Меню Рубрики

Анализ мочи на туберкулез вместо манту инвитро

  • Полимеразная цепная реакция: особенности метода
  • Возможна ли взаимозаменяемость диагностических методов?

Актуальной для родителей проблемой является правомерность и эффективность использования метода ПЦР на туберкулез вместо Манту.

Каждый год туберкулез поражает все большее количество населения, и дети в этом списке не являются исключением. Эффективность лечения напрямую зависит от быстрой и достоверной диагностики, позволяющей определить микобактерии заболевания. Не менее важным является определение наличия латентного (не проявляющегося внешне) туберкулеза, что позволяет вовремя начать профилактическое лечение и предотвратить таким образом активный этап в его течении.

Традиционно в профилактических целях используется вакцина БЦЖ, а в диагностических — проба Манту. Однако в последнее время в связи с возникающими после процедур осложнениями и неточностью диагностических результатов ставится вопрос о современной, более точной и эффективной альтернативе популярным ранее методам.

Один из прогрессивных методов диагностики туберкулеза — ПЦР. Возникает вопрос, является ли его применение вместо Манту оправданным и правомерным.

Полимеразная цепная реакция (понятие «цепной» реакции в данном контексте употребляется для обозначения серии процессов, связанных продуктом или энергией, которые одновременно являются участниками предыдущего и последующего этапа и приводят к ускорению или поддержанию реакций), открытие которой считается одним из наиболее значимых событий микробиологической науки последнего времени, позволяет ученым имитировать естественное самовоспроизведение ДНК с целью выявления специфических болезнетворных молекул.

Результаты этого доказательного и высокочувствительного метода можно получить уже через 1-2 дня. Для сравнения, результаты распространенного культурального метода с применением тестов готовы минимум через 6 недель, а в среднем процедура длится до 15 недель.

БЦЖ не позволяет определить, в каких случаях речь идет о поствакцинальной аллергии, а в каких — о сенсибилизации организма болезнетворными микобактериями туберкулеза. Культуральный метод не дает возможности отличить дикие штаммы и вакционные (M. bovis и M. bovis BCG соответственно).

Со всеми этими задачами прекрасно справляется ПЦР, однако этот факт не является свидетельством того, что она может быть использована вместо Манту.

Следует обратить внимание на то, что Манту и ПЦР применяются для разных целей, поэтому по поводу взаимозаменяемости этих методов до сих пор продолжаются дискуссии.

Распространено мнение, что полимеразной реакцией выявляются возбудители среди множества микробов, для чего достаточно биологической жидкости (например, крови, мочи либо слюны) в объеме 1 мл. Следует учитывать, что микобактерия может пребывать в клетке или в очажке, тогда в анализируемой жидкости фрагментов ДНК возбудителя не найдется: ПЦР даст отрицательный результат.

При клинически подтвержденном туберкулезе легких, что означает наличие возбудителя в организме ребенка, ПЦР дает положительные результаты в 25-80%, при этом ориентировочно 10% результатов будут ложноположительными.

Становится понятно, что даже при отрицательных результатах ПЦР вполне возможна постановка диагноза туберкулез. Иными словами, полимеразная цепная реакция не может быть рекомендована в качестве самостоятельного метода для диагностики туберкулеза.

Однако вследствие того, что данный способ позволяет определить не антитела, а антиген, его успешно применяют тогда, когда организм ребенка не вырабатывает иммунитета при наличии возбудителя заболевания.

ПЦР незаменима в случаях с диагностикой тяжелых или внелегочных форм туберкулеза, при сопутствующем иммунодефиците.

В таких ситуациях диагноз другими методами не устанавливается.

Эффективность метода ПЦР для выявления микобактерий туберкулеза и определения их видов была доказана в результате исследования (отображено в журнале «Туберкулез и болезни легких» №6 за 2013 год), проведенного в МГНПЦБТ.

Впрочем, проблема связана с тем, что родители, переживая из-за негативных последствий Манту, отказываются от этого вида исследования профилактической пробы и, естественно, сталкиваются с проблемами документации при оформлении детей в учебные учреждения.

При отказе родителей от пробы Манту врач может посоветовать выполнить рентгеновское обследование или диагностическое исследование ПЦР.

источник

КВАНТИФЕРОНОВЫЙ ТЕСТ (QuantiFERON®-ТВ Gold) – современный лабораторный тест для выявления туберкулезной инфекции, альтернатива классическому кожному тесту с туберкулином. В настоящий момент в различных странах разработано и выпущено большое число национальных рекомендаций по применению данного теста.

Квантифероновый тест основан на определении INF-γ (гамма-интерферона), высвобождаемого сенсибилизированными Т-клетками, стимулированными in vitro специфическими протеинами (ESAT-6, CFP-10, TB7.7 (p4)) микобактерий туберкулеза, входящих в комплекс Mycobacterium tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi, M. microti, M. africanum и др.). Эти протеины отсутствуют в вакцинных штаммах M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M. kansasii, M. szulagai, M. marinum.

В исследуемой крови пациента (из пробирки с ТВ-антигеном) определяется содержание INFγ, результат анализируется в совокупности с данными, полученными из 2-х других пробирок (выполняющих роль контрольных).

Примерно 1/3 часть населения мира инфицирована МБТ, и только у 5-10% инфицированных лиц развивается заболевание. При наличии неблагоприятных факторов латентная туберкулезаня инфекция (ЛТИ – состояние, когда микобактерии туберкулеза (МБТ) присутствуют в организме человека, но при этом отсутствуют клинические и рентгенологические признаки туберкулеза) может перейти в активную форму с развитием внелегочного туберкулеза (например, туберкулез почек).

К группе высокого риска инфицирования МБТ относятся лица, имевшие контакт с больным туберкулезом, или имеющие высокую вероятность контакта (работники противотуберкулезных диспансеров, приютов, исправительных учреждений и др.), а также лица с сопутствующими заболеваниями (ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом и др.).

Используемые для диагностики ЛТИ кожные тесты – проба Манту и Диаскинтест®, имеют ряд противопоказаний и ограничений к применению.

Противопоказания к проведению пробы Манту и Диаскинтеста:

  • Индивидуальная непереносимость туберкулина;
  • Острые и хронические инфекционные заболевания и соматические заболевания в период обострения;
  • Кожные заболевания и аллергические состояния в период обострения;
  • Период карантина в детских коллективах.

У пациентов с индивидуальной гиперчувствительностью к туберкулину может наблюдаться ложноположительная реакция.

Сравнение тестов для диагностики туберкулезной инфекции

Параметр Проба Манту Диаскинтест® Квантифероновый тест
Метод исследования Кожный тест Кожный тест Исследование крови
Побочные реакции Возможны Возможны Нет
Противопоказания Есть Есть Нет
Специфичность Низкая Высокая Высокая
Ложноположительные результаты после вакцинации БЦЖ Да Нет Нет
Зависимость от сроков проведения профилактических прививок Да (не ранее чем через месяц) Да (не ранее чем через месяц) Нет
Интерпретация результатов Субъективна Субъективна Объективна

Преимущества КВАНТИФЕРОНОВОГО ТЕСТА:

  • отсутствие противопоказаний и ограничений по времени проведения;
  • отсутствие ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;
  • безопасность процедуры и отсутствие побочных реакций;
  • интерпретация результатов этого теста менее субъективна, чем интерпретация результатов кожных туберкулиновых тестов;
  • высокая специфичность (99,1%) и высокая чувствительность (89,0%).

Показания к назначению КВАНТИФЕРОНОВОГО ТЕСТА:

  • Выявление ЛТИ в группах высокого риска: работники специализированных противотуберкулезных и других учреждений, где есть высокий риск контакта с возбудителем или больным туберкулезом, пациенты с сопутствующими заболеваниями и др.;
  • Наличие известных контактов с больным туберкулезом (бактериовыделителем);
  • Наличие положительной реакции пробы Манту для исключения поствакцинальной реакции;
  • Наличие противопоказаний к проведению кожных туберкулиновых проб (пробы Манту и Диаскинтеста®);
  • Дифференциальная диагностика инфекций, вызванных МБТ;
  • Обследование иммигрантов.

