Анализ ПЦР гепатит С – это исследование, основной целью которого является идентификация генетического материала возбудителя. Анализ выявляет возбудитель заболевания методом использования полимеразной цепной реакции. Данная диагностика отличается высокой степенью точности, специфичностью к выявлению отсутствия или наличия вирусной инфекции.
Достоинства анализа ПЦР на гепатит
Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования
Результаты анализа: нормы и отклонения
Расшифровка количественного анализа
Расшифровка качественного анализа
Ложноположительные и ложноотрицальные результаты
Где сделать ПЦР-диагностику и сколько стоит?
Чтобы провести ПЦР анализ на определение вируса гепатита С у пациента берётся венозная кровь, которая потенциально содержит в себе РНК (рибонуклеиновая кислота) HCV искомого вируса.
Тест ПЦР на гепатит С подразумевает порядок действий, когда в частицы крови пациента добавляют:
- праймеры (короткие искусственно-синтезируемые участки необходимо гена);
- специальный фермент (РНК-полимераза).
После забора биологический материал отправляется на исследования в лабораторию. Одна порция крови нужна для проведения непосредственно ПЦР анализа, вторая – отправляется на исследование по методу ИФА. Фермент способен за короткое время увеличить численность генетического материала вируса возбудителя. В специальном аппарате проводится несколько циклов тепловых и охлаждающих процессов. На конечном этапе полученный материал сопоставляется с генами вируса и делается заключение о наличии или отсутствии патологии в организме пациента.
Суть и проведение ПЦР анализа в лаборатории. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.
Существует 3 вида диагностики, дающие возможность определять наличия вируса гепатита С в организме человека:
- генотипирование;
- качественный;
- количественный.
Диагностика гепатита С качественным методом применима для пациентов, у которых в анализе крови определены антитела к вирусу. В случае наличия острой фазы РНК ВГС подобные диагностические мероприятия позволяют определить наличие заболевания за 1-2 недели после инфицирования. В этот период антитела к гепатиту С могут быть ещё не выработаны.
Количественный метод диагностики используется для определения концентрации вируса в образцах крови. Подобный тест на виремию (степень концентрации) даёт возможность точно определить количество единиц вирусной РНК. Конечный результат выражается в соответственном объёме. Если речь идёт о количественном анализе, тогда показатели измеряются в 1 мл (1 куб. см).
Параметр вирусной нагрузки означает уровень инфекционности заболевания, то есть отображает степень «заразности» пациента. На практике это значит, что чем выше концентрация вируса в крови, тем больше шансов у пациента заразить окружающих гепатитом С. Количественный метод исследования также позволяет установить качество и результативность проведённого лечения.
Генотипированием выявляют мутации возбудителя заболевания. Перед назначением лечебного плана определяют генотип вируса: от этого зависит качество и продолжительность терапии. Так, например, при лечении заболевания I-типа эффективность составляет 60%, в случае II, III-типа – около 80%.
Среди основных достоинств проведения процедуры выделяют:
- Возможность ранней диагностики. ПЦР анализ способен определить наличие вируса на ранних стадиях заражения.
- Низкая погрешность результатов. Исследуемый биологический ресурс позволяет диагностировать участок генетического материала, который является характерным только для одного типа вирусной инфекции. Это обстоятельство позволяет не допустить ложных результатов диагностики.
- Высокая степень чувствительности. Анализ ПЦР способен выявлять РНК вируса в небольших количествах, что также дает возможность вовремя отследить скрытые инфекции.
Сдавать анализ ПЦР на гепатит C нужно, если есть:
- наличие контактов с больными людьми, которое могло бы привести к заражению;
- симптомы заболевания цирроза печени (увеличение селезенки, нехарактерные изменения размеров печени, обнаружение на животе венозного сплетения под кожей);
- положительные результаты ИФА;
- увеличение активности АСТ и АЛТ (проявляется в биохимическом анализе крови);
- необходимость контроля ведения антивирусной терапии;
- проведение начального этапа лечения для необходимости установления вирусной нагрузки;
- проведение завершающего этапа терапии для исключения возможных рецидивов;
- наличие у пациента гепатита В, чтобы исключить вариант развития смешанного поражения печени.
