Анализы на инфекции пцр серология ифа

Серологическое исследование (СИ) основано на способности антигенов и антител связываться друг с другом. СИ позволяет с точностью выявить наличие у пациента определённого вируса либо бактерии, группу крови и резус, реактивность организма к антибиотикам, аутоиммунные заболевания, гормональные нарушения, индивидуальную специфичность белков, определить эффективность терапии.

Система иммунитета борется с проникающими в организм болезнетворными микробами (антигенами) при помощи антител, при этом создавая к каждому из вирусов, паразитов либо бактерий свой определённый тип защиты.

Способность иммунитета вырабатывать особые вещества, нейтрализующие вредоносные частицы, была известна учёным давно. Но увидеть реакцию антиген-антитело в лабораторных условиях удалось только в конце XIX века. Было обнаружено, что в результате образования связки, комплексы выпадают в осадок, образуя хлопья либо помутнение. Такие реакции получили названия агглютинации и преципитации. В XX веке серология — наука о свойствах сыворотки, стремительно развивалась, обнаруживались новые методы диагностирования на основе реакций антиген-антитело. На сегодняшний день существует множество способов выявления иммунных комплексов, а СИ являются незаменимым звеном в диагностике, лечении, создании новых медицинских препаратов и вакцин.

Серологические исследования сопровождают современного человека на протяжении всей жизни. Первые анализы на выявление определённых антител проводятся, когда малыш находится ещё в утробе. Беременная женщина сдаёт кровь на различные СИ для определения возможного резус-конфликта либо инфекций, способных навредить вынашиваемому плоду. Когда ребёнок появляется на свет, его ожидают серологические исследования, позволяющие диагностировать врождённые заболевания. Впоследствии анализы сдаются по следующим причинам:

вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции;
выявление активности, стадии развития болезни;
гормональные патологии;
бесплодие;
аутоиммунные заболевания;
нарушение обмена веществ;
аллергии;
онкологические заболевания;
планирование беременности, период вынашивания, патологии беременных;
выявление ревматоидного фактора;
определение группы крови и резус-фактора;
эффективность терапии при различных болезнях;
эффективность вакцинации;
предоперационный и постоперационный период при необходимости оценки уровня некоторых антител;
изучение иммунного состояния организма.

Так как серологические исследования охватывают широкий спектр анализов, в каждом конкретном случае может понадобиться определённая подготовка, но существуют общие правила сдачи серологического теста:

За сутки до исследования следует ограничить в рационе жирное и жареное, исключить алкоголь.
Последний приём пищи должен завершиться за 10 — 12 часов до анализа.
В день сдачи крови не следует употреблять кофе, чай либо иные напитки. Можно в небольшом количестве пить чистую воду.
Лекарственные средства перед анализом исключаются. Если приём отменить невозможно, необходимо предоставить врачу полный перечень препаратов, в том числе витаминов, пероральных контрацептивов.
Все другие исследования либо медицинские манипуляции проводятся после СИ.
Курение рекомендуется прекратить за 12 часов до взятия образца крови.
В предыдущий день следует избегать физических и эмоциональных нагрузок, а перед исследованием желательно 15 минут посидеть в полном покое.
СИ назначаются на утреннее время и сдаются натощак.

Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.

Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).

Методы серологических исследований:

Агглютинация. Связывание Ат с Аг с последующим формированием хлопьев либо осадка. Применяются прямые, непрямые, развёрнутые, ориентировочные реакции, позволяющие выявить антитела в сыворотке.
Гемагглютинация. Используются эритроциты с адсорбированными на них Аг либо Ат, которые склеиваются с соответствующими Ат и Аг. Образуемые комплексы выпадают в виде фестонного осадка.
Преципитация. Образование комплекса Аг-Ат с последующим осаждением в виде помутнения, именуемого преципитатом.
Коагглютинация. Выявление Аг при помощи Ат, адсорбированных на белке клеток стафилококка.
Торможение гемагглютинации. Ат иммунной сыворотки подавляют вирусные Аг, в итоге вирусы теряют способность склеиваться с эритроцитами.
Непрямая реакция Кумбса. Определяются Ат к поверхностным Аг эритроцитов.
Кольцепреципитация. Проводится на основе иммунной сыворотки с наслоением растворимого Аг.
Двойная радиальная иммунодиффузия. Реакция основана на диффундировании компонентов антисыворотки и Аг в лунках агара либо агарозы.
Реакция связывания комплемента. Связь Аг и Ат сопровождается адсорбцией комплемента, в качестве индикатора используются эритроциты барана и Ат к ним в составе гемолитической сыворотки.
Нейтрализация. Основана на нейтрализации вирусного агента антителами.
Реакции, основанные на маркировании Ат и Аг флуоресцентным либо ферментным составом — иммунофлюорисцентный (РИФ) и иммуноферментный (ИФА) методы.

Данный метод основан на использовании Ат, меченных флуоресцентным веществом. Чаще всего в качестве метки используется флуоресцеинизотиоционат, обладающий зелёным свечением в лучах ультрафиолета. Результат анализа оценивается по степени яркости свечения. Может быть использован ручной метод определения при помощи люминесцентного микроскопа, оптического микроскопа с люминесцентной насадкой, а также автоматический способ с применением микрочипового цитомера, проточного цитомера либо роботизированного флуоресцентного микроскопа.

РИФ проводится прямым и непрямым методом. Прямой способ означает непосредственное связывание сорбированного Аг с меченым Ат. Непрямой метод подразумевает использование немаркированных Ат для связки с Аг, а затем добавление меченых Ат, что позволяет избежать неспецифических реакций.

ИФА основан на выявлении комплексов Аг-Ат при помощи маркирования одного из компонентов. В качестве метки используются различные ферменты, которые в результате ферментативной реакции образуют окрашивание. Существуют разнообразные методы ИФА, их можно классифицировать как гомогенные и гетерогенные методы.

Гомогенные означают, что все этапы реакции происходят в растворе.

Гетерогенные методы включают разделение на фазы с использованием твёрдого носителя.

Гомогенно-гетерогенные способы основываются на том, что комплексы Аг-Ат формируются в растворе, а затем для разделения используется твёрдая фаза.

Существует множество вариаций методов ИФА, некоторые из них представлены ниже.

