Методика анализ кала на дисбактериоз

В человеческом теле живут миллиарды бактерий и самых разнообразных микроорганизмов, деятельность которых обеспечивает его нормальное функционирование. Одним из основных мест локализации для большинства из них является кишечник. Именно поэтому любое нарушение микрофлоры данного органа незамедлительно сказывается на состоянии здоровья целого организма.

Для оценки содержания бактерий в кишечнике достаточно провести анализ кала на дисбактериоз. Это достаточно простое микробиологическое исследование, позволяющее определить количественные и качественные характеристики флоры. Кроме этого, диагностика дает возможность определить чувствительность обнаруженных патогенных либо условно-патогенных бактерий к антибиотикам, что поможет выбрать наиболее подходящий вариант терапии.

Состав бактериальной флоры кишечника – один из самых главных факторов нормального функционирования человеческого организма. Нарушение естественного соотношения «полезных» и «вредных» микроорганизмов, как правило, приводит к развитию различных заболеваний. В норме почти 90 % полезной микрофлоры представлено бифидобактериями и лактобактериями.

В число остальных 10 % входят условно-патогенные разновидности, такие как кишечная палочка, клострии, дрожжеподобные грибы, бактероиды, пептококки и т.д. Так, в 1 мл микрофлоры подвздошной кишки приблизительно находится около 105 микроорганизмов, основными из которых являются молочнокислые бактерии, стафилококки, стрептококки и другие грамположительные представители вида анаэробов.

В дистальном отделе органа в норме наблюдается их увеличение до 108, и в первую очередь это происходит за счет кишечной палочки, бактероидов, энтерококков и анаэробов. В толстом кишечнике больше всего присутствуют анаэробные бактерии – лактобациллы, бактероиды и клостридии.

Существуют определенные границы, характеризующие норму для каждого вида микроорганизмов. Поэтому превышение либо снижение количества тех или иных бактерий может привести к нарушению баланса, то есть к дисбактериозу (или дисбиосу) – патологии, которая может протекать как в острой, так и хронической форме.

Слаженный симбиоз микроорганизмов, составляющих флору кишечника у млекопитающих (в том числе и человека) обеспечивает пищеварительные процессы, синтез витаминов группы В, К и защитную функцию от чужеродных вирусов и бактерий. Кроме того, за счет микрофлоры осуществляется двигательная активность, регуляция газового состава кишечника, а также детоксикация.

Проявления дисбактериоза могут довольно сильно отличаться по степени выраженности. Заболевание способно длительное время протекать без заметных или неприметных единичных симптомов, что позволяет человеку быть убежденным в своем здоровье. Но на таком фоне любой стресс может спровоцировать ярко выраженную симптоматику, которая заставит немедленно обратиться за медицинской помощью.

Первое, что сделает врач после осмотра пациента с такими симптомами, как:

расстройство органов пищеварительной системы – диарея, запоры, метеоризм и т.д.;
наличие невыясненной до конца этиологии высыпаний на коже и слизистых;
частые аллергические реакции (чаще всего наблюдается у детей и подростков);
непереносимость определенного ряда пищевых продуктов, –

это порекомендует сдать анализ кала на дисбактериоз. Кроме этого, сделать копрограмму, как еще называется данное исследование, будет необходимо после курса терапии антибактериальными, противовоспалительными и гормональными препаратами, перенесенных инфекций ЖКТ и т.д.

Согласно статистическим данным, детский дисбактериоз очень распространенная патология. Его возникновение может быть обусловлено достаточно разнообразными причинами. В ситуациях, когда у грудничка проявляются первые симптомы дисбактериоза, первое, что необходимо сделать родителям, – это показать ребенка педиатру.

У взрослых, как и у малышей, данное исследование может выполняться двумя методиками, способными показать две характеристики собранного биоматериала. Поэтому врач может назначить бактериальный или биохимический анализ кала на дисбактериоз, но, как правило, в большинстве случаев проводятся сразу оба способа, что показывает наиболее полную картину состояния микрофлоры кишечника.

Обследование производится с целью оценить количественные и видовые характеристики бактерий, и в результате сделанного анализа выработать дальнейшую терапевтическую тактику. В процессе интерпретации полученных материалов становится возможным подсчитать соотношение нормальной, условно-патогенной и при наличии патогенной флоры.

При необходимости дополнительно выполняется бак-посев, то есть образец материала высаживается на питательную среду, и затем определяется бактериальная чувствительность к антибиотикам тех или иных групп. Этот метод позволяет правильно подобрать вариант терапии, и добиться быстрых результатов в излечении заболевания.

Данная методика основана на выяснении содержания биохимических показателей, и в частности метаболитов жирных летучих кислот, таких как масляная, уксусная и пропионовая. Эти соединения продуцируются микроорганизмами, обитающими в органах ЖКТ (желудочно-кишечного тракта). Любое патологическое изменение со стороны органов пищеварения непременно сказывается на микрофлоре, что, следовательно, приводит к сдвигу показателей биохимии.

Результаты биохимического анализа предоставят врачу достаточно информации, что он сможет с уверенностью сказать, в каком конкретно органе идет развитие патологического процесса, и каковы его особенности. Исследование проводится одним из новых методов – газожидкостным хроматографическим анализом, позволяющим оценить не только микрофлору кишечника, но даже и ротовой полости.

Возможности данной диагностики обширны – с помощью ее можно также выполнить скрининговое обследование кишечника и выявить неспецифический колит, синдром раздраженного кишечника, а также новообразования. Кроме этого, становится доступным оценить дезинтоксикационную деятельность печени при различных ее заболеваниях, дисфункцию поджелудочной железы и отклонения в циркуляции желчных кислот.

Перед тем как сдавать анализ на определение состояния микрофлоры кишечника, следует предварительно проконсультироваться с врачом по поводу тонкостей подготовительного процесса.

Все правила, которые включает в себя подготовка, обязательно нужно выполнить, так как в противном случае не получится собрать качественно биоматериал. А это, в свою очередь, повлечет к получению недостоверных результатов, и к повторному назначению обследования. Рекомендации одинаково подходят и взрослому, и ребенку.

Итак, к основным правилам для сбора бактериального (также он может называться бактериологический) анализа относятся следующие:

за несколько дней до обследования исключить из рациона жирное мясо и рыбу, острые и кислые блюда и алкоголь;
за неделю до забора материала прекратить прием антибиотиков, слабительных препаратов, в том числе и ректальных суппозиториев;
женщинам необходимо подобрать так период менструального цикла, чтобы сдача образца не совпала с месячными;
приобрести в аптеке специально предназначенный для данных целей пластиковый контейнер.

Все подготовительные мероприятия относятся к бактериальному методу исследования образца кала, при этом биохимический анализ абсолютно никакой предварительной подготовки не требует. Но так как в большинстве случаев проводятся оба способа, то соответственно пациент должен готовиться к процедуре.

Прежде чем собирать кал на анализ, необходимо убедиться, что тара стерильная и абсолютно сухая. При сборе нужно обязательно проследить, чтобы в контейнер не попала моча либо выделения из половых органов. Для ускорения опорожнения кишечника нельзя пользоваться слабительными препаратами или ставить клизму – это также приведет к некачественным данным. Стул должен быть естественным (произвольным) процессом.

Перед непосредственным забором образца следует провести тщательный туалет половых органов и заднего прохода. Опорожнение кишечника нужно произвести в чистое судно, горшок или непромокаемую бумагу (клеенку), затем взять 10-15 граммов (1-2 чайные ложки) и плотно закрыть герметичной крышкой. На контейнере необходимо указать ФИО пациента, дату рождения, а также точное время и дату сбора образца испражнений.