Подготовка к ПЦР анализу включает следующие рекомендации:
- забор крови проводится утром;
- анализ проводится натощак, поэтому желательно выдержать перерыв между последним приёмом пищи 8-10 часов;
- за несколько дней до проведения диагностики следует исключить жирную, острую и жареную пищу, алкогольные напитки и курение;
- за сутки до анализа следует воздержаться от тяжёлых физических нагрузок, исключить занятия в спортзале или бассейне.
Сам анализ делается недолго, а расшифровывает результаты ПЦР на гепатит С высококвалифицированный специалист гепатолог или инфекционист. На основании результатов анализа пациенту выставляется диагноз.
Чтобы правильно расшифровать результаты обследования, учитывают показатели:
- биохимического анализа крови;
- данные ультразвукового исследования;
- результаты биопсии.
При получении результатов количественного анализа ПЦР учитываются следующие показатели:
Показатель | Характеристика |
Не обнаружено | Норма здорового человека. Данный показатель обозначает, что в организме человека не присутствует генетический материал вируса или его концентрация ниже порога чувствительности. |
До 1,8*10^2 МЕ/мл | Значение подобных результатов изучается с повышенной осторожностью, так как необходимо соотношение информации с другими видами диагностирования. Такой результат требует повторного проведения процедуры, ввиду того, что концентрация РНК возбудителя ниже порога количественного определения. |
До 8*10^5 МЕ/мл | Вирусная нагрузка данного параметра считается низкой. Снижение концентрации вируса говорит о том, что лечебные мероприятия проводятся эффективно. |
Больше 8*10^5 МЕ/мл | Высокая вирусная нагрузка, следует пересмотреть подход к лечению. |
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл | В этом случае концентрация РНК возбудителя достигает запредельных отметок, поэтому делать выводы об уровне вирусной нагрузке нет смысла. Чаще всего при таком результате назначается повторный тест с разведение частиц крови. |
В заключении качественного анализа ПЦР на гепатит С могут присутствовать следующие данные:
Показатель | Характеристика |
Обнаружено | Если зафиксирован положительный ответ, это значит, что в исследуемом образце крови присутствует генетический материал вируса. Простыми словами – подтверждается факт заражения человека. |
Не обнаружено | Если в конечном итоге выходит отрицательный ответ, значит, заражение не произошло или количество РНК вируса недостаточно для определения чувствительности. |
При получении анализов на генотипирование вируса можно обнаружить следующие варианты показателей:
Показатель | Характеристика |
Обнаружена РНК конкретного генотипа | Данный результат показывает то, что в биологическом материале пациента найден вирус гепатита С конкретного генотипа и субтипа. Обозначается каждый генотип цифрой и латинской буквой. |
Обнаружена РНК вируса гепатита С | При подобных результатах назначается повторное исследование, так как данный параметр обозначает наличие вируса гепатита, который не относится к 1,2,3 типу. Подобные случаи считаются редкими в России. |
Не обнаружено | Данный результат считается нормой и свидетельствует о том, что человек здоров или концентрация вируса ниже порога определения. |
Ложно положительные и ложноотрицательные результаты ПЦР исследования получаются в таких случаях:
- при недостаточной квалификации медицинского персонала, которые проводят диагностику;
- ошибки в работе лаборантов, когда кровь транспортируется в лабораторию ненадлежащим способом или биоматериал загрязнён;
- случаи ненамеренной подмены проб крови;
- нарушения в процессе подготовки биологического материала;
- воздействие на исследуемые образцы повышенной температурой.
Среди других причин получения неточных результатов выделяют такие:
- кровь пациента содержит остаточные частицы гепарина и прочих коагулянтов;
- в образце присутствуют вещества-ингибиторы, способствующие замедлению или остановке полимеразной цепной реакции.
