Анализ мочи на белковые фракции

Белковые фракции – это соотношение компонентов, образующих единый показатель – общий белок крови. Оценка соотношения белковых фракций позволяет обнаружить характерные патологические состояния в организме.

Смесь белков крови можно разделить методом электрофореза на 5 фракций:

2. α1 – глобулины: альфа1–антитрипсин, альфа1-кислый гликопротеин (орзомукоид), альфа1-липопротеин.

3. α2 – глобулины: альфа2-макроглобулин, церулоплазмин, гаптоглобин, антитромбин III, тироксинсвязывающий гллобулин. Это острофазные белки, основной из них альфа2-макроглобулин отвечает за развитие воспалительных реакций при инфекциях.

4. β – глобулины: трасферрин (белок-переносчик железа), компоненты системы комплемента, гемопексин (связывает гем, чтобы он не выводился почками), иммуноглобулины, С-реактивный белок.

5. γ – глобулины: лизоцим, фибриноген, иммуноглобулины классов IgG, IgA, IgM, IgE. Последние являются антителами, которые защищают организм от проникновения чужеродных агентов.

Оценка белковых фракций – это комплексное исследование, рассматривать его результаты следует в совокупности. Основные типы нарушений белкового обмена, которые выявляются чаще всего, — это диспротеинемия и парапротеинемия.

Диспротеинемия – это нарушение соотношения компонентов, объединённых в понятие «общий белок». При этом количество общего белка может быть в норме. Для определённых заболеваний характерно типичное изменение состава белков.

• Повышение альфа1 – и альфа2-глобулинов характерно для острых воспалительных процессов – острого бронхита, воспаления лёгких, острого пиелонефрита, инфаркта миокарда, травм, опухолей.
• Повышение альфа2-глобулинов указывает на нефротический синдром, оно объясняется накоплением альфа-2 макроглобулина при одновременной потере альбумина во время фильтрации в почках.
• Повышение уровня гамма-глобулинов указывает на хронический воспалительный процесс в организме: хронический гепатит, ревматоидный артрит.
• Увеличение гамма-глобулинов при одновременном слиянии фракций гамма- и бета-глобулинов при электрофорезе: цирроз печени.

Парапротеинемия – это появление необычного моноклонального белка, называемого парапротеин, М-белок, М-градиент. Уровень М-белка более 15 г/л указывает на миеломную болезнь. Небольшие количества М-белка могут обнаруживаться у пожилых пациентов, при хроническом гепатите.

Появление М-белка возможно при множественной миеломе (увеличение продукции IgG), при макроглобулинемии Вальденстрема (избыточное образование IgM), при моноклональной гаммапатии неясного генеза (гиперпродукция IgA). В любом случае, при исследовании белковых фракций нельзя уточнить класс иммуноглобулина, поэтому оценивается лишь общее повышение М-белка.

Острые воспалительные заболевания.

Хронические воспалительные заболевания.

За сутки до исследования не принимать спиртные напитки, жирную пищу, ограничить физические нагрузки.

Кровь на исследование сдают утром натощак, исключается даже чай или кофе. Допустимо пить обычную воду.

Временной интервал между последним приёмом пищи и взятием крови на исследование – не менее восьми часов.

Кровь на исследование следует сдавать с 8 до 11 часов утра.

Норма: значения нормы могут немного отличаться в зависимости от лаборатории. Сравнивайте результат с нормой на бланке результата анализа. Если она не указана, смотрите ниже.

• беременность,
• алкоголизм,
• обезвоживание организма.

• инфекционные заболевания,
• системные болезни соединительной ткани,
• лимфогранулематоз,
• цирроз печени,
• третий триместр беременности,
• приём гормональных средств — андрогенов.

• нефротический синдром,
• цирроз печени или гепатит,
• хронический воспалительный процесс (ревматоидный артрит, узелковый периартериит).

• механическая желтуха,
• железодефицитная анемия (повышен трансферрин),
• приём эстрогенов.

• хронические инфекционные заболевания,
• паразитарная инвазия,
• саркоидоз,
• болезни печени (хронический гепатит, цирроз),
• множественная миелома,
• болезнь Вальденстрема,
• моноклональная гаммапатия.

• недостаточное поступление белка с пищей,
• нарушение всасывания белка в кишечнике,
• злокачественные опухоли,
• ожоги,
• избыточное содержание жидкости в организме,
• наследственная патология – анальбуминемия.

• врождённый дефицит альфа1-антитрипсина.

• ожоги и травмы (снижение альфа2-макроглобулина),
• гемолиз (снижение гаптоглобина).

• хронические болезни печени,
• нефротический синдром.

• лучевая болезнь,
• агаммаглобулинемия или гипогаммаглобулинемия,
• лимфосаркома,
• лимфогранулематоз.

Выберите беспокоящие вас симптомы, ответьте на вопросы. Выясните, насколько серьезна ваша проблема и нужно ли обращаться к врачу.

Перед использованием информации, предоставляемой сайтом medportal.org, пожалуйста, ознакомьтесь с условиями пользовательского соглашения.

Сайт medportal.org предоставляет услуги на условиях, описанных в настоящем документе. Начиная пользоваться веб-сайтом Вы подтверждаете, что ознакомились с условиями настоящего Пользовательского соглашения до начала пользования сайтом, и принимаете все условия данного Соглашения в полном объеме. Пожалуйста, не пользуйтесь веб-сайтом, если Вы не согласны с данными условиями.

Описание услуги

Вся информация, размещённая на сайте, носит справочный характер, информация взята из открытых источников является справочной и не является рекламой. Сайт medportal.org предоставляет услуги, позволяющие Пользователю производить поиск лекарственных средств в данных, полученных от аптек в рамках соглашения между аптеками и сайтом medportal.org. Для удобства пользования сайтом данные по лекарственным средствам, БАД систематизируются и приводятся к единому написанию.

Сайт medportal.org предоставляет услуги, позволяющие Пользователю производить поиск клиник и другой информации медицинского характера.

Ограничение ответственности

Размещенная в результатах поиска информация не является публичной офертой. Администрация сайта medportal.org не гарантирует точность, полноту и (или) актуальность отображаемых данных. Администрация сайта medportal.org не несет ответственности за вред или ущерб, который Вы могли понести от доступа или невозможности доступа к сайту или от использования или невозможности использования данного сайта.

Принимая условия настоящего соглашения, Вы полностью понимаете и соглашаетесь с тем, что:

Информация на сайте носит справочный характер.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия ошибок и расхождений относительно заявленного на сайте и фактического наличия товара и цен на товар в аптеке.

Пользователь обязуется уточнить интересующую его информацию телефонным звонком в аптеку или использовать предоставленную информацию по своему усмотрению.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия ошибок и расхождений относительно графика работы клиник, их контактных данных – номеров телефонов и адресов.

