Меню Рубрики

Анализ мочи на анализаторе метод определения

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора.

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

  • Качественные,
  • Полуколичественные,
  • Количественные.

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

  1. Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 — 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).
  2. Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.
  3. Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.
  4. Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины. Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

  • низким содержанием белка в моче здорового человека, часто находящимся на пороге чувствительности большинства известных методов;
  • присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;
  • значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

  • обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;
  • должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;
  • обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;
  • быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);
  • обладать приемлемой стоимостью;
  • быть легко адаптируемым к автоанализаторам;
  • результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

К турбидиметрическим методам относятся:

  • определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),
  • определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),
  • определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

  1. биуретовая реакция,
  2. метод Лоури,
  3. методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:
    • Понсо S (Ponceau S),
    • Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)
    • пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул:

протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L;
протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S;
протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L;
протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B;
протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S;
протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L;

где:
B – результат измерения с Кумасси G-250;
L — результат измерения с реактивом Лоури;
P — результат измерения с молибдатом пирогаллола;
S — результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

  • О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, «Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии», Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.
  • А. В. Козлов, «Протеинурия: методы ее выявления», лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.
  • В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», — Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.
  • В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова — Определение белка в моче и спинномозговой жидкости. Кольцово, 2007 г.
  • Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, «Медицина», 1975 г.

Для количественного определения белка пригоден любой образец мочи. Большинство исследователей для выяснения величины суточной потери белка предпочитают определять содержание белка в моче, собранной за сутки.

Раздел: Анализ мочи

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой.

Раздел: Анализ мочи

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Раздел: Анализ мочи

Проба с 20% сульфосалициловой кислотой относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

Кольцевая проба Геллера относится к качественным реакциям определения белка в моче. Так как она основана на реакции коагуляции, то исследуемая моча должна соответствовать определенным требованиям: быть прозрачной и иметь кислую реакцию.

Раздел: Анализ мочи

источник

Количественное определение показателей состава и свойств мочи методом «сухой химии» (принципы метода, аналитические характеристики)

Анализаторы мочи на тест-полосках давно уже стали надежными помощниками врача клинической лабораторной диагностики. Сегодня вряд ли можно найти лабораторию, не оснащенную приборами данного типа, которые позволяют в течение 1–2 минут провести одновременное исследование мочи по 10–13 показателям. Единственным недостатком этих приборов является полуколичественный результат анализа. Таким образом, в большом проценте случаев для уточнения результатов анализа приходится повторять исследование с использованием количественных методов. Сотрудники ООО «Эйлитон» задались вопросом: можно ли создать прибор, работающий по методу «сухой химии» и позволяющий при этом получать количественные результаты анализов. Задача оказалась решаемой. В настоящей статье приведены результаты исследования характеристик аналитической системы «анализатор мочи URiСКАН-strip (ООО «Эйлитон», Россия) + тест-полоски Uriscan 11 strip (YD Diagnostics, Ю. Корея)». На примере тестовой зоны «Белок» показано, что данная аналитическая система позволяет получать результаты, по точности соответствующие требованиям к количественным методам измерения концентрации белка в моче. Применение анализатора URiСКАН-strip в практике лабораторий позволит существенно повысить точность и воспроизводимость исследований мочи, сохранив при этом простоту и удобство работы, характерную для всех экспресс-анализаторов мочи.

Urine analyzers on test strips have long been reliable helpers of a clinical laboratory diagnosis doctor. Today, it is hardly possible to find a laboratory not equipped with such type of instruments, which allows conducing a simultaneous urine study for 10–13 indicators within 1–2 minutes. The only drawback of these devices is the semiquantitative result of the analysis. Thus, in a large percentage of cases, in order to refine the results of the analysis, it is necessary to repeat the study using quantitative methods. Employees of LLC Ailiton set and completed the task of creating a device that operates on the base of «dry chemistry» method and allows receiving quantitative results of analyzes. The research results on characteristics of the analytical system of urine analyzer URiСКАН-strip (Ailiton LLC, Russia) + Uriscan 11 strip test strips (YD Diagnostics, South Korea) are presented in this article. On the example of the test zone «Protein», it is shown that this analytical system allows to obtain results corresponding to the quantitative methods requirements of measuring protein concentration in urine. The use of the URiScan-strip analyzer in the practice of laboratories will significantly improve the accuracy and reproducibility of urine tests, while maintaining the simplicity and convenience of operation characteristic of all urine express analyzers.

Читайте также:  Анализ мочи на скрининг тесты

В ведение Клинический анализ мочи включает в себя определение ряда показателей молекулярного состава и физико-химических свойств мочи, а также анализ мочевого осадка. К показателям первой группы относят концентрацию белка (альбумина), глюкозы, кетонов, нитритов, билирубина, уробилиногена, рН, удельного веса. Они определяются преимущественно методами «сухой химии». Анализ осадка мочи включает определение эритроцитов, лейкоцитов, клеток эпителия, различных видов цилиндров, органических и неорганических кристаллов и микроорганизмов. Как правило, он проводится методами микроскопии. В то же время для определения некоторых элементов мочевого осадка (эритроцитов и лейкоцитов) широко применяются и методы «сухой химии». В основе метода «сухой химии» лежат цветные реакции, приводящие к изменению окраски тестовой зоны полоски. В зависимости от химических свойств определяемого показателя это либо обычные химические, либо ферментативные реакции, а в ряде случаев определяется собственная ферментативная активность аналита [1]. Например, для определения концентрации гемоглобина (эритроцитов) используется химическая цветная реакция, основанная на пероксидазной активности гемоглобина. Лейкоциты выявляются в моче путем регистрации лейкоцитарной эстеразы. Изменение окраски тестовых зон определяется либо визуально: сравнивается окраска тестовой зоны с цветовой шкалой на пенале либо с помощью специализированного отражательного фотометра — анализатора мочи. Последний метод оценки реакции более предпочтителен, поскольку позволяет получить объективный результат анализа. Визуальная оценка реакций существенно зависит как от характера освещения в помещении, так и от особенностей цветовосприятия лаборанта. К тому же одновременное определение 10–13 показателей в большом количестве проб трудоемко. Применяемые в современных лабораториях анализаторы мочи на основе отражательных фотометров бывают двух типов. В первом типе приборов реализован метод оценки изменения цвета тестовых зон, аналогичный цветовому восприятию глаза человека. Тестовые зоны освещаются белым светом, содержащим все длины волн видимого диапазона спектра. Изменение окраски тестовой зоны в результате реакции с аналитами осуществляется сопоставлением сигналов от трех типов селективных фотоприемников в трех диапазонах длин волн: красном, зеленом и синем (RGB) (рис. 1). Точно так же устроено и цветовое зрение человека.

На этом принципе основана работа подавляющего большинства анализаторов мочи, в том числе и таких широко известных в нашей стране приборов, как URiSCAN-Optima, URiSCAN-Pro (производство YD Diagnostics, Ю. Корея), URiСКАН-про (производство ООО «Эйлитон», Россия). Во втором типе анализаторов применяется метод измерения коэффициента отражения тестовых зон на определенных длинах волн. Для каждой тестовой зоны подбирается оптимальная длина волны света, на которой изменение коэффициента отражения имеет наиболее выраженный характер зависимости от концентрации аналита в моче. В таких анализаторах тестовые зоны освещаются с помощью светодиодов, имеющих узкий спектр излучения, а отраженный сигнал регистрируется неселективным фотоприемником (рис. 2).

