Меню Рубрики

Количественный анализ пцр на инфекции

Все чаще в медицинской практике стали применять новый метод диагностики инфекционных заболеваний, который имеет аббревиатуру ПЦР. В чем заключается сущность такого метода исследования и какие заболевания можно благодаря ему выявить, а также в чем достоинства ПЦР в сравнении с другими распространенными способами диагностики и как правильно подготовиться к анализу, можно узнать, прочитав данную статью.

Аббревиатура ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Это возможность участка ДНК пропорционально приумножаться при необходимых условиях. Изобретена ПЦР-диагностика инфекций еще в 1980-х годах. Работали над открытием европейские, американские и советские ученые, поэтому определить первоизобретателя инновационного диагностического метода не представляется возможным. Кроме того, начиная с 1983 года, когда был официально зарегистрирован такой метод исследования инфекционных заболеваний, как ПЦР, продолжается работа по усовершенствованию данного способа. На сегодняшний день такой метод диагностики применяют практически в каждой медицинской лаборатории, имеющей современное необходимое оборудование.

Для анализа ПЦР, в зависимости от медицинских показаний, необходимо провести медицинский забор таких материалов, как кровь, слюна, моча, сперма, грудное молоко или половые выделения, эпителиальные клетки. Диагностика инфекций методом ПЦР заключается в том, чтобы обнаружить ДНК возбудителя в исследуемом материале. С помощью специальных лабораторных манипуляций с использованием химических реактивов и оборудования лаборанты проводят полимеразную цепную реакцию. С ее помощью незаметный в микроскоп участок ДНК возбудителя разрастается до заметных в прибор размеров. Именно поэтому можно обнаружить возбудителя инфекции даже при наличии незначительного участка его ДНК в исследуемом материале.

Способна обнаружить целый ряд патогенных микроорганизмов ПЦР-диагностика инфекций. Расшифровка результатов сводится к обнаружению возбудителя и определению его вида. С помощью полимеразной цепной реакции диагностируют различные заболевания человека: от передающихся половым путем до бессимптомных, так называемых скрытых инфекций. С помощью ПЦР находят:

  • вирус гепатита (А, В, С);
  • уреплазму уреалитикум;
  • уреплазму парвум;
  • хламидию трахоматис;
  • кандиду;
  • микоплазму хоминис;
  • микоплазму гениталиум;
  • гарганеллу вагиналис;
  • трихомоназ;
  • микобактерию туберкулеза;
  • вирус герпеса простого 1 и 2 типа;
  • вирус папилломы;
  • вирус Эпшетейна-Барра;
  • хеликобактер пилори;
  • вирус иммунодефицита.

Вышеперечисленные микроорганизмы вызывают такие заболевания, как гепатит, туберкулез, ИППП и СПИД.

ПЦР-диагностика инфекций проводится в виде качественного (то есть определяют наличие или отсутствие возбудителя) и количественного анализа (высчитывают количество микроба в организме – такой подход необходим, например, при диагностике ВИЧ-инфекций и гепатита).

Практически в каждой лаборатории сегодня проводят диагностику инфекций человека с помощью полимеразной цепной реакции. В чем же достоинства такого метода, почему он стал невероятно популярным как среди медиков, так и в среде пациентов за такой короткий промежуток времени? Объясняется такое стремительное распространение инновационной технологии высоким уровнем достоверности, эффективности и чувствительности. Рассмотрим подробнее достоинства метода диагностики ПЦР:

  1. Процесс проведения анализа максимально автоматизирован, что исключает человеческий фактор при проведении исследования и расшифровке результата.
  2. Благодаря современным технологиям культуры выращиваются в течение 4–6 часов, а соответственно, получить результат анализа можно в день сдачи материала для исследования.
  3. ПЦР-диагностика инфекций обладает высокой чувствительностью, что позволяет обнаружить возбудителя даже при наличии незначительного участка ДНК. В некоторых случаях, например, при вялотекущих и бессимптомных заболеваниях, посев культур иным методом является затруднительным или полностью невозможным.
  4. Материалом для исследования методом ПЦР могут стать кровь, слюна, урогенитальные выделения, эпителиальные клетки, моча, сперма, что крайне удобно при невозможности взятия для анализа определенного материала. Для диагностики инфекционных заболеваний обычно используют венозную кровь и урогенитальный мазок.
  5. Методом полимеразной цепной реакции можно определить несколько возбудителей из одного материала. Такой подход не только сокращает время для постановления правильного диагноза, но и экономит затраты на исследование.
  6. Метод ПЦР считается достоверным, так как было отмечено лишь небольшое количество ложноотрицательных результатов. Ложноположительных ответов зафиксировано до сегодняшнего дня не было.

Какими бы достоинствами ни обладала ПЦР-диагностика инфекций, применяют такой метод не всегда. Например, при диагностике токсоплазмоза полимеразную цепную реакцию проводят только в том случае, если анализ ИФА показал сомнительный или спорный результат. С помощью метода ПЦР невозможно проследить динамику заболевания. Отметим следующие случаи, когда данный метод исследования принесет достоверные и эффективные результаты:

  • для определения инфекционных заболеваний, указанных выше, в соответствующем разделе статьи;
  • широко распространена ПЦР-диагностика урогенитальных инфекций;
  • для определения ИППП во время беременности;
  • для диагностики ВИЧ;
  • при спорных медицинских ситуациях для подтверждения или опровержения предварительного диагноза;
  • для определения отцовства и родственных связей;
  • применяют в генотипировании для обнаружения наследственных предрасположенностей;
  • помогает метод ПЦР работникам криминалистического отдела медицины для идентификации генетического материала.

Обследование ПЦР-методом назначается в обязательном порядке беременной женщине при постановке на учет с целью ранней диагностики инфекций, передающихся половым путем. Так как такие заболевания крайне опасны для нормального протекания периода вынашивания ребенка. ИППП провоцируют замирание развитие плода, выкидыши, внутриутробные уродства, мертворождение, врожденные патологии. Своевременное обнаружение и лечение инфекции значительно повышают шансы на благоприятный исход беременности и рождение здорового малыша.

Обычно будущей маме назначается комплексное обследование, которое имеет название «ПЦР 6». Такое исследование включает анализ на 6 разных инфекций. Проводится как в государственных, так и в частных учреждениях ПЦР-диагностика: «Инвитро», «Счастливая семья», «Уро-Про» и другие лаборатории предлагают такую услугу. Более подробно этот вопрос описан ниже.

Таким образом, понадобится лишь один раз провести забор материала для анализа. При проведении ПЦР-диагностики во время беременности необходим урогенитальный мазок, который берется из канала шейки матки гинекологической щеточкой. Такая процедура не вызывает болезненных ощущений у беременной и никак не влияет на плод.

Часто назначают ПЦР-диагностику для обнаружения возбудителя гепатита. Объясняется это тем, что такое заболевание нередко протекает бессимптомно и переходит в хроническую тяжелую трудноизлечимую стадию. С помощью ПЦР определяют гепатит на самых ранних этапах, что способствует благоприятному излечению в максимально короткие сроки. Проводится в большинстве частных лабораторий такая ПЦР-диагностика инфекций. Цена зависит от типа определяемого вируса и вида анализа. Так, простое определение наличия или отсутствия ДНК возбудителя в крови стоит 400–600 р. Количественный метод обойдется в 1200-1500 р.

Для еще более эффективной результативности метода ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний широко применяют комплексное исследование, которое способствует сокращению сроков постановки диагноза и своевременному лечению. Так, лаборатории предлагают анализ «ПЦР-6» и «ПЦР-12». В первый комплекс входит ПЦР-диагностика половых инфекций, таких как:

  • уреплазмоз;
  • хламидиоз;
  • микоплазмоз;
  • папилломавирус человека;
  • простой герпес;
  • цитомегаловирус.