Контейнер с биоматериалом нужно не позднее 3-4 часов после забора кала доставить в лабораторию. На протяжении этого времени контейнер необходимо поставить в холодильник при температуре 4-8ºС. При промедлении собранный образец будет считаться недействительным, так как уже его исследование не даст правильных результатов.

Учитывая, что многие пациенты проходят диагностику уже при ярко выраженных, доставляющих достаточно сильный дискомфорт, симптомах, одним из основных их вопросов становится, сколько делается анализ и когда он будет готов. Это неудивительно, ведь только по результатам изучения кала можно подобрать соответствующую терапевтическую тактику.

Сколько дней займет выполнение анализа, и расшифровка полученных данных напрямую зависит от того, какой вид исследования назначен пациенту. Если предписано провести бактериологический анализ с определением чувствительности к антибиотикам, то, к примеру, в такой клинике, как Хеликс, это займет не менее 5-7 дней, так как только за это время на питательной среде вырастут колонии микроорганизмов, на которых можно будет испробовать чувствительность к антибиотикам.

Биохимическое обследование обычно готово в течение 1 дня, а при необходимости можно провести экспресс-анализ, который выполняется на протяжении одного часа. Конечно же, не стоит забывать о загруженности лабораторий и отличие работы частных клиник от государственных медицинских учреждений. Поэтому если нужно получить результаты как можно быстрее, то оптимально будет выбрать заведение, которое имеет наилучшие отзывы пациентов или их родственников.

По окончании всех лабораторных процедур, необходимых для получения результатов анализа, пациенту на руки либо лечащему врачу в кабинет передается бланк, в котором содержатся характеристики исследованного образца. В документе указаны нормальные показатели для различных возрастных категорий. При этом, следует отметить, что у малышей до года верхние границы содержания бактерий несколько отличаются от значений взрослых людей. В основном это относится к условно-патогенным микроорганизмам.

При изучении биоматериала производится оценка консистенции и цвета образца, а также присутствие в нем слизи или примеси крови. В норме консистенция должна быть достаточно плотной и сформированной. Как правило, слишком светлый или темный оттенок испражнений – явное доказательство патологических изменений состава кишечной микрофлоры.

После первоначальных оценочных суждений, проведенных по внешнему виду образца каловых масс, детально изучается количество каждого вида микроорганизмов, имеющих диагностическое значение для постановки диагноза. Обязательно определяется содержание наиболее многочисленного показателя – бифидобактерий. В норме их должно быть не менее 95-99%.

Кроме этого оцениваются параметры численности кишечной палочки (эширихии) и лактобактерий. Изменения данных показателей свидетельствуют о наличии дисбактериоза, и при этом в анализе могут отмечаться патогенные бактерии. К ним относятся холерный вибрион, сальмонелла, лямблии, шигелла, гемофильные палочки, золотистый стафилококк и другие.

Подробнее о расшифровке результатов анализа кала на дисбактериоз можно прочитать в этой статье. На основании всех этих показателей врачу несложно будет сделать вывод о характере дисбактериоза, спрогнозировать дальнейшее развитие заболевания и назначить необходимую терапию.

источник

Дисбактериозом называется нарушение не просто количественного содержания микроорганизмов в кишечнике, но и пропорционального соотношения. Правильный баланс обеспечивает необходимый процесс пищеварения, помогает ферментным системам.

Возрастные особенности питания сопровождаются изменением требований к микрофлоре кишечника. Поэтому то, что оптимально для ребенка-грудничка, расценивается нарушением для взрослого человека и наоборот.

Кал на дисбактериоз — сложный анализ. Он требует соблюдения:

предварительной подготовки;
правил сбора испражнений;
выделения каждой группы микроорганизмов;
дифференциации с патологической флорой.

Часть исследований требует биохимических методов, кроме того, при необходимости делают бактериологический посев на дисбактериоз на специальные питательные среды. Поэтому исследование кала на дисбактериоз проводится опытными лаборантами, имеющими специальную подготовку.

В кишечнике человека обитает более 500 видов микроорганизмов. Их задачи:

помочь в расщеплении попавших с едой веществ до состояния, допускающего свободное прохождение сквозь стенку в кровоток;
убрать возникшие в ходе процесса пищеварения шлаки, газы, не допустить гниения;
ускорить выведение ненужных вредных веществ;
выработать недостающие организму ферменты для жизнедеятельности;
синтезировать необходимые витамины;
обеспечение участия в синтезе составляющих для иммунитета.

Все микроорганизмы делятся:

на полезные — выполняют выше перечисленные функции, поддерживают здоровье (бифидобактерии — 95% от всего состава, лактобактерии до 5%, эшерихии);
условно патогенные — становятся патогенными при наличии нужных условий (изменение кислотно-щелочного баланса среды, падение иммунитета за счет длительного или тяжелого заболевания), бактериями «предателями» могут стать стафилококки, энтерококки, клостридии, грибы рода Кандида;
вредные или патогенные — попадая в организм, они становятся причиной болезни кишечника (сальмонелла, шигелла).

Хеликобактерии локализуются в области привратника желудка. Являются одной из важных причин гастрита, язвенной болезни и рака. Возможно их выделение из слюны и фекалий зараженного человека. Обнаруживается у 2/3 населения.

Расшифровка анализа кала на дисбактериоз дает информацию о количественном и качественном составе микрофлоры, предупреждает об опасных отклонениях. По способу получения энергии микроорганизмы делят:

на аэробные — жизнеспособны только в присутствии кислорода (энтеробактерии, лактобактерии, стрептококки, стафилококки, грибы);
анаэробные — развиваются без доступа кислорода, отличаются устойчивостью (бифидобактерии, энтерококки, клостридии).

В норме организм человека защищен от распространения бактериальной флоры и грибов из кишечника в желудок и другие отделы пищеварительного тракта. Преградой становятся:

соляная кислота желудочного сока, разрушающая некоторых виды микроорганизмов;
наличие илеоцекального клапана на границе между подвздошной (последней в тонком кишечнике) и слепой кишкой (начальная часть толстой кишки);
система гладких мышц, регулирующая перистальтические волнообразные движения для проталкивания содержимого в одном направлении — из тонкого в толстый отдел кишечника.

Так происходит у здорового человека. Анализ кала на дисбактериоз может показать нарушение механизмов защиты.

Дисбактериоз — не болезнь, а следствие какого-то заболевания. Обычно к нему приводят:

хроническая патология органов пищеварения;
результат воспалительных процессов в кишечнике при энтероколитах разной этиологии;
использование высоких доз и длительных курсов антибиотиков.

Изменения в состоянии здоровья может быть вызвано уменьшением доли полезных микроорганизмов и ростом размножения условно патогенных и вредителей. Специфических симптомов не бывает. Но, учитывая сбой в функционировании кишечника у пациента, следует ожидать:

нарушения стула (чередование поноса и запора);
вздутие живота (метеоризм) из-за усиления процессов брожения в кишечнике;
приступов колики;
появления непереваренных остатков пищевых волокон, слизи, крови в испражнениях;
снижения аппетита, недостаточную прибавку веса у детей;
распространенных аллергических реакций;
постоянного налета на языке, зубах, запаха изо рта;
кровоточивости десен;
усиления выпадения волос, ломкости ногтей;
участков сухости и шелушений на коже;
признаков снижения иммунитета, о которых можно судить по частым простудам, трудностям с лечением.

Пациентам назначают необходимое обследование для диагностики. Чтобы выяснить роль нарушенной кишечной флоры, врач назначат анализ на дисбактериоз кишечника. Исследование показано больным на фоне химио- и лучевой терапии для выбора поддерживающего лечения.

