Количественный или качественный анализ на инфекции

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови. При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя. Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

• отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
• положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

• если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
• нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
• за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии. Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С). При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР. Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С). Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР). После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые. Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

источник

Мы сократили затраты на рекламу и содержание точек забора биоматериала. Поэтому цена на анализы для вас в 2 раза ниже. Мы сделали это, чтобы вы сдавали анализы легко и управляли своим здоровьем

Анализ будет готов в течение 3 дней, исключая субботу и воскресенье (кроме дня взятия биоматериала). Вы получите результаты на эл. почту сразу по готовности.

Срок исполнения: 2 дня, исключая субботу и воскресенье (кроме дня взятия биоматериала)

Забор мазков на исследование осуществляется в кабинете гинеколога у женщин и уролога или венеролога у мужчин.

Забор у женщин не проводится во время менструации (на фоне кровянистых выделений) и не рекомендуется за 5 дней до начала предполагаемой менструации.

Если вы беременны, перед сдачей мазков обязательно предупредите медицинский центр по телефону заранее.

Общие правила подготовки:

• 72 часа не вступайте в половой контакт,
• для женщин 48 часов не проводите кольпоскопию и трансвагинальное УЗИ, не используйте местные хлорсодержащие и антибактериальные препараты.

Обсудите с врачом прием антибактериальных препаратов и препаратов, содержащих микроорганизмы. Рекомендуется проводить забор мазков не ранее, чем через 2 недели после законченного курса лечения. Прием этих препаратов может приводить к ложноотрицательным и ложноположительным результатам.

Результат анализа значительно зависит от подготовки. Пожалуйста соблюдайте ее точно.

В день сдачи

• В день сдачи мазка не проводите гигиенические процедуры половых органов (для женщин также спринцевание влагалища, не используйте тампоны и влажные салфетки).
• В течение 2-х часов до анализа воздержитесь от посещения туалета (при заборе мазка из уретры).

Процедура у мужчин.
Для взятия мазка мужчина стоит, медработник убирает слизь и вводит в уретру одноразовый зонд на глубину около 4 см, осторожно вращает инструмент и извлекает из уретры.

Процедура у женщин.
Для взятия мазка женщина садится в гинекологическое кресло, медработник осматривает половые пути, вводит во влагалище зеркало — стерильный инструмент, убирает слизь.

Далее зондом берёт материал из наиболее поражённой области. Это может быть: задний свод влагалища, шейка матки, уретра.

Для выявления инфекций, передающиеся половым путем (ИППП) мы используем самый точный метод — ПЦР (PCR Real time).

Комплекс анализов ИППП-12 количественная оценка не только позволяет определить наличие или отсутствие ДНК возбудителей инфекций, но и определить количество патогенных клеток в биоматериале, что дает возможность установить стадию течения болезни, назначить более точное лечение и следить за процессом выздоровления.

В результате вы получите количество ДНК следующих возбудителей: Цитомегаловирус (CMV/ЦМВ), Вирус простого герпеса (HSV/ВПГ) тип 1,2, Вирусы папилломы человека (ВПЧ, HPV) тип 16 и 18, Chlamydia trachomatis (хламидия), Mycoplasma genitalium и Mycoplasma hominis, Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Trichomonas vaginalis (трихомонада) Candida albicans, (возбудитель молочницы (кандидоза), Ureaplasma spp.

В этот комплекс не входят анализы на ВИЧ, сифилис и гепатиты, ввиду того, что они выполняются другим методом и выявляются в крови. Эти анализы входят в комплекс Группа риска.

Материал для исследования — Урогенитальный соскоб

Сегодня ДНК-анализы активно используются с целью диагностирования инфекций и могут выявить даже единичных возбудителей. Самый известный способ исследования ДНК — полимеразная цепная реакция. Также в лабораторной диагностике активно используется новый метод — ПЦР в реальном времени (PCR Real Time). Этот метод заключается в наблюдении и численной оценке накапливания результатов полимеразной цепной реакции.

Использование этого метода позволяет более точно оценить количественные показатели инфекций, крайне редко дает ложноположительные результаты и сокращает время до получения результата.

Данный комплекс включает в себя определение ДНК 12 возбудителей ИППП методом ПЦР: цитомегаловирус (возбудитель цитомегаловирусной инфекции); вирус простого герпеса тип 1,2 (возбудитель генитального герпеса); вирус папилломы человека тип 16, вирус папилломы человека тип 18 (возбудители папилломовирусной инфекции); Chlamydia trachomatis (возбудитель урогенитального хламидиоза); Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium (возбудители урогенитального микоплазмоза); Ureaplasma spp. (возбудитель урогенитального уреаплазмоза); Neisseria gonorrhoeae (возбудитель гонореи); Gardnerella vaginalis (возбудитель гарднереллёза); Trichomonas vaginalis (возбудитель трихомониаза); Candida albicans (возбудитель урогенитального кандидоза).

Интерпретация результатов исследования «ИППП-12 количественная оценка (комплекс анализов методом ПЦР на 12 половых инфекций)»

Интерпретация результатов анализов носит информационный характер, не является диагнозом и не заменяет консультации врача. Референсные значения могут отличаться от указанных в зависимости от используемого оборудования, актуальные значения будут указаны на бланке результатов.

Единицей измерения служит содержание геномных эквивалентов (Lg) возбудителя на 100 000 клеток эпителия человека. Аналогично единице измерения «копий/10*5 эпит. клеток».