Сэндвич-метод. К иммобилизованным Ат добавляется раствор с Аг, после образования комплексов носитель отмывают от лишних компонентов и добавляют маркированные Ат. В результате, Аг оказываются зажатыми иммобилизованными и мечеными Ат, откуда и произошло название метода.
Неконкурентный непрямой ИФА. К иммобилизованным Аг присоединяют исследуемую сыворотку с Ат. Когда образуются комплексы, лишние Ат смывают и добавляют маркированные Ат, способные связаться с прикреплёнными к поверхностям лунок иммунными комплексами.
Конкурентный прямой ИФА. К иммобилизованным Аг вносят исследуемую сыворотку и конъюгат, содержащий маркированные Ат. Формируются комплексы Аг-Ат нескольких видов: с мечеными Ат и с немаркированными Ат, которые вступают между собой в конкуренцию за связь с Аг.

Если у пациента присутствует определённая симптоматика либо иные исследования указывают на заболевание, назначается серологический анализ.

Серологические исследования используют для диагностики следующих инфекций:

вирус гепатита А, В, С, D, Е;
сифилис;
ВИЧ;
герпес;
цитомегаловирус;
краснуха;
корь;
паротит;
Эпштейн-Барр;
хеликобактер;
хламидии;
микоплазмы;
токсоплазмы;
лямблии;
гельминты;
уреаплазмы;
парвовирус;
вирус ветряной оспы;
вирус клещевого энцефалита;
вирус Денге;
коклюш;
боррелии;
легионеллы.

Высокая чувствительность и специфичность.
Широкий спектр определяемых инфекций.
Ранняя диагностика инфицирования.
Возможность мониторинга развития заболевания.
Быстрота и удобство в исполнении.
Возможность использования минимального объёма исследуемого материала.
Безопасность исследования.

источник

Как и анализ ПЦР, ИФА-методы широко применяются в современной лабораторной диагностике ИППП. При чем врач может назначить Вам не только сдать ПЦР анализ, но и провести ИФА — диагностику для выявления определенной инфекции. С непрофессиональной точки зрения пациента подобный комплекс исследования вызывает много вопросов, поскольку все лабораторные методы исследования на первый взгляд кажутся абсолютно одинаковыми. Но, несмотря на внешнюю схожесть, разница между ПЦР, ИФА и другими иммунологическими исследованиями все же есть.

ИФА-анализ основан на выявлении не самой инфекции, а ее продуктов жизнедеятельности — белов-маркеров. ПЦР-анализ напротив выявляет существующие в настоящее время инфекционные агенты (бактерии, вирусы, грибы).

Наименование услуги	Стоимость
Жидкостная цитология	2 200 руб.
Соскоб на грибы (демодекс)	650 руб.
Анализ мочи общий	350 руб.
Анализ мочи (2-х стаканная проба)	630 руб.
Анализ кала общий (копрограмма)	430 руб.
Смотреть весь прайс-лист

РИФ, как и другие иммунологические методы исследования, тоже несколько уступает достоверности ПЦР-инфекции. Суть РИФ такова, при проведении анализа антигены возбудителя (молекулы белка, свойственные инфекции) ищут антителами к ним. Если антитело «обнаружит» белок, антиген инфекции, значит потенциально человек инфицирован. Однако свойство антитела таково, что они могут реагировать не с одним, а с разными антигенами — так называемые перекрестно-реагирующие антигены. Из-за этого специфичность (способность метода выявлять лишь тот инфекционный агент, для которого данный метод исследования назначен) у РИФ чуть ниже, чем у ПЦР.

Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать. Обычно это происходит вследствие нескольких причин:

«Иммунологический след» — «след» от уже перенесенной инфекции. В ответ на внедрение инфекции организм начинает вырабатывать антитела, в частности, антитела класса IgG. Эти антитела «улавливает» ИФА-анализ. Метод ПЦР реагирует только на наличие молекул ДНК инфекции в организме. В такой ситуации ПЦР-анализ дает отрицательный результат, а ИФА — положительный. При чем в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы положительный результат ИФА-диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления.
Разница в оборудовании для проведения диагностики. Получение положительного результата ИФА и ПЦР — отрицательного, может быть вызвано использованием особых тест-систем в ИФА-анализе, которые выявляют все виды бактерий, в том числе те, которые в определенном количеств в норме содержатся в организме человека. Тест-система, используемая в ПЦР-анализе, может быть основана только на определение особого вида болезнетворных бактерий. Например, тест-система для ИФА-диагностики настроена на выявление всех видовхламидий : С. Pneumonia, C. Pecorum, C. Psitaci. А в проведении ПЦР-анализа может быть использована тест-система, выявляющая только С. Trachomatis. Вот почему, ИФА-анализ на С. Pneumonia будет положительным, а ПЦР — отрицательным.
Разница в используемом материале. Материал для ПЦР получают из места предполагаемой локализации инфекции. Для ИФА-диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР-диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, хламидии могут локализироваться в разных местах организма. Вызвав хронический сальпингит , проведенный в области шейки матки анализ ПЦР хламидии не обнаружит. Но ИФА-диагностика все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс.
Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР-диагностики. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдать врач-лаборант в том случае, если инфекция «свежая», т. е. даже при наличии определенных симптомов уровень антител класса IgG в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. Для половых инфекций подобный период «молчания» ИФА-диагностики может достигать двух недель.

Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР-анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА-диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.

Провести комплексную лабораторную диагностику, сдать ПЦР, ИФА и другие анализы Вы можете в медицинском центре «Евромедпрестиж».

источник

ПЦР: СВЕРХЧУВСТВИТЕЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ
ПЦР — ЭТО МЕТОД ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ, НАПРАВЛЕННЫЙ НА ВЫЯВЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ТРЕХБУКВЕННЫЙ ВАРИАНТ — ЭТО АББРЕВИАТУРА НАЗВАНИЯ «ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ». СОБСТВЕННО, В ЭТОМ НАЗВАНИИ И ОТРАЖАЕТСЯ СУТЬ МЕТОДА

Метод ПЦР был разработан в 1983 году Кэри Мюллисом, за что он был удостоен Нобелевской премии. Изначально метод использовался в основном для научных целей, но затем, разглядев его перспективность и эффективность, метод стали продвигать в практическую медицину. За генетическую информацию в живом организме любого размера отвечает ДНК — двухспиральная дезоксирибонуклеиновая кислота, состоящая из последовательности четырех нуклеотидов, которые принято обозначать буквами А (аденин), Г (гуанин), Т (тимидин) и Ц (цитозин). Одно из основных правил генетики – правило комплементарности, то есть нуклеотиды соседних спиралей ДНК соединяются только в определеном порядке: А с Т, Г с Ц, и никак иначе. У каждого живого создания (бактерия, вирус, рыба, зверь) – своя ДНК, причем для выявления конкретного организма достаточно иметь лишь небольшой участок этого хранилища генетической информации. Некоторые виды микроорганизмов, например, вирус иммунодефицита человека, хранят генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК, но и ее фрагменты можно находить с помощью ПЦР. Именно на обнаружении этого небольшого, но уникального для каждого отдельного организма участка и построен принцип ПЦР. Для каждого возбудителя создан свой специфический генетический детектор, эталонный фрагмент ДНК, который по принципу комплементарности точно обнаруживает «свой» фрагмент ДНК и запускает реакцию создания огромного количества его копий. Один цикл ПЦР длится около трех минут, количество копий растет в геометрической прогрессии. Таким образом, за несколько часов количество фрагментов увеличивается в несколько миллиардов раз.

