Меню Рубрики

Метод анализа ифа на гепатит

Анализ на гепатит С необходимо сдавать всем пациентам с подозрением на подобное расстройство. Существует несколько разновидностей подобной диагностической меры. Они указывают, какой именно вирус, а точнее, его разновидность, стала возбудителем недуга.

Необходимость проведения лабораторных обследований заключается в том, что в некоторых случаях подобная болезнь может протекать без выражения каких-либо признаков. Кроме этого, стоит учесть, что вирусный гепатит не имеет специфической симптоматики, отчего его можно ошибочно принять за ряд других патологий ЖКТ. Из этого следует, что диагностика гепатита С основывается на данных лабораторного и инструментального обследования пациентов.

Для окончательного утверждения или отрицания инфицирования человека этим вирусом необходимо проведение следующих тестов:

  • общий анализ крови – показывающий нарушение функционирования поражённого органа;
  • биохимический анализ крови на АЛТ, АСТ и билирубин. Такое исследование даст возможность получить информацию о разрушении печёночных клеток;
  • иммуноферментный анализ – это наиболее эффективная процедура, указывающая на стадию протекания подобного поражения печени, тип вируса и его количественные значения;
  • ПЦР-диагностика – укажет на наличие вируса и его происхождение;
  • иммунохроматографический анализ – представляет собой экспресс-тест, который позволяет в короткие сроки установить наличие у пациента антител.

Показаниями к осуществлению вышеописанных анализов на гепатит С выступают:

  • незащищенный половой акт с заражённым человеком;
  • появление одного или нескольких симптомов подобного недуга. К основным из них стоит отнести желтуху, тяжесть, дискомфорт и боль в зоне правого подреберья, снижение аппетита, нарушение сна, частые приступы тошноты и рвоты;
  • переливание крови;
  • недавнее нанесение татуировок или пирсинга;
  • наркомания – инфицироваться можно через использование одного шприца для инъекционного введения наркотиков;
  • наличие у человека в близком окружении людей с подобным диагнозом – высока вероятность инфицирования при пользовании бытовыми предметами с переносчиком вируса.

Проводить расшифровку анализов должен только тот врач, который их назначил. Это обуславливается тем, что клиницист владеет необходимой информацией о состоянии больного.

Общий анализ крови при гепатите даёт возможность получить клиницисту полную информацию об общем состоянии и функционировании внутренних органов пациента. Изменения в таких показателях не будут специфическими, но при различном протекании вирусного гепатита они будут иметь особенные изменения. Для гепатита С характерны такие отклонения:

  • снижение содержания лейкоцитов и уровня гемоглобина;
  • повышение лимфоцитов среди всего количества лейкоцитов;
  • нарушение процесса свёртываемости крови;
  • уменьшение концентрации тромбоцитов;
  • возрастание СОЭ.

Биохимический анализ крови направлен на отражение функционирования печени. В анализе особо важными являются следующие показатели:

  • АЛТ и АСТ – они попадают в кровь в случаях уничтожения клеток печени. При скрытой форме протекания подобного заболевания такие показатели нередко выступают единственными признаками протекания в организме патологического процесса. Нормой для представительниц женского пола является 31 МЕ/л, а у мужчин – 37. При наличии гепатита подобные показатели будут повышены;
  • билирубин – указывает на тяжесть проявление такого симптома, как желтуха. Лёгкой форме будут соответствовать значения до 85 мкмоль/л, а на тяжёлую укажут показатели свыше 170 мкмоль/л для представителей обоих полов.
  • активность других ферментов печени.

С помощью анализа ПЦР на гепатит С клиницисты смогут выявить генетический материал возбудителя недуга и его количество. Преимуществом такой методики является возможность определения вируса при его минимальном количестве.

Такое исследование входит в список тех анализов, которые нужно сдать абсолютно всем пациентам, обратившимся за консультацией по поводу возможного наличия вирусного поражения печени.

Анализ может определить наличие инфицирования уже через пять дней со времени предполагаемого заражения. Положительный результат укажет на протекание патологии в организме, однако такой исход — ещё не повод для отчаяния и паники. Это обуславливается несколькими причинами:

  • анализ крови иногда может дать ложноположительный анализ на гепатит С. Такой итог может говорить о развитии аутоиммунной патологии, формировании злокачественных или доброкачественных образований, широком спектре других расстройств вирусной этиологии. Помимо этого, он нередко является следствием индивидуальных особенностей иммунной системы;
  • подобный результат, помимо всего прочего, указывает и на наличие инфекции в прошлом;
  • данное заболевание является излечимым – оно хорошо поддаётся консервативной терапии.

Полимеразная цепная реакция существует нескольких разновидностей:

  • качественный и количественный анализы на гепатит С;
  • генотипирование.

Анализ на гепатит С ПЦР качественный – позволяет понять, присутствует ли вирус в крови или нет. Стандартной чувствительностью такого теста будут показатели от 10 до 500 МЕ/мл. Его исходами могут быть два результата:

  • присутствует – говорит об активном размножении вируса;
  • отсутствует – количество возбудителя в крови человека находится ниже уровня восприимчивости такого лабораторного исследования.