Данный принцип реализован в анализаторе мочи URiСКАН-strip (ООО «Эйлитон», Россия). Анализ мочи с использованием классических методов «сухой химии» выполняется на полуколичественном уровне. Полуколичественным результатом анализа является не конкретное число (с определенной погрешностью), а интервал значений, в котором находится измеряемая величина. В качестве примера интервалов значений для полуколичественных результатов определения концентрации белка в моче в табл. 1 приведены диапазоны концентраций для аналитической системы «анализатор мочи URiСКАН-про + тест-полоски Uriscan 11 strip» [5].

Полуколичественные методы анализа мочи вполне адекватно решают задачи скрининга [3, 6]. Однако они малопригодны для мониторинга течения заболевания, в том числе в ходе проводимого лечения, поскольку, как видно из табл. 1, даже 2–3-кратное изменение концентрации белка в процессе динамического наблюдения пациента при исследовании тест-полосками может быть не выявлено [3]. Поэтому для целей мониторинга течения заболевания и оценки эффективности лечения чрезвычайно актуальны повышение точности и обеспечение высокой воспроизводимости результатов анализа, которые позволят надежно оценить динамику патологического процесса.

Цель работы C целью решения задачи повышения точности и воспроизводимости исследований специалистами компании «Эйлитон» был сконструирован уникальный анализатор мочи URiСКАН-strip, позволяющий с использованием тест-полосок Uriscan 11 strip получать результаты анализа мочи, удовлетворяющие требованиям, которые предъявляются к количественным методам исследования. Для выявления и минимизации суммарной погрешности исследования был выполнен анализ погрешностей измерений с использованием аналитической системы: URiСКАН-strip + тест-полоски Uriscan 11 strip. При проведении данной работы необходимо было найти связь результатов измерений с концентрацией аналитов, а также количественно оценить погрешности на каждом этапе. Анализ погрешностей измерений анализатора мочи В аналитической системе: анализатор мочи URiСКАН-strip + тест-полоски Uriscan 11 strip (рис. 2) сигнал с фотоприемника U пропорционален интенсивности падающего на него отраженного света от аналитической зоны I1 , таким образом, U = FI1. В свою очередь, интенсивность отраженного света I1 пропорциональна интенсивности падающего на аналитическую зону света от светодиодов I0 и коэффициенту отражения: I1 = I (t) Котр (t, С). Коэффициент отражения изменяется со временем, что обусловлено протекающими в аналитической зоне реакциями, и зависит от концентрации аналита (С). В конечном итоге получаем так называемую измерительную функцию аналитической системы: U = FI (t)Котр(t, С). Вариации измеряемого сигнала δU связаны с вариациями компонентов аналитической системы следующим образом:

Здесь: δF — вариации коэффициента преобразования светового потока в электрический сигнал фотоприемника; δI — вариации интенсивности света от светодиодов; δКотр — вариации коэффициента отражения аналитических зон тест-полоски. Первые два параметра являются характеристиками анализатора, а последний характеризует качество тест-полосок. Для уменьшения вариаций (δF) и (δI ) в созданном специалистами ООО «Эйлитон» анализаторе URiСКАН-strip была применена специальная конструкция фотометрической ячейки, изображенная на рис. 2. Принцип работы отражательного фотометра анализатора мочи URiСКАН-strip заключается в следующем: падающий на тестовую зону свет (I ) от двух одинаковых светодиодов диффузно отражается (I1) и, пройдя через систему диафрагм, попадает на фотоприемник, сигнал от которого (U) регистрируется с помощью электронного блока анализатора. Использование пары светодиодов с одинаковой интенсивностью и спектром излучения для каждой тестовой зоны, а также системы диафрагм позволяет минимизировать влияние (δI ) и (δF). Таким образом, в погрешность измерения аналита основной вклад вносят вариации коэффициента отражения аналитических зон тест-полоски (δКотр).

1. Определение оптимальной длины волны светодиодов

Для выяснения наиболее оптимальной длины волны излучения светодиодов для тестовой зоны «Белок» были сняты спектры отражения тест-полосок во всем видимом диапазоне длин волн для разных концентраций аналита (рис. 3). Изменения коэффициента отражения аналитической зоны «Белок» обусловлены протекающей в этой зоне реакцией образования комплекса «белок — бромфеноловый синий». Из приведенных спектров видно, что при разных концентрациях белка в моче наиболее значительные изменения коэффициента отражения наблюдаются в диапазоне 600–630 нм. Поэтому в анализаторе URiСКАН-strip для аналитической зоны «Белок» применяются светодиоды с длиной волны из указанного спектрального диапазона, а именно 605 нм. В то же время при определении белка в моче с использованием методов «сухой химии» следует учитывать тот факт, что бромфеноловый синий высоко чувствителен к альбуминовой фракции и намного менее чувствителен к другим фракциям белка, что существенно ограничивает применение тест-полосок для диагностики протеинурии, обусловленной глобулиновыми фракциями, мукопротеинами, низкомолекулярными белками, а также протеинурии Бенс-Джонса [2, 3, 7].

2. Зависимость коэффициента отражения аналитической зоны «Белок» от концентрации белка

После определения рабочей длины волны излучения была построена калибровочная зависимость аналитического сигнала от различных концентраций белка.

Для этого были приготовлены аттестованные по альбумину образцы мочи с разными концентрациями и на анализаторе мочи URiСКАН-strip выполнены серии измерений для каждого значения концентрации. Как видно из рис. 4, полученная калибровочная кривая имеет нелинейный характер, что вполне характерно для отражательной фотометрии. Калибровочная зависимость Котр(С) записывается в память приборов URiСКАН-strip и используется для расчета результата измерения концентрации белка в исследуемых образцах мочи. На следующем этапе была оценена результирующая погрешность определения белка в моче с использованием анализатора URiСКАН-strip. На результирующую погрешность измерения влияют вариации фотометра и измерения.

3. Воспроизводимость измерений коэффициента отражения

Для исследований вариаций измерения коэффициента отражения фотометра были изготовлены специальные стандартные цветные тест-полоски, имитирующие по своим спектральным характеристикам реальные мочевые тест-полоски Uriscan 11 strip. Применение для исследования стандартных тест-полосок позволяет исключить химические вариации, связанные с качеством и количеством реагентов тестовой зоны полоски, объемом мочи, нанесенным на тестовую зону, интерферентами, содержащимися в образцах мочи, концентрацией аналита, временем инкубации, и оценить исключительно фотометрические вариации. Вариации коэффициентов отражения для 20 измерений в канале «Белок» представлены в табл. 2. Столь малые вариации измерения коэффициентов отражения на анализаторе URiСКАН-strip обусловлены вышеописанным алгоритмом измерения и специально разработанной конструкцией фотометра, которые позволили устранить вариации всей измерительной системы прибора: δF и δI .

