Меню Рубрики

Методы анализа специфических белков сыворотки

Анализ на специфические белки – это особый метод исследования обмена белков и определение наличия в организме специфических белков – антител к вирусам и инфекциям. Белки в организме человека выполняют множество различных функций: участвуют в биохимических реакциях в роли катализаторов (гормоны, ферменты), транспортируют вещества, участвуют в иммунной защите организма. Определение специфического белка сможет точно указать на наличие того или иного заболевания. В нашем медицинском центре Вы можете пройти все необходимые исследования.

  • С-Реактивный белок (СРБ) 495 a
  • Ревматоидный фактор (РФ) 528 a
  • Антистрептолизин-О (АСЛО) 583 a
  • Гомоцистеин 1430 a
  • Тропонин I 946 a
  • Сиаловые кислоты 1045 a
  • Церулоплазмин 946 a
  • Миоглобин 1210 a
  • Гаптоглобин 880 a

Получить подробную информацию и записаться на прием Вы можете по телефону +7 (812) 640-55-25

Антистрептолизин О (ASLO) — это маркёр наличия в организме стрептококковой инфекции. Повышение показателя свидетельствует о перенесённой стрептококковой инфекции. Стойкое повышение уровня маркёра увеличивает вероятность возникновения осложнения – ревматизма. В случае благоприятного течения заболевания активность АСЛО снижается в течение 4-8 месяцев. Если активность антистрептолизина не снижается к шестому месяцу, то это позволяет предположить рецидив. Максимальную диагностическую ценность анализ имеет при проведении исследования с интервалом около недели. Увеличение концентрации ASLO наблюдается при следующих заболеваниях: ревматизм, скарлатина, ангина, рожа, пиодермия, хронический тонзиллит.

Гаптоглобин — белок, концентрация которого повышается при острой фазе воспаления. Он вырабатывается с целью предотвращения поражения почек, путём связывания свободного гемоглобина. Выработка гаптоглобина происходит в печени, легочной и жировой ткани. Этот белок играет очень важную роль в обмене железа. Результаты исследования могут выявить как повышенный уровень гаптоглобина в крови — при травмах, сепсисе, некрозах, нефротическом синдроме, злокачественных опухолях, голодании, сахарном диабете; так и пониженный — в случаях генетического дефицита, гемолитической болезни, аутоиммунных заболеваний (гемолитическая анемия), патологии печени, беременности.

Гомоцистеин вырабатывается только в организме и не содержится в продуктах питания. В случае нарушения метаболизма гомоцистеина, происходит постепенное его накапливание. В итоге он может повреждать стенки сосудов, в результате чего образуются атеросклеротические бляшки. С возрастом отмечается увеличение концентрации гомоцистеина в организме. Во время беременности высокий уровень этого белка может привести к возникновению многих осложнений: венозной тромбоэмболии, спонтанного аборта, эклампсии. Значительное повышение гомоцистеина встречается у пациентов с генетическим заболеванием – гомоцистеинурией. При нём происходит нарушение обмена ферментов, задержка умственного развития.

Миоглобин — белок, содержащийся в сердечной и скелетной мышцах. Уровень миоглобина напрямую зависит от деятельности почек. Повышенный миоглобин может свидетельствовать об инфаркте миокарда, травмах, судорогах, ожогах, почечной недостаточности, мышечном перенапряжении. Наоборот, снижение концентрации, встречается при полимиозите, миастении, ревматоидном артрите, аутоиммунных заболеваниях.

Ревматоидный фактор – представляют собой аутоантитела к иммуноглобулинам класса G и вырабатывается при ревматоидном артрите и некоторых других заболеваниях. В этом случае иммунная система начинает уничтожать собственные здоровые клетки. Повышение уровня ревматоидного фактора является признаком очень серьёзных заболеваний:

  1. цирроз печени;
  2. болезнь лёгких;
  3. злокачественные новообразования;
  4. полимиозит;
  5. ревматоидный артрит;
  6. системная красная волчанка;
  7. вирусные заболевания (корь, гепатит, грипп);
  8. инфекционные заболевания (сифилис, туберкулёз).