Ни Администрация сайта medportal.org, ни какая-либо другая сторона, вовлеченная в процесс предоставления информации, не несет ответственности за вред или ущерб, который Вы могли понести от того, что полностью положились на информацию, изложенную на этом веб-сайте.

Администрация сайта medportal.org предпринимает и обязуется предпринимать в дальнейшем все усилия для минимизации расхождений и ошибок в предоставленной информации.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия технических сбоев, в том числе в отношении работы программного обеспечения. Администрация сайта medportal.org обязуется в максимально короткие сроки предпринять все усилия для устранения каких-либо сбоев и ошибок в случае их возникновения.

Пользователь предупрежден о том, что Администрация сайта medportal.org не несет ответственности за посещение и использование им внешних ресурсов, ссылки на которые могут содержаться на сайте, не предоставляет одобрения их содержимого и не несет ответственности за их доступность.

Администрация сайта medportal.org оставляет за собой право приостановить действие сайта, частично или полностью изменить его содержание, внести изменения в Пользовательское соглашение. Подобные изменения осуществляются только на усмотрение Администрации без предварительного уведомления Пользователя.

Вы подтверждаете, что ознакомились с условиями настоящего Пользовательского соглашения , и принимаете все условия данного Соглашения в полном объеме.

Рекламная информация, на размещение которой на сайте имеется соответствующее соглашение с рекламодателем, имеет пометку «на правах рекламы».

источник

Белковый состав мочи при важнейших заболеваниях почек

Профессор Батюшин Михаил Михайлович — Председатель Ростовского областного общества нефрологов, заместитель директора НИИ урологии и нефрологии, Руководитель нефрологической службы ГОУ ВПО РостГМУ, заведующий отделением нефрологии клиники РостГМУ.

Бова Сергей Иванович — Заслуженный врач Российской Федерации,заведующий урологическим отделением — рентгено-ударноволнового дистанционного дробления камней почек и эндоскопических методов лечения, ГУЗ «Областная больница №2», г. Ростов-на-Дону.

Галушкин Александр Алексеевич — кандидат медицинских наук, врач-нефролог, ассистент кафедры внутренних болезней с основами физиотерапии №1 РостГМУ.

Турбеева Елизавета Андреевна — редактор страницы.

Белковый состав мочи при важнейших заболеваниях почек.

Книга: «Протеинурия» (А.С. Чиж).

Еще Гофману и Сенатору (1874) было известно, что с мочой при заболеваниях почек выделяются не только альбумины, но и глобулины (цит. по: Н.Я.Червяковский, 1963). Позже это подтвердил A.Hiller (1927), а затем Е.М.Тареев и М.А.Благирева (1931).

С введением в клиническую практику метода электрофореза белков на бумаге появилась возможность более глубоко изучить механизм протеинурии и ее особенности при различных заболеваниях почек.

По мнению А.Я.Пытеля и С.Д.Голигорского (1968), электрофорез остается пока наиболее доступным методом определения качественных особенностей протеинурии и позволяет в известной мере уточнять некоторые стороны механизма ее происхождения. Белковый состав мочи при диффузных заболеваниях почек изучался методом электрофореза на бумаге многими исследователями.

В последние годы для исследования качественных и количественных особенностей белков мочи используют предложенный в 1955 г. O.Smithies метод электрофореза в крахмальном геле. По мнению Е.М.Тареева (1968), А.Я. Лытеля и С.Д.Голигорского (1968), этот метод является перспективным не только для изучения качественных особенностей протеинурии, но и для выяснения некоторых звеньев ее патогенеза.

К сожалению, работ с применением указанного метода пока еще очень мало (Д.БЛ.Дыкин, М.М.Щерба, 1969; Д.Б.Цыкини соавт., 1971, 1972; Т.Н.Александровская, 1972; Л.Р.Полянцева, 1972; J.Traeger и соавт., 1965,1966,1967).

С помощью электрофореза белков в крахмальном геле по сравнению с электрофорезом на бумаге удается обнаружить в сыворотке крови и в моче значительно большее число белковых фракций,а следовательно,получить и более ценную информацию о белковом спектре этих биологических жидкостей при различных заболеваниях почек.

Так, Д.Б.Цыкини соавт. (1969, 1971), используя данный метод для изучения состава уропротеинов при некоторых диффузных заболеваниях почек, выявили в моче обследованных ими 52 больных от 3 до 12 белковых фракций, в том числе по три фракции (преальбумины, альбумины, сидерофилин) при хроническом гломерулонефрите с изолированным мочевым синдромом, 11 (пре- и постальбумины, альбумины, «2-быстрые глобулины, сидерофилин, гаптоглобины и у-глобулин) — при смешанной форме хронического гломерулонефрита и 12 (кроме упомянутых, еще и «2-медленные глобулины) фракций при нефротическом синдроме на почве гломерулонефрита и амилоидоза почек.

Содержание каждой из глобулиновых фракций, выраженное в относительных показателях (%), было наибольшим в моче больных с нефротическим синдромом.

Как подчеркивают авторы, содержание «2-медленных глобулинов (макроглобулинов) было весьма незначительным (1,1 ±0,71%), и белки этой фракции выявлялись только при нефротическом синдроме и то лишь в единичных случаях. Однако в работе не указывается, как часто встречались другие глобулиновые фракции, в частности гаптоглобины и у-глобулины.

Кроме того, не проведен раздельно анализ уропротеинограмм при одинаковых клинических формах острого и хронического гломерулонефрита и при нефротическом синдроме в зависимости от его этиологии. На наш взгляд, это могло бы представить определенный интерес для дифференциальной диагностики диффузных заболеваний почек.

В работах J .Traeger и соавт.,(1965, 1966, 1967), материалы которых основаны на данных обследования больных (более тысячи) с различными врожденными и приобретенными заболеваниями почек, изучен белковый спектр мочи с одновременным использованием методов электрофореза на бумаге, в крахмальном геле и иммуноэлектрофореза.

В большинстве случаев полученные данные сопоставлялись с результатами прижизненной пункционной биопсии почек и эффективностью кортикостероидной терапии. При некоторых врожденных тубулопатиях упомянутые исследователи выявили так называемый канальцевый (тубулярный) тип протеинурии, для которого на электрофореграмме в крахмальном геле характерно наличие:

• 1) фракции преальбуминов в виде «шапки жандарма»;
• 2) небольшой фракции альбуминов и большой постальбуминов, широкой полосы быстрых (что, по мнению Е. Butler, является специфичным для тубулярной протеинурии) и еще более широкой (шире, чем сывороточного сидерофилина) у-глобулинов;
• 3) а2-медленных и b-глобулинов.

