Расшифровать качественный анализ на гепатит с

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

• вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
• эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
• риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
• риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

• положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
• положительный результат качественной ПЦР;
• контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

• до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
• 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
• последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
• 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

• сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
• процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
• в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
• за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
• если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

• самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
• раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
• при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

• позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
• позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
• определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

РНК-вирус проникает в клетки печени и вызывает болезнь – гепатит С. Заболевание проходит в острой и хронической форме. Для него характерно протекание без видимых признаков. Такое течение объясняется высокой способностью вируса к мутации и появлению различных видов. Это помогает патогену приспосабливаться к организму хозяина и ускользать от иммунной защиты.

Исследования на ранних стадиях развития не дает результата. Качественный анализ ПЦР на гепатит С проводят, чтобы выявить патоген, и начать вовремя лечение.

Гепатит С – серьезное заболевание, при хроническом развитии которого возникает цирроз и рак печени. Ученые длительное время не могут разработать вакцину от болезни, несмотря на изучение особенностей строения HCV. Многообразие видов патогена слабо поддается изучению.

Только с помощью лабораторных исследований можно обнаружить поражение органа, и предупредить инфицирование окружающих. С этой целью проводят качественный анализ ПЦР на гепатит С.

Носитель в течение многих лет может быть инфицирован и не подозревать о болезни. Качественный анализ предполагает проведение в лаборатории полимеразной цепной реакции крови пациента на наличие РНК вируса. Диагностика проводится на сверхчувствительном медицинском оборудовании, которое помогает его обнаружить.

Качественное обследование с помощью ПЦР обладает достоинствами перед другими методами:

• даннй метод помогает выявить генетический материал патогена на ранних стадиях;
• показывает вид возбудителя;
• используется система тестов, нет необходимости высеивать материал в питательной среде;
• обладает высокой скоростью диагностики возбудителя: результат анализа будет готов через 5 часов;
• выявляет скрытую инфекцию.

Качественный анализ назначают при профилактическом осмотре, когда имеются показания на его проведение. Он проводится во время лечения, после выздоровления. С его помощью подтверждают наличие или отсутствие антител вируса гепатита С в крови.

• количественное содержание генотипа HCV;
• качественные характеристики вирусной РНК;
• генотипирование.

Диагностику проводят повторно для подтверждения результата с более чувствительным реагентом.

Для проведения качественной ПЦР нужны предпосылки для ее назначения:

• сексуальная связь с лицом, который инфицирован вирусом гепатита;
• цирроз печени;
• обязательное обследование перед оперативным вмешательством;
• проведение вакцинации против вируса гепатита В;
• плановое обследование работников медицинских учреждений, садов, школ.

Если у пациента видны явные признаки гепатита:

• желтизна кожных покровов, белков глаз;
• боль в правом подреберье;
• усталость;
• увеличение в размерах печени;
• тошнота.

Вирус гепатита С проникает в клетки печени через кровеносные сосуды. Патоген может попасть при гемодиализе, при пользовании инфицированной иглой, при нанесении татуировки, в стоматологических и косметических кабинетах.

Возможна передача вируса новорожденному от инфицированной матери, если происходит травмирование кожи ребенка при родах. Качественный анализ выявляет вирус и указывает на второстепенные признаки: наличие в крови больного антител.

Врач-гепатолог или инфекционист проводит расшифровку результатов ПЦР и ИФА на гепатит С. Полученные данные подтверждаются комплексным обследованием:

• биохимическим анализом;
• УЗИ органа;
• биопсией печеночных тканей.

Опираясь на полученные данные, врач подтверждает или отрицает гепатит С.

Стандартная чувствительность теста на ПЦР колеблется в пределах 10-500 МЕ/мл. Анализ не дает результата, если она ниже указанного параметра.

Количественный анализ ПЦР показывает вирусную нагрузку: концентрацию патогена в человеческом организме (сколько фрагментов флававируса в 1 мл крови). Такой метод обследования назначают перед началом комплексной терапии и на 12 неделе заболевания. Он помогает:

1. Выявить степень болезни. Если концентрация вируса в крови пациента высокая, возможна передача инфекции другим лицам.
2. Назначить противовирусную терапию, выбрать нужный метод лечения.
3. Сделать прогноз выздоравления.

Важно определить генотип, так как патоген постоянно мутирует и приспосабливается к организму. Известно 11 типов, на территории РФ выявлены три: 1, 2, 3. Обследование покажет тип вирусной инфекции.