Для диагностики аутоиммунных заболеваний, в том числе и ревматоидного артрита, зачастую не хватает одного определения ревматоидного фактора. Поэтому врач может назначить дополнительное обследование.

С-Реактивный белок один из самых чувствительных элементов крови. Он первым реагирует на повреждение тканей. Его наличие в сыворотке свидетельствует о проникновении в человеческий организм чужеродных микроорганизмов. Этот белок активизирует иммунитет и стимулирует защитные реакции. Определение СБР получило широкое распространение для диагностики опухолей и острых инфекционных заболеваний, контроля над лечением. СРБ обнаруживается в крови при наличии следующих заболеваний:

  • рак;
  • сепсис новорождённых;
  • инфаркт миокарда;
  • туберкулёз;
  • менингит;
  • ревматические заболевания.

Тропонин участвует в процессе регуляции мышечного сокращения. Анализ используется для диагностики и лечения множества заболеваний.

Церулоплазмин выполняет в организме множество очень важных функций: принимает участие в иммунологических реакциях, ионном обмене, стимулирует гемопоэз, оказывает антиоксидантное действие. При отклонениях от нормы врач может судить о наличии следующих заболеваний:

  1. когда уровень повышен: ревматоидный артрит, острофазный ответ, холестаз, гепатит, болезнь Ходжкина, механическая желтуха;
  2. когда значения показателя снижены: синдром Менкеса, гепатолентикулярная дегенерация, нефроз, дефицит меди.

При беременности уровень церулоплазмина повышен.

Никакой особой подготовки для сдачи анализа не требуется. На приёме у врача следует предупредить его об употреблении лекарственных средств, и обсудить вариант отмены на время прохождения исследования. Правильно расшифровать результаты может только высококвалифицированный специалист.

источник

· Играют важнейшую роль в иммунных процессах;

· Служат резервом аминокислот;

· Выполняют регулирующую функцию (гормоны, ферменты и другие биологически активные белковые вещества).

Нормопротеинемия – нормальное содержание общего белка

Гипопротеинемия – пониженное содержание общего белка

Гиперпротеинемия – повышенное содержание белка

1. Недостаточное поступления белка пищи, наблюдаемое обычно при недоедании, голодании, опухоли, сужении пищевода, нарушении функции желудочно-кишечного тракта (вследствие ухудшения переваривания и всасывания белковых компонентов пищевых продуктов), например, при продолжительных воспалительных процессах кишечника.

По мнению А.А.Покровского, даже несбалансированный аминокислотный состав пищи может иногда приводить к гипопротеинемии.

Для обеспечения нормальных процессов жизнедеятельности организм утилизирует альбуминовую фракцию белков плазмы крови. При усиленном расходовании альбуминов (в основном обусловливающих онкотическое давление крови) развиваются так называемые онкотические или голодные отеки. Вообще говоря, всякое уменьшение содержания белка в плазме крови ниже 5 г% часто сопровождается гипопротеинемическими отеками тканей.

2. Понижение процессов биосинтеза белка (хронические паренхиматозные гепатиты, острые и хронические заболевания, длительные нагноительные процессы, злокачественные новообразования, тяжелые тиреотоксикозы и т.д.).

3. Потеря белка организмом при острых и хронических кровотечениях, при резко увеличенной проницаемости капиллярных стенок (при токсическом их поражении, когда белки крови выходят в ткани), при кровоизлияниях, образовании обширных экссудатов, выпотов в серозные полости, отеках.

Выход белков(главным образом альбуминов)из русла крови происходит при нарушении почечного фильтра вследствие органических заболеваний почек (особенно нефрозах и амилоидозах), при которых белок почти всегда обнаруживается в моче, а также при ожогах.