ПЦР количественный – это значение вирусной нагрузки, отображающее содержание РНК вируса один кубический сантиметр крови. Такая методика не только является частью диагностических мероприятий, но также даёт возможность контролировать эффективность противовирусной терапии. Таким образом, при помощи такого теста уточняется несколько важных факторов:

  • инфекционность – это возможность передачи возбудителя от одного человека к другому. Чем выше количество РНК гепатита, тем больше шансы заразить здорового человека, в частности, во время полового контакта, а также при пользовании одной бритвой или маникюрными принадлежностями;
  • выбор тактики терапии;
  • продолжительность приёма противовирусных препаратов и прогноз.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит зависит от разновидности лабораторного теста и границ его восприимчивости. Нижним значением является не более 600.000 МЕ/мл, средние показатели находятся в пределах от 600.000 до 700.000 МЕ/мл. Результаты от 800.000 МЕ/мл и более уже считаются высокой степенью содержания РНК вируса.

Генотипирование позволяет выявить, каким именно из одиннадцати генотипов возбудителя заразился человек.

После расшифровки анализов клиницист может назначить индивидуальную схему медикаментозной терапии.

ИФА – иммуноферментный тест, являющийся наиболее распространённым и наиболее точным тестом, который позволяет определить наличие или отсутствие антител к возбудителю гепатита.

ИХА – иммунохроматографическое исследование, представляющее собой экспресс-тест для выявления антител. Он осуществляется при помощи специальных полосок и кассет. Несмотря на то что такая методика является довольно новой и только в начале пути своего совершенствования, выделяют один её недостаток, а именно низкую точность. Индикаторные полоски далеко не во всех случаях способны показать итог теста с точностью до сотых.

В независимости от того, какие анализы нужно сдать, они требуют тщательной подготовки пациента. Для получения достоверных результатов анализов на гепатит С, пациенту рекомендуется:

  • сдавать анализы в первой половине дня, обязательно на голодный желудок;
  • непосредственно перед лабораторной диагностикой запрещается пить кофе, чаи, соки или другие напитки. Можно принимать внутрь только очищенную воду без газа;
  • за двое суток до осуществления исследований стоит отказаться от употребления жирных и острых блюд, а также от распития спиртного;
  • минимум за два часа до какого-либо анализа нужно ограничиться от выкуривания сигарет.

Основу лабораторной диагностики составляет ПЦР, во время расшифровки которого, учитываются:

  • положительный или отрицательный результат качественного анализа;
  • количество копий вируса, которое при подобном недуге всегда будет показывать выше 800.000 МЕ/мл.

Во время расшифровки особое внимание обращают на значение второго пункта.

В некоторых случаях наблюдается такая ситуация, когда антитела к гепатиту С положительны, а ПЦР — отрицательный. Это свидетельствует о ранее перенесённом заболевании данной этиологии.

Для прохождения лабораторной диагностики необходимо обратиться к инфекционисту. Только этот специалист сможет провести грамотное первичное обследование и расшифровку результатов анализов.

источник

Чтобы оценить работоспособность защитных функций организма и выявить точные диагностические данные, проводят иммуноферментный анализ. В случаях инфицирования человека обнаруживаются кардинальные изменения в крови и получают результат ИФА на гепатит С положительный.

Метод изучения биологического материала ИФА относят к определению иммунохимических реакций, открывающих взаимосвязи антигенов и антител. В ходе проведения анализа к молекуле антитела химическим способом подсаживают антиген-экзим, служащий маркером, который указывает на компоненты процесса.

К компонентам иммуноферментного анализа относят:

  • антитела:
  • антитела промаркированные;
  • antibodies-attacking-a-virus1-440×264 антиген;
  • субстрат фермента;
  • краситель-индикатор.

Процесс выработки антител и иммуноглобулинов запускается в момент проникания в организм пациента посторонних генов или болезнетворных бактерий.

Задачей иммуноглобулинов считают нейтрализацию антигенов, происходящую при их взаимодействии. В ходе взаимодействия иммуноглобулины формируют комплект антиген-антител, которые имеют количественные и качественные характеристики. Эти значения и изучаются в процессе исследования анализа.

Для регистрации результата в ходе тестирования иммуноферментного анализа у человека забирают биологический материал. Обычно для этих целей используют венозную кровь, но в определенных ситуациях необходим анализ спинномозговой жидкости, стекловидного тела или околоплодных вод беременной женщины. Главной особенностью этого теста является его высокая достоверность, которая составляет порядка 80%.

К плюсам иммуноферментного анализа также относят:

  • метод ИФА превосходит прочие тесты по точности определения важных показателей в десятки раз;
  • для выполнения ИФА не требуется много времени, результаты, подтверждающие или опровергающие наличие вируса в организме, получают довольно быстро;
  • стоимость проведения ИФА доступна большинству категорий населения, в отличие от прочих тестов;
  • проведение ИФА дает возможность обнаружить проблему при начальных проявлениях, что значительно облегчает последующий процесс лечения человека;
  • все стадии проведения этого анализа автоматизированы;
  • высокая степень унификации теста.

К негативным проявлениям данного анализа относят возможность ложноположительных и отрицательных результатов. Сомнительные итоги могут регистрироваться при различных патологических состояниях, беременности и при употреблении медикаментозных средств, которые влияют на выработку организмом антител.

