Точность анализа пцр гепатит с

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 10 6 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 10 5 МЕ/мл = 2.2* 10 6 копий/мл.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*10 4 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*10 7 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста.

источник

О возбудителе HCV-инфекции стало известно сравнительно недавно. До начала 1990-х годов точное выявление заболевания представляло собой серьезную проблему. Это обусловило широкое распространение вируса при гемотрансфузионных процедурах и трансплантации органов, длительное течение инфекции без адекватной терапии. Но сейчас диагностика гепатита С точна, анализы помогают прогнозировать эффективность терапии, а срок выполнения специфических исследований не превышает 3–5 дней.

Так почему масштабы распространения HCV некоторые специалисты сравнивают с эпидемией? В современном российском законодательстве предусмотрена регулярная проверка на гепатит С методом ИФА как у людей из группы риска, так и у работников, способных инфицировать других. Тем не менее, многие не проходят регулярной диспансеризации и не сдают даже стандартные клинические анализы, не говоря о специфических исследованиях.

Но HCV далеко не всегда сопровождается какими-либо клиническими проявлениями, более того, характерные симптомы заболевания отмечают только у четверти пациентов. Вирусная инфекция обычно протекает медленно, но репликация возбудителя патологии происходит постоянно. В результате наступает необратимая гибель гепатоцитов. На месте клеток, утративших свои функции, появляются участки соединительной ткани – своего рода шрамы.

Таким образом развивается фиброз, который, если не предпринять лечебных мер, перерастает в цирроз печени – тяжелое заболевание, сопровождающееся нарушением работы всех внутренних органов. При диагностике на этой стадии можно избавиться от вируса. Однако изменения печеночной паренхимы остаются необратимыми. В некоторых случаях больным требуется срочная трансплантация печени, а лечение начинают после проведения операции.

Поэтому чем раньше поставлен точный диагноз, тем скорее доктор начинает терапию. Таким образом репликацию вируса останавливают еще до развития тяжелых осложнений. Однако обычных клинических исследований недостаточно для выявления инфекции. Необходимо сдать более специфичные анализы, отличающиеся как по технике выполнения, так и по особенностям расшифровки результатов.

Сделать ряд диагностических тестов можно самостоятельно, но интерпретировать полученные данные (особенно если они положительны либо сомнительны) должен только врач.

Заподозрить наличие инфекции можно по некоторым клиническим признакам. К их числу относят:

• постоянное чувство слабости;
• астенический синдром;
• непереносимость физических нагрузок (ранее привычных);
• сонливость;
• эмоциональная раздражительность;
• расстройства пищеварения различной интенсивности (могут отсутствовать, иногда проявляются в виде отсутствия аппетита, тошноты).

Но подобные симптомы не могут достоверно выявить HCV, так как данные признаки не специфичны и указывают на множество других патологий или обычное переутомление.

Как определить гепатит С у взрослых и у детей:

• по анализу крови на содержание определенных иммуноглобулинов (ИФА);
• по результатам исследования, проведенного методом полимеразной цепной реакции;
• по биохимическому анализу на содержание печеночных проб, билирубина.

Недавно на фармацевтическом рынке появились диагностические наборы, позволяющие провести анализ на наличие гепатита С в домашних условиях. Подобные тест-системы менее чувствительны, чем исследования, проводимые в лаборатории. Но в целом, это быстрый и достаточно точный способ самодиагностики.

Интерпретация результатов, особенно сомнительных, должна проводиться врачом. Положительный тест служит показанием для консультации доктора.

Дополнительно необходима проверка показателей общеклинического теста крови и мочи. Перед началом лечения доктор оценивает состояние печени по данным неинвазивных исследований (УЗИ, эластометрия). При подозрении на тяжелые поражения ткани выполняют биопсию органа.

Учитывая длительное бессимптомное течение, результаты обычного анализа крови и мочи могут быть без каких-либо отклонений. Поэтому для выявления вируса гепатита Ц используют серологические (ИФА) и молекулярные (ПЦР) методы лабораторной диагностики. Для этого сдают кровь из вены в частной лаборатории либо поликлинике по месту жительства. Срок получения результатов – до 5 дней.