ДОСТОИНСТВА
Понятно, что теперь определить, какой возбудитель у данной конкретной инфекции, достаточно легко. Какую же практическую выгоду получает человек, когда отправляется на поиски вредоносных микроорганизмов, вооруженный ПЦР?

— Безусловно, одно из главных достоинств — это универсальность метода. ПЦР позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК, даже когда бессильны другие методы. Оборудование, используемое для ПЦР, стандартно, оно не зависит от того, что именно и где именно мы ищем.
— Следующий плюс — высокая специфичность. В материале, направленном на исследование, определяется уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для конкретного возбудителя. Таким образом, можно говорить, что специфичность метода достигает 100%. Кроме того, это позволяет одновременно, в одном и том же материале, проводить поиск нескольких возбудителей без какого-либо ущерба для качества ответа.
— Метод ПЦР обладает высочайшей чувствительностью – мы уже говорили о том, что возможно найти всего один фрагмент генетического материала возбудителя.

— Несомненное преимущество метода – оперативность. Постановка реакции занимает несколько часов, таким образом, вся диагностика, от момента сдачи материала на анализ до получения результата, отнимет всего один день.
— При помощи ПЦР определяют возбудителя, а не реакцию на его внедрение со стороны организма. Таким образом, появилась возможность точно диагностировать заболевание еще в инкубационном периоде, когда нет никаких клинических или лабораторных признаков болезни. Когда нужно делать?
Когда следует бежать в лабораторию, чтобы проанализировать итоги вашего летнего отпуска?
Специалисты советуют делать это в следующих случаях: выделения, зуд, чувство жжения в области половых органов, резко изменившийся запах от половых органов, дискомфорт при мочеиспускании, необычный характер выделений (цвет, количество, консистенция), случайный половой контакт без применения презерватива. Безусловно, ПЦР — мощный и эффективный диагностический инструмент, позволяющий быстро и точно найти возбудителей очень многих инфекций. Чаще всего его используют для диагностики именно заболеваний, передающихся половым путем.

В любом случае нельзя ограничиваться только одним методом. Лучше всего комбинировать различные методы исследования – помимо определения самого возбудителя методом ПЦР? необходимо оценивать и иммунный ответ организма, который определяется традиционными серологическими методами, например — ИФА.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)
В основе иммуноферментного анализа (ИФА) лежит иммунная реакция антигена с антителом.
Для исследования методом ИФА используется кровь из вены, полученная натощак.
Иммуно-ферментный анализ (ИФА) применяется в диагностике урогенитальных инфекций для выявления наличия в сыворотке крови специфических иммуноглобулинов (Ig или антител) — белков, вырабатываемых клетками иммунной системы, направленных на борьбу с внедрившимся в организм инфекционным агентом. Связываясь с микробной клеткой или продуктами ее жизнедеятельности, иммуноглобулины нейтрализуют их и способствуют их элиминации. Таким образом, иммуноглобулины представляют собой суть гуморального иммунитета, то есть иммунитета, обусловленного субстанциями, содержащимися в жидкостях тела, в отличие от клеточного иммунитета, связанного с присутствием специальных клеток иммунной системы.
На каждый вид (и даже подвид) возбудителя вырабатываются свои определенные антитела, которые, как правило, не связываются ни с каким другим инфекционным агентом. Благодаря этому определение антител обеспечивает достаточно высокую специфичность анализа. Из пяти классов Ig в диагностике инфекционных заболеваний чаще всего используются Ig трех типов А, M и G. Прежде всего нужно помнить, что существует некоторый промежуток времени с момента внедрения инфекционного агента в организм и до момента появления антител в сыворотке крови — это так называемый серонегативный период. Для различных инфекций и отдельных индивидуумов он может быть неодинаков, в среднем же для возбудителей урогенитальных заболеваний он составляет 1-4 недели.

РАСХОЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИФА И ПЦР
Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать. Обычно это происходит вследствие нескольких причин:
— «Иммунологический след» — «след» от уже перенесенной инфекции. В ответ на внедрение инфекции организм начинает вырабатывать антитела, в частности, антитела класса IgG. Эти антитела «улавливает» ИФА-анализ. Метод ПЦР реагирует только на наличие молекул ДНК инфекции в организме. В такой ситуации ПЦР-анализ дает отрицательный результат, а ИФА — положительный. При чем в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы положительный результат ИФА-диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления.
— Разница в оборудовании для проведения диагностики. Получение положительного результата ИФА и ПЦР — отрицательного, может быть вызвано использованием особых тест-систем в ИФА-анализе, которые выявляют все виды бактерий, в том числе те, которые в определенном количеств в норме содержатся в организме человека. Тест-система, используемая в ПЦР-анализе, может быть основана только на определении особого вида болезнетворных бактерий. Например, тест-система для ИФА-диагностики настроена на выявление всех видов хламидий : С. Pneumonia, C. Pecorum, C. Psittaci, а в проведении ПЦР-анализа может быть использована тест-система, выявляющая только С. Trachomatis. Вот почему ИФА-анализ на С. Pneumonia будет положительным, а ПЦР — отрицательным.
— Разница в используемом материале.
Материал для ПЦР получают из места предполагаемой локализации инфекции. Для ИФА-диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР-диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, хламидии могут локализироваться в разных местах организма. Вызвав хронический сальпингит, проведенный в области шейки матки анализ ПЦР хламидии не обнаружит. Но ИФА-диагностика все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс.
— Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР-диагностики. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдать врач-лаборант в том случае, если инфекция «свежая», т. е. даже при наличии определенных симптомов уровень антител класса IgG в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. Для половых инфекций подобный период «молчания» ИФА-диагностики может достигать двух недель.