Такое исследование часто назначается женщинам на ранних сроках беременности, а также в период планирования зачатия.

При проведении «ПЦР-12», помимо вышеуказанных заболеваний, диагностируют следующие:

  • гонорею;
  • кандидоз;
  • бактериальный вагиноз;
  • трихомониаз;
  • уреплазмоз;
  • герпес 1 и 2 типа.

В зависимости от лаборатории, перечень исследуемых заболеваний, входящих в комплекс, может различаться. Врач подберет в каждом конкретном случае наиболее подходящий вариант обследования. В любом случае комплексный анализ методом ПЦР займет гораздо меньше времени, сил и материальных затрат.

Подготовка к анализу методом ПЦР заключается в соблюдении рекомендаций по забору определенного вида материала:

  1. Сдавая урогенитальный мазок, следует воздержаться от полового контакта за трое суток до предполагаемого анализа, прекратить прием антибактериальных препаратов и местных мазей, кремов, свеч, нельзя проводить процедуру спринцевания. Во время менструальных выделений забор материала не проводится – необходимо провести анализ не ранее, чем через 3 дня после завершения менструаций. Следует воздержаться от мочеиспускания за 3 часа до анализа.
  2. Венозную кровь лучше сдавать с утра, натощак (хотя это не является правилом). Накануне следует ограничить употребление алкоголя и жирной пищи.
  3. При сдаче спермы необходимо воздерживаться от полового контакта трое суток. Рекомендуется ограничить употребление спиртного, посещение сауны, прием горячей ванны.
  4. Мочу следует сдавать утреннюю, предварительно проведя тщательный туалет половых органов. Лучше собирать материал в специальную стерильную емкость. Материал следует доставить в лабораторию в течение нескольких часов.

Не вызывает сложностей интерпретация результатов, после того как была проведена ПЦР-диагностика инфекций. Расшифровка качественного метода заключается в оценке наличия или отсутствия в исследуемом материале возбудителя, а также в определении вида патогенного микроорганизма. Если в исследуемом материале был обнаружен участок ДНК микроба, то записывается положительный результат на соответствующем бланке, а также указывается, какой именно вид микроба был определен. При отсутствии патогенного микроорганизма в материале результат будет отрицательным.

Полученные результаты количественного анализа, например при диагностике гепатита, необходимо расшифровывать с помощью норм, указанных лабораторией. Так как единицы измерения и количественный фактор значительно отличаются в разных медицинских диагностических учреждениях. Достоверно, с учетом всех сопутствующих факторов, расшифровать такой анализ может только врач.

На сегодняшний день практически каждая частная лаборатория предлагает такую услугу, как ПЦР-диагностика инфекций.

  1. «Инвитро» — цена проводимых данной лабораторией исследований и качество зарекомендовали себя не только в России, но и в Украине, Казахстане, Белоруси. Отзывы пациентов свидетельствуют о высоком качестве предоставления медицинских услуг, быстром получении достоверных результатов. Но ценовая политика соответствует высокому качеству. Так, за анализ методом ПЦР на одну инфекцию, например гепатит, необходимо будет заплатить около 700 р. За сбор материала берут отдельную плату – это еще 400р. Значительно дешевле обойдется комплексное исследование «ПЦР-6» в данной лаборатории – такой анализ стоит 1445 р., в него входят исследования шести инфекций, передающихся половым путем.
  2. Лаборатория «Хеликс» также заслуживает достойные отзывы потребителей. Современные технологии и оборудование, высококвалифицированный персонал и умеренные цены заслужили положительные отзывы. Стоимость анализа на одну инфекцию методом ПЦР составляет 290 р., дополнительно нужно оплатить забор материала. В зависимости от его вида такой платеж составит от 25 р. (моча) до 550 р. (урогенитальный мазок с секретом простаты).
  3. Лаборатория «СитиЛаб» отличается тем, что выполняет практически любой анализ методом ПЦР в течение суток, в то время как другие предоставляют готовый результат только через 2 дня. Заплатив немного больше, можно получить ответ даже в день сдачи анализа. Ценовая категория приблизительно следующая: анализ на определение хламидий стоит 230 р., «ПЦР-6» обойдется в 1430 р., а количественный анализ гепатита С – 12650 р. Стоит отметить, что в данной лаборатории представлен широкий выбор комплексных анализов методом ПЦР. Это является несомненным достоинством при диагностике заболеваний.

Проводится ПЦР-диагностика и в государственной поликлинике на платной основе. Следует отметить, что стоимость таких анализов незначительно ниже по сравнению с исследованиями в частной лаборатории. А вот оборудование и материалы значительно отличаются – по этому критерию частные клиники явно выигрывают. Проконсультируйтесь с лечащим врачом по поводу выбора лаборатории для сдачи анализа методом ПЦР в вашем регионе.

источник

ДНК ПЦР анализы направлены на выявление патогенных микроорганизмов. Они бывают количественные и качественные.

Если при ПЦР ДНК обнаружена или не выявлена, это качественный тест.

Если указывается ещё и концентрация, это количественная ПЦР. Данный анализ более информативен. Хотя требуется он далеко не всегда.

  • Когда необходим количественный ПЦР анализ
  • ПЦР на микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллу, кандиду
  • Мазок ПЦР количественный на хламидии
  • Количественный ПЦР анализ ВПЧ 21 тип
  • Количественное определение РНК ВИЧ и необходимость для лечения
  • Оценка результативности лечения с помощью ПЦР анализа крови к гепатитам
  • Интерпретация количественной ПЦР мазков и крови
  • Подготовка к количественному анализу ПЦР мазков и крови
  • К какому врачу обратиться для ПЦР анализа

При ПЦР количественное определение требуется во многих случаях. Она дает дополнительные возможности, если сравнивать с качественным анализом.

Если после проведения ПЦР ДНК обнаружено, знать количество микроорганизмов необходимо, чтобы понять:

  • требуется ли пациенту лечение (при низких количественных показателях оно может не назначаться);
  • насколько быстро идет выздоровление (есть ли вирусологический ответ от лечения);
  • стоит ли продолжать терапию этими же препаратами или нужно менять схему;
  • болезнь находится под контролем или возникает рецидив, требующий дополнительных терапевтических мероприятий;
  • насколько высоким является риск осложнений (например, вероятность диспластических изменений в шейке матки при папилломавирусной инфекции).

Поговорим подробнее, при каких патологиях могут потребоваться количественные ДНК ПЦР анализы.

Существуют микроорганизмы, которые не всегда вызывают патологический процесс в структурах урогенитального тракта. Они могут вызывать воспалительные или другие симптомы только в том случае, когда популяция бактерий значительно увеличится.

Чтобы узнать, увеличилась она или нет, требуются соответствующие анализы. Многие лаборатории предлагают комплексный количественный анализ ПЦР сразу на несколько возбудителей.

Микоплазмы двух видов могут вызывать воспалительные процессы во влагалище. Это микоплазма гениталиум и хоминис. Причем, гениталиум может вызывать воспаление даже в минимальных концентрациях. Этот микроорганизм рассматривается как однозначно патогенный. При его выявлении даже в малых количествах проводится лечение. Целью его считается эрадикация возбудителя. Критерием успешности терапии является отрицательный анализ ПЦР на микоплазму гениталиум.

А вот хоминис – менее опасный вид данных микроорганизмов. Он может обнаруживаться в урогенитальном тракте многих людей. В том числе тех, кто не имеет признаков воспалительного процесса в урогенитальном тракте. В этом случае пороговой считается концентрация бактерий в клиническом материале от 10 4 копий ДНК в мл.

Если ПЦР покажет, что бактерий меньше, лечение может и не назначаться. Но если количество патогенов превышает указанное значение, требуется антибактериальная терапия.

