Качественный количественный анализ гепатит с

Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.

Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.

Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.

Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.

Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.

Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.

Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:

1. Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
2. Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
3. Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.

Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.

Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.

Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.

Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.

Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:

• Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
• Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
• Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
• Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
• Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
• При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
• Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
• Для контроля результативности проводимой терапии.
• После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.

ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.

Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:

1. Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
2. Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
3. За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
4. За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.

За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.

Забор крови происходит следующем образом:

• Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
• Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
• В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
• После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
• К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.

Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.

Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.

У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.

Плюсы исследования представлены в таблице:

Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.

Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.

Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.

В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.

Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.

Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.

Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.

Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.

Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.

ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.

Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.

В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.

Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:

Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.

источник

Ведущий метод диагностики воспаления печени — количественный анализ на гепатит С. Определение болезни подразумевает проведение количественного, качественного анализа с проверкой генотипа вируса, что дает возможность определить основные параметры течения заболевания. Ввиду способности к мутации требуется точное и своевременное диагностирование с правильно расшифровкой данных для разработки терапевтической схемы.

С 2012 года болезнь гепатита C официально считается полностью излечимым заболеванием. Но для этого важна своевременная диагностика.

Полимеразная цепная реакция или же ПЦР — метод, позволяющий выявить гепатит на начальных стадиях. Чувствительность немного ниже ИФА. Метод определяет ДНК- фрагменты вируса в пробе крови пациента даже в малых количествах. Исходя из этого врач правильно вычисляет именно возбудителя инфекции, а не его продукты жизнедеятельности. По результатам анализа ПЦР есть возможность выявить даже следы вируса и его генотип.

В ПЦР выделяют 3 вида анализа:

• Качественный. ПЦР гепатита С, который основывается на поиске иммуноглобулинов (антител) типа M и G, характеризующих факт заражения. Анализ может выдать — «не обнаружено», что будет считаться нормой.
• Количественный. Подтверждает диагноз, позволяет контролировать лечение, указывает на риск заражения других людей. Определяется количество в международной системе единиц — МЕ/мл. Показатель рассчитывается из количества РНК-вируса в 1 мл пробы крови. Высокий результат указывает на повышенный риск инфицирования других людей.
• Генотипирование. Метод, основывающийся на выявлении генотипов HCV, которых насчитывается 7.

Перед сдачей крови на проверку важно придерживаться правил:

• За 8 часов до анализов в последний раз покушать.
• Не пить спиртного за 2 дня, желательно не курить в это время или хотя бы за 1—2 часа до.
• Сообщить о приеме лекарств.

Вернуться к оглавлению

Для проведения количественного метода исследования нужен ряд показаний, без которых эта диагностика невозможна. К ним относится:

• выявление качественным анализом антител РНК-вируса;
• присутствие хронического или острого вида заболевания;
• планирование тактики лечения;
• обнаружение микст-гепатитов при диагностировании.

Вернуться к оглавлению

Определение концентрации патогена — суть исследования. Диагностика определяет степень тяжести заболевания, что позволяет полностью увидеть клиническую картину болезни. С помощью это вида ПЦР обнаруживают, какая вирусная нагрузка при гепатите С. После проведения расшифровки полученных данных анализа, врачи назначают лечение, в ходе которого делают забор крови на 4, 12, 16 и 24-й неделях. По завершении 12-й должно быть улучшение, в обратном случае метод лечения стоит заменить.

Найденное в крови количество HCV, влияет на вероятность, с которой вирус гепатита передается окружающим — чем выше, тем больше вероятность. За счет этой процедуры составляется правильный план дальнейшего лечения. Полученные в ходе процедуры результаты измеряются в единицах МЕ/мл и копий/мл. Расшифровать показатели можно только после пересчета полученного количества с учетом коэффициента (КП). Есть 2 метода:

• HCV Monitor с КП в МЕ — 2,7;
• LCX HCV RNA с КП — 3,8.

Основное преимущество проведения ПЦР диагностики – точное определение наличия возбудителей. Метод рассчитан на выявление рибонуклеиновой кислоты, чем он и разнится от других, оценивающих косвенные признаки и дающие исключительно опосредованное доказательство присутствия инфекции.

Большая специфичность обусловлена тем, что исследуется уникальный фрагмент ДНК. Это позволяет исключить ложноположительные результаты, в отличие от ИФА (анализа на иммуноглобулины). ПЦР-метод подобен размножению бактерий на средах, в которых их количество под действием определённой среды увеличивается в миллионы раз. Праймеры, устанавливающие специфичность методики, могут быть предназначены для семейства микроорганизмов или для конкретного вида.