Положительный результат: в анализируемом образце обнаружена ДНК того или иного возбудителя из данного комплекса: инфицирование одним или несколькими возбудителями.

Отрицательный результат: в анализируемом образце не обнаружена ДНК данных возбудителей: нет инфицирования. Отрицательный результат исследования может быть также и при нарушении правил взятия материала, когда в образце не содержится ДНК возбудителя в достаточном для проведения исследования количестве.

Lab4U — медицинская онлайн-лаборатория, цель которой сделать анализы удобными и доступными, чтобы Вы могли заботиться о своем здоровье. Для этого мы исключили все затраты на кассиров, администраторов, аренду и прочее, направив деньги на использование современного оборудования и реактивов от лучших мировых производителей. В лаборатории внедрена система TrakCare LAB, которая автоматизирует лабораторные исследования и сводит к минимуму влияние человеческого фактора

• Вам удобно выбрать назначенные анализы из каталога, либо в строке сквозного поиска, у Вас всегда под рукой точное и понятное описание подготовки к анализу и интерпретация результатов
• Lab4U моментально формирует для Вас список подходящих медцентров, остается выбрать день и время, рядом с домом, офисом, детским садом или по пути
• Вы можете заказать анализы для любого члена семьи в несколько кликов, один раз внеся их в свой личный кабинет, быстро и удобно получив результат на почту
• Анализы выгоднее средней рыночной цены до 50%, так Вы можете направить сэкономленный бюджет на дополнительные регулярные исследования или другие важные траты
• Lab4U всегда онлайн работает с каждым клиентом 7 дней в неделю, это значит что каждый Ваш вопрос и обращение видят руководители, именно за счет этого Lab4U постоянно улучшает сервис
• В личном кабинете удобно хранится архив ранее полученных результатов, вы легко сравните динамику
• Для продвинутых пользователей мы сделали и постоянно совершенствуем мобильное приложение

Мы работаем с 2012 года в 24 городах России и выполнили уже более 400 000 анализов (данные на август 2017 года)

Команда Lab4U делает все, чтобы малоприятная процедура стала простой, удобной, доступной и понятной. Сделайте Lab4U своей постоянной лабораторией

Добавьте к заказу анализы

Выберите дату и время сдачи

Оформите и оплатите заказ

Сдайте анализы без очереди

Получите результаты по эл. почте

• Москва
• Санкт-Петербург
• Нижний Новгород
• Астрахань
• Белгород
• Владимир
• Волгоград
• Воронеж
• Иваново
• Йошкар-Ола
• Казань
• Калуга
• Кострома
• Краснодар
• Курск
• Орел
• Пенза
• Пермь
• Ростов-на-Дону
• Рязань
• Самара
• Саратов
• Тверь
• Тула
• Уфа
• Ярославль

Годовой абонемент входит в состав первого заказа и дает возможность год Вам и членам Вашей семьи сдавать анализы в два раза дешевле. Результаты всех анализов бессрочно будут храниться в личном кабинете. Подробнее

источник

ПЦР – важнейший метод диагностики инфекционных заболеваний.

Сегодня большинство лабораторий делают анализы на ИППП и другие инфекционные патологии при помощи реакции амплификации нуклеиновых кислот. Она очень точная, позволяет диагностировать болезнь даже на начальных стадиях.

Для диагностики туберкулеза все чаще применяют именно ПЦР. Ранее болезнь можно было выявить только с помощью микроскопии или посева мокроты. Используется также ИФА для определения антител в крови. Но все эти способы менее чувствительны. Они помогают подтвердить диагноз только при наличии большого количества бактерий.

ПЦР обнаруживает туберкулез даже в доклинической стадии. В том числе в случаях, когда культуральное исследование дает ложноотрицательные результаты. Исследовать можно любой клинический материал. Это может быть мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, смывы бронхов, менструальная кровь и т.д., в зависимости от предполагаемой локализации инфекции.

Анализ на гепатит Ц, если он качественный, может быть положительным или отрицательным. В ходе исследования обнаруживается РНК вируса. Это один из основных маркеров гепатита.

В ходе диагностики могут быть использованы тест-системы с разной чувствительностью. Тесты бывают малочувствительные и высокочувствительные.

Первые обходятся значительно дешевле. В этом их основное преимущество. Но в то же время они выявляют вирус лишь в концентрации от 50 МЕ/мл и более. То есть, не исключены ложноотрицательные результаты.

По рекомендации ВОЗ, диагноз гепатит С может быть установлен, если три раза проведенное исследование ПЦР обнаружило РНК вируса. Это один из наиболее ранних методов диагностики.

ПЦР становится положительной, даже когда антитела ещё не появляются. РНК в крови может быть обнаружена уже через 1-2 недели после заражения.

Существуют также высокочувствительные тесты. Таковыми считаются те, что определяют РНК при концентрации 25 МЕ/мл или меньше. Такие диагностические тесты обходятся дороже низкочувствительных в несколько раз. Но иногда необходимость в их проведении все же возникает.

Основные случаи, когда высокочувствительный тест ПЦР необходим:

• Антитела положительные, но РНК в крови не обнаруживается.

Наличие одних только антител не дает оснований установить диагноз. Потому что антитела могут говорить и о перенесенной в прошлом инфекции. Требуется подтверждения путем выявления РНК. И если концентрация её низкая, обычный тест ПЦР может дать отрицательный результат. В таком случае проводят высокочувствительный тест. Он позволяет с высокой достоверностью либо подтвердить, либо исключить диагноз.

