Расшифровка анализа пцр качественный на гепатит с

Вирусный гепатит С относится к наиболее опасным и тяжело диагностируемым заболеваниям. Проблема в том, что нередко эта болезнь обнаруживается только на поздних стадиях ввиду того, что основной ее формой является хроническая, а ХГС проходит бессимптомно. Однако именно ранняя диагностика позволяет подобрать наиболее подходящее лечение, которое поможет навсегда забыть о вирусном воспалении печени.

Одним из самых универсальных способов определения ВГС является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Но что такое анализ ПЦР при гепатите С? В чем особенности этого тестирования? Чем анализ ПЦР на гепатит С качественный отличается от количественного? Как расшифровывается результат тестирования? Ответы на каждый из этих вопросов вы сможете найти в нашей статье.

Полимеразная цепная реакция относится к наиболее распространенным и точным методам диагностики ВГС. Но что показывает ПЦР анализ на гепатит С? Результаты тестирования позволяют определить наличие флававируса в организме носителя, а также степень вирусной нагрузки в его организме.

Для анализа используется проба венозной крови пациента, взятой в день проведения исследования. Сдача ПЦР-теста на гепатит С рекомендуется следующим категориям лиц:

• Пациентам с обнаруженными иммуноглобулинами к антигенам возбудителя ВГС
• Женщинам в период беременности
• Работникам медицинских учреждений, постоянно контактирующим с инфицированными биологическими жидкостями
• Пациентам, в анамнезе которых числился ранее вылеченный вирусный гепатит
• Больным с явными симптомами поражения печени

Тест на гепатит С ПЦР может быть качественным или количественным. Оба метода активно используются при диагностике ВГС. Рассмотрим подробнее особенности качественного и количественного анализа ПЦР на гепатит С.

Качественная реакция проводится в том случае, если предварительно установленный диагноз ВГС требует подтверждения. Результаты тестирования бывают положительными и отрицательными. Положительная реакция указывает на наличие возбудителя инфекции в организме обследуемого. В свою очередь, отрицательный результат указывает либо на отсутствие патогена, либо на его несущественную концентрацию.

Что такое ПЦР при гепатите (анализ качественного типа)? Это тестирование, помогающее окончательно определить диагноз. Стоимость его проведения в Москве, в зависимости от клиники, варьируется в пределах от 1800 до 3000 рублей.

Кровь на количественную полимеразную цепную реакцию сдается в том случае, если диагноз уже установлен. Анализ позволяет определить патогенную нагрузку в организме больного на текущий момент. Таким образом, лечащий врач получает информацию о том, какая площадь печени поражена флававирусом и может подобрать необходимую в конкретном случае терапевтическую схему.

Чем выше показатели патогена в крови обследуемого, тем более серьезную стадию заболевания придется лечить. Стоимость количественной полимеразной цепной реакции в московских клиниках колеблется в пределах от 1800 до 4000 рублей в зависимости от выбора медучреждения.

Итак, ответ на вопрос «Что такое анализ ПЦР при гепатите С?» найден. Но как подготовиться к предстоящей диагностике? При подготовке к сдаче образца крови для теста на гепатит С ПЦР пациент должен:

• За несколько суток до явки в лабораторию полностью отказаться от фаст-фуда и другой тяжелой и жирной пищи
• В течение 24 часа до сдачи анализа ПЦР на гепатит С не употреблять спиртные напитки и воздерживаться от курения
• В течение 8 часов до диагностики не принимать пищу
• В целях собственной безопасности, перед введением в вену инъекционной иглы проследить за тем, чтобы медработник использовал исключительно стерильный одноразовый шприц

Крови для полимеразной цепной реакции берется совсем немного. Поэтому после процедуры пациенту реабилитация не требуется. Поэтому сразу же после процедуры больной отправляется домой. Диагностика проводится в утренние часы.

Расшифровка ПЦР-теста на гепатит С проводится в условиях медицинской лаборатории. Погрешность в итоговых результатах зависит от компетентности медработников, а также от того, насколько обследуемый следовал правилам подготовки к тестированию.