С помощью проведения иммуноферментного анализа подсчитывается количество антител к вирусу гепатита С. В ходе исследования определяется число этих образований по IgM типу, который соответствует острому течению недуга и IgG, обнаруживаемому при хронической форме.

Антитела IgM регистрируют в течение двух недель после инфицирования организма пациента вирусом гриппа С в острой форме, срок существования этих образований от 3 до 5 месяцев.

Антитела IgG вырабатываются спустя несколько месяцев после поражения организма, но их существование подтверждается в течение десяти лет, даже при условии полного выздоровления пациента.

Отрицательный результат тестирования дает возможность утверждать, что антитела обоих типов отсутствуют в организме и на данный момент гепатит С не обнаружен. Следует учитывать, что если человек заразился в течение последних двух недель, определение патологии невозможно.

Положительный результат теста показывает наличие того или иного типа антител в организме пациента. Данный показатель характеризует инфицирование гепатитом С в острой или хронической форме. Следует учитывать, что фиксация этих образований не дает возможность однозначно указывать на заражение человека, вполне допустимо, что он является только носителем. Бывают случаи, когда при расшифровке данных фиксируется ложноположительный результат.

Это происходит в результате фиксирования лабораторными приборами антител, которые производятся защитной системой человека в ответ на следующие патологии:

  • аутоиммунное воспаление;
  • проникновение в организм пациента прочих инфекций;
  • при беременности.

Статистика проведения иммуноферментного исследования показывает, что ложноположительный вывод регистрируется в 15% всех результатов, подтверждающих наличие вируса. Для беременных женщин данный показатель еще выше.

Недостоверный вывод тестирования на гепатит С выявляется при сбоях функционирования внутренних органов и технических сбоев, то есть халатного отношения медицинского персонала к своим обязанностям. Ошибки обнаруживаются не более чем в 15% случаев, но их можно избежать, выполняя следующие правила:

Перед сдачей анализа нельзя курить

  • для сдачи анализа необходимо выбирать только проверенные, сертифицированные лаборатории с обученным медицинским персоналом;
  • накануне проведения анализов следует прекратить употребление любых медикаментозных препаратов, если прием лекарства обусловлен состоянием пациента, он должен предупредить персонал лаборатории об этом факте;
  • процедура обычно проводится утром натощак, но перед этим пациенту не следует проявлять излишнюю физическую активность и курить;
  • непосредственно перед проведением анализа рекомендуется определить температуру тела, она не должна превышать норму.

При сомнении в правильности выводов тестирования, назначается повторный анализ. В идеале требуется проведение трех исследований биологического материала на гепатит С.

Если первый тест показал наличие антител в крови пациента, а последующие два не выявили эти образования, можно утверждать, что инфицирования организма вирусом гепатита С нет. Существует ряд заболеваний, которые влияют на результат тестирования крови на наличие вируса гепатита С.

Некоторые патологии сопровождаются выработкой антител, и в этом случае подтверждение наличия вируса гепатита С в организме пациента производится с помощью других методов исследования, так как многократно повторяющиеся ошибки при ИФА анализе не дают гарантии правильного диагноза.

Комплексное изучение с применением исследования биологического материала человека в лабораторных условиях и с использованием инструментальных методов позволит выявить истинную причину недомогания, и исключить гепатит С.

Чаще всего причиной ложноположительного результата анализа являются следующие патологии:

  • инфекционные заболевания острого или хронического типа;
  • рак или доброкачественные новообразования во внутренних органах;
  • заболевания аутоиммунного типа, при течении которых образуются антитела к собственным клеткам организма пациента;
  • туберкулез;
  • малярия;
  • склеродермия;
  • герпес;
  • рассеянный склероз;
  • артрит.

Все перечисленные заболевания являются причиной возникновения сбоев в иммунной системе человека, в результате чего иммуноглобулины начинают вырабатываться с превышением нормы, что и становится помехой для постановки точного диагноза и подтверждения наличия вируса гепатита С в организме пациента.

После соприкосновения с источником инфекции организм человека может успешно подавить воспаление, но антитела, при проведении ИФА, все еще обнаруживались в крови, что стало причиной ложноположительного результата теста.

Читайте также:  Сдать анализы на спид гепатит

Довольно часто такой результат тестирования регистрируется у беременных женщин, поэтому без повторного анализа, подтверждение заболевания у такого пациента, не проводится.

Причиной отклонений от нормы становится изменения в организме женщины, которая ждет ребенка. В этот период у нее происходит перестройка внутренних органов, что выражается в следующих процессах:

  • изменяется гормональный фон;
  • в крови формируются специфические белки, вследствие чего меняется ее состав;
  • уровень цитокинов увеличивается.

Помимо перечисленных факторов, влияющих на итоги иммуноферментного анализа, нужно отметить ошибки медицинского персонала, приводящие к обнаружению ложноположительных выводов тестирования:

  • недостаточная квалификация персонала, проводящего забор биологического материала;
  • сбои в функционировании лабораторного оборудования;
  • подмена проб по халатности;
  • ненадлежащее хранение биологического материала (нарушение температурного режима).