Потому что в больших количествах микоплазмы:

  • вызывают воспаление;
  • могут провоцировать осложнения;
  • передаются при половом акте;
  • опасны для беременных.

Гарднереллы – вид транзитных микроорганизмов, которые часто выявляются в урогенитальном тракте женщин. Они не вызывают воспаления. Но в больших количествах провоцируют дисбактериоз. Это заболевание, основным проявлением которого является обильное отделяемое из влагалища с неприятным запахом.

Патология нарушает качество половой жизни. Гарднереллы в больших количествах способны быстро уничтожать лактобактерий. Они вытесняют их. В итоге может оказаться так, что лактобактерии вообще не обнаруживаются во влагалище. Этого не должно случиться, потому что молочнокислые бактерии защищают организм женщины от других микробов. Они делают это за счет продукции молочной кислоты.

Читайте также:  Анализы на внутриутробные инфекции для ребенка

Кислая рН влагалища не дает условно-патогенным бактериям чрезмерно развиваться.

Количественная ПЦР ДНК диагностика на гарднереллы показывает, сколько этих микроорганизмов содержится во влагалище. Если их больше 10 4 копий ДНК в мл, требуется антибактериальное лечение. Оно позволяет предотвратить дисбактериоз влагалища или устранить его основные проявления, если они уже присутствуют.

Кандиды – ещё одна группа микроорганизмов, для которых имеет значение количество. Это грибы, которые в норме присутствуют в урогенитальном тракте большинства людей.

Кандидоз является оппортунистической инфекцией. Он развивается, когда в организме ослаблен иммунитет. В этом случае количество кандид резко увеличивается. Появляются красные пятна, белые выделения и другие симптомы, иногда достаточно сильно выраженные.

Само по себе обнаружение кандиды с помощью ПЦР не дает врачу никакой ценной информации. Всем и так понятно, что эти грибы в структурах урогенитального тракта есть. Поэтому качественная ПЦР на кандидоз не проводится.

Клиническое значение имеет только количественный метод ПЦР. При определении кандид в количестве, превышающем пороговое значение, устанавливается диагноз кандидоз. Назначается соответствующее лечение.

Показанием для назначения количественного ПЦР на кандиды является в основном наличие симптомов кандидоза. Анализ также может быть использован в случае обнаружения псевдомицелия при микроскопии мазка из урогенитального тракта. ПЦР позволяет установить вид гриба.

Ведь кандидоз может быть вызван десятками видов микроорганизмов. Чаще всего это кандида альбиканс. Но есть ещё 5-6 видов грибов, которые провоцируют кандидоз достаточно часто. Причем, их наличие усложняет процесс лечения.

Часто такие кандидозы рецидивируют. Они плохо реагируют на традиционно используемые при кандидозе противогрибковые препараты.

Количественная ПЦР на кандидоз используется и после лечения. Она помогает врачу понять, была ли проведенная терапия успешной, и оценить риск рецидива грибкового заболевания в будущем.

Количественная ПЦР на уреаплазмоз тоже проводится достаточно часто. Уреаплазмы рассматриваются как условно-патогенная флора. То есть, они опасны только в больших количествах.

ПЦР количественная на уреаплазмы позволяет решить вопрос о необходимости лечения.

У многих врачей-венерологов целесообразность использования количественной ПЦР на уреаплазмы вызывает вопросы. Этот микроорганизм обладает очень высокой адгезивной способностью. Он крепко прилипает к клеткам, поэтому в клиническом материале может быть гораздо меньше бактерий, чем есть в организме.

Соответственно, количественные показатели могут быть заниженными. Кроме того, они значительно варьируют от анализа к анализу.

Хотя в настоящее время считается, что лечение стоит начинать только при концентрации бактерий от 10 4 копий ДНК в мл, нередко врачи назначают лечение и при меньшем их количестве. Особенно если женщина готовится к беременности.

Есть немало исследований, которые подтверждают: уреаплазма очень опасна для плода. Она вызывает инфицирование околоплодных оболочек.

Уреаплазма способна спровоцировать преждевременные роды. Она вызывает респираторные инфекции у новорожденного плода. Поэтому даже если качественная ПЦР показывает небольшие количества уреаплазм, желательно пролечиться тем женщинам, которые готовятся к беременности.

Не требуется лечение при сочетании таких факторов:

  • концентрация уреаплазм ниже пороговой;
  • нет симптомов воспаления;
  • супружеская пара не планирует беременность.

Тогда лечиться не обязательно. Но такие случаи встречаются редко. Потому что пациенты редко приходят на диагностику венерических заболеваний с профилактической целью. В основном они обращаются после возникновения воспалительных симптомов.

На хламидии чаще проводят тест качественный, а не количественный.

Потому что этот микроорганизм является патогенным.

Одного только факта его обнаружения достаточно, чтобы начать лечение.

Причем, количество копий ДНК не играет существенной роли в определении схемы терапии и дозировок препаратов.

Тем не менее, количественные тесты иногда проводят.

Они дают врачу возможность оценить прогноз заболевания.

Понять, насколько высока вероятность осложнений.

А также спрогнозировать ответ на лечение.

При большой концентрации хламидий в урогенитальном тракте доктор может увеличить курс терапии.

Оценивая данный показатель в динамике, он может понять, работают ли те антибактериальные препараты, которые он назначил.

Такие исследования могут использоваться в диагностике папилломавирусной инфекции.

Почему нужны именно количественные анализы, а не качественные? Они более информативны в плане оценки прогноза заболевания, целесообразности противовирусного лечения и оценки его результативности.

Для первичной диагностики обычно проводят качественную ПЦР. Она помогает установить, какие типы ВПЧ присутствуют в организме. Это могут быть высокоонкогенные, среднеонкогенные или низкоонкогенные типы.

Особую настороженность вызывают вирусы высокой онкогенности. Поэтому не лишним будет знать, в каком количестве они содержатся в урогенитальном тракте.

Особенно важен данный анализ для женщин. Ведь у них ВПЧ является основной причиной рака шейки матки.

В свою очередь карцинома шейки матки – самое частое злокачественное онкологическое заболевание среди молодых женщин.

Проведение количественной ПЦР позволяет установить, прогрессирует или регрессирует патологический процесс. Если количество вирусов увеличивается, это говорит о высоком риске дисплазии шейки матки. А она в дальнейшем переходит в рак.

При длительно сохраняющиеся высокой вирусной нагрузке показано лечение с помощью иммуномодуляторов и противовирусных препаратов общего действия. В процессе лечения проводятся повторные исследования ПЦР.

Врач смотрит, стало вирусов в организме больше или меньше. Если их стало меньше, это хороший прогностический признак. Если же вирусов стало больше, то по результатам количественной ПЦР схему терапии стоит пересмотреть.

Количественная ПЦР имеет важнейшее значение в диагностике и терапии ВИЧ.

В основном первичная диагностика заболевания проводится путем определения уровня антител в крови. Это метод намного дешевле, а результаты можно получить быстрее.

Но в некоторых случаях без ПЦР не обойтись. Метод позволяет обнаружить ДНК провируса или РНК вируса в крови.

В основном используют количественную ПЦР для выявления РНК. Это самый ранний маркер ВИЧ. Анализ крови позволит диагностировать болезнь уже через несколько недель после заражения. А количественная оценка методом ПЦР имеет огромное значение в определении схемы терапии.

С помощью анализа оценивают эффективность лечения. Если вирусная нагрузка снижается до неопределяемой, это говорит о том, что терапия проходит успешно.

Антиретровирусные препараты работают. Но если она начинает возрастать, это свидетельствует о формировании резистентности к препаратам. Подобное нередко происходит через несколько лет после начала лечения.