Тубулярный тип протеинурии в чистом виде либо с некоторыми изменениями обнаружен также при пиелонефрите, поликистозе почек, острой почечной недостаточности, отравлении фенацетином, витамином Д, при гипоксии. Однако необходимо отметить, что в упомянутых работах изучались лишь качественные особенности уропротеинограмм без их количественного анализа.

Анализируя литературные данные о качественном и количественном составе белков мочи при важнейших диффузных заболеваниях почек, следует отметить, что получены ОНИ в основном с помощью метода электрофореза на бумаге и в ряде случаев, существенно различаются между собой.

При этом наиболее исследован нефротический синдром, в меньшей мере — другие клинические формы гломерулонефрита и незначительно — пиелонефрит. Содержание в моче отдельных белковых фракций выражалось, как правило, лишь в относительных (%), а не в абсолютных (г/л) величинах, и в подавляющем большинстве результаты исследований не подвергались статистическому анализу.

Содержание общего белка, а тем более отдельных его фракций в моче, их качественные и количественные особенности в аспекте различных клинических форм важнейших диффузных почечных поражений до настоящего времени изучались весьма ограниченно.

Более полного представления о качественных и количественных особенностях уропротеинограмм при различных клинических вариантах почечных заболеваний можно достичь при помощи метода электрофореза белков в различных гелях, в частности в крахмальном геле.

Методом электрофореза в крахмальном геле нами изучен белковый спектр мочи у 288 больных от 16 до 65 лет, в том числе у 148 мужчин и 140 женщин. Среди них были 124 больных с различными клиническими формами хронического гломерулонефрита (22 — с острым гломерулонефритом с затянувшимся течением, 76 — с хроническим пиелонефритом, 9 — с интерстициальным нефритом, 3 — с амилоидозом почек, 26 — с хронической почечной недостаточностью, 21 — сострой почечной недостаточностью и 7 больных с застойной протеинурией). У части больных электрофорез белков проведен в динамике,в результате чего получено и проанализировано 336 уропротеинограмм.

Данные качественного и количественного анализа протеинограмм мочи в зависимости от нозологической формы заболевания и его клинической формы приводятся ниже.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Прежде чем перейти к изложению полученных данных и результатов их анализа, целесообразно дать краткое описание методики исследования. При этом метод электрофореза белков сыворотки крови и мочи в крахмальном геле описан более детально ввиду его меньшей известности и необходимости изложения некоторых дополнений и усовершенствований, внесенных нами при обработке этого метода.

Материалом для исследования являлись сыворотка крови и моча больных. Кровь (5—7 мм) брали из вены натощак. Получаемую после свертывания и центрифугирования сыворотку крови сливали в отдельную чистую пробирку и использовали для определения содержания общего белка, электрофореза белков и других исследований. Мочу брали у больных из утренней порции (сразу после сна), как это делали, например, М.А. Адо (1965) и другие. Предварительно ее подвергали диализу и концентрированию.

Диализ и концентрирование мочи. В литературе описаны различные методы диализа и концентрирования мочи. Так, Н.К.Лебедева и соавт. (1967), A. Afonso (1967) 10-20 мл мочи, помещенной в целлофановый мешочек, подвергали диализу вначале против водопроводной воды в течение 6 часов, а затем против дистиллированной воды в течение 16—20 часов.

Концентрирование осуществляли с помощью комнатного вентилятора до тех пор, пока в мешочке оставалось несколько капель мочи. М.П.Матвеев , Л.В.Шатунова (1969) диализ мочи проводили в целлофановых трубках против дистиллированной воды в течение двух дней,а концентрирование —в 16% растворе желатины. Дистиллированную воду в качестве диализирующей среды применяли и другие авторы (М.А.Адо, 1965; А.П. Пелещук и соавт., 1968 и др.).

Причем М.А.Адо для концентрирования мочи использовала комнатный вентилятор, добиваясь увеличения концентрации белка в 10 раз, а А.П.Пелещук и соавторы сгущение мочи проводили аналогично, но лишь в тех случаях, когда концентрация белка в моче была ниже 1 г/л. Другие рекомендуют добиваться концентрации белка в моче до 10 г/л и более (И.Тодоров, 1963; Т.Дочев, 1965).

Предложены методы диализа и концентрирования мочи в растворах высокомолекулярных веществ, например поливинилпирролидона, полиэтиленгликоля (В.Salle и соавт., 1967; J.Traeger и соавт., 1965, 1966 и др. ), гуммиарабика (И.Тодоров, 1963; Д.Дочев, 1965), а также с помощью особых фильтров под давлением, путем ультрафильтрации и т.п. (Ю.Я.Гофман, 1963; Г.В.Воскобойников, Н.Д.Сидорова, 1965; J.Traeger и соавт., 1966 и др.).

Мы проводили диализ мочи против дистиллированной воды в течение 8— 12 часов, а сгущение ее при помощи комнатного вентилятора в течение 4-6 часов, добиваясь увеличения концентрации белка в 20 раз. Для этого необходимое количество мочи (20 мл) в начале наших исследований помещали в целлофановый мешочек.

Однако в связи с рядом неудобств, связанных с приготовлением мешочков, внесением и взятием мочи из них, в дальнейшем для этих целей были использованы небольшие воронки. Широкую часть воронки обтягивали целлофаном, который в узкой ее части прочно обвязывали ниткой.

Концами последней затем подвешивали воронку к штативу (при концентрировании мочи) или к специальному приспособлению (при диализе). Исследуемую порцию мочи мерной пипеткой вводили в воронку через узкую ее часть.

Растекаясь относительно тонким слоем по целлофану, закрывающему широкую часть воронки, моча на сравнительно большой поверхности соприкасалась с ним, что способствовало более полному и быстрому проведению диализа и концентрирования.

Определение концентрации общего белка в сыворотке крови и в моче.

Содержание общего белка в сыворотке крови и в моче устанавливали биуретовым методом. Хотя этот метод определения белка был предложен давно (W.Autenriet, 1914; цит по: Л.А.Неделина и Н.А.Сентебова, 1971), однако для широкого использования его потребовались многочисленные дополнительные исследования (Л.Ф.Кельзон, 1952; Л.Г.Смирнова, Е.А.Кост, 1960; С.Г.Аптекарь, А.А. Покровский, 1969; G.Kingsley, 1939; R.Ardry, 1949; W.Bartosiewicz, 1956; M.Piscator, 1966 и др.).

В результате была разработана наиболее приемлемая модификация этого метода, которая в настоящее время предложена в нашей стране в качестве унифицированной методики определения общего белка в сыворотке крови (Л.А.Неделина, Н.А.Сентебова, 1971).

Биуретовый метод широко применяют и для количественного определения белка в моче (Л.Г.Смирнова, Е.А.Кост, 1960; Е.И.Кримкевич, 1972;

Н.Я.Мельман, 1972; А.П.Пелещук и соавт., 1972; A.Hiller, 1927; W.Foster и соавт., 1952 и др.). Однако предварительно моча должна быть сконцентрирована, так как при низких концентрациях белка снижается чувствительность метода (Л.А.Неделина, Н.А.Сентебова, 1971).