Важно знать! Высокая чувствительность количественного исследования позволяет выявить норму РНК вируса гепатита С в биологическом образце от 1 до 10 микроорганизмов при большой специфичности. Автоматизация процесса приводит к тому, что анализ может быть готов всего за 4-5 часов.

Проводится исследование в любых государственных и частных лабораториях («Инвитро», ЦМД). Расшифровывать результат должен исключительно врач.

Обычно количественный анализ на гепатит С делается перед началом терапии, на 12 и 24 неделе лечения, и ежегодно после его завершения. Выдается результат, который показывает, удалось ли прибору обнаружить вирус и в каком количестве. Применяется ПЦР и для оценки эффективности лечения и в том случае, если качественный метод не определяет возбудителя при позитивном анализе на иммуноглобулины.

Отрицательный результат количественного анализа ПЦР на гепатит С при присутствии иммуноглобулинов, свидетельствующих об острой фазе патологии, может говорить о том, что концентрация вируса ниже предельной чувствительности прибора. Но это при условии, что ИФА был проведен верно.

На сегодня болезнь успешно лечится современными препаратами. Но чтобы взять под контроль заболевание, нужно располагать сведениями о вирулентности у каждого конкретного пациента, что и делается при помощи количественного ПЦР на гепатит С.

источник

Гепатит С. Чем он опасен для человека. Как диагностировать инфекцию. Что нужно для проведения анализа

Вирус гепатита С или ВГС – инфекционное заболевание, которое несет в себе молекулу рибонуклеиновой кислоты.

Этот тип вируса умеет легко приспосабливаться к условиям обитания и часто трансформируется в разные формы болезни, поэтому нашей защитной системе организма так сложно с ним справиться. Классифицируют шесть главных генетических типов инфекции и десятки подтипов. В наших краях зачастую встречаются первые три типа вируса.

По статистике лишь четверть случаев заболевания ВГС протекают без осложнений, во всех остальных случаях норма, если инфекция перерастает в хронический процесс, который пагубно влияет на внутренние органы. Так гепатит может осложняться печеночным фиброзом – процесс замены печеночных клеток. Дальше осложнения развиваются по цепной реакции: вследствие фиброза появляются раковые опухоли, болезнь печени перерастает в цирроз.

В большинстве случаев инфекция попадает в организм человека по кровеносным сосудам. Диагностируют вирус гепатита С несколькими методами. Отслеживают уровень концентрации антител к ВГС. Инфицирование не произошло, если в крови пациента не будут найдены антитела к ней. В противном случае вирус изучается более глубоко, проводят еще один тест – ПЦР. Только этот метод позволяет идентифицировать РНК вируса спустя всего полторы недели после заражения, во время, когда организм не успевает начать производство антител к инфекции, и последствия заражения никак не отражены на общем состоянии, тем более в результатах других исследований, таких как БАК и биопсия.

Вирусная нагрузка или количественный анализ ПЦР – анализ на определение уровня содержания инфекции в плазме. По сути, количественный анализ – это число молекул инфекционной рибонуклеиновой кислоты в одном миллилитре крови.

Р-ДНК – быстрый, дешевый и не самый точный количественный способ определения вируса на основе выявления клеток разветвленной ДНК. Этот тест может не идентифицировать заражение, присутствующее в организме из-за плохой чувствительности – около 450 МЕ/мл.

Количественный метод транскрипционной амплификации позволяет найти в организме клетки РНК. Этот способ появился сравнительно недавно, он стоит недорого и является достаточно эффективным средством диагностики. Чувствительность теста около 10 МЕ/мл.

Попробуем объяснить результаты анализов. Ниже приведена таблица и расшифровка.

Норма для каждого случая

Результат анализа может быть предоставлен исходя и другой классификации – по концентрации копий молекул вируса в единице жидкости. Усредненно можно полагать, что в одной единице МЕ 4 копии на один миллилитр.

Чтобы определить степень активности инфекции в организме, применяют метод исследования виремии. На основе такого анализа специалист дает заключение о возможности заражения пациентом окружающих, вступающих с ним в тесный контакт. Особой значимости набирает этот анализ при опасности передачи инфекции во время беременности от матери к плоду.