• РНК обнаружено;
• РНК не обнаружено (болезнь не выявлена);
• тип флававируса;
• количественный состав (концентрацию в крови);
• название теста.

Если гепатит С обнаружен в биологическом материале пациента, врач назначает повторное исследование, чтобы исключить ошибку. Обследование биоматериала делают от 1 до 5 дней. Срок исполнения зависит от загруженности персонала.

Присутствие флававируса и антител к нему свидетельствует о продолжительном течении болезни, которая перешла в хроническую стадию. Ложные показания бывают у беременных женщин и у людей, имеющих другие инфекционные заболевания.

Качественный анализ не обнаружил гепатит С. Отрицательное значение означает, что в крови отсутствуют РНК вируса. Утомляемость и другие признаки возможно связаны с протеканием другой инфекции в организме и требуют дальнейшего изучения.

Если вирус обнаружен в крови, нельзя отчаиваться и впадать в панику. В 20 процентах болезнь излечивается самостоятельно. Антитела не всегда свидетельствует о том, что вы болеете гепатитом С. Случаются ошибки при лабораторных исследованиях. Доброкачественные и злокачественные опухоли, инфекционные очаги в организме, проведенная ранее вакцинация смазывают картину ПЦР.

Раннее обнаружение помогает вовремя остановить болезнь. Назначают противовирусную терапию. Препараты помогают вылечить хроническое заболевание в течение 3-6 месяцев.

источник

Многие знают, что гепатит — болезнь не только опасная, но и коварная, ведь диагностировать ее непросто. Иногда пациенту приходится пройти целый ряд исследований — от анализа крови на наличие антител до УЗИ печени. Заболевание диагностируется непосредственно по крови, а остальные исследования демонстрируют, в какой степени печень повреждена гепатитом.

Наиболее эффективный и современный метод — это метод ПЦР (полимеразная цепная реакция). Расшифровка количественного анализа на вирус гепатита С или В выявляет разновидность болезни и дает понимание, как вирус будет мутировать в организме человека.

Быстрый и точный ПЦР-анализ ищет возбудителя следующим образом: при исследовании существенно увеличивается часть ДНК вируса в образце крови. Взятую у человека кровь помещают в особые реактивы, и начинается клонирование клеток. Появление сотен ДНК позволяет обнаружить возбудителя еще на ранней стадии.

ПЦР-анализ бывает нескольких видов:

• Качественный анализ. Это исследование показывает, что в крови присутствуют гены-«вредители». Качественный анализ подтвердил опасения? Значит, следует провести количественное исследование, чтобы установить степень развития вируса. Результат обозначается простыми словами: «обнаружено» или «не обнаружено». В первом случае в организме пациента найдены РНК вируса, значит, человек уже болен. Во втором случае кровь чиста от гена вируса. Чтобы не оставалось сомнений, специалисты рекомендуют спустя 10 дней сдать повторный анализ.
• Количественный анализ. Такой вид исследования определяет, в каком количестве в крови присутствуют гены вируса, насколько тяжелая степень у заболевания. О результате говорят слова «положительно», «отрицательно» и «недействительный».
  1. Под словом «положительно» понимается инфекционная нагрузка. Такой метод диагностики нужен медикам, чтобы отслеживать, действует ли терапия. Время проведения анализа — 4, 12, 16 и 24 недели болезни. Показатель, не превышающий 8х10т МЕ/мл, свидетельствует об эффективности лечения.
  2. Результат «отрицательно» говорит, что ген инфекции отсутствует.
  3. «Недействительный» бывает тогда, когда ген вируса был обнаружен при качественном исследовании, но количественный анализ его не выявил. Такое случается при объеме инфекции ниже уровня.

Не все пациенты сдают количественный анализ (в этом его отличие от качественного). Если качественный подтверждает или опровергает присутствие «врага», то количественный подтверждает диагноз, помогает спрогнозировать развитие заболевания и определиться с терапией.

Количество РНК до начала лечения и во время терапии демонстрирует эффективность работы с пациентом. Кроме того, по числу РНК врачи понимают, какие дозы лекарств нужны больному.

Если в крови были найдены антитела к гепатиту, то за качественным анализом следует количественный. «Пожертвовать» кровью больному придется несколько раз.

• Сначала — еще до того, как будет принято решение о курсе терапии, т.е. при первичной диагностике.
• Затем во время лечения — это необходимо, чтобы видеть клиническую картину результатов (как правило, на 1, 4, 12 и 24 неделях).
• Финальный анализ проводится после терапии — он показывает, возможен ли рецидив.