• Наличие признаков поражения печени.

Если анализ на антитела отрицательный, а признаки поражения печени присутствуют, врач может назначить высокочувствительный тест ПЦР на гепатит С. Потому что отрицательные антитела не говорят о том, что болезни нет. Вполне вероятно, что инфицирование состоялось недавно, и АТ ещё не успели синтезироваться. Кроме того, их может не быть при иммунодефиците человека или в случае лечения иммунодепрессантами.

• Оценка эффективности терапии.

Согласно европейских рекомендаций 2015 года, для оценки вирусологического ответа на терапию должны использоваться только высокочувствительные тесты ПЦР. Данный метод диагностики используется также для выявления гепатита В. В ходе диагностики определяется фрагмент ДНК. Это самый ранний тест, позволяющий обнаружить вирус ещё на начальном этапе болезни.

• для уточнения результатов при отрицательном исследовании на HBsAg;
• в качестве скринингового теста;
• для обследования лиц, контактирующих с больным гепатитом В;
• с целью контроля лечения;
• для обнаружения обострения хронического гепатита В.

Доктор может назначить этот анализ при наличии желтухи или цирроза печени, а также в случае лабораторных признаков поражения печени. Расшифровка результатов проводится врачом.

В некоторых случаях проводится количественный анализ ПЦР на гепатит С. По итогам исследования доктор получает числовое значение. Оно определяет вирусную нагрузку. Расшифровать анализ не трудно. Возможные такие результаты:

• вирус не обнаружен;
• вирус обнаружен, его концентрация составляет менее 100 МЕ/мл;
• вирус обнаружен, концентрация указывается в числовом выражении от 100 до 100 миллионов МЕ/мл;
• вирус выявлен в количестве более 100 миллионов МЕ/мл.

Назначается такое исследование в основном перед началом лечения для определения оптимальной терапевтической тактики. Кроме того, в процессе терапии оценка вирусологической нагрузки позволяет оценить эффективность применения медикаментозных средств.

На гепатит Б тоже проводится количественный тест ПЦР. Показания – аналогичные.

Метод выявления генотипа вирусов с помощью реакции амплификации нуклеиновых кислот используется также при многих других патологиях. Например, при папилломавирусной инфекции.

Сам факт наличия ВПЧ в организме установить нетрудно. Для этого достаточно осмотра – на коже и слизистых появляются бородавки или кондиломы. Но разные вирусы несут разную степень опасности. Некоторые из них всего лишь доставляют психологический дискомфорт, провоцируя появления бородавок. В то же время другие грозят злокачественными онкологическими новообразованиями. Чтобы понять, чего можно ждать от вируса, проводится ПЦР на онкогенные типы. В основном это типы 16, 18, а также 31 и 33.

Есть и более углубленные исследования. Они предполагают дополнительное определение других типов ВПЧ высокого онкогенного риска.

При обнаружении опасных вирусов избавиться от них все равно невозможно. Потому что не существует пока что препаратов, уничтожающих ВПЧ полностью. Но пациента с угрозой появления злокачественных новообразований берут под контроль. Он регулярно наблюдается у доктора.

В большинстве случаев рак не появляется на пустом месте. Особенно если речь идет о раке шейки матки – самом частом онкологическом процессе, который запускают вирусы папилломы. Ему предшествуют диспластические изменения. Их можно своевременно выявить и вылечить. Поэтому в случае обнаружения у женщины высокоонкогенных ВПЧ, она должна регулярно сдавать мазки на онкоцитологию и проходить гинекологические осмотры.

Качественный метод ПЦР имеет значительное отличие от количественного. Оно состоит в том, что результат выдается обнаружено или не обнаружено. Тогда как количественный дает числовое значение. Он необходим в ряде случаев. Например, чтобы оценить, прогрессирует ли болезнь (увеличилась ли вирусная нагрузка).

С помощью количественного исследования можно проверить, эффективно ли проходит терапия (уменьшилась ли вирусная нагрузка). Определяются показания к лечению заболевания. Например, при низкой концентрации патогена может применяться тактика наблюдения, а при увеличении популяции назначается лечение.

Существует большое количество видов полимеразной цепной реакции. Рассмотрим некоторые из них, которые активно используются в медицине.

Real Time PCR

Одной из разновидностью ПЦР является Real Time PCR. RT PCR предполагает определение ДНК возбудителя в режиме реального времени и оценку количества копий специфических фрагментов нуклеиновых кислот. Для этого могут использоваться различные методы. В основном применяется один из двух способов:

• ДНК-зонды;
• флюоресцентные красители.

Метод очень похож на обычную ПЦР. Здесь есть все те же самые этапы. Вначале проводится денатурация ДНК. Затем – отжиг праймеров. При RT PCR детекция продукта производится по мере его накопления. Методика широко используется в различных областях медицины и науки. В первую очередь это диагностика заболеваний. С помощью ПЦР в реальном времени можно оценить вирусную или бактериальную нагрузку. Оценивается эффективность лечения – врач смотрит, уменьшилось ли количество ДНК возбудителей в организме человека. Метод применяется и в онкологии. С его помощью можно провести детекцию атипичных клеток в солидной опухоли. А также определяются циркулирующие опухолевые клетки.

Real Time PCR применяется в микробиологии. Метод используется для оценки количественных показателей нормальной микрофлоры человека, например, в кишечнике или во влагалище.