4. Воспроизводимость в серии и правильность результатов измерений

Для исследования воспроизводимости в серии и правильности результатов измерений белка в моче были приготовлены стандартные образцы мочи с аттестованными концентрациями альбумина. Для этого были взяты несколько образцов мочи здоровых людей с концентрацией белка, близкой к нулю. Затем в объединенный пул мочи добавлялись строго заданные количества альбумина. Погрешность приготовления стандартных образцов не превышала 1%. Каждый стандартный образец мочи измеряли 20 раз и вычисляли средние значения SD и CV. Результаты измерений представлены в табл. 3. В верхней строке приведены аттестованные значения концентрации альбумина, строкой ниже — средние значения по 20 измерениям, в нижних строках приведены абсолютные и относительные отклонения средних значений от аттестованных. Из таблицы видно, что полученные относительные отклонения средних значений от референтных (В) не превышают 10,67%, что практически в два раза ниже требований приказа Минздрава РФ N45 от 7.02.2002 «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации» по предельно допустимым значениям смещения (В) для серии из 20 измерений, а именно: ±В20 = 20% [4]. Таким образом, результаты, полученные с использованием аналитической системы: анализатор мочи URiСКАН-strip + тест-полоски Uriscan 11 strip полностью отвечают требованиям к правильности определения концентрации белка в моче количественными методами.

Общий CV%измерения белка = (CV%фотометра 2 + CV%измерения 2 )1/2 = (0,05 2 +15,63 2 ) 1/2 = 15,63%,

что заметно ниже предельно допустимого коэффициента общей аналитической вариации белка, рассчитанного по результатам 20 измерений для количественного анализа мочи согласно приказу Минздрава РФ N45 от 7.02.2000. В соответствии с данным приказом для белка в моче предельно допустимый СV20 составляет 25 % [4]. При этом видно, что сам фотометр вносит в аналитическую систему пренебрежимо малую погрешность. Если рассмотреть задачу обеспечения точности измерений белка в моче шире, то необходимо также учесть межлотовую вариацию тест-полосок и межприборную вариацию.

5. Межлотовые вариации концентрации белка для тестполосок Uriscan 11 strip

Вариация, обусловленная различиями характеристик тест-полосок разных лотов (серий), является важной характеристикой аналитической системы: анализатор мочи + тест-полоски. Эти отличия, как правило, обусловлены качеством и количеством реагентов, нанесенных на тестовую зону полоски, и являются интегральной характеристикой качества тест-полосок определенного бренда. В табл. 4 и на рис. 5 представлены данные по исследованию межлотовой вариации результатов измерений белка в моче с использованием аналитической системы: URiСКАН-strip + тест-полоски Uriscan 11 strip. Из приведенных данных видно, что значения межлотовой вариации близки значениям вариации в аналитической серии (внутрилотовой вариации) и не превышают 13,7%. Высокая сопоставимость результатов при определении белка в моче на анализаторе URiСКАНstrip с использованием тест-полосок Uriscan 11 strip различных лотов свидетельствует о стабильно высоком качестве тест-полосок Uriscan 11 strip.

6. Межприборная воспроизводимость результатов измерений

Поскольку калибровка прибора вводится в память каждого прибора при его производстве и не предполагает выполнения процедуры калибровки в лабораториях, важной характеристикой таких приборов является межприборная воспроизводимость. Для исследования этой характеристики были взяты 40 приборов, и на каждом из них было выполнено по одному измерению. Результаты представлены в табл. 5. Сравнивая показатели точности в табл. 3, 4 и 5, можно сделать вывод: межприборная вариация меньше по сравнению с вариацией в аналитической серии и сопоставима с межлотовой вариацией. Полученные результаты свидетельствуют о том, что при выполнении анализа мочи в разных лабораториях, оборудованных анализаторами URiСКАН-strip, будут получены сопоставимые результаты и пациенту при мониторинге патологического процесса в динамике не обязательно выполнять исследования мочи в одной и той же лаборатории. Итак, получив данные межлотовой и межприборной вариации, можно оценить суммарную погрешность определения белка в моче в диапазоне 0,1–10,0 г/л при самых крайних условиях:

CV%измерения белка = (CV%фотометра 2 + CV%измерения 2 + CV%межлотовая 2 + CV%межприборная 2 ) 1/2 = (0,052 +15,63 +13,72 + 13,32) 1/2 = 24,7%

Таким образом, даже с учетом всех возможных видов вариаций, суммарная погрешность определения белка не превышает 25%!

Представленные в настоящей работе результаты показали, что аналитическая система: URiСКАН-strip + тест-полоски Uriscan 11 strip обладает следующими характеристиками:

  • вариации измерения коэффициентов отражения не превышают 0,05%, что является уникальной характеристикой для приборов данного класса, позволяющей обеспечить высокую точность исследования показателей мочи на анализаторе URiСКАН-strip;
  • относительные отклонения средних значений от референтных (В) не превышают –10,67 %, что полностью соответствует требованиям приказа Минздрава РФ от 07.02.2000 N 45 «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации» к правильности определения концентрации белка в моче количественными методами;
  • коэффициент вариации в аналитической серии из 20 измерений в диапазоне концентраций белка в моче 0,1–10,0 г/л не превышает 15,63 % и всецело удовлетворяет требованиям приказа Минздрава РФ от 07.02.2000 N 45 к количественному анализу мочи;
  • значения межлотовой вариации близки к значениям вариации в аналитической серии (внутрилотовой вариации) и не превышают 13,7%, что свидетельствует о стабильном качестве тест-полосок Uriscan 11 strip;
  • межприборная вариация меньше по сравнению с вариацией в аналитической серии. Коэффициент вариации результатов определения концентрации белка на 40 приборах варьирует в диапазоне 9,9–13,3 %, что обеспечивает сопоставимость результатов исследования белка в моче в разных лабораториях региона, оснащенных анализаторами URiСКАН-strip. Столь высокие для методов «сухой химии» аналитические характеристики представленной системы были достигнуты благодаря применению российскими учеными уникальных конструкторских и программных решений при создании анализатора мочи URiСКАН-strip и использованию высококачественных тест-полосок Uriscan 11 strip.
  • Волкова И.А. Общий анализ мочи на современном этапе развития клинической лабораторной диагностики. // Лаборатория ЛПУ.— 2014.— Спецвыпуск № 5.— С. 59–63.
  • Иванова В. Н., Первушин Ю. В., Рогова С.Ш., Абасова Т.В. Трактовка результатов исследования мочи. // www.stgmu. ru/userfiles/depts/clinical_lab_diagnosis_ pe/Obschij_analiz_mochi.rtf.
  • Куриляк О.А., Шибанов А.Н. Анализ мочи в лаборатории современной поликлиники. // Поликлиника. Спецвыпуск № 12, 2018. «Лаборатория ЛПУ» С. 24–30.
  • Приказ МЗ РФ № 45 от 07.02.2000 // Управление качеством клинических лабораторных исследований. Нормативные документы. Москва.— Лабпресс, 2000, С. 5–57.
  • Руководство по эксплуатации анализатора мочи URiСКАН-про. Москва, 2017, С. 34.
  • Шибанов А.Н., Куриляк О.А. Лаборатория — клиницисту. Анализ мочи в современной клинике. // Медицинский алфавит.— 2017.— Том 3 (Больница — все для ЛПУ). № 33. С. 54–60.
  • Эмануэль В.Л. Лабораторные технологии оценки мочевого синдрома. // Нефрология.— 2007, Том 11, № 1.— С. 17–27.
Читайте также:  Анализ мочи на siemens diagnostics

А. Н. Шибанов, к. ф.‑м. н.; О. А. Куриляк, к. б. н.; А. В. Цыганова; П. А. Стариков; И. М. Елькина

источник

Химическое обследование урины выполняется, чтобы качественно и полуколичественно выявить компоненты, обладающие способностью растворяться в воде и при нормальном состоянии в биожидкости отсутствующие.