В случае расшифровки анализа ПЦР на гепатит С качественного, важно учитывать порог чувствительности реагентов, колеблющийся в пределах 10-500 МЕ/мл. У качественной полимеразной цепной реакции может быть только 2 результата:

• Положительный. Диагноз вирусный гепатит С подтверждается за счет обнаружения флававируса в крови больного. Концентрация патогена в плазме крови достаточна для постановки диагноза. Если диагностика проводилась после лечения, такой результат указывает на неэффективность терапии.
• Отрицательный. Патоген отсутствует, либо концентрация его в крови до крайности мала. Подобный результат не всегда указывает на отсутсвие инфекции. Обследуемому рекомендуется сдать дополнительные тесты на чувствительность к реагентам.

Чтобы выяснить, что показывает ПЦР анализ на гепатит С при количественном тестировании, необходимо отталкиваться от серединного показателя, равного 8х10^5 МЕ/мл (800 000 МЕ/мл).

Если уровень патогенной нагрузки ниже или равен среднему, больному назначается медикаментозная терапия на основе препаратов прямого противовирусного действия. Если же показатель выше 800 000 единиц, лечащему врачу придется подумать о более серьезных мерах борьбы с ВГС. Возможно, больному понадобится трансплантация печени.

Определение вирусного гепатита С методом ПЦР проводится во многих медучреждениях столицы. При этом пройти тестирование можно как в стационарных, так и в амбулаторных условиях.

источник

Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.

По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.

Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев. Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Различают три вида ПЦР-анализа:

Качественный анализ ПЦР . Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.

Количественный анализ ПЦР . Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.

Генотипирование . Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.

ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

• контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
• положительный результат иммуноферментного анализа;
• признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
• появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
• повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
• перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
• с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
• после окончания лечения для контроля за рецидивами;
• при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.

Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности.

Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования.

Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование.

Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно.

Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким.

Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови.

Обнаружена РНК определенного генотипа

В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа.

Обнаружена РНК вируса гепатита С

В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования.

Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала.

Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

• кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
• образец биоматериала был загрязнен;
• в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
• в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

Диагностика на ранних стадиях . ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.

Низкая вероятность ошибки . В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.

Высокая чувствительность . ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.

Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

• анализ крови сдают с утра;
• перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
• за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
• в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.

источник

Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.

Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.

Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.

Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.

Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.

Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.

Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:

1. Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
2. Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
3. Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.

Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.

Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.

Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.

Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.

Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:

• Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
• Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
• Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
• Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
• Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
• При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
• Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
• Для контроля результативности проводимой терапии.
• После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.

ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.

Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:

1. Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
2. Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
3. За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
4. За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.

За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.

Забор крови происходит следующем образом:

• Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
• Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
• В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
• После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
• К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.

Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.

Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.

У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.

Плюсы исследования представлены в таблице:

Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.

Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.

Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.

В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.

Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.

Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.

Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.

Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.

Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.

ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.

Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.

В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.

Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:

Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.

источник

РНК-вирус проникает в клетки печени и вызывает болезнь – гепатит С. Заболевание проходит в острой и хронической форме. Для него характерно протекание без видимых признаков. Такое течение объясняется высокой способностью вируса к мутации и появлению различных видов. Это помогает патогену приспосабливаться к организму хозяина и ускользать от иммунной защиты.

Исследования на ранних стадиях развития не дает результата. Качественный анализ ПЦР на гепатит С проводят, чтобы выявить патоген, и начать вовремя лечение.

Гепатит С – серьезное заболевание, при хроническом развитии которого возникает цирроз и рак печени. Ученые длительное время не могут разработать вакцину от болезни, несмотря на изучение особенностей строения HCV. Многообразие видов патогена слабо поддается изучению.

Только с помощью лабораторных исследований можно обнаружить поражение органа, и предупредить инфицирование окружающих. С этой целью проводят качественный анализ ПЦР на гепатит С.