Подобные исследования проводятся:
- в частных медицинских центрах;
- в КДВ;
- в государственных поликлиниках.
Государственные поликлинники проводят анализ ПЦР на гепатит С бесплатно на основаниях наличия у пациента направления от гепатолога или инфекциониста.
Диагностика заболевания на платной основе проводится во всех крупных городах России.
Стоимость диагностики зависит от:
- качества оборудования клиники;
- скорость выполнения работы;
- типа теста.
Цена на изучение крови методом ПЦР колеблется в следующих пределах:
- качественный ПЦР анализ — 600-900 рублей (в Москве и Санкт-Петербурге);
- качественный ПЦР анализ — 300-800 рублей (регионы);
- определение вирусной нагрузки — 17000-22000;
- определение других видов инфекции количественного анализа 1200-10000 рублей.
Ошибочные анализы на гепатит С. Снято каналом Гепатит С побежден.
источник
Анализ ПЦР на гепатит С: где и как правильно сдать, что означает положительный и отрицательный результат
ПЦР на гепатит С – обязательный анализ при обследовании пациента с симптомами поражения печени. Исследование назначают для подтверждения диагноза и получения максимально полной информации о возбудителе болезни, активности вирусной инфекции. Результаты служат основанием для назначения противовирусной терапии, определения ее продолжительности и оценки эффективности.
Диагностика с применением методики полимеразной цепной реакции получила распространение сравнительно недавно. Исследования на эту тему велись с середины 1970-х годов. Но первые публикации относительно возможности использования ПЦР в практической медицине появились только в середине 1980-х гг.
При объяснении, что такое ПЦР, врачи подчеркивают, что это самый надежный и достоверный анализ при гепатите С. Данный тест позволяет не только выявить частицы РНК вируса, но и установить его концентрацию (указывает на активность инфекционного процесса) и генотип. Полученные результаты играют ключевую роль для определения тактики и схемы дальнейшей терапии.
В чем состоит суть постановки реакции? При помощи определенных биологически активных веществ добиваются увеличения количество частиц РНК вируса в небольшом объеме крови. Впоследствии участки генома определяются разнообразными физико-химическими методами.
Постановка ПЦР осуществляется при помощи нескольких компонентов:
- Праймер. Это искусственно синтезированное соединение, в котором последовательность нуклеотидов полностью идентична конкретному участку РНК вируса, не подвергающегося мутациям и изменением в зависимости от генотипа. Определение РНК вируса гепатита С выполняется с использованием строго специфичного праймера.
- РНК-полимераза. Фермент, отличающийся устойчивостью и структурной стабильностью на фоне изменений температуры, необходимых для правильного протекания химической реакции. Обеспечивает построение цепочки РНК на одном из этапов ПЦР.
- Смесь протеинов. Для построения дополнительных участков РНК необходим «строительный материал», для чего к биологическому образцу добавляют определенные соединения белковой структуры.
- Буфер. Смесь, поддерживающая оптимальный уровень рН для обеспечения протекания полимеразной цепной реакции.
- Образец биологического материала, предположительно содержащий образец РНК HCV (Hepatitis C Virus).
При некоторых способах постановки ПЦР дополнительно используются РНК-зонды и другие внутренние контроли, используемые в качестве контрольных образцов при выявлении результатов.
Сам процесс увеличения участков вирусной РНК при помощи матрицы именуют амплификацией. Реакция протекает в несколько этапов:
- Денатурирование. Процесс «раскручивания» нитей РНК обеспечивается повышением температуры до определенного уровня.
- Отжиг. После снижения температуры до необходимых показателей происходит присоединение праймеров к РНК. Данная стадия возможна только при наличии в образце крови искомых вирусных частиц.
- Непосредственный синтез участков вирусной РНК с участием ферментов.
Перечисленные циклы постановки ПЦР повторяются несколько десятков раз, что обеспечивает многократное увеличение количества участков РНК возбудителя гепатита С уровня, определяемого лабораторными способами.