В таком случае схему лечения приходится менять. Иначе количество иммунных клеток в крови начнет снижаться. Вследствие ухудшения иммунитета начнут присоединяться инфекции и возникать злокачественные новообразования.

Используется также выявление ДНК ВИЧ при помощи ПЦР. Метод более предпочтителен для обследования новорожденных детей. Потому что количество РНК в крови может уменьшаться, если мать получала антиретровирусную терапию. В результате в первые дни жизни ПЦР количественная на РНК вируса может быть ложноотрицательной.

Количественный анализ ПЦР используется при гепатите C для определения уровня виремии.

Метод дает возможность подобрать оптимальную схему терапии. А также он дает возможность оценить, насколько эффективной является проводимая терапия.

Благодаря ПЦР вирус гепатита С определяется уже через 1 неделю с момента заражения. В дальнейшем метод применяется, чтобы понять, было ли специфическое лечение эффективным.

Результаты оцениваются по ряду критериев:

  • вирусологический;
  • биохимический;
  • морфологический.

Вирусологический контроль проводится при помощи ПЦР. Если РНК вируса гепатита С не выявляется, то терапия прошла успешно.

Если результаты остаются отрицательными в течение 6 месяцев, такой вирусологический ответ считается устойчивым.

Появление РНК вируса на фоне прекращения лечения говорит о рецидиве заболевания. В процессе проведения терапии с помощью количественного ПЦР оценивают динамику изменения концентрации вируса.

Оптимальным результатом считается исчезновение РНК в течение не более чем 4 недель противовирусного лечения. Такой вирусологический ответ называют ранним.

ПЦР также позволяет определить тип вируса гепатита. При разных типах назначаются разные схемы лечения. Количественные показатели при вирусном гепатите С оценивают через каждые 3 месяца терапии.

Интерпретацией результатов занимается врач.

Единицей измерения количества патогенных микроорганизмов является концентрация ДНК или РНК в одном миллилитре клинического материала. Она обычно обозначается в 10, которая возведена в степень. Эта степень фактически означает количество нулей, которые следуют после единицы. Например, 10 4 – это 10 000 копий ДНК.

Для разных инфекций нормы отличаются. В каждом случае требуется индивидуальная расшифровка анализа, так как часто их ещё нужно сравнивать с проведенными ранее исследованиями.

Подготовки к сдаче крови не требуется.

А вот к сдаче мазка нужно приготовиться. Есть несколько ограничений, которых следует придерживаться.

Запрещено накануне сдачи анализа:

  • вести интимную жизнь – в течение 2 дней;
  • принимать антибактериальные препараты (за исключением случаев, когда они назначены врачом) – в течение 2 недель;
  • не мочиться – 3 часа;
  • женщинам – не спринцеваться и не пользоваться тампонами – 2 дня.

Чтобы сделать качественную ПЦР, обратитесь к доктору-венерологу. Специалисты данного профиля ведут прием в нашем медицинском центре. Они оценят, есть ли у вас показания к назначению данного анализа.

При необходимости вы сможете сдать кровь или мазки в день обращения. Результаты для большинства исследований получите на следующий день.

Для сдачи анализов методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

  • ВИЧ
  • Гарднереллез
  • Кондиломатоз
  • Молочница
  • Сифилис
  • Трихомониаз
  • Баланопостит
  • Герпес
  • Гонорея
  • Микоплазмоз
  • Уреаплазмоз
  • Уретрит
  • Хламидиоз
  • ЗППП

источник

Среди современных методов диагностики одним из наиболее точных и информативных считается мазок на ПЦР. Преимуществом метода полимеразной цепной реакции является возможность использования любого биологического материала. Чаще всего соскоб для лабораторного исследования берут из половых органов мужчин и женщин с целью обнаружения и профилактики инфекций, передающихся половым путем.

Метод ПЦР применяется не только в медицине. Его используют в археологии, генетике, криминалистике. Разработчиком этого вида диагностики является американский химик Кэри Мюллис – лауреат Нобелевской премии. Кстати, самую престижную международную награду он получил за открытие метода ПЦР.

Благодаря полимеразной цепной реакции у ученых появилась возможность определять сходство ДНК, устанавливать отцовство и родственные связи. И все же основным предназначением мазка методом ПЦР принято считать диагностику инфекционных заболеваний у человека.

Полимеразная цепная реакция представляет собой высокоточный способ молекулярно-генетического исследования, проведение которого позволяет выявлять вирусные, генетические и наследственные патологии. Преимущество данной методики заключается в возможности определения болезнетворных агентов не только на острой или хронической стадии заболевания, но и в инкубационный период, то есть до того, как проявятся первые симптомы патологии.

Мазок на ПЦР никогда не дает ложноположительного ответа. Этим и отличается данный метод диагностики от других. Если инфекции в организме нет, пациент не получит положительный результат – в этом можно не сомневаться. Сегодня анализ на полимеразную цепную реакцию сдают с целью определить тип возбудителя и его количество.

Ни один из методов исследования не способен найти возбудителя непосредственно в гене, содержащемся в исследуемых материалах. ПЦР – это максимально точный и достоверный анализ на венерические заболевания и латентные вирусы в организме. В отличие от иных способов диагностики, анализ полимерной цепной реакции имеет ряд преимуществ:

  • он нацелен на обнаружение возбудителя инфекции;
  • является универсальным, поскольку позволяет выявлять сразу несколько типов инфекционных агентов;
  • при этом достаточно использования только одного биологического образца пациента;
  • обладает сверхчувствительностью, за счет чего вероятность возможных перекрестных реакций равняется нулю.

В сравнении с методом бактериологического посева, мазок на ПЦР считается самым надежным и быстрым диагностическим способом. Сама процедура лабораторной диагностики не занимает более четырех часов. Для получения результата бакпосева требуется не менее семи дней. Суть этого метода состоит в следующем: образец биоматериала помещают в благоприятную среду и наблюдают за активностью возбудителей, если таковые обнаруживаются, на протяжении всего периода исследования.

Анализ мазка на ПЦР способен раскрыть любое количество инфекционных возбудителей в организме, включая «скрытые» вирусы, не проявляющие себя никакой симптоматикой в течение длительного времени. Этот диагностический метод применяют тогда, когда необходимо подтвердить или опровергнуть наличие у пациента:

  • вирусного гепатита;
  • уреаплазмоза;
  • хламидиоза половых путей;
  • вируса папилломы человека;
  • герпеса;
  • злокачественных клеток;
  • микоплазмоза;
  • вагиноза;
  • мононуклеоза;
  • трихомониаза;
  • ВИЧ-инфекции.

В качестве исследуемого материала для анализа на ПЦР используют кровь, слюну, мокроту, мочу. Перед процедурой взятия соскоба пациенту необходимо подготовиться к нему. О том, как подготовиться перед анализом ПЦР-мазка, пациенту сообщит лечащий врач. Как правило, специалисты проводят с больными соответствующую консультацию. Например, кровь сдают натощак, а непосредственно перед соскобом шейки матки нежелательно проводить гигиенические процедуры.

Материалом для ПЦР-анализа могут быть практически любые биологические жидкости человека. Чужеродные ДНК болезнетворных микроорганизмов способны проникать в любую среду. Чаще всего в качестве образца для исследований применяется кровь и ее отдельные компоненты (плазма или сыворотка). В жидкой ткани могут присутствовать РНК вирусного гепатита, простого герпеса, цитомегаловируса, ВИЧ.

Широкие показания к исследованию имеют биологические жидкости. К ним относятся:

  • сок простаты;
  • сперма;
  • вагинальный секрет;
  • спинномозговая (ликвор);
  • амниотическая;
  • бронхоальвеолярный лаваж;
  • суставная жидкость;
  • слюна.