Пример результата исследования и интерпретация:

Параметр Результат Критерии оценки результатов
Содержание гамма-интерферона в контрольной пробирке (NIL) 0,05 До 8,00
Содержание гамма-интерферона в пробирке с ТВ-антигеном (ТВ Ag) 0,09 Менее 0,35 (или свыше 0,35, но до 25% контрольного значения NIL)
Содержание гамма-интерферона в пробирке с митогеном (Mitogen) 9,56 От 0,50
Квантифероновый тест (диагностика туберкулеза) Отрицательный Отрицательный

Интерпретация результата исследования

Положительный результат Сомнительный результат Отрицательный результат
  • Инфицирование МБТ;
  • Инфицирование нетуберкулезными микобактериями (M. kansasii, M. szulgai, M. marinum).
  • Индивидуальные особенности иммунитета;
  • Нарушение преаналитических требований.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 — 2019

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

источник

Всем здравствуйте!
Девочки, кто сдавал детям кровь в Инвитро на определение наличия/отсутствия туберкулеза, подскажите, пожалуйста, какой анализ сдавали: за 360 р. (Микобактерии туберкулеза, определение ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в сыворотке крови) или за 1500 р (Антитела суммарные IgM+IgG+IgA к Mycobacterium tuberculosis) ? Читать полностью
+8 Зарегистрируйтесь и получите возможность оценивать материалы, общаться в комментариях и многое другое!’)»> Зарегистрируйтесь и получите возможность оценивать материалы, общаться в комментариях и многое другое!’)»> MarM 18.07.2019 372 7 50 комментариев
Все рецепты
Рецепты от Поваренок.ру
Хрустящее сырное печенье
Оторваться просто невозможно, первую только откусываешь,
Подробнее »
Запеченный картофель «Криспи .
Crispy Gratin. Предлагаю вашему вниманию замечательный .
Подробнее »
Индийская сладость «Расгулла» .
Rasgulla. Скажу вам, что, если вы никогда не пробовали .
Подробнее »
Тот самый сацебели
Думаю, что одно из ярких воспоминаний, которое вы привезли .
Подробнее »

Перечисленные Вами методы анализа не информативны для тех целей, из-за которых проводится туберкулинодиагностика. Альтернативой Манту и Диаскинтесту могут служить только Квантифероновый тест или T.SPOT-TB.

То, что Вы перечислили, это методы ПЦР и ИФА.
Цель туберкулинодиагностики у детей — это не только выявление заболевания ТБ, но и установление факта ПТИ (первичного инфицирования МБТ).

Метод ПЦР используется для диагностики заболевания туберкулёзом и абсолютно не подходит для выявления инфицирования. С помощью ПЦР ищут ДНК туб. палочек в биологическом материале: мокроте, промывных водах бронхов или желудка, моче, операционном материале, отделяемом свищей и пр. ПЦР крови во фтизиатрии не применяется, т. к. туб. палочка в кровеносном русле может находится очень кратковременно при генерализации процесса. Поэтому берегите свои деньги и никогда не ведитесь на анализ «ПЦР крови на туберкулез».
У детей с подозрением на туберкулез органов дыхания берут на анализ промывные воды бронхов или желудка. Мокроту дети не умеют откашливать, они её заглатывают. Если процесс расположен в легочной ткани, то ПЦР чаще всего положительный даже у детей. Если же это туберкулез внутригрудных лимфатических узлов (ТВГЛУ), наиболее частая форма туберкулёза в детском возрасте, то ПЦР будет отрицательным. Ну разве что при свищевой форме ТВГЛУ можно выявить туб. палочку. Но такая форма встречается крайне редко. Поэтому получив лишь только отрицательный анализ ПЦР мокроты или другого биологического материала, нельзя быть уверенным, что ребёнок здоров.
При инфицировании ни в одном биологическом материале туб. палочки не может быть априори, поэтому для его выявления применяться не может.

ИФА метод предполагает определение антител к туб. палочке. Даже при активной форме туберкулеза чувствительность этого метода не более 75%. Часто пациенты с активной формой туберкулёза, подтвержденной другими методами обследования, приносят отрицательный результат анализа, сделанный методом ИФА.
К тому же, всегда интересно, к какому виду туб. палочки определяли антитела? Их всего 5 видов. Чаще всего заболевание у человека вызывает человеческий и бычий тип. И в идеале результат анализа должен выглядеть так: IgG человеческий тип — отрицательно, IgG бычий тип — отрицательно. Но обычно результат выглядит так: антитела к micobacterium tuberculosis — отрицательно. Даже не всегда пишут какие антитела определяли G или М, хотя это имеет большое значение. IgМ — это антитела, которые вырабатываются при активном размножении туб палочки, а IgG — это антитела которые указывают на давность процесса.
Вывод — часто ложноотрицательный результат, поэтому для диагностики не подходит. Не может быть альтернативой Диаскинтесту и пробе Манту.

Поэтому методы ПЦР и ИФА являются лишь дополнительными методами диагностики туберкулеза.

Но в любом случае нужно помнить, что проба Манту, Диаскинтест, Квантифероновый тест, T-SPOT.TB являются лишь скрининговыми методами диагностики у детей. Их цель — выявить тех лиц, которых необходимо дообследовать дальше на туберкулез, а при отсутствии заболевания решить вопрос с профилактикой его возникновения в будущем.

То, что Вы перечислили, это методы ПЦР и ИФА.
Цель туберкулинодиагностики у детей — это не только выявление заболевания ТБ, но и установление факта ПТИ (первичного инфицирования МБТ).

Метод ПЦР используется для диагностики заболевания туберкулёзом и абсолютно не подходит для выявления инфицирования. С помощью ПЦР ищут ДНК туб. палочек в биологическом материале: мокроте, промывных водах бронхов или желудка, моче, операционном материале, отделяемом свищей и пр. ПЦР крови во фтизиатрии не применяется, т. к. туб. палочка в кровеносном русле может находится очень кратковременно при генерализации процесса. Поэтому берегите свои деньги и никогда не ведитесь на анализ «ПЦР крови на туберкулез».
У детей с подозрением на туберкулез органов дыхания берут на анализ промывные воды бронхов или желудка. Мокроту дети не умеют откашливать, они её заглатывают. Если процесс расположен в легочной ткани, то ПЦР чаще всего положительный даже у детей. Если же это туберкулез внутригрудных лимфатических узлов (ТВГЛУ), наиболее частая форма туберкулёза в детском возрасте, то ПЦР будет отрицательным. Ну разве что при свищевой форме ТВГЛУ можно выявить туб. палочку. Но такая форма встречается крайне редко. Поэтому получив лишь только отрицательный анализ ПЦР мокроты или другого биологического материала, нельзя быть уверенным, что ребёнок здоров.
При инфицировании ни в одном биологическом материале туб. палочки не может быть априори, поэтому для его выявления применяться не может.

ИФА метод предполагает определение антител к туб. палочке. Даже при активной форме туберкулеза чувствительность этого метода не более 75%. Часто пациенты с активной формой туберкулёза, подтвержденной другими методами обследования, приносят отрицательный результат анализа, сделанный методом ИФА.
К тому же, всегда интересно, к какому виду туб. палочки определяли антитела? Их всего 5 видов. Чаще всего заболевание у человека вызывает человеческий и бычий тип. И в идеале результат анализа должен выглядеть так: IgG человеческий тип — отрицательно, IgG бычий тип — отрицательно. Но обычно результат выглядит так: антитела к micobacterium tuberculosis — отрицательно. Даже не всегда пишут какие антитела определяли G или М, хотя это имеет большое значение. IgМ — это антитела, которые вырабатываются при активном размножении туб палочки, а IgG — это антитела которые указывают на давность процесса.
Вывод — часто ложноотрицательный результат, поэтому для диагностики не подходит. Не может быть альтернативой Диаскинтесту и пробе Манту.

Поэтому методы ПЦР и ИФА являются лишь дополнительными методами диагностики туберкулеза.

источник

Туберкулез — опасное заболевание, которое успешно лечится при своевременной диагностике.

Одно из наиболее информативных исследований, позволяющих выявить недуг на ранней стадии, носит название метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Анализ ПЦР — не только самое информативное, но и одно из самых доступных исследований, которое позволяет выявить туберкулез на ранних стадиях.

Все живые микроорганизмы, включая вирусы и бактерии, содержат в своей структуре молекулы РНК и ДНК. Выделив эти кислоты, можно с большой достоверностью сказать, какие чужеродные агенты присутствуют в крови человека, и поставить точный диагноз.

Суть метода ПЦР заключается в особой обработке образцов биологических жидкостей, в результате чего можно определить, к какому виду относятся присутствующие в нем микроорганизмы.

Читайте также:  17 он прогестерон анализ мочи

Методика ПЦР применяется у людей с тяжелыми поражениями легких в тех случаях и респираторными проявлениями (сильный кашель, кровохаркание), когда точно диагностировать болезнь по клиническим симптомам невозможно.

Рекомендуется пройти исследование и после непосредственного контакта с носителем заболевания. В число преимуществ, которыми он обладает, входят:

  • скорость выполнения — для получения результата не нужно выращивать культуру возбудителя или проводить другие сложные процедуры;
  • высокая информативность — при диагностике туберкулеза точность анализа достигает 90% и выше;
  • высокая чувствительность и специфичность — для выявления возбудителей болезни в материале может содержаться всего одна клетка вируса;
  • универсальность — для анализа подходят практически любые биологические жидкости: мокрота, кровь, смывы бронхов.