Врач, использующий количественный анализ как один из основных методов исследования, преследует несколько целей:

1. Медик должен понимать, насколько глубоко вирус проник в организм, какое количество антигенов присутствует в теле больного.
2. Доктор определяет, действует ли терапия.
3. Врач подбирает метод лечения и составляет прогноз.
4. Метод дополняет анализ крови, биопсию, эластометрию и т.п.

Существует несколько показаний к проведению количественного анализа:

1. Надо определить вирусную нагрузку и взять под контроль антивирусную терапию.
2. Результаты качественного ПЦР-анализа говорят о наличии антител гепатита С.
3. Пациент страдает от острого или хронического гепатита С.
4. У больного найден микст-гепатит.
5. Необходимость четко спланировать терапию.
6. После 12 недель лечения результаты качественного анализа все еще показывают присутствие вируса.

Для исследования нужна кровь из вены. Есть ряд простых стандартных правил, которых должен придерживаться пациент:

1. Лучше всего отправиться на анализ утром натощак, до этого в течение 8-12 часов воздерживаться от пищи.
2. У человека не всегда есть возможность пройти исследование именно утром. В таком случае завтрак должен быть диетическим; после завтрака также следует «пост» (8-12 часов).
3. За 1-2 дня до сдачи крови пациент должен отказаться от спиртного и жирной/жареной пищи.
4. После обильного застолья приходить на анализ нельзя.
5. Как минимум за час до сдачи крови человек не должен курить.
6. Пациенту понадобится 10-15 минут спокойствия перед тем, как сдать биоматериал. Для чего нужна такая релаксация? Физическое и эмоциональное напряжение способно повлиять на результат, следовательно, человеку необходимо расслабиться.
7. Лечащий врач должен знать, принимает ли пациент какие-то препараты. Если да, то после последнего приема надо выждать 10-14 дней. Возможно, доктор изменит условия.
8. Если человек проходил физиотерапевтические процедуры, рентгенографию или ректальное исследование, то сдавать кровь придется через определенное время.
9. Реагенты, оборудование, единицы измерения и, конечно, точность в разных лабораториях могут отличаться. Лучше сдавать первичный и повторные анализы в одном месте.

Когда будут известны результаты? Зависит от конкретной лаборатории и занятости ее сотрудников. Уже через 4-5 часов можно подвести итоги и уже на следующий день получить заключение.

Иногда о результатах говорят не цифры, а слова — «не обнаружено» или «ниже диапазона измерений».

• «Не обнаружено» означает, что вирус не найден.
• Слова «ниже диапазона изменений» говорят о том, что инфекция присутствует в небольшом количестве. В таком случае нужен количественный анализ, который «чувствительнее» качественного.

Медики ориентируются на вирусную нагрузку. Специалисты должны выяснить, сколько вирусных РНК содержится в 1 мл крови.

Принято пользоваться формулой МЕ/мл, но в некоторых лабораториях число измеряется в копиях/мл. Коэффициенты перевода варьируются от 1 до 5, важно, какой метод используется при определении количества.

Разные тест-системы предлагают свои варианты перевода компонентов в международные значения. Разработана таблица расшифровки количественного анализа на гепатит С, и вы можете ознакомиться с ее данными. Нормам ПЦР соответствуют определенные значения вирусной нагрузки:

Если здоровый человек сдает количественный анализ на гепатит С, то его норма — результат «не обнаружено». Для тех, кому не повезло заболеть, нормы другие. Количество вируса в их организме должно снижаться, о чем говорит убывание нулей в результате анализа: с 1*10 6 МЕ/мл до 1*10 5 МЕ/мл и т.д. При использовании амплификатора концентрация вируса не должна покидать границы от 1,8*10 2 до 2,4*10 7 МЕ/мл.

Когда можно утверждать, что лечение производит нужный эффект? В том случае, если при повторном исследовании нагрузка меньше 8*10 5 МЕ/мл.

Какова вероятность раннего вирусологического ответа? Примерно 85%. В таком случае на третий день терапии снижается количество вирусных РНК.

При показателе, превышающем 8*10 5 МЕ/мл, необходимо поменять тактику лечения. Зависимость простая: чем выше уровень, тем печальнее прогноз.