Читайте также: Анализы на вич и глистов

Для получения достоверных результатов недостаточно иметь рядом квалифицированных специалистов и хорошо оборудованную лабораторию. Необходимо соблюдать требования по подготовке к анализу и правильно собрать кал.

Проведенный анализ на дисбактериоз может оцениваться как достоверный, если в предшествующие три дня из питания были исключены любые продукты, способствующие процессам брожения. К ним относятся:

алкоголь;
свекла;
блюда из мяса и рыбы.

За три дня до сдачи анализа прекратить применение таких лекарственных средств, как:

антибиотики;
слабительные любого вида (включая ректальные свечи, касторовое и вазелиновое масло).

Хорошо промыть с мылом область промежности и ануса перед дефекацией. Дождаться самопроизвольной дефекации для забора материала, не использовать слабительных. Это требование затруднительно для лиц с постоянными запорами. Собрать кал в стерильную емкость, без мочи. Образец плотно закрыть крышкой.

При наличии кровянистых выделений или примесей слизи их нужно включить в собранный материал. Ребенка следует усадить на горшок, предварительно хорошо вымытый и ополоснутый кипятком.

Для проведения исследований достаточно около 10 г испражнений, по объему это равно чайной ложке. На крышке посудины следует указать инициалы и фамилию пациента, для ребенка — дату рождения, время и дату, когда сдается анализ.

Идеальным для завершения условий сдачи анализа на дисбактериоз является быстрая доставка емкости в лабораторию (не позднее 40 минут). Допустим срок два часа. Разрешается хранить в холодильнике до четырех часов, но не в морозилке. Чем дольше задержка, тем больше погибнет анаэробных микроорганизмов от контакта с воздушной средой. А это искажает полученные результаты.

Врач предлагает сдать кал сначала на общий анализ, который называется копроскопией или копрологией. Он проводится при микроскопии капли разведенных дистиллированной водой испражнений.

слизь;
элементы воспаления;
непереваренные пищевые волокна;
эритроциты;
жировые включения;
яйца глистов;
цистную форму паразитов.

Точного подсчета количества бактерий не проводится. В результатах для врача важна регистрация нарушения процесса пищеварения. С целью уточнения причины назначаются биохимическое или бактериологическое дополнительное исследование.

Биохимический анализ кала на дисбактериоз позволяет получить результаты через час. Метод основан на способности бактерий к выделению жирных кислот. По анализу разновидности кислотного содержимого различают микроорганизмы и определяют локализацию в кишечнике.

Преимуществами способа являются:

сравнительная быстрота;
возможность удлинения времени доставки в лабораторию до суток;
сохранность материала в условиях заморозки в холодильнике;
точность информации.

Для правильного сбора в отличие от уже приведенной схемы необходимо:

предусмотреть срок после проведения антибиотикотерапии не менее двух недель;
женщинам воздержаться от сдачи анализа, если не полностью закончились месячные;
забирать кусочки кала из разных частей.

Содержание кислот определяют в мг на г каловых масс. Допустимыми считаются показатели:

уксусной кислоты 5,35–6,41;
пропиленовой 1,63–1,95;
масляной 1,6–1,9.

По концентрации жирных кислот делается вывод о возможном составе микроорганизмов в кишечнике.

Бактериологический посев кала на дисбактериоз более трудоемкий метод исследования. Анализ необходимо проводить как можно быстрее после дефекации.

Размножение бактерий происходит 4–5 дней. Сколько делается анализ на дисбактериоз определяют затраты времени на процесс роста. Они значительно больше, чем при биохимическом исследовании, потому что требуется не только сосчитать количественный показатель, но и идентифицировать микроорганизмы по их свойствам. Результаты учитываются в КОЕ/г (колониеобразующих единицах).

Нормальный расклад микроорганизмов должен соответствовать следующей схеме:

бифидобактерии 10 8 –10 10 ;
лактобактерии и эшерихии 10 6 –10 9 ;
стрептококки 10 5 –10 7 ;
негемолитические стафилококки 10 4 –10 5 ;
клостридии 10 3 –10 5 ;
условно патогенные энтеробактерии 10 3 –10 4 ;
гемолитические стафилококки менее 10 3 КОЕ/г.

Численность бактерий у детей до года при грудном вскармливании отличается от взрослых:

бифидобактерии составляют 10 10 –10 11 ;
лактобактерии 10 6 –10 7 .

Недостатками метода являются:

значительное искажение результатов в зависимости от задержки доставки материала;
отсутствие учета мукозных бактерий, находящихся в толстой кишке;
гибель анаэробных микроорганизмов от контакта с кислородом.

По итогам всех исследований проводится расшифровка анализа на дисбактериоз у взрослых. В нем учитываются выделенные микроорганизмы и их количество:

Патогенные энтеробактерии четко указывают на источник заболевания. Их в норме не должно быть или количественно не превышать 10 4 КОЕ/г (сальмонеллы, протеи, энтеробактерии, палочка чумы). Наличие в анализе говорит об опасности для здоровья пациента.
Рост лактозонегативных энтеробактерий (например, клебсиеллы, серрации) сопровождает случаи падения иммунитета в послеоперационном периоде, при длительной терапии антибиотиками.
Повышенное содержание условно патогенных микробов (кишечной палочки, клостридий, стафилококков) возможно при диспепсических явлениях, запорах, тошноте, кожных заболеваниях. Стафилококки особенно опасны для новорожденных и малышей до года. Они не просто вызывают нарушение усвоения пищи, но провоцируют тяжелые пневмонии, менингит, эндокардит. Сепсис приводит к летальному исходу. Выявление стафилококковой инфекции в родильном отделении требует полного закрытия и санитарной обработки.
Превышение содержания в анализе кишечной палочки может быть связано с инфицированием паразитами, гельминтами.
Грибы рода Кандида в небольшом количестве содержатся у каждого человека. Рост возможен в ответ на применение антибиотиков. Но в других случаях указывает на очаги грибкового поражения во рту, на половых органах, в зоне ануса.

К результатам анализа нужно относиться внимательно как в плане предупреждения развития болезни в будущем, так и при выборе оптимального лечения.

источник

Анализ кала на дисбактериоз назначается обычно в рамках диагностики кишечной патологии.

Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника – синдром, характеризующийся изменением микробного состава толстой кишки. Лабораторную диагностику дисбактериоза начинают с выполнения бактериологического анализа кала. Как правило, лечащий врач, выписывая направление на исследование, рассказывает не только о том, где сдать анализы, но и о том, как правильно подготовиться. Соблюдение правил подготовки и техники сбора во многом влияет на достоверность результата исследования микрофлоры кишечника.

С целью качественного и количественного определения патогенных форм микроорганизмов в 1 г фекалий применяют бак анализ – посев фекалий на питательные среды.

Подозрение на дисбаланс микробной флоры могут вызвать признаки нездоровья, проявляющиеся в течение длительного времени и не объясняющиеся иными причинами.

снижение аппетита;
общее недомогание;
головные боли;
снижение иммунитета;
аллергия;
нарушение нормальной прибавки массы тела у детей.

нарушения стула, болезненные ощущения при дефекации;
метеоризм, вздутие живота, урчание;
схваткообразные боли в животе;
тошнота, отрыжка, неприятный привкус во рту.

Нарушения стула определяются локализацией дисбиотических изменений: энтеральные поносы – признак дисбактериоза в тонком кишечнике. За счет нарушения всасывания питательных веществ объем каловых масс увеличен, фекалии зловонные, пенистые. Нарушение стула колитического типа свидетельствует о дисбиозе с локализацией в толстом кишечнике. Объем испражнений в этом случае часто скудный, с примесью слизи, прожилками крови.