Для сравнения: точность микроскопии мазков мокроты, которая используется для выявления туберкулеза, составляет всего 40-50%, а при низком количестве возбудителей снижается до 10% и меньше. Культуральные исследования мокроты более информативны, но для получения результатов требуется от 2 до 8 недель.

Можно использовать ПЦР на туберкулез вместо Манту, если у человека имеются какие-либо противопоказания к пробе.

К недостаткам методики относится риск получения ложноотрицательного результата. Иными словами, отсутствие в мокроте, крови или моче специфического ДНК еще не говорит об отсутствии туберкулеза у больного.

Важно. При диагностике туберкулеза у детей чувствительность анализа ПЦР ниже, чем у взрослых, и составляет около 25-83%.

Фото 1. Делать ПЦР вместо Манту ребенку, это хороший вариант, если он аллергик или часто болеет.

Процедура проведения анализа ПЦР проводится посредством специального прибора под названием амплификатор, и состоит из четырех этапов. Для проведения исследования необходимы участки ДНК, с которых начинается синтез молекул, нуклеотиды (основы молекул ДНК), а также полимераза, или фермент, ускоряющий проведение процедуры.

  1. Забор биологического материала (мокрота, кровь, смывы бронхов).
  2. Прогревание образца до температуры около 98% для разрушения первичной структуры цепочки ДНК.
  3. Отжиг, или снижение температуры на несколько градусов, чтобы связать праймер с нитью ДНК.
  4. Синтез молекул, необходимых для получения результата.

После проведения 25-30 подобных циклов образуется определенное количество копий ДНК вирусов, по которым легко определить возбудителя заболевания.

Внимание: анализ ПЦР не отличает «мертвые» микроорганизмы от «живых», поэтому результат может быть положительным в течение определенного времени после проведенного лечения.

Если сдается анализ крови ПЦР на туберкулез, то нет необходимости в специальной подготовке, но больным рекомендуется придерживаться общих правил: воздержаться от приема пищи не менее чем на 8 часов, исключить алкоголь и прием медикаментозных препаратов, не курить в течение часа перед забором материала.

Мокроту собирают в утреннее время после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

Если экссудат выделяется плохо, накануне вечером следует принять отхаркивающий препарат или сделать ингаляцию. Диагностическую ценность имеет мокрота со слизью, гноем, белыми или желтоватыми вкраплениями.

Если взять мокроту на анализ невозможно, для выявления возбудителей заболевания используются смывы из бронхов. Такой анализ не требует подготовки, а забор материала выполняется следующим образом. С помощью гортанного шприца больному вливают в трахею раствор хлорида натрия, который вызывает сильный кашель — выкашлянная жидкость используется для исследования.

Внимание. Результат анализа искажают антибиотики, гепарин и другие препараты, использующиеся для местного лечения, поэтому исследование рекомендуется проводить через 10-14 дней после приема.

источник

Туберкулёз — это инфекционное заболевание лёгких, известное ещё со времён глубокой древности. На сегодняшний день диагностировать заболевание можно разными методами: внутрикожной пробой манту, флюорографией, рентгенографией. Действенным способом выявления заболевания является и бактериологическое исследование мазков с мокротой.

Однако, несмотря на возможность современной медицины предупреждать туберкулёз, количество заболевших им неумолимо растёт. Поэтому вопрос создания новых способов противодействия заболеванию всегда остаётся актуальным.

Ещё с советского времени в качестве массового метода диагностики болезни используется проба манту. Большинство ошибочно полагают, что манту является прививкой. В действительности с помощью пробы, вводимой подкожно, выявляется присутствие возбудителя в организме.

Главный действующий компонент представлен туберкулином, состоящим из скомбинированных органических веществ, взятых из микобактерий. Туберкулин по своей сути является аллергеном, который, попав в организм, начинает медленную, но верную провокацию аллергической реакции в крови. Для недопущения развития аллергии перед процедурой рекомендуется принять противоаллергическое средство.

  • отрицательной;
  • сомнительной;
  • положительной.

В случае отсутствия в организме возбудителя заболевания, аллергической реакции наблюдаться также не будет. Если же место инъекции обозначилось припухлостью и покраснением, иначе говоря, произошло образование папулы, тогда, дополнительно исследуется кровь, для исключения возможного инфицирования.

Проблема с применением пробы манту заключается в том, что реакция бывает положительной даже в том случае, когда человек не является носителем инфекции и тем более не болеет туберкулёзом.

Положительную реакцию на пробу под силу спровоцировать:

  • хроническому тонзиллиту;
  • ОРВИ;
  • ОРЗ;
  • глистным инвазиям;
  • аллергическому васкулиту;
  • прочим болезням.

В таких случаях пробу вводят повторно.

Противопоказано применение пробы манту при поражении тяжёлыми кожными болезнями, сердечным ревматизмом, бронхиальной астмой, эпилепсией.

Так как реакция на манту имеет довольно высокий процент ложного срабатывания, были разработаны альтернативные методы диагностики туберкулёза у испытуемого. Сегодня диагностировать туберкулёз можно, проведя анализ крови вместо манту. Исследуется кровь:

  • иммуноферментным анализом крови (ИФА);
  • полимеразной цепной реакцией (ПЦР-диагностикой на туберкулёз).

Использование иммуноферментной диагностики помогает выявлению в крови антител (иммуноглобулинов) к возбудителю болезни.

ИФА обладает высокой чувствительностью. Благодаря этому, возможно, его использование не только как альтернативы, но и в дополнение к манту для разрешения спорных случаев (например, при сомнительной реакции). Дополнительное назначение этого анализа предназначено для подтверждения результата теста либо его опровержения.

Несмотря на имеющиеся плюсы, ИФА обладает некоторыми недостатками.

  • Недостаточно высокой точностью (подтверждая присутствие инфекции, анализ не диагностирует факт заражения ею). При подозрении на заражение дополнительно назначаются исследования биохимического и общего анализа крови.
  • Малой пригодностью для применения в регионах, где болезнь имеет большую распространённость.

Большей эффективностью и точностью на сегодняшний день отличается анализ крови, проводимый с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР). В отличие от пробы манту анализу ПЦР поддаётся диагностирование развивающегося внелегочного туберкулёза.

Часто манту заменяется анализом ПЦР, когда требуется скорость с выявлением самого заболевания и источника, его вызвавшего.

Использование метода ПЦР отлично справляется с выявлением возможного рецидива заболевания. Это особенно важно для уже переболевших туберкулёзом, поскольку рецидив болезни возможен, ориентировочно, по прошествии года после выхода из реабилитационного периода.

Замена манту проведением анализа крови на определение туберкулёза является единственным выходом для больных с синдромом приобретённого иммунодефицита и пациентам, страдающим серьёзным поражением лёгких.

  • Забранная у пациента кровь в небольшом количестве помещается внутрь стеклянной колбы, где уже содержится вещество, предотвращающее свёртываемость.
  • Отделённые от плазмы клетки просматривают под микроскопом, с целью определить присутствие возбудителя, способного вызвать заболевание.
  • В заключении осадочный материал соединяется с веществами, вызывающими реакцию клеток, создаётся необходимый температурный режим. Процесс завершается получением обновлённого ДНК — материала. Результаты свидетельствуют либо о присутствии заболевании в организме, либо о его отсутствии.

К плюсам ПЦР-анализа относится:

  • Способность метода к чёткой идентификации ДНК одного, конкретного возбудителя заболевания, без путаницы с любыми другими.
  • Отсутствие возрастных ограничений для проведения анализа.
  • Большое преимущество ПЦР, заключающееся в способности выявления даже одной бактерии, вызвавшей болезнь, среди разнообразия других. Отличие от других микроскопических, бактериологических и иммуноферментных методов диагностики.
  • Универсальность этого метода обследования, подходящего для применения к любому из многочисленных видов бактерий или вирусов. Причём использование ПЦР подходит как для обнаружения самого возбудителя, так и конкретной среды его локализации: в крови, мокротах, моче.

Огромным преимуществом метода перед остальными является скорость получения результатов: всего-то по прошествии 3−4 часов!

  • Значимым недостатком ПЦР-метода является его обладание феноменальной сверхчувствительностью, часто приводящей к ложноположительным результатам. Это может случиться, например, если на оборудовании для проведения анализа осталось чужеродное ДНК, пусть даже и в мизерном количестве.
  • В большинстве случаев это ДНК размножается, что влечёт к неправильной постановке результата исследования. Решается эта проблема использованием одноразовой посуды или материалов.
  • К существенному недостатку ПЦР относится неспособность этой методики установить присутствие какого возбудителя зафиксировано: живого или мёртвого. Это может обернуться диагностированием туберкулёза у выздоровевшего пациента, организм которого ещё не полностью очистился от мёртвых тканей возбудителя.