RAPD – это не отдельный анализ. Это ПЦР-маркер. Он считается наиболее распространенным.

В ходе анализа используется единичный короткий праймер. Обычно он имеет 10 членов.

Нуклеотидная последовательность – произвольная. Иногда в RAPD используется сразу несколько праймеров.

PCR RFLP – способ определения ДНК путем её разрезания. Для этого используются ферменты эндонуклеазы рестрикции. В последующем фрагменты анализируются путем электрофореза. Метод используется для определения генов, отвечающих за различные заболевания, склонность к которым передается по наследству. А также для определения генетического родства двух людей.

ПЦР с обратной транскрипцией

Существует множество других видов ПЦР.

Реакция с обратной транскрипцией предполагает превращение РНК в одноцепочечную ДНК с помощью обратной транскриптазы. Затем проводится обычная ПЦР для анализа последовательности нуклеотидов.

Метод позволяет обнаружить РНК даже в минимальном количестве. Он применяется в диагностике ВИЧ и некоторых генетических заболеваний. Другие виды ПЦР:

• вложенная – особенностью является применение двух пар праймеров;
• инвертированная – предполагает несколько разрезаний и сшиваний ДНК, в результате чего известные фрагменты оказываются на двух концах неизвестного;
• асимметричная – предполагает использование избытка одного праймера;
• ступенчатая – проводится при температуре выше оптимальной, которая постепенно уменьшается до оптимума;
• виртуальная – проводится с помощью компьютерного анализа, который предсказывает потенциальную амплификацию ДНК.

ПЦР на герпес 6 типа

Анализ может использоваться для выявления любых вирусов. В том числе семейства герпеса.

Могут быть определены возбудители 1 и 2 типа. ВПГ 1 и 2 типа могут вызывать лабиальный или генитальный герпес. Первый чаще вызывает поражение губ. Второй – обычно вызывает воспалительные процессы мочеполовой системы.

Выявляются также:

• третий тип – ветряная оспа;
• четвертый – вирус Эпштейна-Барр;
• пятый – цитомегаловирус;
• шестой – розеоловирус;
• седьмой – провоцирующий саркому Капоши.

В нашей клинике можно обследоваться на любые инфекции методом ПЦР. Результаты анализов можно получить быстро, и при необходимости – анонимно.

источник

ДНК ПЦР анализы направлены на выявление патогенных микроорганизмов. Они бывают количественные и качественные.

Если при ПЦР ДНК обнаружена или не выявлена, это качественный тест.

Если указывается ещё и концентрация, это количественная ПЦР. Данный анализ более информативен. Хотя требуется он далеко не всегда.

• Когда необходим количественный ПЦР анализ
• ПЦР на микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллу, кандиду
• Мазок ПЦР количественный на хламидии
• Количественный ПЦР анализ ВПЧ 21 тип
• Количественное определение РНК ВИЧ и необходимость для лечения
• Оценка результативности лечения с помощью ПЦР анализа крови к гепатитам
• Интерпретация количественной ПЦР мазков и крови
• Подготовка к количественному анализу ПЦР мазков и крови
• К какому врачу обратиться для ПЦР анализа

При ПЦР количественное определение требуется во многих случаях. Она дает дополнительные возможности, если сравнивать с качественным анализом.

Если после проведения ПЦР ДНК обнаружено, знать количество микроорганизмов необходимо, чтобы понять:

• требуется ли пациенту лечение (при низких количественных показателях оно может не назначаться);
• насколько быстро идет выздоровление (есть ли вирусологический ответ от лечения);
• стоит ли продолжать терапию этими же препаратами или нужно менять схему;
• болезнь находится под контролем или возникает рецидив, требующий дополнительных терапевтических мероприятий;
• насколько высоким является риск осложнений (например, вероятность диспластических изменений в шейке матки при папилломавирусной инфекции).

Поговорим подробнее, при каких патологиях могут потребоваться количественные ДНК ПЦР анализы.

Существуют микроорганизмы, которые не всегда вызывают патологический процесс в структурах урогенитального тракта. Они могут вызывать воспалительные или другие симптомы только в том случае, когда популяция бактерий значительно увеличится.

Чтобы узнать, увеличилась она или нет, требуются соответствующие анализы. Многие лаборатории предлагают комплексный количественный анализ ПЦР сразу на несколько возбудителей.

Микоплазмы двух видов могут вызывать воспалительные процессы во влагалище. Это микоплазма гениталиум и хоминис. Причем, гениталиум может вызывать воспаление даже в минимальных концентрациях. Этот микроорганизм рассматривается как однозначно патогенный. При его выявлении даже в малых количествах проводится лечение. Целью его считается эрадикация возбудителя. Критерием успешности терапии является отрицательный анализ ПЦР на микоплазму гениталиум.

А вот хоминис – менее опасный вид данных микроорганизмов. Он может обнаруживаться в урогенитальном тракте многих людей. В том числе тех, кто не имеет признаков воспалительного процесса в урогенитальном тракте. В этом случае пороговой считается концентрация бактерий в клиническом материале от 10 4 копий ДНК в мл.

Если ПЦР покажет, что бактерий меньше, лечение может и не назначаться. Но если количество патогенов превышает указанное значение, требуется антибактериальная терапия.

Потому что в больших количествах микоплазмы:

• вызывают воспаление;
• могут провоцировать осложнения;
• передаются при половом акте;
• опасны для беременных.