Что касается гепатита В, то за норму приняты такие значения вирусной нагрузки:

Узнав количество вируса, медики получают возможность определить форму болезни — острую, хроническую или носительство. Эта информация помогает понять, надо ли проводить дополнительные исследования. Результаты рассказывают, как вирус и пораженный им организм реагируют на терапию:

1. Превышающее норму значение трансаминазы говорит о хроническом гепатите В, как и активность вируса больше 4 наравне с количеством ДНК-копий 10 5 /мл.
2. Стандартный уровень трансаминазы и концентрация ниже 10 5 /мл — это носительство.
3. При гепатите В нужно все время отслеживать устойчивость, каждые 3 месяца отправляясь на анализы. Внезапно увеличившаяся в 10 раз вирусная нагрузка — свидетельство того, что коварный вирус стал устойчив к лекарствам.
4. Если через 3 дня лечения нагрузка снизилась на 85%, то ход терапии можно назвать благоприятным.
5. Иногда показатель АЛТ превышает норму (не чаще 2 раз за полгода), а вирусная нагрузка становится выше 10 5 /мл. В таком случае нужна биопсия печени. Если же уровень АЛТ повышается чаще 2 раз за 6 месяцев, а вирус очень активен, то немедленно назначается антивирусная терапия.

И доктору, и пациенту хочется знать, как вирус поведет себя, переходя из острой формы в хроническую. Прогноз таков:

У ПЦР-анализа масса плюсов:

1. Точность метода позволяет быстро определиться с диагнозом и начать лечение.
2. Скорость. Нет необходимости разграничивать и выращивать разные виды возбудителя. Четко налаженный процесс позволяет оперативно получить результат всего за 4-5 часов.
3. Возбудитель определяется прямым путем. Найдена «та самая» часть ДНК? Значит, диагноз ясен. Например, обнаруживающий белки-маркеры ИФА находит лишь продукты жизнедеятельности бактерий, но не дает полной гарантии.
4. Специфичность исследования. Возможна реакция на ложные совместно-реагирующие агенты, но в данном случае исследуется только то вещество, которое характерно именно для конкретного возбудителя.
5. Даже самое незначительное количество вируса будет обнаружено, значит, восприимчивость — еще один плюс.
6. Универсальность метода. Способность найти фрагменты ДНК или РНК конкретных организмов позволяет работать при беспомощности других методов и использовать один материал для диагностики.
7. ПЦР-анализ обнаруживает и явные, и скрытые инфекции, изучая даже стойкие и не выращиваемые агенты.

Медицина — это не математика, иногда расшифровка количественного анализа на гепатит С или В оказывается ошибочной.

Важно сдавать ПЦР-анализ в клинике, заработавшей себе хорошую репутацию и отзывы. ПЦР находит вирус с точностью до 100%, но иногда показатели падают до 95%. Причина тому — некачественные реактивы, устаревшее оборудование и т.д.

Если за дело берутся профессионалы, работающие в авторитетном медицинском учреждении, то можно не беспокоиться, вероятность ошибки практически нулевая.

источник

Вирусный гепатит С — тяжелое заболевание, которое протекает с поражением печени. У восьмидесяти процентов больных оно переходит в хроническую форму. Вирус размножается в клетках печени — гепатоцитах — и вызывает их гибель. Отмершая ткань замещается очагами соединительной ткани, развивается фиброз.

По мере развития фиброза печень оказывается неспособна выполнять свои функции, начинается цирроз печени, который опасен своими осложнениями: повышением давления в системе портальной вены, желудочно-кишечными кровотечениями, нарушением свертывания крови, изменениями психики из-за повреждения ядер головного мозга токсическими продуктами.

Причина заболевания — заражение вирусом из семейства Flaviviridae, который относится к типу РНК-вирусов. Это значит, что генетический материал, по которому синтезируются белки возбудителя, закодирован в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Заражение происходит через кровь, половым путем, и от беременной женщины к плоду. К сожалению, между инфицированием и началом выработки антител может пройти достаточно большое количество времени — от двух недель до шести месяцев. Это не дает определить заражение методом иммуноферментного анализа и начать лечение на ранних стадиях.

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя. С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Различают три вида ПЦР-анализа:

Качественный анализ ПЦР . Первая стадия исследования. Он позволяет выявить генетический материал вируса в крови.

Количественный анализ ПЦР . Позволяет определить вирусную нагрузку — концентрацию генетического материала возбудителя в одном миллилитре крови. Это исследование проводят перед началом терапии, а затем на первой, четвертой, двенадцатой и (если курс длительный) двадцать четвертой неделе лечения, чтобы оценить его эффективность.

Генотипирование . Возбудитель гепатита С часто и быстро мутирует. На планете было обнаружено семь вариантов генотипа этого вируса. В России распространены первой, второй и третий тип. Каждый из генотипов обладает различной устойчивостью к терапии, например эффективность лечения первого типа составляет шестьдесят процентов, а для второго и третьего этот показатель достигает восьмидесяти пяти. Поэтому, для того чтобы подобрать подходящие препараты и назначить курс лечения достаточной длительности необходимо точно определить, каким типом вируса заражен пациент.