источник

Старинным, но эффективным методом лабораторной диагностики можно считать микроскопию. Материал наносится на стекло и рассматривается под сильным увеличением. Таким образом легко обнаружить болезни, вызываемые одноклеточными паразитами (малярия, лямблиоз, токсоплазмоз, амебиаз).

С бактериями приходится сложнее. Для их диагностики приходится ожидать, пока культура подрастет на питательной среде. А после этого провести исследование полученной колонии. Такая методика требует времени (7-10 дней), а полученный результат часто не имеет значения из-за прогрессирования болезни. Однако, при вялотекущих инфекциях этот способ позволяет определить чувствительность микроба к антибактериальному препарату.

Сложнее всего выращивать вирусы. Вирусологический метод применяют крайне редко, т.к. большинство вирусных инфекций развиваются слишком интенсивно.

Серодиагностика приобретает огромное значение в определении и лечении заболеваний. Этот метод позволяет определить изменение титра антител в крови пациента на протяжении всей болезни. Серологическая реакция идет между антителами сыворотки крови пациента и известным антигеном. Серодиагностика может использоваться для определения всех типов возбудителей (и бактерий, и протистов, и вирусов).

На болезнетворный агент (антиген) в организме человека вырабатывается особое защитное соединение (антитело). Выработка антител – это своеобразная защитная реакция организма, которая впоследствии позволит ему эффективнее защищаться от чужеродных белков (антигенов).

Чаще всего серодиагностика проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА). Что это за тест? Это обычная реакция на выявление связи антиген-антитело. Но для выявления этого комплекса используют фермент, сигнализирующий о наличии соединения. ИФА используется не только для диагностики инфекционных заболеваний. С помощью этой методики можно определять онкомаркеры, гормоны и аллергены.

ИФА позволяет определять три типа антител: иммуноглобулин А, М, G. По наличию определенного типа иммуноглобулинов можно судить о стадии заболевания. Например, если ИФА выявил только IgA, это говорит о начальной стадии заболевания. На 2-4 неделе болезни появляются Igтипа М. И только через месяц появляются все типы, учитывая IgG. После выздоровления в организме остается метка об инфекции. Это IgG(иногда и IgA), при этом титр их сильно снижается. На основе этих данных выставляется диагноз, отслеживается динамика болезни и ответ организма на проводимое лечение.

В клинике ИФА широко применяют для определения возбудителей вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции, сифилиса, хламидий и паразитов. Спектр возможностей исследования неограничен. Диагностика инфекций этим методом имеет ряд достоинств и недостатков. Поговорим о них подробнее.

ИФА позволяет выявить болезнь на ранней стадии. Например, при диагностике Лайм-боррелиоза антитела образуются через месяц после инфицирования, а клиническая картина может развиться спустя месяцы и годы.
ИФА дает высокую точность. Выявить комплекс «антиген-антитело» удается в 90% случаев.
ИФА остается довольно простым и дешевым методом исследования. Примерная цена услуги зависит от вида анализа и варьируется в пределах 300-700 рублей. Немного дороже обойдется количественный анализ – 600-1300 рублей.
ИФА за счет своей простоты и дешевизны часто используется как метод скрининга. С его помощью удается вычислить переносчиков заболеваний среди обширной популяции.
ИФА проводится довольно быстро, ответ не заставит себя ждать.

Внимание! Расшифровка метода проводится врачом. Только специалист может оценить результаты обследования и сопоставить их с клинической картиной.

Однако, при всех достоинствах методика иммуноферментного анализа несовершенна и часто используется в сочетании с другими способами диагностики. Результаты анализа могут быть ложноположительными (часто наблюдается при наличии ревматологических и аутоиммунных болезней) и ложноотрицательными (при сильном иммунодефиците). Тогда диагностика инфекционных заболеваний переходит на молекулярный уровень. Про него расскажем ниже.

ПЦР диагностика инфекций была создана в конце 20 века. Этот метод позволяет находить генетический материал возбудителя болезни даже в капле крови. Также можно исследовать мочу, мокроту, смывы из носоглотки и любые другие биологические объекты.

Какие возбудители чаще всего нуждаются в ПЦР-диагностике? В клинике полимеразную цепную реакцию используют для подтверждения диагноза СПИД, инфекционный гепатит, папилломавирус, хламидиоз, токсоплазмоз, микоплазмоз, уреаплазмоз. Но при желании с помощью ПЦР можно определить наличие любой инфекции.

Метод ПЦР бывает не только качественным, но и количественным (позволяет определить массивность инфекционных частиц). Это свойство широко используется при лечении вирусных гепатитов.

Расшифровка качественного анализа не требует медицинского образования. Если ДНК (РНК) возбудителя обнаружена в крови (соскобе, моче и т.д.), то диагноз подтверждается. Количественный анализ трактуется только врачом. В целом метод быстр, прост и удобен. Цена на такой вид анализа остается приемлемой. Например, диагностика инфекционных гепатитов варьируется от 400-800 рублей, половые инфекции можно определить за 300-500 рублей.

Перед проведением любого анализа проконсультируйтесь с врачом. Только доктор подскажет вам быстрый путь определения инфекции. Удачи!

Будьте бережны и внимательны к своему здоровью – выберите подходящего вам врача и запишитесь на приём по телефону: 8 (499) 969-20-36 (для жителей Москвы и Московской области).

источник

ПЦР: СВЕРХЧУВСТВИТЕЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ

ПЦР — это метод лабораторной диагностики, направленный на выявление возбудителей инфекционных заболеваний. Трехбуквенный вариант — это аббревиатура названия «полимеразная цепная реакция». Собственно, в этом названии и отражается суть метода

За генетическую информацию в живом организме любого размера отвечает ДНК — двухспиральная дезоксирибонуклеиновая кислота, состоящая из последовательности четырех нуклеотидов, которые принято обозначать буквами А (аденин), Г (гуанин), Т (тимидин) и Ц (цитозин). Одно из основных правил генетики – правило комплементарности, то есть нуклеотиды соседних спиралей ДНК соединяются только в определеном порядке: А с Т, Г с Ц, и никак иначе. У каждого живого создания (бактерия, вирус, рыба, зверь) – своя ДНК, причем для выявления конкретного организма достаточно иметь лишь небольшой участок этого хранилища генетической информации. Некоторые виды микроорганизмов, например, вирус иммунодефицита человека, хранят генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК, но и ее фрагменты можно находить с помощью ПЦР. Именно на обнаружении этого небольшого, но уникального для каждого отдельного организма участка и построен принцип ПЦР.

