Анализ методом пцр для детей

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – наиболее информативный, точный и современный метод диагностики инфекционных заболеваний, позволяющий обнаружить возбудителя в организме пациента, даже если количество вредоносных клеток исчисляется единицами, и они пока не успели спровоцировать развитие болезни. Еще 25 лет назад врачи не могли даже мечтать о таких возможностях, а сегодня сдать анализ ПЦР можно в любой крупной лаборатории.

ПЦР-диагностика открыла перед людьми многие другие ценные перспективы – с помощью этой методики можно изучать генные мутации, устанавливать отцовство, вычислять риск развития онкологических заболеваний, оценивать возраст и происхождение археологических артефактов и даже доказывать вину преступников, обнаруживая их ДНК в уликах. Но сегодня мы обсудим именно медицинский аспект этого открытия и расскажем вам, какие заболевания можно диагностировать методом ПЦР, как сдавать анализ и что означают его результаты.

Любое живое существо на Земле, будь то человек, животное или микроб, имеет гены – носители наследственной информации, которые представляют собой участки ДНК или РНК с определенной последовательностью нуклеотидов, уникальной для каждого организма. ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота) образует длинные молекулы, состоящие из двух нитей, закрученных в спираль друг относительно друга, и эти нити собираются из нуклеотидов, как из бусинок.

Допустим, требуется увидеть, есть ли в биологическом материале пациента ДНК или РНК инфекционного возбудителя или ее фрагменты. Но как это сделать, если молекулы крошечные и их мало? Методика ПЦР дает ответ: можно искусственно размножить вредоносную ДНК или РНК в лабораторных условиях, чтобы без труда ее обнаружить и идентифицировать.

Суть полимеразной цепной реакции состоит в том, чтобы разъединить нити молекул и попытаться «подсадить» к их противоположным концам фрагменты ДНК или РНК возбудителей – если они подойдут, значит, это и есть искомый микроб. А добавленный в пробирку фермент под названием «ДНК-полимераза» запустит синтез новых копий нужных участков молекул, они многократно размножатся и станут заметны. Далее мы опишем простыми словами, как происходит этот удивительный процесс и для чего это необходимо.

Американский ученый Кэрри Муллис изобрел ПЦР в 1983 году, а спустя десять лет, в 1993 году, получил за свое открытие Нобелевскую премию по химии. Однако методика была несовершенной и требовала существенных доработок. На сегодняшний день существует уже более десятка видов ПЦР для разных диагностических целей.

Итак, мы знаем, что длинная молекула ДНК или РНК образована двумя цепочками нуклеотидов, всего их бывает пять типов:

Ген – это устойчивая, многократно повторяемая уникальная комбинация нуклеотидов, и в одном гене их может быть несколько десятков или даже сотен, но все они располагаются друг напротив друга в строгом соответствии с правилом комплементарности. Это означает, что напротив гуанина в одной нити может стоять только цитозин из другой нити, а напротив аденозина – только тимин, иначе молекула ДНК не сложится и не закрутится в спираль. При этом пары «А – Т», «Т – А», «Г – Ц» и «Ц – Г» могут сочетаться в любых комбинациях: повторяться несколько раз подряд или идти вразнобой.

Схематически это можно представить так:

У РНК вместо тимина есть урацил, и такие молекулы выступают носителями генетической информации у некоторых вирусов, называемых ретровирусами. Например, у вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

Вот это свойство – комплементарность – является ключевым для ПЦР-диагностики. Ведь чтобы началась амплификация (синтез дополнительных копий участков ДНК на родительской матрице), нужно чтобы «подсаженный» фрагмент ей подходил. Такой фрагмент называется праймером или попросту «затравкой» и содержит до тридцати нуклеотидов, расположенных в уникальной для каждого возбудителя последовательности. Праймеры для проведения ПЦР-анализов производятся отдельно и доставляются в лабораторию в готовом виде. На сегодняшний день в распоряжении врачей есть праймеры сотен различных бактерий, вирусов и простейших.

Чтобы процесс начался, необходимо соблюсти ряд условий: добавить нужные реагенты и создать особый температурный режим. Все это происходит в приборе под названием «амплификатор» или «термоциклер», который может обеспечить нагревание и охлаждение пробирок с точностью до 0,1°C. Современные модификации амплификаторов могут замораживать и хранить готовые материалы, а некоторые даже имеют встроенный флуоресцентный детектор для определения результатов анализа ПЦР в режиме реального времени, когда нужно вычислить вирусную нагрузку (об этом мы расскажем ниже).

Внутри амплификатора взятый у пациента биоматериал проходит несколько десятков циклов, каждый из которых состоит из трех стадий: денатурации, отжига и элонгации. Это самая интересная часть ПЦР-диагностики, давайте рассмотрим весь процесс в подробностях, а начнем с необходимых реагентов.

Стандартный набор выглядит так:

Биоматериал, предположительно содержащий ДНК возбудителя заболевания;

Праймеры, то есть два комплекта нуклеотидов, комплементарных противоположным концам цепочек нужного фрагмента ДНК;

ДНК-полимераза – термостабильный фермент, который выступает катализатором реакции амплификации. К этому ферменту очень серьезные требования: он должен сохранять активность при высокой температуре длительное время – несколько часов, пока повторяются циклы ПЦР. Поэтому для проведения анализа используются ферменты, выделенные из термофильных микроорганизмов: Thermus aquaticus (Taq-полимераза), Pyrococcus woesei (Pwo-полимераза), Thermus thermophilus (Tth-полимераза), Pyrococcus furiosus (Pfu-полимераза) и другие;

Mg2+, то есть ионы магния, двухвалентного металла, необходимого ДНК-полимеразе для эффективной работы;

dATP, dGTP, dCTP и dTTP, четыре дезоксирибонуклеозидтрифосфата, из которых будут строиться новые фрагменты цепочек ДНК;

Буферный раствор, позволяющий поддерживать оптимальные условия – в него входят некоторые соли и сывороточный белок альбумин.

Итак, реагенты помещены в пробирку, она установлена в амплификатор, что же происходит дальше? Запускается повторяющийся цикл из трех стадий, целью которых является амплификация ДНК инфекционных возбудителей, если таковые будут обнаружены в пробе.

Амплификатор нагревает пробирку до 94-98 °C и сохраняет такую температуру на протяжении 30 секунд – 2 минут, чтобы цепочки ДНК разошлись в стороны. Конкретное значение температуры и времени зависит от типа полимеразы и от того, какого именно микроба ищут. По-другому этот период называется стадией плавления. Большинство видов ПЦР-диагностики требуют прогрева пробирки перед первым циклом в течение 2-5 минут.