Для получения достоверных результатов требуется следование нижеуказанным рекомендациям:

  1. Осмотр лечащим врачом, для получения сведений о противопоказаниях к проведению диагностики.
  2. Прекращение приёма антибактериальных лекарственных средств, влекущих искажение результатов исследования.
  3. Отказ от табака и алкоголя.

Процедура производится утром на голодный желудок либо по прошествии четырёх часов после употребления пищи.

Туберкулёз является серьёзным заболеванием, особенно распространённым среди детей. Сложность заключается в том, что диагностирование заболевания у детей ввиду иных проявлений, чем у взрослых, часто бывает несвоевременным. Поэтому вопрос поиска методов, позволяющих выявлять присутствие туберкулёза на ранних стадиях, остаётся для учёных одним из приоритетных.

источник

Альтернативы Манту для ребенка по закону: анализ крови, мочи и другие способы проверки вместо пробы на туберкулез

Туберкулез – серьезное инфекционное заболевание, которое может появиться у человека любого возраста. Возбудителем является микобактерия туберкулеза (палочка Коха).

Обязательная иммунизация вакциной БЦЖ новорожденных с последующей ревакцинацией значительно снизила заболеваемость туберкулезом. В настоящее время все чаще встречаются латентные формы болезни, поэтому проблема ранней диагностики не теряет своей актуальности.

Туберкулез передается от больного человека воздушно-капельным путем. У детей младшего возраста превалирует алиментарный путь заражения. Наиболее распространенным и дешевым методом раннего выявления болезни является проведение реакции Манту. Часто применяются и другие, альтернативные способы.

Основной метод профилактического обследования детей на туберкулез – реакция Манту, но при наличии противопоказаний и желании родителей можно провести альтернативные анализы

Пробой Манту называется метод исследования, при котором туберкулин вводится детям под кожу с внутренней стороны предплечья. Туберкулин не является вакциной, не содержит живую или инактивированную микобактерию туберкулеза.

Специфический иммунный ответ детского организма в виде папулы на коже вызывают продукты жизнедеятельности микобактерий. Проверка и оценка результата введения туберкулина производится через 72 часа, размер папулы измеряется прозрачной линейкой.

Согласно федеральным клиническим рекомендациям Российского общества фтизиатров выделяют несколько типов реакции:

  • отрицательная реакция – папулы либо нет, либо ее размер менее 1 мм, ребенок никогда не контактировал с микобактериями туберкулеза;
  • сомнительная реакция – до 5 мм в диаметре, не имеет диагностического значения;
  • положительная реакция – уплотнение от 5 до 16 мм – первичный контакт с палочкой Коха состоялся, но болезнь не развилась;
  • гиперергическая реакция – папула более 17 мм, гнойно-некротическое воспаление и увеличение регионарных лимфоузлов свидетельствуют о заболевании туберкулезом, требуется срочное обращение к врачу-фтизиатру.

Реакция Манту не дает представления о распространенности или локализации процесса. Помимо этого, достаточно велико количество ложноположительных результатов:

  • при неправильном уходе за местом инъекции;
  • при индивидуальной реакции организма малыша на вещества, содержащиеся в пробе, кроме туберкулина;
  • при наличии массивной глистной инвазии.

Как и к любому методу диагностики, к проведению реакции Манту у детей имеется ряд противопоказаний:

  • наличие серьезных поражений кожи, хронических болезней в момент манифестации, эпилепсии;
  • аллергии во время обострения;
  • индивидуальная гиперчувствительность к туберкулину;
  • с момента выздоровления от последнего острого заболевания, либо после окончания карантинных мероприятий в детской организации, должно пройти не меньше месяца;
  • проведение туберкулиновой пробы не рекомендуется в один день с плановой вакцинацией.

Перед проведением пробы Манту ребенка должен осмотреть педиатр, поскольку процедура имеет ряд противопоказаний

Согласно федеральным клиническим рекомендациям Российского общества фтизиатров, с целью исключения туберкулеза у ребенка возможно использование альтернативных методов обследования. Заменить традиционные проверки могут следующие методики: Диаскинтест, Квантифероновый тест, Т-Спот исследование, обзорная рентгенография органов грудной клетки.

Общеклинический анализ крови нельзя использовать вместо Манту. При заболевании туберкулезом в ОАК обнаруживается лейкоцитоз (увеличение количества лейкоцитов выше нормы), сдвиг лейкоцитарной формулы влево, увеличение скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

Такие изменения не являются специфическими для туберкулеза, и происходят при любом воспалительном процессе в организме. Результаты биохимического анализа крови также будут без заметных изменений.

Исследование сыворотки крови способом полимеразной цепной реакции (ПЦР) для скринингового обнаружения туберкулеза у детей не рекомендуется, поскольку выделить геномные фрагменты (части ДНК) возбудителей из крови возможно только при генерализованном туберкулезном процессе. Метод ПЦР пригоден для диагностических целей – выделения микобактерий туберкулеза в биологических образцах: мокроте, смывных водах бронхов, экссудате плевральной полости, спинномозговой и внутрисуставной жидкости. Использование ПЦР вместо проведения реакции Манту нецелесообразно.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) крови также не применяется при скрининге туберкулеза. Способ ИФА основан на обнаружении специфических антител в крови, а при туберкулезе действует другой патогенез иммунного ответа организма – антител в крови мало.

Анализ мочи также не является альтернативой туберкулиновым пробам, а лишь помогает в диагностике туберкулезного поражения мочевыводящей системы. В результатах исследования мочи можно обнаружить признаки амилоидных трансформаций только при внелегочных формах туберкулеза (изменения в почках, мочевом пузыре), а ПЦР мочи подтвердит диагноз.

На сегодняшний день наибольшей восприимчивостью, избирательностью и минимальным аллергенным действием обладает проба с биопрепаратом «Диаскинтест». Он представляет собой аллерген туберкулезный рекомбинантный (АТР) и предназначается для внутридермального введения.

Методика инъекции и трактовка результатов аналогичны проведению пробы Манту, однако достоверность этого теста значительно выше. Тест считается положительным, если размер постинъекционной папулы превышает 3 мм. Крайне редко встречаются ложноположительные результаты при снижении у обследуемого общего иммунитета во время какого-либо сопутствующего заболевания.

Для проведения квантиферонового теста придется сдать кровь из вены. Способ QuantiFERON – TB Gold основан на иммуносорбентном анализе определения специфических антител, продуцируемых Т-лимфоцитами, с помощью меченых ферментов.

Квантифероновый метод обладает высокой чувствительностью. Крайне высокая стоимость этого анализа исключает возможность широкого применения.

Т-спот метод (T-SPOT.TB, спот-реакция) не менее информативен, чем квантифероновый анализ. Главным отличием является определение самих Т-лимфоцитов, которые продуцируют антитела в ответ на внедрение микобактерий. Это исследование позволяет проверить пациентов, подлежащих диагностике, из группы повышенной угрозы по возникновению туберкулезной инфекции (например, ВИЧ-инфицированных).

Согласно Приказу Министерства Здравоохранения РФ № 951 2014 года возможно проведение рентгенологического исследования (обзорной рентгенограммы грудной клетки) для исключения заболевания туберкулезом. Рентгенография или КТ органов грудины также является альтернативой внутрикожным пробам и может использоваться вместо Манту. Однако необходимо помнить, что при использовании рентгенологического обследования организм ребенка получает достаточно вредную лучевую нагрузку.

Перед поступлением в детское дошкольное учреждение или школу, туберкулез должен быть исключен у абсолютно каждого ребенка согласно действующему законодательству. Основным методом скрининговой диагностики была и остается туберкулинодиагностика.

В федеральных клинических рекомендациях Российского общества фтизиатров четко прописан алгоритм ведения детей, поступающих (посещающих) в образовательные учреждения, в случае отказа от иммунодиагностики. По требованиям санитарно-эпидемиологических правил 3.1.2.3114-13 «Профилактика туберкулеза» дети, туберкулинодиагностика которым не проводилась, допускаются в детскую образовательную организацию при наличии заключения врача-фтизиатра об отсутствии заболевания.

Следует помнить об опасности туберкулеза у детей, а также о том, что до сих пор не изобретен совершенно безопасный и абсолютно достоверный способ его диагностики. Именно поэтому ребенок должен быть обследован на туберкулез, а возможность выбора метода остается за родителями.

Самыми опасными для самого больного и окружающих являются инфекционные заболевания, протекающие в скрытой форме. Отсутствие явных симптомов не позволяет начать своевременное лечение. При этом болезнь прогрессирует, а больной является заразным для окружающих. Из таких заболеваний самым распространенным является туберкулез. По статистике около трети людей даже в высокоразвитых странах инфицированы. Поэтому так важно проводить своевременную диагностику этого заболевания. Наряду с общеизвестными пробами Манту, диаскинтестом и флюорографией для выявления туберкулеза применяется клинический анализ крови.