ПЦР-исследование назначают в следующих случаях:

• контакт с больным человеком, при котором могло произойти заражение;
• положительный результат иммуноферментного анализа;
• признаки цирроза печени: изменение размеров печени, увеличение селезенки, появление на животе подкожного венозного сплетения;
• появление симптомов поражения печени: боли в правой части живота, пожелтение кожных покровов;
• повышение активности АЛТ и АСТ в биохимическом анализе крови;
• перед началом лечения для определения вирусной нагрузки;
• с целью контроля за эффективностью антивирусной терапии;
• после окончания лечения для контроля за рецидивами;
• при наличии диагностированного гепатита B, для исключения смешанного поражения печени.

Расшифровкой ПЦР-анализа и иммуноферментного анализа на гепатит С должен заниматься гепатолог или инфекционист. Анализировать результаты ПЦР необходимо в комплексе с данными биохимического анализа крови, биопсии и УЗИ. Только квалифицированный врач сможет проанализировать результаты исследований и, основываясь на них, назначить правильное лечение.

В анализируемом биологическом материале обнаружен генетический материал возбудителя. Инфицирование подтверждено.

Инфицирование отсутствует, либо количество РНК возбудителя ниже границы чувствительности.

Нормальный показатель для здоровых людей. Означает, что в исследуемом материале отсутствует РНК гепатита С, либо его концентрация ниже порога чувствительности исследования.

Концентрация РНК ниже диапазона количественного определения. Такие результаты интерпретируют очень осторожно, соотносят их с данными других исследований, часто проводят повторное исследование.

Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается низким. Обычно снижение количества вируса означает, что терапия идет успешно.

Уровень вирусной нагрузки при данной концентрации считается высоким.

Количество РНК выше верхнего предела диапазона количественного определения. Делать выводы о степени вирусной нагрузки при таком результате нельзя. Обычно в таких случаях тест повторяют с разведением образца крови.

Обнаружена РНК определенного генотипа

В биоматериале обнаружен вирус гепатита С определенного генотипа и субтипа. Результат кодируется римскими цифрами и латинскими буквами, например — 1а, 2b. Всего существует семь генотипов и шестьдесят семь субтипов, однако в России встречаются только три первых типа.

Обнаружена РНК вируса гепатита С

В крови обнаружена РНК редкого для России генотипа, который нельзя отнести к первому, второму или третьему типу. Необходимы дополнительные исследования.

Данный результат говорит о том, что пациент здоров, или о том, что колчество РНК возбудителя слишком мала.

Возможна ситуация, когда ПЦР-анализ на гепатит С отрицательный, а иммуноферментный анализ распознает антитела против вируса. Это значит, что пациент переболел гепатитом С в острой форме и излечился самостоятельно. Примерно двадцать случаев инфицирования заканчиваются самопроизвольным излечением, если организм пациента оказывает достаточное сопротивление инфекции.

Несмотря на то, что ПЦР — высокоточный анализ, его результаты могут быть искажены в следующих ситуациях:

• кровь транспортировалась в лабораторию в ненадлежащих условиях, был нарушен температурный режим;
• образец биоматериала был загрязнен;
• в крови находились остаточные следы гепарина и других антикоагулянтов;
• в исследуемом веществе оказались ингибиторы — вещества, которые замедляют или останавливают полимеразную цепную реакцию.

Диагностика на ранних стадиях . ПЦР обнаруживает генетический материал возбудителя заболевания. С помощью иммунофлюоресцентного анализа можно определить только иммуноглобулины — вещества, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию. В случае заражения гепатитом С промежуток между заражением и началом иммунного ответа может составлять несколько недель и месяцев, в это время ИФА будет неэффективна. ПЦР даст ответ уже на первой неделе после заражения.

Низкая вероятность ошибки . В исследуемом материале определяют участок генетического материала, который характерен только для одного вида возбудителей. Это позволяет исключить ложные результаты. При ИФА возможны ошибки, так как один и тот же вид антител может выделяться против разных вирусов — такие антитела называют перекрестными.

Высокая чувствительность . ПЦР позволяет обнаружить РНК возбудителя даже в минимальных количествах. Это дает возможность выявить скрытые инфекции.

Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

• анализ крови сдают с утра;
• перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
• за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
• в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.