При проведении иммуноферментного анализа следует учитывать, что пациент мог недавно получить прививку против гриппа, гепатита или столбняка. Этот факт нужно обязательно довести до сведения лечащего врача или медицинского персонала в лаборатории, чтобы была назначена другая дата исследования.

Регистрация антител в биологическом материале пациента, указывающая на присутствие вируса гепатита С в организме, не всегда является окончательным диагнозом заболевания. Ложноположительные результаты иммуноферментного анализа нередки, и повторные тесты часто опровергают первоначальные выводы.

При положительных анализах нужно обратиться к гепатологу

Нужно понимать, что ИФА тест дает возможность выявить количественные и качественные изменения в биологическом материале человека и определить характер течения заболевания. Делать окончательное заключение об инфицировании гепатитом С можно только после комплексного изучения состояния пациента с применением других лабораторных и инструментальных исследований.

Если положительный результат выявлен надлежащим образом, человеку следует отправиться к специалистам: инфекционисту и гепатологу. Только профильный врач сможет определить, какие тесты необходимо пройти дополнительно до назначения курса терапии

По данным медицинской статистики, в мире инфицировано гепатитом С почти 4% населения, но этот показатель явно занижен, так как многие носители недуга не подозревают о своей проблеме. Поэтому проведение ИФА теста в качестве профилактической меры поможет выявить заболевание на начальной стадии и быстро справиться с болезнью.

источник

Всемирный день борьбы с гепатитом

27-28 июля пройдите обследование на гепатиты B И С БЕСПЛАТНО

Гепатит — это воспалительный процесс, который происходит в клетках печени, в результате чего происходит разрушение клеток (гепатоцитов) и орган не может полноценно выполнять свои функции. При хронических формах заболевания полного восстановления поврежденных клеток печени не происходит, и они замещаются соединительной тканью. Что, в свою очередь, приводит к изменению структуры органа, развитию цирроза и даже раку печени (гепатоцеллюлярной карциноме).

ВАЖНО! К сожалению, гепатит может проходить и без специфических симптомов. В этом случае поставить диагноз возможно только при проведении лабораторного обследования.

Для вашего удобства разработаны комплексные программы лабораторного обследования, включающие основные показатели для первичного скрининга.

Одним из самых устойчивых является вирус гепатита А (также известный как болезнь Боткина). Сохраняет свои инфицирующие свойства в воде, пищевых продуктах, игрушках, посуде и предметах обихода при комнатной температуре до нескольких недель, при температуре -20°C – до нескольких лет. Для заражения достаточно всего несколько вирусных частиц.

Заражение возможно через пищевые продукты (овощи, фрукты, ягоды и морепродукты, которые не подвергались термической обработке); при употреблении воды из водоемов (родники, ручьи, источники), которая не подвергалась кипячению. Также возможен бытовой путь передачи при несоблюдении правил личной гигиены, использовании общей посуды, игрушек. Для заболевания характерны эпидемические вспышки. Хроническая форма заболевания отсутствует; для его профилактики разработана вакцина.

Один из самых устойчивых среди вирусов гепатита. Может длительно сохранять свои инфицирующие свойства.

Заражение возможно при проведении различных процедур и манипуляций, связанных с нарушением целостности кожных покровов и слизистых оболочек; при незащищенном половом контакте с инфицированным партнером; от инфицированной матери – новорожденному.

Полностью выздоравливают почти 90% заболевших. Примерно у 10% пациентов вирусный гепатит В становится хроническим. Без лечения хронический гепатит может привести к фиброзу, циррозу и раку печени. Для его профилактики разработана вакцина

Менее устойчив в окружающей среде, чем вирус гепатита В, но тем не менее сохраняет свои инфицирующие свойства в течение 30 минут при температуре +60°С.

Заражение возможно при проведении различных процедур и манипуляций, связанных с нарушением целостности кожных покровов и слизистых оболочек; при незащищенном половом контакте с инфицированным партнером; от инфицированной матери – новорожденному.

Острая форма заболевания с последующим выздоровлением развивается лишь у 20-30% заболевших. У большинства инфицированных (70-80%) гепатит С переходит в хроническое течение.

Представляет собой «неполноценный» вирус. Он обладает инфицирующими свойствами только в присутствии вируса гепатита B — самостоятельная форма заболевания невозможна. Однако, возможно одновременное заражение вирусным гепатитом В и D, либо заражение вирусным гепатитом D на фоне хронического вирусного гепатита B. Заражение возможно при проведении различных процедур и манипуляций, связанных с нарушением целостности кожных покровов и слизистых оболочек; при незащищенном половом контакте с инфицированным партнером; от инфицированной матери – новорожденному.

Устойчивость в окружающей среде меньше, чем у вируса гепатита А. Заражение возможно через пищевые продукты (овощи, фрукты, ягоды и морепродукты, которые не подвергались термической обработке); при употреблении воды из водоемов (родники, ручьи, источники), которая не подвергалась кипячению.

Этот тип гепатита наиболее опасен для беременных женщин, поскольку именно у них гепатит Е чаще всего приводит к развитию острой печеночной недостаточности, потере плода и летальному исходу. По данным ВОЗ смертность от вирусного гепатита Е среди беременных женщин достигает 20-25%. Хроническая форма заболевания отсутствует.