В наших исследованиях использована модификация метода, описанная Л.Г.Смирновой и Е.А.Кост (1960). Следует отметить, что в том количестве мочи, которое мы брали для исследований, существенной разницы в содержании общего белка не наблюдалось независимо от того, взята ли моча из суточного ее количества или из утренней порции.

У 23 обследованных больных (2 больных с острым гломерулонефритом, 12 — с хроническим гломерулонефритом, 7 — с хроническим пиелонефритом и 2 — с интерстициальным нефритом) концентрация общего белка в порции мочи, взятой для исследования из суточного ее количества и из утренней порции .соответственно была равна 0,072±.0,013 и 0,071±0,010 (Р>0,3). На уропротеинограмме выявлялось и в том и в другом случае одинаковое количество белковых фракций.

Содержание общего белка определяли у одного и того же больного одновременно в сыворотке крови и в моче (после ее диализа и концентрирования) . Для удобства дальнейших расчетов и проведения сравнительного анализа показателей общего белка и белковых фракций сыворотки крови и мочи применяли одни и те же величины (проценты и граммы на литр). Концентрацию белка в моче вычисляли по следующей формуле:

Белковый состав мочи при важнейших заболеваниях почек

где X — концентрация белка в несконцентрированной моче, г/л; а — объем сконцентрированной мочи (обычно 1 мл); С — концентрация белка в сконцентрированной моче, определяемая по биуретовой реакции, г/л; А — объем мочи, взятой для концентрирования (обычно 20 мл).

Для определения концентрации белка в граммах на литр несконцентрированной мочи полученную величину умножают на 10.

Электрофорез белков в крахмальном геле. Исследованиями последних лет установлена высокая эффективность электрофоретического анализа белков при использовании в качестве поддерживающих сред различных мелкодисперсных гелей (агарового, полиакриламидного, крахмального), а также иммуноэлектрофореза.

Благодаря сравнительной простоте, доступности и высокой разрешающей способности в лабораторной практике последних лет широкое распространение получил метод электрофореза белков в крахмальном геле, который впервые был предложен в 1955 г. О.Smithies. Этот метод чаще всего используется для изучения различных белков крови, тканевых белков и некоторых ферментов.

Он позволяет выявить в сыворотке крови от 12 до 13—17—22 белковых фракций (С.М.Раппопорт, 1956; В.Д.Успенская и соавт., 1968; Е.Д.Васильева, 1968; Ф.Гауровиц, 1965; Дж.Уилкинсон, 1968) ,а при использовании двухмерного электрофореза в сочетании с иммуноэлектрофорезом — до 30 фракций (Г.В.Троицкий, 1962; Е.М.Саминский, 1966; В.Д.Успенская и соавт., 1968 и др.).

При этом каждую из пяти фракций, получаемых при электрофорезе на бумаге, можно разделить на ряд под фракций. Так, например, си-глобулин человека удалось разделить на 8 под- фракций (Дж.Уилкинсон, R68). С помощью этого метода выделены плазменные белки, обладающие индивидуальными различиями, а также установлен ряд наследственных типов гаптоглобина, трансферрина и некоторых других белков.

Количество белковых фракций сыворотки крови, полученных с помощью электрофореза в крахмальном геле, так велико, что не все они идентифицированы, и в полной мере не установлено, какую сыворотку следует принимать за нормальную, так как у каждого здорового человека она может иметь свои индивидуальные особенности (Е.М.Саминский, 1966).

Что касается применения метода электрофореза в крахмальном геле для исследования белкового состава мочи при заболеваниях почек, то по этому вопросу в литературе имеется сравнительно немного работ (Е.М.Тареев, 1968; Д.Б.Цыкин и соавт., 1969; 1972; P.Milliez и соавт., 1960; M.Debray -Sachs, 1966; J.Traeger и соавт., 1965, 1966, 1967 и др.).

Между тем изучение качественного и количественного состава белков мочи с помощью упомянутого метода является перспективным как в отношении диагностики заболеваний почек, так и для выяснения некоторых сторон механизма протеинурии.

Метод электрофореза в крахмальном геле чаще всего используется для изучения качественного состава белков, однако в настоящее время доказана возможность применения его и для количественного определения отдельных белковых фракций, хотя при этом встречаются довольно значительные трудности, о чем будет сказано ниже.

Основные принципы и особенности метода. Поскольку трактовку результатов фракционного анализа белков сыворотки крови и мочи, полученных методом электрофореза в крахмальном геле, необходимо связывать с особенностями разделения белковых фракций при миграции их через гель, целесообразно кратко остановиться на основных принципах электрофореза белков в гелевых средах.

При электрофорезе гели в качестве поддерживающей среды обладают рядом важных особенностей и преимуществ по сравнению с другими средами. Главная особенность гелей — малые размеры их пор, которые, кроме того, могут изменяться в зависимости от концентрации геля.

По своему диаметру поры в геле можно сравнить с размером белковых макромолекул. Вот почему гель схож с молекулярным ситом, в котором скорость движения белковых молекул зависит от их размера: крупные молекулы (диаметр их равен или почти равен диаметру пор) движутся медленнее, чем мелкие, легко проникающие через гель (Э.Г.Ларский, 1971; Г.Маурер, 1971 и др.).

Таким образом, электрофоретическое разделение белков в гелях зависит не только от электрического заряда молекул, но и от их размеров и формы (Е.М.Саминский, 1966; В.Д.Успенская и соавт., 1968; Дж.Хаггис и соавт., 1967). Кроме того, адсорбционные явления в гелях выражены очень слабо (Г.В.Троицкий, 1962; Е.М.Саминский, 1966).

По этим причинам электрофорез в гелях обладает чрезвычайно высокой разрешающей способностью, которая наиболее выражена в крахмальном и полиакриламидном гелях. Агаровый гель, хотя и обладает малой адсорбционной способностью, но в связи с относительно большими размерами пор дает несколько худшее разделение белковых молекул (Е.М.Саминский, 1966).

Считают, что электрофорез в мелкодисперсных гелях является единственным видом электрофореза, при котором происходит разделение белков с одинаковой электрической подвижностью, но с различными молекулярными массами (В.Д.Успенская и соавт., 1968).

Аппаратура и другие принадлежности, необходимые для проведения электрофореза белков в крахмальном геле. Электрофорез белков в крахмальном геле можно проводить в обычном аппарате, предназначенном для электрофореза белков на бумаге, например типа ПЭФ, но описаны и специальные аппараты для проведения этого метода исследования (В.Д.Успенская, 1959; В.М.Родионов и соавт.; 1960; В.А.Давыдова, Н.И.Макаревич, 1964; М.Д.Луцик, 1968; S.Boyer, R.Hiner, 1963). Нами использован аппарат УЭФ (универсальный прибор для электрофореза).