Для диагностики венерических заболеваний типа гонореи, хламидиоза, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомониаза, гарднереллеза, герпетических форм и др., у пациентов берут эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. У мужчин берут мазок ПЦР из уретры, а у женщин – из влагалища или шейки матки.

Отдельная категория – биоптаты. Чаще всего биоптаты исследуют с целью определения природы новообразования, подтверждения его злокачественности. Биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки требуются для выявления бактерии Хеликобактер пилори и ее количественной нагрузки.

Моча как биоматериал используется при инфекционных поражениях мочевыделительной системы. У мужчин мазок ПЦР нередко заменяют исследованием мочи, поскольку уретра у представителей сильного пола является универсальным элементом мочеполового тракта.

Читайте также:  Анализы на внутренние инфекции спб

Для диагностики туберкулеза и обструктивных болезней легких исследуется мокрота. Материал могут собирать в стерильный флакон (15-20 мл) или брать мазок из зева. ПЦР-анализ также используют для выявления осложненных форм микоплазмоза и хламидиоза – при отсутствии лечения и других неблагоприятных факторов данные виды инфекции способны поражать респираторную систему человека.

Способ подготовки зависит от того, какой именно биоматериал необходимо сдать на исследование:

  • Если для анализа требуется образец слюны, то процедуру проводят натощак. За несколько часов до исследования нельзя принимать лекарственные препараты. Кроме того, нежелательно пить много жидкости, тем более горячей, чтобы не нарушить естественный состав микрофлоры ротовой полости.
  • Мочу для ПЦР необходимо собирать с утра. Для этого необходимо подготовить стерильный контейнер и тщательно подмыться. Материал не должен содержать посторонних примесей, поэтому мужчинам во время мочеиспускания необходимо оттянуть крайнюю плоть, а женщинам – закрыть влагалище ватным тампоном.
  • За три дня до сдачи спермы мужчине необходимо отказаться от сексуальных контактов. В период подготовки нежелательно посещать баню, принимать горячую ванну, употреблять алкоголь, острые блюда. Перед сбором биоматериала нельзя мочиться, поэтому за сутки до анализа желательно ограничить потребление жидкости.
  • Кровь, как уже было отмечено, сдавать нужно с утра, натощак. За 2-3 дня до анализа желательно отказаться от жирной пищи, алкоголя и сильнодействующих медикаментов.

При подозрении на то или иное заболевание, передающееся половым путем, врач может назначить женщине мазок на ПЦР. В лабораториях, которые относятся к бюджетным поликлиникам, такие анализы обычно не делают. Прежде чем выбирать место для исследования, необходимо убедиться, что там проводят необходимую диагностику.

Большинство из тех заболеваний, которые передаются половым путем, могут не проявлять себя в течение нескольких месяцев, поэтому отсутствие симптомов не является гарантией того, что девушка не заражена. Будучи носителем инфекции и не догадываясь о болезни, женщина может не только заразить партнера, но и упустить время для успешного лечения. Венерические заболевания могут приводить к бесплодию, воспалению органов малого таза и прочим осложнениям.

Мазок ПЦР на инфекцию назначается женщине в том случае, если имел место контакт с малознакомым партнером. Если венерический статус последнего неизвестен, значит, присутствует риск инфицирования. Сдача мазка на ПЦР целесообразна в случае, если:

  • женщина сомневается в «чистоте» своего нового партнера, так как во время полового акта не использовался презерватив;
  • в течение года у женщины было несколько половых партнеров;
  • у пациентки ранее было выявлено венерическое заболевание;
  • наступила беременность.

Обследование на половые инфекции является обязательным для будущих матерей, поскольку некоторые из них, даже если протекают скрыто и не дают о себе знать, могут нести серьезную опасность жизни и здоровью плода.

Соскоб у женщин берет врач-гинеколог. Сама процедура взятия соскоба на полимеразную цепную реакцию ничем не отличается от обычного гинекологического исследования на влагалищную флору. Процедура взятия мазка ПЦР на хламидии, трихомониаз, вирус папилломы человека, гонорею и другие половые инфекции происходит по стандартной схеме:

  1. Пациентка подготавливается к процедуре и занимает место на гинекологическом кресле.
  2. Для сбора материала гинеколог надевает одноразовые стерильные перчатки и производит осмотр наружных половых органов.
  3. Далее во влагалище женщины вводят специальный расширитель, который позволяет с помощью зеркала осмотреть внутренний эпителий.
  4. Для забора биоматериала используется специальная щетка, которая не обладает впитывающими свойствами и не способна повредить слизистые оболочки. С ее помощью берут соскоб с цервикального канала, стенок влагалища. Обыкновенная ватная палочка для этой цели не подходит.
  5. Использованный медицинский прибор, содержащий вагинальный секрет, вставляют в пробирку, закрывают и отправляют в лабораторию.

Процедура взятия соскоба обычно безболезненна, но иногда пациентки испытывают неприятные ощущения из-за контакта чувствительной слизистой с гинекологическими инструментами. Боль в процессе забора биоматериала может свидетельствовать о протекающем воспалительном процессе.

  • Вступать в интимную связь перед процедурой нельзя – после последнего контакта должно пройти не менее двух суток.
  • Если женщина проходит лечение антибиотиками или применяет вагинальные суппозитории, за три недели до взятия мазка ПЦР курс терапии необходимо завершить. В противном случае результат анализа может оказаться ложным.
  • Во время менструации мазок не берут.
  • Непосредственно перед забором биоматериала нельзя спринцеваться или использовать антибактериальное мыло.
  • Перед процедурой нельзя посещать туалет, последний раз помочиться можно за три часа до процедуры.

Как уже было сказано, мазок ПЦР у мужчин берут из мочеиспускательного канала. Чтобы получить необходимый биоматериал, врач-уролог использует специальный тонкий зонд и вводит его на глубину 3-4 см. Процесс взятия мазка ПЦР на уреаплазму, гонорею и другие распространенные возбудители может принести боль и значительный дискомфорт. Но придется потерпеть. Нередко у мужчин мазок на ПЦР вызывает жжение и зуд, поэтому перед введением зонда с целью уменьшить дискомфортные ощущения пациентам рекомендуют массажировать уретру. Поэтапно процедура взятия соскоба выглядит так:

  • Мужчина освобождает половые органы от одежды.
  • Прежде чем вводить зонд в уретру, врач надевает одноразовые перчатки и осуществляет визуальный осмотр кожных покровов, слизистых оболочек на предмет высыпаний.
  • Затем с помощью инструмента уролог берет мазок методом ПЦР из мочеиспускательного канала. Зонд вводится на 3-4 см в глубину уретры и несколько раз прокручивается.
  • После извлечения зонда врач делает мазок на предметном стекле, которое впоследствии и отправит в лабораторию.

Помимо болезненных ощущений, процедура взятия соскоба вызывает у мужчин психологический дискомфорт. У тех, кто посещает уролога регулярно, подобных проблем не возникает. Кроме того, имеет значение правильная подготовка к мазку ПЦР. Она заключается в соблюдении следующих условий:

  • За несколько дней до анализа мужчине нужно отказаться от интимных связей.
  • Мазок берут в утренние часы.
  • Перед процедурой мужчине не нужно проводить гигиену половых органов, лучше всего принять душ с вечера.
  • За три часа до взятия образца биоматериала нельзя посещать туалет.

Так же, как и у женщин, сильнодействующие препараты могут исказить результат анализа на полимеразную цепную реакцию.

В принципе для того, чтобы разобраться в результатах лабораторного исследования на полимеразную цепную реакцию, не нужно обладать медицинским образованием. Расшифровать заключение экспертов достаточно просто. В ответах, которые выдают пациенту на руки, содержится информация о типе инфекции. Если возбудитель обнаружен, в заключении будет отмечен положительный результат. Он свидетельствует о наличии в организме исследуемого человека ДНК или РНК вируса.

