирках содержимое перемешивали, после 35 мин пребывания при комнатной температуре вновь перемешивали и производили измерение на ФЗКе-56 против Н20 в кюветах 0,5 см, синий светофильтр В 3.

Содержание ГАГ рассчитали по формуле:

Способ диагностики системных заболеваний соединительной ткани путем исследования сыворотки крови, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что с целью повышения точности способа, в cblBopoJKe крови и в моче опре-. деляют содержание гликоэаминогликанов, причем определение в моче проводят после

=45 г ГАГ/кг креат. где E ст.к, — экстинкция стандартной пробы для креатинина

E ол. к -экстинкция опытной пробы ГАГ

5 Е ст. — экстинкция стандартной пробы

Е оп. к — экстинкция опытной пробы креатинина, 20 — коэффициент корреляции, соответ10 ствующий потере обьема

Так как показатели содержания ГАГ в сыворотке крови и в моче могут колебаться и сравнительно больших пределах, но а организме постоянно поддерживается баланс

15 между синтезируемыми и экскретируемыми

ГАГ, произвели определение соотношения между содержанием ГАГ в сыворотке крови и в моче, используя для удобства умножение коэффициента на 10 . У больной Б. коэффи20 циент составил:

Для сравнения у здоровых доноров коэффициент составляет в среднем

3р 0,04+ 0,009 . В данном случае его

r.ã ГДГ кг кр. повышение не позволяет диагностировать системное заболевание соединительной ткани, так как показатель не достигает 0,07.

источник