Для получения определенных размеров гелевой пластинки и проведения электрофореза необходима специальная кювета с крышкой. Предложены и описаны различные варианты плексигласовых кювет (Г.В.Троицкий, 1962; И.М.Маркелов, 1964; Н.Н.Старостин, 1966; А.А.Стрекалов, 1966 и др.).

На наш взгляд, наиболее простой и удобной является конструкция кюветы, описанная В.Д.Успенской и соавт. (1968). Мы пользовались плексигласовой кюветой аналогичного типа, но несколько иных размеров: длина ее рабочей площади составляла 16,5 см, ширина 7,0 см и высота бортиков (от этого зависит толщина гелевой пластинки) 6 мм. Крышка кюветы имела те же размеры, за исключением меньшей высоты бортиков (3 мм), так как она одновременно использовалась в качестве лотка для разделения гелевой пластинки на две равные части одинаковой толщины.

Формовочная пластинка (гребенка), необходимая для образования поперечного ряда щелей в геле, куда вносится исследуемый материал (сыворотка крови и моча), изготовлена нами из пластмассовой пластинки толщиной 0,5 мм и шириной 6,5 см; длина (высота) ее не имеет практического значения.

На одном из концов пластинки вырезались прямоугольные зубцы высотой 6,5 мм, шириной 8 мм; расстояние между зубцами 2,8 мм. Таким образом,всего было шесть зубцов,что сразу позволило сделать в геле шесть насечек (щелей) и вносить в гель для проведения электрофореза такое же количество проб исследуемого материала. Гелевую пластинку обычно рекомендуется разрезать нихромовой проволокой диаметром 0,1 мм.

Гидролиз крахмала. Успешное разделение белковых фракций во многом зависит от качества крахмального геля, который должен обладать определенной степенью дисперсности, эластичности и прочности. Это имеет существенное значение не только в процессе проведения электрофореза, но и при дальнейших манипуляциях с гелем (окрашивание, отмывка, фотографирование, сушка и т.п.). Качество же крахмального геля во многом зависит от сорта крахмала, тщательности и особенностей проведения его гидролиза.

Процесс приготовления гидролизного крахмала — один из наиболее трудных и в то же время наиболее важных и ответственных моментов в методике получения крахмального геля. Описан ряд модификаций приготовления гидролизованного крахмала (Г.Ф.Троицкий, 1962; Е.М.Саминский, 1966; Н.Н.Старостин, 1966; Ю.Н.Берг и соавт., 1967; Е.Д.Васильева, 1968; В.Д.Успенская и соавт., 1968).

Однако общий принцип гидролиза такой, каким его описал О.Smithies (1955): крахмал гидролизуют соляной кислотой в среде ацетона при строго определенной температуре и в течение определенного промежутка времени для каждого сорта крахмала. Мы пользовались гидролизованным крахмалом, который получали из лаборатории линейных животных Белорусского научно-исследовательского института животноводства.

Гидролиз картофельного крахмала высшего сорта проводился в среде ацетона с добавлением соляной кислоты (из расчета на 300 г крахмала 600 мл ацетона и 9 мл соляной кислоты плотности 1,18) при температуре 38,6°С в течение двух часов.

Приготовление крахмального геля. Предварительно необходимо приготовить буферные растворы двух видов:

• 1) для разведения гидролизованного крахмала (крахмальный буфер) и
• 2) для заливки электродных кювет (электродный буфер).

Для электрофореза в крахмальном геле можно применять обычные буферные растворы с колебаниями pH от 2,0 до 11,0 (В.Д.Успенская и соавт., 1968). Наибольшее распространение получили боратные растворы, предложенные О.Smithies, различные модификации которых были в дальнейшем использованы многими авторами (Н.Н.Старостин, 1966; Ю.Н.Берг и соавт., 1967; В.Д.Успенская и соавт., 1968; Дж.Уилкинсон, 1968 и др.). Весьма эффективны комбинированные буферные системы, например трисцитратный буфер (Г.В.Троицкий,1962; M-Poulak, 1957 и др.).

Нами использованы боратные буферные растворы следующего состава:

1) для разведения крахмала — 1,86 г борной кислоты (Н^ВО^) и 0,48 г гидроксида натрия (NaOH) на 1000 мл дистиллированной воды;

2) для заливки кювет — 18,6 г борной кислоты и 2,4 г NaOH на 1000 мл дистиллированной воды.

При подготовке крахмального геля обычно оптимальной считают концентрацию крахмала,равную 12—15% (В.Г.Троицкий, 1962; Е.М.Саминский, 1966) или 12-17 (В.Д.Успенскаяи соавт., 1968), 12-13% (Дж.Уилкинсон, 1968), 12—16 (Ю.Н.Берг и соавт., 1967) и даже 18% (Д.БДыкин, М.М.Щерба, 1969).

Следовательно, чтобы получить гель 12—18% концентрации,на 100 мл буферного раствора требуется 12—18 г гидролизованного крахмала. При этом описаны два варианта приготовления геля.

Первый вариант — вся навеска крахмала растворяется в соответствующем количестве крахмального буфера, затем полученная суспензия, помещенная в круглодонную колбу с длинным горлом, нагревается на открытом пламени горелки при энергичном вращении до получения геля.

Однако в таком случае не всегда удается установить точно момент, когда следует прекратить нагревание, а от этого зависит качество получаемого геля и его пригодность для электрофореза. Чтобы избежать погрешностей, даются различные рекомендации (Е.М.Саминский, 1966; Ю.Н.Берг и соавт., 1967; В.Д.Успенская и соавт., 1968 и др.).

Однако полностью устранить упомянутые дефекты не всегда удается. Учитывая это, предложен второй вариант приготовления геля, сущность которого заключается в следующем (Н.Н.Старостин,1966).

Приготовленную навеску крахмала помещают в отдельную колбу и добавляют туда примерно одну треть соответствующего количества буфёрного раствора; при взбалтывании получают суспензию крахмала. Остальные две трети буфера,находящегося в круглодонной колбе или другом сосуде достаточной емкости, нагревают до кипения, и затем при энергичном помешивании через воронку равномерной струей добавляют в него суспензию крахмала. В результате получается крахмальный гель заданной концентрации.

Нами использован второй вариант приготовления крахмального геля, только кипящий буфер вливали в суспензию крахмала, находящегося в колбе Бунзена, что снижало потерю крахмала, остающегося на стенках колбы, и затем переходили к деаэрации геля. Колбу Бунзена, закрытую притертой пробкой, подключали к водоструйному насосу. Отсасывание воздуха продолжали до тех пор, пока не прекращалось выделение пузырьков.

