Иммуноферментный анализ на гепатит в

Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.

При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.

Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.

Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.

При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.

Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.

HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.

При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg.
Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого пациента относят к хроническим больным вирусным гепатитом В.
Наличие HBsAg – довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн. носителей, а у нас в стране – около 10 млн. носителей.
Прекращение циркуляции HBsAg с последующей сероконверсией (образование анти-HBs) всегда свидетельствует о выздоровлении — санации организма.

Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:

для диагностики острого гепатита В:

• инкубационный период;
• острый период заболевания;
• ранняя стадия реконвалесценции;

для диагностики хронического вирусного гепатита В;

при заболеваниях:

• персистирующем хроническом гепатите;
• циррозе печени;

для скрининга и выявления больных в группах риска:

• больные с частыми гемотрансфузиями;
• больные с хронической почечной недостаточностью;
• больные с множественным гемодиализом;
• больные с иммунодефицитными состояниями, в том числе СПИДом.

Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.

В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.

Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:

хронического вирусного гепатита В при наличии HBs антигена в сыворотке крови;

перенесенного вирусного гепатита В.

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.

В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.

Этот антиген часто обнаруживается при хроническом активном гепатите вирусной этиологии. Особый интерес к определению HBeAg связан с тем, что его обнаружение характеризует активную репликативную фазу инфекционного процесса . Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса.

Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.

Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:

инкубационного периода вирусного гепатита В;

продромального периода вирусного гепатита В;

острого периода вирусного гепатита В;

хронического персистирующего вирусного гепатита В.

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.

Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.

Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.

Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:

установление начальной стадии заболевания;

острый период инфекции;

ранняя стадия реконвалесценции;

реконвалесценция;

поздняя стадия реконвалесценции.

диагностика недавно перенесенного вирусного гепатита В;

диагностика хронического персистирующего вирусного гепатита В.

Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.

Критериями наличия хронического гепатита В являются:

бнаружение или периодическое выявления ДНК ВГВ в крови;

постоянное или периодическое повышение активности АЛТ/АСТ в крови;\

морфологические признаки хронического гепатита при гистологическом исследовании биоптата печени.

Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.

Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.

Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.

Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.

Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:

разрешения сомнительных результатов серологических исследований;

выявление острой стадии заболевания по сравнению с перенесенной инфекцией или контактом;

контроля эффективности противовирусного лечения.

Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии

Этот метод дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к активным препаратам.
Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыворотке крови применяются тест-системы, чувствительность которых составляет 50-100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5 Х 10^3 -10^4 копий/мл. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации.

Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.

• Оценку уровня виремии осуществляют следующим образом:
• менее 2.10^5 копий/мл (менее 2.10^5 МЕ/мл) – низкая виремия ;
• от 2.10^5 копий/мл (2.10^5 МЕ/мл) до 2.10^6 копий/мл (8.10^5 МЕ/мл) – средняя виремия;
• более 2.10^6 копий/мл – высокая виремия.

Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.

Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).

Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.

источник

Гепатит – тяжелая воспалительная патология гепатоцитов (клеток печени) и печеночной ткани, имеющая инфекционное, аутоиммунное или токсическое происхождение. Опасность болезни заключается в высокой контагиозности, и сложной эрадикации (полной ликвидации).

Для постановки точного диагноза используются результаты анализа крови на гепатит, исследования мочи и кала, аппаратного обследования (УЗИ, МРТ, КТ). К наиболее распространенным относятся гепатиты вирусной этиологии А, В, С и развивающиеся на их фоне типы Е, D.

Вирусные гепатиты протекают в острой или хронической форме. Острое течение с проявлением яркой симптоматики характерно для типа А, В. Гепатит С в большинстве случаев протекает латентно, выраженные симптомы проявляются не сразу. Тип В может иметь как острую, так и хроническую форму. Профилактическая прививка предусмотрена только против гепатита В, вакцинация типов А и С не проводится.

Инфицирование гепатитом – одна из тяжелейших печеночных патологий, угрожающая развитием онкологических новообразований в печени и перерождением в неизлечимый цирроз. При несвоевременной врачебной помощи имеет высокую вероятность летального исхода.

Расширенная лабораторная диагностика вирусного поражения печени включает следующие анализы крови:

• ОКА (общий клинический анализ);
• биохимия;
• коагулограмма (анализ на свертываемость);
• ИФА (иммуноферментный анализ);
• ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Дополнительно проводится исследование мочи и кала. При подтвержденной печеночной патологии типа В и С, назначается анализ на реакцию Вассермана (сифилис) и вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).

Лабораторная микроскопия на гепатит проводится:

• при предполагаемом диагнозе, согласно симптоматическим жалобам пациента (тошнота и рвота, болевой синдром в правом подреберье, потемнение мочи и обесцвечивание кала, желтушность кожи и другие);
• в случае серьезных отклонений от референсных значений показателей печеночных ферментов в проведенной ранее биохимии крови;
• при хронических печеночных патологиях (рак и цирроз);
• женщинам в перинатальный период и детям, рожденным от инфицированных мамочек.

Сдать анализ необходимо в случае обнаружения гепатита в ближайшем окружении пациента. Плановое обследование на наличие инфекции проходят работники медицинских учреждений, находящиеся в непосредственном контакте с больными гепатитом или с образцами биожидкости (крови, мочи).

Направление на анализы выписывает терапевт, инфекционист либо врач, занимающийся болезнями гепатобилиарной системы – гепатолог. Для экономии времени проверить состояние печени можно самостоятельно на возмездной основе в клинико-диагностических центрах Москвы и других крупных городов.

Сколько дней делают анализ, зависит от оснащения лаборатории и функциональной загруженности медперсонала. Результаты общеклинического и биохимического исследования обычно готовы на следующий день. Специальные анализы (ИФА, ПЦР) изготавливаются в течение 3–7 дней (в отдельных случаях – до двух недель).