Для каждого возбудителя создан свой специфический генетический детектор, эталонный фрагмент ДНК, который по принципу комплементарности точно обнаруживает «свой» фрагмент ДНК и запускает реакцию создания огромного количества его копий. Один цикл ПЦР длится около трех минут, количество копий растет в геометрической прогрессии. Таким образом, за несколько часов количество фрагментов увеличивается в несколько миллиардов раз.

Понятно, что теперь определить, какой возбудитель у данной конкретной инфекции, достаточно легко.

Какую же практическую выгоду получает человек, когда отправляется на поиски вредоносных микроорганизмов, вооруженный ПЦР?

Безусловно, одно из главных достоинств — это универсальность метода. ПЦР позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК, даже когда бессильны другие методы. Оборудование, используемое для ПЦР, стандартно, оно не зависит от того, что именно и где именно мы ищем.
Следующий плюс — высокая специфичность. В материале, направленном на исследование, определяется уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для конкретного возбудителя. Таким образом, можно говорить, что специфичность метода достигает 100%. Кроме того, это позволяет одновременно, в одном и том же материале, проводить поиск нескольких возбудителей без какого-либо ущерба для качества ответа.
Метод ПЦР обладает высочайшей чувствительностью – мы уже говорили о том, что возможно найти всего один фрагмент генетического материала возбудителя.
Несомненное преимущество метода – оперативность. Постановка реакции занимает несколько часов, таким образом, вся диагностика, от момента сдачи материала на анализ до получения результата, отнимет всего один день.
При помощи ПЦР определяют возбудителя, а не реакцию на его внедрение со стороны организма. Таким образом, появилась возможность точно диагностировать заболевание еще в инкубационном периоде, когда нет никаких клинических или лабораторных признаков болезни. Когда нужно делать?

Когда следует бежать в лабораторию, чтобы проанализировать итоги вашего летнего отпуска?

Специалисты советуют делать это в следующих случаях: выделения, зуд, чувство жжения в области половых органов, резко изменившийся запах от половых органов, дискомфорт при мочеиспускании, необычный характер выделений (цвет, количество, консистенция), случайный половой контакт без применения презерватива. Безусловно, ПЦР — мощный и эффективный диагностический инструмент, позволяющий быстро и точно найти возбудителей очень многих инфекций. Чаще всего его используют для диагностики именно заболеваний, передающихся половым путем.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)

В основе иммуноферментного анализа (ИФА) лежит иммунная реакция антигена с антителом.

Для исследования методом ИФА используется кровь из вены, полученная натощак.

Иммуно-ферментный анализ (ИФА) применяется в диагностике урогенитальных инфекций для выявления наличия в сыворотке крови специфических иммуноглобулинов (Ig или антител) — белков, вырабатываемых клетками иммунной системы, направленных на борьбу с внедрившимся в организм инфекционным агентом. Связываясь с микробной клеткой или продуктами ее жизнедеятельности, иммуноглобулины нейтрализуют их и способствуют их элиминации. Таким образом, иммуноглобулины представляют собой суть гуморального иммунитета, то есть иммунитета, обусловленного субстанциями, содержащимися в жидкостях тела, в отличие от клеточного иммунитета, связанного с присутствием специальных клеток иммунной системы.

На каждый вид (и даже подвид) возбудителя вырабатываются свои определенные антитела, которые, как правило, не связываются ни с каким другим инфекционным агентом. Благодаря этому определение антител обеспечивает достаточно высокую специфичность анализа. Из пяти классов Ig в диагностике инфекционных заболеваний чаще всего используются Ig трех типов А, M и G. Прежде всего нужно помнить, что существует некоторый промежуток времени с момента внедрения инфекционного агента в организм и до момента появления антител в сыворотке крови — это так называемый серонегативный период. Для различных инфекций и отдельных индивидуумов он может быть неодинаков, в среднем же для возбудителей урогенитальных заболеваний он составляет 1-4 недели.

РАСХОЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИФА И ПЦР

«Иммунологический след» — «след» от уже перенесенной инфекции. В ответ на внедрение инфекции организм начинает вырабатывать антитела, в частности, антитела класса IgG. Эти антитела «улавливает» ИФА-анализ. Метод ПЦР реагирует только на наличие молекул ДНК инфекции в организме. В такой ситуации ПЦР-анализ дает отрицательный результат, а ИФА — положительный. При чем в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы положительный результат ИФА-диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления.
Разница в оборудовании для проведения диагностики. Получение положительного результата ИФА и ПЦР — отрицательного, может быть вызвано использованием особых тест-систем в ИФА-анализе, которые выявляют все виды бактерий, в том числе те, которые в определенном количеств в норме содержатся в организме человека. Тест-система, используемая в ПЦР-анализе, может быть основана только на определении особого вида болезнетворных бактерий. Например, тест-система для ИФА-диагностики настроена на выявление всех видов хламидий: С. Pneumonia, C. Pecorum, C. Psittaci, а в проведении ПЦР-анализа может быть использована тест-система, выявляющая только С. Trachomatis. Вот почему ИФА-анализ на С. Pneumonia будет положительным, а ПЦР — отрицательным.
Разница в используемом материале.

Материал для ПЦР получают из места предполагаемой локализации инфекции. Для ИФА-диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР-диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, хламидии могут локализироваться в разных местах организма. Вызвав хронический сальпингит, проведенный в области шейки матки анализ ПЦР хламидии не обнаружит. Но ИФА-диагностика все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс.

Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР-диагностики. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдать врач-лаборант в том случае, если инфекция «свежая», т. е. даже при наличии определенных симптомов уровень антител класса IgG в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. Для половых инфекций подобный период «молчания» ИФА-диагностики может достигать двух недель.

Как и анализ ПЦР, ИФА-методы широко применяются в современной лабораторной диагностике ИППП . При чем врач может назначить Вам не только сдать ПЦР анализ, но и провести ИФА — диагностику для выявления определенной инфекции. С непрофессиональной точки зрения пациента подобный комплекс исследования вызывает много вопросов, поскольку все лабораторные методы исследования на первый взгляд кажутся абсолютно одинаковыми. Но, несмотря на внешнюю схожесть, разница между ПЦР, ИФА и другими иммунологическими исследованиями все же есть.

РИФ , как и другие иммунологические методы исследования, тоже несколько уступает достоверности ПЦР-инфекции. Суть РИФ такова, при проведении анализа антигены возбудителя (молекулы белка, свойственные инфекции) ищут антителами к ним. Если антитело «обнаружит» белок, антиген инфекции, значит потенциально человек инфицирован. Однако свойство антитела таково, что они могут реагировать не с одним, а с разными антигенами — так называемые перекрестно-реагирующие антигены. Из-за этого специфичность (способность метода выявлять лишь тот инфекционный агент, для которого данный метод исследования назначен) у РИФ чуть ниже, чем у ПЦР.

Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать. Обычно это происходит вследствие нескольких причин:

«Иммунологический след» — «след» от уже перенесенной инфекции . В ответ на внедрение инфекции организм начинает вырабатывать антитела, в частности,антитела класса IgG . Эти антитела «улавливает» ИФА-анализ. Метод ПЦР реагирует только на наличие молекул ДНК инфекции в организме. В такой ситуации ПЦР-анализ дает отрицательный результат, а ИФА — положительный. При чем в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы положительный результат ИФА-диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления.
Разница в оборудовании для проведения диагностики . Получение положительного результата ИФА и ПЦР — отрицательного, может быть вызвано использованием особых тест-систем в ИФА-анализе, которые выявляют все виды бактерий, в том числе те, которые в определенном количеств в норме содержатся в организме человека. Тест-система , используемая в ПЦР-анализе, может быть основана только на определение особого вида болезнетворных бактерий. Например, тест-система для ИФА-диагностики настроена на выявление всех видов хламидий: С. Pneumonia, C. Pecorum, C. Psitaci. А в проведении ПЦР-анализа может быть использована тест-система, выявляющая только С. Trachomatis . Вот почему, ИФА-анализ на С. Pneumonia будет положительным, а ПЦР — отрицательным.
Разница в используемом материале . Материал для ПЦР получают из места предполагаемой локализации инфекции. Для ИФА-диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР-диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, хламидии могут локализироваться в разных местах организма. Вызвав хронический сальпингит, проведенный в области шейки матки анализ ПЦР хламидии не обнаружит. Но ИФА-диагностика все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс.
Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР-диагностики. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдать врач-лаборант в том случае, если инфекция «свежая», т. е. даже при наличии определенных симптомов уровень антител класса IgG в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. Для половых инфекций подобный период «молчания» ИФА-диагностики может достигать двух недель.

В лабораторной диагностике существует множество методов выявления необходимого элемента в биоматериале. Для диагностики инфекционных заболеваний чаще всего используют два принципиально разных метода: ИФА и ПЦР . Мы предлагаем Вам ознакомиться с данными методами, чтоб понять плюсы и минусы каждого из них.

ПЦР – один из самых наукоемких методов. Он обнаруживает ДНК микроорганизма. Генетический материал индивидуален для любого микроба, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью и не может «обознаться». Принцип ПЦР заключается в том, что в пробирке происходит многократное удвоение искомого генетического кода. В случае присутствия даже незначительного количества этого кода, произойдет увеличение его количества, и анализатор сможет «уловить» его наличие. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Однако, у этого метода есть и свои минусы. Во-первых, в отличие от ИФА, ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено мазком (например, с уретры или из носа). Во-вторых, за счет своей высокой чувствительности, ПЦР может обнаружить даже мертвые частицы микробов, что наблюдается сразу после лечения. В таком случае, результат будет ложноположительный.

Резюмируя вышесказанное, приведем таблицу сравнения этих двух методов друг с другом:

источник

Место ПЦР в диагностике урогенитальных инфекций: взгляд клинициста

Ю.В. Сергеев Медицинский Центр УД ПРФ
В настоящее время в клинической картине многих заболеваний, передающихся половым путем, отмечаются малоси мптомность, отсутствие характерных проявлений, наклонность к латентному течению. В связи с этим все большее значение приобретают лабораторные методы их диагностики. Последнее десятилетие характеризуется стремительным внедрением в практическое здравоохранение новых молекулярно-биологических методов исследования на фоне постоянного совершенствования уже ставших традиционными (микробиологические, серологические, иммунохимические). Многие методы требуют высокой квалификации персонала, значительных материальных затрат. В связи с этим в последние годы имеет место благоприятная тенденция к созданию крупных специализированных диагностических центров, предлагающих дерматовенерологической службе весь комплекс современных лабораторных методик на достаточно высоком уровне и в сжатые сроки. Поэтому возрастает ответственность клиницистов при назначении того или иного лабораторного исследования и его интерпретации. В настоящей работе сделана попытка определить место молекулярно-биологических методов исследования (полимеразная цепная реакция) в клинико-лабораторном алгоритме диагностики инфекций, передающихся половым путем.
Хламидиоз
Хламидийной инфекции свойственны отсутствие патогномоничных клинических симптомов, наклонность к затяжному, рецидивирующему течению, cочетание с другими инфекционными агентами (микоплазмы, уреаплазмы), поэтому установление этиологического диагноза без лабораторного подтверждения представляется невозможным.
Цитоскопический метод диагностики основан на выявлении цитоплазматических клеток-включений Провачека, широко доступен, но эффективен лишь при острых формах заболевания. При урогенитальном хламидиозе частота их обнаружения не превышает 10-12%.
Метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) прямое выявление как корпускулярных, так и растворимых антигенов хламидий при люминесцентной микроскопии. Метод является скрининговым и основными показаниями к его применению являются острая, хроническая формы заболевания, необходимость установления хламидийной этиологии инфекционного процесса урогенитального тракта. Его чувствительность и специфичность при использовании моноклональных антител, содержащихся в качественных импортных наборах, могут составлять 60% и 80% соответственно. Методика требует ее исполнения опытным лабораторным работником, высококвалифицированная экспертная оценка методом ПИФ редко бывает доступной, в частности, оценка эффективности лечения. ПИФ недостаточно чувствительна для определения малых количеств элементарных телец — возможны ложноотрицательные результаты.
Методы иммуноферментного анализа (ИФА) основаны на обнаружении растворимого антигена хламидий в цервикальных и уретральных мазках с детекцией результатов исследования на ИФА-анализаторе. Чувствительность и специфичность при использовании качественных импортных тест-систем приближается к 65-70% и 80-90% соответственно. Показания к применению такие же, как и для метода ПИФ.
Более широкие показания имеет ИФА-метод при выявлении антихламидийных антител классов IgM, IgA, IgG в сыворотке крови. Его следует применять при определении стадии заболевания (острая, хроническая, реактивация или реинфекция, состояние после реконвалесценции), оценки эффективности лечения (наряду с культуральным методом и ПЦР), установления хламидийной этиологии экстрагенитальных поражений. Наибольшую диагностическую информацию предоставляет использование тест-систем, выявляющих антитела к антигену C.trachomatis в количественном титре. Титр IgM характеризует острую форму заболевания, титры IgA, IgG — хроническую, реинфекцию или реактивацию, повышенные титры IgG могут являться маркерами перенесенной в прошлом инфекции.
Культуральный метод диагностики основан на выделении возбудителя в культуре клеток, обработанных различными метаболитами. Он является референсным («золотой стандарт»), но наиболее трудоемок и длителен в исполнении (3-7 дней). Культуральный метод обладает наиболее широкими показаниями при диагностике хламидиоза. В отличие от цитоскопического, ПИФ и ИФА-методов его можно использовать при оценке эффективности антибактериальной терапии, выявлении резистентности к антибиотикам, индикации хламидий у иммунодефицитных больных.
Высокие показатели чувствительности и специфичности полимеразной цепной реакции (ПЦР) делают ее революционной в лабораторной диагностике. Основными мишенями при выявлении хламидии являются нуклеотидная последовательность криптической плазмиды, последовательность главного белка внутренней мембраны, рибосомальные гены. Показания к применению ПЦР такие же, как и у культурального метода, за исключением невозможности выявления резистентности к антибиотикам. Следует учитывать, что при исследовании биопроб методом ПЦР сразу после курса антибактериального лечения в некоторых случаях можно получить «ложноположительные с клинической точки зрения» результаты, поскольку невозможно однозначно оценить жизнеспособность микробной клетки на основании выявления фрагмента ее генома, используя только молекулярно-биологические методы. При исследовании культуральным методом микробные клетки, потерявшие эти важные с клинической точки зрения свойства, не дадут роста в клеточной культуре.
На основании изложенного можно предложить клиницистам лабораторный диагностический алгоритм хламидийной инфекции:

первоначально применение ПЦР с целью выявления ДНК C.trachomatis и определение титра антител классов IgМ, IgA, IgG к C.trachomatis (для характеристики стадии заболевания);
в ходе лечения возможно повторное определение титра антител классов IgA, IgG с целью мониторинга эффективности лечения;
по окончания курса лечения оценка его эффективности культуральным методом или спустя 4 недели (полное обновление эпителия мочеполовых путей) с применением ПЦР;
через 3-6 месяцев после курса лечения определение титров антител IgA, IgG в качестве отдаленной оценки его эффективности.

Трихомониаз
Трихомониазу свойственна широта клинических проявлений. Основным носителем инфекции являются женщины детородного возраста. У них возможны как бессимптомное носительство (в 25 — 50% случаев), так и клинически очевидный вагинит.
У мужчин в клинико-эпидемиологическом отношении трихомониаз можно разделить на следующие группы: бессимптомное носительство, острый, контактное выявление по инфицированной половой партнерше. Довольно часто клинические симптомы не отражают реальной картины заболевания, необходимо применение лабораторных методов диагностики. Доказано, что при использовании в диагностическом процессе только одной клинической картины у 88% женщин трихомониаз не будет выявлен, а в 29% случаев неинфицированным женщинам будет поставлен ложноположительный диагноз.
В настоящее время применяют четыре основных лабораторных метода выявления Т.vaginalis: микроскопический, культуральный, иммунологический и молекулярно-биологический (ПЦР).
Микроскопический метод включает в себя следующие методики:

определение трихомонад в нативном препарате при фазовом контрастировании;
окрашивание метиленовым синим или по Граму;
окрашивание по Романовскому-Гимза.

Он имеет самую низкую чувствительность (30%) относительно других методов лабораторной диагностики трихомониаза. Это обусловлено потерей клеткой характерной подвижности после того, как трихомонада уже извлечена из окружающей среды человеческого организма. Особенно затруднительна диагностика в случае низкотитражных препаратов или препаратов, содержащих огромное количество клеток эпителия, лейкоцитов. В очаге воспаления трихомонада часто представлена округлыми формами, напоминающими полиморфоядерные лейкоциты, и естественно, типичные морфологические признаки теряются во время фиксации и окрашивания, создавая трудность для этиологической идентификации.
К культуральным методам выявления T.vaginalis относятся следующие: выращивание трихомонад в бульонной культуре, метод пластикового конверта, метод системы InPouch, рост патогена на клеточной культуре.
В России культуральный метод — это второй основной метод, используемый в лабораторной диагностике трихомониаза и первый по своей значимости до середины 90-х годов. Наибольшую практическую значимость имеет технология роста патогена на клеточной культуре, использующая способность клеточных линий восстанавливать T.vaginalis из клинических образцов. Доказано, что этот метод лучше относительно культивирования в бульоне и приготовления влажной камеры, поскольку способен детектировать T.vaginalis в концентрациях менее 3-х организмов в 1 мл, но он дорог и длителен по времени.
Проведенный в 1990 г. анализ диагносцирования «трихомониаза» в ЦНИКВИ МЗ РФ, показал, что подавляющее число больных трихомониазом (72,8%) как среди женщин, так и среди мужчин были выявлены благодаря применению культурального метода.
Иммунологические методы не получили должного распространения в России вследствие отсутствия качественных отечественных тест-систем. Клиническое значение имеют прямое определение антител T.vaginalis в биопробах с использованием моноклональных антител в качестве быстрого метода диагностики трихомониаза. Моноклональные антитела для выявления T.vaginalis из клинических образцов давали аналогичные результаты с влажными препаратами для микроскопии. Прямой иммуноферментный и иммунофлюоресцентный анализ трихомонад, использующий перокидазо- и флюорохром — меченные смеси моноклональных антител к различным структурам T.vaginalis были такими же чувствительными и специфическими, как и культуральные методы. К тому же эти результаты этим методом достигаются в течение одного часа, что позволяет осуществлять контрольно-диагностическую функции.
В настоящее время ПЦР-технология занимает первое место в клинической лабораторной диагностике трихомониаза наравне с культуральным методом. Данные зарубежных авторов по сравнительным исследованиям биопроб методами микроскопии, культурального посева и ПЦР на наличие T.vaginalis показали, что ПЦР-метод имеет чувствительность 97% и специфичность 98% в сравнении с 70% чувствительности культурального и 36% микроскопического методов. Основными преимуществами ПЦР по сравнению с другими методами являются:

возможность быстрого получения результатов и одновременного выявления в биопробе нескольких возбудителей;
высокая чувствительность (выявление единичных микроорганизмов);
высокая специфичность, обусловленная подбором праймеров на участки генома, специфичные только для T.vaginalis;
прямое определение возбудителя — выявляется ДНК T.vaginalis;
более низкая себестоимость по сравнению с культуральным методом.