После этого колбу отсоединяли от водоструйного насоса и еще горячий гель медленно выливали в заранее подготовленную кювету, которая закрывалась крышкой таким образом,чтобы под ней не оставалось пузырьков воздуха, и поверх нее накладывали груз (обычно кирпич, обернутый в полиэтиленовую пленку). В таком виде крахмальный гель оставляли на два часа при комнатной температуре до образования плотной и эластичной гелевой пластинки.

Крахмальный гель готовили непосредственно перед электрофорезом. В проводимых опытах концентрация его составляла 15%. Охлаждать гель можно при комнатной температуре, как это делала, например, Е.Д.Васильева (1968), либо в холодной комнате в течение 2-2,5 часов, либо в рефрижераторе в течение 30—60 минут (Ю.Н.Берг и соавт., 1967) или нескольких часов (Е.М.Саминский, 1966).

Внесение в гель исследуемого материала. После того как гель остынет, необходимо аккуратно снять с кюветы крышку, тщательно очистить ее и борта кюветы от избытка геля (нами крышка промывалась водой и высушивалась) . С обоих концов гелевую пластинку осторожно отделяют скальпелем, от стенок кюветы,чтобы легче было подвести под нее мостики из фильтровальной бумаги.

Последние готовят из двух-трех слоев фильтровальной бумаги днирина которой соответствует ширине гелевой пластинки,а длина на 5—7 см превышает расстояние от кюветы до поверхности электродного буфера, в наших условиях она составляет 12—15 см.

Мостики из фильтровальной бумаги осторожно с помощью формовочной пластинки подводят на 1,5—2 см под гелевую пластинку с обоих ее концов.

Затем приступают к внесению в гель проб исследуемого материала. Насечки или щели в геле, в которые вносятся образцы исследуемой биологической жидкости, готовят заранее различными способами — скальпелем (Н.Н.Старостин, 1966), лезвием бритвы (Ю.Н.Берг и соавт., 1967) или пластмассовой гребенкой (В.Д.Успенская и соавт., 1968). Последний способ, на наш взгляд, наиболее удобен: он позволяет сделать сразу необходимое количество одинаковых по размеру и расположенных строго на одной линии щелей (линия старта).

Используя формовочную пластинку (гребенку), мы делали насечки в геле по линии, отстоящей на 2—3 см от края подведенной под гелевую пластинку полосы фильтровальной бумаги. В образованные таким образом отверстия с помощью пинцета и кусочков фильтровальной бумаги, размеры которых соответствовали размерам зубцов формовочной пластины, вносили пробы исследуемой сыворотки крови и концентрированной мочи.

Кусочки фильтровальной бумаги перед внесением в стартовую выемку предварительно смачивали сывороткой крови или мочой. Некоторые авторы (Ю.Н.Берг и соавт., 1967) рекомендуют вносить в гель образцы исследуемых биологических жидкостей с помощью пастеровской пипетки. Однако этот способ неточен, так как в различные щели может вноситься неодинаковое количество исследуемого материала.

В одну кювету было внесено сразу шесть проб: три—сыворотки крови и три—мочи.Причем сыворотку крови и мочу одного и того же больного помещали в рядом расположенные стартовые выемки, что представлялось удобным при идентификации белковых фракций мочи и сравнении их с аналогичными фракциями сыворотки крови.

По окончании внесения образцов в крахмальный гель кювету закрывали крышкой, предварительно смазав ее тонким слоем вазелинового масла (для предотвращения высыхания геля), и помещали в аппарат для электрофореза. Переходные мостики смачивали электродным буферным раствором и свободные концы их опускали в электродные кюветы, заполненные буферным раствором. Затем аппарат для электрофореза включали в сеть.

Условия для электрофореза. Большинство авторов электрофорез белков в крахмальном геле рекомендуют проводить при напряжении от 4-5 (Г.В.Троицкий, 1962; В.Д.Успенская и соавт., 1968) до 6—8 В/см (Ю.Н.Берг и соавт., 1967)и силе тока 2—2,5 тА на 1 см ширины кюветы или гелевой пластинки (Ю.Н.Берг и соавт., 1967; В.Д.Успенская и соавт., 1968).

Другие электрофорез проводили при общем напряжении до 200 В и более и силе тока 0,5—2 тА на 1 см ширины кюветы (Д.БДыкин, М.М.Щерба, 1969; В.А.Давыдова, Н.И.Макаревич, 1964; Дж.Уилкинсон, 1968). Длительность электрофореза при комнатной температуре составляет от 4—6 до 18—2U часов (Н.К.Лебедева и соавт., 1968; В.Д.Успенская и соавт., 1968) и даже до нескольких суток (Ю.Н.Берг и соавт., 1967 и др.).

Нами проведен электрофорез при силе тока 2,0—2,5 тА на 1 см ширины гелевой пластинки (14-16 тА) и напряжении 375—380В. Длительность электрофореза составляла 4 часа. При таких условиях проведения электрофореза, которые соблюдают большинство исследователей, было получено от 9 до 15 белковых фракций в сыворотке крови обследованных лиц.

Кроме того, при данных условиях можно в течение рабочего дня полностью закончить весь процесс подготовки и проведения исследования, в том числе и окрашивание электрофореграмм.

Окрашивание, проявление и фотографирование электрофореграмм. Окрашивание и проявление электрофореграмм в крахмальном геле выполнялось в соответствии с рекомендациями Ю.Н.Берг и соавт. (1967), В.Д.Успенской и соавт. (1968) и других. Поэтому отметим, что для приготовления раствора краски нами был использован растворитель, состоящий из метанола, дистиллированной воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:5:1.

В качестве красителя взят амидошварц 10В (Чехословакия) и кислотный сине-черный краситель, применяемый на ткацких фабриках. Последний лучше и более интенсивно окрашивает белковые фракции.

Раствор красителя готовили из расчета 10 г на 1000 мл растворителя. Окраска гелевых пластинок продолжалась 5-7 минут, после чего красящий раствор сливали, а гелевые пластинки 2-3 раза промывали в течение 5 — 10 минут растворителем. Затем кюветы с гелевыми пластинками заполняли этим же растворителем и, плотно закрыв стеклом, оставляли на ночь.

Утром, слив растворитель, электрофореграммы промывали от оставшихся излишков краски дистиллированной водой и оставляли их в ней на несколько часов. После окраски и отмывки белковые фракции четко вырисовывались на бледном фоне крахмального геля, особенно под тонким слоем чистой дистиллированной воды.

В таких условиях проводили фотографирование электрофореграмм аппаратом ’’Зенит-ЗМ” на пленку чувствительностью 130 единиц при искусственном освещении одной и той же интенсивности. Затем, отпечатав снимки на контрастной бумаге размером 9×12 см, получали фотоэлектрофореграммы (ФЭФГ).