Перед проведением анализа образец забора крови соответствующим образом подготавливается. Содержащиеся РНК адсорбируются на буфере-носителе, затем смываются и используется для постановки полимеразной цепной реакции.
Детекция результатов проводится либо методом электрофореза (горизонтального или вертикального), либо способом гибридизации. Способ расшифровки результатов реакции выбирается исходя из целей проведения исследования (просто выявление РНК, либо определение ее ориентировочного количества).
Перечень предлагаемых исследований на HCV включает несколько пунктов, отличающихся по стоимости, срокам готовности и способу выполнения.
Если обратиться к протоколам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), порядок диагностики инфекции включает несколько последовательных этапов.
Для начала сдают:
- общий анализ крови и мочи;
- биохимия крови;
- исследование на содержание глюкозы (строго натощак);
- анализ на ВИЧ;
- флюорография;
- иммунограмма (при подозрении на наличие аутоиммунных патологий).
При отклонении показателей биохимического анализа крови от физиологической нормы пациенту назначают тест, основанный на обнаружении специфических антител, вырабатываемых при контакте вируса с кровью (ИФА).
Но подобный анализ крови на гепатит С имеет существенный недостаток. Процесс синтеза антител зависит от функционирования и выработки иммунокомпетентных клеток. Индивидуальные особенности организма могут стать причиной как ложноотрицательного, так и ложноположительного ответа.
Перед назначением теста ИФА врач рассказывает пациенту о возможной ошибке, что вызывает ответный вопрос: «Какой анализ крови показывает гепатит С с минимальным риском получения неверных результатов?» Для подтверждения или опровержения диагноза самым точным лабораторным тестом является проведение ПЦР методом real time.
Дальнейшая тактика действий зависит от того, что покажет исследование. В случае подтверждения диагноза, пациенту сразу же назначают гепатопротекторы, предупреждают о важности правильного питания и здорового образа жизни. Но таргетная терапия невозможна без определения уровня вирусной нагрузки и генотипа гепатита С.
Некоторые лекарственные препараты могут спровоцировать обострение гепатита В. Поэтому для исключения осложнений, дополнительно назначают анализы на HBsAg. HCV лечат только после получения отрицательного результата исследования.
При первичной диагностике гепатита С серологическим методом определяется титр вырабатываемых антител. Такой результат приблизительно показывает активность патологического процесса. Но максимально точную информацию доктор может получить только после изучения данных ПЦР.
В настоящее время практически во всех лабораториях анализ выполняют ультрачувствительным методом. Таким образом диагностика HCV возможно уже через 10–14 дней после заражения, реже – спустя 2,5–3 недели. В зависимости от целей, преследуемых в ходе исследования, доктор назначает конкретный тип теста.
Существуют следующие разновидности ПЦР:
- Качественный. При назначении диагностических тестов, у пациентов возникает вопрос, что показывает подобный метод исследования. Качественный анализ способом ПЦР – высокочувствительный тест, определяющий наличие РНК вируса в крови в минимальной концентрации. Обычно подобная разновидность полимеразной цепной реакции ставится по технологии обратной транскрипции. Это один из немногих способов ПЦР, в ходе которого в качестве мишени можно использовать РНК.
- Количественный. Количественный анализ на гепатит С позволяет определить точный уровень РНК HCV в крови. Проведение исследования возможно только одним способом – методом real-time. В ходе подготовки материала к постановке ПЦР в образец добавляют краситель. После каждого цикла амплификации проводится автоматизированное количественное исследование в режиме реального времени. Нередко методику проводят в сочетании с обратной транскрипцией. Таким образом возможно качественное определение малого количества копий РНК вируса. Устанавливать уровень РНК HCV количественно имеет смысл, если получен положительный результат качественной ПЦР.
- Генотипирование. Анализ сдается проводится на конечной стадии диагностического процесса. Принцип исследования построен на разнице в последовательности нуклеотидов, что отличает один генотип вируса гепатита С от другого. Обычно анализ делают методом мультипраймерной (мультиплексной) ПЦР.