Туберкулез – это очень заразное инфекционное заболевание. Передается оно воздушно-капельным путем и вызывается палочкой Коха. Эти микобактерии очень устойчивы, они сохраняются во внешней среде несколько месяцев, а при попадании в организм человека начинают постепенно размножаться. Чаще всего туберкулез локализуется в легких, но может поражать другие органы.

Читайте также:  1 кетоновые тела при анализе мочи

Опасность этой болезни в ее хроническом течении, причем на начальном этапе, часто ничем не проявляет себя. Эта инфекция очень заразна, больной может не подозревать, что инфицирован, но для окружающих он будет опасен. А лечить туберкулез очень сложно, так как бактерии устойчивы к внешним воздействиям.

Вылечить туберкулез легче всего в том случае, когда он диагностирован на начальном этапе. Поэтому так важно вовремя выявить эту болезнь. Во всем мире обязательно проводят профилактические обследования на туберкулез.

Обычно диагностика у детей проводится с помощью туберкулиновой пробы – реакции Манту или диаскинтеста. Но не всегда эти исследования достоверны. Они не проводятся при обострении хронических заболеваний, при аллергических реакциях или кожных болезнях, а также при эпилепсии. После 14 лет и для взрослых основным методом выявления туберкулеза является флюорография грудной клетки. Если при этом обследовании выявлены какие-то отклонения или есть подозрение на инфицирование, врач назначает более тщательную диагностику.

Это делается для того, чтобы вовремя начать лечение при выявлении инфекции, а также исключить риск заражения других людей, так как туберкулез очень заразен. Сдавать кровь рекомендуется при любом подозрении на эту болезнь, а также вместо проведения реакции Манту в том случае, когда к ней имеются противопоказания. Исследуется кровь также для контроля эффективности лечения при туберкулезе.

Анализ крови на туберкулез не требует специальной подготовки, не имеет противопоказаний. Результат можно получить уже на следующий день. Этот метод диагностики позволяет точнее всего выявить наличие инфекции в организме. Чаще всего проводят его при положительной реакции на туберкулиновую пробу. Но сдавать кровь на туберкулез требуется также после контакта с инфицированным человеком или при подозрении на внелегочный туберкулез.

После того, как ребенку сделали прививку БЦЖ, проводить Манту или диаскинтест нецелесообразно, так как они покажут ложноположительные результаты. При этом для диагностики рекомендуется делать анализы крови.

Рекомендуется сдать кровь на выявление палочки Коха также в том случае, когда появляются симптомы этого заболевания:

  • кашель, не прекращающийся дольше 3 недель;
  • постоянная субфебрильная температура;
  • сильная слабость и снижение работоспособности;
  • беспричинная потеря веса;
  • повышенная потливость, особенно по ночам;
  • черты лица заостряются;
  • больной бледен, но на щеках неестественный румянец;
  • увеличиваются лимфоузлы.

Когда пациент обращается к врачу с такими жалобами, его направляют к фтизиатру. Это врач, занимающийся лечением туберкулеза. Он назначает больному комплексное обследование, которое обязательно включает анализы крови.

Для диагностики туберкулеза существует несколько видов анализов. Название каждого из них отражает суть исследования, но многим людям это ничего не говорит. Поэтому лучше выяснить у врача, с какой целью назначается тот или иной анализ и что он позволяет узнать. В зависимости от риска инфицирования, общего состояния здоровья больного и его возраста назначается один из анализов:

  • общий или биохимический;
  • квантифероновый тест;
  • иммуноферментный или ИФА;
  • ПЦР или полимеразная цепная реакция.

Все эти анализы разные, они могут выявить инфицирование на начальном этапе, скрытую форму туберкулеза, его активную стадию. Они применяются также при лечении уже диагностированной болезни. Но, какой анализ сделать в каждом конкретном случае, может решить только врач. Иногда требуется провести комплексную диагностику, только несколько методов совместно позволяют точно определить наличие инфекции и место ее локализации.

Такое исследование проводится регулярно при туберкулезе легких и других органов. Общий анализ крови не может выявить наличие палочки Коха в организме, но он позволяет оценить состояние здоровья пациента. Такое исследование необходимо для того, чтобы отслеживать, как организм сопротивляется инфекции, эффективно ли проводимое лечение.

Оценивая общий анализ крови больного, врач прежде всего обращает внимание на количество лейкоцитов, лимфоцитов и скорость оседания эритроцитов. Уровень лейкоцитов обычно при туберкулезе повышается, а количество лимфоцитов уменьшается. При активной форме болезни в крови также будет повышенный уровень нейтрофилов. Но наиболее информативным является показатель СОЭ. В норме он не бывает выше 20-30 единиц. А при туберкулезе скорость оседания эритроцитов возрастает до 50 единиц и выше.

Кроме того, иногда врачи при подозрении на туберкулез назначают биохимический анализ крови. Он информативен для выявления острой формы заболевания. При этом будут повышены показатели белка, мочевины, холестерина и лизоцима. Такой анализ также применяется для выявления особых форм туберкулеза, например, при поражении печени. В крови при этом выявляется повышение количества билирубина, а также ферментов АЛАТ и АСАТ.

Особенность этого анализа в том, что он позволяет определить наличие в крови антител к микобактериям туберкулеза. Несмотря на то, что эта диагностика точно показывает, инфицирован больной или нет, она не позволяет узнать, какой орган поражен инфекцией. Кроме того, с помощью квантиферонового теста нельзя определить, находится болезнь в активной фазе или скрытой. Иногда у больного с уже пролеченным туберкулезом такой тест показывает положительный результат.

Когда необходимо сделать анализ крови на туберкулез вместо Манту, назначают чаще всего именно квантифероновый тест. Он не дает ложных результатов после прививки БЦЖ, так как эта вакцина не вызывает появление этих специфических интерферонов.

Особенность квантиферонового анализа в том, что выявляются в крови особые интерфероны, которые вырабатываются только при наличии в организме микобактерий туберкулеза. Называется этот анализ тестом, так как является альтернативой диаскинтесту, но проводится не под кожей больного, а в пробирке. Суть его в том, что к исследуемой плазме крови добавляют антигены. Потом оценивается реакция иммунной системы организма, проявляющаяся в выработке интерферонов.

Иммуноферментный анализ более точен. Это тоже исследование крови на антитела к туберкулезу. Но, кроме этого, с его помощью оценивается качество и количество различных элементов крови. Называют его еще серологическим исследованием крови. При этом определяется наличие определенных иммуноглобулинов, которые вырабатываются иммунной системой при инфицировании.

Но этот анализ может быть неточен, он не всегда позволяет выявить микобактерии туберкулеза. На начальном этапе болезни иммуноглобулины еще не вырабатываются, поэтому в крови не определяются. Не используют ИФА вместо реакции Манту после прививки БЦЖ, так как он тоже может показать ложный результат. Кроме того, недостоверным он будет при иммунодефиците.

Поэтому для диагностики его используют редко, чаще всего имунноферментный анализ применяется для оценки эффективности лечения туберкулеза. Часто назначают его при наличии положительной реакции на пробу Манту.

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, – это сейчас самый точный метод диагностики туберкулеза. Поэтому его часто назначают при наличии спорных результатов диагностики или при подозрении на инфицирование. С помощью ПЦР можно со 100% уверенностью определить болезнь.

Это довольно сложное обследование, основанное на оценке различных фрагментов ДНК в крови. Он позволяет обнаружить даже малое количество бактерий в крови. Кроме того, исследуя методом ПЦР другие жидкости организма, например, мокроту, мочу, внутрисуставную жидкость, можно точно определить место локализации болезни.

Полимеразная цепная реакция проводится по сыворотке крови. Обычно анализ проходит в несколько этапов. Сначала исследуют плазму под микроскопом, пытаясь выявить палочку Коха. Потом с помощью разных реактивов и изменения температуры получают генетический материал. Исследуя ДНК, можно определить, присутствует ли бактерия в организме и в каких количествах.

Благодаря высокой точности и безопасности этого исследования его проводят в любом возрасте. Именно ПЦР чаще всего назначается при невозможности проведения реакции Манту или при подозрении на туберкулез у взрослых людей. Этот анализ позволяет быстро диагностировать заболевание. С его помощью можно определить место локализации инфекции, а также вовремя выявить наличие рецидивов болезни. Метод полимеразной цепной реакции позволяет оценить эффективность проводимого лечения.

Выявление туберкулеза по анализу крови имеет много преимуществ перед другими методами обследования. Прежде всего, он самый точный и достоверный. Вероятность ложных результатов и необходимость в повторном обследовании при такой диагностике очень низкая.