В игру вступают праймеры – один из них комплементарен первой нити развалившейся надвое цепочки ДНК, а другой подходит ко второй нити, причем, праймеры ограничивают начало и конец того участка молекулы, который необходимо достроить. Праймеры называют «затравкой», потому что фермент полимераза катализирует производство новых копий нужного фрагмента ДНК именно после соединения праймеров с родительской матрицей.

Чтобы это соединения произошло, амплификатор должен понизить температуру пробирки. Как правило, отжиг с праймерами производится при температуре на 5 °C ниже, чем нужно для их денатурации. Если установить слишком высокую температуру, праймеры будут плохо соединяться с матрицей, а если слишком низкую, они могут прикрепиться не в том месте, где нужно. Поэтому лучше показывают себя праймеры с температурой плавления выше 60 °C, ведь они позволяют проводить отжиг и элонгацию одновременно при 60-75 °C. Стадия отжига длится 30 секунд, и за этот короткий период полимераза уже успевает катализировать синтез двух-трех сотен новых нуклеотидов.

Происходит собственно амплификация, то есть размножение нужного участка вредоносной ДНК, если таковая обнаружена. В рамках одного цикла количество участков увеличивается вдвое, каждый последующий цикл опять приводит к двукратному увеличению их числа, то есть действует принцип геометрической прогрессии. А всего за время ПЦР-анализа проводится 30-50 циклов, что по времени занимает 2-3 часа.

Температура элонгации и длительность этой стадии зависит от того, какая полимераза используется и какова длина размножаемого участка ДНК. Например, для Taq и Pfu-полимеразы оптимальна температура 72 °C, при этом фермент произведет 1000 пар оснований за 1 минуту. По окончанию всех циклов ПЦР, как правило, запускают дополнительную, финальную стадию элонгации – она длится около 10 минут и позволяет достроить все оставшиеся участки ДНК.

Существует два способа определения итогов ПЦР-анализа: традиционный – электрофорез, когда в реакции задействуются обычные праймеры, а оценку результатов проводит человек, и более современный – сканирование в режиме реального времени, когда «затравки» меченые, а их свечение регистрирует прибор.

В первом случае все цепочки ДНК сортируются по размерам. У этого способа есть существенные недостатки: во-первых, лаборанту приходится открывать пробирки с материалом, следовательно, в них могут попасть посторонние фрагменты ДНК из соседних пробирок (контаминация ампликонами), и тогда результат анализа ПЦР будет ложноположительным. Во-вторых, оценку производит человек, что называется, «на глаз», поэтому достоверность полученных данных целиком зависит от внимательности и профессионализма специалиста.

В случае с ПЦР-диагностикой в режиме реального времени (Real-Time PCR) влияние человеческого фактора на итоги исследования минимально – пробирки помещаются в современный высокотехнологичный прибор и ни разу не открываются на протяжении всех циклов, включая анализ результатов, который тоже проводит умная машина. У этого способа только два очевидных недостатка – высокая стоимость и ограниченная доступность, поскольку амплификаторами нового поколения оснащена далеко не каждая лаборатория.

ПЦР-диагностика активно используется во многих отраслях клинической медицины:

Урогинекология и дерматовенерология. Это, пожалуй, самые заинтересованные в ПЦР врачебные направления. С помощью соответствующего анализа можно диагностировать любые заболевания, передающиеся половым путем: гонорею, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз, гарднереллез и т. д. Метод ПЦР позволяет обнаружить и вирусы, часто поражающие органы половой сферы человека – например, генитальный герпес или папилломовирус. А эти возбудители, как известно, обладают онкогенной активностью, то есть могут провоцировать развитие злокачественных опухолей (рака шейки матки у женщин, рака предстательной железы у мужчин);

Инфектология и эпидемиология. На втором (а возможно и на первом) месте по частоте использования ПЦР-диагностики находится инфекционная медицина, поскольку обсуждаемая методика позволяет диагностировать все распространенные заразные болезни, некоторые из которых несут смертельную угрозу здоровью людей и представляют эпидемиологическую опасность. Речь идет о ВИЧ, гепатитах, сифилисе, холере, бруцеллезе, токсоплазмозе, дифтерии, туляремии и прочих серьезных заболеваниях;

Донорство и трансплантология. ПЦР-диагностика позволяет службе крови оценивать качество донорского материала: выявлять опасных возбудителей и отсортировывать непригодный материал. А при пересадке органов очень важно оценить совместимость тканей донора и реципиента – тут на помощь тоже приходит методика ПЦР;

Генетика и репродуктология. С помощью специальных разновидностей ПЦР-анализа можно установить отцовство, просчитать риск возникновения опасных генных мутаций у предполагаемого потомства пары, обратившейся в центр планирования семьи, а также изучить взятый у беременной женщины биоматериал (например, амниотическую жидкость) с той же целью – вовремя обнаружить тяжелый порок развития плода;

Акушерство и неонатология. Современные родильные дома тоже часто используют ПЦР-диагностику, а некоторые даже имеют собственную лабораторию. Это нужно для того, чтобы максимально оперативно обследовать новорожденных малышей при подозрении на наличие у них внутриутробной или полученной во время родов инфекции: ВИЧ, сифилиса, хламидиоза, цитомегаловируса, мононуклеоза, краснухи и других;

Пульмонология и фтизиатрия. Метод ПЦР дает возможность специалистам этих врачебных направлений бороться с редкими, устойчивыми штаммами бактерий, вызывающих респираторные заболевания, например, атипичный хронический бронхит. В этом случае успех лечения целиком зависит от того, удастся ли точно идентифицировать возбудителя болезни и назначить адресную терапию. Кроме того, ПЦР-анализ позволяет проводить максимально раннюю диагностику туберкулеза;

Гастроэнтерология и аллергология. Врачи этих двух специальностей тоже крайне заинтересованы в методе ПЦР, поскольку он дает возможность обнаружить главную причину развития гастрита и язвы желудка – коварную бактерию Хеликобактер пилори, а также установить индивидуальную непереносимость продуктов питания у конкретного человека. Существуют врожденные особенности работы пищеварительного тракта, не позволяющие правильно перерабатывать и усваивать некоторые компоненты пищи, например, глютен или лактозу. Эти особенности наследуются генетически, следовательно, могут быть обнаружены методом ПЦР. Кстати, если у кого-то из родителей есть аллергия на определенный продукт (орехи, грибы, цитрусовые), то велика вероятность того, что у ребенка возникнет такая же проблема;

Онкология. Специалисты этого серьезнейшего направления медицины используют ПЦР-диагностику для оценки риска развития злокачественных опухолей у пациента, поскольку те клетки человеческого тела, которые подвергаются мутации и начинают бесконтрольно делиться, меняют структуру своей ДНК и начинают отличаться от здоровых клеток. Необходимо взять пункцию или биопсию подозрительных тканей и изучить материал методом ПЦР, чтобы установить масштабы угрозы.