Носитель в течение многих лет может быть инфицирован и не подозревать о болезни. Качественный анализ предполагает проведение в лаборатории полимеразной цепной реакции крови пациента на наличие РНК вируса. Диагностика проводится на сверхчувствительном медицинском оборудовании, которое помогает его обнаружить.

Качественное обследование с помощью ПЦР обладает достоинствами перед другими методами:

• даннй метод помогает выявить генетический материал патогена на ранних стадиях;
• показывает вид возбудителя;
• используется система тестов, нет необходимости высеивать материал в питательной среде;
• обладает высокой скоростью диагностики возбудителя: результат анализа будет готов через 5 часов;
• выявляет скрытую инфекцию.

Качественный анализ назначают при профилактическом осмотре, когда имеются показания на его проведение. Он проводится во время лечения, после выздоровления. С его помощью подтверждают наличие или отсутствие антител вируса гепатита С в крови.

• количественное содержание генотипа HCV;
• качественные характеристики вирусной РНК;
• генотипирование.

Диагностику проводят повторно для подтверждения результата с более чувствительным реагентом.

Для проведения качественной ПЦР нужны предпосылки для ее назначения:

• сексуальная связь с лицом, который инфицирован вирусом гепатита;
• цирроз печени;
• обязательное обследование перед оперативным вмешательством;
• проведение вакцинации против вируса гепатита В;
• плановое обследование работников медицинских учреждений, садов, школ.

Если у пациента видны явные признаки гепатита:

• желтизна кожных покровов, белков глаз;
• боль в правом подреберье;
• усталость;
• увеличение в размерах печени;
• тошнота.

Вирус гепатита С проникает в клетки печени через кровеносные сосуды. Патоген может попасть при гемодиализе, при пользовании инфицированной иглой, при нанесении татуировки, в стоматологических и косметических кабинетах.

Возможна передача вируса новорожденному от инфицированной матери, если происходит травмирование кожи ребенка при родах. Качественный анализ выявляет вирус и указывает на второстепенные признаки: наличие в крови больного антител.

Врач-гепатолог или инфекционист проводит расшифровку результатов ПЦР и ИФА на гепатит С. Полученные данные подтверждаются комплексным обследованием:

• биохимическим анализом;
• УЗИ органа;
• биопсией печеночных тканей.

Опираясь на полученные данные, врач подтверждает или отрицает гепатит С.

Стандартная чувствительность теста на ПЦР колеблется в пределах 10-500 МЕ/мл. Анализ не дает результата, если она ниже указанного параметра.

Количественный анализ ПЦР показывает вирусную нагрузку: концентрацию патогена в человеческом организме (сколько фрагментов флававируса в 1 мл крови). Такой метод обследования назначают перед началом комплексной терапии и на 12 неделе заболевания. Он помогает:

1. Выявить степень болезни. Если концентрация вируса в крови пациента высокая, возможна передача инфекции другим лицам.
2. Назначить противовирусную терапию, выбрать нужный метод лечения.
3. Сделать прогноз выздоравления.

Важно определить генотип, так как патоген постоянно мутирует и приспосабливается к организму. Известно 11 типов, на территории РФ выявлены три: 1, 2, 3. Обследование покажет тип вирусной инфекции.

• РНК обнаружено;
• РНК не обнаружено (болезнь не выявлена);
• тип флававируса;
• количественный состав (концентрацию в крови);
• название теста.

Если гепатит С обнаружен в биологическом материале пациента, врач назначает повторное исследование, чтобы исключить ошибку. Обследование биоматериала делают от 1 до 5 дней. Срок исполнения зависит от загруженности персонала.

Присутствие флававируса и антител к нему свидетельствует о продолжительном течении болезни, которая перешла в хроническую стадию. Ложные показания бывают у беременных женщин и у людей, имеющих другие инфекционные заболевания.

Качественный анализ не обнаружил гепатит С. Отрицательное значение означает, что в крови отсутствуют РНК вируса. Утомляемость и другие признаки возможно связаны с протеканием другой инфекции в организме и требуют дальнейшего изучения.