Нарушение всасывания в кишечнике необходимых питательных веществ в течение длительного времени способно стать причиной гиповитаминоза, белково-энергетической недостаточности, нарушений ионного баланса, недостаточности кальция и имеет следующие проявления:

перепады настроения, раздражительность, снижение когнитивных способностей;
сухость и бледность кожи и слизистых оболочек;
кожный зуд;
тусклость и ломкость волос, расслаивание ногтей;
снижение минерализации костной ткани;
ангулярный стоматит.

За неделю до исследования отменяют прием антибиотиков и других лекарственных средств, оказывающих влияние на микробную флору, а также на параметры кала. Стул, предназначенный для сдачи анализа, должен быть сформирован естественным путем, не следует применять клизму, слабительные препараты или ректальные суппозитории.

Анализ кала на дисбактериоз может выявить лишь его наличие, для определения причин необходимо дополнительное обследование.

Запрещается собирать материал для исследования ранее, чем через два дня после рентгенконтрастного исследования пищеварительного тракта. Накануне сдачи анализа кала на дисбактериоз нужно исключить из рациона продукты, способствующие окрашиванию каловых масс, избыточному образованию газов, возникновению диареи или запора.

В материал для анализа не должна попасть моча или влагалищные выделения, поэтому перед сбором фекалий следует опорожнить мочевой пузырь, затем подмыться водой с мылом без пенящихся добавок или ароматизаторов.

Заранее нужно позаботиться о емкости, из которой будет собираться кал. Это может быть сухое и чистое судно, если такого нет, можно закрепить на поверхности унитаза полиэтиленовую пленку. Сразу после дефекации кал из разных участков нужно собрать в стерильный пластиковый контейнер при помощи специальной лопатки, встроенной в крышку. Для анализа на дисбактериоз понадобится около 10 мл биоматериала. Кал доставляется в лабораторию в течение трех часов с момента сбора анализа. Допускается хранение материала в холодильнике при температуре от +3 до +7 °С в течение шести часов, при более длительном хранении достоверность результатов считается сниженной.

В ходе анализа кала на дисбактериоз определяют концентрацию и соотношение нормальных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

Микробная флора необходима для жизнедеятельности организма. В кишечнике здорового человека в норме содержится 400–500 штаммов разных микроорганизмов. Они обеспечивают нормальное пищеварение, участвуют в синтезе и всасывании витаминов, подавляют деятельность патогенных микробов.

Иногда используется экспресс-методика диагностики дисбактериоза, результаты которой можно получить уже через час, однако при таком тесте оценивается содержание в кале только бифидобактерий и собственного белка.

Нормальная микрофлора кишечника выполняет следующие функции:

участие в выработке местного иммунитета, осуществление синтеза антител, подавляющих постороннюю микрофлору;
повышение кислотности среды (снижение уровня pH);
защита (цитопротекция) эпителия, повышение его устойчивости к канцерогенным и патогенным факторам;
захват вирусов, предотвращение колонизации организма посторонними микроорганизмами;
ферментами бактерий осуществляется расщепление пищевых веществ, при этом образуются разные соединения (амины, фенолы, органические кислоты и другие). Под влиянием ферментов также происходит трансформация желчных кислот;
участие в конечном разложении остатков непереваренной пищи;
обеспечение организма питательными веществами, синтез низкомолекулярных жирных кислот, являющихся источником энергии для клеток кишечника;
формирование газового состава, регуляция перистальтики, усиление процессов всасывания в кишечнике;
синтез витаминов группы В, никотиновой, фолиевой и пантотеновой кислот, витамина К, обеспечение поглощения кальция, магния, железа;
участие в механизмах регуляции репаративных процессов при обновлении клеток эпителия кишечника;
синтез ряда аминокислот и белков, обмен жиров, белков, углеродов, желчных и жирных кислот, холестерина;
утилизация избытков пищи, формирование каловых масс.

У здорового человека в кишечнике поддерживается динамическое равновесие между организмом хозяина, заселяющими его микроорганизмами и окружающей средой. Нарушение качественного и количественного состава микрофлоры вызывает дисбактериоз.

Обычно дисбактериоз является следствием или осложнением заболеваний кишечника патологии или нерациональной антибиотикотерапии.

С целью качественного и количественного определения патогенных форм микроорганизмов в 1 г фекалий применяют бак анализ – посев фекалий на питательные среды. Бактериологический посев применяют для диагностики кишечных инфекций и бактерионосительства. Материал для бакпосева помещают в стерильную емкость с консервантом, затем производится выделение чистой культуры микроорганизма, изучение ее свойств и подсчет количества колониеобразующих единиц (КОЕ).

Сколько делается анализ кала на дисбактериоз? Как правило, время ожидания результата составляет от двух дней до недели. Иногда используется экспресс-методика диагностики дисбактериоза, результаты которой можно получить уже через час, однако при таком тесте оценивается содержание в кале только бифидобактерий и собственного белка.

Расшифровка анализа кала на дисбактериоз проводится лечащим врачом с учетом анамнеза и клинических проявлений заболевания.

Нормы содержания бактерий в 1 г кала представлены в таблице.

источник

Микрофлора кишечника представлена условно патогенными, сапрофитами, патогенными микроорганизмами. При нарушении баланса среди различных видов микробов и возникает дисбактериоз.

Анализ кала на дисбактериоз позволяет выявить, устранить причину заболевания. Выяснить количественное и качественное состояние микрофлоры кишечника можно с помощью следующих исследований:

копрограммы – общего анализа кала;
бактериологического исследования;
хроматомасс-спектрометрии;
ПЦР – диагностики или полимеразной цепной реакции;
дыхательного теста.

Рассмотрим по порядку каждый вид исследования по мере убывания популярности, доступности диагностики.

Так называется анализ на дисбактериоз кишечника с расшифровкой. При исследовании определяется физическое, химическое состояние каловых масс, проводится их микроскопическое исследование. К физическим свойствам относятся: цвет кала при дисбактериозе, консистенция, состояние, форма, запах, наличие примесей, непереваренных фрагментов пищи.

Химические исследования отражают наличие или отсутствие скрытой крови, билирубина, стеклобелина, аммиака.

Микроскопический анализ на дисбактериоз дает возможность обнаружить включения, не видные невооруженным глазом – детрит, форменные элементы крови (эритроциты, лейкоциты), макрофаги, простейшие микроорганизмы, яйца глистов.

Копрограмма чаще делается маленьким детям при расстройстве пищеварения. Прежде, чем сдать анализ на дисбактериоз у грудничка, нужно приобрести специальный контейнер в аптеке. Обычно собирается утренняя порция кала. Чтобы получить достоверные анализы, перед сдачей нельзя делать клизмы, принимать лекарственные препараты в любой форме (инъекции, ректальные свечи, таблетки). Кал на дисбактериоз желательно доставить в лабораторию не позднее двух часов после взятия.

Анализ на дисбактериоз кишечника делается для определения вида микроорганизмов в кале. Чаще интересует наличие патогенной микрофлоры. Из сапрофитов (полезных микробов) в организме человека присутствуют бифидобактерии, лактобактерии, эшерихии, энтерококки. Бактероиды появляются у детей не ранее 6 месячного возраста.

Условно патогенными микробами являются стрептококки, кишечная палочка, стафилококки. При определенных условиях их рост может увеличиваться и привести к появлению кишечных расстройств. Патогенные микроорганизмы в норме в кале отсутствуют или имеются в ничтожно малых количествах, быстро подавляются другой микрофлорой. К ним относятся сальмонеллы, дизентерийная палочка (шигеллы), брюшнотифозная, синегнойная палочки.

Как собрать кал на дисбактериоз правильно? Перед исследованием требуется отменить прием лекарств и другие лечебные процедуры. Непосредственно перед сбором материала нужно хорошо подмыться с мылом. Кишечник опорожняется в чистую емкость. Порция для исследования собирается из разных мест, не касаясь посуды.