Но такие анализы сейчас делаются только платно, так как они не входят в перечень обязательных. Поэтому не всем они доступны. Например, кватифероновый тест в Москве можно сделать за 2000-3500 рублей. Поэтому чаще всего детям для профилактики инфицирования проводят тест Манту, а взрослым – флюорографию.

Расшифровка анализов крови должна проводиться врачом. Обязательно нужно при этом учитывать другие результаты диагностики, возраст больного, наличие хронических заболеваний и общее состояние его здоровья. Несмотря на это, подобные методы диагностики туберкулеза менее субъективны, чем реакция Манту и диаскинтест.

Анализы крови на туберкулез являются самым достоверным и точным методом диагностики этого заболевания. Особенно информативны они для выявления латентной инфекции, при которой больной является бактерионосителем и может представлять опасность для окружающих. Подобная диагностика не имеет противопоказаний и не вызывает никаких негативных реакций организма. Но обязательно они назначаются только при подозрении на туберкулез или при положительных результатах распространенных тестов: Манту или флюорографии.

источник

Статья на конкурс «био/мол/текст»: Несмотря на стремительное развитие медицины, туберкулез не спешит сдавать свои позиции, оставаясь не только актуальным и смертоносным, но и трудно диагностируемым заболеванием. А ведь своевременная диагностика — это возможность снизить количество больных активными формами и повлиять на распространение инфекции! Традиционно для диагностики туберкулеза применяют пробу Манту 2 ТЕ. Тем не менее в последние годы появились альтернативные методы — «Диаскинтест» и анализ крови IGRA (Interferon Gamma Release Assay). Что это за тесты и в состоянии ли они полностью заменить «старушку» пробу Манту, которой недавно исполнилось 110 лет?

Эта работа опубликована в номинации «Биофармацевтика» конкурса «био/мол/текст»-2018.

Генеральный спонсор конкурса — компания «Диаэм»: крупнейший поставщик оборудования, реагентов и расходных материалов для биологических исследований и производств.

Спонсором приза зрительских симпатий выступил медико-генетический центр Genotek.

Проблема лечения и диагностики туберкулеза до сих пор остается чрезвычайно актуальной. И дело не только в том, что палочка Коха (Mycobacterium tuberculosis) развивает поразительную устойчивость к антибиотикам: ситуацию осложняет еще и длительный инкубационный период заболевания. Фактически, мы имеем дело с возбудителем, носители которого могут долгое время быть совершенно здоровы! В придачу, существуют не только активные формы туберкулеза, но и латентное носительство. А предсказать, перейдет ли оно в активную форму и когда это случится, чрезвычайно трудно. Однако не все так плохо, потому что даже латентное носительство можно диагностировать и в случае необходимости пролечить. Вопрос лишь в том, что до сих пор не разработано точного и эффективного метода диагностики туберкулезных процессов. Поэтому долгие годы ученые пытаются разработать «идеальный» тест, который позволил бы отличить туберкулез от постпрививочного иммунитета и латентного носительства, имел бы низкую себестоимость и не зависел от человеческого фактора.

Тем не менее диагностика — это еще не диагноз, и результат любого теста не является истиной в последней инстанции. Диагноз же по-прежнему ставят, исходя из нескольких составляющих:

  • клинической картины;
  • наличия контакта с туберкулезным больным;
  • рентгенографии легких, флюорографии или компьютерной томографии;
  • результатов диагностических тестов.

Однако большинство этих методов диагностируют туберкулез постфактум — только скрининговые тесты помогают выделить лиц с высоким риском развития заболевания или с только зарождающимся процессом. И уже более 100 лет основным методом массовой диагностики туберкулеза является туберкулиновая проба Манту 2 ТЕ (содержащая 2 туберкулиновые единицы). Тест спорный, со множеством ложноположительных результатов, но именно его используют во всем мире и отказываться пока не собираются.

Проба Манту 2 ТЕ — это специфический кожный тест на основе туберкулина. Туберкулин является смесью разнообразных антигенов, полученных из инактивированной микобактерии туберкулеза и продуктов ее жизнедеятельности (белков, полисахаридов, нуклеиновых кислот — всего около 200 наименований [1], [2]). Также в состав препарата для пробы Манту входят фенол в качестве консерванта, стабилизатор «Твин-80», соли фосфатного буферного раствора и хлорид натрия.

Смысл этой пробы в том, что организм человека, зараженного микобактерией туберкулеза, будет реагировать на введение ее частичек выработкой Т-лимфоцитов [3]. Если же человек здоров, подобной реакции не будет. Однако тут есть одно но: антигены, входящие в состав туберкулина, характерны не только для палочки Коха, но и для других штаммов микобактерии, в том числе и для M. bovis — основы прививки БЦЖ. Поэтому проба Манту плохо «различает» привитых этой вакциной и реально заболевших туберкулезом.

В мире используют 3 вида туберкулина (рис. 1): датский препарат PPD (purified protein derivative) RT 23, американский PPD-S и российский — PPD-L. Различаются они видами микобактерий, из которых были получены: при производстве датского и американского препаратов используют только M. tuberculosis, а при производстве российского — смесь из M. tuberculosis и M. bovis (микобактерии, вызывающей туберкулез у крупного рогатого скота; на основе этого штамма была разработана вакцина БЦЖ). Различие в составах туберкулина обусловливает разные границы положительного результата: 15 мм для детей, привитых БЦЖ, и не более 10 мм для непривитых детей до 5 лет у датского препарата, не более 10 мм у американского и 5 мм у российского [4].

Рисунок 1. Препараты туберкулина

Диагностику с помощью пробы Манту проводят следующим образом: небольшое количество туберкулина вводят под кожу чуть выше запястья и через 72 часа оценивают реакцию, которую считают положительной, если в месте введения появляется припухлость (папула) более 5 мм в диаметре. В зависимости от ее размера, различают степень реакции от отрицательной (0–1 мм) до резковыраженной, или гиперергической (17 мм и более у детей и подростков, 21 мм и более у взрослых) [5]. И тут начинаются трудности, потому что у привитых БЦЖ реакция Манту положительна [6]! Мало того, чем больше поствакцинальный рубец, тем выше чувствительность к туберкулину [7]. Поэтому у привитых БЦЖ оценивают не только диаметр папулы, но и размер поствакцинального рубчика (табл. 1).

Таблица 1. Соотношение размера папулы и рубчика после прививки БЦЖ. [8]
Срок, прошедший с момента вакцинации БЦЖ Размер рубчика после БЦЖ Привитый иммунитет (мм) Неясная причина Подозрение на инфицирование
1 год 6–10 мм 5–15 мм 16 мм Более 17 мм
2–5 мм 5–11 мм 12–15 мм Более 16 мм
0 мм 2–4 мм 5–11 мм Более 12 мм
2 года Вне зависимости от размера Уменьшение размера папулы или прежний ее размер Увеличение размера на 2–5 мм от предыдущего положительного результата Реакция изменяется на положительную или папула увеличивается более чем на 5 мм
3–5 лет Вне зависимости от размера 5–8 мм либо уменьшение размера папулы Увеличение размера на 2–5 мм за последний год или отсутствие тенденции к уменьшению Изменение на положительную (5 мм) реакцию или увеличение папулы на 6 мм;
12 мм при впервые поставленной пробе; изменение предыдущего размера на 2–4 мм или размер в 12 мм
6–7 лет Вне зависимости от размера 0–4 мм 5 мм 6 мм и более
7–9 лет Если в 7 лет ребенку была сделана ревакцинация БЦЖ, реакция Манту вновь становится положительной и нормы повторяются 0–4 мм 5 мм 6 мм и более
Взрослые Отрицательная реакция, покраснение любого диаметра; папула до 4 мм Более 5 мм

Безусловно, метод оценки результата довольно субъективный. Но главное, папулу надо еще правильно измерить, зафиксировав только размер выпуклой части и игнорируя покраснение вокруг нее (рис. 2).

Рисунок 2. Правильная и неправильная оценки диаметра папулы

Впрочем, основной недостаток пробы Манту не в этом: проблема в том, что с ее помощью трудно отличить поствакцинальный иммунитет от заболевания, а цена ошибки — «ненужный» курс антибиотиков. Поэтому чаще всего ее результат — это только первый шаг, лишь подозрение на туберкулез. Что интересно, при тяжелом течении болезни из-за неадекватного Т-клеточного ответа реакция на туберкулин обычно отсутствует [6], однако эту фазу заболевания уже хорошо видно и по клинической картине, и на рентгенограмме.

Читайте также:  1025 sg в анализе мочи

Еще одна трудность с диагностическими возможностями пробы Манту связана с тем, что они зависят от нижней границы положительного результата: чем ниже граница, тем больше будет наблюдаться ложноположительных реакций. К примеру, в России пороговым значением является папула в 5 мм. Это приводит к гипердиагностике — большому количеству зафиксированных реакций, но в итоге к низкому проценту реально выявленных случаев инфицирования [4].