Если вирус обнаружен в крови, нельзя отчаиваться и впадать в панику. В 20 процентах болезнь излечивается самостоятельно. Антитела не всегда свидетельствует о том, что вы болеете гепатитом С. Случаются ошибки при лабораторных исследованиях. Доброкачественные и злокачественные опухоли, инфекционные очаги в организме, проведенная ранее вакцинация смазывают картину ПЦР.

Раннее обнаружение помогает вовремя остановить болезнь. Назначают противовирусную терапию. Препараты помогают вылечить хроническое заболевание в течение 3-6 месяцев.

источник

Для постановки диагноза «хронический вирусный гепатит С (ХВГС)» требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

• высокая чувствительность – 97-98%;
• гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
• быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

• в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
• часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
• вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

• исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
• разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
• накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
• за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
• до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.

источник

ПЦР-диагностика гепатита С – это исследование биологических образцов с применением полимеразной цепной реакции. Способ заключается в многократном копировании фрагментов РНК вируса. Благодаря такой методике всего нескольких молекул возбудителя достаточно для того, чтобы тест отреагировал на присутствие вируса. Результат можно получить уже в первые 5-7 дней после контакта с зараженным человеком. ПЦР позволяет выявить факт инфицирования, а также приблизительную концентрацию HCV и его генотип.

Самая очевидная причина для назначения ПЦР на гепатит С в крови – это наличие признаков заболеваний печени:

• хроническая усталость;

• боли в области печени;

• желтизна кожи и белков глаз;

• гипертрофия печени;

• тошнота.

Анализ на ПЦР целесообразно сделать в условиях повышенного риска заражения:

1. сексуальный контакт с предполагаемым носителем гепатита;
2. повышенная активность АЛТ и АСТ, выявленные по результатам биохимического анализа крови;
3. если результат ИФА на антитела к вирусу гепатита положительный.

Другие показания к сдаче крови:

• Врачи-гепатологи назначают ПЦР на гепатит С в профилактических целях перед операциями.
• Медработники и сотрудники детских садов и школ сдают анализ в ходе плановых проверок.
• Метод показан при проведении вакцинации против вируса гепатита В.
• Анализ проводится несколько раз в ходе терапии гепатита С, чтобы оценить ее эффективность.
• ПЦР нужен для исключения смешанного поражения печени, что иногда бывает при гепатите В.

В течение дня у человека меняется соотношение эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, а также активность некоторых гормонов. Прием пищи влияет на наличие жирных кислот в крови. Этот фактор мешает точности анализа. По этим причинам анализ ПЦР на гепатит С проводится утром натощак. В качестве исследуемого образца берется кровь из вены.

Перед сдачей анализа требуется подготовка:

1. за 2-3 дня – ограничить нагрузку на печень (исключить алкогольные напитки, не употреблять жирную и жареную пищу);
2. за сутки – исключить стресс, поднятие тяжестей, посещение спортзала и бассейна;
3. за 8 часов – прекратить употребление любой пищи, так как глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь, изменяют качество ферментной реакции;
4. с утра до момента сдачи крови – не курить.

На результат анализа может повлиять повышение концентрации адреналина в крови. Чтобы исключить эту погрешность, нужно прийти на 20 минут раньше, отдышаться и успокоиться.

На эффективность анализа крови могут влиять разные препараты – БАДы, средства с кофеином, этанолом, глюкозой, леводопой, пероральные контрацептивы, антибиотики. Даже если человек принимает обычные витамины, об этом нужно предупредить врача.

В настоящее время используются три метода ПЦР:

1. качественный (тест на наличие или отсутствие вируса);
2. количественный (тест на концентрацию вируса в крови);
3. с генотипированием (определяет принадлежность HVC к конкретному генотипу и субтипу).