Основные методы диагностики патологии можно разделить на две группы. Молекулярные исследования направлены на обнаружение частиц вируса. Помимо наличия РНК возбудителя гепатита С, такой анализ показывает его количественное содержание и точный генотип. Серологическое исследование (ИФА) «реагирует» на выработку иммуноглобулинов, синтезируемых при попадании вируса в кровь человека.

Уровень РНК, достаточный для лабораторного определения, достигается через 10–16 дней после инфицирования (если проводить диагностику современными высокочувствительными технологиями). Количественно вирусную РНК можно определить позже, через 4–6 недель после заражения. Тогда же целесообразно проводить и генотипирование. Синтез антител начинается сразу же, при первом контакте вируса с кровью человека. Но лабораторным путем при помощи анализа ИФА их можно обнаружить только через 3–4 недели.

Возможность выявления вируса на ранних стадиях зависит от индивидуальных особенностей больного – сроков выработки антител и активности процессов репликации вируса.

Какие анализы сдают при подозрении на гепатит С:

• биохимия крови, печеночные пробы (отклонения от нормы могут лишь косвенно указывать на наличие гепатита С);
• ИФА;
• ПЦР.

Грамотное поэтапное полное обследование способствует исключению неопределенных результатов, дает максимально точную картину здоровья пациента в целом и позволяет врачу назначить правильное лечение.

Исследование методом ПЦР – самый точный анализ для обнаружения гепатита С в организме. Сам принцип постановки полимеразной цепной реакции достаточно сложен. Для проведения необходим обработанный и соответствующим образом подготовленный образец биологического материала. К нему добавляют фермент, провоцирующий деление заданного участка РНК (при его наличии) в геометрической прогрессии. Впоследствии определение частиц вируса проводят при помощи различных физико-химических методов.

Основные отличия ПЦР-диагностики гепатита C от исследования путем иммуноферментного анализа приведены в таблице:

Качественный анализ, предназначенный для выявления патогенной РНК строго специфичен, поэтому используется для дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита С и для первичного определения наличия заболевания. Современные наборы реактивов, используемые для проведения исследования, характеризуются высокой чувствительностью. Достоверная диагностика возможна уже через 1,5–2 недели после инфицирования.

Расшифровка анализа не отличается сложностью. Если частицы вируса обнаружены, человек болен либо произошла реконвалесценция болезни. Отрицательный результат свидетельствует в пользу отсутствия патологии или о диагностическом окне, когда человек заражен, но уровень РНК патогена слишком низок для лабораторного обнаружения.

При помощи качественного анализа методом ПЦР возможна ранняя диагностика вирусной инфекции.

Исследование проводится после подтверждения диагноза гепатита С по качественной ПЦР. По анализу определяют показатель вирусной нагрузки. Этот параметр определяет активность патологического процесса. В зависимости от результата количественного анализа выделяют несколько уровней вирусной нагрузки (представлено в таблице).

Чем выше параметр вирусной нагрузки (ВН), тем активнее происходит репликация вируса, хуже прогноз и выше вероятность необратимых изменений структуры тканей печени. Как правило, высокая виремия сопровождается достаточно характерными клиническими проявлениями инфекции. Обнаружение низкой ВН, особенно на фоне острой фазы заболевания является предиктором самостоятельного выздоровления. В таком случае начало терапии откладывают на 7–14 дней, после чего исследование повторяют.

Данный анализ проводят только в том случае, если в крови обнаружена вирусная РНК и установлено ее количественное содержание. Генотипирование – единственное исследование, которое определит разновидность возбудителя гепатита С. Только так можно правильно назначить курс терапии и установить продолжительность их применения.

В настоящее время диагностика вирусной инфекции возможна дома, при этом человеку не нужны какие-либо специальные медицинские навыки. Экспресс-тест на гепатит С «работает» по принципу иммуноферментного анализа, то есть набор позволяет определить наличие антител к HCV в образце биологического материала. Большинство тест-систем предназначены для проверки крови. Но появились наборы, позволяющие выяснить, есть ли иммуноглобулины к гепатиту С в слюне.

Относительно достоверности экспресс-тестов было проведено несколько клинических исследований. Установлено, что подобные наборы – не самый точный способ диагностики инфекции, многое зависит от правильности забора биологического материала, соблюдения других правил выполнения анализа. Однако проведение такого теста дает возможность самостоятельно определить инфицирование, не посещая доктора и лабораторию.