Попадание в урину подобных элементов говорит о наличии патологических отклонений парного органа или свидетельствует о нарушении процесса метаболизма. Для проведения исследования предпочтение отдается утренней урине, потому что она считается максимально концентрированной. Проверка позволяет практически полностью исключить негативные показатели.

Диагностические тест-полоски для анализа мочи представляются одним либо несколькими химическими реактивами, используемыми для исследований в стационарных лабораториях. Они нанесены на пластиковую либо плотную бумажную основу, размеры составляют шесть на тринадцать сантиметров при пятимиллиметровой толщине.

Реагент является индикатором для тестирования, способным изменять собственный оттенок, контактируя с осадковыми компонентами, находящимися в биологической жидкости.

Реагентный индикатор выбирается с учетом того, что за тип патологии следует обнаружить. Бывают полоски только с одним нанесенным реактивом. Их называют одноиндикаторными, можно проверить уровень содержания только одного элемента.

Существуют тест-полоски с целой шкалой разных реактивов, предназначенных для выполнения комплексного обследования. Такие тесты называются мультииндикаторными.

В комплект теста включены:

  • тубус из пластикового материала, в котором может храниться от двадцати пяти до ста пятидесяти полосок;
  • подробная инструкция по применению;
  • сорбентное вещество, поглощающее излишки влаги;
  • коробочка из картона;
  • шкала с разноцветными оттенками, при помощи которой интерпретируются показатели анализа урины. В большинстве случаев такая шкала наносится на поверхность тубуса.

Полоски предназначаются для проведения быстрого анализа урины не только в домашних условиях, но и с использованием анализаторов, помогающих определять характеристики биологического материала.

Определение качественного показателя подразумевает выявление определенного компонента, подтверждающего наличие той или иной патологии. Изменения оттенка индикаторного элемента однозначно заявляет о наличии метаболита и относится к реакции положительного характера. Полуколичественный показатель подразумевает определение объема выявленных включений методом визуализации уровня окраски реактивного элемента.

Используют тест-полоски для организации контроля состояния выявленного ранее заболевания и для обнаружения новых патологических отклонений. К ним относятся:

  • диабет;
  • глюкозария женщин в период беременности;
  • болезни инфекционного характера в мочеточных каналах;
  • неинфекционные поражения путей вывода урины;
  • образование конкрементов.

На сегодняшний день изготовлением полосок для проведения тестов занимаются многие страны. В числе известных компаний можно назвать:

  • российские – «Биоскан» и «Биосенор»;
  • корейская – Uriscan;
  • канадская – Multicheck;
  • швейцарская – Mcral-Test;
  • американская – UrineRS.

Любой изготовитель предоставляет обширный перечень наборов для диагностирования, помогающих проверить разнообразные параметры:

Сочетание индикатора из нескольких реагентных элементов на одном тесте дает возможность оптимизировать выполнение диагностирования, учитывая преследуемые цели. К примеру, для контроля уровня сахара при диабете, на тест-полоску наносится индикаторный элемент, реагирующий на глюкозу и кетоны. В случаях с симптоматикой на диабетическую нефропатию, рекомендуется воспользоваться полосками, совместившими в себе индикаторы:

Считается, что любой изготовитель производит тест-полоски, используемые не только при визуальных обследованиях, но и при инструментальных, когда применяются анализаторы.

Проводя тест-проверку, рекомендуется придерживаться определенных правил, отклонение от которых способно привести к получению ложных показателей:

  1. Не прикасайтесь к индикаторной части полоски.
  2. Проводите процедуру при температуре пятнадцать – двадцать пять градусов тепла. При более холодных условиях скорость реакции существенно снижается, что влечет за собой ложные результаты.
  3. Если урина находилась в холодильной камере, ее необходимо подогреть до нужного температурного режима.
  4. Хранение биологической жидкости, отобранной для проверки, более двух часов запрещается. В противном случае физико-химические показатели урины изменяются.
  5. Запрещается повторное использование одной полоски.
  6. Не рекомендуется погружать индикатор в урину на долгое время – есть вероятность вымывания реагентного элемента с поверхности полоски.
  7. Вскрыв упаковку, все тесты необходимо использовать в определенный производителем срок – не позднее шести месяцев.
  8. Не подвергайте шкалу долгому воздействию ультрафиолета, чтобы тона не выцветала.

Весь процесс выполнения экспресс-анализа условно делится на несколько этапов:

  1. Полоска извлекается из тубуса, крышка плотно закрывается.
  2. Приготовленная для анализа урина тщательно перемешивается, чтобы предотвратить образование осадка и создать возможность для получения более точных результатов.
  3. Индикатор погружается в биологическую жидкость на одну – три секунды.
  4. Вынув тест, необходимо удалить излишнюю мочу, постукивая ребром полосочки по краю посуды.
  5. Ожидая результат реакции, которая длится от тридцати секунд до трех минут (зависит от проверяемых параметров и рекомендаций изготовителя), полоска выкладывается на чистую поверхность индикаторной частью вверх.
  6. Уточнение показателей выполняется сопоставлением полученных показателей с цветной шкалой, прилагающейся к комплекту.

Попробуем рассмотреть наиболее известные компоненты урины, которые возможно проверять, используя тест-полоски, изучим их характеристики.

Лейкоцитный индикатор используется при выявлении воспалений в мочеточных каналах – цистита, пиелонефрита, гломерулонефрита. Как только реагент, нанесенный на тест, вступает в реакцию, изменяется оттенок шкалы. Реакция считается положительной, если желтый цвет станет пурпурным.

Ее наличие в урине называется глюкозурией. Показатель подтверждает превышение количества глюкозы в клетках крови по отношению к почечному порогу. Такая ситуация возможна при диабете либо гликозурии почек, когда нарушен механизм реабсорбации канальцевого типа.

Тестовые полоски удобны при уточнении уровня глюкозы, потому что содержат в индикаторе фермент глюкозооксидазы и пероксидазы, вступающих в реакцию с глюкозой и образующих смену цветовой гаммы с зеленой на коричневую.

Превышение сахара в урине беременной женщины не всегда подтверждает появление диабета. Иногда это вызвано временными отклонениями в работоспособности парного органа.

Это результат, получаемый после окисления жиросодержащих кислот. Увеличение концентрации кетоновых тел образуется по причине нехватки углеводов либо неспособности тканей перерабатывать глюкозу. Такое состояние, когда повышается уровень кетонов, называют кетоацидозом. Его возникновение подтверждается изменениями оттенка полоски со светло-розового на бордовый.