Данный тест проходят пациенты, у которых в крови нашлись антитела к инфекции. Примерно четверть больных острым гепатитом С излечиваются самостоятельно, то есть при клинических исследованиях следов вируса не выявляется. По итогам теста врач прогнозирует дальнейшее протекание болезни и назначает соответственное лечение.

Лечебные процедуры назначаются после проведения исследования ПЦР. Высокие показатели по результатам ПЦР снижают шансы на беспрепятственное восстановление здорового состояния организма, низкие же наоборот – повышают.

Также данный тест проходят пациенты уже параллельно с терапевтическими процедурами: в начале первого месяца, конце первого месяца, в конце квартала и через пол года.

Если уровень заражения с течением времени, а в частности в конце первого квартала лечения, не снижается, значит, лечение малоэффективно. Врачу следует изменить вектор терапии.

Снижение активности заражения определяется понижением в десять раз количеством молекул вируса в крови. То есть если на первой неделе было найдено10000 единиц, а в конце квартала 1000 единиц, инфекция считается угасающей, а лечение стоит продолжать.

После окончания курса терапии все равно необходимо отслеживать состояние инфекции, так как существует опасность рецидивной инфекции, т.е. вирус может снова распространяться, а болезнь прогрессировать.

Результат теста может быть некорректным из-за присутствия человеческого фактора при исследовании материала. Лаборантом может быть не соблюдены условия содержания опытных проб, например:

• попадание грязи на испытуемую пробу
• присутствие в плазме гепарина
• наличие в плазме специальных веществ, действующих на реагенты, входящие в состав ПЦР.

В разных клиниках по одному и тому ж анализу могут предоставить отличающиеся результаты. Причина в различном подходе исследований, работе с разными реагентами. Это вполне обычная ситуация. Уберечь себя от неточного результата анализа можно, если сдавать анализы только в своей проверенной клинике.

В дополнение к уровню виремии необходимо идентифицировать генетический тип инфекции, особенно в период назначения и прохождения курса лечения. Стоит понимать, что характер болезни невозможно выявить путем проведения анализа ПЦР. Для этого служат и обязательны к применению другие тесты, такие как биохимический анализ крови (БАК), биопсия печени и так далее.

Материал для проведения опыта при гепатитах забирают из локтевой вены. Пациент сдает кровь рано утром до приема еды. Настоятельно рекомендуется ограничить физическую работу, организовать рациональное питание, воздержаться от вредных превычек за день до сдачи анализа. Тогда степень достоверности теста будет значительной. Как правило, исследование материала занимает не больше суток, то есть на следующий день после сдачи можно забирать результаты анализа.

источник

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

• вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
• эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
• риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
• риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

• положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
• положительный результат качественной ПЦР;
• контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

• до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
• 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
• последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
• 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

• сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
• процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
• в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
• за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
• если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

• самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
• раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
• при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

• позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
• позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
• определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

Многие знают, что гепатит — болезнь не только опасная, но и коварная, ведь диагностировать ее непросто. Иногда пациенту приходится пройти целый ряд исследований — от анализа крови на наличие антител до УЗИ печени. Заболевание диагностируется непосредственно по крови, а остальные исследования демонстрируют, в какой степени печень повреждена гепатитом.

Наиболее эффективный и современный метод — это метод ПЦР (полимеразная цепная реакция). Расшифровка количественного анализа на вирус гепатита С или В выявляет разновидность болезни и дает понимание, как вирус будет мутировать в организме человека.

Быстрый и точный ПЦР-анализ ищет возбудителя следующим образом: при исследовании существенно увеличивается часть ДНК вируса в образце крови. Взятую у человека кровь помещают в особые реактивы, и начинается клонирование клеток. Появление сотен ДНК позволяет обнаружить возбудителя еще на ранней стадии.

ПЦР-анализ бывает нескольких видов:

• Качественный анализ. Это исследование показывает, что в крови присутствуют гены-«вредители». Качественный анализ подтвердил опасения? Значит, следует провести количественное исследование, чтобы установить степень развития вируса. Результат обозначается простыми словами: «обнаружено» или «не обнаружено». В первом случае в организме пациента найдены РНК вируса, значит, человек уже болен. Во втором случае кровь чиста от гена вируса. Чтобы не оставалось сомнений, специалисты рекомендуют спустя 10 дней сдать повторный анализ.
• Количественный анализ. Такой вид исследования определяет, в каком количестве в крови присутствуют гены вируса, насколько тяжелая степень у заболевания. О результате говорят слова «положительно», «отрицательно» и «недействительный».
  1. Под словом «положительно» понимается инфекционная нагрузка. Такой метод диагностики нужен медикам, чтобы отслеживать, действует ли терапия. Время проведения анализа — 4, 12, 16 и 24 недели болезни. Показатель, не превышающий 8х10т МЕ/мл, свидетельствует об эффективности лечения.
  2. Результат «отрицательно» говорит, что ген инфекции отсутствует.
  3. «Недействительный» бывает тогда, когда ген вируса был обнаружен при качественном исследовании, но количественный анализ его не выявил. Такое случается при объеме инфекции ниже уровня.

Не все пациенты сдают количественный анализ (в этом его отличие от качественного). Если качественный подтверждает или опровергает присутствие «врага», то количественный подтверждает диагноз, помогает спрогнозировать развитие заболевания и определиться с терапией.

Количество РНК до начала лечения и во время терапии демонстрирует эффективность работы с пациентом. Кроме того, по числу РНК врачи понимают, какие дозы лекарств нужны больному.

Если в крови были найдены антитела к гепатиту, то за качественным анализом следует количественный. «Пожертвовать» кровью больному придется несколько раз.

• Сначала — еще до того, как будет принято решение о курсе терапии, т.е. при первичной диагностике.
• Затем во время лечения — это необходимо, чтобы видеть клиническую картину результатов (как правило, на 1, 4, 12 и 24 неделях).
• Финальный анализ проводится после терапии — он показывает, возможен ли рецидив.

Врач, использующий количественный анализ как один из основных методов исследования, преследует несколько целей:

1. Медик должен понимать, насколько глубоко вирус проник в организм, какое количество антигенов присутствует в теле больного.
2. Доктор определяет, действует ли терапия.
3. Врач подбирает метод лечения и составляет прогноз.
4. Метод дополняет анализ крови, биопсию, эластометрию и т.п.

Существует несколько показаний к проведению количественного анализа:

1. Надо определить вирусную нагрузку и взять под контроль антивирусную терапию.
2. Результаты качественного ПЦР-анализа говорят о наличии антител гепатита С.
3. Пациент страдает от острого или хронического гепатита С.
4. У больного найден микст-гепатит.
5. Необходимость четко спланировать терапию.
6. После 12 недель лечения результаты качественного анализа все еще показывают присутствие вируса.

Для исследования нужна кровь из вены. Есть ряд простых стандартных правил, которых должен придерживаться пациент:

1. Лучше всего отправиться на анализ утром натощак, до этого в течение 8-12 часов воздерживаться от пищи.
2. У человека не всегда есть возможность пройти исследование именно утром. В таком случае завтрак должен быть диетическим; после завтрака также следует «пост» (8-12 часов).
3. За 1-2 дня до сдачи крови пациент должен отказаться от спиртного и жирной/жареной пищи.
4. После обильного застолья приходить на анализ нельзя.
5. Как минимум за час до сдачи крови человек не должен курить.
6. Пациенту понадобится 10-15 минут спокойствия перед тем, как сдать биоматериал. Для чего нужна такая релаксация? Физическое и эмоциональное напряжение способно повлиять на результат, следовательно, человеку необходимо расслабиться.
7. Лечащий врач должен знать, принимает ли пациент какие-то препараты. Если да, то после последнего приема надо выждать 10-14 дней. Возможно, доктор изменит условия.
8. Если человек проходил физиотерапевтические процедуры, рентгенографию или ректальное исследование, то сдавать кровь придется через определенное время.
9. Реагенты, оборудование, единицы измерения и, конечно, точность в разных лабораториях могут отличаться. Лучше сдавать первичный и повторные анализы в одном месте.

Когда будут известны результаты? Зависит от конкретной лаборатории и занятости ее сотрудников. Уже через 4-5 часов можно подвести итоги и уже на следующий день получить заключение.

Иногда о результатах говорят не цифры, а слова — «не обнаружено» или «ниже диапазона измерений».

• «Не обнаружено» означает, что вирус не найден.
• Слова «ниже диапазона изменений» говорят о том, что инфекция присутствует в небольшом количестве. В таком случае нужен количественный анализ, который «чувствительнее» качественного.

Медики ориентируются на вирусную нагрузку. Специалисты должны выяснить, сколько вирусных РНК содержится в 1 мл крови.