Качественный анализ – это метод диагностики гепатита С, который позволяет подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в крови. Выявляет наличие в определенной концентрации – в пределах 10-500 МЕ/мл. Выполняется в течение 1-4 дней и дает следующие результаты:

• «Не обнаружено» – вирус отсутствует либо его концентрация так мала, что реагент его не распознает.
• «Обнаружено» – вирус HCV присутствует, и его концентрация выше минимального порога чувствительности. Анализ выдает такой результат уже на 3-4 день после заражения.

Этот метод оценивает вирусную нагрузку, которая меняется в зависимости от стадии заболевания или этапа излечения. Метод не только показывает наличие флавивируса, но и его концентрацию в МЕ (международных единицах) на 1 мл крови. Это играет решающую роль при выборе тактики лечения гепатита С. Результаты количественной ПЦР-диагностики записываются следующим образом:

В результатах анализов очень часто можно увидеть степени, которые обозначаются как «^», например, 6*10^5 МЕ/МЛ, 10 в пятой степени это 100 тысяч, соответственно 6*10^5 МЕ/МЛ = 600 000 МЕ/МЛ.

Просто подставляйте результат вашего анализы, который стоит перед знаком умножить, и вы получите результат. Учтите, что единицы измерения могут отличаться (копий/мл, ме/мл).

Если затрудняетесь или есть вопросы по другим переменным анализов, вы всегда можете написать нашему дежурному врачу-инфекционисту (чат в правом нижнем углу экрана). Он бесплатно расшифрует ваши анализы.

Количественный анализ ПЦР на гепатит С необходим для оптимального выбора препарата. С его помощью можно прогнозировать осложнения и эффективность терапии. Он позволяет оценить степень заразности носителя гепатита для окружающих: чем большее число вирусов насчитывается в крови, тем больше риск заражения.

Сегодня известно, что у гепатита С имеется 11 генотипов и огромное количество субтипов. В разных странах есть свои приоритетные разновидности. В России в основном встречается 1 генотип (1b чаще, чем 1а), на втором месте по распространенности – 3 генотип (субтип 3а), на третьем – 2.

У каждого генотипа свои особенности. Зная их, можно спрогнозировать характер течения инфекции, риск перехода в хроническую форму и вероятность ответа на противовирусную терапию. Например, 3 генотип HCV провоцирует стеатоз, а 1 генотип требует лечения в течение 48 недель. По рекомендациям Минздрава генотипирование должно предшествовать противовирусной терапии.

Исходя из результатов, врач определяет противовирусный препарат, его дозировку, курс приема.

ПЦР-диагностика на вирусный гепатит С опережает иные методы по чувствительности, низкой вероятности ошибок и другим показателям:

• Позволяет выявить вирус на самых ранних стадиях, когда концентрация его в крови ничтожно мала. Для сравнения, иммунофлюоресцентный анализ (ИФА) реагирует только на иммуноглобулины, а они вырабатываются лишь через несколько недель в ответ на инфекцию. В то же время ПЦР реагирует на сам антиген и показывает присутствие вируса уже через 5 дней после заражения.

• Ложные результаты возникают гораздо реже, чем у других методов. Так, у ИФА возможны ложные результаты на гепатит при появлении перекрестных антител, но ПЦР реагирует непосредственно на патогены и такой погрешности не имеет.

• ПЦР – высокочувствительный метод. Анализ реагирует на присутствие РНК вируса гепатита уже 10-100 клеток в пробе и дает результат еще задолго до появления первых симптомов.

• В отличие от культуральных методов исследования, ПЦР проводится методом высокотехнологичной автоматизированной амплификации, что позволяет проводить тестирование в день забора.

Тест универсален и позволяет обнаружить несколько типов возбудителей гепатита в одной биологической пробе.

ПЦР-диагностика гепатита имеет и свои недостатки. Главный из них связан со способностью микроорганизмов к мутации. Вирусы гепатита приспосабливаются к условиям окружающей среды, и их генотип меняется. Когда это происходит, диагностическая система не может уловить гибрид. Второй недостаток ПЦР связан с возможностью получения ложноположительного и ложноотрицательного результата. Чтобы избежать ошибки, нужно соблюдать правила забора материала. Чаще всего погрешности возможны после уже проведенного лечения, поэтому принимать решение об отмене терапии может только лечащий врач.