источник

Если диагностирован вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого влияет на назначение лечебной схемы, строго обязателен. В отличие от генотипирования, подобное исследование выполняется несколько раз: непосредственно на этапе комплексной диагностики заболевания и в ходе терапии. Доктору важно знать количественное содержание вируса в крови пациента, чтобы назначить адекватное лечение.

Уже на стадии терапии анализ крови на уровень HCV предназначен для оценки эффективности принимаемых лекарств. По данным клинических исследований, на фоне подавляющего большинства противовирусных препаратов прямого действия количественный тест демонстрирует отрицательный результат уже на 21–28 день. Однако о полном выздоровлении речь идет в том случае, если негативные данные сохраняются на протяжении двух лет с последнего дня приема таргетных таблеток.

Для установления числового значения генома возбудителя гепатита С в сыворотке крови обычно пользуются молекулярной технологией ПЦР. Только таким образом можно точно посчитать уровень виремии: данный термин обозначает концентрацию копий (частиц генома) возбудителя гепатита С в определенной единице крови. Прочие методы, например, выявление core-антигена иммуноферментным тестом применяются гораздо реже из-за высоких финансовых затрат и сложностей, касающихся технического выполнения исследования.

Полимеразная цепная реакция до недавнего времени была лишь экспериментальным методом анализа и не была широко распространена в клинической практике. Принцип методики основан на так называемой амплификации – способности определенного участка генома патогена к многократному копированию.

Это достигается при помощи обязательных компонентов выполнения ПЦР:

• праймера, структура которого практически идентична определенным участкам РНК HCV,
• фермента, обеспечивающего реакцию амплификации.

Сам процесс лабораторного исследования происходит в буферном растворе, в котором содержится фиксированная комбинация катионов и анионов. Таким образом возможно поддержание оптимального для течения ПЦР уровня рН. Набор для проведения ПЦР содержит и протеины, используемые в качестве своего рода «строительного материала» при амплификации.

Структура праймера такова, что он может взаимодействовать только со строго определенным возбудителем. На этом принципе основана специфичность анализа методом ПЦР. Если иммуноферментные серологические исследования зависят от индивидуальных параметров иммунной системы человека, ПЦР направлена исключительно на выявление РНК возбудителя HCV.

Еще одна особенность проведения подобного исследования состоит в том, что расшифровка ПЦР гепатита С возможна как с использованием компьютерных программ (обычно используется, когда необходимо количественно установить содержание вируса в крови) и микроскопических методов. В норме у здорового в плане вирусного поражения печени человека патоген в крови отсутствует. Выявление возбудителя HCV методом ПЦР, будь то качественное либо количественное исследование, однозначно указывает на инфицирование.

При помощи постановки ПЦР можно не только определить виремию, то есть фактический уровень патогена в кровотоке, но и генотип вируса. Все доступные исследования, выполняемые по такой методике, приведены в таблице.

При гепатите С проводится все три исследования ПЦР. Алгоритм диагностики состоит в следующем:

1. Общие клинические исследования («стандартный набор» – кровь, моча, биохимия и печеночные пробы), дополнительно могут назначать ревматоидные тесты и ряд других анализов при подозрении на аутоиммунные процессы;
2. Серологическое исследование (ИФА) на выявление антител к возбудителю гепатита С. Изначально показан тест Anti-HCV Total.
3. Качественная ПЦР, предназначена для подтверждения результатов ИФА.
4. Количественная ПЦР, выполняется при подтвержденном диагнозе HCV-инфекции.
5. Генотипирование, также проводится при установленном факте заражения.

Если человек желает самостоятельно обследоваться на гепатит С, рекомендуют сдавать ИФА. Дальнейшие обследования проводят в зависимости от полученных результатов. Если ИФА отрицательный и человек не предъявляет никаких жалоб, повторное тестирование проходят через год. Но при наличии симптомов патологии (в том числе и неспецифических, например, сильная слабость, утомляемость, боли в правом подреберье) следует сдать качественную ПЦР.

В целом, техника выполнения ПЦР по большому счету одинакова, как для качественного, так и количественного исследования. Образец биологического материала смешивают с тест-раствором, который содержит специальные соединения. Их роль состоит в стимуляции деления РНК патогена (причем строго специфичного генетического материала возбудителя).

В результате концентрация HCV достигает лабораторно определяемого уровня. На данном этапе возможно проведение качественного анализа. Однако после сложных подсчетов (обычно для этих целей используют компьютерные программы) устанавливают количественный показатель содержания HCV. После этого полученный результат переводят в Международные Единицы и фиксируют в лабораторном бланке.