Цена одной тест-системы, позволяющей проверить наличие вируса, колеблется в пределах 800–2000 рублей в зависимости от производителя и способа выполнения анализа. Исследование выполняют следующим образом. На тест-полосу наносят образец биологического материала (слюна либо кровь) и ждут отведенное время. Появление одной контрольной полоски свидетельствует об отрицательном результате, две линии – о возможном инфицировании.

При подготовке к проведению обследования необходимо соблюдать такие правила:

• исключить токсическое влияние алкоголя на печень (отказаться от употребления спиртного за 5–7 дней до сдачи анализов);
• соблюдать диету с ограничением жирных, жареных, копченых блюд (стол №5) за неделю до проведения обследования;
• сдавать кровь строго натощак (прием пищи запрещен за 12–14 часов до забора крови);
• не курить за 8 часов до исследования.

Существует несколько способов проведения диагностики. Можно сдать кровь в частной лаборатории, где не требуется направлений от врача. Необходимые тесты выполняют по полису страхования, но перед этим придется получить направления у участкового терапевта или инфекциониста.

Нередко пациенты интересуются, покажет ли общий анализ крови гепатит С, ведь общеклинические исследования сдаются регулярно при вирусных заболеваниях и других, более распространенных инфекциях. Но изменения картины крови возникают далеко не всегда. Кроме того, подобные нарушения неспецифичны и не позволяют провести точную диагностику заболевания.

Приблизительно в 20–30% случаев возникают следующие изменения:

• снижение общего уровня лейкоцитов за счет лимфоцитов;
• уменьшение содержания гемоглобина;
• изменение уровня тромбоцитов за счет нарушений свертывающей системы крови;
• повышение параметров скорости оседания эритроцитов.

Еще одним способом, как обнаружить вирусное поражение печени, служат показатели биохимического исследования крови.

О возможном инфицировании свидетельствует повышение концентрации:

Нарушения функциональной активности печени проходят по мере приема противовирусных препаратов.

Диагноз гепатита С не ставят на основании результатов печеночных проб и стандартного клинического исследования крови.

Для получения полной картины состояния пациента необходимо проведение дополнительных инструментальных исследований. Это связано с длительным бессимптомным течением патологии. Нередко о наличии болезни пациент узнает на стадии фиброза, а при неблагоприятном прогнозе – на этапе цирроза либо злокачественной малигнизации гепатоцитов.

От состояния печени во многом зависит тактика терапии. При декомпенсированных формах цирроза прием таргетных противовирусных препаратов дополняется рибавирином, либо продолжительность лечения увеличивают до 24 недель.

Процедура проводится для определения стадии и степени цирроза, а также подтверждения злокачественного перерождения клеток (предварительно опухоль обнаруживают при помощи ультразвукового исследования). Пункцию выполняют в условиях стационара под местной анестезией.

Под контролем УЗИ специалист делает прокол и вводит в паренхиму печени специальную иглу с системой захвата, позволяющей взять образец биологического материала. Кусочек ткани помещают в специальную среду, при необходимости добавляют краситель и исследуют под микроскопом.

Противопоказанием к проведению процедуры служит паразитарное поражение печени и тяжелые нарушения системы свертывания. Кроме того, возможность выполнения манипуляции напрямую зависит от согласия самого пациента. Для принятия взвешенного решения врач должен подробно объяснить, для чего необходимы результаты биопсии, каковы риски при проведении процедуры.

Ультразвуковое исследование сочетает в себе высокую информативность, безболезненность и безопасность. В течение 15–20 минут доктор может получить подробные данные о размерах и структуре печени и других органов брюшной полости.

Как правило, УЗИ, проведенное на фоне гепатита С, демонстрирует:

• нарушения кровоснабжения органа;
• изменения, связанные с оттоком и секрецией желчи;
• наличие уплотнений, очагов воспаления, некроза, в тяжелых случаях возможно обнаружение новообразований;
• увеличение размеров печени.

По итогам УЗИ доктор поймет масштабы поражения печени, однако точная диагностика гепатита С возможна только по результатам анализа крови.

Сама техника выполнения обследования напоминает ультразвуковую диагностику. Эластометрия – неинвазивное безболезненное исследование, предназначенное для оценки плотности паренхимы печени. Таким образом доктор может определить стадию и тяжесть фиброза, при котором нормальная ткань органа замещается соединительной. Без соответствующей терапии и таргетного противовирусного лечения развивается цирроз печени.