источник

Гепатит С является болезнь с вирусной этиологией, которая поражает печень. Провоцирует данное состояние вирус HCV с РНК-молекулой. Наличие этой кислоты дает возможность делать анализ ПЦР на гепатит С.

Опасность рассматриваемого заболевания в том, что период между попаданием вируса в организм и появлением первых симптомов может быть довольно длительным — от 1-2 до 4-5 недель. Это мешает выявить заболевания и начать терапию своевременно.

Зависимо от особенностей организма носителя вируса заболевание может протекать остро, а также приобретать хроническую форму, которая требуется затратного и продолжительного по времени лечения. Если обнаруживаются вирусные частицы гепатита С, то пациента назначаются необходимые анализы, одним из которых есть ПЦР на гепатит С. Этот анализ проводится абсолютно всем лицам, у кого были обнаружена антитела к вирусу.

Анализ крови поможет доктору определить наличие или отсутствие вируса гепатита С в организме пациента. Данный показателя определяют количество вируса, который поразил организм, а также его генотип и характеристики.

На основе полученных результатов после проведения данного анализа, а также ссылаясь на дополнительное проведенные исследования специалист определяет продолжительность лечения, и степень угрозы пациента для здоровья других людей.

ПЦР гепатит С имеет и другое название — РНК-анализ. Такое название объясняется тем, что в вирусе присутствует частичка РНК. Этот микроорганизм способен мутировать.

Все генотипы вируса характеризуются дифференциальной резистентностью, именно поэтому каждому пациенту назначаются разные методы терапии и в каждом индивидуальном случае дальнейший прогноз может отличаться.

В качестве исследуемого материала выступает кровь из вены. ЕЕ нужно сделать на голодный желудок. Обычно тестирование осуществляется методом Real-Time PCR, но также может использоваться тест COBAS AMPLICOR. В не зависимости от выбранного типа исследования крайне важно учесть порог чувствительности, то есть возможность реагента определить саму малую концентрацию вирусных частиц в крови.

Если показатели нормальные, то в расшифровке теста будет указано «не найдено».

• количественный анализ;
• качественный;
• генотропирование.

Благодаря тесту можно выявить генетику вирусной инфекции, а также стадию его развития в организме пациента. В зависимости от того, насколько система диагностики чувствительна, анализ моет проводиться либо один раз либо несколько — для подтверждения результата, используя более чувствительный реагент.

Рассматриваемый анализ также может называть анализ ПЦР на гепатит С качественный. Обычный уровень чувствительности теста, который позволяет определить присутствие вируса — от 10 до 500 МЕ.

При отрицательных показателях можно говорить о том, что уровень вируса в крови пациента значительно меньше порога чувствительности теста.

В случае, если результаты тестов ничего не показали, доктору необходимо немного больше узнать о пороге чувствительности пациента.

Тест может определить наличие вируса в организме пациента примерно через неделю после инфицирования.

Благодаря подобному исследованию можно узнать количество РНК флавивируса присутствует в организме человека. Он определяет, сколько вирусного РНК есть на 1 кубическом см крови. Результаты анализов расшифруются в МЕ на мл.

Количественную диагностику ПРЦ следует проводить прежде чем назначать лечебную терапию, ну и конечно же после проведенных процедур, примерно на 12 недели лечения. Данная процедура необходима для того, чтобы удостоверится в правильности лечебной терапии. Вирусная нагрузка дает возможность определить 3 главных показателя болезни:

• продолжительность и прогноз противовирусного лечения (чем большей будет вирусная нагрузка, тем длительней будет терапевтический курс);
• эффективность, а также метод терапии;
• инфекционность, то есть степень риска передачи вируса от зараженного человека к здоровому.