В некоторых случаях вместо ПЦР используют другие методики – разветвленной ДНК и транскрипционной амплификации. Но из-за сложности выполнения и более низкой чувствительности большинство специалистов предпочитают выявлять количественные нормы гепатита С именно при помощи ПЦР.

Сейчас практически в любой частной лаборатории пациент может пройти обследования без каких-либо бумаг и направлений от терапевта. Количественное определение вируса гепатита С в крови не является исключением. Вопрос в том, когда целесообразна сдача теста?

Гепатологи рекомендуют проведение исследования в таких случаях:

• позитивный ИФА + положительная ПЦР;
• негативный ИФА + положительная ПЦР.

Кроме того, количественное определение HCV показано и в ходе противовирусной терапии. Врач сравнивает результаты виремии, полученные до начала курса приема медикаментов, с результатами тестирования, проведенного уже во время лечения. Нормой считается негативная ПЦР к 12 неделе применения препаратов. А предиктором 100% выздоровления считают отсутствие виремии уже через месяц терапии.

Тестирование продолжают и после окончания лечения для исключения риска рецидива. Пациент должен сдавать такой тест на протяжении еще 2 лет. При отрицательном результате говорят о выздоровлении. Больного снимают с учета у гепатолога или инфекциониста и дают общие рекомендации относительно восстановления состояния печени.

Если спустя 2 года количественный тест на HCV вновь положителен, все исследования повторяют заново. В таком случае предполагают повторное инфицирование и, возможно, другой генотип вируса. Но требуется новая схема лечения, а вероятность благополучного исхода существенно ниже.

Сроки выполнения количественного определения вирусной нагрузки при подтвержденной HCV-инфекции указаны в таблице.

Сама методика постановки ПЦР менее чувствительна к особенностям функционирования внутренних органов, иммунной системы. Однако это не исключает соблюдения правил подготовки к проведению теста. В большинстве случаев количественный тест проводится при уже подтвержденном диагнозе гепатита С.

Это подразумевает как минимум отказ от алкоголя и соблюдение строгой диеты (по столу №5 или №5а в зависимости от тяжести состояния больного). Лечащий врач уже ознакомлен с анамнезом, знает, какие лекарственные средства принимает пациент и от каких патологий страдает. Это облегчает расшифровку анализа ПЦР и снижает вероятность постановки ошибочного диагноза.

Но чтобы получить максимально точный результат необходимо:

• сдавать кровь натощак (после ужина должно пройти не менее 12 часов, завтрак противопоказан);
• посещать лабораторию следует в первой половине дня;
• до сдачи крови нельзя есть и пить что-либо кроме воды;
• нельзя курить за 8–10 часов до исследования.

Перечисленные правила нужно соблюдать перед каждой проверкой на количественное содержащие патогена. Если исследование проводят после лечения и врач разрешил ослабления в диете, за 7–10 дней до проведения тестирования необходимо вновь вернуться к строгому режиму питания. Что касается спиртного, ограничения сохраняются на протяжении всей жизни.

Ранее отечественные специалисты делили виремию на несколько групп: очень низкую, низкую, умеренную, высокую и очень высокую. Но в настоящее время расшифровка анализа крови на гепатит С проводится в соответствии с международными нормами. Сейчас виремию делят только на 2 группы. В таблице указаны вероятные данные количественного анализа на гепатит С (окончательная расшифровка вне зависимости от показателей должна проводиться врачом).

Но только специалист может грамотно расшифровать количественное исследование на HCV и отличить показатели нормы от критических, свидетельствующих об отсутствии результата от противовирусной терапии либо о рецидиве инфекции. Все анализы должны быть подшиты в амбулаторную карту, чтобы у доктора была полная информация об активности вирусной инфекции и ответной реакции на прием таргетных медикаментов.

Показатели нормы при расшифровке количественного анализа на гепатит С бывают только тогда, когда результат ПЦР отрицателен, то есть РНК вируса во взятом образце крови отсутствует. В остальных случаях наличие патогена свидетельствует о заражении.

При подтверждении диагноза количественные показатели крови при гепатите С служат основой для оценки степени активности вирусного процесса. Высокая виремия повышает вероятность осложнений и сокращает срок наступления необратимых изменений в печени.

Вирусологическая нагрузка, превышающая 800 000 МЕ/мл служит основанием для проведения ряда инструментальных обследований:

• эластографии – диагностического метода для определения степени фиброза (разрастания и размеров очагов соединительной ткани);
• томографии – подробное рентгенологическое исследование, позволяющее исключить либо подтвердить наличие злокачественных или доброкачественных новообразований;
• биопсии печени, которая дает максимально полную информацию о структурных изменения в органе.