Подобные методики информативны при диагностике цирроза и наличия злокачественных новообразований. Томограмма имеет ряд противопоказаний. Но подобное исследование гораздо информативнее УЗИ и эластометрии, позволяет в полной мере оценить состояние печени.

Самостоятельная диагностика вируса без проведения должных исследований и их грамотной расшифровки невозможна. Человек может предположить наличие инфекции по ряду симптомов, например, повышенной утомляемости, постоянной слабости, сочетающихся с расстройствами пищеварения. К группе риска относят людей, часто подвергающихся инвазивным медицинским или эстетическим процедурам, пренебрегающими барьерными методами защиты при случайных половых контактах.

Наиболее простой способ самостоятельной диагностики – проведение экспресс-теста либо сдача анализов в платной лаборатории. Однако при наличии характерной для вирусного поражения печени лучше пройти комплексное обследование под контролем врача.

Обследование на гепатит С при беременности является обязательным и выполняется дважды: при первой консультации у гинеколога и постановке на учет, а затем в середине последнего триместра. Доктор назначает анализы, выполняемые по методики ИФА. Но основная проблема заключается в получении ложноположительных результатов. После зачатия в организме женщины начинается выработка протеинов, близких по структуре к антителам к гепатиту С.

Поэтому позитивный ИФА при беременности не всегда является признаком инфицирования и требует подтверждения методом ПЦР. Также в период вынашивания ребенка возможно обследование органов брюшной полости при помощи УЗИ, иногда проводится эластометрия. Но при подтверждении диагноза лечение может навредить плоду. Поэтому назначают поддерживающие здоровье женщины медикаменты, а основную терапию начинают после родов.

Лечение гепатита С вполне реально как на острой, так и на хронической фазе. Но одно из условий успешной терапии – своевременная диагностика, когда еще возможно восстановление функциональной активности печени. Поэтому специалисты рекомендуют самостоятельно либо по направлению от врача сдавать соответствующие тесты, а при позитивном результате незамедлительно обращаться за медицинской помощью.

источник

Анализ ПЦР гепатит С – это исследование, основной целью которого является идентификация генетического материала возбудителя. Анализ выявляет возбудитель заболевания методом использования полимеразной цепной реакции. Данная диагностика отличается высокой степенью точности, специфичностью к выявлению отсутствия или наличия вирусной инфекции.

Достоинства анализа ПЦР на гепатит

Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования

Результаты анализа: нормы и отклонения

Расшифровка количественного анализа

Расшифровка качественного анализа

Ложноположительные и ложноотрицальные результаты

Где сделать ПЦР-диагностику и сколько стоит?

Чтобы провести ПЦР анализ на определение вируса гепатита С у пациента берётся венозная кровь, которая потенциально содержит в себе РНК (рибонуклеиновая кислота) HCV искомого вируса.

Тест ПЦР на гепатит С подразумевает порядок действий, когда в частицы крови пациента добавляют:

• праймеры (короткие искусственно-синтезируемые участки необходимо гена);
• специальный фермент (РНК-полимераза).

После забора биологический материал отправляется на исследования в лабораторию. Одна порция крови нужна для проведения непосредственно ПЦР анализа, вторая – отправляется на исследование по методу ИФА. Фермент способен за короткое время увеличить численность генетического материала вируса возбудителя. В специальном аппарате проводится несколько циклов тепловых и охлаждающих процессов. На конечном этапе полученный материал сопоставляется с генами вируса и делается заключение о наличии или отсутствии патологии в организме пациента.

Суть и проведение ПЦР анализа в лаборатории. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.

Существует 3 вида диагностики, дающие возможность определять наличия вируса гепатита С в организме человека:

• генотипирование;
• качественный;
• количественный.

Диагностика гепатита С качественным методом применима для пациентов, у которых в анализе крови определены антитела к вирусу. В случае наличия острой фазы РНК ВГС подобные диагностические мероприятия позволяют определить наличие заболевания за 1-2 недели после инфицирования. В этот период антитела к гепатиту С могут быть ещё не выработаны.