Для эффективного лечения некоторых заболеваний необходимо иметь точные данные о количественной нагрузке, которая означает присутствие РНК-копий возбудителя на 1 мл крови. В большей степени определение количественной нагрузки важно при болезнях, спровоцированных условно-патогенной микрофлорой, поскольку инфекционные агенты активизируются и негативно воздействуют на организм человека только в том случае, если их количество превышает установленные пороги. Такой анализ ПЦР имеет особое значение для составления плана лечения и наблюдением за динамикой пациентов, инфицированных вирусным гепатитом или ВИЧ-инфекцией.

Исследования на ПЦР отличаются максимальной точностью, специфичностью и чувствительностью. Мазок на полимеразную цепную реакцию позволяет узнать, есть ли в организме обследуемого конкретный тип инфекции, определить ее штамм и количество РНК-копий. Метод ПЦР позволяет выявлять возбудителя даже при минимальном содержании ДНК вируса в представленных образцах биоматериала.

Сроки выполнения анализа во многом зависят от того, какой из существующих методов полимеразной цепной реакции применяется в конкретной лаборатории. Самым простым способом изучения биологического материала считается микроскопический. Обычно этот метод исследования не занимает много времени. За срочность пациентам приходится платить дополнительно, но если по каким-либо причинам есть необходимость в проведении экстренного исследования, результаты могут выдать пациенту на руки спустя час. Быстрее всего ответы анализов получают те, кто обращается в специализированные медучреждения, оснащенные собственной лабораторией. Иначе необходимо учитывать время, которое будет потрачено на доставку биоматериала.

Конечная стоимость анализа будет зависеть от того, на какую инфекцию необходимо проверить пациента. В Москве на лабораторные исследования методом ПЦР установлены такие цены:

  • заболевания, передающиеся половым путем – анализ выполняется в среднем за 1-2 дня, стоимость составляет 300-500 руб. (за обнаружение одного возбудителя);
  • такие же сроки и цены установлены на диагностику методом ПЦР вируса Эпштейна-Барра, папилломы человека, герпеса, цитомегаловирусной инфекции;
  • обследование на гепатит A, B, C, D, G обойдется пациенту в 650-800 руб., за уточнение количественной нагрузки придется заплатить еще 2000 руб. (на выполнение исследования потребуется 4-5 дней);
  • подтверждение наличия в желудочном или кишечном биоптате бактерии Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) – 400-600 руб.;
  • антитела и антигены ВИЧ— 400-500 руб.;
  • количество РНК ВИЧ в образцах крови – более 10 тыс. руб.

С целью экономии врачи рекомендуют выбирать пакеты анализов — такие исследования обходятся дешевле. Услуги со скидками предоставляются в большинстве сетевых клиник, где делают анализы по методу ПЦР («СМ-Клиника», «Инвитро», «ОН-Клиник») и многопрофильных медцентрах.

Если в мазке обнаружились патогенные возбудители, не нужно отчаиваться. Главное – это как можно скорее начать терапию. Сегодня существует немало препаратов, благодаря которым даже пациенты с неизлечимыми болезнями имеют все шансы на высокое качество и нормальную продолжительность жизни. Выбор тактики лечения должен осуществлять врач. Самолечение при инфекционных заболеваниях недопустимо.

источник

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – наиболее информативный, точный и современный метод диагностики инфекционных заболеваний, позволяющий обнаружить возбудителя в организме пациента, даже если количество вредоносных клеток исчисляется единицами, и они пока не успели спровоцировать развитие болезни. Еще 25 лет назад врачи не могли даже мечтать о таких возможностях, а сегодня сдать анализ ПЦР можно в любой крупной лаборатории.

ПЦР-диагностика открыла перед людьми многие другие ценные перспективы – с помощью этой методики можно изучать генные мутации, устанавливать отцовство, вычислять риск развития онкологических заболеваний, оценивать возраст и происхождение археологических артефактов и даже доказывать вину преступников, обнаруживая их ДНК в уликах. Но сегодня мы обсудим именно медицинский аспект этого открытия и расскажем вам, какие заболевания можно диагностировать методом ПЦР, как сдавать анализ и что означают его результаты.

Любое живое существо на Земле, будь то человек, животное или микроб, имеет гены – носители наследственной информации, которые представляют собой участки ДНК или РНК с определенной последовательностью нуклеотидов, уникальной для каждого организма. ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота) образует длинные молекулы, состоящие из двух нитей, закрученных в спираль друг относительно друга, и эти нити собираются из нуклеотидов, как из бусинок.

Допустим, требуется увидеть, есть ли в биологическом материале пациента ДНК или РНК инфекционного возбудителя или ее фрагменты. Но как это сделать, если молекулы крошечные и их мало? Методика ПЦР дает ответ: можно искусственно размножить вредоносную ДНК или РНК в лабораторных условиях, чтобы без труда ее обнаружить и идентифицировать.

Суть полимеразной цепной реакции состоит в том, чтобы разъединить нити молекул и попытаться «подсадить» к их противоположным концам фрагменты ДНК или РНК возбудителей – если они подойдут, значит, это и есть искомый микроб. А добавленный в пробирку фермент под названием «ДНК-полимераза» запустит синтез новых копий нужных участков молекул, они многократно размножатся и станут заметны. Далее мы опишем простыми словами, как происходит этот удивительный процесс и для чего это необходимо.

Американский ученый Кэрри Муллис изобрел ПЦР в 1983 году, а спустя десять лет, в 1993 году, получил за свое открытие Нобелевскую премию по химии. Однако методика была несовершенной и требовала существенных доработок. На сегодняшний день существует уже более десятка видов ПЦР для разных диагностических целей.

Итак, мы знаем, что длинная молекула ДНК или РНК образована двумя цепочками нуклеотидов, всего их бывает пять типов:

Ген – это устойчивая, многократно повторяемая уникальная комбинация нуклеотидов, и в одном гене их может быть несколько десятков или даже сотен, но все они располагаются друг напротив друга в строгом соответствии с правилом комплементарности. Это означает, что напротив гуанина в одной нити может стоять только цитозин из другой нити, а напротив аденозина – только тимин, иначе молекула ДНК не сложится и не закрутится в спираль. При этом пары «А – Т», «Т – А», «Г – Ц» и «Ц – Г» могут сочетаться в любых комбинациях: повторяться несколько раз подряд или идти вразнобой.

Схематически это можно представить так:

У РНК вместо тимина есть урацил, и такие молекулы выступают носителями генетической информации у некоторых вирусов, называемых ретровирусами. Например, у вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

Вот это свойство – комплементарность – является ключевым для ПЦР-диагностики. Ведь чтобы началась амплификация (синтез дополнительных копий участков ДНК на родительской матрице), нужно чтобы «подсаженный» фрагмент ей подходил. Такой фрагмент называется праймером или попросту «затравкой» и содержит до тридцати нуклеотидов, расположенных в уникальной для каждого возбудителя последовательности. Праймеры для проведения ПЦР-анализов производятся отдельно и доставляются в лабораторию в готовом виде. На сегодняшний день в распоряжении врачей есть праймеры сотен различных бактерий, вирусов и простейших.

Чтобы процесс начался, необходимо соблюсти ряд условий: добавить нужные реагенты и создать особый температурный режим. Все это происходит в приборе под названием «амплификатор» или «термоциклер», который может обеспечить нагревание и охлаждение пробирок с точностью до 0,1°C. Современные модификации амплификаторов могут замораживать и хранить готовые материалы, а некоторые даже имеют встроенный флуоресцентный детектор для определения результатов анализа ПЦР в режиме реального времени, когда нужно вычислить вирусную нагрузку (об этом мы расскажем ниже).