Материал для бакисследования берется строго в стерильную посуду, незамедлительно доставляется в лабораторию. Иначе часть микроорганизмов может погибнуть, и результаты окажутся недостоверными.

Сотрудники баклабораторий производят посев кала на дисбактериоз на питательную среду для последующего выделения колоний микроорганизмов. Предварительные анализы готовы через сутки, окончательные – через трое.

Анализа кала на дисбактериоз с расшифровкой методом хроматомасс-спектрометрии проводится прибором спектрографом. Суть метода заключается в определении соотношения массы исследуемого органического вещества к заряду ионов.

Во время диагностики производится качественная и количественная идентификация данных. Современные анализаторы подключены к компьютеру. Результаты исследования выводятся на экран и сохраняются базой данных.

Анализа кала на бактериоз инвитро, так можно назвать полимеразную цепную реакцию или ПЦР-диагностику. Высокоинформативный способ применяется для выявления хронических и острых инфекций, наследственных заболеваний.

Возбудителей болезни в биологической пробе определяют по ДНК материалу. В условиях лаборатории участок ДНК многократно увеличивают с помощью ферментов. Используют ту его часть, которая отвечает необходимым условиям исследования. Как сдать анализ на дисбактериоз для ПЦР-диагностики? Так же, как при других методах исследования. Утром в стерильные контейнеры.

Сдавать анализ кала на дисбактериоз для дыхательного водородного теста не требуется. Метод исследования основан на следующем. В кишечнике присутствуют в основном анаэробные микробы, жизнедеятельность которых происходит без доступа воздуха и сопровождается выделением большого количества водорода. Газ присутствует в выдыхаемом воздухе и анализатором определяется его концентрация.

Несведущему человеку сложно понять и оценить любой полученный на руки результат диагностики. Расшифровкой анализа на дисбактериоз и выдачей заключения занимаются специалисты. Интересующую информацию можно получить у лечащего врача.

источник

Организм человека находится в постоянном взаимодействии с окружающей средой. Между тем, из огромного числа микроорганизмов, непрерывно попадающих в пищеварительный тракт человека, только определенные роды, виды микробов нашли в кишечнике человека благоприятные условия существования; в процессе длительной эволюции они закрепились в кишечнике и составили его облигатную микрофлору, выполняющую важные для организма физиологические функции. Нельзя при этом не учесть, что отдельные факторы, такие как характер питания, сезон года, возраст, оказывают некоторое влияние на состав микрофлоры кишечника. С возрастом, например, происходит сдвиг в сторону увеличения грамположительной, гемолитической микрофлоры. Однако колебания, связанные с этими воздействиями, невелики, а способность здорового организма к саморегуляции обеспечивает быстрое восстановление относительного постоянства нормального биоценоза.

Из представителей облигатной микрофлоры кишечника прежде всего следует назвать бифидобактерии (Bifidobacterium) среди анаэробных микробов и кишечную палочку (Escherichia) — среди аэробных.

Основную микрофлору здоровых новорожденных детей, находящихся на естественном вскармливании, составляют бифидобактерии, которые обнаруживаются в больших разведениях фекалий (10 -8 — 10 -11 ). Количество их составляет 85 — 95 % числа всех микробов кишечника. Число кишечных палочек в стуле у этих детей невелико. При переходе на прикорм и более разнообразную пищу увеличивается количество кишечной палочки, ацидофильных микробов, энтерококка. Вместе с тем, в противовес существовавшему ранее представлению о преобладании анаэробных микробов только у детей, находящихся на грудном вскармливании, установлено, что полного вытеснения бифидобактерий не происходит, в норме они продолжают оставаться в толстом кишечнике в значительных количествах в течение всей жизни человека. Основные различия микрофлоры детей раннего возраста и старших контингентов в разных количественных соотношениях бифидобактерий и кишечной палочки.

У детей ясельного возраста аэробная кишечная микрофлора характеризуется еще более высоким содержанием кишечной палочки, энтерококка. У небольшого числа детей этого возраста выделяются лактозодефективные энтеробактерии и стафилококк. Среди аэробных энтеробактерий у здоровых детей, по данным Н.Д. Стерлиговой (1975), в фекалиях обнаруживаются кроме эшерихий и другие условно-патогенные бактерии семейства кишечных. Так, микробы рода Proteus выделяют 6 — 7 % детей, каждый из родов Citrobacter, Enterobacter, Serratia — 1,0 — 1,4 % здоровых детей. В анаэробной микрофлоре, как и у детей раннего возраста, преобладают бифидобактерии.

У здорового взрослого человека, не принимавшего до исследования антибиотиков и химиопрепаратов, основная аэробная микрофлора представлена на 90 — 95 % полноценной в ферментативном отношении кишечной палочкой, которая разлагает в течение 18 — 20 часов лактозу и растет на среде Эндо в виде темно-красных колоний с металлическим блеском. Выделенные из этих колоний культуры расщепляют лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу с образованием кислоты и газа; редко ферментируют сахарозу; образуют индол, сероводород, створаживают молоко, обладают активной подвижностью. Среднее количество кишечной палочки в 1 г фекалий составляет 300 — 400 млн, на средах Эндо и Левина и 800 млн, на 5 % кровяном агаре.

У здоровых взрослых людей в 1,5 % случаев обнаруживается кишечная палочка со сниженными ферментативными свойствами в первой генерации, которая растет на среде Эндо в виде бледно-розовых колоний. При последующем пересеве (вторая генерация) выделенная культура расщепляет лактозу до конца; количество ее в среднем составляет 21 млн/г фекалий. Гемолизирующие эшерихии, как правило, в фекалиях здоровых людей не обнаруживаются.

Лактозонегативные энтеробактерии обнаружены у 5,1 % обследованных здоровых лиц (в среднем 24,9 млн./г). Последующая идентификация выделенных с первичного посева культур как из лактозонегативных, так и лактозоположительных колоний позволяет установить, что у взрослых людей среди представителей аэробной микрофлоры обнаруживаются различные роды условно-патогенных энтеробактерий, например, Citrobacter — у 3 %, Enterobacter — у 1 — 1,5 % и т.д. Однако определить количественное содержание каждого из указанных родов в 1 г фекалий не представляется возможным, так как подавляющее большинство этих родовых групп условно-патогенных энтеробактерий содержат варианты как ферментирующие, так и не ферментирующие лактозу; поэтому в первичном посеве трудно определить процентное содержание микробов каждого из этих родов энтеробактерий.

Энтерококк обнаружен у 20 % взрослых людей при среднем количестве 634 млн/г. Энтерококк представляет собой диплококки удлиненной формы, более полиморфные, чем стрептококк и пневмококк; окрашивается положительно по Граму, неподвижен, желатин не разжижает, молоко не створаживает. Энтерококк в отличие от стрептококка дает в бульоне диффузный рост. От стрептококка его можно дифференцировать по ряду тестов: энтерококк разлагает маннит, растет на средах, содержащих 40 % желчи, в молоке с 0,1 % метиленовой сини редуцирует последнюю, устойчив к воздействию высокой температуры (до 60 °C).

Негемолизирующий и гемолизирующий стафилококк выделяют 2,2 — 1,5 % взрослых людей, при этом средние числовые показатели негемолизующего стафилококка во много раз больше, чем гемолизирующего — 417 млн/г и 90 млн/г соответственно.

Грибы рода Кандида, почти как правило, в посевах фекалий здоровых людей не обнаруживаются.