Количественный метод диагностики используется для определения концентрации вируса в образцах крови. Подобный тест на виремию (степень концентрации) даёт возможность точно определить количество единиц вирусной РНК. Конечный результат выражается в соответственном объёме. Если речь идёт о количественном анализе, тогда показатели измеряются в 1 мл (1 куб. см).

Параметр вирусной нагрузки означает уровень инфекционности заболевания, то есть отображает степень «заразности» пациента. На практике это значит, что чем выше концентрация вируса в крови, тем больше шансов у пациента заразить окружающих гепатитом С. Количественный метод исследования также позволяет установить качество и результативность проведённого лечения.

Генотипированием выявляют мутации возбудителя заболевания. Перед назначением лечебного плана определяют генотип вируса: от этого зависит качество и продолжительность терапии. Так, например, при лечении заболевания I-типа эффективность составляет 60%, в случае II, III-типа – около 80%.

Среди основных достоинств проведения процедуры выделяют:

1. Возможность ранней диагностики. ПЦР анализ способен определить наличие вируса на ранних стадиях заражения.
2. Низкая погрешность результатов. Исследуемый биологический ресурс позволяет диагностировать участок генетического материала, который является характерным только для одного типа вирусной инфекции. Это обстоятельство позволяет не допустить ложных результатов диагностики.
3. Высокая степень чувствительности. Анализ ПЦР способен выявлять РНК вируса в небольших количествах, что также дает возможность вовремя отследить скрытые инфекции.

Сдавать анализ ПЦР на гепатит C нужно, если есть:

• наличие контактов с больными людьми, которое могло бы привести к заражению;
• симптомы заболевания цирроза печени (увеличение селезенки, нехарактерные изменения размеров печени, обнаружение на животе венозного сплетения под кожей);
• положительные результаты ИФА;
• увеличение активности АСТ и АЛТ (проявляется в биохимическом анализе крови);
• необходимость контроля ведения антивирусной терапии;
• проведение начального этапа лечения для необходимости установления вирусной нагрузки;
• проведение завершающего этапа терапии для исключения возможных рецидивов;
• наличие у пациента гепатита В, чтобы исключить вариант развития смешанного поражения печени.

Подготовка к ПЦР анализу включает следующие рекомендации:

• забор крови проводится утром;
• анализ проводится натощак, поэтому желательно выдержать перерыв между последним приёмом пищи 8-10 часов;
• за несколько дней до проведения диагностики следует исключить жирную, острую и жареную пищу, алкогольные напитки и курение;
• за сутки до анализа следует воздержаться от тяжёлых физических нагрузок, исключить занятия в спортзале или бассейне.

Сам анализ делается недолго, а расшифровывает результаты ПЦР на гепатит С высококвалифицированный специалист гепатолог или инфекционист. На основании результатов анализа пациенту выставляется диагноз.

Чтобы правильно расшифровать результаты обследования, учитывают показатели:

• биохимического анализа крови;
• данные ультразвукового исследования;
• результаты биопсии.

При получении результатов количественного анализа ПЦР учитываются следующие показатели:

В заключении качественного анализа ПЦР на гепатит С могут присутствовать следующие данные:

При получении анализов на генотипирование вируса можно обнаружить следующие варианты показателей:

Ложно положительные и ложноотрицательные результаты ПЦР исследования получаются в таких случаях:

• при недостаточной квалификации медицинского персонала, которые проводят диагностику;
• ошибки в работе лаборантов, когда кровь транспортируется в лабораторию ненадлежащим способом или биоматериал загрязнён;
• случаи ненамеренной подмены проб крови;
• нарушения в процессе подготовки биологического материала;
• воздействие на исследуемые образцы повышенной температурой.

Среди других причин получения неточных результатов выделяют такие:

• кровь пациента содержит остаточные частицы гепарина и прочих коагулянтов;
• в образце присутствуют вещества-ингибиторы, способствующие замедлению или остановке полимеразной цепной реакции.

Подобные исследования проводятся:

• в частных медицинских центрах;
• в КДВ;
• в государственных поликлиниках.

Государственные поликлинники проводят анализ ПЦР на гепатит С бесплатно на основаниях наличия у пациента направления от гепатолога или инфекциониста.

Диагностика заболевания на платной основе проводится во всех крупных городах России.

Стоимость диагностики зависит от:

• качества оборудования клиники;
• скорость выполнения работы;
• типа теста.