При подозрении на носительство вируса, необходимо выполнить качественную ПЦР. Если результат отрицательный, человек скорее всего здоров. Но для полного исключения заражения рекомендуют повторить исследование через 7–10 дней. Если же РНК вируса обнаружена, проводят дальнейшие тесты (количественный и генотипирование).
Основным показанием к сдаче крови на гепатит С методом полимеразной цепной реакции является положительный результат иммуноферментного анализа (вне зависимости от разновидности: Total, дифференцированный тест на IgG и IgM).
Кроме того, провериться нужно:
- в период беременности (тест делают дважды – в первом триместре и за 7–10 недель до родов);
- при работе, связанной с повышенным риском инфицирования (медсестры, лаборанты, работники донорских центров, косметологи и т.д.);
- при беспорядочных половых связях и незащищенном контакте с малознакомым человеком;
- на фоне ВИЧ, онкологических заболеваний, приема определенных медикаментозных средств и т.д.;
- пациентам, зависимым от внутривенных наркотиков;
- при постоянном проведении инвазивных диагностических или лечебных процедур;
- при проведенном до 1992 года переливании крови (ранее не существовало достоверных способов проверки донорского биологического материала на наличие вируса).
- при соприкосновении открытой раны с чужой кровью, нестерилизованным медицинским инструментарием.
Рост заболеваемости растет с каждым годом. Поэтому для раннего выявления инфекции лабораторные тесты на HCV рекомендуют сдавать один раз в год.
При обращении в поликлинику, пациент имеет право на бесплатные анализы. Но сначала сдают тест ИФА. И только при положительном либо сомнительном результате показано исследование методом ПЦР. Поэтому провести срочную диагностику можно обратившись в платную лабораторию, где сдать кровь на ПЦР можно в удобное для пациента время. Одновременно рекомендуют сразу проверить показатели печеночных ферментов, стандартные клинические параметры крови.
Как правило, изучение крови методом ПЦР доступно практически в любой лаборатории. Если пункт забора крови не оснащен должным оборудованием, биологический материал транспортируют для проведения исследования с соблюдением температурного режима и других условий. Проведение ПЦР в поликлинике возможно только после других обследований, результаты которых косвенно укажут на наличие гепатита С.
Перед тем, как сдавать кровь на обнаружения возможного вируса, следует соблюсти ряд правил подготовки к анализу.
Основные аспекты указаны в памятке:
- За 5–7 дней отказаться от потребления жирной, жареной пищи, алкоголя. В целом, доктора рекомендуют придерживаться правил питания по диете №5.
- За 12–14 часов до проведения исследования не есть. Пить можно только воду.
- Сдать кровь лучше в первой половине дня.
- До процедуры не курить.
Также следует предупредить доктора о принимаемых лекарственных препаратах, возможных проблемах со здоровьем, хронических заболеваниях.
Забор крови выполняется из вены. После окончания процедуры место прокола медсестра заклеивает стерильным пластырем, предупреждает о необходимости согнуть руку и держать ее в таком положении 10–15 минут. В противном случае высока вероятность появления болезненной гематомы.
Сколько делается анализ, зависит от лаборатории. Средний срок выполнения колеблется в пределах 1–3 дней. Некоторые клиники предоставляют платную услугу быстрой постановки ПЦР, однако время проведения ограничивается возможностями медицинской аппаратуры.
В поликлинике результаты могут передаваться врачу в течение 7–10 дней. Это связывают с большим наплывом пациентов. При этом биологический материал хранится в соответствии со всеми требованиями.
Как правило, расшифровка качественной ПЦР не представляет сложности. Но во избежание ошибочной трактовки, с полученным из лаборатории бланком следует обратиться к врачу. Варианты, что означает та или иная разновидность ПЦР, приведены в таблице.