Тест-полоски для выявления данного компонента используются главным образом при возникновении подозрений на недостаточность парного органа. Процесс реакции основан на возможности тетрабромфенола, находящегося в составе реагента, взаимодействовать с белками, выдавая в результате окрашенный комплекс.

Шкала с индикатором в случае выявления гематурии бывает с одним либо с двумя секторами, которые реагируют исключительно на гемоглобин. Нижайший к определению уровень способен варьироваться, составляя пять – десять эритроцитов в 1 мкл и десять миллиграмм гемоглобина в 1 мкл.

Если реакция заканчивается положительно, и оттенок реагента изменяется, в первой части сектора наблюдаются точки, а вторая половина окрашивается равномерным оттенком темно-зеленого либо синего цвета.

С учетом того, что при гематурии зачастую в урине появляется белок, рекомендуется пользоваться полосками, совмещающими реактивы по гематурии и протеинурии.

Присутствие в урине крови довольно часто является причиной инфекции либо травмирования мочеточного канала, кровотечения в парном органе.

Уточнение уровня кислотности урины в домашней обстановке считается делом простым. Показатель кислотности биологического материала определяет, какой вид солей преобладает, что считается весьма важным при исследовании и последующем лечении мочекаменного заболевания. При замере уровня кислотности оттенок индикаторной линейки варьируется с оранжевого цвета до зелено-голубого.

Проверка урины на этот показатель проводится при обследовании наркоманов или спортсменов, которые подозреваются в приеме допинговых препаратов.

При норме удельна масса мочи считается 1.010 – 1.025. Увеличение плотности может наблюдаться во время воспалительных процессов в почках, диабете, недостаточности парного органа.

Увеличение их содержания подтверждает отклонения в работе печени и желчных каналов. Шкала замера имеет минимальный уровень в 2 мг/л, а максимальный показатель равен 80-ти. Рост содержания этих элементов вызовет увеличение насыщенности окраски индикаторной линейки. Положительные показатели проверки на билирубин подтверждают наличие либо развитие гепатита.

Тесты на данный элемент используются в случаях, когда есть симптоматика на отклонения в работе почек, сбои гормонального характера, диабет. Креатинин принимает активное участие в энергетическом обмене клеток тканей, его уровень зависит от массы мышц.

Исходя из того, что мышечный показатель остается практически неизменным, то и уровень креатина будет постоянным. Увеличение его в моче вызывается недостаточностью почек, обезвоживанием организма, диетпитанием с преобладанием мяса, нагрузками физического характера.

Их выявление в биожидкости может вызывается двумя причинами:

  • в процессе жизни и деятельности вредных паразитов (в подобной ситуации врач определяет бактериурию);
  • из-за употребления продуктов питания, в которых содержится много нитратов.

В большинстве случаев выявление нитритов подтверждает развитие урогенитального инфекционного заболевания.

Хоть метод использования полосок отличается при тестировании простотой и доступностью, все же остается серьезная доля вероятности, что полученные показатели окажутся ложными. Но если строго выполнять все правила применения средств для индивидуального диагностирования, то риски ошибок можно минимизировать.

источник

Материал: утренняя порция мочи

Метод исследования: cухая химия

Является частью общего анализа мочи, обычно выполняется в комплексе с 61203 Исследование мочевого осадка.

Подготовка: прием контейнеров с мочой для анализа проводит фельдшер-лаборант в кабинете лаборатории, указанном в талоне. Накануне сдачи анализа исключить прием диуретиков, не употреблять овощи и фрукты, изменяющие окраску мочи (свекла, морковь и др.). Не рекомендуется сдавать анализ во время менструации. Перед сбором мочи произвести тщательный гигиенический туалет половых органов. При первом утреннем мочеиспускании необходимо выпустить в унитаз небольшой объем мочи. Затем, не прерывая мочеиспускания, собрать приблизительно 50 мл мочи в специальный контейнер. После сбора следует плотно закрыть контейнер завинчивающейся крышкой и доставить в лабораторию.

Описание: определение параметров мочи с помощью тест-полосок на автоматическом анализаторе (цвет, прозрачность, удельный вес, рН, белок, глюкоза, билирубин, уробилиноген, кетоновые тела, нитриты, гемоглобин)

Исследование мочи методом сухой химии включает оценку физико-химических характеристик мочи без микроскопического исследования осадка. Больным с заболеваниями почек и мочевыделительной системы исследование выполняют в динамике для оценки состояния и контроля терапии. Лицам, перенёсшим стрептококковую инфекцию (ангина, скарлатина) рекомендуется сдать анализ мочи через 1 — 2 недели после выздоровления. В профилактических целях рекомендуется выполнять анализ 1 — 2 раза в год.

Цвет мочи обусловлен наличием в моче пигмента урохрома. В зависимости от степени насыщения пигмента моча принимает жёлтую окраску различных оттенков. Иногда может изменяться только цвет осадка: например, при избытке уратов осадок имеет коричневатый цвет, мочевой кислоты — жёлтый, фосфатов — белесоватый.

Прозрачность мочи – помутнение может быть результатом наличия в моче форменных элементов крови, бактерий, жировых капель, солей, зависит от рН и температуры хранения мочи. При длительном хранении моча может стать мутной в результате размножения бактерий. В норме небольшая мутность может быть обусловлена эпителием и слизью.

Относительная плотность (удельный вес) мочи зависит от количества выделенных органических соединений (мочевины, мочевой кислоты, солей) и электролитов — Cl, Na и К. На плотность оказывает влияние количество выделяемой мочи. Чем выше диурез, тем меньше относительная плотность мочи. Наличие белка и глюкозы вызывает повышение удельного веса мочи. Снижение концентрационной функции почек при почечной недостаточности приводит к снижению удельного веса (гипостенурия). Полная потеря концентрационной функции приводит к выравниванию осмотического давления плазмы и мочи, это состояние называется изостенурией.

pH мочи — свежая моча здоровых людей может иметь реакцию рН от 4,5 до 8,0, обычно реакция мочи слабокислая (рН от 5,0 до 6,0). Колебания рН мочи зависит от состава питания. Изменения рН мочи отражают кислотно-основное состояние крови.

Белок в моче — один из наиболее важных лабораторных показателей функции почек. У здоровых людей может выявляться небольшое количество белка в моче (физиологическая протеинурия), не превышая 0,080 г/сут в покое и 0,250 г/сут при интенсивных физических нагрузках (маршевая протеинурия). Белок в моче может обнаруживаться при стрессе, переохлаждении. Протеинурия (появление в моче белка в повышенном количестве) может быть преренальной (связанной с усиленным распадом тканей или появлением в плазме патологических белков), ренальной (обусловленной патологией почек) и постренальной (связанной с патологией мочевыводящих путей). Появление в моче белка является частым неспецифическим симптомом патологии почек. При ренальной протеинурии белок обнаруживается как в дневной, так и ночной моче. По механизмам возникновения ренальной протеинурии различают клубочковую и канальцевую протеинурию. Клубочковая протеинурия связана с патологическим изменением барьерной функции мембран почечных клубочков. Массивная потеря белка с мочой (> 3 г/л) всегда связана с клубочковой протеинурией. Канальцевая протеинурия обусловлена нарушением реабсорбции белка при патологии проксимальных канальцев.