Цена на изучение крови методом ПЦР колеблется в следующих пределах:

• качественный ПЦР анализ — 600-900 рублей (в Москве и Санкт-Петербурге);
• качественный ПЦР анализ — 300-800 рублей (регионы);
• определение вирусной нагрузки — 17000-22000;
• определение других видов инфекции количественного анализа 1200-10000 рублей.

Ошибочные анализы на гепатит С. Снято каналом Гепатит С побежден.

источник

Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.

Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.

Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.

Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.

Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.

Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.

Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:

1. Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
2. Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
3. Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.

Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.

Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.

Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.

Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.

Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:

• Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
• Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
• Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
• Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
• Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
• При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
• Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
• Для контроля результативности проводимой терапии.
• После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.

ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.

Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:

1. Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
2. Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
3. За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
4. За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.

За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.

Забор крови происходит следующем образом:

• Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
• Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
• В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
• После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
• К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.

Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.

Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.

У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.

Плюсы исследования представлены в таблице:

Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.

Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.

Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.

В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.

Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.

Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.

Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.

Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.

Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.

ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.

Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.

В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.

Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:

Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.

источник

Для постановки диагноза «хронический вирусный гепатит С (ХВГС)» требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

• высокая чувствительность – 97-98%;
• гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
• быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

• в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
• часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
• вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

• исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
• разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
• накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
• за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
• до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.

источник

ПЦР-диагностика гепатита С – это исследование биологических образцов с применением полимеразной цепной реакции. Способ заключается в многократном копировании фрагментов РНК вируса. Благодаря такой методике всего нескольких молекул возбудителя достаточно для того, чтобы тест отреагировал на присутствие вируса. Результат можно получить уже в первые 5-7 дней после контакта с зараженным человеком. ПЦР позволяет выявить факт инфицирования, а также приблизительную концентрацию HCV и его генотип.

Самая очевидная причина для назначения ПЦР на гепатит С в крови – это наличие признаков заболеваний печени:

• хроническая усталость;

• боли в области печени;

• желтизна кожи и белков глаз;

• гипертрофия печени;

• тошнота.

Анализ на ПЦР целесообразно сделать в условиях повышенного риска заражения:

1. сексуальный контакт с предполагаемым носителем гепатита;
2. повышенная активность АЛТ и АСТ, выявленные по результатам биохимического анализа крови;
3. если результат ИФА на антитела к вирусу гепатита положительный.

Другие показания к сдаче крови:

• Врачи-гепатологи назначают ПЦР на гепатит С в профилактических целях перед операциями.
• Медработники и сотрудники детских садов и школ сдают анализ в ходе плановых проверок.
• Метод показан при проведении вакцинации против вируса гепатита В.
• Анализ проводится несколько раз в ходе терапии гепатита С, чтобы оценить ее эффективность.
• ПЦР нужен для исключения смешанного поражения печени, что иногда бывает при гепатите В.

В течение дня у человека меняется соотношение эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, а также активность некоторых гормонов. Прием пищи влияет на наличие жирных кислот в крови. Этот фактор мешает точности анализа. По этим причинам анализ ПЦР на гепатит С проводится утром натощак. В качестве исследуемого образца берется кровь из вены.

Перед сдачей анализа требуется подготовка:

1. за 2-3 дня – ограничить нагрузку на печень (исключить алкогольные напитки, не употреблять жирную и жареную пищу);
2. за сутки – исключить стресс, поднятие тяжестей, посещение спортзала и бассейна;
3. за 8 часов – прекратить употребление любой пищи, так как глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь, изменяют качество ферментной реакции;
4. с утра до момента сдачи крови – не курить.

На результат анализа может повлиять повышение концентрации адреналина в крови. Чтобы исключить эту погрешность, нужно прийти на 20 минут раньше, отдышаться и успокоиться.

На эффективность анализа крови могут влиять разные препараты – БАДы, средства с кофеином, этанолом, глюкозой, леводопой, пероральные контрацептивы, антибиотики. Даже если человек принимает обычные витамины, об этом нужно предупредить врача.

В настоящее время используются три метода ПЦР:

1. качественный (тест на наличие или отсутствие вируса);
2. количественный (тест на концентрацию вируса в крови);
3. с генотипированием (определяет принадлежность HVC к конкретному генотипу и субтипу).