Вид исследования | Возможный результат и предполагаемая расшифровка | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Качественная ПЦР |
Вид ПЦР | Описание полученных значений |
Качественный | В бланке указывают «обнаружено» или «не обнаружено» |
Количественный | |
Генотипирование | Проводится, если обнаружено присутствие вируса в организме. В бланке показывают выявленный подтип HCV |
Расшифровкой результатов должен заниматься квалифицированный специалист. Так, иногда возникают ситуации, когда ИФА на гепатит С положительный, а ПЦР отрицательный. Подобное расхождение объясняют несколькими причинами. Это может быть ошибкой лаборатории, поэтому одно из исследований необходимо повторить спустя 2–3 недели.
Иногда такие результаты возникают вследствие скрыто перенесенной острой HCV-инфекции. ИФА определяет наличие антител, но по факту, РНК вируса в организме или отсутствует, или не выявляется из-за ничтожно малой концентрации. В любом случае пациент с подобными данными исследований нуждается в дальнейшем наблюдении и консультациях врача.
Качественный анализ ПЦР является относительно быстрым и наиболее точным методом первичной диагностики гепатита С. По результатам исследования можно определить, заражен человек или нет, а затем проводить более детальные лабораторные методы. Ложноотрицательный результат вероятен в первые 14–21 день после заражения, когда количества РНК вируса недостаточно, для выявления даже высокочувствительными тест-системами.
Ложноположительный результат возможен по вине сотрудников лаборатории. Иногда такие данные получают при беременности, активном течении онкологических и/или аутоиммунных заболеваний.
Чтобы исключить вероятность неправильной расшифровки, качественный анализ рекомендуют повторить через 3–4 недели.
Количественный анализ методом ПЦР на гепатит С обычно назначают для определения вирусемии в ходе противовирусной терапии. В норме, по мере приема лекарственных средств вирусологическая нагрузка постепенно снижается. Цель лечения – отрицательные или минимально допустимые показатели исследования.
Расшифровка результатов зависит от единиц измерения, используемых в лаборатории, поэтому обычно в бланке указывают полученные данные, референсные значения и описание отклонений от нормы.
Количественный анализ ПЦР необходим для оценки эффективности лечения, подбора схемы терапии (сочетание нескольких противовирусных препаратов), определения продолжительности приема медикаментов. Исследование периодически проводится и после окончания курса лечения для своевременного выявления рецидива.
Одно из основных исследований, которые проводятся на этапе диагностики и обязательно до начала терапии, так как генотип – главный фактор, влияющий на подбор лекарственных средств.
К настоящему моменту известно об 6 генотипах HCV (каждый имеет свои подтипы), но в России и странах Европы у подавляющего числа больных выявляют:
- 1b – один из самых неблагоприятных в плане прогноза, быстро переходит в хроническую форму, агрессивен по отношению к тканям печени, сложно поддается терапии;
- 4 – плохо «отвечает» на терапию, требует тщательного подбора схемы приема препаратов;
- 2а, 3а – успешное лечение отмечают в 70% случаев и чаще (при использовании современных противовирусных медикаментов).
Остальные генотипы диагностируют реже. В отличие от количественного анализа, генотипирование выполняют один раз и не повторяют в процессе лечения (исключение составляют устойчивые формы HCV, не поддающиеся терапии.
Несмотря на то, что ВОЗ рекомендует ИФА как основной метод выявления HCV-инфекции, исследование методом ПЦР имеет ряд «плюсов»:
- высокая точность;
- возможность первичной диагностики;
- оценка эффективности лечения по определению вирусологической нагрузки;
- точное установление генотипа вируса, что предопределяет тактику дальнейшего лечения;
- доступная стоимость.
Пункты забора крови для проведения исследования есть в любом городе, что дополнительно облегчает диагностику и делает сдачу анализов доступными для каждого пациента.
Стоимость анализа ПЦР на гепатит С зависит от ряда факторов:
- Ценовая политика лабораторного центра и его местонахождение (так, в Москве подобные услуги обходятся дороже).
- Разновидность исследования (цена на качественный, количественный анализ и генотипирование отличается).