Глюкоза в моче в норме отсутствует или обнаруживается в минимальных количествах (до 0,8 ммоль/л). После фильтрации через мембрану почечных клубочков глюкоза полностью реабсорбируется. Появление глюкозы в моче (глюкозурия) возникает при повышении концентрации глюкозы в крови более 10 ммоль/л, т.е. превышении почечного порога — максимальной способности почек к обратному всасыванию глюкозы. Снижение почечного порога (например, вследствие поражения почечных канальцев) также сопровождается глюкозурией. Исследование уровня глюкозы в моче имеет большое значение при диагностике сахарного диабета, а также мониторинге (самоконтроля) антидиабетической терапии.

Билирубин — основной конечный метаболит порфиринов, выделяемый из организма. Моча здоровых людей содержит минимальные, неопределяемые количества билирубина. Билирубинурия наблюдается главным образом при поражении паренхимы печени или механическом затруднении оттока желчи. При гемолитической желтухе реакция мочи на билирубин бывает отрицательной.

Уробилиноген в моче. Уробилиноген и стеркобилиноген образуются в кишечнике из выделившегося с желчью билирубина. В норме в моче здорового человека уробилиноген определяется в следовых количествах — выделение его с мочой за сутки не превышает 10 мкмоль (6 мг). При стоянии мочи уробилиноген переходит в уробилин.

Кетоновые тела в моче. Кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и бета-оксимасляная кислоты) образуются в результате усиленного катаболизма жирных кислот. Определение кетоновых тел важно в распознавании метаболической декомпенсации при сахарном диабете.

Нитриты в нормальной моче отсутствуют. Обнаружение нитритов в моче свидетельствует о наличии инфекции мочевого тракта.

Гемоглобин в нормальной моче отсутствует. Положительный результат теста отражает присутствие свободного гемоглобина или миоглобина в моче (гемолитическая анемия, тяжелые отравления).

Показания для проведения исследования:

заболевания мочевыделительной системы

оценка течения заболевания, контроль развития осложнений и эффективности проводимого лечения

источник

Моча – продукт обмена веществ, образующийся в почках в результате фильтрации жидкой части крови, а также процессов реабсорбции и секреции различных аналитов. Состоит на 92 — 98% из воды, остальная часть приходится на растворенные в ней азотистые продукты обмена белков (мочевина, мочевая кислота, креатинин и др.), минеральные соли и другие вещества. Состав мочи значительно варьирует даже у здоровых людей.

Общий (клинический) анализ мочи является стандартным исследованием при диагностике практически любого заболевания, а также применяется для контроля эффективности проводимого лечения.

Общий анализ мочи включает определение физико-химических свойств мочи (прозрачность, рН, относительная плотность), изучение патологических компонентов (белок, глюкоза, кетоновые тела, желчные пигменты, кровь) и микроскопию осадка.

I. Микроскопия осадка мочи

Исследование организованного осадка (эпителий, лейкоциты, эритроциты, цилиндры) и неорганизованного осадка (слизь, соли, бактерии, грибы) производится на автоматическом анализаторе IQ 200, UF1000i (Sysmex).

Читайте также:  Анализ мочи на щавелевую кислоту норма

Анализаторы обладают высокой чувствительностью и выполняют точный количественный подсчет форменных элементов мочи, в том числе бактерий и грибов. Для дифференциации элементов мочи одновременно используется метод кондуктометрии с гидродинамическим фокусированием и флюоресцентная проточная цитометрия. Анализатор имеет 2 отдельных канала для анализа: первый – для идентификации и характеристики бактерий, второй – для остальных элементов осадка. Наличие отдельного канала для анализа бактерий обеспечивает бескомпромиссную точность их идентификации и подсчета.

В процессе анализа прибор идентифицирует, дифференцирует и определяет количество элементов в моче. Результат выдается в виде количества элементов в 1 микролитре мочи. Для удобства клиницистов и пациентов, которые привыкли ориентироваться на количество элементов осадка в поле зрения, пересчет производится автоматически.

При исследовании осадка мочи в норме эритроциты отсутствуют

Обнаружение большого количества эритроцитов в моче определяется термином гематурия.

Различают микрогематурию – цвет мочи не изменен и макрогематурию – цвет мочи изменен: от светло-розового до цвета «мясных помоев».

В осадке эритроциты различают:

  • Эритроциты неизмененные (при постренальной гематурии и макрогематурии ренального происхождения)
  • Эритроциты измененные (при прохождении пораженного воспалительным процессом почечного фильтра – гематурия ренального происхождения).

В раннем детском возрасте эритроциты в осадке мочи обнаруживаются чаще и в большем количестве, что объясняется несостоятельностью почечного фильтра, его увеличенной проницаемостью. Функциональная микрогематурия отмечается при ортостатизме и нарушениях осанки у детей в возрасте 10 и более лет. При переохлаждении, перегревании, после интенсивных спортивных нагрузок микрогематурия может обнаруживаться и у взрослых и может сочетаться с альбуминурией.

Гематурия на фоне приема лекарственных препаратов (аминогликозиды, анальгетики, циклоспорин А, цитостатики, сульфаниламиды) носит функциональный, временный характер, после прекращения приема этих препаратов гематурия исчезает.

Примечание: в сильно концентрированной моче с плотностью 1,030 -1,040 и рН 9-10 или плотностью 1,002-1,005 и рН 4,5-5,0 могут обнаруживаться измененные эритроциты, которые не имеют диагностического значения, но отмечаются при описании результатов анализа.

У здоровых людей в норме определяют 2 – 4, не более 10 лейкоцитов в поле зрения. Лейкоцитурия (повышенное выделение лейкоцитов с мочой), чаще всего является признаком воспалительного процесса в мочевой системе.

Лейкоцитурия инфекционная (бактериальная)

является признаком воспалительных заболеваний почек, мочевыводящих путей. Массивная лейкоцитурия – пиурия, связанная с выделением с мочой гноя (обилие лейкоцитов, в том числе частично разрушенных, бактерий). Пиурия наиболее характерный симптом при инфекционно-воспалительных заболеваниях почек и мочевыводящих путей (пиелонефриты, пиелиты, циститы) всегда сочетается с бактериурией.

Пиелоциститы, особенно у грудных детей, могут протекать без лейкоцитурии. Обычно это связанно с задержкой лейкоцитов при спазме уретры. В этих случаях для исключения лейкоцитурии, пиурии рекомендовано повторное исследование мочи, а также анализ мочи по Нечипоренко.

встречается при аутоиммунных заболеваниях, опухолевых процессах, туберкулезе почек и мочевыводящих путей, иногда выявляется при подостром течении гломерулонефрита с нефротическим синдромом в период обострения (подтверждается отрицательными посевами мочи и отрицательным тестом на нитриты)

Референсные значения: до 10 лейкоцитов в поле зрения

3) Эпителий

В мочездоровых людей клетки почечного эпителия не обнаруживаются

существенного диагностического значения не имеет, у мужчин в норме выявляют только единичные клетки, у женщин присутствуют в большем количестве, иногда количество плоского эпителия в моче повышается при инфекциях мочевыводящих путей.