Принято пользоваться формулой МЕ/мл, но в некоторых лабораториях число измеряется в копиях/мл. Коэффициенты перевода варьируются от 1 до 5, важно, какой метод используется при определении количества.

Разные тест-системы предлагают свои варианты перевода компонентов в международные значения. Разработана таблица расшифровки количественного анализа на гепатит С, и вы можете ознакомиться с ее данными. Нормам ПЦР соответствуют определенные значения вирусной нагрузки:

Если здоровый человек сдает количественный анализ на гепатит С, то его норма — результат «не обнаружено». Для тех, кому не повезло заболеть, нормы другие. Количество вируса в их организме должно снижаться, о чем говорит убывание нулей в результате анализа: с 1*10 6 МЕ/мл до 1*10 5 МЕ/мл и т.д. При использовании амплификатора концентрация вируса не должна покидать границы от 1,8*10 2 до 2,4*10 7 МЕ/мл.

Когда можно утверждать, что лечение производит нужный эффект? В том случае, если при повторном исследовании нагрузка меньше 8*10 5 МЕ/мл.

Какова вероятность раннего вирусологического ответа? Примерно 85%. В таком случае на третий день терапии снижается количество вирусных РНК.

При показателе, превышающем 8*10 5 МЕ/мл, необходимо поменять тактику лечения. Зависимость простая: чем выше уровень, тем печальнее прогноз.

Что касается гепатита В, то за норму приняты такие значения вирусной нагрузки:

Узнав количество вируса, медики получают возможность определить форму болезни — острую, хроническую или носительство. Эта информация помогает понять, надо ли проводить дополнительные исследования. Результаты рассказывают, как вирус и пораженный им организм реагируют на терапию:

1. Превышающее норму значение трансаминазы говорит о хроническом гепатите В, как и активность вируса больше 4 наравне с количеством ДНК-копий 10 5 /мл.
2. Стандартный уровень трансаминазы и концентрация ниже 10 5 /мл — это носительство.
3. При гепатите В нужно все время отслеживать устойчивость, каждые 3 месяца отправляясь на анализы. Внезапно увеличившаяся в 10 раз вирусная нагрузка — свидетельство того, что коварный вирус стал устойчив к лекарствам.
4. Если через 3 дня лечения нагрузка снизилась на 85%, то ход терапии можно назвать благоприятным.
5. Иногда показатель АЛТ превышает норму (не чаще 2 раз за полгода), а вирусная нагрузка становится выше 10 5 /мл. В таком случае нужна биопсия печени. Если же уровень АЛТ повышается чаще 2 раз за 6 месяцев, а вирус очень активен, то немедленно назначается антивирусная терапия.

И доктору, и пациенту хочется знать, как вирус поведет себя, переходя из острой формы в хроническую. Прогноз таков:

У ПЦР-анализа масса плюсов:

1. Точность метода позволяет быстро определиться с диагнозом и начать лечение.
2. Скорость. Нет необходимости разграничивать и выращивать разные виды возбудителя. Четко налаженный процесс позволяет оперативно получить результат всего за 4-5 часов.
3. Возбудитель определяется прямым путем. Найдена «та самая» часть ДНК? Значит, диагноз ясен. Например, обнаруживающий белки-маркеры ИФА находит лишь продукты жизнедеятельности бактерий, но не дает полной гарантии.
4. Специфичность исследования. Возможна реакция на ложные совместно-реагирующие агенты, но в данном случае исследуется только то вещество, которое характерно именно для конкретного возбудителя.
5. Даже самое незначительное количество вируса будет обнаружено, значит, восприимчивость — еще один плюс.
6. Универсальность метода. Способность найти фрагменты ДНК или РНК конкретных организмов позволяет работать при беспомощности других методов и использовать один материал для диагностики.
7. ПЦР-анализ обнаруживает и явные, и скрытые инфекции, изучая даже стойкие и не выращиваемые агенты.

Медицина — это не математика, иногда расшифровка количественного анализа на гепатит С или В оказывается ошибочной.

Важно сдавать ПЦР-анализ в клинике, заработавшей себе хорошую репутацию и отзывы. ПЦР находит вирус с точностью до 100%, но иногда показатели падают до 95%. Причина тому — некачественные реактивы, устаревшее оборудование и т.д.

Если за дело берутся профессионалы, работающие в авторитетном медицинском учреждении, то можно не беспокоиться, вероятность ошибки практически нулевая.

источник