Гарднереллы – вид транзитных микроорганизмов, которые часто выявляются в урогенитальном тракте женщин. Они не вызывают воспаления. Но в больших количествах провоцируют дисбактериоз. Это заболевание, основным проявлением которого является обильное отделяемое из влагалища с неприятным запахом.

Патология нарушает качество половой жизни. Гарднереллы в больших количествах способны быстро уничтожать лактобактерий. Они вытесняют их. В итоге может оказаться так, что лактобактерии вообще не обнаруживаются во влагалище. Этого не должно случиться, потому что молочнокислые бактерии защищают организм женщины от других микробов. Они делают это за счет продукции молочной кислоты.

Кислая рН влагалища не дает условно-патогенным бактериям чрезмерно развиваться.

Количественная ПЦР ДНК диагностика на гарднереллы показывает, сколько этих микроорганизмов содержится во влагалище. Если их больше 10 4 копий ДНК в мл, требуется антибактериальное лечение. Оно позволяет предотвратить дисбактериоз влагалища или устранить его основные проявления, если они уже присутствуют.

Кандиды – ещё одна группа микроорганизмов, для которых имеет значение количество. Это грибы, которые в норме присутствуют в урогенитальном тракте большинства людей.

Кандидоз является оппортунистической инфекцией. Он развивается, когда в организме ослаблен иммунитет. В этом случае количество кандид резко увеличивается. Появляются красные пятна, белые выделения и другие симптомы, иногда достаточно сильно выраженные.

Само по себе обнаружение кандиды с помощью ПЦР не дает врачу никакой ценной информации. Всем и так понятно, что эти грибы в структурах урогенитального тракта есть. Поэтому качественная ПЦР на кандидоз не проводится.

Клиническое значение имеет только количественный метод ПЦР. При определении кандид в количестве, превышающем пороговое значение, устанавливается диагноз кандидоз. Назначается соответствующее лечение.

Показанием для назначения количественного ПЦР на кандиды является в основном наличие симптомов кандидоза. Анализ также может быть использован в случае обнаружения псевдомицелия при микроскопии мазка из урогенитального тракта. ПЦР позволяет установить вид гриба.

Ведь кандидоз может быть вызван десятками видов микроорганизмов. Чаще всего это кандида альбиканс. Но есть ещё 5-6 видов грибов, которые провоцируют кандидоз достаточно часто. Причем, их наличие усложняет процесс лечения.

Часто такие кандидозы рецидивируют. Они плохо реагируют на традиционно используемые при кандидозе противогрибковые препараты.

Количественная ПЦР на кандидоз используется и после лечения. Она помогает врачу понять, была ли проведенная терапия успешной, и оценить риск рецидива грибкового заболевания в будущем.

Количественная ПЦР на уреаплазмоз тоже проводится достаточно часто. Уреаплазмы рассматриваются как условно-патогенная флора. То есть, они опасны только в больших количествах.

ПЦР количественная на уреаплазмы позволяет решить вопрос о необходимости лечения.

У многих врачей-венерологов целесообразность использования количественной ПЦР на уреаплазмы вызывает вопросы. Этот микроорганизм обладает очень высокой адгезивной способностью. Он крепко прилипает к клеткам, поэтому в клиническом материале может быть гораздо меньше бактерий, чем есть в организме.

Соответственно, количественные показатели могут быть заниженными. Кроме того, они значительно варьируют от анализа к анализу.

Хотя в настоящее время считается, что лечение стоит начинать только при концентрации бактерий от 10 4 копий ДНК в мл, нередко врачи назначают лечение и при меньшем их количестве. Особенно если женщина готовится к беременности.

Есть немало исследований, которые подтверждают: уреаплазма очень опасна для плода. Она вызывает инфицирование околоплодных оболочек.

Уреаплазма способна спровоцировать преждевременные роды. Она вызывает респираторные инфекции у новорожденного плода. Поэтому даже если качественная ПЦР показывает небольшие количества уреаплазм, желательно пролечиться тем женщинам, которые готовятся к беременности.

Не требуется лечение при сочетании таких факторов:

• концентрация уреаплазм ниже пороговой;
• нет симптомов воспаления;
• супружеская пара не планирует беременность.

Тогда лечиться не обязательно. Но такие случаи встречаются редко. Потому что пациенты редко приходят на диагностику венерических заболеваний с профилактической целью. В основном они обращаются после возникновения воспалительных симптомов.

На хламидии чаще проводят тест качественный, а не количественный.

Потому что этот микроорганизм является патогенным.

Одного только факта его обнаружения достаточно, чтобы начать лечение.

Причем, количество копий ДНК не играет существенной роли в определении схемы терапии и дозировок препаратов.

Тем не менее, количественные тесты иногда проводят.

Они дают врачу возможность оценить прогноз заболевания.

Понять, насколько высока вероятность осложнений.

А также спрогнозировать ответ на лечение.

При большой концентрации хламидий в урогенитальном тракте доктор может увеличить курс терапии.

Оценивая данный показатель в динамике, он может понять, работают ли те антибактериальные препараты, которые он назначил.

Такие исследования могут использоваться в диагностике папилломавирусной инфекции.

Почему нужны именно количественные анализы, а не качественные? Они более информативны в плане оценки прогноза заболевания, целесообразности противовирусного лечения и оценки его результативности.