А вот лишь неполный список тех вредоносных микроорганизмов, которые можно обнаружить с помощью ПЦР-анализа:

Обширное семейство герпес-вирусов, в том числе цитомегаловирус, варицелла-зостер, вирус Эпштейна-Барра и другие;

источник

Среди современных методов диагностики одним из наиболее точных и информативных считается мазок на ПЦР. Преимуществом метода полимеразной цепной реакции является возможность использования любого биологического материала. Чаще всего соскоб для лабораторного исследования берут из половых органов мужчин и женщин с целью обнаружения и профилактики инфекций, передающихся половым путем.

Метод ПЦР применяется не только в медицине. Его используют в археологии, генетике, криминалистике. Разработчиком этого вида диагностики является американский химик Кэри Мюллис – лауреат Нобелевской премии. Кстати, самую престижную международную награду он получил за открытие метода ПЦР.

Благодаря полимеразной цепной реакции у ученых появилась возможность определять сходство ДНК, устанавливать отцовство и родственные связи. И все же основным предназначением мазка методом ПЦР принято считать диагностику инфекционных заболеваний у человека.

Полимеразная цепная реакция представляет собой высокоточный способ молекулярно-генетического исследования, проведение которого позволяет выявлять вирусные, генетические и наследственные патологии. Преимущество данной методики заключается в возможности определения болезнетворных агентов не только на острой или хронической стадии заболевания, но и в инкубационный период, то есть до того, как проявятся первые симптомы патологии.

Мазок на ПЦР никогда не дает ложноположительного ответа. Этим и отличается данный метод диагностики от других. Если инфекции в организме нет, пациент не получит положительный результат – в этом можно не сомневаться. Сегодня анализ на полимеразную цепную реакцию сдают с целью определить тип возбудителя и его количество.

Ни один из методов исследования не способен найти возбудителя непосредственно в гене, содержащемся в исследуемых материалах. ПЦР – это максимально точный и достоверный анализ на венерические заболевания и латентные вирусы в организме. В отличие от иных способов диагностики, анализ полимерной цепной реакции имеет ряд преимуществ:

он нацелен на обнаружение возбудителя инфекции;
является универсальным, поскольку позволяет выявлять сразу несколько типов инфекционных агентов;
при этом достаточно использования только одного биологического образца пациента;
обладает сверхчувствительностью, за счет чего вероятность возможных перекрестных реакций равняется нулю.

В сравнении с методом бактериологического посева, мазок на ПЦР считается самым надежным и быстрым диагностическим способом. Сама процедура лабораторной диагностики не занимает более четырех часов. Для получения результата бакпосева требуется не менее семи дней. Суть этого метода состоит в следующем: образец биоматериала помещают в благоприятную среду и наблюдают за активностью возбудителей, если таковые обнаруживаются, на протяжении всего периода исследования.

Анализ мазка на ПЦР способен раскрыть любое количество инфекционных возбудителей в организме, включая «скрытые» вирусы, не проявляющие себя никакой симптоматикой в течение длительного времени. Этот диагностический метод применяют тогда, когда необходимо подтвердить или опровергнуть наличие у пациента:

вирусного гепатита;
уреаплазмоза;
хламидиоза половых путей;
вируса папилломы человека;
герпеса;
злокачественных клеток;
микоплазмоза;
вагиноза;
мононуклеоза;
трихомониаза;
ВИЧ-инфекции.

В качестве исследуемого материала для анализа на ПЦР используют кровь, слюну, мокроту, мочу. Перед процедурой взятия соскоба пациенту необходимо подготовиться к нему. О том, как подготовиться перед анализом ПЦР-мазка, пациенту сообщит лечащий врач. Как правило, специалисты проводят с больными соответствующую консультацию. Например, кровь сдают натощак, а непосредственно перед соскобом шейки матки нежелательно проводить гигиенические процедуры.

Материалом для ПЦР-анализа могут быть практически любые биологические жидкости человека. Чужеродные ДНК болезнетворных микроорганизмов способны проникать в любую среду. Чаще всего в качестве образца для исследований применяется кровь и ее отдельные компоненты (плазма или сыворотка). В жидкой ткани могут присутствовать РНК вирусного гепатита, простого герпеса, цитомегаловируса, ВИЧ.

Широкие показания к исследованию имеют биологические жидкости. К ним относятся:

сок простаты;
сперма;
вагинальный секрет;
спинномозговая (ликвор);
амниотическая;
бронхоальвеолярный лаваж;
суставная жидкость;
слюна.

Для диагностики венерических заболеваний типа гонореи, хламидиоза, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомониаза, гарднереллеза, герпетических форм и др., у пациентов берут эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. У мужчин берут мазок ПЦР из уретры, а у женщин – из влагалища или шейки матки.

Отдельная категория – биоптаты. Чаще всего биоптаты исследуют с целью определения природы новообразования, подтверждения его злокачественности. Биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки требуются для выявления бактерии Хеликобактер пилори и ее количественной нагрузки.

Моча как биоматериал используется при инфекционных поражениях мочевыделительной системы. У мужчин мазок ПЦР нередко заменяют исследованием мочи, поскольку уретра у представителей сильного пола является универсальным элементом мочеполового тракта.

Для диагностики туберкулеза и обструктивных болезней легких исследуется мокрота. Материал могут собирать в стерильный флакон (15-20 мл) или брать мазок из зева. ПЦР-анализ также используют для выявления осложненных форм микоплазмоза и хламидиоза – при отсутствии лечения и других неблагоприятных факторов данные виды инфекции способны поражать респираторную систему человека.