Выявляется при гломерулонефритах, пиелонефритах, нефритах, циститах, простатитах, мочекаменной болезни, лихорадках, интоксикациях, послеоперационных состояниях, новообразованиях почек и мочевыводящих путей

пиелонефрит, хроническая, острая почечная недостаточность, тубулярный некроз, отторжение почечного трансплантанта, новообразования почек, интоксикация солями тяжелых металлов, этиленгликолем, препаратами висмута, салицилатами

Референсные значения: не обнаружено (допускается единичный плоский в поле зрения)

Цилиндры представляют собой элементы осадка цилиндрической формы (своеобразные слепки почечных канальцев), состоящие из белка или клеток,

По составу и внешнему виду различают несколько видов цилиндров (гиалиновые, зернистые, эритроцитарные, восковидные и др.).

В моче здоровых людей клетки почечного эпителия не обнаруживаются.

Цилиндры обнаруживаются при всех органических заболеваниях почек, тяжелых интоксикациях, системных заболеваниях, острых реакциях отторжения трансплантанта.

Референсные значения: не обнаружено

5) Кристаллы солей (оксалаты кальция, ураты, фосфаты, кристаллы мочевой кислоты, мочекислый аммоний, фосфорнокислая известь, трипельфосфаты)

Моча представляет собой раствор различных солей, которые при стоянии мочи могут образовывать кристаллы. Избыточное содержание солей в моче способствует образованию конкрементов и развитию мочекаменной болезни. В тоже время диагностическое значение присутствия в моче кристаллов солей обычно невелико. Наличие тех или иных кристаллов солей в мочевом осадке указывает на изменение реакции в кислую или щелочную сторону.. Вероятность образования кристаллов и мочевых конкрементов возрастает при обменных нарушениях в организме.

Референсные значения: не обнаружено

Слизь вырабатывается эпителием мочевыводящих путей и может присутствовать в небольшом количестве в осадке мочи.

Увеличение образования слизи наблюдается при острых и хронических воспалительных процессах нижних отделов мочевыводящих путей (уретриты, циститы).

Референсные значения: не обнаружено

Точный количественный подсчет бактерий производится на автоматическом анализаторе UF1000i (Sysmex) методом проточной цитофлуометрии (при этом происходит специфическое окрашивание исключительно только бактерий, что обеспечивает точный результат исследования), качественное определение бактерий производится на анализаторе IQ 200 (Iris, США)

У здоровых людей мочеобразовательная и мочевыводящая система стерильна. Минимальное количество бактерий, которое смывается мочой из дистального отдела мочеиспускательного канала, обычно не превышает 10^4 в 1 мл. Появлений бактерий в моче более чем 1*10^5 в 1 мл – это бактериурия, которая чаще всего свидетельствует о наличии инфекционно-воспалительных заболеваний почек и мочевыводящих путей.

При обнаружении бактерий в моче рекомендовано произвести бактериологический посев мочи, с помощью которого можно определить вид бактерий и оценить уровень бактериурии, а также выявить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам. Но необходимо учитывать, что анализатор IQ 200, UF1000i (Sysmex) чувствителен к любому роду бактерий, при этом в бактериальном посеве выявляются в основном клинически значимые микроорганизмы (Escherichia coli в 80 — 90% случаев, реже — S. faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Citrobacter, Klebsiella pneumoniae, Serratia, несколько реже Staphylococcus aures, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Streptococcus pyogenes, Candida albicans и др). Кроме того, бактерии сохраняются в моче не более 1 — 2 суток после начала правильно подобранной антибиотикотерапии. Важно также учитывать, что большое количество лейкоцитов в моче тормозит рост бактерий в бактериальном посеве.

Обнаружение большого количества бактерий в осадке мочи в сочетании с большим количеством плоского эпителия может свидетельствовать о контаминации пробы при сборе мочи (неправильная подготовка пациента при сборе мочи). Поэтому при наличии бактериурии обязательно оцениваются и другие показатели общего анализа мочи – лейкоциты, эритроциты, определение нитритов и др.)

Референсные значения:

Качественное определение бактерий (анализатор IQ 200 ( Iris, США): не обнаружено; определяется степень бактериурии: +; ++;+++

Количественное определение бактерий (автоматический анализатор UF1000i (Sysmex):

  • Муж.: меньше 2.6 х 10^4/мл
  • Жен.: меньше 1.0 х 10^5/мл
  • Дети: меньше 2.07 х 10^4/мл

8) Споры грибов (дрожжеподобные грибы)

Обнаружение в осадке мочи дрожжевых грибов свидетельствует о кандидомикозе мочевыводящих путей и почек в результате нерациональной антибиотикотерапии или при тяжелом иммунодефиците (химиотерапия, прием цитостатиков, а также у ВИЧ-инфицированных при развернутой стадии СПИДа).

Нужно учитывать также, что наличие в осадке мочи дрожжевых грибов часто может свидетельствовать о контаминации пробы влагалищными выделениями, в этих случаях рекомендовано повторить исследование при обязательном строгом соблюдении правил сбора мочи.

Для определения видовой идентификации грибковой флоры рекомендовано произвести посев на грибы р. Candida, с определением чувствительности к антимикотическим препаратам.

Референсные значения: не обнаружено

9) Сперматозоиды

Незначительное количество сперматозоидов может обнаруживаться в норме Сперматозоиды в моче в значительном количестве, определяются при заболеваниях и аномалиях развития мужских мочеполовых органов.

Референсные значения: не обнаружено

ІІ. Физико-химические показатели мочи определяются на мочевом автоматическом анализаторе iChem Velocity Iris (Beckman Coulter), автоматический биохимический анализатор AU480 (Beckman Coulter).

Белок в моче определяется в два этапа:

1) качественное определение тест-полоской на автоматическом биохимическом анализаторе мочи — iChemVelocity Iris , Beckman Coulter;

2) в том случае, если результат позитивный — выполняется количественное определение белка в моче на автоматическом биохимическом анализаторе AU480, Beckman Coulter.

Один из самых важных лабораторных маркеров патологии почек и мочевыводящих путей. В норме большая часть белков крови не проходит через мембрану почечных клубочков, в связи с размером, строением и зарядом белковой молекулы, а низкомолекулярные белки, попавшие в первичную мочу, реабсорбируются в проксимальных канальцах. При минимальных повреждениях в клубочках почек наблюдается прежде всего потеря низкомолекулярных белков (преимущественно альбумина), поэтому при большой потере белка часто развивается гипоальбуминемия.
При более выраженных патологических изменениях в мочу попадают и более крупные белковые молекулы (альфа-2- макроглобулин, бета-липопротеиды, гамма-глобулин). Некоторое количество белка физиологически секретируется эпителием канальцев почек (белок Тамма-Хорсфалля), который участвует в образовании гиалиновых цилиндров.

Транзиторная протеинурия может возникнуть после продолжительной физической нагрузки (маршевая протеинурия), после переохлаждения или перегревания организма, при эмоциональном стрессе (плач, страх), после грубой пальпации почек (пальпаторная протеинурия), протеинурия новорожденных (первые 4-10 дней после рождения).