Качественный анализ – это метод диагностики гепатита С, который позволяет подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в крови. Выявляет наличие в определенной концентрации – в пределах 10-500 МЕ/мл. Выполняется в течение 1-4 дней и дает следующие результаты:

• «Не обнаружено» – вирус отсутствует либо его концентрация так мала, что реагент его не распознает.
• «Обнаружено» – вирус HCV присутствует, и его концентрация выше минимального порога чувствительности. Анализ выдает такой результат уже на 3-4 день после заражения.

Этот метод оценивает вирусную нагрузку, которая меняется в зависимости от стадии заболевания или этапа излечения. Метод не только показывает наличие флавивируса, но и его концентрацию в МЕ (международных единицах) на 1 мл крови. Это играет решающую роль при выборе тактики лечения гепатита С. Результаты количественной ПЦР-диагностики записываются следующим образом:

В результатах анализов очень часто можно увидеть степени, которые обозначаются как «^», например, 6*10^5 МЕ/МЛ, 10 в пятой степени это 100 тысяч, соответственно 6*10^5 МЕ/МЛ = 600 000 МЕ/МЛ.

Просто подставляйте результат вашего анализы, который стоит перед знаком умножить, и вы получите результат. Учтите, что единицы измерения могут отличаться (копий/мл, ме/мл).

Если затрудняетесь или есть вопросы по другим переменным анализов, вы всегда можете написать нашему дежурному врачу-инфекционисту (чат в правом нижнем углу экрана). Он бесплатно расшифрует ваши анализы.

Количественный анализ ПЦР на гепатит С необходим для оптимального выбора препарата. С его помощью можно прогнозировать осложнения и эффективность терапии. Он позволяет оценить степень заразности носителя гепатита для окружающих: чем большее число вирусов насчитывается в крови, тем больше риск заражения.

Сегодня известно, что у гепатита С имеется 11 генотипов и огромное количество субтипов. В разных странах есть свои приоритетные разновидности. В России в основном встречается 1 генотип (1b чаще, чем 1а), на втором месте по распространенности – 3 генотип (субтип 3а), на третьем – 2.

У каждого генотипа свои особенности. Зная их, можно спрогнозировать характер течения инфекции, риск перехода в хроническую форму и вероятность ответа на противовирусную терапию. Например, 3 генотип HCV провоцирует стеатоз, а 1 генотип требует лечения в течение 48 недель. По рекомендациям Минздрава генотипирование должно предшествовать противовирусной терапии.

Исходя из результатов, врач определяет противовирусный препарат, его дозировку, курс приема.

ПЦР-диагностика на вирусный гепатит С опережает иные методы по чувствительности, низкой вероятности ошибок и другим показателям:

• Позволяет выявить вирус на самых ранних стадиях, когда концентрация его в крови ничтожно мала. Для сравнения, иммунофлюоресцентный анализ (ИФА) реагирует только на иммуноглобулины, а они вырабатываются лишь через несколько недель в ответ на инфекцию. В то же время ПЦР реагирует на сам антиген и показывает присутствие вируса уже через 5 дней после заражения.

• Ложные результаты возникают гораздо реже, чем у других методов. Так, у ИФА возможны ложные результаты на гепатит при появлении перекрестных антител, но ПЦР реагирует непосредственно на патогены и такой погрешности не имеет.

• ПЦР – высокочувствительный метод. Анализ реагирует на присутствие РНК вируса гепатита уже 10-100 клеток в пробе и дает результат еще задолго до появления первых симптомов.

• В отличие от культуральных методов исследования, ПЦР проводится методом высокотехнологичной автоматизированной амплификации, что позволяет проводить тестирование в день забора.

Тест универсален и позволяет обнаружить несколько типов возбудителей гепатита в одной биологической пробе.

ПЦР-диагностика гепатита имеет и свои недостатки. Главный из них связан со способностью микроорганизмов к мутации. Вирусы гепатита приспосабливаются к условиям окружающей среды, и их генотип меняется. Когда это происходит, диагностическая система не может уловить гибрид. Второй недостаток ПЦР связан с возможностью получения ложноположительного и ложноотрицательного результата. Чтобы избежать ошибки, нужно соблюдать правила забора материала. Чаще всего погрешности возможны после уже проведенного лечения, поэтому принимать решение об отмене терапии может только лечащий врач.

источник