Способ подготовки зависит от того, какой именно биоматериал необходимо сдать на исследование:

Если для анализа требуется образец слюны, то процедуру проводят натощак. За несколько часов до исследования нельзя принимать лекарственные препараты. Кроме того, нежелательно пить много жидкости, тем более горячей, чтобы не нарушить естественный состав микрофлоры ротовой полости.
Мочу для ПЦР необходимо собирать с утра. Для этого необходимо подготовить стерильный контейнер и тщательно подмыться. Материал не должен содержать посторонних примесей, поэтому мужчинам во время мочеиспускания необходимо оттянуть крайнюю плоть, а женщинам – закрыть влагалище ватным тампоном.
За три дня до сдачи спермы мужчине необходимо отказаться от сексуальных контактов. В период подготовки нежелательно посещать баню, принимать горячую ванну, употреблять алкоголь, острые блюда. Перед сбором биоматериала нельзя мочиться, поэтому за сутки до анализа желательно ограничить потребление жидкости.
Кровь, как уже было отмечено, сдавать нужно с утра, натощак. За 2-3 дня до анализа желательно отказаться от жирной пищи, алкоголя и сильнодействующих медикаментов.

При подозрении на то или иное заболевание, передающееся половым путем, врач может назначить женщине мазок на ПЦР. В лабораториях, которые относятся к бюджетным поликлиникам, такие анализы обычно не делают. Прежде чем выбирать место для исследования, необходимо убедиться, что там проводят необходимую диагностику.

Большинство из тех заболеваний, которые передаются половым путем, могут не проявлять себя в течение нескольких месяцев, поэтому отсутствие симптомов не является гарантией того, что девушка не заражена. Будучи носителем инфекции и не догадываясь о болезни, женщина может не только заразить партнера, но и упустить время для успешного лечения. Венерические заболевания могут приводить к бесплодию, воспалению органов малого таза и прочим осложнениям.

Мазок ПЦР на инфекцию назначается женщине в том случае, если имел место контакт с малознакомым партнером. Если венерический статус последнего неизвестен, значит, присутствует риск инфицирования. Сдача мазка на ПЦР целесообразна в случае, если:

женщина сомневается в «чистоте» своего нового партнера, так как во время полового акта не использовался презерватив;
в течение года у женщины было несколько половых партнеров;
у пациентки ранее было выявлено венерическое заболевание;
наступила беременность.

Обследование на половые инфекции является обязательным для будущих матерей, поскольку некоторые из них, даже если протекают скрыто и не дают о себе знать, могут нести серьезную опасность жизни и здоровью плода.

Соскоб у женщин берет врач-гинеколог. Сама процедура взятия соскоба на полимеразную цепную реакцию ничем не отличается от обычного гинекологического исследования на влагалищную флору. Процедура взятия мазка ПЦР на хламидии, трихомониаз, вирус папилломы человека, гонорею и другие половые инфекции происходит по стандартной схеме:

Пациентка подготавливается к процедуре и занимает место на гинекологическом кресле.
Для сбора материала гинеколог надевает одноразовые стерильные перчатки и производит осмотр наружных половых органов.
Далее во влагалище женщины вводят специальный расширитель, который позволяет с помощью зеркала осмотреть внутренний эпителий.
Для забора биоматериала используется специальная щетка, которая не обладает впитывающими свойствами и не способна повредить слизистые оболочки. С ее помощью берут соскоб с цервикального канала, стенок влагалища. Обыкновенная ватная палочка для этой цели не подходит.
Использованный медицинский прибор, содержащий вагинальный секрет, вставляют в пробирку, закрывают и отправляют в лабораторию.

Процедура взятия соскоба обычно безболезненна, но иногда пациентки испытывают неприятные ощущения из-за контакта чувствительной слизистой с гинекологическими инструментами. Боль в процессе забора биоматериала может свидетельствовать о протекающем воспалительном процессе.

Вступать в интимную связь перед процедурой нельзя – после последнего контакта должно пройти не менее двух суток.
Если женщина проходит лечение антибиотиками или применяет вагинальные суппозитории, за три недели до взятия мазка ПЦР курс терапии необходимо завершить. В противном случае результат анализа может оказаться ложным.
Во время менструации мазок не берут.
Непосредственно перед забором биоматериала нельзя спринцеваться или использовать антибактериальное мыло.
Перед процедурой нельзя посещать туалет, последний раз помочиться можно за три часа до процедуры.

Как уже было сказано, мазок ПЦР у мужчин берут из мочеиспускательного канала. Чтобы получить необходимый биоматериал, врач-уролог использует специальный тонкий зонд и вводит его на глубину 3-4 см. Процесс взятия мазка ПЦР на уреаплазму, гонорею и другие распространенные возбудители может принести боль и значительный дискомфорт. Но придется потерпеть. Нередко у мужчин мазок на ПЦР вызывает жжение и зуд, поэтому перед введением зонда с целью уменьшить дискомфортные ощущения пациентам рекомендуют массажировать уретру. Поэтапно процедура взятия соскоба выглядит так:

Мужчина освобождает половые органы от одежды.
Прежде чем вводить зонд в уретру, врач надевает одноразовые перчатки и осуществляет визуальный осмотр кожных покровов, слизистых оболочек на предмет высыпаний.
Затем с помощью инструмента уролог берет мазок методом ПЦР из мочеиспускательного канала. Зонд вводится на 3-4 см в глубину уретры и несколько раз прокручивается.
После извлечения зонда врач делает мазок на предметном стекле, которое впоследствии и отправит в лабораторию.

Помимо болезненных ощущений, процедура взятия соскоба вызывает у мужчин психологический дискомфорт. У тех, кто посещает уролога регулярно, подобных проблем не возникает. Кроме того, имеет значение правильная подготовка к мазку ПЦР. Она заключается в соблюдении следующих условий:

За несколько дней до анализа мужчине нужно отказаться от интимных связей.
Мазок берут в утренние часы.
Перед процедурой мужчине не нужно проводить гигиену половых органов, лучше всего принять душ с вечера.
За три часа до взятия образца биоматериала нельзя посещать туалет.

Так же, как и у женщин, сильнодействующие препараты могут исказить результат анализа на полимеразную цепную реакцию.

В принципе для того, чтобы разобраться в результатах лабораторного исследования на полимеразную цепную реакцию, не нужно обладать медицинским образованием. Расшифровать заключение экспертов достаточно просто. В ответах, которые выдают пациенту на руки, содержится информация о типе инфекции. Если возбудитель обнаружен, в заключении будет отмечен положительный результат. Он свидетельствует о наличии в организме исследуемого человека ДНК или РНК вируса.