источник

При подозрении на наличие вируса необходимо прежде всего сдать анализы на гепатит С, чтобы точно быть уверенным в диагнозе, определить генотип и правильно подобрать соответствующую схему терапии. Сдается сразу несколько анализов, чтобы не было никаких сомнений в наличии заболевания.

Алгоритм диагностики и ведения пациентов с подозрением на гепатит С заключается в следующем:

  1. Вирусологические исследования проводятся в два этапа (линии). Первая – ИФА (иммуноферментный анализ крови на наличие маркеров гепатита С – анти-HCV). Вторая линия – ПЦР и генотипирование.
  2. Биохимическое исследование крови – главные показатели этого анализа АЛТ, АСТ и уровень билирубина. Для оценки общего состояния организма и возможных патологических процессов в других системах назначается общий анализ крови.
  3. Биопсия или ультразвуковая эластометрия.

Биохимия, общий анализ крови и эластометрия являются дополнительными исследованиями, которые позволяют составить полную картину заболевания и назначить грамотную терапию.

Позволяет подтвердить наличие или отсутствие антител (специфических белков) в сыворотке крови. Они являются основным показателем иммунного ответа на присутствие инфекции в печени.

Сразу важно понять, что наличие антител – это не 100% подтверждение присутствия вируса гепатита С в организме больного. Если анализ крови на гепатит С положительный по методу ИФА, то это является только основой для более углубленных исследований – направление на вирусологическое обследование второй линии – ПЦР.

На исследование берут только венозную кровь пациента, целесообразно проводить анализ только натощак, когда на показатели крови не оказывает влияние процесс всасывания пищи. Кроме этого пациент должен в течение трех суток соблюдать определенную диету – нельзя употреблять жирное, жареное, выпечку, спиртосодержащие напитки.

В сыворотке крови можно обнаружить несколько видов антител, все зависит от стадии заболевания. Иногда наличие определенных антител доказывает наступление ремиссии.

Можно выделить четыре класса антител, которые определяют при анализе на гепатит С:

  1. Иммуноглобулины G (Anti-HCV IgG) – их присутствие сигнализирует о хронической форме гепатита С, когда вирус находится в подавленном состоянии. Носителей также можно вычислить по присутствию этих антител.
  2. Антитела класса М (Anti-HCV core IgM) – повышенный уровень этих иммуноглобулинов говорит об остром течении инфекции, либо рецидиве хронического гепатита. Их можно обнаружить по истечению 12 недель после инфицирования.
  3. Суммарное определение антител к гепатиту С (Anti-HCV total) – это одновременный учет фракций класса М и G. Данное обследование сыворотки крови на вирус гепатита С позволяет установить даже минимальные концентрации антител и является универсальной методикой. Обнаружение этих антител происходит уже после 4-6 недель развития заболевания.
  4. Антитела к неструктурным белкам HCV (Anti-HCV NS) – этот метод применяют редко, так как суммарное определение антител дает те же результаты. В сыворотке можно определить несколько белковых соединений: Anti-NS3, Anti-NS4, Anti-NS5. Anti-NS3 можно вычленить на ранних стадиях развития заболевания. А два других распознаются уже после выявления остальных маркеров при анализе на гепатит С.

Этот анализ сыворотки крови полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет выявить наличие РНК вируса гепатита С. Если результат негативный, то обследование больного прекращается. Повторная сдача анализа ПЦР HCV РНК назначается через полгода.

Первый этап – это качественный ПЦР, если сдать этот анализ на гепатит С, то он покажет наличие или отсутствие вируса в крови. Лучше выбрать обычную чувствительность до 60 МЕ/мл.

Если качественный ПЦР дал позитивный результат анализа крови на гепатит С, то проводится дополнительный количественный. Он помогает определить вирусную нагрузку на организм, узнать концентрацию вируса в крови. Данный метод более дорогостоящий, поэтому его стоит проводить после получения результатов качественного ПЦР.

Алгоритм сдачи Качественного и Количественного ПЦР.

Интерпретация исследований ПЦР количественный:

  • Низкие показатели вирусной нагрузки – до 400 тыс. МЕ/мл.
  • Средние показатели до 800 000 МЕ/мл.
  • Высокая степень – свыше 800 тысяч МЕ/мл.

Таким образом два вида анализа на гепатит С (на присутствие и количество вирусных вирионов в крови) позволяют поставить правильный диагноз.

Для того чтобы начать грамотное лечение необходимо сдать анализы на гепатит С, только случае получения положительных результатов по нескольким методикам (окончательным является ПЦР) можно говорить о верно поставленном диагнозе.

В таблице представлены расшифровки анализа крови на присутствие гепатита С. Если сдается проба на Anti-HCV total и ПЦР, то можно сделать следующие выводы:

Расшифровка результатов исследований Исследование Anti-HCV total ПЦР диагностика
Гепатита С нет, можно проводить повторное исследование через 6 месяцев. негативный отрицательный
Период выздоровления, после качественно проведенной терапии противовирусными препаратами прямого действия, либо произошло самоизлечение. позитивный негативный
Активное течение вирусного гепатита С, клиническая картина ярко выражена. позитивный положительный

Схема терапии, комбинация медикаментов и продолжительность лечения напрямую зависят от генотипа. Существует 6 генотипов, при использовании лекарственных формул с прямым противовирусным действием удается успешно излечить все генотипы.