Для первичной диагностики обычно проводят качественную ПЦР. Она помогает установить, какие типы ВПЧ присутствуют в организме. Это могут быть высокоонкогенные, среднеонкогенные или низкоонкогенные типы.

Особую настороженность вызывают вирусы высокой онкогенности. Поэтому не лишним будет знать, в каком количестве они содержатся в урогенитальном тракте.

Особенно важен данный анализ для женщин. Ведь у них ВПЧ является основной причиной рака шейки матки.

В свою очередь карцинома шейки матки – самое частое злокачественное онкологическое заболевание среди молодых женщин.

Проведение количественной ПЦР позволяет установить, прогрессирует или регрессирует патологический процесс. Если количество вирусов увеличивается, это говорит о высоком риске дисплазии шейки матки. А она в дальнейшем переходит в рак.

При длительно сохраняющиеся высокой вирусной нагрузке показано лечение с помощью иммуномодуляторов и противовирусных препаратов общего действия. В процессе лечения проводятся повторные исследования ПЦР.

Врач смотрит, стало вирусов в организме больше или меньше. Если их стало меньше, это хороший прогностический признак. Если же вирусов стало больше, то по результатам количественной ПЦР схему терапии стоит пересмотреть.

Количественная ПЦР имеет важнейшее значение в диагностике и терапии ВИЧ.

В основном первичная диагностика заболевания проводится путем определения уровня антител в крови. Это метод намного дешевле, а результаты можно получить быстрее.

Но в некоторых случаях без ПЦР не обойтись. Метод позволяет обнаружить ДНК провируса или РНК вируса в крови.

В основном используют количественную ПЦР для выявления РНК. Это самый ранний маркер ВИЧ. Анализ крови позволит диагностировать болезнь уже через несколько недель после заражения. А количественная оценка методом ПЦР имеет огромное значение в определении схемы терапии.

С помощью анализа оценивают эффективность лечения. Если вирусная нагрузка снижается до неопределяемой, это говорит о том, что терапия проходит успешно.

Антиретровирусные препараты работают. Но если она начинает возрастать, это свидетельствует о формировании резистентности к препаратам. Подобное нередко происходит через несколько лет после начала лечения.

В таком случае схему лечения приходится менять. Иначе количество иммунных клеток в крови начнет снижаться. Вследствие ухудшения иммунитета начнут присоединяться инфекции и возникать злокачественные новообразования.

Используется также выявление ДНК ВИЧ при помощи ПЦР. Метод более предпочтителен для обследования новорожденных детей. Потому что количество РНК в крови может уменьшаться, если мать получала антиретровирусную терапию. В результате в первые дни жизни ПЦР количественная на РНК вируса может быть ложноотрицательной.

Количественный анализ ПЦР используется при гепатите C для определения уровня виремии.

Метод дает возможность подобрать оптимальную схему терапии. А также он дает возможность оценить, насколько эффективной является проводимая терапия.

Благодаря ПЦР вирус гепатита С определяется уже через 1 неделю с момента заражения. В дальнейшем метод применяется, чтобы понять, было ли специфическое лечение эффективным.

Результаты оцениваются по ряду критериев:

• вирусологический;
• биохимический;
• морфологический.

Вирусологический контроль проводится при помощи ПЦР. Если РНК вируса гепатита С не выявляется, то терапия прошла успешно.

Если результаты остаются отрицательными в течение 6 месяцев, такой вирусологический ответ считается устойчивым.

Появление РНК вируса на фоне прекращения лечения говорит о рецидиве заболевания. В процессе проведения терапии с помощью количественного ПЦР оценивают динамику изменения концентрации вируса.

Оптимальным результатом считается исчезновение РНК в течение не более чем 4 недель противовирусного лечения. Такой вирусологический ответ называют ранним.

ПЦР также позволяет определить тип вируса гепатита. При разных типах назначаются разные схемы лечения. Количественные показатели при вирусном гепатите С оценивают через каждые 3 месяца терапии.

Интерпретацией результатов занимается врач.

Единицей измерения количества патогенных микроорганизмов является концентрация ДНК или РНК в одном миллилитре клинического материала. Она обычно обозначается в 10, которая возведена в степень. Эта степень фактически означает количество нулей, которые следуют после единицы. Например, 10 4 – это 10 000 копий ДНК.

Для разных инфекций нормы отличаются. В каждом случае требуется индивидуальная расшифровка анализа, так как часто их ещё нужно сравнивать с проведенными ранее исследованиями.

Подготовки к сдаче крови не требуется.

А вот к сдаче мазка нужно приготовиться. Есть несколько ограничений, которых следует придерживаться.

Запрещено накануне сдачи анализа:

• вести интимную жизнь – в течение 2 дней;
• принимать антибактериальные препараты (за исключением случаев, когда они назначены врачом) – в течение 2 недель;
• не мочиться – 3 часа;
• женщинам – не спринцеваться и не пользоваться тампонами – 2 дня.

Чтобы сделать качественную ПЦР, обратитесь к доктору-венерологу. Специалисты данного профиля ведут прием в нашем медицинском центре. Они оценят, есть ли у вас показания к назначению данного анализа.

При необходимости вы сможете сдать кровь или мазки в день обращения. Результаты для большинства исследований получите на следующий день.