Последние можно сохранять длительное время и использовать для количественного определения (при необходимости — многократно) величины отдельных белковых фракций методом денситометрии в отраженном свете. Кроме того, по ним можно проводить точную идентификацию каждой из белковых фракций сыворотки крови и мочи.

Для просветления фона гелевой пластинки и получения большей «выразительности» белковых фракций предложены различные методы дополнительной обработки гидролизованного крахмала, в частности ацетилированием (Е.Д.Васильева, 1968; В.Х.Панкина, 1971) и другими способами (Ю.Н.Берг, Е.А.Маркина, 1968).

В наших исследованиях такие методы не применялись, так как гидролизованный крахмал получали уже в готовом виде, гель которого после окраски и отмывки давал сравнительно светлый тон.

Для сохранения крахмальные гелевые пластинки с электрофореграммами на них высушивали следующим образом: после фотографирования гелевую пластинку помещали на 12—24 часа в специальный раствор, состоящий из двух частей метанола и одной части глицерина.

Затем пластинку покрывали с обеих сторон фильтровальной бумагой и, расположив между стеклянными пластинками соответствующих размеров, вносили в термостат для сушки при температуре 50-60°С (сушку лучше проводить в потоке проходящего воздуха при температуре 40-50 С).

Обработанная и высушенная гелевая пластинка становится эластичной и прочной. В таком виде электрофореграм- ма в крахмальном геле может долго сохраняться, не теряя четкости контуров и интенсивности окраски полученных в ней белковых фракций. Этот способ более прост и удобен, чем некоторые другие (А.В.Азявчик, 1969 и др.).

Таким образом, в качестве документа можно хранить как гелевые пластинки (их заворачивают в целлофан, а затем в бумагу с необходимыми подписями на ней) ,так и снятые с них на фотопленку электрофореграммы. Кроме того, на бумаге можно делать схематические зарисовки полученных в геле протеинограмм сыворотки крови и мочи.

Количественный анализ электрофореграмм в крахмальном геле. Для количественного определения белковых фракций предложено несколько методов (элюирование с последующим фотокалориметрированием элюатов, фотометрирование в проходящем свете с последующей обработкой электрофореграмм гравиметрическим либо планиметрическим методом, денситометрия в проходящем свете и др.). Однако о выборе метода количественной оценки электрофореграмм существуют разные мнения.

Большинство исследователей считают метод денситометрии наиболее простым по технике выполнения, достаточно точным и поэтому наиболее перспективным (А.А.Соколов и соавт., 1956; А.Е.Гуревич, 1960; Е-А.Чуркин, 1965; Ат.Илков, Т.1 Николаев, 1959; Р.Даневев, Д.Стойнов, 1964 и др.), но отдельные авторы (О.А.Васильева, Г.Е.Барковская, 1960 и др.), признавая несомненную ценность денситометрии, отмечают, что метод элюирования дает меньше погрешностей.

При помощи прямого денситометрирования можно точно определить количественные соотношения отдельных фракций без их предварительного элюирования, которое часто трудно осуществить на практике из-за его сложности (Р.Цаневев, Д.Стойнов, 1964).

При этом количественный анализ электрофореграмм в агаровом геле чаще устанавливают методом прямой (или непосредственной) денситометрии в проходящем свете, так как пластинки агарового геля получаются достаточно прозрачными (В.А.Вайчювенас, 1963; A. Вилейшис и соавт., 1965; Р.А.Гуляева, В.А.Савран, 1967; Р.Протокалэ, B. Боеру, 1959 и др.).

Таким же образом считают возможным проводить количественное определение белковых фракций в полиакриламидном и крахмальном гелях (Г.В.Троицкий, 1962; Р.Цаневев, Д.Стойнов, 1964; Е.М.Саминский, 1966; Э.Г.Ларскийи соавт., 1967 и др.).

Однако гель крахмала по сравнению с агаровым и полиакриламидным менее прозрачен, что затрудняет деноитометрию, поэтому требуется предварительное просветление его, для чего, как уже указывалось, предложен ряд методов (Е. Д.Васильев а, 1968; В.Д.Успенская и соавт., 1968; Ю.Н.Берг, Е.А.Маркина, 1968; В.Х.Панкина, 1971 и др.).

Кроме того, гелевую пластинку необходимо предварительно высушить, что также требует дополнительного времени, навыка и реактивов. Все это существенно усложняет процесс количественной оценки электрофореграмм в крахмальном геле методом прямой денситометрии в проходящем свете, не удовлетворяет полностью исследователей и заставляет искать новые, более простые, доступные, но не менее точные пути количественного анализа белковых фракций.

Учитывая это, для количественной характеристики белковых фракций в крахмальном геле нами использован метод денситометрии с фотографий элекрофореграмм (ЭФГ), т.е. фотоэлектрофореграмм (ФЭФГ) в отраженному не проходящем свете (рис. 2).

Белковый состав мочи при важнейших заболеваниях почек

Для сравнительной оценки точности применявшегося нами варианта денситометрии предварительно был проведен параллельный количественный анализ 19 электрофореграмм белков сыворотки крови, полученных методом электрофореза на бумаге, с помощью денситометра ERL10 (Карл Цейсс, Иена, DDR) путем прямой денситометрии, т.е. в отраженном свете непосредственно с элекрофореграмм и методом непрямой денситометрии также в отраженном свете, но с фотоэлектрофореграмм.

Средние показатели величины каждой из пяти белковых фракций, полученные двумя параллельно проводимыми методами денситометрии и подвергнутые статистическому анализу в целях установления достоверности их различий, представлены в табл.3.

Как видно из табл. 3, количественные показатели величины белковых фракций, полученных при денситометрии с ФЭФГ, статистически значимо не отличаются от аналогичных показателей, полученных путем прямой денситометрии с ЭФГ (Р> 0,3). Это свидетельствует о том, что метод денситометрии с ФЭФГ в отраженном свете не уступает по своей точности методу прямой денситометрии с ЭФГ.

Содержание белка в каждой фракции выражали в относительных (%) и абсолютных (г/л) величинах. Зная относительную величину белковой фракции и содержание общего белка сыворотки крови и мочи (г/л), расчет искомой фракции проводили по следующей формуле:

Белковый состав мочи при важнейших заболеваниях почек

где у — величина искомой фракции, г/л; М — содержание общего белка, г/л; х — величина искомой фракции, %.

Как уже отмечалось, с помощью электрофореза в крахмальном геле в сыворотке крови здорового человека можно выделить до 12—20 и более белковых фракций.