Исследование проводится методом ПЦР Real time, то есть основой для определения генотипа становится РНК вируса – это высокоточный метод диагностики.

Для данного исследования используется венозная или капиллярная кровь. Сдается анализ на голодный желудок (нельзя кушать в течение 12 часов перед сдачей крови). Желательно за три дня до проведения обследования не употреблять алкоголь, за 30 минут до забора крови нельзя курить.

После получения результатов они анализируются: при увеличении содержания определённых ферментов можно говорить о наличии процессов, связанных с поражениями определенных участков печени. Нормальные показатели указаны в таблице:

Норма АЛТ, АСТ у взрослых и детей
Категория пациентов АЛТ (Ед/л) АСТ (Ед/л)
Дети до месяца До 38 До 32
Дети с 1-12 месяцев Меньше 27 Меньше 36
С года до 16 лет До 22 До 31
Женщины Меньше 18 Меньше 22
Мужчины До 15 До 17

Гистологическая картина после определения биохимических показателей крови показывает неспецифические воспалительно-некротические изменения, сочетание жировых и гидропических дистрофических состояний, образование лимфоидных фолликул, общую оценку работоспособности печени.

Биопсия – это более старый и травматичный метод исследования печени, который позволяет определить тяжесть ее поражения при гепатите С.

С 2013 года крупные клиники в России стали устанавливать оборудование для ультразвуковой эластографии. Этот метод позволяет получить более точный результат и без травмирования клеток печени.

Существуют две шкалы оценки степени фиброза, не важно каким методом получены результаты – по Knodell и METAVIR. Второй способ более чувствительный и разработан для оценки влияния гепатита С на работу печени. Он выделяет, в отличии от Knodell, в отдельную стадию – умеренную активность. Она характеризует фиброз портальных трактов с единичными септами, таким образом оценка будет более детальной.

Шкала METAVIR:

  • А0 – некровосполительной активности нет;
  • А1 – активность минимальна;
  • А2 – умеренная;
  • А3 – выраженная.

По шкале METAVIR тяжесть фиброза оценивается следующим образом:

  • F0 – фиброз отсутствует – 5,8 кПа;
  • F1 – фиброз без вовлечения в патологический процесс перегородок (септ) – от 5,9 до 7,2 кПа;
  • F2 – с вовлечением нескольких септ – диапазон показателей 7,3-9,5 кПа;
  • F3 – в фиброз вовлечено несколько перегородок – 9,6-12,5кПа;
  • F4 – цирроз – выше 12,6 кПа.

Кроме вышеперечисленных методик врач может назначить УЗИ, но не простое, а с цветным допплеровским картированием. Это исследование позволяет оценить скорость и вектор движения крови внутри органа, области, где кровообращение отсутствует.

Читайте также:  Сдать анализы на спид гепатит сифилис

источник

Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.

При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.

Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.

Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.

При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.

Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.

HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.

При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg.
Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого пациента относят к хроническим больным вирусным гепатитом В.
Наличие HBsAg – довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн. носителей, а у нас в стране – около 10 млн. носителей.
Прекращение циркуляции HBsAg с последующей сероконверсией (образование анти-HBs) всегда свидетельствует о выздоровлении — санации организма.

Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:

для диагностики острого гепатита В:

  • инкубационный период;
  • острый период заболевания;
  • ранняя стадия реконвалесценции;

для диагностики хронического вирусного гепатита В;

при заболеваниях:

  • персистирующем хроническом гепатите;
  • циррозе печени;

для скрининга и выявления больных в группах риска:

  • больные с частыми гемотрансфузиями;
  • больные с хронической почечной недостаточностью;
  • больные с множественным гемодиализом;
  • больные с иммунодефицитными состояниями, в том числе СПИДом.

Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.

В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.

Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:

  • хронического вирусного гепатита В при наличии HBs антигена в сыворотке крови;
  • перенесенного вирусного гепатита В.
  • Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.

    В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
    HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.

    Этот антиген часто обнаруживается при хроническом активном гепатите вирусной этиологии. Особый интерес к определению HBeAg связан с тем, что его обнаружение характеризует активную репликативную фазу инфекционного процесса . Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса.

    Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.

    Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:

  • инкубационного периода вирусного гепатита В;
  • продромального периода вирусного гепатита В;
  • острого периода вирусного гепатита В;
  • хронического персистирующего вирусного гепатита В.
  • Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.

    Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.

    Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.

    Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:

  • установление начальной стадии заболевания;
  • острый период инфекции;
  • ранняя стадия реконвалесценции;
  • реконвалесценция;
  • поздняя стадия реконвалесценции.
  • диагностика недавно перенесенного вирусного гепатита В;
  • диагностика хронического персистирующего вирусного гепатита В.
  • Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.

    Критериями наличия хронического гепатита В являются:

  • бнаружение или периодическое выявления ДНК ВГВ в крови;
  • постоянное или периодическое повышение активности АЛТ/АСТ в крови;\
  • морфологические признаки хронического гепатита при гистологическом исследовании биоптата печени.
  • Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
    Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.

    Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.

    Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.

    Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.

    Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:

  • разрешения сомнительных результатов серологических исследований;
  • выявление острой стадии заболевания по сравнению с перенесенной инфекцией или контактом;
  • контроля эффективности противовирусного лечения.
  • Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии

    Этот метод дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к активным препаратам.
    Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыворотке крови применяются тест-системы, чувствительность которых составляет 50-100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5 Х 10^3 -10^4 копий/мл. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации.

    Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.

    • Оценку уровня виремии осуществляют следующим образом:
    • менее 2.10^5 копий/мл (менее 2.10^5 МЕ/мл) – низкая виремия ;
    • от 2.10^5 копий/мл (2.10^5 МЕ/мл) до 2.10^6 копий/мл (8.10^5 МЕ/мл) – средняя виремия;
    • более 2.10^6 копий/мл – высокая виремия.

    Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.

    Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).

    Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.

    источник

    Во многих случаях врачам необходимо правильно оценить, насколько хорошо и слаженно работают защитные функции организма пациента. Для точной диагностики различных заболеваний, патологий крови, выявления иммунодефицитов используется специальный анализ крови методом ИФА. Эта аббревиатура расшифровывается как иммуноферментный анализ.

    Этот метод относится к числу иммунохимических реакций, которые основаны на взаимодействии антигенов и антител. К молекуле антитела химически присоединяют молекулу антигена-энзима. Фермент применяют в качестве метки, по которой следят за одним из компонентов реакции.

    Основными компонентами ИФА являются:

    • антиген;
    • антитело;
    • антитело, меченное ферментом;
    • субстрат фермента;
    • индикаторный краситель.

    Антитела или иммуноглобулины вырабатываются в тот момент, когда в организм попадают какие-то антигены или чужеродные микроорганизмы. Иммуноглобулины входят в контакт с антигенами и обезвреживают их. Связываясь с конкретным антигеном, иммуноглобулины образуют своеобразный комплект: антиген-антитело. У этого комплекта могут быть как количественные, так и качественные показатели. Именно их и определяет с высокой точностью метод ИФА.

    В некоторых случаях в качестве исследуемого материала берут спинномозговую жидкость или содержимое стекловидного тела. У беременных женщин исследуют околоплодные воды. Но чаще всего для исследования используется кровь пациента. Она берется из вены строго натощак.

    Перед сдачей анализа следует воздержаться от еды в течение 12 часов. Также в течение 2-3 дней перед анализом не надо есть жирную и жареную пищу, употреблять алкоголь.

    Физические нагрузки перед сдачей анализа и стрессы могут не лучшим образом повлиять на результат, поэтому желательно их исключить.

    Врач должен знать, не принимал ли пациент накануне каких-то лекарств. Женщинам необходимо сообщить доктору о фазе своего менструального цикла – это тоже имеет значение.

    Врач может назначить сдачу этого анализа при подозрении на следующие заболевания:

    • вирусные заболевания – гепатит, герпес, цитомегаловирус и т.п.;
    • аллергические состояния;
    • заболевания, передающиеся половым путем – хламидиоз, сифилис, микоплазмоз и т.д.;
    • иммунодефицитные заболевания;
    • некоторые онкологические заболевания (например, рак печени).

    Также метод ИФА применятся для того, чтобы лечащий врач мог оценить, насколько эффективна назначенная пациенту терапия при лечении того или иного заболевания, каков уровень гормонов у больного. Он также входит в комплексное обследование пациента перед предстоящим оперативным вмешательством.

    Расшифровка некоторых показаний анализа ИФА:

    Показатель IgG, Показатель IgA Показатель IgM Результат
    не определяется не определяется полное выздоровление
    отсутствует иммунитет

    к инфекции

    + и — + и — + острая инфекция
    + Поствакцинальный или

    постинфекционный иммунитет

    + и — + и — хроническая инфекция
    + + + обострение хронической

    Время ожидания результатов зависит от того, какое именно заболевание необходимо диагностировать. Кроме этого, надо учитывать возможности лаборатории, в которой проводится исследование. Некоторые небольшие медицинские учреждения в целях экономии средств ждут, когда кровь сдадут несколько пациентов, чтобы одновременно использовать реактивы.

    Но даже с учетом всех вариантов, вы должны получить результаты не позднее чем через 10 дней после забора крови. А в самом быстром случае время ожидания составляет 1 день.

    К несомненным плюсам данного метода исследования крови относятся:

    • высокая точность показателей. ИФА превосходит другие методы по чувствительности в 10- 100 раз;
    • высокая скорость проведения – выигрыш во времени получения результата повышается в 30 раз;
    • невысокая стоимость по сравнению с другими методами исследований;
    • возможность раннего диагностирования заболеваний и отслеживания динамики процесса болезни;
    • автоматизация всех этапов исследования;
    • высокая унификация.

    К недостаткам можно отнести то, что в отдельных случаях результаты бывают как ложноположительными, так и ложноотрицательными. На достоверность могут повлиять прием пациентом ряда лекарств, различные нарушения в обмене веществ больного и наличие некоторых хронических заболеваний (например, ревматоидный артрит), при которых идет активная выработка организмом антител.

    При взятии данного анализа у новорожденного ребенка достоверность также может нарушиться из-за присутствия в крови младенца антител матери.