4. Дефектопротеинемии (альбуминемия) – врожденное отсутствие или недостаточное содержание церулоплазмина в плазме крови при болезни Вильсона.

5. У женщин в период лактации и последних месяцев беременности.

7. Квашиоркор (острая белковая недостаточность)

8. Ретенционный солевой синдром

1. Серьезное обезвоживание

2. При сгущении крови из-за незначительных потерь жидкости, что бывает при профузных поносах, усиленном потоотделении, неукротимой рвоте, несахарном диабете, при холере, непроходимости кишечника, генерализованном перитоните, тяжелых ожогах, лишении воды.

3. При хроническом полиартрите и некоторых и некоторых хронических воспалительных процессах.

4. Стойкая гиперпротеинемия до 12 г% и выше отмечается при миеломной болезни (плазмацитоме), макроглобулинемии Вандельстрема, при которых в плоских костях черепа появляются дополнительные очаг и образования «ненормальных», патологических белков – парапротеинов.

Гипопротеинемия связана почти всегда с гипоальбуминемией, а гиперпротеинемия – с гиперглобулинемией.

Гипоальбуминемию организм компенсирует гиперглобулинемией (даже если нет раздражения ретикуло-эндотелиальной системы) для того, чтобы сохранить уровень коллоидно-осмотического давления. Напротив, увеличение глобулинов компенсируется гипоальбуминемией.

Важное диагностическое значение имеет выяснение количественных взаимоотношений между отдельными фракциями сыворотки крови. Их изучение позволяет произвести дифференциацию заболеваний даже тогда, когда содержание общего белка в сыворотке оказывается неизменным.

Методы определения общего белка в сыворотке крови

Референтные величины концентрации общего белка в сыворотке крови – 65-85 г/л

2. Определение удельного веса сыворотки

3. Весовые (гравиметрические), когда белки крови осаждают, высушивают до постоянного веса и взвешивают на аналитических весах.

1. Рефрактометр ИРФ – 454 Б2М

предназначен для определения белка в сыворотке крови, спинно-мозговой жидкости, контроля концентрации лекарств, измерения плотности мочи.

Принцип теста: двухвалентная медь реагирует в щелочном растворе с белковыми пептидными связями с образованием характерного пурпурного цветного биуретового комплекса.

3. Определение белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на ацетатцеллюлозной пленке.

Буферный раствор предназначен для электрофоретического разделения белков сыворотки крови на мембранах из ацетатцеллюлозы с последующим денситометрическим определением белковых фракций.

Принцип электрофоретического разделения белков основан на различной скорости движения молекул белков сыворотки крови в постоянном электрическом поле определенной напряженности. Разделенные белковые фракции окрашиваются красителем. Интенсивность окраски белковых фракций пропорциональна их количеству.

Сыворотка крови, свободная от гемолиза, липемии и не желтушная. Белковые фракции сыворотки крови стабильны в плотно закрытой пробирке при 18-25 в течение 8 часов, при 2-8 – в течение 3 дней, при 20 – в течение 1 месяца.

1. Проведение электрофореза

1.1. сухие мембраны осторожно положить на поверхность буфера для электрофореза, избегая быстрого их погружения, и выдержать до полного смачивания. Смоченные мембраны аккуратно промокнуть между листами плотной фильтровальной бумаги, не допуская их высыхания. Перед нанесением образцов желательно провести фазу префореза. Для этого мембрану следует поместить в камеру для электрофореза и включить ток в выбранном режиме на 10 минут. Фазу префореза можно заменить длительным замачиванием мембраны в растворе буфера (несколько часов).

1.2. с помощью аппликатора нанести анализируемые образцы сыворотки крови на расстоянии 2-3 см от катодного края мембраны. Мембрану поместить в электрофоретическую камеру и подключить ток.

2. Обработка электрофореграммы

После отключения тока мембрану осторожно перенести в раствор красителя на 3-5 минут, затем дважды на 3 минуты в 5-7% раствор уксусной кислоты (до отбеливания фона).