Данный вид диагностики зависит от вида лабораторного теста, а также от порога чувствительности.

Так как HCV имеет высокую активность в плане мутации, при проведении теста необходимо определить, какой генотип вируса присутствует у больного в крови. Существует 11 генотипов вируса гепатита С, они также делятся на разные субтипы.

Следует помнить о том, что данный этап анализа крайне важен, потому что благодаря нему доктор может сделать выводы об фазе вируса, назначить подходящее лечение, а также выписать пациенту наиболее эффективные препараты.

Различные генотипы HCV поддаются лечению по-разному. К примеру, чтобы вылечить первый генотип потребуется более года, а эффективность такой терапии примерно 65%. А вот генотип 2 и 3 можно вылечить за полгода, при этом эффективность терапии значительно выше — примерно 90%.

Также следует отметить, что благодаря генотипироанию можно также понять, в каком состоянии находится печень. К примеру, часто генотип 3 протекает совместно с стеатозом, который способствует накоплению жира в клетках печени.

Анализ крови на ПРЦ способен определить генотип заболевания. В некоторых случаях тестовые системы не могут определить вирус. В таком случае можно получить результат «не типируется». Подобный результат анализов говорит о том, что генотип вируса не характерен для определенной территории. В подобных случаях нужно провести повторные анализы но уже с высшим пороком чувствительности.

Вся расшифровка анализов основана на сведениях полученных ранее. Благодаря лабораторным исследованиям в большинстве случаев обозначаются такие данные:

• тест обычно называется Real-time;
• обозначается цифра генотипа;
• к-во фракций с РНК;
• найдено или не найдено.

Самым важным при расшифровке данного анализа есть пункт под номером 3. Он позволяет увидеть вирусную нагрузку, от которой зависит продолжительность лечебных процедур, и дальней шее состояния пациента, а также его время его выздоровления.

Результаты исследований показывают цифру генотипа а также иногда можно увидеть латинскую букву, которая является определителем субгенотипа вируса. Чтобы доктор мог поставить правильный диагноз и назначить лечение ему необходимо знать генотип заболевания, этого будет достаточно для проведения дальнейших действий.

Для того, чтобы расшифровать анализы, надобно обратиться к таким специалистам — инфекционисту либо гепатологу. Эти доктора смогут расшифровать полученные данные. В основном расшифровка результатов анализа крови, да и вообще любых анализов, для человека без медицинского образования, совершенно непонятны.

К примеру, при отрицательном тесте на гепатит, и ИФА положительном, смело можно утверждать об отсутствии у пациента НСВ, но это не исключает того, что гепатит С пациент перенес намного раньше, при чем в острой форме.

Считается, что положительный ИФА говорит, о том, что в кровяном русле обнаружены антитела, произведенные после того, как вирус был в прошлом поражен. Однако в нынешней медицине этот анализ не считают достаточно надежным. Доктора его используют исключительно в качестве первичного скрининга. При диагностике болезни доктора отталкиваются от показателей ПЦР-тестов.

Чтобы сделать анализ ПЦР используется кровь из вены. Обычно делают двойной забор биоматериала — для теста ПЦР и для ИФА. Чтобы результаты были точными и достоверными, нужно соблюдать некоторые правила забора биоматериала:

• между употреблением еды и забором биоматериала должен быть выдержан временной промежуток — не меньше 8 часов;
• кровь нужно сдавать на голодный желудок, в первой половине дня;
• на протяжении суток перед анализом нужно отказаться от интенсивных физнагрузок;
• перед тем, как сдавать анализ, надобно отказаться от употребления жареной еды и от питья спиртного.

Готовые результаты можно забрать на следующий день.

источник

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

• вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
• эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
• риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
• риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

• положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
• положительный результат качественной ПЦР;
• контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

• до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
• 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
• последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
• 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

• сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
• процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
• в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
• за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
• если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

• самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
• раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
• при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

• позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
• позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
• определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник