Гепатит с количественный анализ 150

Ведущий метод диагностики воспаления печени — количественный анализ на гепатит С. Определение болезни подразумевает проведение количественного, качественного анализа с проверкой генотипа вируса, что дает возможность определить основные параметры течения заболевания. Ввиду способности к мутации требуется точное и своевременное диагностирование с правильно расшифровкой данных для разработки терапевтической схемы.

С 2012 года болезнь гепатита C официально считается полностью излечимым заболеванием. Но для этого важна своевременная диагностика.

Полимеразная цепная реакция или же ПЦР — метод, позволяющий выявить гепатит на начальных стадиях. Чувствительность немного ниже ИФА. Метод определяет ДНК- фрагменты вируса в пробе крови пациента даже в малых количествах. Исходя из этого врач правильно вычисляет именно возбудителя инфекции, а не его продукты жизнедеятельности. По результатам анализа ПЦР есть возможность выявить даже следы вируса и его генотип.

В ПЦР выделяют 3 вида анализа:

Качественный. ПЦР гепатита С, который основывается на поиске иммуноглобулинов (антител) типа M и G, характеризующих факт заражения. Анализ может выдать — «не обнаружено», что будет считаться нормой.
Количественный. Подтверждает диагноз, позволяет контролировать лечение, указывает на риск заражения других людей. Определяется количество в международной системе единиц — МЕ/мл. Показатель рассчитывается из количества РНК-вируса в 1 мл пробы крови. Высокий результат указывает на повышенный риск инфицирования других людей.
Генотипирование. Метод, основывающийся на выявлении генотипов HCV, которых насчитывается 7.

Перед сдачей крови на проверку важно придерживаться правил:

За 8 часов до анализов в последний раз покушать.
Не пить спиртного за 2 дня, желательно не курить в это время или хотя бы за 1—2 часа до.
Сообщить о приеме лекарств.

Вернуться к оглавлению

Для проведения количественного метода исследования нужен ряд показаний, без которых эта диагностика невозможна. К ним относится:

выявление качественным анализом антител РНК-вируса;
присутствие хронического или острого вида заболевания;
планирование тактики лечения;
обнаружение микст-гепатитов при диагностировании.

Вернуться к оглавлению

Определение концентрации патогена — суть исследования. Диагностика определяет степень тяжести заболевания, что позволяет полностью увидеть клиническую картину болезни. С помощью это вида ПЦР обнаруживают, какая вирусная нагрузка при гепатите С. После проведения расшифровки полученных данных анализа, врачи назначают лечение, в ходе которого делают забор крови на 4, 12, 16 и 24-й неделях. По завершении 12-й должно быть улучшение, в обратном случае метод лечения стоит заменить.

Найденное в крови количество HCV, влияет на вероятность, с которой вирус гепатита передается окружающим — чем выше, тем больше вероятность. За счет этой процедуры составляется правильный план дальнейшего лечения. Полученные в ходе процедуры результаты измеряются в единицах МЕ/мл и копий/мл. Расшифровать показатели можно только после пересчета полученного количества с учетом коэффициента (КП). Есть 2 метода:

HCV Monitor с КП в МЕ — 2,7;
LCX HCV RNA с КП — 3,8.

источник

Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.

Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.

Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.

Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.

Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.

Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.

Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:

Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.

Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.

Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.

Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.

Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.

Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:

Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
Для контроля результативности проводимой терапии.
После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.

ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.

Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:

Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.

За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.

Забор крови происходит следующем образом:

Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.

Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.

Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.

У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.

Плюсы исследования представлены в таблице:

Прямая диагностика возбудителя патологии	Другие исследования позволяют дать ответ – есть ли возбудитель в организме или нет. Но с помощью ПЦР методики можно конкретно установить вид вирусного агента.
Специфичность исследования	ПЦР определяет уникальный фрагмент ДНК, который соответствует только одной разновидности вирусного агента. Это позволяет свести к минимуму вероятность ошибки.
Высокая степень чувствительности	Можно выявить даже мизерную концентрацию вируса в крови.
Определение всех возбудителей	Во время исследования можно обнаружить всех патогенных агентов.
Скрыто протекающие инфекции	Кроме вирусного возбудителя можно выявить инфекции, которые имеют латентное течение, отличаются высокой антигенной активностью.

Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.

Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.

Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.

В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.

Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.

Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.

Результат	Расшифровка
Отрицательно	Это норма для здорового человека. Значит, в исследуемом биологическом материале нет РНК вирусного гепатита, либо содержание меньше порогов восприимчивости.
До 1,8*10^2 МЕ/мл	Говорит о том, что содержание РНК меньше диапазона количественного определения. Интерпретировать такой результат надо осторожно, потому что он считается спорным. Дополнительно проводятся другие исследования для последующего сопоставления. Также проводят повторно ПЦР-тест.
До 8*10^5 МЕ/мл	Низкая вирусная нагрузка. Как правило, такой результат значит, что проводимое лечение эффективно.
От 8*10^5 МЕ/мл	Высокая вирусная нагрузка. Незамедлительно требуется терапия (если не проводится), либо необходима коррекция медикаментозных назначений.
2,4*10^7 МЕ/мл	РНК больше верхнего максимума количественного определения. На фоне такого результата о вирусной нагрузке не судят. Требуется повторное исследование с разведением образца биологической жидкости.

Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.

Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.

Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.

ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.

Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.

В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.

Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:

Название лабораторной службы	Ценовая политика
Хеликс	· Стоимость забора биологического материала – 170 рублей. · Качественное + количественное исследование методом ПЦР – 3990 рублей. · Выявление антител вирусной болезни – 1500 рублей (срок 2-3 дня). · Проверка активности вируса перед началом курса терапии – 4090 рублей.
Инвитро	· Количественное выявление РНК вируса гепатита C посредством ПЦР – 3140 рублей. · Забор биологического материала (венозной крови) – 199 рублей. · Оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени – 18 000 рублей. · Качественный ультрачувствительный тест – от 3000 рублей. · Проведение генотипирования – от 1250 рублей.
Гемотест	· Цена количественного исследования 2200 рублей. · Качественная диагностика от 700 рублей. · Определение РНК возбудителя – от 4000 рублей. · Забор крови из вены около 150 рублей.

Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.

источник

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Проводимое исследование	Цели выполнения
Биохимический анализ крови и печеночные пробы	Позволяет оценить функциональную активность печени, уровень билирубина, показатели печеночных трансаминаз. Превышение нормы в 2 раза и более указывает на наличие заболевания
Клинические анализы крови, мочи и кала	Данные исследования неспецифичны, но по результатам можно установить наличие воспалительного процесса, оценить общее состояние пациента. Обнаружение билирубина в моче, изменение оттенка кала говорит в пользу поражения печени
Иммуноферментный анализ (ИФА)	Позволяет определить как наличие вирусной инфекции в организме, так и ее форму (острую или хроническую). Недостатком исследования является вероятность ложных результатов
Полимеразная цепная реакция	Дорогостоящий, сложный в проведении, но вместе с тем наиболее точный метод диагностики HCV. Позволяет подтвердить наличие вируса в организме человека, количественно установить уровень копий РНК, определить генотип HCV
Инструментальные обследования печени	Необходимо проведение УЗИ органов брюшной полости, установление стадии фиброза, оценка тяжести цирроза, исключение гепатоцеллюлярной карциномы

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
положительный результат качественной ПЦР;
контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Значение показателя	Уровень вирусной нагрузки
РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы)	Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии
1,8×102–7,9×105 МЕ/мл	Низкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов
8×102–2,3×107 МЕ/мл	Умеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача
2,4×107 МЕ/мл и выше	Высокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени)

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

В последнее время в поисковиках интернет-ресурсов все чаще появляется запрос «количественный анализ на гепатит с расшифровкой».

Действительно, вирус гепатита распространен и опасен, заболевание поражает печень. Название его произошло от лат. hepatitis — воспаление печени. Заражение происходит через кровь либо половым путем, чаще болеют взрослые люди в возрасте от 25 до 50 лет.

Выделяют несколько типов этого заболевания. Гепатит С не имеет яркой выраженности, но в 40–70% случаев переходит в хроническую форму, способен вызвать цирроз печени и рак. Это заболевание требует точного диагностирования и расшифровки полученных данных, для чего разработаны методики. Одна из них — РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР.

РНК (рибонуклеиновая кислота) — вид макромолекулы, одна из составляющих живой клетки. РНК отвечает за кодировку генетической информации. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет обыкновение мутировать. Известны 6 его подтипов, а также много субтипов.

Болезнь в своей хронической стадии приводит к фиброзу печени — разрастаются соединительные ткани, структура органа постепенно нарушается. Фиброз поддается своевременному лечению, так как печень не подверглась еще разрушительным процессам. В отличие от цирроза, тяжелого необратимого заболевания печени, в который может перерасти фиброз без принятия необходимых мер вовремя.

Человеку с подозрением на наличие у него вируса гепатита, определяют антитела к нему. Если их нет — заболевание исключается, при их наличии прибегают к методу ПЦР (полимеразной цепной реакции). В молекулярной биологии он является экспериментальным, но занимает ведущее место среди методик диагностирования инфекционных болезней. С помощью него можно значительно увеличить концентрацию фрагментов молекул в пробе. Через 10 дней после инфицирования РНК уже возможно определить в крови.

Этот метод является единственным, позволяющим выявить заболевание на ранних стадиях. Другими способами (напр., биохимическим исследованием крови) это сделать невозможно, так как печень еще не поражена.

Открыл метод в 1993 году биохимик Кэрри Муллис, за что получил Нобелевскую премию. ПЦР стал прорывом в медицине и науке, так как позволил быстро и точно определять инфекции в крови и других биологических материалах человека. Иными словами, метод ускорил развитие диагностики инфекционных заболеваний.

РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР является эффективным по следующим причинам:

имеет хорошую чувствительность — определяется даже малое количество вируса в крови;
определяется сам вирус, а не побочные продукты, создаваемые им;
определяется вид возбудителя.

Метод ПЦР включает два основных способа исследования биологического материала на поиск вируса гепатита С:

Эти исследования имеют различные задачи.

Качественный анализ на гепатит с расшифровкой подтверждает наличие вируса после того как в крови уже найдены антитела к этому заболеванию. Если исследование дало положительный результат, значит, болезнь обнаружена. Иными словами, человек инфицирован. Если получен отрицательный результат, это означает, что человек не инфицирован, либо в наличии слишком маленькая концентрация вируса. Эта концентрация не обнаруживается таким способом.

Помимо этого клиническая картина заболевания строится на основании маркеров гепатита С и расшифровки анализа. Основные маркеры — иммуноглобулины (антитела) M и G. Наличие их в крови пациента указывает на нехарактерный процесс для здорового организма. На основании наличия этих антител больному, как правило, устанавливается первичный диагноз.

Количественный анализ назначается при первичном обнаружении антител и при необходимости проведения лечения.

Также количественный анализ на гепатит С назначают при выявлении микст-гепатитов (заражение сразу несколькими вирусами).

Количественный анализ с расшифровкой проводится с целью:

прояснения окончательного диагноза;
выстраивания прогнозов относительно течения заболевания и его лечения — продление, сокращение лечения либо изменение тактики;
мониторинга терапии.

Чтобы результаты были верными, нужно соблюдать установленный режим перед тем как сдавать кровь:

прийти в лабораторию натощак, последний раз принять пищу можно за 8 часов до процедуры;
за два дня до исследования запрещен алкоголь, жирные и жареные продукты;
ультразвуковые исследования, массаж, физиотерапию перед исследованием проводить нельзя;
за день запрещен прием лекарств, если прием отдельных препаратов невозможно отменить, об этом сообщается до забора крови;
перед процедурой рекомендуется снизить по возможности физические и нервные нагрузки.

Выполнение этих требований будет залогом получения верных результатов количественного анализа на гепатит С.

После получения показателей количественного анализа необходимо сделать расшифровку результатов анализов на гепатит С. Результаты вычисляются и в единицах МЕ/мл, и в копиях на мл. Для получения результатов, пересчитанных в копии, применяют несколько методик.

HCV Monitor (коэффициент пересчета на МЕ — 2,7);
LCX HCV RNA (коэффициент пересчета на МЕ — 3,8).

Таблица. Расшифровка количественного анализа HCV RNA методом ПЦР.

Показатель, МЕ/мл	Результаты обнаружения вируса
Не обнаружено	Является нормой для здорового человека
Ниже 180	Минимальная концентрация ниже диапазона измерений, не обнаружен
Ниже 800 000	Обнаружен, виремия (концентрация вируса) низкая
Выше 800 000	Обнаружен, виремия высокая
Выше 25 000 000	Обнаружен, виремия выше диапазона измерений

Такая расшифровка результатов анализов на гепатит С помогает определить степень опасности заболевания в плане возможности его передачи. Чем больше обнаружена концентрация вируса в крови при расшифровке, тем выше вероятность заразить другого человека. Также концентрация влияет на успешность назначаемого лечения.

Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу.

Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. МЕ/мл, можно говорить о минимальной концентрации вируса в крови, но не об отсутствии заболевания. Нагрузку более 800 тыс. МЕ/мл определяют как высокую. Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций. Границей считают 400 тыс. МЕ/мл.

Получение ошибочного результата возможно. Это может быть объяснено несколькими причинами.

Ошибка работы диагностического центра — лаборатории. Иногда нарушаются правила проведения исследования, неверно подготавливаются образцы.
Исследуемый образец загрязнен.
Определение в крови гепарина — вещества, которое препятствует свертыванию крови.
Определение в крови ингибиторов — веществ, задерживающих физико-химические процессы.
Применение различных способов и реактивов в разных лабораториях.

Лучше проводить исследование в современной, хорошо себя зарекомендовавшей лаборатории. Для получения правильного результата важна чувствительность системы диагностики. Это нужно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой. Желательно, чтобы чувствительность была не ниже 50 МЕ/мл.

Сдача анализов на гепатит с расшифровкой — надежный современный способ диагностики. Исследования проводятся до лечения, во время и после него, при наличии как острой, так и хронической форм заболевания. Диагностика, проведенная до терапии, определяет его эффективность в дальнейшем.

Во время лечения забор крови делают на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Уже на 12-й неделе показатель виремии должен значительно снизиться. Если этого не происходит, лечение неэффективно и нужно подыскивать новое. Например, с 1 млн МЕ нагрузка должна уменьшиться до 100 тыс. МЕ. После окончания лечения проводят расшифровку анализа гепатита С для исключения рецидивов.

Общее представление о том, что такое анализ ПЦР можно составить, посмотрев следующее видео:

источник

Заболевание под названием гепатит может серьезно поразить печень и вызвать сильное воспаление. Существует несколько типов гепатита, а вирусы, которые провоцируют развитие заболевания могут делиться по генотипу в зависимости от мутации и географического расположения. Один из распространенных видов заболевания это тип С. Количественный анализ на гепатит С, расшифровка которого проводится лечащим врачом, может протекать в острой форме или перейти в хроническую.

Для определения диагноза проводится соответствующее лабораторное исследование. В качестве первого поверхностного теста может быть использован качественный анализ, который покажет есть ли в организме возбудитель гепатита. Но для установления точной стадии заболевания и назначения лечения необходимо провести количественный тест.

Вирус гепатита передается от человека к человеку. Заболевание имеет инкубационный период, в который симптомы практически не проявляются. Время скрытого течения болезни зависит от иммунной системы человека и количества вируса, которое попало в организм. Медики установили следующие основные пути передачи гепатита С:

47% вероятность заразиться вирусом через кровь при использовании общих нестерильных шприцов во время введения внутривенных наркотиков. Организм, ослабленный влиянием наркотических веществ, не может сопротивляться вирусу и болезнь распространяется.
22% шанс подхватить гепатит при переливании крови. В связи с высоким риском заражения гепатитом, ВИЧ и другими заболеваниями через донорскую кровь, медучреждения подвергают все биологически образцы обязательной проверке перед использованием. Если соблюдается это правило, то риск заражения минимален.
16% риск заражения гепатитом при использовании нестерильных медицинских инструментов. Как правило, все врачи тщательно следят за оборудованием и инвентарем. Но если техника безопасности не соблюдается, возможно заражение гепатитом или другими заболеваниями.
13% шанс передачи вируса от инфицированной матери растущему плоду.
12% вероятность заразиться вирусом при сексуальном контакте без использования презерватива со случайным половым партнером. По статистике для гомосексуальных пар риск выше.

Нормальным, тое есть здоровым состоянием считается отсутствие каких-либо серьезных проявления недомогания. Опасность вируса гепатита состоит в том, что заболевание может не давать сильных симптомов. Явные признаки заболевания, (рвота, резкое похудение и пр.) проявляются только в 15% случаев. У остальных 85% больных симптомы проявляются достаточно слабо. Необходимо следить за своим самочувствием и реагировать на ухудшение состояния.

Наиболее характерный признак проблем с печенью, это желтушность кожи и белка глаз. Эти признаки соответствуют не только вирусу гепатита, но и другим заболеваниям печени.
Появление сосудистых звездочек на коже. Мелки капилляры, которые находятся у кожного покрова расширяются в результате присутствия вируса в крови, и появляются «звездочки».
«Печеночные ладони» это симптом, который сопровождается покраснением ладоней, а иногда и стоп. Это явление также называется пальмарной эритемой и появляется обычно вместе с сосудистыми звездочками.
Раздражающее токсическое воздействие вируса на организм может вызвать кожный зуд.
Из-за изменения химического состава крови может быть нарушен показатель свертываемости.
Длительное воздействие вируса на организм приводит к нарушению функций мозга (приобретенная энцефалопатия).
Возможно появление внутренних кровотечений.
Нарушения функций печени может привести к скоплению жидкости в брюшной полости (асцит).
В конце дня на ногах больного появляются отеки.

Проявление одного или двух симптомов характерно для самых различных заболеваний. Чаще всего недомогание объясняется физической усталостью или сильной психологической нагрузкой и стрессом. При обнаружении нескольких характерных симптомов из представленного списка имеет смысл сделать количественный анализ на гепатит С.

Одним из самых надежных и достоверных способов диагностики гепатита это полимеразная цепная реакция или ПЦР. В отличие от других типов исследования (ИФА или РИФ) анализ ПЦР на гепатит позволяет обнаружить непосредственно генетический материал вируса, а не антитела для борьбы с ним. Это дает возможность для точной диагностики. Антитела к вирусу сохраняются в человеческом организме и после полного выздоровления. В таком случае ИФА обнаружит антитела у совершено здорового человека, то есть результат будет положительным. С анализом ПЦР такой проблемы нет.

Норма для показателя составляет число, близкое к нулю. То есть, у здорового человека в принципе не должно быть клеток вируса в организме. ПЦР количественный отражает то число, вирусных клеток, которое обнаружено в исследуемом биологическом образце. Исходя из полученных данных, врач может сделать вывод о степени зараженности организма в целом. Концентрация вируса указывает на стадию заболевания и позволяет отследить приблизительное время заражения.

Важно не только правильно подготовиться к анализу и сдать биологический образец в лабораторию, но и расшифровать полученные данные. Это должен делать только квалифицированный врач. Конечно, на бланке с результатом уже имеется информация о принятых нормах и проставлены значения пациента. Однако цифры это еще не все, опыт и медицинские знания позволяют получить больше информации. Таблица показывает, какой результат может показать анализ ПЦР на гепатит тип С количественный:

Содержание вируса (Ме/мл)	Значение
Нет	Вирус в организме человека отсутствует, это нормальный показатель для здорового человека. Также такой результат может быть, если концентрация вируса ничтожно мала и находится ниже чувствительности теста.
Менее 1,8×10 2	Содержание вируса в исследуемом биологическом образце ниже линии границы.
Менее 8×10 5	Обнаружено незначительное количество вируса, заболевание в начальной стадии. Для пациента это хороший прогноз, возможность назначения эффективного лечения и полное выздоровление в большинстве случаев.
Более 8×10 5	Концентрация вируса высокая, требуется немедленное лечение. Организм подвергается серьезной нагрузке.
Более 2,4×10 7	Концентрация вируса очень высокая, выше линейного диапазона. При составлении прогноза учитываются все факторы, лечение может быть длительным, а болезнь может перейти в хроническую форму.

Для лечения гепатита С количественный анализ имеет первостепенное значение. От того, насколько сильно вирус поразил организм, зависит назначение препаратов и дальнейший прогноз для пациента. Кроме концентрации гепатита С в крови, с помощью ПЦР можно определить генотип вируса. И если данный тип возбудителя болезни не характерен для местности, в которой проживает больной, можно отследить путь заражения и предотвратить вспышку гепатита в регионе.

Расшифровка анализа не менее важна, чем сама процедура. Количественный ПЦР может быть ложным только в результате ошибки, так называемого человеческого фактора. По различным данным вероятность получения ложного результата анализа составляет около 5%. Порча биологического образца возможна при транспортировке и неправильном хранении.

Также имеет место загрязнение рабочего места лаборанта и ошибки во время взятия крови для анализа.

От пациента в данном случае мало что зависит. Но следует уделить максимум внимания выбору лаборатории, в которой будет проводиться исследование. Сегодня любой человек может ознакомиться с отзывами о медицинских учреждениях в интернете и составить мнение о компетентности и профессионализме сотрудников лаборатории. Оснащенность современным оборудованием и положительная реакция людей снижает шансы на получение ложного результата.

Согласно медицинской статистике в 30% случаев заражения гепатитом типа С иммунная система человека может самостоятельно побороть заболевание без использования медицинских препаратов. В остальных 70% случаев без врачебного вмешательства болезнь перетекает в хроническую форму и остается навсегда, постепенно разрушая печень и сокращая длительность жизни человека. Количественный анализ на гепатит С с расшифровкой позволяет, как диагностировать заболевание в начальной стадии, так и отслеживать периоды обострений хронической формы заболевания.

источник

Гепатит С. Чем он опасен для человека. Как диагностировать инфекцию. Что нужно для проведения анализа

Вирус гепатита С или ВГС – инфекционное заболевание, которое несет в себе молекулу рибонуклеиновой кислоты.

Этот тип вируса умеет легко приспосабливаться к условиям обитания и часто трансформируется в разные формы болезни, поэтому нашей защитной системе организма так сложно с ним справиться. Классифицируют шесть главных генетических типов инфекции и десятки подтипов. В наших краях зачастую встречаются первые три типа вируса.

По статистике лишь четверть случаев заболевания ВГС протекают без осложнений, во всех остальных случаях норма, если инфекция перерастает в хронический процесс, который пагубно влияет на внутренние органы. Так гепатит может осложняться печеночным фиброзом – процесс замены печеночных клеток. Дальше осложнения развиваются по цепной реакции: вследствие фиброза появляются раковые опухоли, болезнь печени перерастает в цирроз.

В большинстве случаев инфекция попадает в организм человека по кровеносным сосудам. Диагностируют вирус гепатита С несколькими методами. Отслеживают уровень концентрации антител к ВГС. Инфицирование не произошло, если в крови пациента не будут найдены антитела к ней. В противном случае вирус изучается более глубоко, проводят еще один тест – ПЦР. Только этот метод позволяет идентифицировать РНК вируса спустя всего полторы недели после заражения, во время, когда организм не успевает начать производство антител к инфекции, и последствия заражения никак не отражены на общем состоянии, тем более в результатах других исследований, таких как БАК и биопсия.

Вирусная нагрузка или количественный анализ ПЦР – анализ на определение уровня содержания инфекции в плазме. По сути, количественный анализ – это число молекул инфекционной рибонуклеиновой кислоты в одном миллилитре крови.

Р-ДНК – быстрый, дешевый и не самый точный количественный способ определения вируса на основе выявления клеток разветвленной ДНК. Этот тест может не идентифицировать заражение, присутствующее в организме из-за плохой чувствительности – около 450 МЕ/мл.

Количественный метод транскрипционной амплификации позволяет найти в организме клетки РНК. Этот способ появился сравнительно недавно, он стоит недорого и является достаточно эффективным средством диагностики. Чувствительность теста около 10 МЕ/мл.

Попробуем объяснить результаты анализов. Ниже приведена таблица и расшифровка.

Норма для каждого случая

Обнаруженная концентрация молекул инфекции, МЕ/мл	Описание
отсутствует	Результат – норма. Инфекция не присутствует в организме или присутствует в настолько малом количестве, что находится ниже порога чувствительности теста
0-1,8х10^2	Норма. Количество молекул инфекции меньше допустимых границ
1,8х10² – 8х10^5	Не норма. Инфекция присутствует в небольшом количестве.
8х10^5 – 2,4*10^7	Не норма. Инфекция в большом количестве
Свыше 2,4*10^7	Не норма. Большая опасность. Инфекция сильно выражена

Результат анализа может быть предоставлен исходя и другой классификации – по концентрации копий молекул вируса в единице жидкости. Усредненно можно полагать, что в одной единице МЕ 4 копии на один миллилитр.

Чтобы определить степень активности инфекции в организме, применяют метод исследования виремии. На основе такого анализа специалист дает заключение о возможности заражения пациентом окружающих, вступающих с ним в тесный контакт. Особой значимости набирает этот анализ при опасности передачи инфекции во время беременности от матери к плоду.

Данный тест проходят пациенты, у которых в крови нашлись антитела к инфекции. Примерно четверть больных острым гепатитом С излечиваются самостоятельно, то есть при клинических исследованиях следов вируса не выявляется. По итогам теста врач прогнозирует дальнейшее протекание болезни и назначает соответственное лечение.

Лечебные процедуры назначаются после проведения исследования ПЦР. Высокие показатели по результатам ПЦР снижают шансы на беспрепятственное восстановление здорового состояния организма, низкие же наоборот – повышают.

Также данный тест проходят пациенты уже параллельно с терапевтическими процедурами: в начале первого месяца, конце первого месяца, в конце квартала и через пол года.

Если уровень заражения с течением времени, а в частности в конце первого квартала лечения, не снижается, значит, лечение малоэффективно. Врачу следует изменить вектор терапии.

Снижение активности заражения определяется понижением в десять раз количеством молекул вируса в крови. То есть если на первой неделе было найдено10000 единиц, а в конце квартала 1000 единиц, инфекция считается угасающей, а лечение стоит продолжать.

После окончания курса терапии все равно необходимо отслеживать состояние инфекции, так как существует опасность рецидивной инфекции, т.е. вирус может снова распространяться, а болезнь прогрессировать.

Результат теста может быть некорректным из-за присутствия человеческого фактора при исследовании материала. Лаборантом может быть не соблюдены условия содержания опытных проб, например:

попадание грязи на испытуемую пробу
присутствие в плазме гепарина
наличие в плазме специальных веществ, действующих на реагенты, входящие в состав ПЦР.

В разных клиниках по одному и тому ж анализу могут предоставить отличающиеся результаты. Причина в различном подходе исследований, работе с разными реагентами. Это вполне обычная ситуация. Уберечь себя от неточного результата анализа можно, если сдавать анализы только в своей проверенной клинике.

В дополнение к уровню виремии необходимо идентифицировать генетический тип инфекции, особенно в период назначения и прохождения курса лечения. Стоит понимать, что характер болезни невозможно выявить путем проведения анализа ПЦР. Для этого служат и обязательны к применению другие тесты, такие как биохимический анализ крови (БАК), биопсия печени и так далее.

Материал для проведения опыта при гепатитах забирают из локтевой вены. Пациент сдает кровь рано утром до приема еды. Настоятельно рекомендуется ограничить физическую работу, организовать рациональное питание, воздержаться от вредных превычек за день до сдачи анализа. Тогда степень достоверности теста будет значительной. Как правило, исследование материала занимает не больше суток, то есть на следующий день после сдачи можно забирать результаты анализа.

источник