Внутри амплификатора взятый у пациента биоматериал проходит несколько десятков циклов, каждый из которых состоит из трех стадий: денатурации, отжига и элонгации. Это самая интересная часть ПЦР-диагностики, давайте рассмотрим весь процесс в подробностях, а начнем с необходимых реагентов.

Читайте также:  Анализы на внутриутробные инфекции у беременных

Стандартный набор выглядит так:

Биоматериал, предположительно содержащий ДНК возбудителя заболевания;

Праймеры, то есть два комплекта нуклеотидов, комплементарных противоположным концам цепочек нужного фрагмента ДНК;

ДНК-полимераза – термостабильный фермент, который выступает катализатором реакции амплификации. К этому ферменту очень серьезные требования: он должен сохранять активность при высокой температуре длительное время – несколько часов, пока повторяются циклы ПЦР. Поэтому для проведения анализа используются ферменты, выделенные из термофильных микроорганизмов: Thermus aquaticus (Taq-полимераза), Pyrococcus woesei (Pwo-полимераза), Thermus thermophilus (Tth-полимераза), Pyrococcus furiosus (Pfu-полимераза) и другие;

Mg2+, то есть ионы магния, двухвалентного металла, необходимого ДНК-полимеразе для эффективной работы;

dATP, dGTP, dCTP и dTTP, четыре дезоксирибонуклеозидтрифосфата, из которых будут строиться новые фрагменты цепочек ДНК;

Буферный раствор, позволяющий поддерживать оптимальные условия – в него входят некоторые соли и сывороточный белок альбумин.

Итак, реагенты помещены в пробирку, она установлена в амплификатор, что же происходит дальше? Запускается повторяющийся цикл из трех стадий, целью которых является амплификация ДНК инфекционных возбудителей, если таковые будут обнаружены в пробе.

Амплификатор нагревает пробирку до 94-98 °C и сохраняет такую температуру на протяжении 30 секунд – 2 минут, чтобы цепочки ДНК разошлись в стороны. Конкретное значение температуры и времени зависит от типа полимеразы и от того, какого именно микроба ищут. По-другому этот период называется стадией плавления. Большинство видов ПЦР-диагностики требуют прогрева пробирки перед первым циклом в течение 2-5 минут.

В игру вступают праймеры – один из них комплементарен первой нити развалившейся надвое цепочки ДНК, а другой подходит ко второй нити, причем, праймеры ограничивают начало и конец того участка молекулы, который необходимо достроить. Праймеры называют «затравкой», потому что фермент полимераза катализирует производство новых копий нужного фрагмента ДНК именно после соединения праймеров с родительской матрицей.

Чтобы это соединения произошло, амплификатор должен понизить температуру пробирки. Как правило, отжиг с праймерами производится при температуре на 5 °C ниже, чем нужно для их денатурации. Если установить слишком высокую температуру, праймеры будут плохо соединяться с матрицей, а если слишком низкую, они могут прикрепиться не в том месте, где нужно. Поэтому лучше показывают себя праймеры с температурой плавления выше 60 °C, ведь они позволяют проводить отжиг и элонгацию одновременно при 60-75 °C. Стадия отжига длится 30 секунд, и за этот короткий период полимераза уже успевает катализировать синтез двух-трех сотен новых нуклеотидов.

Происходит собственно амплификация, то есть размножение нужного участка вредоносной ДНК, если таковая обнаружена. В рамках одного цикла количество участков увеличивается вдвое, каждый последующий цикл опять приводит к двукратному увеличению их числа, то есть действует принцип геометрической прогрессии. А всего за время ПЦР-анализа проводится 30-50 циклов, что по времени занимает 2-3 часа.

Температура элонгации и длительность этой стадии зависит от того, какая полимераза используется и какова длина размножаемого участка ДНК. Например, для Taq и Pfu-полимеразы оптимальна температура 72 °C, при этом фермент произведет 1000 пар оснований за 1 минуту. По окончанию всех циклов ПЦР, как правило, запускают дополнительную, финальную стадию элонгации – она длится около 10 минут и позволяет достроить все оставшиеся участки ДНК.

Существует два способа определения итогов ПЦР-анализа: традиционный – электрофорез, когда в реакции задействуются обычные праймеры, а оценку результатов проводит человек, и более современный – сканирование в режиме реального времени, когда «затравки» меченые, а их свечение регистрирует прибор.

В первом случае все цепочки ДНК сортируются по размерам. У этого способа есть существенные недостатки: во-первых, лаборанту приходится открывать пробирки с материалом, следовательно, в них могут попасть посторонние фрагменты ДНК из соседних пробирок (контаминация ампликонами), и тогда результат анализа ПЦР будет ложноположительным. Во-вторых, оценку производит человек, что называется, «на глаз», поэтому достоверность полученных данных целиком зависит от внимательности и профессионализма специалиста.

В случае с ПЦР-диагностикой в режиме реального времени (Real-Time PCR) влияние человеческого фактора на итоги исследования минимально – пробирки помещаются в современный высокотехнологичный прибор и ни разу не открываются на протяжении всех циклов, включая анализ результатов, который тоже проводит умная машина. У этого способа только два очевидных недостатка – высокая стоимость и ограниченная доступность, поскольку амплификаторами нового поколения оснащена далеко не каждая лаборатория.

ПЦР-диагностика активно используется во многих отраслях клинической медицины:

Урогинекология и дерматовенерология. Это, пожалуй, самые заинтересованные в ПЦР врачебные направления. С помощью соответствующего анализа можно диагностировать любые заболевания, передающиеся половым путем: гонорею, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз, гарднереллез и т. д. Метод ПЦР позволяет обнаружить и вирусы, часто поражающие органы половой сферы человека – например, генитальный герпес или папилломовирус. А эти возбудители, как известно, обладают онкогенной активностью, то есть могут провоцировать развитие злокачественных опухолей (рака шейки матки у женщин, рака предстательной железы у мужчин);

Инфектология и эпидемиология. На втором (а возможно и на первом) месте по частоте использования ПЦР-диагностики находится инфекционная медицина, поскольку обсуждаемая методика позволяет диагностировать все распространенные заразные болезни, некоторые из которых несут смертельную угрозу здоровью людей и представляют эпидемиологическую опасность. Речь идет о ВИЧ, гепатитах, сифилисе, холере, бруцеллезе, токсоплазмозе, дифтерии, туляремии и прочих серьезных заболеваниях;

Донорство и трансплантология. ПЦР-диагностика позволяет службе крови оценивать качество донорского материала: выявлять опасных возбудителей и отсортировывать непригодный материал. А при пересадке органов очень важно оценить совместимость тканей донора и реципиента – тут на помощь тоже приходит методика ПЦР;

Генетика и репродуктология. С помощью специальных разновидностей ПЦР-анализа можно установить отцовство, просчитать риск возникновения опасных генных мутаций у предполагаемого потомства пары, обратившейся в центр планирования семьи, а также изучить взятый у беременной женщины биоматериал (например, амниотическую жидкость) с той же целью – вовремя обнаружить тяжелый порок развития плода;

Акушерство и неонатология. Современные родильные дома тоже часто используют ПЦР-диагностику, а некоторые даже имеют собственную лабораторию. Это нужно для того, чтобы максимально оперативно обследовать новорожденных малышей при подозрении на наличие у них внутриутробной или полученной во время родов инфекции: ВИЧ, сифилиса, хламидиоза, цитомегаловируса, мононуклеоза, краснухи и других;

Пульмонология и фтизиатрия. Метод ПЦР дает возможность специалистам этих врачебных направлений бороться с редкими, устойчивыми штаммами бактерий, вызывающих респираторные заболевания, например, атипичный хронический бронхит. В этом случае успех лечения целиком зависит от того, удастся ли точно идентифицировать возбудителя болезни и назначить адресную терапию. Кроме того, ПЦР-анализ позволяет проводить максимально раннюю диагностику туберкулеза;