Терминология этих фракций окончательно еще не установлена, но большинство исследователей (Ю.Н.Берг и соавт. 1967; И.И.Иванов, И.А.Пелишенко, 1969; Дж.Уилкинсон, 1968; О.Smithies, 1955, 1959; J.Traeger и соавт., 1965, 1966) пользуются следующими их обозначениями: на электрофореграмме белков в крахмальном геле обычно выявляются две фракции преальбуминов (Pr j, Р), за которыми следует широкая гомогенная фракция альбуминов (А) , затем две-три фракции постальбуминов, за ними фракция с-быстрых глобулинов, обозначаемая чаще р-глобулинов, следующие три (иногда и больше) фракции являются гаптоглобинами (Нр) или обозначаются как ф-фракции; далее расположена фракция медленно движущихся а1-макроглобулинов и фракция b-липопротеинов и, наконец, по другую сторону стартовой линии расположена фракция b-глобулинов.

Схема расположения упомянутых фракций и их количество представлены на рис. 3.

Статистический анализ. Полученные результаты исследования подвергаются статистическому анализу в целях определения достоверности различий сравниваемых абсолютных и относительных величин (Л.С.Каминский, 1964; П.Ф.Рокицкий, 1967; Б.С.Бессмертный, 1967; Д.Сепетлиев, 1968).

Критерий t для абсолютных показателей находим по формуле

Белковый состав мочи при важнейших заболеваниях почек

а для относительных — по формуле:

Белковый состав мочи при важнейших заболеваниях почек

источник

Синонимы: Белковые фракции, Протеинограмма, Serum Protein Electrophoresis, SPE, SPEP

Научный редактор: М. Меркушева, ПСПбГМУ им. акад. Павлова, лечебное дело.
Октябрь, 2018.

Одним из основных компонентов крови является белок, который состоит из фракций (альбумина и нескольких видов глобулинов), образующих определенную формулу количественного и структурного соотношения. При воспалительных (острых и хронических) процессах, а также при онкологических патологиях формула белковых фракций нарушается, что позволяет оценить физиологическое состояние организма и диагностировать ряд серьезных заболеваний.

Под действием электрического поля (на практике применяется электрофорез) белок разделяется на 5-6 фракций, которые отличаются по местоположению, подвижности, структуре и доле в общей белковой массе.

Самая главная фракция — альбумин — составляет более 40-60% объема общего белка сыворотки крови.

Другие фракции представляют собой глобулины:

К ним относятся белки острой фазы (быстрого реагирования):

• антитрипсин — блокирует протеолитические ферменты (при воспалительном процессе в легочной ткани подавляет функцию эластазы, предотвращая деградацию эластина в стенках альвеол и развитие эмфиземы легких);
• кислый гликопротеин (орозомукоид) — способствует фибриллогенезу;
• липопротеины отвечают за доставку липидов к другим клеткам;
• транспортные белки связывают и перемещают важные гормоны организма (кортизол, тироксин).

Также включают белки острой фазы:

• макроглобулин активизирует защитные процессы организма при инфекционных и воспалительных поражениях;
• гаптоглобин соединяется с гемоглобином;
• церулоплазмин определяет и связывает ионы меди, нейтрализует свободные радикалы и является окислительным ферментом для витамина С, адреналина;
• липопротеины обеспечивают перемещение жиров.

К этой группе относят белки:

• трансферрин — обеспечивает перемещение железа;
• гемопексин — препятствует потере железа, связывает гемоглобин, миоглобин, каталазу, доставляет их в печень, где происходит распад гема и связывание железа с ферритином.
• комплементы — участвуют в иммунном отклике;
• бета-липопротеины — перемещают фосфолипиды и холестерин;
• некоторые иммуноглобулины — также обеспечивают иммунную реакцию.

Фракция включает важнейшие белки иммуноглобулины разных классов (IgА, IgМ, IgЕ, IgG), которые являются антителами и отвечают за местный и общий иммунитет организма.

В результате развития острых или обострения хронических воспалительных заболеваний соотношение белковых фракций изменяется. Уменьшение количества того или иного вида белка может наблюдаться при иммунодефицитах, которые свидетельствуют о серьезных процессах в организме (аутоиммунные заболевания, ВИЧ, онкология и т.д.). Избыток зачастую свидетельствует о моноклональной гаммапатии (производство аномальных типов иммуноглобулинов). К последствиям гаммапатии можно отнести множественную миелому (рак плазматических клеток), макроглобулинемию Вальденстрема (опухоль костного мозга) и т.д. Также может возникнуть поликлональная гаммапатия (секреция аномального количества иммуноглобулинов). Результатом являются инфекционные болезни, аутоиммунные патологии, заболевания печени (например, вирусные гепатиты) и другие хронические процессы.

Исследование белковых фракций позволяет диагностировать синдром иммунодефицита, онкологические и аутоиммунные процессы.

Также врач может назначить протеинограмму в следующих случаях:

• оценка тяжести течения воспалительных или инфекционных процессов (в острой и хронической форме);
• диагностика заболеваний печени (гепатиты) и почек (нефротический синдром);
• определение продолжительности заболевания, формы (острая, хроническая), стадии, а также контроль эффективности терапии;
• диагностика моно- и поликлональных гаммапатий;
• диагностика и лечение диффузных поражений соединительной ткани, в том числе коллагенозов (ее системное разрушение);
• наблюдение пациентов с нарушенным метаболизмом, режимом питания;
• мониторинг состояния больных с синдромом мальабсорбции (нарушение пищеварения и всасывания питательных компонентов);
• подозрение на множественную миелому, характеризующуюся симптомами: хроническая слабость, лихорадка, частые переломы и смещения, ломота в костях, инфекционные процессы в хронической форме.
• При отклонениях в лабораторных анализах, позволяющих заподозрить множественную миелому: гиперкальциемии, гипоальбуминемии, лейкопении и анемии.
• При подозрении на недостаточность альфа-1-антитрипсина, болезнь Брутона и другие иммунодефициты.

Исследование белковых фракций в крови (протеинограмма) выявляют концентрацию общего белка, количественное соотношение альбуминов и глобулинов.

Референсный диапазон, используемый в лаборатории Инвитро 1 :

Белковые фракции, г/л Альбумин Альфа-1 Альфа-2 Бета Гамма до 6 месяцев 27,3 – 49,1 2,1 – 5,4 5,3 – 9,8 3,3 – 6,7 1,7 – 6,3 6 месяцев -1 год 36,0 – 50,6 2,0 – 3,7 6,3 – 12,1 4,7 – 7,5 2,8 – 8,0 1-2 года 38,7 – 51,1 2,4 – 4,0 7,8 – 11,6 5,3 – 7,9 4,2 – 8,8 2 года — 7 лет 30,5 – 48,9 2,0 – 3,7 5,6 – 10,6 4,3 – 8,3 4,6 – 10,7 7 лет — 21 год 30,9 – 49,5 1,7 – 3,7 4,8 – 9,7 4,4 – 9,1 6,0 – 12,7 старше 21 года 37,5 – 50,1 1,9 – 4,6 4,8 – 10,5 4,8 – 11,0 6,2 – 15,1