Для сдачи анализов методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

• ВИЧ
• Гарднереллез
• Кондиломатоз
• Молочница
• Сифилис
• Трихомониаз
• Баланопостит
• Герпес
• Гонорея
• Микоплазмоз
• Уреаплазмоз
• Уретрит
• Хламидиоз
• ЗППП

источник

Качественный и количественный анализ — два фундаментальных метода сбора и интерпретации данных в исследованиях. Эти методы могут использоваться независимо или одновременно, поскольку все они имеют одни и те же цели. У них есть некоторые ошибки, и поэтому одновременное использование их может компенсировать ошибки, которые каждый из них имеет, а затем дает качественные результаты.

Более того, в количественном и качественном анализе имеются совпадения. В этой статье раскрываются ключевые различия между этими двумя методами анализа исследований.

Количественный анализ часто связан с численным анализом, когда данные собираются, классифицируются, а затем вычисляются для определенных результатов с использованием набора статистических методов. Данные выбираются случайным образом в больших образцах и затем анализируются. Преимущество количественного анализа результатов может быть применено в общей популяции с использованием моделей исследований, разработанных в образце. Это является недостатком качественного анализа данных из-за ограниченного обобщения результатов.

Количественный анализ носит более объективный характер. Он стремится понять возникновение событий, а затем описать их с использованием статистических методов. Однако более ясность может быть получена путем одновременного использования качественных и количественных методов. Количественный анализ обычно оставляет случайные и скудные события в результатах исследований, тогда как качественный анализ их рассматривает.

Количественный анализ обычно касается измеряемых величин, таких как вес, длина, температура, скорость, ширина и многое другое. Данные могут быть выражены в табличной форме или в любом графическом представлении с использованием графиков или диаграмм. Количественные данные можно классифицировать как непрерывные или дискретные, и их часто получают с помощью обследований, наблюдений, экспериментов или интервью.

Однако в количественном анализе имеются ограничения. Например, может быть сложно выявить относительно новые концепции, используя количественный анализ, и именно там, где качественный анализ входит в уравнение, чтобы выяснить «почему» возникает определенное явление. Вот почему методы часто используются одновременно.

Качественный анализ связан с анализом данных, которые не могут быть количественно определены. Этот тип данных касается понимания и понимания свойств и атрибутов объектов (участников). Качественный анализ может получить более глубокое понимание «почему» происходит определенное явление. Анализ может использоваться в сочетании с количественным анализом или предшествующим ему.

В отличие от количественного анализа, который ограничен определенными правилами или цифрами классификации, анализ качественных данных может быть широким и многогранным. И это субъективно, описательно, нестатистическое и исследовательское по своей природе.

Поскольку качественный анализ стремится получить более глубокое понимание, исследователь должен быть хорошо округлен с учетом каких-либо физических свойств или атрибутов, на которых основано исследование. Часто исследователь может иметь отношения с участниками, где раскрываются их характеристики. В количественном анализе характеристики объектов часто не раскрываются. Типичные проанализированные данные качественно включают цвет, пол, национальность, вкус, внешний вид и многое другое, пока данные не могут быть вычислены. Такие данные получены с помощью интервью или наблюдений.

В качественном анализе есть ограничения. Например, он не может быть использован для обобщения населения. Небольшие образцы используются в неструктурированном подходе, и они не являются репрезентативными для общей популяции, поэтому этот метод не может быть использован для обобщения всей популяции. Вот где количественный анализ в фактор.

Анализ качественных данных основан на классификации объектов (участников) в соответствии со свойствами и атрибутами, тогда как количественный анализ основан на классификации данных на основе вычислимых значений. Качественный анализ субъективен, тогда как количественный является объективным.

В качественном анализе данные собираются небольшими нерепрезентативными образцами неструктурированным способом. Типичные собранные данные включают цвет, расу, религию, национальность и многое другое. В количественном анализе, с другой стороны, данные собираются в больших репрезентативных выборках, которые могут обобщать всю популяцию.

Методика качественного анализа является исследовательской, где анализ стремится получить более глубокое понимание того, почему происходит определенное явление. Методология количественного анализа может быть убедительна, например, сколько или сколько раз происходит определенное явление, а не почему это происходит.

В качественном анализе результаты исследований специфичны для изучаемых объектов и не применимы к общей популяции, тогда как в количественном анализе результаты могут быть применимы для населения в целом.

В качественном анализе исследователи часто задают открытые вопросы, проводят собеседования и наблюдения, тогда как в количественном анализе исследователи проводят измерения, проводят опросы, эксперименты и наблюдения.

Качественный анализ направлен на более глубокое понимание социальных взаимодействий, в то время как количественный анализ направлен на проверку гипотез и даже дает будущие прогнозы

источник

ПЦР количественный – современный способ диагностики различных заболеваний, передающихся половым путем.

Методика считается высокоточной и применяется в том случае, если необходимо поставить диагноз на ранних этапах болезни. А также при ее бессимптомном течении.

К какому врачу обращаться для сдачи количественного анализа ПЦР? Каковы правила подготовки к исследованию и в чем его основная суть?

Количественный анализ ПЦР – это довольно сложная реакция. Изначально она применялась только в молекулярной биологии в научных целях. Только в последние несколько лет методика стала использоваться, чтобы ставить инфекционные и некоторые генетические диагнозы.

Суть количественного анализа полимеразной цепной реакции кажется довольно простой. В ходе реакции специальный прибор непрерывно регистрирует данные. Благодаря чему удается точно оценить количество тех или иных частиц ДНК в биологическом материале.

Метод количественной ПЦР коренных отличий от классического исследования этого типа, в принципе, не имеет. Пациент сдает мазок или кровь в обычном режиме. Но при этом сама реакция осуществляется под контролем специального регистратора.