Для эффективного лечения некоторых заболеваний необходимо иметь точные данные о количественной нагрузке, которая означает присутствие РНК-копий возбудителя на 1 мл крови. В большей степени определение количественной нагрузки важно при болезнях, спровоцированных условно-патогенной микрофлорой, поскольку инфекционные агенты активизируются и негативно воздействуют на организм человека только в том случае, если их количество превышает установленные пороги. Такой анализ ПЦР имеет особое значение для составления плана лечения и наблюдением за динамикой пациентов, инфицированных вирусным гепатитом или ВИЧ-инфекцией.

Исследования на ПЦР отличаются максимальной точностью, специфичностью и чувствительностью. Мазок на полимеразную цепную реакцию позволяет узнать, есть ли в организме обследуемого конкретный тип инфекции, определить ее штамм и количество РНК-копий. Метод ПЦР позволяет выявлять возбудителя даже при минимальном содержании ДНК вируса в представленных образцах биоматериала.

Сроки выполнения анализа во многом зависят от того, какой из существующих методов полимеразной цепной реакции применяется в конкретной лаборатории. Самым простым способом изучения биологического материала считается микроскопический. Обычно этот метод исследования не занимает много времени. За срочность пациентам приходится платить дополнительно, но если по каким-либо причинам есть необходимость в проведении экстренного исследования, результаты могут выдать пациенту на руки спустя час. Быстрее всего ответы анализов получают те, кто обращается в специализированные медучреждения, оснащенные собственной лабораторией. Иначе необходимо учитывать время, которое будет потрачено на доставку биоматериала.

Конечная стоимость анализа будет зависеть от того, на какую инфекцию необходимо проверить пациента. В Москве на лабораторные исследования методом ПЦР установлены такие цены:

заболевания, передающиеся половым путем – анализ выполняется в среднем за 1-2 дня, стоимость составляет 300-500 руб. (за обнаружение одного возбудителя);
такие же сроки и цены установлены на диагностику методом ПЦР вируса Эпштейна-Барра, папилломы человека, герпеса, цитомегаловирусной инфекции;
обследование на гепатит A, B, C, D, G обойдется пациенту в 650-800 руб., за уточнение количественной нагрузки придется заплатить еще 2000 руб. (на выполнение исследования потребуется 4-5 дней);
подтверждение наличия в желудочном или кишечном биоптате бактерии Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) – 400-600 руб.;
антитела и антигены ВИЧ— 400-500 руб.;
количество РНК ВИЧ в образцах крови – более 10 тыс. руб.

С целью экономии врачи рекомендуют выбирать пакеты анализов — такие исследования обходятся дешевле. Услуги со скидками предоставляются в большинстве сетевых клиник, где делают анализы по методу ПЦР («СМ-Клиника», «Инвитро», «ОН-Клиник») и многопрофильных медцентрах.

Если в мазке обнаружились патогенные возбудители, не нужно отчаиваться. Главное – это как можно скорее начать терапию. Сегодня существует немало препаратов, благодаря которым даже пациенты с неизлечимыми болезнями имеют все шансы на высокое качество и нормальную продолжительность жизни. Выбор тактики лечения должен осуществлять врач. Самолечение при инфекционных заболеваниях недопустимо.

источник

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
термостабильная ДНК-полимераза;
дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
буферный раствор.

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 — 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 — 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 — 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 — 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 — 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 — 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 — 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой — позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. — 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы — М.: Наука, 2005 — В 2 т. — ISBN 5-02-033278-X
http://ru.wikipedia.org/wiki

источник

Тем, кто интересуется новыми способами диагностики, следует узнать, что такое метод ПЦР. Современные технические возможности в области лабораторных исследований предоставляют возможность выявлять множество заболеваний на начальных стадиях. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) считается на данный момент самым точным и новым методом.

ПЦР анализ — что это такое? Это метод использует принципы молекулярной биологии. Для исследования материала применяются особые ферменты, которые многократно и быстро копируют ДНК, РНК фрагменты возбудителей болезни. Существует разные виды ПЦР анализа в зависимости от исследуемого материала (кровь, моча, кал и т.д.). После обработки сотрудники лаборатории сравнивают с базой данных полученный результат, выявляют концентрацию, тип возбудителя.

Анализ на ПЦР помещают в специальный амплификатор (прибор), который нагревает и охлаждает пробирки с биоматериалом. Изменения температуры нужны для репликации фрагментов. Точность результата будет зависеть от точности температурного режима. Метод полимеразной цепной реакции помогает выявить:

инфекционный мононуклеоз;
ВИЧ;
цитомегаловирусную инфекцию;
вирусные гепатиты G, C, B, A;
инфекции/заболевания, передающиеся половым путем (ИППП/ЗППП): гарднереллез, трихомониаз, уреаплазмоз;
герпетическую инфекцию;
онкогенные вирусы;
листериоз;
хеликобактерную инфекцию;
клещевой энцефалит, боррелиоз;
туберкулез;
кандидоз.

На данный момент из-за новизны технологии анализ крови методом ПЦР все еще имеет высокую цену. Для подготовки биоматериала не нужно соблюдать определенные требования. Даже вызванные физическими нагрузками, стрессами, сменой рациона питания изменения состава не влияют на результат исследования. ПЦР анализ крови может испортить только прием антибактериальных средств, поэтому перед сдачей необходимо выдержать паузу между лечением и тестом.

ПЦР исследование крови – самый распространенный вариант диагностики хронических, острых инфекционных патологий при вирусном или атипичном проявлении. Серологические методы исследования имеют определенную трудность при проведении – определение наличия возбудителя проводится по наличию антител в организме человека. Результат мог быть ложноотрицательным, если состояние больного не давало время для их выработки.

В сфере гинекологии для исследования наличия инфекционных микроорганизмов используют ПЦР анализ мазка. Работа с материалом проводится по тому же принципу, что и с кровью: многократное увеличение фрагментов ДНК возбудителя, чтобы с легкостью его идентифицировать. Это же помогает обнаружить скрытые инфекции у женщины. Для проведения анализа могут быть взяты разные биологические жидкости: слюна, мокрота, моча, кровь. В гинекологии для точности определения чаще используется мазок со слизистой влагалища из цервикального канала.

Для проведения ПЦР существуют определенные показания. Нередко его нужно сделать, чтобы выявить устойчивый к антибиотикам вид возбудителя. У женщин основными показаниями для диагностики по этому методу выступают:

беременность, которая протекает тяжело;
острая фаза ИППП;
если есть подозрение на переход ИППП в хроническую стадию;
поиск причин бесплодия.