Такие протеинурии быстро исчезают после прекращения действия вызывающего их фактора.

Патологические протеинурии:

Пререналные протеинурии (связаны с избытком белков – гемоглобин, миоглобин, продукты деградации фибрина, лёгкие цепи иммуноглобулинов):

Возникают при разрушении тканей и гемолизе или с появлением в плазме крови паталогических парапротеинов (лимфопролиферативные расстройства).

Обусловлены патологией почек:

— клубочковая (гломерулярная), связанная с изменением барьерной функции мембран клубочков, может сопровождаться массивной потерей белка (более 3г/л)

— канальцевая (тубулярная), связанная с нарушением реабсорбции и деградации белка в проксимальных канальцах или повышенной продукцией белка Тамма-Хорсфалля

Возникают в результате кровотечения из мочевыводящих путей, локального выделения иммуноглобулинов при инфекциях мочевыводящих путей воспаления, полипоза, опухоли мочевого пузыря.

Ортостатическая протеинурия (постуральная, перемежающаяся, циклическая, лордотическая)

Характерна для детей дошкольного и школьного возраста, в 4-5% носит семейный характер. Протеинурия появляется у ребенка только в положении стоя, когда позвоночник занимает лордотическое положение, вызывая пассивный застой в почечных венах и, соответственно, застойную протеинурию, представленную в основном альбумином. В горизонтальном положении, как правило, протеинурия исчезает.

Референсные значения: меньше 0,140г/л

В норме глюкоза в моче отсутствует.

При концентрации глюкозы в крови, которая превышает максимальную способность почек к обратному всасыванию глюкозы или при снижении этой способности вследствие изменения функций почечных канальцев, наблюдается глюкозурия.

— алиментарная (наблюдается при поступлении в пищу большого количества углеводов, при этом организм временно теряет способность усваивать глюкозу)

— эмоциональная (наблюдается после эмоционального напряжения и стресса)

— при приеме некоторых лекарств (кофеин, кортикостероиды)

Патологическая глюкозурия

— непанкреатогенная ( раздражение ЦНС, тиреотоксикоз, синдром Иценка – Кушинга, акромегалия, феохромоцитома и др.).

С возрастом почечный порог для глюкозы снижается. Кроме того почечный порог уменьшается при хронических заболеваниях почек, гипертонической болезни, при диабетической нефропатии, тогда глюкозурия наблюдается при концентрации в крови ниже пороговой. Также при снижении уровня фильтрации глюкозурия может не наблюдаться даже при гипергликемии, превышающей почечный порог.

Референсные значения: 0 — 0,8 ммоль/л

3) Кетоновые тела

Кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и бета-оксимасляная кислоты) образуются в результате усиленного катаболизма жирных кислот и в процессе обмена аминокислот, глюкозы. Кетонурия – важный диагностический признак, который свидетельствует о нарушении углеводного и жирового обменов. Определение кетоновых тел важно в распознавании метаболической декомпенсации при сахарном диабете. Инсулинзависимый ювенильный диабет часто впервые диагностируется по появлению кетоновых тел в моче. При неадекватной терапии инсулином кетоацидоз прогрессирует. Возникающие при этом гипергликемия и гиперосмолярность приводят к дегидратации, нарушению баланса электролитов, кетоацидозу. Эти изменения вызывают нарушения функции ЦНС и могут привести к гипергликемической коме.

Референсные значения:

  • не обнаружено
  • степень обнаружения:
  • 0 -0,5 ммоль/л – следы
  • 0,6 – 1,5 ммоль/л – (+)
  • 1,6 – 5,0 ммоль/л – ( ++ )
  • 5,1 – 15 ммоль/л – (+++)

4) Цвет мочи

В норме цвет мочи соломенно — желтый, янтарно — желтый, светло – желтый, у детей первого года жизни возможна бесцветная моча.

5) Прозрачность

В норме моча полностью прозрачная, небольшая мутность может быть обусловлена присутствием незначительного количества слизи и клеток эпителия.

Помутнение мочи может быть результатом наличия в моче эритроцитов, лейкоцитов, эпителия в значительном количестве, бактерий, жировых капель, выпадения в осадок солей (уратов, фосфатов, оксалатов) и зависит от концентрации солей, рН, температуры хранения мочи (низкая температура способствует выпадению солей в осадок).
При длительном стоянии моча может стать мутной в результате размножения бактерий.

6) Реакция (рН мочи)

В норме у здоровых людей при нормальном питьевом режиме и разнообразной диете моча имеет слабокислую реакцию: 5,0 – 7.0.

7) Удельный вес

В норме составляет 1,010 – 1,017

Относительная плотность (удельный вес) мочи
зависит от количества выделенных органических соединений (мочевины, мочевой кислоты, солей), электролитов (Cl, Na, К), а также от количества выделяемой воды. Чем выше диурез, тем меньше относительная плотность мочи. Наличие белка и, особенно, глюкозы вызывает повышение удельного веса мочи. Снижение концентрационной функции почек при почечной недостаточности приводит к снижению удельного веса (гипостенурия). Полная потеря концентрационной функции приводит к выравниванию осмотического давления плазмы и мочи, это состояние называется изостенурией. Гиперстенурия — повышение относительной плотности, например, при сахарном диабете относительная плотность мочи увеличивается до 1,040 – 1,050.

Представляют собой продукты жизнедеятельности грамотрицательных микроорганизмов (Escherichia coli, Proteus, Klebsiella, Citrobacter, Salmonella), энтерококков, стафилококков и Pseudomonas. В норме моча, которая содержится в мочевом пузыре, стерильная, нитриты отсутствуют. Обнаружение нитритов в моче свидетельствует об инфицировании мочевого тракта. Отрицательный результат не всегда исключает бактериурию, так как мочевая система может быть инфицирована бактериями, которые не переводят нитраты в нитриты (стрептококки, стафилококки и другие), количество бактерий очень высокое (в этом случае нитриты восстанавливаются в элементарный азот и не определяются) либо количество бактерий скудное.

Референсные значения: не определяются.

9) Уробилиноген (желчный пигмент)

Представляет собой продукт окисления желчного пигмента билирубина, является нормальным продуктом катаболизма, который в физиологических условиях экскретируется с калом и в минимальных количествах с мочой.

Уробилиногенурия характерна для гемолитических состояний, поражений паренхимы печени, кишечной патологии.

Референсные значения: не обнаружено

Примечание: длительное нахождение мочи при комнатной температуре при прямом солнечном свете приводит к окислению уробилиногенов до уробилинов, что может привести к ложноотрицательным результатам.

10) Билирубин

Билирубин — основной конечный метаболит порфиринов, выделяемый из организма. Билирубинурия наблюдается при поражении паренхимы печени или механическом затруднении оттока желчи. При гемолитической желтухе билирубин в моче не определяется.

Референсные значения: не обнаружено

Лаборатория « Смартлаб» выполняет:

  • 9006Общий анализ мочи (аппаратный и ручной подсчет форменных элементов осадка мочи)
  • 9076Общий анализ мочи (аппаратный и ручной подсчет форменных элементов осадка мочи + количественное определение бактерий высокочувствительным методом)

источник