1.2. электрофореграмму обработать с помощью сканера и компьютерной программы.

Сывороточные бета-глобулины, гамма-глобулины и липопротеины осаждаются при рН 7.55 тимоловым реактивом. В зависимости от количества и взаимного отношения белковых фракций при реакции возникает помутнение, интенсивность которого измеряют турбидиметрически.

Тимоловая проба более пригодна для функционального исследования печени, чем коллоидно-устойчивые пробы. Считают что она положительна в 90-100 % случаев болезни Боткина (уже в преджелтушной ее стадии и при безжелтушной форме) и при токсическом гепатите. Реакция положительна при послегепатитном и постнекротическом, особенно желтушном циррозе (в отличие от других форм циррозов), при коллагеновых заболеваниях, малярии и вирусных инфекциях. При механической желтухе она (в 75% случаев) отрицательна, что имеет дифференциально-диагностическое значение.

При механической желтухе проба становится положительной лишь в случае, если процесс осложняется паренхиматозным гепатитом. Для дифференциации механической желтухи от паренхиматозной большое значение имеет применение тимоловой пробы с пробой Бурштейна (на бета- и пре-беталипопротеиды).

При паренхиматозной желтухе обе пробы положительны, при механической желтухе тимоловая проба отрицательна, проба Бурштейна – резко положительна.

Список использованной литературы

1. Специфические белки в клинической лабораторной диагностике: вопросы и ответы. – Тёпфер Г., Тома Р., Цавта Б., М., 2004. – 96с

источник

Практически все патологические процессы, в том числе и радиационные поражения организма, сопровождаются образованием и выделением в кровь продуктов обмена, формируя синдром эндогенной интоксикации различного генеза и сложного многокомпонентного биохимического спектра. Основными системами связывания и транспорта веществ различной химической природы в организме являются иммунные антитела, буферные системы, форменные элементы крови, плазменные белки. Доминирующее место среди них занимает сывороточный альбумин.

Альбумин – самый обильный белок в человеческой плазме, составляющий около 60% всех белков плазмы. Альбумин также присутствует во внеклеточном пространстве, где его общее количество превышает содержание во внутрисосудистом пространстве на 30%. Альбумин имеет молекулярную массу 66,3 kDa и состоит из единственной цепи пептида из 585 аминокислот. Это – высокозаряженный белок без гликозилированных остатков, но с 17 бисульфидными мостиками и одним свободным цистеином [1].

Кровяной и тканевой пулы альбумина обмениваются, и, следовательно, состояние альбумина крови отражает течение метаболических процессов всего организма и является информативной системой, отражающей молекулярные изменения [2].

Альбумин играет важную роль буфера, поддерживающего рН на физиологическом уровне, нормальную вязкость и онкотическое давление плазмы. Альбумин является важным показателем белкового резерва организма, а также выполняет транспортную функцию. Несмотря на его высокую растворимость, это – важный переносчик многих гидрофобных (нераствоимых в воде) молекул типа свободных жирных кислот, билирубина, тироксина, гемина и ксенобиотиков (например, фенитоина, вальпроевой кислоты).

Читайте также:  Анализ белка при сахарном диабете

Альбумин также критически важен для метаболизма кальция, поскольку до 45% общего кальция сыворотки связаны с альбумином. Известны случаи анальбуминемии, при которых, как сообщают, были обнаружены серьезные расстройства метаболизма костей.