Для выявления инфекции может быть назначен со стороны врача анализ кала на ПЦР. Для того, чтобы получить максимально достоверные результаты после теста, необходимо придерживаться следующих правил перед забором биоматериала:

за несколько суток прекратить прием слабительных препаратов: масла, свечи;
исключить медикаменты, которые дают специфическую окраску калу, к примеру, с содержанием железа.

Для забора следует использовать стерильную палочку и контейнер. Чем-либо их дополнительно протирать, ополаскивать не нужно. При сборе материала будьте осторожны, вы не должны задеть рукой внутренние стенки контейнера. Следите, чтобы в кале не было примесей мочи, нельзя использовать дополнительные вспомогательные средства для испражнения (клизма). Собирать материал нужно в день сдачи, хватит 1/3 объема контейнера. Данный метод диагностики имеет следующие преимущества:

Анализ способен указывать на ДНК паразита, другие же тесты могут определять только остатки их жизнедеятельности.
Высокая точность, будет установлен возбудитель.
Ультрачувствительный анализ, который способен выявить даже одну клетку вируса.
Результат исследования ПЦР будет готов через 4-5 часов.

При необходимости для проведения теста врач может взять для исследования мочу. Высокая точность открывает возможность работать с любой биологической жидкостью, из которой удается извлечь ДНК вируса. Чтобы сдать анализ мочи ПЦР, нужно придерживаться таких ограничений перед забором материала:

минимум за 1 день до процедуры прекратить половые контакты;
за 3 недели до сдачи должно быть окончено любое антибактериальное лечение, потому что медикаменты смажут картину;
сдавать анализ нужно натощак (жидкость тоже запрещена);
брать нужно первую утреннюю порцию материала.

Из вышенаписанного понятно, что такое ПЦР анализ и видны явные преимущества такого метода исследования. Еще один плюс данной диагностической процедуры – простота расшифровки результатов. Учитывая, сколько делается анализ ПЦР (сам процесс занимает около 5 часов, но лаборатория выдает данные через 1-2 суток), данный метод диагностики становится лучшим вариантом для определения множества инфекций. По результатам врач может сказать вам, что тест:

Отрицательный – в исследуемом материале не было искомого возбудителя.
Положительный – были найдены РНК, ДНК возбудителя.

Иногда проводится количественное определение микроорганизмов. Это необходимо при заболеваниях, которые вызывают условно-патогенные возбудители. Особенность этих вирусов в том, что проявляются они только при избыточном количестве и найти их обычными исследованиями крайне проблематично. Этот фактор важен для выбора терапевтической тактики, чтобы эффективно лечить вирусные инфекции, к примеру, гепатит, ВИЧ.

Чтобы понять до конца, что такое ПЦР диагностика инфекций и насколько она эффективна, нужно узнать, что она способна выделять до 12 возбудителей. Проводится текст только в лабораторных условиях. Для исследования применяют специальные ферменты, которые увеличивают во много раз количество РНК, ДНК фрагментов вируса. Анализ ПЦР на 12 инфекций способен выявить:

микобактерии туберкулеза;
ВИЧ;
цитомегаловирус;
гепатит C, G, B, A;
герпес 1, 2 типа;
вирус Эпштейн-Барра (инфекционный мононуклеоз);
инфекции, которые передаются половы путем, к примеру, хламидии;
листериоз;
ВПЧ;
кандидозную инфекцию;
хеликобактер пилори;
боррелиоз, клещевой энцефалит.

Этот диагностический метод помогает определить наличие вируса в крови. Это дает врачам возможность говорить о его наличии или отсутствии. Анализ ПЦР на гепатит С бывает двух видов: качественный и количественный. Первый вариант указывает только на его наличие и может иметь формулировку «обнаружен»/«не обнаружен». Этот вид теста имеет чувствительно в 10-500 МЕ/мл. Это говорит о том, что при низком содержании возбудителя в организме анализ будет «не обнаружено».

Количественный анализ более точный и покажет концентрацию инфекции в крови. Обозначается этот показатель как «вирусная нагрузка», измеряется в количестве вирусной РНК на конкретный объем крови. Расшифровка в разных лабораториях может отличаться. Помимо измерения в МЕ/мл используются единицы измерения «копии». Пересчитать копии на МЕ можно по формуле: 1 МЕ = 4 копии. Если в расшифровке значение присутствие вируса превышает 800 000 МЕ/мл (или 800*103), это говорит о высоком содержании возбудителя.

Делать тест следует в утреннее время. Это важно для того, чтобы не дать всему массиву мокроты, который образовался за ночь, выйти из желудка. Анализ ПЦР на туберкулез так же важен как ИФА, Манту, томографе. Тест помогает выделить наличие микобактерий, состояние мочи, общий иммуноглобулин, СОЭ, определить состояние легких на данный момент. Для точности получения результатов при анализе ПЦР необходимо проводить его с соблюдением следующих правил:

Осуществляется посев 3 раза, но полную аспирацию содержимого желудка следует проводить только в условиях стационара.
Выявляет микобактерии посев наличествующих масс в желудке менее чем в 50% диагнозов. Даже при получении оптимальных условий рекомендуется вместо них УЗИ.
Даже при отрицательном характере результата не может быть полностью исключена вероятность развития туберкулеза с изменением СОЭ, иммуноглобулина или других показателей.
Посев материалов при ПЦР менее восприимчив на патологические состояния, если получен он в рамках бронхоскопического обследования, который исключает подозрения на ТБ у ребенка.

Для многих людей данный диагноз считается смертельным приговором. По этой причине после частых половых связей человек становится более внимателен к сигналам, которые подает его тело (а иногда придумывает их). Самый надежный вариант получить подтверждение или опровержение данного заболевания – ПЦР анализ на ВИЧ. Тест можно использовать для определения следующих возможных проблем со здоровьем:

Опровержение/подтверждение наличия ВИЧ в период серонегативного кона.
Определение генотипа ВИЧ-1, ВИЧ-2.
Уточнение описания патологического процесса при сомнительном результате иммуноблота.
Заражение после переливания крови.
Определения ВИЧ-статуса у детей, которые родились от матерей-носителей заболевания.
Помогает установить наблюдение за вирусной загруженностью организма.

Вирус папилломы может быть выявлен у любого человека, долгое время он может находиться в латентном состоянии. Развитие провоцирует ослабление иммунитет, стрессы или эмоциональные всплески. Анализ ПЦР на ВПЧ помогает определить концентрацию вируса в крови. По этой причине рекомендуется проводить количественно определение, а не качественное. Эти данные помогут спрогнозировать вероятность развития злокачественного характера инфекции.