В общем, не удивительно, что в последнее время информативность туберкулиновой пробы постоянно ставится под сомнение. Мало того, она может вызывать не связанные с туберкулезом аллергические реакции, поэтому все больше здоровых, но склонных к аллергии детей вынуждены идти в тубдиспансер в надежде выяснить причину положительной реакции. И наконец, на результат пробы может влиять множество факторов: недавно перенесенные инфекции, хронические заболевания, прием медикаментов, изменение гормонального фона или иммунитет к нетуберкулезным микобактериям [7].

Если говорить о достоинствах пробы Манту, то кроме низкой себестоимости, ими будут возможность выявления туберкулеза на ранних стадиях развития (за исключением лиц с иммуносупрессией и маленьких детей до двух лет [7]) и более высокая диагностическая ценность у непривитых БЦЖ по сравнению с привитыми (от 50% и ниже против 65,4% [6], [9]).

  • Туберкулин вреден для здоровья, потому что инактивированные микобактерии вызывают аллергию и «нагружают иммунитет». Здесь есть небольшая доля правды: как препарат, туберкулин может вызывать аллергические реакции, не связанные с инфицированием, однако ни о какой «нагрузке» не может быть и речи, хотя бы потому что на него не вырабатываются антитела.
  • Проба Манту 2 ТЕ токсична, так как препарат содержит фенол. В туберкулиновой пробе фенол является консервантом, подавляющим рост бактерий и грибков [5]. При этом его количество настолько мало (0,00025 г), что не может оказать влияние на здоровье. Фенол является продуктом метаболизма бактерий, населяющих наш кишечник, поэтому он образуется в тканях организма, попадает в кровь и выводится с мочой. Ежедневно выводится примерно 0,1–0,15 г фенола, что во много раз превышает количество, содержащееся в препарате для пробы Манту.
  • Пробу Манту делают только в странах третьего мира. Это неправда: туберкулиновый тест делают во всем мире, включая США, Канаду, Германию, Данию и Нидерланды. Однако, из-за низкой заболеваемости в этих странах, туберкулинодиагностику обычно проводят только группам риска.

Наука, однако, не стоит на месте, и альтернативы пробе Манту существуют. Вопрос лишь в том, насколько они альтернативны. После расшифровки в 1998 году генома M. tuberculosis появилась возможность разработать абсолютно новые тесты: отечественную кожную пробу «Диаскинтест» и анализы крови IGRA. Однако на роль теста-заменителя пробы Манту больше всех претендует именно «Диаскинтест».

По сравнению с туберкулиновой пробой «Диаскинтест» — это большой шаг вперед. И все потому, что в его состав входит не сотня антигенов, а только рекомбинантный белок CFP10-ESAT6 в стандартном разведении, который не реагирует ни на вакцинный штамм M. bovis, ни на большинство непатогенных микобактерий, — в основном он чувствителен только к палочке Коха. Иными словами, для диагностики инфекции можно использовать лишь этот белок, который показывает наличие или отсутствие клеточного иммунитета к M. tuberculosis. «Диаскинтест» вводят внутрикожно и проверяют результат через 72 часа.

Рисунок 3. Антигены ESAT-6 и CFP-10

В геноме M. tuberculosis белки ESAT-6 и CFP-10 закодированы в зоне RD1. Они экспрессируются при размножении микобактерии и связаны с ее вирулентностью, поэтому иммунный ответ на эти белки отражает активность инфекционного процесса [10]. В составе «Диаскинтеста» они представлены в виде рекомбинантного белка из двух связанных антигенов ESAT6 и CFP10 (рис. 3), синтезируемых генетически модифицированной культурой бактерий Escherichia coli BL21(DE3)/pCFP-ESAT [6]. По похожей технологии был получен еще один препарат — датский C-Tb, однако в нем другое соотношение ESAT-6 и CFP-10, и он менее чувствителен по сравнению с российской разработкой [4].

Благодаря тому, что в состав «Диаскинтеста» входит не коктейль из полисахаридов, липидов и белков, а только синтетический антиген плюс вспомогательные вещества (фенол, натрия хлорид, «Твин-80»), он является более высокоспецифичным, чем препарат для пробы Манту. То есть при его применении фиксируется меньше ложноположительных результатов, а также аллергических реакций неинфекционного характера [2].

Что касается оценки активности туберкулезного процесса, то в этом «Диаскинтест» на голову опережает конкурентов, потому что для него разработана градация положительного результата (табл. 2). То есть чем больше возбудителя в организме, тем больший размер будет иметь папула. А это значит, что у большинства туберкулезных больных реакция на этот тест более выражена, чем у латентных носителей (единственное, здесь снова имеет место субъективная оценка результата). Прибавим к этому то, что «Диаскинтест» позволяет выявлять носителей с высоким риском развития туберкулеза и снижать количество необоснованной терапии [11], а также снижение выраженности реакции на него у больных, получающих курс антибиотиков [4], и получим весьма ценное конкурентное преимущество перед туберкулиновой пробой.

Таблица 2. Оценка ответной реакции на «Диаскинтест». Составлена по информации из инструкции.
Реакция Размер гиперемии и папулы
Отрицательная Нет папулы и/или гиперемии, «укольчитая реакция» до 2 мм
Сомнительная Наличие гиперемии при отсутствии папулы
Положительная: Папула любого размера:
— слабовыраженная положительная реакция До 5 мм
— умеренно выраженная реакция 5–9 мм
— выраженная реакция 10–14 мм
— гиперергическая реакция 15 мм и более, а также при везикуло-некротических изменениях и (или) лимфангоите, лимфадените независимо от размера инфильтрата

Однако и у «Диаскинтеста» есть недостатки:

  • Он не чувствителен к M. bovis и, следовательно, не может диагностировать туберкулезный процесс, вызванный этим видом микобактерии. Конечно, число подобных случаев невелико, но все-таки это снижает эффективность теста.
  • Согласно исследованиям, у «Диаскинтеста» достаточно высокая чувствительность в выявлении туберкулезной инфекции как у детей — 90–96,7%, так и у взрослых — 78–81,5% [2]. Тем не менее остаются приблизительно 10–20% случаев, которые он пропускает.
  • «Диаскинтест» может быть отрицательным у туберкулезных больных с выраженными нарушениями работы иммунной системы из-за тяжелого течения болезни, а также у ВИЧ-инфицированных (в этом случае чувствительность теста зависит от уровня Т-лимфоцитов CD4+ [2]).
  1. Препарат для пробы Манту 2 ТЕ и «Диаскинтест» — маркеры туберкулезной аллергии, то есть они являются «аллергенами». Туберкулезная аллергия связана с иммунным ответом на M. tuberculosis, который делает организм чувствительным (сенсибилизированным) даже к малому количеству микобактерии. С помощью кожных тестов, содержащих раздражающий фактор (инактивированные частицы палочки Коха), этот процесс можно зафиксировать. Инфекционная аллергия является реакцией замедленного типа, поэтому результат проб оценивают не сразу, а через 72 часа.
  2. Кожная реакция на эти пробы является маркером Т-зависимого иммунного ответа, в котором задействованы Т-клетки CD4+ и CD8+ и ассоциированные с ними провоспалительные цитокины, IFNγ, TNF и т.д. Поэтому кожные тесты чувствительны в том числе и к латентному носительству, когда количество микобактерии крайне мало [4], [6].
  3. Как видно из таблиц 1 и 2, результаты кожных проб наблюдают в динамике, при необходимости сравнивая между собой значения предыдущих лет. Поэтому нет смысла делать диагностику туберкулеза, что называется «для галочки»: только для медкарты в детский сад или в школу — ее нужно проводить ежегодно (или хотя бы раз в два года).
  4. В трактовке результатов кожных проб существует понятие виража — резкое увеличение диаметра папулы на шесть и более миллиметров по сравнению с предыдущей пробой. Кроме этого, виражом считают не связанный с вакцинацией БЦЖ переход отрицательной реакции в положительную. Вираж пробы Манту не всегда означает инфицирование (он может быть и аллергического характера), однако для уточнения ситуации обычно назначают дополнительное обследование и консультацию фтизиатра.

Если сравнивать диагностическую эффективность тестов, то «Диаскинтест» дает значительную фору туберкулиновой пробе. Тем не менее среди фтизиатров есть адепты как пробы Манту, так и «Диаскинтеста». Впрочем, сравнительные исследования говорят не в пользу проб с туберкулином — ведь реакция на них еще не означает заболевания или заражения микобактерией. Плюс массовая вакцинация БЦЖ резко снижает их диагностические способности [6].