Низкая вирусная нагрузка говорит о медленно развивающейся вирусной инфекции. Такой процесс не исключает прогрессирования поражения печени, но вероятность возникновения тяжелого декомпенсированного цирроза или гепатоцеллюлярной карциномы низка. У такой категории пациентов редко возникают внепеченочные проявления гепатита С (кардиоваскулярные расстройства, аутоиммунные нарушения), что также повышает шансы не только успешной противовирусной терапии, но и быстрого общего восстановления.

При постановке диагноза назначают несколько исследований, таким образом ошибка в проведении тестирования исключается.

Основными маркерами при гепатите С служат:

1. Положительный результат иммуноферментного анализа. Но ИФА во многом зависит от состояния иммунной системы человека, поэтому на этапе первичной диагностики не исключают ложноположительный либо ложноотрицательный результат.
2. Коэффициент позитивности при гепатите С выше 1. Рассчитывается по титру антител. Иногда референсные значения могут отличаться в зависимости от используемой тест-системы, но физиологическая норма всегда указывается в бланке с результатами.
3. Положительный результат качественного теста ПЦР. Обнаружение РНК возбудителя патологии однозначно указывает на инфицирование.
4. Определяемая виремия методом количественной ПЦР.

Косвенными лабораторными признаками гепатита С служат:

• повышение уровня печеночных ферментов, билирубина;
• изменение уровня лимфоцитов, в некоторых случаях, лейкоцитов, ускорение СОЭ.

Но при ответе на вопрос, какие показатели крови указывают на гепатит С, доктора руководствуются результатами ПЦР, так как ИФА может быть непоказательным при наличии определенных заболеваний (ВИЧ, аутоиммунных расстройств). Также неверные результаты вероятны при беременности, приеме некоторых лекарств. Не последнюю роль играет и анамнез.

При гепатите С антитела, как и РНК обнаруживаются при помощи тест-систем не сразу, а спустя как минимум 10–14 дней. ИФА может дать достоверный результат позже – через 4–6 недель после инфицирования. Поэтому если есть серьезные основания предполагать контакт с кровью больного, при негативном результате все анализы имеет смысл повторить через 1–1,5 месяца.

В современных лабораториях тестирование проводят с соблюдением всех норм (в соответствии с требованиями отечественного и зарубежного законодательства), но исключить вероятность ошибок и ложных результатов нельзя.

Если на выполнение ИФА оказывает влияние состояние иммунной системы человека, правильность выполнения ПЦР зависит от:

• соблюдения стерильности при заборе, транспортировке и работе с образцами крови пациента, чтобы исключить возможный контакт с контаминированными образцами;
• соблюдения температурного режима и других правил при хранении и перевозке пробирок с кровью;
• правильности постановки ПЦР (начиная от работы лаборанта и заканчивая функционированием автоматических диагностических систем);
• качества используемых лабораторных материалов.

Но количественный анализ проводится на основании уже выполненных исследований, которые однозначно указывают на наличие HCV (ИФА и качественная ПЦР). Поэтому при отрицательном результате на фоне подтвержденного диагноза исследование повторяют. Кроме того, обращают внимание, как обозначается гепатит С в анализах.

В некоторых клиниках могут пользоваться устаревшей системой, когда виремия указывается не в международных единицах, а в количестве копий. Иногда путаница возникает с подсчетом нулей в указанных цифрах. Именно поэтому расшифровкой обозначений в бланке результатов должен заниматься врач.

Определение вирусной нагрузки возможно и с использованием других методик, включая серологические. Так, исследование на антиген core считают альтернативой количественной ПЦР.

Но большинство врачей отдают предпочтение ПЦР благодаря:

• доступности и качеству тест-систем: их производством занимаются ведущие мировые фармацевтические и медикотехнологические корпорации;
• быстроте и простоте выполнения;
• высокой чувствительности: современные методики ПЦР позволяют обнаружить РНК патогена в количестве 5 МЕ/мл;
• универсальности: количественное определение проводится одинаковыми методиками вне зависимости от генотипа HCV;
• объективности вне зависимости от состояния здоровья пациента (в отличие от ИФА), что позволяет проводить исследования на разных этапах диагностики и лечения;
• отсутствию влияния на результаты принимаемых лекарств.

Сейчас ПЦР остается основным методом количественного определения виремии. Тест используется повсеместно практически во всех лабораториях и больницах. Но во избежание ошибок, перед сдачей анализа нужно поинтересоваться, по какой технологии будет проводиться исследование, чтобы соотнести результаты дальнейших анализов.

источник