Методика диагностики наличия ВПЧ основывается на основном свойстве ПЦР выделять из материала ДНК вируса. Из-за высокой чувствительности теста даже небольшое количество бактерий будет обнаружено. Количественное исследование открывает врачам возможность установить степень опасности заболевания, составить прогноз на будущее. Эта диагностика обязательна для всех мужчин и женщин, которые обнаружили у себя кондиломы. Количественный анализ ПЦР поможет определить, что послужило причиной развития ВПЧ: временное снижение иммунитета или хроническое заболевание.

Данный вид диагностики в микробиологии помогает с высокой точностью проводить анализ ПЦР на герпес. Копирование фрагментов ДНК вируса будет происходить только, если в материале присутствует нужный ген. В данном случае тест по результатам проведения может указать на наличие или отсутствие возбудителя. Выявить его удастся даже при низкой концентрации в крови.

Еще один плюс анализа ПЦР в том, что он может определить герпетическую вирусную инфекцию сразу же после заражения, до появления клинической симптоматики. Можно определить тип герпеса (1 или 2), для сдачи анализа специфической подготовки не требуется, но врачи рекомендуют перед забором крови отказаться от:

При вынашивании ребенка очень важно провести данное исследования, чтобы поставить на учет состояние женщины. ПЦР анализ при беременности входит в перечень самых эффективных методов определения наличия разнообразных заболеваний. Провести тест нужно не только для выявления патологий, но и для определения вероятности заражения ребенка внутриутробно. Только благодаря ПЦР-диагностики стало возможным выявить степень прогрессирования, развитие множества инфекций внутри утробы матери.

Если вам интересно, как берут анализ ПЦР, то следует рассматривать каждый отдельный случай, учитывая тип биоматериала. Соскоб, мазок или забор крови имеет свои особенности, к примеру:

плазма сдается утром;
моча берется только первая утром, в лабораторных условиях в стерильный контейнер;
мазок или соскоб будет показателен только после воздержания от половых контактов не менее 3 суток;
нельзя сдавать мазок во время менструации и через 2 суток после нее.

Данный вид исследования относится к современным и высокотехнологическим способам диагностики. Сдавать анализы методом ПЦР следует в лабораториях, которые обладают всем необходимым комплексом для получения полноценных результатов. Не меньшую роль играют квалифицированные, подготовленные кадры. Отдайте предпочтение крупными, серьезным, известным лабораториям. Это поможет не только получить результаты быстро, но и обеспечит их достоверность.

Еще один вопрос, который часто интересует пациентов: сколько стоит анализ ПЦР? Из-за новизны метода, необходимости приобретения дорогостоящего оборудования цена на тест относительно высокая. На стоимость ПЦР влияет вид инфекции, на которую будут проверять человека. Ориентировочная цена и сроки выполнения тестов следующая:

ИППП проверят за 1 день, цена – 400-500 рублей.
Герпес, ВПЧ, вирус Эпштейна-Барра, цитомегловирус выявляют за сутки, цена – 300-500 р.
Анализ на гепатит проводится за 5 дней, цена на качественный вариант – 500 р., количественный – 2000 р.
Хеликобактер пилори выявляют за сутки, цена – 400 р.
Антигены, антитела ВИЧ, цена – от 380 р.
Качественный анализ РНК ВИЧ, цена – от 3 500 р.
Количественный анализ РНК ВИЧ, цена – от 11 000 р.

источник

Полимеразную цепную реакцию (Polymerase chain reaction, ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году американский биохимик Кэри Б. Мюллис. В 1993 году за это открытие он был удостоен Нобелевской премии.

Сегодня области применения ПЦР как современного метода молекулярной биологии чрезвычайно широки. Особое место диагностика ПЦР занимает в медицинской практике. И причина этому достаточно проста: полимеразная цепная реакция делает невозможное возможным.

Часто диагностику ПЦР образно описывают как метод, с помощью которого можно находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл. «Иглой» является крошечный фрагмент генетического материала клеток (ДНК или РНК).

Таким образом, открытие этого метода — одно из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние десятилетия. Развитие метода ПЦР позволило медицинской диагностике в целом подняться на качественно новый уровень.

Основа метода — многократное избирательное копирование (амплификация) определённого участка ДНК с целью получения такого количества генетического материала, которого будет достаточно для визуальной детекции. При этом многократно копируется (амплифицируется) только заданный участок ДНК при условии, что он присутствует в исследуемом биоматериале.

Кроме того, исследование помимо простого увеличения количества копий участков ДНК позволяет проводить другие манипуляции с генетическим материалом. Поэтому метод широко применяется в научных исследованиях, биологической и медицинской практике: в диагностике инфекционных и наследственных заболеваний, при выявлении мутаций, генотипировании, установлении отцовства, идентификация личности и др.

Сегодня ПЦР-диагностика инфекций — один из самых точных, чувствительных и эффективных клинических лабораторных методов. Причём спектр выявляемых возбудителей практически неограничен – была бы разработана тест-система для ПЦР-анализа искомого возбудителя.

Благодаря своей высокой чувствительности, ПЦР позволяет выявить возбудителя даже при его минимальном содержании (то есть в исследуемом биоматериале присутствуют всего несколько молекул его ДНК).

ПЦР выявляет возбудителей инфекционных заболеваний тогда, когда это невозможно сделать другими методами (иммунологическими, культуральными, микроскопическими). Поэтому для целого ряда возбудителей инфекций метод полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом», он проверен временем и апробирован клинически. В современной лабораторной диагностике инфекционных болезней ПЦР — самый чувствительный и специфичный метод прямого обнаружения возбудителей. Это позволяет не только установить этиологию заболевания, но и контролировать течение инфекционного процесса и оценивать эффективность проводимого лечения.

Анализ на ИППП методом ПЦР особенно актуальны при бессимптомном течении инфекционного процесса, вызванного безусловно-патогенными микроорганизмами (Хламидия , качественное определение ДНК; Микоплазма, качественное определение ДНК; Возбудитель гонореи, качественное определение ДНК; Возбудитель трихомоноза, качественное определение ДНК). Например, при хронической гонорее у женщин даже с помощью бактериологического метода часто не удается выявить гонококк, несмотря на имеющиеся симптомы хронического воспалительного процесса в шейке матки или уретре.