Молочнокислые микробы представляют сборную группу микроорганизмов, в которую входят ацидофильная и другие молочнокислые палочки, молочнокислые стрептококки, стрептобактерии. Они окрашиваются по Граму положительно, спор не образуют, неподвижны, молоко створаживают. Молочнокислые микробы требуют для культивирования сложных по составу питательных сред.

В анаэробной микрофлоре кишечника здорового человека облигатными являются бифидобактерии. Они обнаружены у 92,7 % взрослых людей. Количественное содержание их значительно: в 96,1 % проб они выделены из фекалий, разведенных до 10 -11 , т.е. в 1 г фекалий они составляют сотни миллиардов микробных тел. Морфологически бифидобактерии имеют разветвления на концах палочек, могут быть в форме римской цифры V или гантелей с колбовидными утолщениями на концах, часто скопления их имеют вид китайских иероглифов. Бифидобактерии окрашиваются по Граму положительно (редко встречаются и грамотрицательные), образуют кислоту без газообразования на средах с лактозой, глюкозой, сахарозой; неподвижны, молоко не створаживают, индол и сероводород не образуют, растут только в анаэробных условиях, спор не образуют.

При посевах фекалий в анаэробных условиях вырастает также значительное количество бесспоровых грамотрицательных палочек, которые объединены в группу бактероидов. Палочки весьма полиморфны, могут иметь и кокковидную форму. Эта группа микробов очень мало изучена. В отношении их нет четкой классификации. О физиологической роли бактероидов для организма человека сведений достаточных нет. Слабая изученность этой группы бактерий объясняется трудностями культивирования — применения сложных питательных сред и условий строгого анаэробиоза.

Физиологическое значение нормобиоценоза велико и многообразно. Кишечная палочка, бифидобактерии характеризуются высокоантагонистическими свойствами, препятствующими развитию патогенных и ряда необычных для нормальной микрофлоры кишечника условно-патогенных микробов; тем самым барьерное действие нормальной микрофлоры кишечника можно рассматривать как один из факторов естественной резистентности организма. Известна также витаминообразующая функция нормальной микрофлоры кишечника — способность синтезировать ряд витаминов, особенно группы B. Нормальная микрофлора кишечника участвует в ферментативных процессах в толстом кишечнике, в частности, в процессе расщепления кишечных ферментов — энтерокиназы и щелочной фосфатазы. Таким образом, нормальная кишечная микрофлора способствует поддержанию постоянства биохимической и биологической среды пищеварительного аппарата, обеспечивает его нормальное функционирование.

Термином «дисбактериоз» кишечника определяют такие ассоциации микроорганизмов, которые качественно или количественно либо одновременно в том и другом направлении отличаются от нормального состава микрофлоры за счет исчезновения или снижения числа облигатных ее представителей, с одной стороны, увеличения числа энтеробактерий, отсутствующих или встречающихся в ничтожных количествах в норме, с другой. В итоге такие микробные ассоциации не в состоянии выполнить физиологические функции, осуществляемые нормальным биоценозом кишечника.

К настоящему времени уже известен ряд условий, при которых развивается дисбактериоз кишечника. Это прежде всего при кишечных инфекционных заболеваниях, в частности при дизентерии; при любых других заболеваниях, изменяющих реактивность организма. Клиническими наблюдениями и прямыми экспериментами на животных установлены нарушения нормальной микрофлоры также под влиянием антибиотиков, химиопрепаратов, лучевых воздействий.

Широкое распространение в последние годы дисбактериоза кишечника определяет его важное значение в клинике кишечных расстройств. А.Ф. Билибин трактует дисбактериоз как состояние срыва адаптации, ведущее к нарушению защитных и компенсаторных механизмов. Надо полагать, это имеет особенное значение в раннем детском возрасте при незрелости специфических и неспецифических факторов резистентности.

Что касается характеристики микробных ассоциаций при дисбактериозе кишечника, то таковые неоднозначны. При одинаковой клинике могут быть разные микробные ассоциации и наоборот. Однако можно полагать, что в любом случае снижение числа облигатной микрофлоры, обладающей высокой антагонистической активностью, создает условия для развития тех родов и видов энтеробактерий, размножение которых в нормальных условиях было подавлено конкуренцией активных симбионтов, либо тех микроорганизмов, которые оказались транзиторно в кишечнике. Чаще всего в этих условиях развиваются микробы, которые обладают высокой резистентностью к антибиотикам и менее требовательны к условиям размножения, а именно: гноеродные микробы, в первую очередь стафилококк, гнилостные (микробы рода Протея и др.); грибы рода Кандида.

У лиц с дисфункцией кишечника на фоне дисбактериоза в микробных ассоциациях могут присутствовать также условно-патогенные микробы семейства кишечных, которые не являются элементами облигатной микрофлоры, вместе с тем обнаруживаются и у здоровых людей. Так, при исследовании 1500 проб фекалий от детей с кишечными расстройствами (Стерлигова, 1975) микробы рода Hafnia были выделены в 10,9 % проб, Aerobacter — в 4,2 %, Citrobacter — в 3,9 %, Klebsiella — в 0,9 %, Arisona — в 0,9 %, Serratia — в 0,5 % проб против 6,6 % — 1,4 % — 1 %, 1,4 % — 0 — 1 % соответственно у здоровых.

Важно при этом подчеркнуть, что при огромном числе накопленных наблюдений о характере микрофлоры при дисбактериозе не описано замещение нормальной микрофлоры одним каким-либо видом (родом) микробов. Как правило, дисбактериоз характеризуется тоже ассоциацией разных представителей энтеробактерий, но по составу отличной от нормобиоценоза. Более того, состав микрофлоры при дисбактериозе гораздо более пестрый и содержит до 5 и более родов, нехарактерных для нормальной микрофлоры. Широкие ассоциации условно-патогенных микробов часто сочетаются с более выраженной клиникой кишечного заболевания.

При вновь сложившихся ассоциациях имеющая место конкуренция в отношении питательного субстрата создает разные условия размножения, а следовательно, и разную численность популяций различных видов микроорганизмов. Снижение, например, кислотности среды в связи с подавлением молочнокислых бактерий создает благоприятные условия для размножения гнилостных бактерий: снижение числа антагонистов (в основном кишечной палочки, бифидобактерий) благоприятствует развитию кокковой микрофлоры и др.

Весьма важно, что между отдельными компонентами ассоциации при дисбактериозе не складываются, как при нормальном биоценозе, определенные стойкие взаимосвязи в отношении окислительно-восстановительного потенциала, взаимного использования продуктов обмена, витаминообразования, антагонистических взаимоотношений. Отсутствие закрепленных стойких условий взаимодействия внутри возникших ассоциаций подтверждается весьма быстрой сменой их состава. При повторных исследованиях даже через короткие промежутки времени характер микробных ассоциаций изменяется. Это является убедительным подтверждением того, что обнаруженный тот или иной вид (род) условно-патогенных микробов является не этиологическим фактором, а элементом дисбактериоза.

Качественные изменения состава микробного пейзажа в кишечнике при дисбактериозе выражаются в изменении ряда свойств кишечной палочки — основного симбионта аэробной микрофлоры. Одним из характерных признаков является снижение ее антагонистических свойств. Кишечная палочка часто утрачивает и ферментативную активность, подвижность. Гемолизирующие эшерихии, выделенные от лиц с дисбактериозом кишечника, обладают, как правило, токсическими (дермонекротическими) свойствами.

Имеющее место при нормальной микрофлоре расщепление поступающих из верхних отделов кишечника ферментов (энтерокиназы, щелочной фосфатазы), с их последующей реабсорбцией, не осуществляется в условиях дисбактериоза. Подтверждением этого является повышенное выделение с фекалиями этих ферментов, в частности энтерокиназы до 600 ед./г, в то время как у здоровых людей энтерокиназа в фекалиях отсутствует, либо обнаруживается в виде следов (до 20 ед./г).