То есть для пациента полимеразная цепная реакция для определения числа вирусов или других патогенных организмов не отличается от классического анализа именно в плане особенностей сдачи. Особенностью подобного исследования является то, что саму реакцию в лаборатории завершают на довольно ранних этапах. Это необходимо, чтобы предотвратить появление большого количества ПЦР-фрагментов, которые могут смазать результат.

Многие пациенты задают своим лечащим врачам вопрос о том, когда необходим количественный анализ ПЦР мазков и крови. Часто ошибочно считается, что основная задача этого метода – поставить диагноз при отсутствии симптомов. Или в том случае, если инфекция сочетанная.

Соответственно, рекомендация сдать биологический материал может даваться пациентам со следующими жалобами:

• проблемы с мочеиспусканием, начиная от задержки мочи и заканчивая жалобами на дискомфорт во время опорожнения мочевого пузыря;
• появление каких-либо нестандартных выделений, имеющих особый цвет или запах;
• болезненность во время сексуальных контактов;
• наличие воспалительных реакций на кожных покровах и видимых слизистых оболочках;
• появление в крови или естественных выделениях крови, гноя и др.

Однако количественное определение ПЦР гораздо чаще применяется не для постановки диагноза, а используется, когда диагноз уже известен.

Дело в том, что этот метод способен дать врачу информацию о том, насколько интенсивно развивается болезнь. Эффективна ли выбранная терапия, нет ли у патогенов резистентности к используемым лекарственным средствам. Поскольку эта информация важна для проведения терапии, анализ подобного типа рекомендуется сдавать регулярно с интервалом в каждые три месяца. Очень важен количественный ПЦР на гепатит C для диагностики хронизации инфекционного процесса.

В этом случае врач обратит внимание на то, что все показатели выходят за пределы нормы. Исследование также рекомендуется пройти перед тем, как будет назначена противовирусная терапия, чтобы определить, насколько высока вирусная нагрузка.

Мазок ПЦР количественный на хламидии и другие инфекции дает много важной информации. В первую очередь он позволяет оценить, насколько высока вирусная нагрузка на организм пациента. Обычно чем она выше, тем тяжелее состояние больного и тем более радикальное лечение требуется для нормализации жизненных показателей. По снижению этого показателя также судят о том, насколько эффективно лечение. Если показатель снижается, значит терапия подобрана верно и ее стоит продолжать. Если же наблюдается стабильность или повышение, стоит пересмотреть схему лечения.

Оценка эффективности лечения с помощью ПЦР анализа крови к ВИЧ и гепатитам сегодня позволяет подбирать противовирусную терапию.

И не вслепую, как это было раньше, учитывая невысокую выраженность клинических симптомов этих болезней на ранних стадиях, а целенаправленно.

Многие пациенты спрашивают у своих врачей о том, как подготовиться к сдаче биологического материала. Так, чтобы информация, полученная в результате, была наиболее полноценной и достоверной.

Диагностика методом ПЦР не требует какой-либо очень сложной подготовки, требования можно считать стандартными. Во-первых, чаще всего в качестве биологического материала сдается кровь из вены.

Поскольку кровь сдается на голодный желудок, рекомендуется попасть на анализ в утреннее время. Чтобы не вынуждать организм голодать в течение целого дня.

Дополнительные рекомендации следующие:

• перед процедурой забора крови рекомендуется 15-20 минут отдохнуть, чтобы организм пришел в себя;
• за 12 часов до процедуры рекомендуется ограничить: курение, употребление алкогольных напитков;
• за 48 часов до забора материала отказываются от сексуальных контактов;
• за 12 часов до исследования лучше не употреблять жирную пищу;
• по рекомендации врача также возможно придется на время отказаться от некоторых медикаментов, чтобы получить достоверный результат;
• если предполагается, что кровь будет сдавать ребенок, то ему за полчаса до процедуры рекомендуется с промежутком в несколько минут давать кипяченую воду, чтобы восполнить объем крови, который меньше, чем у взрослых.

Важно правильно подобрать клинику, где будет сдаваться анализ. Ведь ПЦР дает высокие диагностические результаты только в том случае, если используются хорошие реагенты.

И соблюдены технологии транспортировки крови в лабораторию и ряд других условий.

Интерпретация анализов мазков и крови может показаться простым делом, но это вовсе не так. Доверить расшифровку результатов нужно грамотному специалисту, который разбирается в заболевании.

Ведь благодаря методике можно:

• точно определить, какова стадия инфекционного процесса;
• узнать, эффективно ли лечение;
• понять, нужна ли биопсия печени при гепатите.

Все эти данные может в полном объеме оценить только врач, исходя из набора медицинских знаний об особенностях течения инфекционного процесса, данных о пациенте и его состоянии здоровья.

источник

Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.

Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.

Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.

Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.

Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.

Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.

Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:

1. Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
2. Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
3. Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.

Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.

Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.

Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.

Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.

Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:

• Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
• Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
• Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
• Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
• Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
• При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
• Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
• Для контроля результативности проводимой терапии.
• После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.

ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.

Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:

1. Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
2. Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
3. За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
4. За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.

За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.

Забор крови происходит следующем образом:

• Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
• Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
• В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
• После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
• К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.

Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.

Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.

У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.

Плюсы исследования представлены в таблице:

Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.

Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.

Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.

В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.

Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.

Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.

Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.

Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.

Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.

ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.

Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.

В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.

Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:

Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.

источник