- Сроки выполнения (ряд лабораторий предлагают доплатить определенную сумму за срочное получение результатов).
Узнать, сколько стоит ПЦР на гепатит С можно либо по телефону, либо на интернет-сайте лаборатории.
Средняя цена по России составляет:
- качественное определение РНК вируса – 700–1000 рублей и до 3000 рублей с использованием ультрачувствительных тест-систем;
- генотипирование – 1000–1200 рублей (в комплексе с количественным определением – до 4000 рублей);
- количественное определение вирусологической нагрузки – 2300–3000 рублей.
В поликлинике по месту жительства подобные исследования проводят бесплатно (при наличии полиса ОМС). Но лаборанту обязательно предъявляют направление от лечащего врача.
источник
Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.
Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.
Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.
Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.
Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.
Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.
Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:
- Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
- Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
- Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.
Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.
Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.
Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.
Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.
Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:
- Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
- Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
- Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
- Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
- Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
- При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
- Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
- Для контроля результативности проводимой терапии.
- После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.
ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.
Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:
- Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
- Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
- За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
- За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.
За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.
Забор крови происходит следующем образом:
- Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
- Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
- В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
- После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
- К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.
Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.
Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.
У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.
Плюсы исследования представлены в таблице:
Прямая диагностика возбудителя патологии | Другие исследования позволяют дать ответ – есть ли возбудитель в организме или нет. Но с помощью ПЦР методики можно конкретно установить вид вирусного агента. |
Специфичность исследования | ПЦР определяет уникальный фрагмент ДНК, который соответствует только одной разновидности вирусного агента. Это позволяет свести к минимуму вероятность ошибки. |
Высокая степень чувствительности | Можно выявить даже мизерную концентрацию вируса в крови. |
Определение всех возбудителей | Во время исследования можно обнаружить всех патогенных агентов. |
Скрыто протекающие инфекции | Кроме вирусного возбудителя можно выявить инфекции, которые имеют латентное течение, отличаются высокой антигенной активностью. |
Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.
Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.
Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.
В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.
Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.
Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.
Результат | Расшифровка |
Отрицательно | Это норма для здорового человека. Значит, в исследуемом биологическом материале нет РНК вирусного гепатита, либо содержание меньше порогов восприимчивости. |
До 1,8*10^2 МЕ/мл | Говорит о том, что содержание РНК меньше диапазона количественного определения. Интерпретировать такой результат надо осторожно, потому что он считается спорным. Дополнительно проводятся другие исследования для последующего сопоставления. Также проводят повторно ПЦР-тест. |
До 8*10^5 МЕ/мл | Низкая вирусная нагрузка. Как правило, такой результат значит, что проводимое лечение эффективно. |
От 8*10^5 МЕ/мл | Высокая вирусная нагрузка. Незамедлительно требуется терапия (если не проводится), либо необходима коррекция медикаментозных назначений. |
2,4*10^7 МЕ/мл | РНК больше верхнего максимума количественного определения. На фоне такого результата о вирусной нагрузке не судят. Требуется повторное исследование с разведением образца биологической жидкости. |
Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.
Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.
Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.
Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.
ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.
Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.
В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.
Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:
Название лабораторной службы | Ценовая политика |
Хеликс | · Стоимость забора биологического материала – 170 рублей. · Качественное + количественное исследование методом ПЦР – 3990 рублей. · Выявление антител вирусной болезни – 1500 рублей (срок 2-3 дня). · Проверка активности вируса перед началом курса терапии – 4090 рублей. |
Инвитро | · Количественное выявление РНК вируса гепатита C посредством ПЦР – 3140 рублей. · Забор биологического материала (венозной крови) – 199 рублей. · Оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени – 18 000 рублей. · Качественный ультрачувствительный тест – от 3000 рублей. · Проведение генотипирования – от 1250 рублей. |
Гемотест | · Цена количественного исследования 2200 рублей. · Качественная диагностика от 700 рублей. · Определение РНК возбудителя – от 4000 рублей. · Забор крови из вены около 150 рублей. |
Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.
источник