Гастроэнтерология и аллергология. Врачи этих двух специальностей тоже крайне заинтересованы в методе ПЦР, поскольку он дает возможность обнаружить главную причину развития гастрита и язвы желудка – коварную бактерию Хеликобактер пилори, а также установить индивидуальную непереносимость продуктов питания у конкретного человека. Существуют врожденные особенности работы пищеварительного тракта, не позволяющие правильно перерабатывать и усваивать некоторые компоненты пищи, например, глютен или лактозу. Эти особенности наследуются генетически, следовательно, могут быть обнаружены методом ПЦР. Кстати, если у кого-то из родителей есть аллергия на определенный продукт (орехи, грибы, цитрусовые), то велика вероятность того, что у ребенка возникнет такая же проблема;

Онкология. Специалисты этого серьезнейшего направления медицины используют ПЦР-диагностику для оценки риска развития злокачественных опухолей у пациента, поскольку те клетки человеческого тела, которые подвергаются мутации и начинают бесконтрольно делиться, меняют структуру своей ДНК и начинают отличаться от здоровых клеток. Необходимо взять пункцию или биопсию подозрительных тканей и изучить материал методом ПЦР, чтобы установить масштабы угрозы.

А вот лишь неполный список тех вредоносных микроорганизмов, которые можно обнаружить с помощью ПЦР-анализа:

Обширное семейство герпес-вирусов, в том числе цитомегаловирус, варицелла-зостер, вирус Эпштейна-Барра и другие;

источник

Полимеразную цепную реакцию (Polymerase chain reaction, ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году американский биохимик Кэри Б. Мюллис. В 1993 году за это открытие он был удостоен Нобелевской премии.

Сегодня области применения ПЦР как современного метода молекулярной биологии чрезвычайно широки. Особое место диагностика ПЦР занимает в медицинской практике. И причина этому достаточно проста: полимеразная цепная реакция делает невозможное возможным.

Часто диагностику ПЦР образно описывают как метод, с помощью которого можно находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл. «Иглой» является крошечный фрагмент генетического материала клеток (ДНК или РНК).

Таким образом, открытие этого метода — одно из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние десятилетия. Развитие метода ПЦР позволило медицинской диагностике в целом подняться на качественно новый уровень.

Основа метода — многократное избирательное копирование (амплификация) определённого участка ДНК с целью получения такого количества генетического материала, которого будет достаточно для визуальной детекции. При этом многократно копируется (амплифицируется) только заданный участок ДНК при условии, что он присутствует в исследуемом биоматериале.

Кроме того, исследование помимо простого увеличения количества копий участков ДНК позволяет проводить другие манипуляции с генетическим материалом. Поэтому метод широко применяется в научных исследованиях, биологической и медицинской практике: в диагностике инфекционных и наследственных заболеваний, при выявлении мутаций, генотипировании, установлении отцовства, идентификация личности и др.

Сегодня ПЦР-диагностика инфекций — один из самых точных, чувствительных и эффективных клинических лабораторных методов. Причём спектр выявляемых возбудителей практически неограничен – была бы разработана тест-система для ПЦР-анализа искомого возбудителя.

Благодаря своей высокой чувствительности, ПЦР позволяет выявить возбудителя даже при его минимальном содержании (то есть в исследуемом биоматериале присутствуют всего несколько молекул его ДНК).

ПЦР выявляет возбудителей инфекционных заболеваний тогда, когда это невозможно сделать другими методами (иммунологическими, культуральными, микроскопическими). Поэтому для целого ряда возбудителей инфекций метод полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом», он проверен временем и апробирован клинически. В современной лабораторной диагностике инфекционных болезней ПЦР — самый чувствительный и специфичный метод прямого обнаружения возбудителей. Это позволяет не только установить этиологию заболевания, но и контролировать течение инфекционного процесса и оценивать эффективность проводимого лечения.

Анализ на ИППП методом ПЦР особенно актуальны при бессимптомном течении инфекционного процесса, вызванного безусловно-патогенными микроорганизмами (Хламидия , качественное определение ДНК; Микоплазма, качественное определение ДНК; Возбудитель гонореи, качественное определение ДНК; Возбудитель трихомоноза, качественное определение ДНК). Например, при хронической гонорее у женщин даже с помощью бактериологического метода часто не удается выявить гонококк, несмотря на имеющиеся симптомы хронического воспалительного процесса в шейке матки или уретре.

Современная ПЦР-диагностика позволяет не только выявить генетический материал возбудителей инфекций, но и определить концентрации их ДНК/РНК (количественный формат исследования). Определение количества возбудителей имеет важное значение в решении вопроса о назначении лечения, особенно если выявлены условно-патогенные микроорганизмы (Микоплазма, количественное определение ДНК; Типирование уреаплазмы, количественное определение ДНК) .

Одним из основных направлений развития метода ПЦР является разработанный в CMD формат «Мультипрайм», позволяющий выявить в одной пробирке (и одной реакции) нескольких патогенов.

В настоящее время известно как минимум 5 вирусов, способность которых вызывать поражение печени доказана. Это возбудители гепатита А, В, С, D, Е. В редких случаях гепатит может быть вызван вирусами Эпштейна-Барр и простого герпеса. Способность поражать печень таких агентов как вирусы ТТ и гепатита G сегодня признается не всеми. Все эти вирусы относятся к различным семействам, имеют разные биологические свойства и соответственно, тактика лечения будет тоже значительно отличаться в зависимости от этиологии гепатита.

Учитывая вышеизложенное, весьма актуальной проблемой является адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов с выявлением конкретного возбудителя. Без использования современных молекулярно-биологических методов это невозможно. Поэтому диагностика гепатитов методом полимеразной цепной реакции — один из самых важнейших шагов в установлении причины заболевания и определения дальнейшей тактики лечения.

В настоящее время для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции используется наиболее доступный и одновременно чувствительный подход — обнаружение в крови антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) – с последующим подтверждением положительных результатов анализа методом иммуноблоттинга (ИБ). Эффективность выявления лиц, инфицированных ВИЧ, с помощью данного подхода может достигать 99% и более.

Но серологическая диагностика ВИЧ-инфекции имеет ряд ограничений:

  1. Неэффективность в период т.н. «серологического окна» (в первые недели после заражения антитела не выявляются по причине их отсутствия или низкой концентрации).
  2. Антитела к ВИЧ длительное время выявляются у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.
  3. Ложноположительные результаты ИФА из-за присутствия в крови антител к антигенам, сходным с антигенами ВИЧ.
  4. Ложноотрицательные и сомнительные результаты ИФА и иммуноблоттинга (особенно у пациентов в терминальной стадии заболевания).

Поэтому анализы ПЦР при обследовании на ВИЧ-инфекцию сегодня находят всё более широкое применение. Согласно «Методическим рекомендациям о проведении обследования на ВИЧ-инфекцию» (утв. Минздравсоцразвития РФ 06.08.2007) «при наличии эпидемиологических критериев, свидетельствующих о недавнем риске заражения ВИЧ для пациентов и при этом предположительно ложноположительных или ложноотрицательных результатов в ИФА и ИБ, например, при обследовании детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, или пациентов в периоде «серонегативного окна» используется метод ПЦР, при котором обнаруживается генный материал ВИЧ…..». А в случае уже установленного диагноза ВИЧ-инфекции анализ методом ПЦР используется для прогноза, динамического наблюдения и мониторинга проводимой терапии.

В Центре молекулярной диагностики (CMD) можно сдать ПЦР-анализ на ВИЧ анонимно.

Для этого обращайтесь к разделу сайта «Где сдать анализы».

источник