Можно определить следующие показания к выявлению T.vaginalis методом ПЦР:

латентное, асимптомное течение заболевания;
выявление T.vaginalis на фоне микст-инфекции урогенитального тракта;
контроль эффективности антибактериального лечения (в комплексе с культуральным);
проведение скрининговых исследований (в комплексе с микроскопическим);
контроль объективности микроскопического исследования.

Гонорея
Основными методами лабораторной диагностики N.gonorhoeae в настояшее время являются микроскопический, культуральный и молекулярно-биологический.
Микроскопический метод выявления N.gonorhoeae имеет низкую чувствительность и ему также присущи недостатки микроскопической диагностики трихомониаза.
Культуральная диагностика N.gonorhoeae имеет недостаточное распространение в дерматовенерологической практике России из-за чрезвычайной прихотливости гонококка к микробиологическим средам и длительности анализа.
ПЦР-диагностика гонореи довольно перспективна и в настоящее время имеет тенденцию к широкому распространению. По данным зарубежных авторов ПЦР-анализ при использовании тест-систем «Amplicor C. trachomatis/ N.gonorhoeae» фирмы «Ф.Хоффманн — Ла Рош» обладает высокой специфичностью и чувствительностью, превосходящей в ряде случаев культуральный метод.
В России по экономическим причинам невозможно широкое применение ПЦР-тест-систем фирмы «Ф.Хоффманн — Ла Рош». В связи с этим клиницист при выборе коммерческой лаборатории должен учитывать риск получения ложноположительных результатов из-за возможного использования в ней низкоспецифичных праймеров, имеющих «перекрест» с непатогенными нейссериями.
Показания к определению N.gonorhoeae методом ПЦР аналогичны показаниям к ПЦР — диагностике трихомониаза.
Микоплазмоз и уреаплазмоз
Несмотря на внедрение высокочувствительных генодиагностических технологий остается открытым вопрос о патогенности микоплазм, поскольку отсуствует четкая корреляция между их титром и выраженностью патологии урогенитального тракта. При диагностике микоуреаплазмоза не следует опираться исключительно на результаты ПЦР-исследования. В данном случае предпочтительным сочетанием методов являются микробиологический (посев в селективную среду и в среду с антибиотиками) и ПЦР. Микробиологический метод позволяет провести детекцию микоплазм в количествах, достаточных для развития патологии, а также назначить лечение с учетом антибиотикорезистентности данного клинического изолята. В свою очередь метод ПЦР позволяет определять наличие незначительного количества микоплазм, которые в дальнейшем, на фоне подавленного иммунитета, могут вызывать те или иные клинические проявления. В то же время метод ПЦР должен является скрининговым при обследовании на уреа-микоплазмы беременных женщин. На фоне ослабленного иммунитета даже их носительство в ходе беременности может привести к неблагоприятному ее течению и патологии плода.
Таким образом, сочетанное применение микробиологического метода и ПЦР позволяет при диагностике микоуреаплазмоза получить наиболее полную информацию:

обнаружение микоплазм в количествах, достаточных для развития патологического процесса;
определение антибиотикорезистентности микоплазм ;
обнаружение микоплазм в минимальном количестве, имеющем клиническое значение для прогнозирования беременности.

Герпес
При заборе биопроб на ПЦР-анализ следует учитывать, что наиболее информативным будет являться исследование мочи, слюны, в меньшей степени уретрального и цервикального мазков. Качественное определение ДНК вируса герпеса I-II типа наиболее эффективно при латентной форме заболевания, отсутствии выраженных клинических проявлений, микст-инфекции. ПЦР-исследованию на герпес в обязательном порядке должны подвергаться беременные, поскольку персистирование вируса герпеса в половых путях даже у серопозитивных лиц резко повышает риск инфицирования плода. При проведении противовирусной терапии определение титров антител класса IgG к герпетическому антигену методом ИФА является показателем эффективности лечения.
Гарднереллез
Gardnerella vaginalis является наиболее значимым этиопатологическим компонентом бактериального вагиноза. В то же время наличие G. vaginalis не всегда сопровождается клинической картиной вагиноза. Частота ее обнаружения у здоровых женщин составляет от 12% до 47% в титре до 106 КОЕ/ мл вагинального отделяемого, и только при определенных условиях, приводящих к изменению соотношения анаэробных и аэробных бактерий, обнаружение G. vaginalis свидетельствует о развитии вагиноза. Он характеризуется резким снижением титра лактобацилл и значительным увеличением количества анаэробных микроорганизмов, концентрация которых достигает 109-1011 КОЕ/ мл вагинального отделяемого. В настоящее время основным методом диагностики бактериального вагиноза является культуральный.
Качественная детекция G. vaginalis методом ПЦР, применяемая во многих коммерческих лабораториях, является малоинформативным исследованием, поскольку ее выявление должно носить количественный или полуколичественный характер.
Не является также клинически значимым факт единичиного выявления G. vaginalis методом ПЦР в уретральном отделяемом у мужчин. Это может свидетельствовать лишь о наличии гарднерелл у полового партнера обследованного.
В настоящее время в ряде лабораторий ведется интенсивная работа по созданию ПЦР-тест-систем с применением высокоспецифичных праймеров, позволяющих определять концентрацию G. vaginalis в клиническом материале.
Заключение
Период экстенсивного применения качественной детекции ДНК инфекционных агентов, в целом, определил место ПЦР в структуре клинико-лабораторного диагноза ИППП. К сожалению, излишняя коммерциализация ПЦР-анализа и имеющиеся недостатки в работе лабораторий и качестве тест-систем приводят в ряде случаев к дискредитации метода. В связи с этим немаловажное значение приобретает становление и совершенствование системы внешнего и внутреннего контроля качества работы ПЦР-лабораторий.
Несомненно преимущество ПЦР в диагностике таких латентных инфекций, как хламидиоз, герпес, позволяющее исключить применение дорогостоящих и трудоемких культуральных методов.
Сочетанное применение микробиологического метода и ПЦР позволяет выявлять микоплазмы в минимальном количестве, достаточном для развития патологического процесса с определением их антибиотикорезистентности.
Применение ПЦР необходимо при выявлении трихомонад и гонококков в случае латентного течения заболевания, наличия микст-инфекции, проведения контроля эффективности антибактериального лечения (наряду с культуральным методом).
При диагностике бактериального вагиноза ПЦР не имеет в настоящий момент преимуществ перед культуральными методами.
Применение ПЦР при диагностике всех инфекций, передаваемых половым путем, позволяет исключить субъективизм микроскопического исследования.

источник