ОКА при вирусной инфекции печени не имеет диагностической ценности в отношении вируса, но дает представление об изменениях в организме, вызванных вирусной инвазией (проникновение в организм). Общий анализ крови покажет характерные отклонениями от нормативных значений:

• лейкопения, иначе снижение числа белых клеток крови (лейкоцитов);
• анемия (пониженный гемоглобин);
• тромбоцитопения или сниженный показатель тромбоцитов, отражающих качество свертываемости крови;
• увеличение скорости оседания эритроцитов (красных кровяных телец), иначе СОЭ.
• лимфоцитоз (повышение количества лимфоцитов – кровяных клеток, отвечающих за сопротивляемость организма инфекциям).

Для исследования производится забор капиллярной крови (из пальца). Специальная подготовка к процедуре не предусмотрена. Общий анализ крови при гепатите оценивается в комплексе с коагулограммой.

Неспособность гепатоцитов выполнять свои функции вследствие поражения вирусом становится причиной плохой свертываемости крови. Основные параметры коагулограммы при гепатите:

• увеличение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ);
• повышение протромбинового индекса (ПТИ);
• снижение показателей печеночного белка протромбина.

Кровь для коагулограммы сдается из вены.

Результаты биохимии крови при патологических нарушениях печени всегда будут неудовлетворительными. При инфицировании значения основных исследуемых параметров изменяются в сторону увеличения либо уменьшения, что позволяет врачу подозревать гепатит и направить пациента на дальнейшее обследование. Биохимический анализ крови при гепатите С и В отражает определенные отклонения от нормы.

Основной желчный пигмент – билирубин – отвечает в организме за гемоглобиновый обмен. Вместе с белками плазмы (альбуминами), он попадает в печень, где трансформируется на прямой и связанный пигмент. Вирус разрушается клеточные мембраны печени, поэтому при норме билирубина от 5 до 20 мкмоль/л гепатит повышает его значения в несколько раз.

Показатели билирубина в зависимости от стадии развития болезни

Аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ) и щелочная фосфатаза (ЩФ) представляют собой печеночные ферменты, которые активно выходят в кровь при повреждениях гепатоцитов и ткани печени. Референсными значениями являются: АЛТ и АСТ для мужчин – до 45 ед/л, для женщин – до 31 ед/л, ЩТ – до 150 ед/л.

При остром гепатите показатели увеличиваются в десятки раз. Хронический гепатит С может не проявляться яркими клиническими признаками, у 1/5 больных печеночные ферменты незначительно превышают норму.

Белок в крови представлен альбумином (продукт внутрисекреторной деятельности гепатоцитов) и гаммаглобулинами. Альбумин отвечает за стабильность коллоидно-осмотического давления, доставку и распределение гормонов, органических соединений, кислот, витаминов и минералов.

Гаммаглобулины – это антитела (иммуноглобулины IgA, IgM, IgG, IgE), обеспечивающее защиту организма от вирусов и инфекций иного характера. Усредненная норма альбумина в крови составляет от 40 гр. /л до 50 гр. /л. В случае заражения гепатитом, производство снижается.

При этом анализ показывает нормальные значения для общего белка. Это обусловлено значительным увеличением числа иммуноглобулинов, старающихся ликвидировать вирус. Биохимический анализ не дает представления о типе вируса и его активности, но по совокупности отклонений показателей можно предположительно диагностировать HАV, HBV, HCV. Для биохимии используется венозная кровь.

После инвазии гепаднавирус с кровью попадает в печень, где заражает гепатоциты, изменяет их ДНК-структуру и блокирует функции. Внешняя оболочка вируса имеет белковую основу, защищающую его РНК. Клетки оболочки являются антигенами – чужеродными агентами, представляющими угрозу для организма.

В ответ на их проникновение иммунная система начинает активное производство Ig (иммуноглобулинов) – клеток-антител, ликвидирующих постороннее вторжение. Каждый иммуноглобулин предназначен для выявления и устранения определенного антигена. В ходе специальных анализов изучаются антигены, антитела и РНК вируса.

Лабораторная микроскопия крови на вирус гепатита базируется на иммуноферментном анализе (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Данные способы диагностики используются для обнаружения большинства существующих инфекций, которые проникают в системный кровоток. В ходе исследований определяется факт наличия вируса и его разновидность. Забор крови для спецанализов производится из вены.

На первоначально интересующий пациентов вопрос, нужно ли сдавать кровь из вены натощак или нет, ответ всегда утвердительный. Любая еда способна изменить состав и текстуру крови, сделать ее мутной. В этом случае результат анализа будет искажен.

Для получения объективных данных пациенту необходима несложная предварительная подготовка:

• за неделю прервать прием любых медицинских препаратов;
• за 2–3 суток устранить из рациона жирную пищу, фастфуд, исключить алкогольные напитки;
• соблюдать режим голодания перед процедурой, минимум 8 часов;
• за час отказаться от никотина.

Иммуноферментный анализ основан на оценке иммунного комплекса «антиген-антитело». На первичном этапе анализа очищенный антиген помещается на исследовательскую поверхность и к нему добавляется сыворотка крови. Иммуноглобулины связываются с антигеном и определяют его принадлежность. Если агент не признается антителами, как «родной», они захватывают его в кольцо, пытаясь уничтожить.

Таким образом, формируется иммунный комплекс. Иммуноглобулины исполняют роль маркеров, по которым оценивается тип вируса. Далее проводится ферментативная реакция – делается «подсадка» определенного фермента к комплексу и оценивается изменение окраски посредством колориметра (анализатора ИФА). Степень окрашивания соответствует концентрации антител.

Тип гепатита А выявляется по маркерам анти-HAV IgM и анти-HAV IgG. Расшифровка анализа определяет наличие или отсутствие вируса и иммунитет к инфекции. Оценкой является «–» (отрицательно) и «+» (положительно).

В случае перенесенного заболевания у человека формируется стойкий иммунитет, обеспечивающий защиту от повторного инфицирования.

Гепатит В определяется основным маркером HbsAg, реагирующим на поверхностный антиген HBV, и дополнительным антигенам и антителам, по которым устанавливается острое или латентное течение болезни либо интегративная форма (переход в хроническую стадию) либо бессимптомно перенесенная инфекция. Маркеры гепатита В:

• HBcAg (ядерный антиген);
• HBcAb IgM (антитела к ядерному антигену);
• HBeAb (антитела к антигену «е») – указывает на перенесенное заболевание;
• HBV-DNA (ДНК вируса).

Расшифровка анализа включает два варианта:

• HbsAG «–» (отрицательный) – отсутствие инфицирования;
• HbsAG «+» (положительный) – наличие маркера вируса в организме.

Таблица результатов дает полное представление о динамике течения заболевания

Вакцинация против HBV не является обязательной. Решение о проведении профилактической прививки каждый принимает самостоятельно.

Посттрансфузионный гепатит С – наиболее тяжелая разновидность печеночной инфекции. Имеет одиннадцать генотипов вируса. Инкубационный период может варьироваться от 2–3 недель до 6 месяцев. При латентном течении легко переходит в хроническую форму, чрезвычайно сложно поддающуюся лечению. Основные маркеры гепатита типа С, определяемые в ходе ИФА, и их значение:

Распространенность генотипов гепаднавируса: 1a – Австралия, Америка. 1b и 2a – Европа, Азия. 2b – Северная Европа, США. 2c – Южная и Западная Европа. 3a – Австралия, Азия, Европа. 4a, 4c, 5a –Африка. 6a, 7a, 7b, 8a, 8b, 9a – Азия, 10a, 11a – Индонезия.

Выявить сложный вирус и определить его генную структуру помогает методика полимеразной цепной реакции ПЦР. Гепатит и другие вирусы определяются посредством многократного копирования фрагмента ДНК (амплификации) в реакторе (амплификаторе). Кровь помещается в реактор, где обрабатывается термически до расщепления РНК и ДНК.

Далее к биожидкости добавляются молекулы специальных веществ, которые выделяют нужные участки РНК и связываются с ними. С каждым новым присоединением вещества к молекуле РНК достраивается копия генетической структуры вируса. Положительный результат означает наличие инфекции, число копий указывает на количественный состав гепаднавируса.

Ценность анализа ПЦР на гепатит заключается в возможности генотипирования – выявления генотипа. Это позволяет подобрать максимально эффективный препарат, поскольку разные генотипы имеют различную резистентность (восприимчивость) к лекарствам.

Анализ мочи при гепатите менее информативен, чем микроскопия крови, но по его отдельным показателям несложно предположить наличие патологических процессов в печени. При неудовлетворительных результатах, полученных даже не для специального выявления печеночных проблем, врач направит пациента на расширенную лабораторную диагностику.

В рамках комплексного обследования на гепатит анализ урины выполняет вспомогательную функцию. В моче наблюдается появление элементов, которые в норме должны отсутствовать:

• белок (протеинурия);
• эритроцитарные, восковидные, эпителиальные белковые цилиндры в осадке урины (цилиндрурия)
• билирубин (билирубинурия);
• кровь (гематурия).

При заболеваниях печени значительно завышены показатели уробилиногена (уробилиногенурия).

Качественная диагностика печеночных патологий возможна только в условиях лаборатории. Для самостоятельного определения инфекции разработан специальный экспресс- анализ по тестовым полоскам (или кассетам). С его помощью можно подтвердить или опровергнуть наличие вируса, но нельзя определить его разновидность и количественную концентрацию антигена.

Биоматериал (кровь или слюну) помещают на участок стрипа (тест-полоски), пропитанный реагентами. Результат оценивается по двум зонам (контрольной и тестовой):

• линии в обеих зонах – инфицирование:
• линия в зоне контроля – инфекции нет;
• полное отсутствие линий – бракованный тест.

Гепатит является тяжелым заболеванием печени, характеризующимся высокой контагиозностью вирусов. Самыми распространенными типами вирусной инфекции являются А, В, С. Диагностика инфекционного поражения печени проводится посредством лабораторной микроскопии крови, включающей следующие анализы:

• общий клинический (ОКА);
• биохимический;
• коагулограмма (анализ на свертываемость);
• иммуноферментный (ИФА);
• полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Сдавать кровь на исследования можно по направлению от врача либо самостоятельно в платных клинико-диагностических центрах. Экспресс-тест, продающийся в аптеках, не является надежным способом определения инфекции и требует дополнительной проверки. Расшифровкой полученных результатов занимается только доктор (терапевт, гепатолог, инфекционист). Во избежание серьезных последствий для здоровья, самодиагностикой заниматься не следует.

источник

Для диагностики вирусного гепатита в рамках медицинского протокола используется несколько лабораторных и инструментальных методик. Одной из самых достоверных является иммуноферментный анализ (ИФА). Метод помогает определить наличие антигена к тому или иному виду вируса. Для этого выполняется стандартная процедура забора крови из вены пациента. Результаты становятся известны уже через неделю после взятия анализа.

Термин расшифровывается как «иммуноферментный анализ». Он подразумевает определение в крови комплексов антиген-антитело для уточнения этиологии возбудителя. Если это вирус, определяются его виды и подвиды. Антигены — это частички на поверхности клеток возбудителей, связывающиеся с определенными участками антител. Последние являются иммунными молекулами, вырабатываемыми организмом для собственной защиты. Антигены и антитела неповторимы, поэтому определение их структуры с помощью иммуноферментного анализа свидетельствует о наличии конкретной патологии в организме больного. В качестве меток используются ферменты, которые и дали название методике.

ИФА — это высокоточная методика, ее чувствительность достигает 90%. Она помогает проводить скрининг парентеральных гепатитов. Эти заболевания передаются путем инъекции, или через переливание крови. ИФА помогает выявить пациентов, у которых отсутствуют симптомы. Таковыми является большинство хронических больных. Они имеют риск развития цирроза. Его обнаружение на поздних стадиях — это плохой прогноз. Поэтому иммуноферментная методика позволяет своевременно определить заболевание и сэкономить деньги на лечение. ИФА верифицирует этиологию возбудителя и определяет прогноз недуга. Диагностические наборы для нее стоят недорого и длительно хранятся. За быстроту, удобство и точность данных ИФА называют экспресс-методом.

ИФА необходим, когда требуется уточнить этиологию вирусного возбудителя для определения схемы лечения. У пациента идентифицируют наличие хронического гепатита B и C, или перенесенного заболевания вирусом подтипа A. Методику нужно применять у членов семьи больного, которые могут заразиться. В инфекционном стационаре анализ выполняется всем пациентам, у которых присутствуют такие симптомы:

• Желтуха. Желтушность кожных покровов не сопровождается болями в правом подреберье и изменением цвета стула и мочи.
• Повышение температуры тела. Она вырастает до субфебрильных цифр, иногда наступает лихорадка.
• Диспепсия. Присутствуют тошнота и рвота, которая не приносит облегчение.
• Немотивированная слабость.
• Мелкоточечные высыпания на теле. Это мелкие кровоизлияния вследствие печеночной недостаточности.
• Тяжесть в правом подреберье. Симптом возникает вследствие растяжения увеличенной печенью собственной капсулы, содержащей множество нервных окончаний.

Основным показанием к выполнению анализа является наличие определенных анамнестических данных. Если пациент ранее страдал инъекционной наркоманией, ему переливали кровь или пересаживали органы — это повод выполнить ИФА.

Чтобы результаты ИФА были достоверными, требуется предварительно подготовиться. За день до сдачи крови пациенту рекомендуется перестать употреблять жирную и жареную пищу, продукты с высокой концентрацией красителей, стабилизаторов, консервантов, усилителей вкуса и аромата. Нежелательно непосредственно перед выполнением метода заниматься тяжелым физическим трудом и спортивными упражнениями. В день сдачи крови необходимо воздержаться от завтрака. Забор материала натощак позволит получить точный результат. Необходимо исключить из употребления некоторые лекарственные средства. Но самостоятельно это делать не рекомендуется, поскольку есть вероятность вреда для здоровья. Нужна предварительная консультация лечащего доктора.

Метод ИФА состоит из двух этапов. На первом выполняется забор материала, на втором последний исследуется в лаборатории. Начальный этап проходит стандартно. Ему предшествует подготовка пациента к сдаче крови. В стерильном помещении проводится забор биоматериала, отправляемый в герметических контейнерах на лабораторное исследование. Дальнейшее определение комплексов антиген-антитело происходит с помощью ферментов и тест-систем на специализированном оборудовании. Результат становится известен в течение недели и отправляется пациенту на электронную почту.

Интерпретация данных подразделяется на качественную и количественную. При качественном определении результаты анализа считаются позитивными, если обнаружены суммарные антитела к определенному подтипу вируса. Выявление anti-НАV IgМ свидетельствует про острый, а anti-НАV IgG — хронический гепатит А. Позитивный маркер НВsAg — признак инфицирования вирусом подтипа В. Он наблюдается в острой и хронической фазах заболевания. Если же выявлен HBCAg, у человека присутствует хронический гепатит С. А anti-НDV сигнализирует про инфицирование подвидом D. Пациенты, у которых определен положительный маркер к вирусу, нуждаются в дальнейшем обследовании для более точной верификации диагноза.

источник

Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов основывается на применении иммунохимических и молекулярно-биологических методов исследований. Основными иммунохимическими методами являются радиоизотопный или радиоиммунный (РИА) и иммуноферментный (ИФА). В основе иммунохимических методов диагностики лежит специфическое взаимодействие антиген — антитело с последующим выявлением комплекса при помощи специальных меток. Наиболее распространенным является иммуноферментный анализ.

Первые сообщения о применении иммуноферментного анализа, как метода для определения каких-либо веществ были опубликованы в 1971 году одновременно двумя исследовательскими группами — В. Van Weemen, A. Schuurs и Е. Engvall, P. Perlmann. В основе иммуноферментного анализа лежит следующий принцип: на твердой фазе, в качестве которой используется, главным образом, поверхность лунок полистиролового планшета, фиксируется антиген возбудителя инфекции или антитела (часто смесь антител) к антигенам, которые необходимо обнаружить. Этот антиген или антитела, которые зафиксированы на твердой фазе, называются иммуносорбентом.

В результате инкубации иммуносорбента и испытуемой сыворотки при наличии определяемого агента происходит их связывание в комплекс антиген — антитело. После процедуры промывки, в ходе которой удаляются несвязанные антигены и антитела, проводится инкубация с конъюгатом. В качестве конъюгата при детекции HBsAg используют анти-HBs, при детекции антител к вирусу гепатита С —антитела к иммуноглобулинам человека (антивидовой конъюгат), меченные пероксидазой хрена. В итоге этой инкубации происходит присоединение к уже имеющимся комплексам антиген — антитело дополнительно внесенного конъюгата. После удаления несвязавшегося конъюгата (отмывки) в лунки вносится субстрат. При использовании пероксидазного конъюгата в качестве субстрата используют перекись водорода в сочетании с индикатором, в качестве которого наиболее часто применяют ортофенилендиамин (ОФД) или тетраметилбензидин (ТМБ). Результат оценивается фотометрически.

Качество и надежность аналитических возможностей иммуноферментного метода характеризуются рядом критериев, к числу которых относятся чувствительность, специфичность, правильность и воспроизводимость.

Чувствительность — то минимальное количество вещества, которое может быть обнаружено при помощи иммуноферментного анализа. При этом нижним пределом чувствительности данного метода является концентрация исследуемого вещества в образце, которая соответствует наименьшему положительному результату определения, статистически достоверно отличающемуся от показателей заведомо отрицательных образцов. Чувствительность ИФТС зависит от ряда обстоятельств, связанных как с конструкцией тест-системы (аффинность иммуносорбента, качества экстракционных и буферных систем), так и разрешающей способностью и точностью метода регистрации.

Специфичность — способность выявлять именно те компоненты, для определения которых предназначена данная иммуноферментная тест-система. Специфичность ИФА определяется во многом перекрестной реакцией антител или антигенов (то есть композиции, используемой в качестве иммуносорбента), с близкородственными соединениями, а также составом инкубационной среды (матрикс-эффект).

Правильность — соответствие среднего значения результатов повторных определений одного и того же контрольного образца с истинной величиной измеряемого параметра. Правильность определения в ИФА зависит от качества самой тест-системы и контрольного образца. Для хороших иммуноферментных тест-систем показатели правильности лежат в пределах 90-110 %. Особенностью медико-биологических исследований в ИФА является невозможность установления точной величины, и поэтому за истинную величину принимается средняя от нескольких экспертных лабораторий. Статистическим критерием правильности служит средняя арифметическая и степень ее отклонения от истинного значения, выраженная в процентах.

Воспроизводимость — способность тест-системы показывать одни и те же значения при повторных исследованиях одного и того же образца. Воспроизводимость зависит как от случайных погрешностей (ошибок) при проведении процедуры постановки реакции, так и от качества тест-систем и точности метода регистрации результатов. Считается, что воспроизводимость одних и тех же контрольных образцов одной фирмы в разных лабораториях не должна превышать величину коэффициента вариации в 15%.

Существует несколько специфических схем ИФА для определения маркеров вирусных гепатитов: а) прямой иммуноферментный анализ; б) непрямой иммуноферментный анализ; в) конкурентное ингибирование; в) «ловушеч-ный», или «capture» метод.

Из молекулярно-биологических методов диагностики вирусных гепатитов чаще используются полимеразная цепная реакция и гибридизация. Эти методы, особенно ПЦР, позволяют выявлять очень малые количества специфической вирусной ДНК или РНК и, таким образом, судить о репликации, а в ряде случаев и об активности репликации.

источник

Всемирный день борьбы с гепатитом

27-28 июля пройдите обследование на гепатиты B И С БЕСПЛАТНО

Гепатит — это воспалительный процесс, который происходит в клетках печени, в результате чего происходит разрушение клеток (гепатоцитов) и орган не может полноценно выполнять свои функции. При хронических формах заболевания полного восстановления поврежденных клеток печени не происходит, и они замещаются соединительной тканью. Что, в свою очередь, приводит к изменению структуры органа, развитию цирроза и даже раку печени (гепатоцеллюлярной карциноме).

ВАЖНО! К сожалению, гепатит может проходить и без специфических симптомов. В этом случае поставить диагноз возможно только при проведении лабораторного обследования.

Для вашего удобства разработаны комплексные программы лабораторного обследования, включающие основные показатели для первичного скрининга.

Одним из самых устойчивых является вирус гепатита А (также известный как болезнь Боткина). Сохраняет свои инфицирующие свойства в воде, пищевых продуктах, игрушках, посуде и предметах обихода при комнатной температуре до нескольких недель, при температуре -20°C – до нескольких лет. Для заражения достаточно всего несколько вирусных частиц.

Заражение возможно через пищевые продукты (овощи, фрукты, ягоды и морепродукты, которые не подвергались термической обработке); при употреблении воды из водоемов (родники, ручьи, источники), которая не подвергалась кипячению. Также возможен бытовой путь передачи при несоблюдении правил личной гигиены, использовании общей посуды, игрушек. Для заболевания характерны эпидемические вспышки. Хроническая форма заболевания отсутствует; для его профилактики разработана вакцина.

Один из самых устойчивых среди вирусов гепатита. Может длительно сохранять свои инфицирующие свойства.

Заражение возможно при проведении различных процедур и манипуляций, связанных с нарушением целостности кожных покровов и слизистых оболочек; при незащищенном половом контакте с инфицированным партнером; от инфицированной матери – новорожденному.

Полностью выздоравливают почти 90% заболевших. Примерно у 10% пациентов вирусный гепатит В становится хроническим. Без лечения хронический гепатит может привести к фиброзу, циррозу и раку печени. Для его профилактики разработана вакцина

Менее устойчив в окружающей среде, чем вирус гепатита В, но тем не менее сохраняет свои инфицирующие свойства в течение 30 минут при температуре +60°С.

Заражение возможно при проведении различных процедур и манипуляций, связанных с нарушением целостности кожных покровов и слизистых оболочек; при незащищенном половом контакте с инфицированным партнером; от инфицированной матери – новорожденному.

Острая форма заболевания с последующим выздоровлением развивается лишь у 20-30% заболевших. У большинства инфицированных (70-80%) гепатит С переходит в хроническое течение.

Представляет собой «неполноценный» вирус. Он обладает инфицирующими свойствами только в присутствии вируса гепатита B — самостоятельная форма заболевания невозможна. Однако, возможно одновременное заражение вирусным гепатитом В и D, либо заражение вирусным гепатитом D на фоне хронического вирусного гепатита B. Заражение возможно при проведении различных процедур и манипуляций, связанных с нарушением целостности кожных покровов и слизистых оболочек; при незащищенном половом контакте с инфицированным партнером; от инфицированной матери – новорожденному.

Устойчивость в окружающей среде меньше, чем у вируса гепатита А. Заражение возможно через пищевые продукты (овощи, фрукты, ягоды и морепродукты, которые не подвергались термической обработке); при употреблении воды из водоемов (родники, ручьи, источники), которая не подвергалась кипячению.

Этот тип гепатита наиболее опасен для беременных женщин, поскольку именно у них гепатит Е чаще всего приводит к развитию острой печеночной недостаточности, потере плода и летальному исходу. По данным ВОЗ смертность от вирусного гепатита Е среди беременных женщин достигает 20-25%. Хроническая форма заболевания отсутствует.

источник

Гепатит В — одно из самых опасных заболеваний современности.

Его вызывает вирус, проникающий в организм при контакте крови с инфицированным биологическим материалом, в том числе, остающимся на маникюрных принадлежностях, медицинских инструментах, машинках для нанесения татуировок, которые не были нужным образом продезинфицированы. Вирус может передаваться и при половом контакте.

Для диагностики болезни проводится анализ на гепатит В путем забора крови пациента.

Заражение происходит половым и бытовым путем, тип распространения — гематогенный (через кровь). При инфицировании вирус проникает в гепатоциты (клетки печени), в которых продуцируется в дальнейшем. Посредством кровотока болезнь стремительно распространяется по организму. Вирус В (HBV) характеризуется высокой устойчивостью к воздействиям температуры и кислоты, способен сохранять поражающие свойства в течение полугода.

Если гепатит В проявил первые симптомы, прежде чем начать терапию и лечение, необходимо сдать анализы. Исследование крови является достоверным способом установки заражения гепатитом. Проводится в лабораторных условиях. Материал для анализа на гепатит В сдается натощак: с последнего приема пищи должно пройти минимум 8 часов.

Для выявления в крови вируса гепатита В применяются анализы трех типов, характеризующих присутствие вируса в крови:

• анализ на наличие в материале ДНК HBV путем исследования полимеразной цепной реакции;
• качественное исследование присутствия белка Anti-HBc IgG и антигена HBsAg (встречаются у здоровых, инфицированных и переболевших);

• анализ на выявления белков HBeAg и Anti-HBc IgM (характеризуют обострение болезни).

Для полноты картины рекомендуется одновременно провести исследования по нескольким маркерам.

Наиболее распространенными анализами на гепатит В является иммунологические. Их суть — выявить в крови антитела, выработанные организмом или печенью. Пробы носят качественный и количественный характер. Анализы на гепатит В и их расшифровка, как правило, содержат информацию о нескольких характерных белках. При проведении пробы исследуются следующие антитела:

Встречается на ранних сроках заражения до проявления клинических признаков.

Положительный маркер говорит о присутствии вируса, но встречается и у абсолютно здоровых людей. Если в крови присутствует менее 0,05 МЕ/мл, то результат считается отрицательным. Если значение концентрации антитела выше, анализ признается положительным.

Обнаруживается практически у каждого инфицированного пациента. Сохранения показателей на высоком уровне может говорить о переходе болезни в хроническую форму течения. Положительный маркер говорит о нахождении болезни в периоде обострения, затяжном выздоровлении. HBeAg является крайне плохим признаком. Больной очень заразен. В норме — белок в крови не обнаруживается.

Существует два типа антител Anti-НВс: IgG и IgM. Присутствие в крови IgM является признаком течения острой формы, высокой заразности больного и возможности перерохода заболевания в хроническую форму. В норме присутствие IgM не допускается. IgG — благоприятный показатель. Маркер указывает на сформировавший иммунитет организма против гепатита В.

При выявлении в крови маркера можно делать вывод о благоприятном течении заболевания и формировании защитного иммунитета у больного.

Маркер сигнализирует о выздоровлении и формировании иммунитета.

Для лабораторного обследования и выявления наличия диагноза гепатита В в крови применяют метод ПЦР. Способ рассмотрения полимеразной цепной реакции является самым современным в области выявления заболевания.

Итоговая расшифровка показывает, имеются ли следы генного присутствия возбудителя в клетках печени.

Если при проведении исследования соблюдаются все принципы, то результат обладает абсолютной точностью. Метод используется для постановки диагноза, применяется в процессе лечения и при противовирусной терапии.

1. Качественное ПЦР по итогу имеет всего два значения: «обнаружено» и «не обнаружено». Процедура проводится каждому пациенту с подозрением на гепатит. При средней чувствительности теста на ПЦР в диапазоне от 10 до 500 МЕ/мл, при низких содержаниях ДНК вируса в крови, генный материал обнаружен не будет.
2. Количественное ПЦР. В отличие от качественного, указывает не только на гепатит В. Количественный анализ указывает насколько норма здорового человека далека от показателей больного в числовом выражении. Метод позволяет оценить стадию заболевания и назначить лечение. Чувствительность теста ПЦР при количественном следовании выше, чем при качественном методе. В основе лежит подсчет выявленной ДНК, который выражается в копиях на миллилитр или МЕ/мл.

Кроме того, количественное ПЦР дает понимание воздействия лечения и корректности подобранной терапии. В зависимости от количества генного материала вируса может быть принято решение о сокращении срока лечения или, наоборот, о его продлении и усилении.

Метод биохимического анализа является обязательным для получения полной клинической картины течения заболевания. Этот диагностический метод дает понимание о работе внутренних органов (печени, почек, желчного пузыря, щитовидной железы и других). Расшифровка дает понимание о скорости обмена веществ в организме, возможных патологиях метаболизма. Развернутые показатели укажут на недостаток витаминов, макроэлементов и минералов, необходимых для здоровья и жизни человека.

Сдать анализ на гепатит можно в любом другом диагностическом центре (Инвитро, Гемотест и др). Биохимический анализ крови при выявлении гепатита В включает следующие компоненты.

Этот фермент наиболее часто встречается в повышенных концентрациях при остром и хроническом гепатите. Вещество содержится в печеночных клетках, а при поражениях органа посредством кровотока попадает в сосуды.

Количество и концентрация в крови при вирусном заболевании постоянно меняется, поэтому исследования проводятся не реже, чем раз в квартал. АЛТ отражает не только активность вируса гепатита, но и степень вызванных им нарушений в печени. Уровень АЛТ возрастает при повышении количества токсических веществ печеночного происхождения и в присутствие вируса.

Белок является составляющей важнейших органов человека: печени, нервной ткани, ткани почек, скелета и мышц. Фермент участвует и в построении самой главной мышцы — сердца. Высокие показатели АСТ у больного с гепатитом В может сигнализировать о фиброзе печени. Аналогичная ситуация возникает при алкогольном, медикаментозном или любом другом токсическом поражении клеток печени.

Зашкаливающие показатели являются признаком разрушения печени на клеточном уровне. Необходимо учитывать при постановке диагноза соотношение АСТ и АЛТ (коэффициент де Ритиса). Одновременное повышение концентрации обоих ферментов — признак некроза печени.

Вещество образуется в селезенке и печени, как результат распада гемоглобина в их тканях. Этот компонент входит в состав желчи. Выделяют две фракции белка: прямой билирубин (связанный) и непрямой билирубин (свободный). При возрастании в крови связанного билирубина имеет смысл подозревать гепатит или другие поражения печени. Это непосредственно связано с цитолизом печеночных клеток.

Если возрастает количество непрямого билирубина, то, скорее всего, присутствует поражение паренхимотозной ткани либо синдром Жильбера. Высокий уровень билирубина по результатам анализа может стать следствием непроходимости желчных протоков. При уровне билирубина свыше 30 микромоль на литр у больного проявляется желтушный оттенок кожи, моча становится темной, а белки глаз изменяют свой цвет.

Синтез этого белка происходит в печени. Если его количество снижено, то это свидетельствует об уменьшении синтеза ферментов в органе вследствие возникновения тяжелых поражений печеночных клеток.

Если количество общего белка становится существенно ниже, чем принятая норма, то это говорит о замедлении функционирования печени.

Фермент, используемый при обнаружении механической желтухи и холециститов. Возрастание уровня ГГТ является сигналом токсического поражения печени. Может провоцироваться хронических алкоголизмом и бесконтрольным употреблением медикаментов. Белок особо чувствителен к токсинам и алкоголю, под их влиянием его активность растет стремительно. Сохранение высокой концентрации ГГТ в крови в течение длительного времени говорит о тяжелых поражениях печени.

Является продуктом белкового обмена, происходящего в печени. Резкое снижение уровня — сигнал замедления работы органа.

Снижение уровня белковых фракций является признаком патологии печени.

Диагностирование гепатита В представляет собой совокупное исследование показателей. Только их комплексный анализ позволяет сделать выводы об инфицировании пациента. Рассмотрим расшифровку анализа на гепатит В. Для сравнения приведена норма веществ в крови.

Таблица. Расшифровка анализа на гепатит В.

Ложноположительным называют результат, который возникает в виде положительной реакции на присутствие возбудителя вируса в крови при его отсутствии. Такой результат возможен при прохождении обследования на гепатит В и формируется под влиянием различных факторов. Встречается подобная реакция при:

• беременности;
• развитии онкологических заболеваний;
• тяжелых инфекционных проявлениях;
• перенесенной вакцинации;
• сбоев в работе иммунной системы.

Ложноположительный анализ на гепатит В возможен при нарушениях в ходе забора крови или во время процедуры проведения ее исследования. Анализы на гепатит В в этом случае необходимо сдать повторно. Во избежание подобного рекомендуется проходить дополнительное обследование методом ПЦР, которое без обнаружения генов гепатита В, полностью исключает заболевание.

Дополнительная интересная информация о гепатите В – в следующем видео:

источник

Иммуноферментный анализ – это метод диагностики вирусных заболеваний. ИФА на гепатит С показывает реакцию иммунной системы на действие патогенных микроорганизмов. Для процедуры используют венозную кровь и ищут в ней антитела к вирусу гепатита. Иммуноферментный анализ недорогой, выполняется быстро, но требует подтверждения повторным ИФА или более дорогим ПЦР.

Метод основан на способности антител (клеток иммунной системы) образовывать комплексы с частицами вируса гепатита (антигенами). Для определения этих комплексов пользуются специальными маркерными ферментами. Анализ дает возможность выявить количество антител к вирусу в первые 6-12 недель болезни.

Подготовка к ИФА включает:

• исключение физических нагрузок за сутки до исследования;
• запрет на употребление алкогольных напитков, табачных изделий и жирной пищи;
• временное прекращение приема лекарственных препаратов и оральных контрацептивов.

Кровь для иммуноферментного анализа на гепатит берут утром натощак. Достоверность данного метода повышается при повторном проведении ИФА спустя 2 недели после процедуры.

Результат анализа показывает:

1. уровень эффективности работы иммунной системы при борьбе с вирусом;
2. стадию заболевания;
3. течение – острый или хронический гепатит.

Женщинам в период беременности необходимо сдать кровь на ИФА минимум два раза:

• на ранних сроках (4-5 недель);
• перед родами;

Преимущества ИФА заключаются в:

• доступной стоимости анализа для всего населения;

• полной автоматизации процесса, исключающей ошибку человека;

• быстром получении результата анализа;

• возможности выявить инфекционное заболевание на ранних этапах;

• высокой точности.

Гепатит С – опасное вирусное заболевание, которое передается через кровь и разрушает клетки печени.

Показания к анализу крови на ВГС:

• наличие ВИЧ-инфекции;
• симптомы острого гепатита: рвота, вялость, чувство горечи во рту, отсутствие аппетита, желтушный цвет кожных покровов и др.;
• хронический гепатит;
• наличие в биохимическом анализе крови повышенного билирубина и изменение коэффициента де Ритиса (указывают на нарушения работы печени);
• принадлежность к группе риска (врачи, медсестры, наркозависимые);
• наркотическая и алкогольная зависимость.

Проверку на гепатит С обязаны проходить военные, сотрудники правоохранительных органов, работники общепита и социальных служб.

Анализ на гепатит С, проведенный методом ИФА, способен обнаружить антитела двух типов:

IgM – иммуноглобулин, имеющий самую крупную молекулярную массу и неспособный проникать через плацентарный барьер. Антитела класса IgM вырабатываются в организме первыми – спустя 6 недель после заражения. Через полгода уровень иммуноглобулинов типа М снижается и остается таким до следующего рецидива болезни (при хроническом гепатите). Иммуноглобулины M являются основой первичного иммунного ответа зараженного организма.

IgG – основной иммуноглобулин сыворотки крови, является вторичным иммунным ответом. Обеспечивает иммунитет ребенка, рожденного от инфицированной матери. Иммуноглобулины G вырабатываются спустя 3 месяца после возникновения заболевания, достигают максимальной концентрации на пятом месяце и остаются в этом количестве на протяжении многих лет.

В периоде острого вирусного гепатита есть две стадии. На первой происходит активация и выделение IgM, на второй – IgG. В острой фазе болезни IgM и IgG образуются к нуклеокапсидному белку вируса Core. При латентном (скрытом) течении вырабатываются IgG к белку core и неструктурному белку NS.

Диагностика гепатита включает два способа проведения ИФА – прямой и непрямой.

Прямой метод ИФА на антитела к гепатиту С основан на образовании комплексов антиген-антитело.

1. В специальную таблицу с лунками заносят биологический материал пациента (кровь) и оставляют на 30 минут. Важные элементы приклеиваются ко дну лунок.
2. Добавляют специальные меченые антитела. Они прикрепляются к антителам исследуемой крови (если такие есть). Здесь выжидают несколько часов.
3. Содержимое лунок сливают и промывают от лишних веществ.
4. В каждую лунку добавляют ферменты, которые распознают добавленные ранее антитела. Ферменты связаны со специальным маркером.
5. При положительной реакции маркерное вещество становится окрашенным.

Эта методика включает несколько простых шагов и обеспечивает достоверный результат.

Непрямой метод ИФА отличается тем, что в системе участвуют не два, а три компонента.

• Конкурирующий: в исследуемую систему добавляют антигены, кровь пациента, в которой предполагается наличие иммуноглобулинов, и антитела, помеченные ферментом. Две группы антител вступают в борьбу за образование комплексов с антигеном. Положительной реакция считается при максимальном количестве антител первой группы и минимальном – второй группы.
• Сэндвич-ИФА: в лунки заносят антитела к исследуемому антигену, после чего добавляют кровь и новые антитела. Исследуемый антиген оказывается между двумя молекулами иммуноглобулинов. Этот «сэндвич» виден визуально или при подсвечивании специальным спектром.

Существует четыре варианта расшифровки анализа:

1. Положительный результат. В исследуемом материале обнаружены IgM и IgG к вирусу гепатита – означает, что человек заражен давно (более 3 месяцев назад). Если обнаружены только IgM, то инфекция попала в кровь месяц назад, если только IgG – произошло выздоровление или хронизация гепатита.
2. Отрицательный результат. Иммуноглобулинов в исследуемой крови не обнаружено. Человек полностью здоров.
3. Ложноположительный результат. ИФА всегда нужно проверять полимеразной цепной реакцией (выявляет сам вирус в крови или печеночной ткани). Если ПЦР дает отрицательный результат, то ИФА следует провести заново.
4. Сомнительный результат. Если прошло очень мало времени после рискованной ситуации, ИФА может не выявить наличия антител. Для подтверждения результата необходимо провести повторный анализ через две недели.

Ложноположительный и ложноотрицательный результаты ИФА могут возникнуть вследствие ошибки в лаборатории или неправильной подготовке к анализу. У беременных ложные результаты встречаются чаще, чем у остальных людей.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – дополнительный метод диагностики вирусных заболеваний. Выявляет РНК вируса, то есть его генетическую информацию, применяется для подтверждения диагноза. В некоторых случаях ПЦР дает отрицательный результат при положительном показателе ИФА.

• Выздоровление: ПЦР реагирует только на РНК вируса гепатита, а ИФА может дать положительный результат и после выздоровления, ведь он выявляет клетки иммунной системы, которые сохраняются в крови на несколько лет.
• Разный исследуемый материал: при заборе из разной локализации может возникнуть несоответствие результатов. Так, для ПЦР берут не только кровь, но и кусочек ткани печени.
• Разные тестовые системы.

После пройденной терапии против гепатита С необходимо еще раз сдать кровь на ИФА.

Иммуноглобулины G сохраняются в организме несколько лет после выздоровления, поэтому повторный анализ на гепатит может быть положительным. В этом случае необходимо дополнительно сдать кровь на ПЦР. Отрицательный результат ПЦР на гепатит будет свидетельством того, что человек здоров, а положительный – подтвердит ИФА и укажет на некачественное лечение.

Отрицательный результат повторного ИФА является подтверждением выздоровления.

ИФА относится к лабораторным методам высокой точности и позволяет выявить заболевание на ранних сроках. При первых симптомах гепатита нужно срочно обратиться к врачу, который назначит необходимые анализы для подтверждения диагноза.

Если у вас так же обнаружен РНК гепатита С в крови (вирусная нагрузка), рекомендуем ознакомиться с материалом по расшифровке анализов при гепатите С.

источник