В качестве примера можно привести отечественное исследование, в котором сравнивали результаты кожных проб [6]. Оказалось, что у подростков, живших в близком контакте с больными открытой формой туберкулеза (бактериовыделителями), положительные реакции на введение туберкулина наблюдались в 77,9% случаев, заболевание же было выявлено только у 4,9%. При этом положительные реакции на «Диаскинтест» отметили лишь у 5,6%, из которых в 62,5% случаев выявили туберкулез [6]. По оценкам российских ученых, результативность «Диаскинтеста» в выявлении активного туберкулеза может превышать результативность пробы Манту 2 ТЕ в 40 раз (табл. 3) [11]!

Таблица 3. Сравнение результатов «Диаскинтеста» и пробы Манту в разных ситуациях. [9]
Результат пробы Манту Результат «Диаскинтеста»
В норме:
у непривитых БЦЖ Отрицательный Отрицательный
у привитых БЦЖ Слабоположительный или положительный без гиперергии Отрицательный
При заражении:
у непривитых БЦЖ Положительный Слабовыраженный или положительный в зависимости от активности процесса*
у привитых БЦЖ Резко положительный Слабовыраженный или положительный в зависимости от активности процесса*
* Не учитывается ситуация (10–20% случаев), когда результат «Диаскинтеста» ложноотрицательный.

Открытие специфичных для M. tuberculosis антигенов позволило разработать лабораторные тесты для диагностики туберкулеза. Это широко известные анализы IGRA (Interferon-Gamma Release Assays), к которым относятся T-SPOT®.TB и QuantiFERON-TB Gold In-Tub («Квантиферон»).

Технология их проведения довольно проста: у пациента берут венозную кровь, смешивают ее с белками ESAT-6, CFP-10 и TB 7.7, после чего наблюдают за реакцией. То есть за количеством Т-лимфоцитов (T-SPOT®.TB) или гамма-интерферона («Квантиферон») [12].

Многие необоснованно считают эти тесты «золотым стандартом» диагностики туберкулеза и его латентных форм, хотя их результаты могут лишь косвенно свидетельствовать об активной инфекции микобактерией или о носительстве — процессах, которые IGRA-анализы не различают [12]. И если ориентироваться на руководства ВОЗ, а также Европейского центра по контролю и профилактике заболеваний (ECDC), «золотых стандартов» в диагностике латентных форм туберкулеза не существует в принципе. Как не существует и адекватной модели латентной туберкулезной инфекции. Поэтому для оценки границ результатов IGRA-анализов приходится использовать так называемые «суррогаты» — показания людей с подтвержденным активным туберкулезом [12]. А это только усложняет ситуацию, потому что у больных туберкулезом снижен клеточный иммунитет, и их показатели не могут служить основой для оценки диагностики латентной инфекции [6].

Вдобавок, отрицательный результат IGRA-анализов крови, не является гарантией отсутствия заболевания; от ложных результатов они тоже не застрахованы. Например, при тестировании «Квантифероном» ложноотрицательные результаты возможны:

  • в ранние сроки инфицирования;
  • при иммунодефицитных состояниях;
  • при неправильном заборе крови или ее транспортировке;
  • из-за ошибок во время расшифровки результатов.

Добавлю, что тесты IGRA требуют наличия качественного оборудования, специальных реактивов и квалифицированного персонала, поэтому себестоимость у них довольно высока.

Кроме того, по сравнению с кожными тестами существенным недостатком этих анализов является определение in vitro только образования гамма-интерферона или активности Т-клеток. Поэтому в странах с высокой заболеваемостью (а Россия, несомненно, в их числе с показателем более 50 больных на 100 000 населения [13]) у IGRA-анализов нет никаких дополнительных преимуществ [12]. Тем более что их способность диагностировать туберкулезный процесс колеблется в районе 42–90% для разных возрастных групп, к тому же они не маркируют латентное носительство [12]. Другими словами, для жителей нашей страны анализы крови на туберкулез в общем-то напрасная трата денег, хотя в странах с низкой заболеваемостью (США, Канада, Западная Европа) они более информативны и рекомендованы к замене туберкулиновых проб для привитых БЦЖ [14].

В мире живет более полумиллиарда латентных носителей M. tuberculosis. Причем, далеко не каждый из них в итоге заболевает, потому что размножение микобактерии сдерживает иммунная система. Например, из 100 инфицированных палочкой Коха детей, лишь у одного развивается активная форма туберкулеза, поэтому диагностические тесты направлены не только на выявление латентных носителей, но и на оценку риска развития заболевания [15].

При оценке эффективности тестов для диагностики туберкулеза чаще всего учитывают два параметра: чувствительность (sensitivity) и специфичность (specificity). Под чувствительностью понимают способность метода выявлять лиц с заболеванием или носителей с высоким риском развития туберкулеза. Под специфичностью — способность теста правильно идентифицировать людей, у которых нет туберкулеза (то есть этот параметр характеризует риск появления ошибочных ложноположительных результатов) [12].

Согласно исследованиям, у анализов крови IGRA достаточно высокая специфичность, но проблемы с чувствительность (табл. 4), поэтому они не могут стать основным инструментом в диагностике туберкулеза, особенно в странах с высокой заболеваемостью. Что касается «Диаскинтеста», то если верить отечественным публикациям [4], [6], [10], [11], он обладает и высокой специфичностью, и высокой чувствительностью (табл. 4). Чудо, а не тест! Однако высокая чувствительность не равняется абсолютной, поэтому и у «Диаскинтеста» случаются «проколы» в виде ложных результатов (чаще всего они наблюдается у детей до двух лет или у лиц с сопутствующими тяжелыми заболеваниями [11]).

Таблица 4. Оценка чувствительности и специфичности анализов крови IGRA по сравнению с туберкулиновой пробой Манту и «Диаскинтестом» в диагностике активного туберкулеза
«Квантиферон» [12] T-SPOT®.TB [12] Проба Манту [12] «Диаскинтест» [2]
Общая чувствительность 80%* 81%** 65%*** 93,3%
Общая специфичность 79% 59% 75% 93,7%
* Общая чувствительность 81% (95% CI 78–84%) для пациентов с подтвержденным туберкулезом.
** Общая чувствительность 92% (95% CI 90–93%) для пациентов с подтвержденным туберкулезом.
*** Общая чувствительность 68% (95% CI 63–72%) для пациентов с подтвержденным туберкулезом.
CIconfidence interval, доверительный интервал.

В общем, анализы крови вряд ли смогут полностью заменить собой пробу Манту 2 ТЕ (и тем более «Диаскинтест», если речь идет об РФ). Но, быть может, они могут стать одним из дополнительных инструментов в диагностике активной туберкулезной инфекции? Да, такая возможность существует, но и здесь есть оговорки. Например, для пациентов с внелегочным туберкулезом, ВИЧ-инфицированных или детей старше пяти лет их можно рассматривать в качестве дополнительного метода. Однако в настоящее время существует ограниченное количество исследований этих тестов [12], поэтому далеко идущие выводы делать рано (табл. 5).

Таблица 5. Оценка специфичности и чувствительности анализов крови IGRA, пробы Манту и «Диаскинтеста» у детей и подростков в диагностике туберкулеза
Проба Манту [12] «Квантиферон» [12] T-SPOT®.TB [12] «Диаскинтест»
Специфичность 89,4% 85,8% 84% 86,3% [2]
Чувствительность 65,4% 79,9% 42,2% 90,5–96,7% [2]
94,8 [11]

Как говорится, при всем богатстве выбора альтернатив немного. К сожалению, при выборе теста многие руководствуются не его диагностическими характеристиками, а безвредностью для здоровья, потому что фенол в составе кожных проб пугает многих. И существует даже движение против пробы Манту, группа поддержки которого периодически предлагает заменить ее анализами крови IGRA. Но, как было отмечено выше, у подобных страхов нет никаких оснований. В придачу, являясь продуктом жизнедеятельности организма, фенол не накапливается, а выводится вместе с мочой. Поэтому главными критериями все-таки являются чувствительность и специфичность тестов.

На данный момент, наилучшие характеристики демонстрирует только «Диаскинтест». Однако, несмотря на это, в массовой диагностике продолжают использовать пробу Манту 2 ТЕ, и она вполне удовлетворяет фтизиатров. Ведь «Диаскинтест» (также как и IGRA-анализы) не реагирует на инфекцию, вызванную M. bovis. Кроме того, его внедрили в массовую диагностику лишь 10 лет назад, а это слишком небольшой срок, чтобы полностью удостовериться в его диагностической эффективности и «списать» туберкулиновую пробу за ненужностью.

Что касается анализов крови IGRA, то они слишком дороги, не превосходят «Диаскинтест» в чувствительности и не различают латентное носительство. А в мире, где живет более 10 миллионов туберкулезных больных и 1,7 миллиарда носителей микобактерий [3], это является существенным недостатком.

источник