    Для того чтобы перепроверить данные анализа ИФА, уточнить диагноз, пациенту предлагают слать анализ ПЦР. Это диагностика полимеразных цепных реакций. Благодаря данному анализу выявляется микроскопический фрагмент ДНК любого возбудителя болезни, например, вируса гепатита. Достоверность анализа составляет в большинстве случаев 100 %.

    Ряд хронических заболеваний с вялотекущим течением анализ ИФА не способен выявить, а методу ПЦР это вполне по силам. При помощи этого анализа выявляются такие заболевания, как мононуклеоз, вирусный гепатит, цитомегаловирус, клещевой энцефалит, различные инфекции, передающиеся половым путем, папилломавирус, кандидоз, ВИЧ.

    Материалом для исследования является кровь, а также моча, слюна, слизь, сперма, соскоб эпителия, внутрисуставные жидкости.

    Для того чтобы результат оказался верным, пациенту необходимо правильно подготовиться к сдаче анализа. Если на анализ берется венозная кровь, что за несколько часов до сдачи нельзя ни есть, ни пить. За несколько дней до анализа желательно исключить из своего рациона все жирные и жареные блюда и продукты, которые могут вызвать аллергическую реакцию. Следуют воздержаться от приема алкогольных напитков и курения.

    Также не менее, чем за 10 дней до дня диагностики следует прекратить принимать антибактериальные препараты. Если на анализ сдается моча, то перед сбором нельзя мочиться в течение примерно 3 часов. Моча собирается утром в строго стерильную баночку.

    Перед сдачей мазка женщинам не следует спринцеваться и применять какие-либо вагинальные свечи.

    Сдавать мазок на анализ надо до наступления месячных или спустя 4 дня после их окончания. Ответ пациент получает через сутки после сдачи анализа.

    Для подтверждения у пациента диагноза «вирусный гепатит» результаты исследований при помощи ИФА и ПЦР играют ведущую роль. Посредством ПЦР в крови пациента выявляется генетический материал вируса, что дает возможность не только подтвердить диагноз, но и выявить количество вируса, и определить стадию самого инфекционного процесса. С помощью ИФА-диагностики выявляются антитела к вирусам гепатитов.

    Диагноз гепатита А врач первоначально ставит после опроса больного, по жалобам, свидетельствующим об остром начале заболевания: сильная тошнота и рвота, боль в животе, развитие желтухи. В фекалиях больного, если они собраны в острой стадии заболевания, можно обнаружить вирус.

    При исследовании крови больного на ИФА в острой фазе заболевания будет значительно повышен уровень IgM, а титр IgG останется на высоком уровне даже после выздоровления пациента. Специфические антитела выявляются уже на 3 день острой фазы заболевания и могут сохраняться до полугода. Все современные тест-системы диагностики гепатита А основаны именно на методе ИФА.

    Для диагностики вирусного гепатита В врачи стараются использовать как метод ИФА, так и метод ПЦР. Высокий уровень титров IgM и IgG говорит о высокой активности вируса, что характерно для недавнего по времени заражения. К ПЦР диагностике в данном случае обращаются для того, чтобы выявить степень концентрации вируса.

    Также оба метода используют при подозрении на гепатит С. Антитела титра IgM будут обнаружены примерно через 8 недель после заражения, титр IgG появится через 12 недель. С помощью ПЦР диагностики врач точно определит стадию инфекционного процесса, количество и качество самого вируса. Также можно определить генотип вируса гепатита С.

    Дело в том, что на сегодняшний момент науке известно 11 видов этого вируса. В России наиболее распространены 3 генотипа. Если врач точно знает, каким именно генотипом заражен пациент, то лечение будет направлено именно на борьбу с конкретным генотипом. Все препараты и дозы будут правильно подобраны и шансы на успех, таким образом, значительно возрастут.

    Несмотря на то, что метод ИФА был изобретен достаточно давно (впервые такой анализ был проведен в 1971 году), его актуальность не потеряла своего значения и сегодня.

    Следует помнить, что необходимость проведения подобной диагностики может установить только врач. И только квалифицированный медицинский работник может правильно интерпретировать результаты анализа и назначить соответствующее лечение. Ни в коем случае не занимайтесь самодиагностикой и тем более самолечением.

    источник

    Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

    Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

    Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

    Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

    Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

    ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

    В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

    Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

    • острых и хронических заболеваниях печени;
    • желтухе неясного генеза;
    • обследовании перед хирургическими вмешательствами;
    • стандартном обследовании доноров крови;
    • постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;
    • прохождении гемодиализа;
    • профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;
    • незащищенном сомнительном половом контакте;
    • рождении детей от инфицированных матерей.

    В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

    За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

    Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

    Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

    1. На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
    2. На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
    3. Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

    Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

    • По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
      a) конкурентный;
      b) неконкурентный;
    • По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
      a) гомогенные;
      b) гетерогенные;
    • 3) По принципу определения исследуемого вещества:
      a) прямой;
      b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

    При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

    1. В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
    2. Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
    3. Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

    При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

    1. В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
    2. В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
    3. В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
    4. Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

    Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

    При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

    При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

    Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

    Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

    Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

    Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

    ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

    • выполненной накануне вакцинации;
    • при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;
    • опухолевом процессе;
    • инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

    Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

    Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

    Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

    Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

    Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

    источник