Современная ПЦР-диагностика позволяет не только выявить генетический материал возбудителей инфекций, но и определить концентрации их ДНК/РНК (количественный формат исследования). Определение количества возбудителей имеет важное значение в решении вопроса о назначении лечения, особенно если выявлены условно-патогенные микроорганизмы (Микоплазма, количественное определение ДНК; Типирование уреаплазмы, количественное определение ДНК) .

Одним из основных направлений развития метода ПЦР является разработанный в CMD формат «Мультипрайм», позволяющий выявить в одной пробирке (и одной реакции) нескольких патогенов.

В настоящее время известно как минимум 5 вирусов, способность которых вызывать поражение печени доказана. Это возбудители гепатита А, В, С, D, Е. В редких случаях гепатит может быть вызван вирусами Эпштейна-Барр и простого герпеса. Способность поражать печень таких агентов как вирусы ТТ и гепатита G сегодня признается не всеми. Все эти вирусы относятся к различным семействам, имеют разные биологические свойства и соответственно, тактика лечения будет тоже значительно отличаться в зависимости от этиологии гепатита.

Учитывая вышеизложенное, весьма актуальной проблемой является адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов с выявлением конкретного возбудителя. Без использования современных молекулярно-биологических методов это невозможно. Поэтому диагностика гепатитов методом полимеразной цепной реакции — один из самых важнейших шагов в установлении причины заболевания и определения дальнейшей тактики лечения.

В настоящее время для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции используется наиболее доступный и одновременно чувствительный подход — обнаружение в крови антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) – с последующим подтверждением положительных результатов анализа методом иммуноблоттинга (ИБ). Эффективность выявления лиц, инфицированных ВИЧ, с помощью данного подхода может достигать 99% и более.

Но серологическая диагностика ВИЧ-инфекции имеет ряд ограничений:

Неэффективность в период т.н. «серологического окна» (в первые недели после заражения антитела не выявляются по причине их отсутствия или низкой концентрации).
Антитела к ВИЧ длительное время выявляются у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.
Ложноположительные результаты ИФА из-за присутствия в крови антител к антигенам, сходным с антигенами ВИЧ.
Ложноотрицательные и сомнительные результаты ИФА и иммуноблоттинга (особенно у пациентов в терминальной стадии заболевания).

Поэтому анализы ПЦР при обследовании на ВИЧ-инфекцию сегодня находят всё более широкое применение. Согласно «Методическим рекомендациям о проведении обследования на ВИЧ-инфекцию» (утв. Минздравсоцразвития РФ 06.08.2007) «при наличии эпидемиологических критериев, свидетельствующих о недавнем риске заражения ВИЧ для пациентов и при этом предположительно ложноположительных или ложноотрицательных результатов в ИФА и ИБ, например, при обследовании детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, или пациентов в периоде «серонегативного окна» используется метод ПЦР, при котором обнаруживается генный материал ВИЧ…..». А в случае уже установленного диагноза ВИЧ-инфекции анализ методом ПЦР используется для прогноза, динамического наблюдения и мониторинга проводимой терапии.

В Центре молекулярной диагностики (CMD) можно сдать ПЦР-анализ на ВИЧ анонимно.

Для этого обращайтесь к разделу сайта «Где сдать анализы».

источник

Найдена информация о 6 подходящих медицинских центрах для детей. Диагностика ПЦР у детей — цены и отзывы. Сравнительная таблица медицинских центров и клиник для детей Москвы, где есть диагностика полимеразной цепной реакции на туберкулез детям.

На портале Detmed.Firmika.ru собраны адреса и телефоны детских медицинских центров, предлагающих диагностику ПЦР у детей. Мы предлагаем найти центр в удобном вам районе или около подходящей станции метро. В удобных для сравнения таблицах представлены цены на приём — таким образом вы легко сможете сравнить стоимость процедур в разных медцентрах. Особенный интерес представляют отзывы об учреждениях Москвы, оставленные посетителями портала. Мы внимательно отслеживаем их достоверность, стараясь публиковать только комментарии реальных клиентов.

Одним из самых главных моментов в постановке диагноза детям является определение возбудителя, вызвавшего болезнь. Метод ПЦР позволяет сделать это практически безошибочно. Что необходимо знать родителям, где можно сдать кровь на ПЦР, и сколько может стоить этот анализ в Москве?

Суть метода полимеразной цепной реакции заключается в вычленении из практически любых материалов, которые может сдать ребенок (кровь, мокрота или слюна) ДНК возбудителя и обработки ее должным образом. С помощью специальной аппаратуры, концентрацию молекул ДНК увеличивают до такого количества, которое легко позволит определить возбудителя. ПЦР один из основных методов диагностики таких детских заболеваний, как:

вирусные гепатиты;
туберкулез;
дифтерия;
токсоплазмоз;
опоясывающий лишай.

Результаты исследования ПЦР обычно более просты для расшифровки как лечащему врачу, так и родителям: возбудитель либо выявлен, либо нет. Как и с другими исследованиями крови, перед сдачей материала рекомендуется не кормить ребенка — анализ будет более достоверным.

Для правильного проведения исследования лаборатория должна быть оснащена исправной аппаратурой, и медицинский работник должен уметь с ней обращаться. Также само помещение, где проводится анализ, должно быть очищено с помощью специального фильтра, потому что в воздухе содержится достаточное количество микроорганизмов для получения недостоверного результата.

Забор крови у малышей ведется из пальца или вены, чаще всего локтевой. Другие материалы, такие как слюна, мокрота или мазок из зева (для диагностики дифтерии) собираются медицинским работником в специальную стерильную емкость для дальнейшего хранения и проведения анализа. Результат может быть готов уже на следующий день, так как для ПЦР не требуется засеивать бактерии на специальную среду и длительно ждать их роста.

Важно понимать, что ребенку может быть дискомфортно во время забора крови или других материалов. Родители должны быть рядом, чтобы поддержать его, а детям старшего возраста будет интересно узнать ход процедуры. Уделите внимание внешнему виду медработника: шапочка, перчатки, маска и специальная медицинская форма или халат обязательны, так как уберегают материал, взятый от малыша от попадания туда чужих биологических частиц.

На данный анализ вашего ребенка может направить лечащий врач из поликлиники. В этом случае, его проведение абсолютно бесплатно, однако очереди и длительное ожидание может задержать сам процесс диагностики. В медицинских центрах проведение ПЦР стоит от 250 до 2500 рублей, так как сам по себе этот анализ не считается дорогостоящим. Некоторые частные клиники предоставляют услугу забора материала для анализа на дому, а также ускоренного проведения исследования за отдельную плату.

источник