Дисбактериоз сопровождается нарушением содержания в организме витаминов, особенно группы B — тиамина (витамина В₁), рибофлавина (витамина В₂), пиридоксина (витамина В₆) и инозита, что, как известно, отрицательно влияет на течение физиологических процессов и общую реактивность организма. Недостаток витаминов, в частности группы B, при дисбактериозе является одним из факторов, способствующих исчезновению активных симбионтов, нуждающихся в витаминах этой группы, и, с другой стороны, бесконкурентного роста микробов, не нуждающихся в них для своего развития, например стафилококка, микробов рода Протея, грибов рода Кандида.

Таким образом, при дисбактериозе имеет место не только нарушение нормальных соотношений различных морфологических групп энтеробактерий, но с этим связаны и функциональные отклонения.

Что касается количественных сдвигов в анаэробной микрофлоре, то они еще более выражены, чем в аэробной. Так, например, при дисбактериозе у больных хроническим колитом B. bifidum вовсе не обнаруживаются у подавляющего числа обследованных, в то время как резкое снижение кишечной палочки (менее 1 млн в 1 г испражнений) имеет место лишь в 16 % проб.

Нарушение экологических соотношений в кишечнике в сторону высокого содержания микроорганизмов, которые в норме встречаются только спорадически, в небольших количествах, приводит к нарушению уравновешенной системы, что и является патогенетическим фактором определенного числа регистрируемых кишечных заболеваний. Кроме того, организм лишается физиологического барьера в кишечнике как одного из факторов естественной резистентности.

Дисбактериоз может протекать при отсутствии клинической симптоматики (компенсированная форма), так и вызывать дисфункцию кишечника. В первом случае организм сам уравновешивает возникшие нарушения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры и расстройства пищеварительной функции не происходит. Развитие декомпенсированных форм дисбактериоза в большой мере зависит от снижения реактивности организма, что особенно касается грудных детей, а также ослабленных детей старшего возраста и взрослых лиц.

Дисфункция кишечника на фоне дисбактериоза требует применения для восстановления нормального биоценоза кишечника бактериальных препаратов из микробов-антагонистов — представителей нормальной микрофлоры.

Первый отечественный бактерийный препарат колибактерин представляет собой живую культуру высокоактивного штамма — антагониста E. coli M17. В настоящее время имеются бактерийные монопрепараты другого состава — бифидумбактерин, лактобактерин. Бифидумбактерин представляет живую культуру бифидобактерий (штамм I B. bifidum), составляющих основную микрофлору новорожденных детей и постоянного представителя анаэробной микрофлоры детей старшего возраста и взрослых людей. Лактобактерин представляет живые культуры L.B. fermenti и L.B. Plantarum — представителей молочнокислых бактерий, постоянных обитателей кишечника здоровых детей и взрослых.

Исходя из положения, что при дисбактериозе часто нарушается как аэробная, так и анаэробная микрофлора, разработан комплексный биопрепарат бификол, содержащий в своем составе бактерии E. Coli штамм М17 и штамм B. bifidum I.

Все названные препараты эффективны при лечении кишечных заболеваний на фоне дисбактериоза у взрослых и детей. Эффективность особенно демонстративна при лечении больных хроническими кишечными расстройствами (в том числе хроническим постдизентерийным колитом), которые в течение длительного времени безрезультатно лечились антибиотиками и другими препаратами. Перспективность этих препаратов повышается отсутствием побочного действия.

Содержащиеся в биологических препаратах микробы-антагонисты способствуют угнетению или полному вытеснению из кишечника патогенных и условно-патогенных микробных видов, микробных ассоциаций, не закрепленных в процессе эволюции в кишечнике, а следовательно, не связанных с физиологическими функциями пищеварительного тракта.

Учитывая роль дисбактериоза в поддержании длительной дисфункции кишечника, бактериологические исследования фекалий должны быть направлены в настоящее время не только на обнаружение патогенных энтеробактерий (шигелл, сальмонелл), но и на определение состояния микрофлоры кишечника. Ниже приведена общая схема исследования на обоих направлениях (см. приложение).

Как видно из представленной схемы, 1 г нативных фекалий без консерванта растирают в ступке с 9 мл физиологического раствора (10 -1 ). Из этого разведения делают посев на плотные питательные среды, обычно применяемые для выделения патогенных энтеробактерий (среду Плоскирева, среды Плоскирева или Левина с синтомицином или другим антибиотиком). Одновременно делают массивный посев из нативного кала на жидкие среды обогащения (Мюллера, селенитовую, магниевую).

Из основного разведения 1:10 делают дополнительные 100-кратные разведения в физиологическом растворе до 10 -3 — 10 -5 , затем из пробирки, в которой фекалии разведены до 10 -5 , вносят по 0,1 мл на поверхность среды Эндо, Левина, Сабуро, и 0,01 мл на 3 — 5 % кровяной агар. Посев испражнений для обнаружения патогенных грибов можно также проводить на рисовой, картофельной и других применяемых в лаборатории питательных средах. Для получения роста изолированных, доступных для счета, колоний применяют стеклянные бусы.

Стеклянные круглые бусинки (заранее простерилизованные по 10 — 12 штук в пробирке) опускают в чашку с посевным материалом. При легком покачивании чашки с бусами в течение одной минуты материал равномерно распределяется по питательной среде. Посев бусами начинают со среды, на которой посеяно наибольшее разведение материала, т.е. с кровяного агара, а затем бусы переносят на чашки с другими средами.

Для посева на бифидобактерии делают дополнительно еще 2 — 3 разведения до 10 -7 -10 -9 — 10 -11 . В первую пробирку с 9 — 10 мл среды Блаурокк вносят 1 мл из разведения фекалий 10 -7 , во вторую — 0,1 мл из этого же разведения, в третью и четвертую пробирку вносят соответственно по 1,0 и 0,1 мл из разведения 10 -9 , а в пятую и шестую по 1,0 и 0,1 мл из разведения 10 -11 . Все среды, за исключением среды Сабуро, помещают в термостат при температуре 37°.

Через 20 — 22 часа на среде Эндо подсчитывают число и процент лактозонегативных (бесцветных) колоний по отношению ко всему числу выросших колоний. Колонии со слабовыраженными ферментативными свойствами (слабое разложение лактозы — розовые колонии) подсчитывают по отношению к общему числу колоний кишечной палочки. Например: на среде Эндо выросли 50 лактозонегативных колоний при посеве 0,1 мл фекалий из разведения 1:100000. При расчете следует 50 умножить на 10, а затем на 100000 (степень разведения). Следовательно, в 1 г фекалий будет 50000000 лактозонегативных энтеробактерий.

С чашек со средами Эндо, Левина, Плоскирева выделяют не менее 4 — 5 колоний, отличающихся по морфологии, окраске на среды Рессела с мочевиной и солью Мора или на среду Олькеницкого, а также в пробирку с бульоном, под пробку которой подвешена индикаторная бумажка для определения индола. В дальнейшем лактозонегативные культуры изучают прежде всего в отношении принадлежности к патогенным энтеробактериям по действующей инструкции МЗ СССР, 1967 г.

Родовой состав лактозоотрицательных энтеробактерий, не относящихся к патогенным микробам семейства кишечных, может быть определен с помощью тестов, рекомендованных Всесоюзным центром по эшерихиям (1973). Вместе с тем, для выявления дисбактериоза можно не детализировать родовой состав лактозонегативных бактерий, а ограничиться определением на среде Эндо общей суммы лактозонегативных колоний.

Рост микробов рода Протея характеризуется разложением мочевины и окрашиванием среды Рессела в фиолетово-коричневый цвет при индикаторе тимоловый синий + кислый фуксин или оранжевый при индикаторе ВР, на среде Олькеницкого — в оранжевый цвет.

На 3 — 5 % кровяном агаре учитывают процентные соотношения колоний кишечной палочки, обладающих и не обладающих гемолизирующими свойствами; соотношения колоний кишечной палочки и кокковых форм; соотношения гемолизирующих и негемолизирующих кокков. Количество в 1 г фекалий указанных групп микробов учитывают, как это было указано, на среде Эндо (стр. 13).

С 5 % кровяного агара пересевают колонии разного вида на скошенную поверхность слабощелочного агара. После 20 — 22-часовой инкубации в термостате при 37°. проводят микроскопию окрашенных по Граму мазков. Культуры стафилококка проверяют в реакции плазмокоагуляции и в отношении лецитиназной активности на желточно-солевом агаре.

Для определения плазмокоагуляции петлю агаровой культуры стафилококка вносят в пробирку с 1 — 2 мл стерильной кроличьей или человеческой плазмы разведенной, 1:5*. Посевы помещают в термостат и проверяют результат через 30 минут, 2 — 4 и 24 часа. В качестве контроля ставят пробирки с плазмой без добавления культуры и с плазмой, в которую посеян заведомо коагулирующий стафилококк. При свертывании плазма полностью уплотняется или в пробирке плавает сгусток.

* Можно пользоваться сухой плазмой, выпускаемой Минским институтом эпидемиологии и микробиологии.

Для определения лецитиназной активности делают посев секторами на чашку с желточно-солевым агаром (на одну чашку можно посеять 4 — 8 культур). Посев инкубируют 24 — 48 часов при 37°, после чего учитывают результат.

Лецитиназоположительной считают культуру, вокруг которой образуется радужный венчик.

Для дифференциации энтерококка от прочих диплококков и диплострептококков применяют следующие тесты: способность расти и редуцировать метиленовую синьку в молоке, как наиболее надежный тест, рост в бульоне с 40 % желчи, расщепление маннита, терморезистентность (выживание при прогревании при 60° — 30 минут).

С целью обнаружения патогенных грибов посевы на среде Сабуро инкубируют в течение 3 — 5 дней при 28 — 30°, выделяют плотные непрозрачные колонии в пробирки со скошенной поверхностью этой же среды. Посевы снова выдерживают в термостате при той же температуре 3 — 4 суток, после чего проводят микроскопию препарата из живой культуры в капле стерильной водопроводной воды при помощи объектива 40, окуляра 10. К патогенным грибам относят культуры почкующихся клеток при наличии длинных нитей мицелия (псевдомицелий) или более коротких нитей (истинный мицелий).

Для определения анаэробных бифидобактерий посевы на среде Блаурокк выращивают при 37° в течение 48 часов. Из посевов, в которых виден рост в виде помутнения всей среды, в виде отдельных колоний или тяжей, готовят окрашенные по Граму мазки. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах, расположенных в виде римской цифры V, с несколько утолщенными концами или в виде скоплений, напоминающих китайские иероглифы, подтверждает их принадлежность к бифидобактериям. При отсутствии роста через 48 часов посевы оставляют в термостате до 72 часов.

Выделение чистой культуры B. bifidum является весьма трудоемким и практически необязательным, так как определение разведения, в котором обнаруживают B. bifidum, является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного их содержания в фекалиях.

Исследования указанных представителей кишечной микрофлоры не исчерпывает весь биоценоз кишечника, тем не менее позволяет выявить нормальное или нарушенное состояние кишечной микрофлоры.

Для количественного определения содержания кишечной палочки штамма М17 у лиц, получавших колибактерин или бификол, проводят дополнительный посев 0,1 мл из разведения 10 -5 (см. схему) на чашку со средой Эндо, в которой 1 % лактозы заменен 1 % сахарозы**. После 20 — 22-часовой инкубации при 37° на указанной среде определяют процентное соотношение колоний, расщепляющих сахарозу (кишечная палочка М17 сахарозоположительная), к общему числу выросших колоний кишечной палочки. Для окончательного суждения о принадлежности выросших колоний к кишечной палочке штамма М17 необходимо испытать не менее 8 — 10 сахарозоположительных колоний в реакции агглютинации на стекле с сывороткой против кишечной палочки М17***, разведенной в 10 раз. Этот тест является показателем как степени заселения кишечника штаммом М17 при приеме препарата, так и длительности приживления этого штамма после прекращения лечения колибактерином или бификолом.

** Рецепт среды — см. приложение.

*** Сыворотку можно заказать в Московском институте эпидемиологии и микробиологии Минздрава РСФСР.

В процессе лечения кишечная палочка штамма М17 составляет обычно 30 — 50 % по отношению к облигатным кишечным палочкам фекалий. О положительном влиянии примененного препарата на содержание бифидофлоры можно судить по количественному нарастанию таковой в кишечнике.

Существенные сдвиги микрофлоры в направлении нормализации регистрируются через 12 — 15 дней после приема бактерийных препаратов; в отдельных случаях для стойкого восстановления нормального биоценоза необходим более длительный срок — до 2 — 3 месяцев.

Правильная трактовка результата бактериологического исследования имеет исключительно большое значение для эпидемиолога, а также клициниста при решении вопроса о природе кишечного заболевания и соответственно методах лечения, а именно: либо этиотропного характера, либо направленных на нормализацию кишечной микрофлоры.

При выдаче результата исследования необходимо указать наличие или отсутствие в посеве фекалий патогенных энтеробактерий (шигелл, сальмонелл), а также дать описание состава кишечной микрофлоры.

Показателем дисбактериоза являются отклонения от нормальной микрофлоры человека, описанной выше. Дисбактериоз может выражаться высоким удельным весом кишечной палочки со слабовыраженными ферментативными свойствами (> 10 %), лактозонегативных энтеробактерий (> 5 %), наличием гемолизирующих эширихий, микробов рода Протея, грибов рода Кандида, большим процентным содержанием стафилококка. В подавляющем большинстве случаев при дисбактериозе имеет место как ассоциация ряда условно-патогенных микробов, нехарактерных для нормального биоценоза, так и одновременно качественные изменения эшерихий (гемолиз, снижение ферментативной активности, потеря подвижности).

Весьма показательными для нарушенного биоценоза кишечника являются также количественные сдвиги облигатной микрофлоры — отсутствие роста бифидобактерий в минимальном разведении фекалий (10 -7 ) и резкое снижение числа кишечной палочки (менее 1 млн/г).

В процессе лечения любым из названных бактерийных препаратов восстанавливается облигатная как аэробная, так и анаэробная микрофлора, а ассоциации микроорганизмов, характерные для дисбактериоза, исчезают. К концу 2 недели лечения число бифидобактерий достигает высоких цифр (10 -11 ). К этому сроку имеет место нарастание в посевах лактозопозитивных колоний кишечной палочки полноценной в ферментативном отношении, активно подвижной.

С другой стороны, резко снижается в первые две недели лечения число лиц, у которых выделяется кишечная палочка с гемолизирующими свойствами, слабыми ферментативными свойствами, лактозонегативные эшерихии, микробы рода Протея, грибы рода Кандида. Наибольшая стойкость выделения в эти сроки сохраняется у стафилококка как негемолизирующего, так особенно гемолизирующего.

Весьма характерным признаком для суждения о положительном влиянии бактерийного препарата на микрофлору кишечника — это менее пестрый состав ее, отсутствие широких ассоциаций многих родов и видов микробов, отмеченных до лечения.

Образец выдачи результата бактериологического исследования кишечной микрофлоры.

источник