Альбумин вносит основной вклад в поддержание объема циркулирующей крови (ОЦК). Поддержание постоянства ОЦК зависит от удержания в сосудистом русле воды. При этом артериальное давление способствует перемещению жидкости во внесосудистое (межклеточное) пространство. В отсутствие эффективного противодействия этому процессу произошла бы быстрая потеря воды из сосудистого русла. В отличие от клеточных мембран, стенки капилляров проницаемы для небольших молекул, поэтому натрий почти не оказывает осмотического эффекта в кровеносных капиллярах. Наименьшей из молекул, концентрация которых значительна в кровотоке, но вне кровеносных сосудов низкая, выступает молекула альбумина. В норме стенка капилляров малопроницаема для него, поэтому концентрация альбумина в крови выступает наиболее важным фактором, противостоящим общему артериальному (гидростатическому) давлению.

Альбумин присутствует в плазме в больших количествах и вносит самый значительный вклад в поддержание ее онкотического давления. Как известно, онкотическое давление препятствует вытеканию жидкости из капилляров в окружающее интерстициальное (межклеточное) пространство под действием давления внутри сосудов. На 65–80% онкотическое давление плазмы обусловлено альбумином.

При патологии динамическое равновесие и обмен жидкости между внутри- и внесосудистыми пространствами нарушается. При уменьшении содержания альбумина в крови (острая кровопотеря, высокий уровень катаболизма, печеночная недостаточность, потери белка с мочой и др.) онкотическое давление плазмы снижается, жидкость усиленно покидает сосудистое русло, в связи с чем происходит сгущение крови, замедление кровотока, а в межклеточном пространстве образуется избыток жидкости и развивается отек. Отек является клинический симптом накопления жидкости в интерстициальном пространстве.

Альбумин синтезируется в печени из аминокислот со скоростью примерно 12–15 г/сут, полупериод его жизни в кровотоке 18–20 дней. Выработка альбумина стимулируется тироксином и анаболическими стероидами, тогда как подавляется повышением коллоидального осмотического давления, дефицитом аминокислот и увеличением уровня интерлейкина-6 (при реакции острой фазы воспаления).

Референтные переделы альбумина в сыворотке крови: 35–50 г/л.

Альбумин выполняет свои функции благодаря уникальной пространственной структуре, которая определяется последовательностью аминокислот в полипептидной цепи. Полипептидная цепь принимает адекватную характеру воздействия пространственную структуру в процессе самосборки. Белок из развернутой цепи, минуя множество промежуточных структур (конформеров), приобретает наиболее стабильную упаковку, нативную структуру. Известно, что альбумин образует формы, отличающиеся по свойствам от нативного белка, т.е. имеет большое количество изомеров. Если, каждый аминокислотный остаток имеет около 10 возможных конформаций, то цепь из 100 остатков может иметь порядка 10 100 различных структур [3].

Исследованиями последних 10–15 лет показано, что многие нейродегенеративные болезни связаны с накоплением «неправильно» свернутых белков. Ранее постулировалось, что только некоторые специфические белки могут под действием неблагоприятных факторов принимать β-складчатую конформацию, а впоследствии агрегировать с образованием β-амилоидных структур. Позднее оказалось, что практически все белки в определенных условиях могут образовывать β-складчатую структуру. В этой связи было сделано предположение, что не только нейродегенеративные, но и многие другие болезни могут быть связаны с неправильной упаковкой молекул различных белков. Также не исключаятся вероятность, что каждый из белков может иметь две или несколько относительно стабильных «замороженных» структур, которые лишь с малой вероятностью переходят друг в друга. Если это предположение, верно, то вполне возможно, что, находясь в одной структуре, данный белок будет участвовать в одних реакциях или выполнять одну функцию, а, перейдя в другое структурное состояние, белок станет выполнять совершенно иные функции [4].

Установлено наличие модификации альбумина при гестозе беременных, что сопровождающееся нарушением его транспортной и детоксикационной функций. Причем нарушения в транспортной системе альбумина отмечаются ранее, чем диагностируемое действие токсинов на клетки и органы. При этом наблюдается корреляция степени изменения характеристик альбумина со степенью тяжести гестоза [5].

У пациентов с онкопатологией обнаружено изменение конформации сывороточного альбумина, а также значительное снижение его функциональных свойств, нарушение связывающей способности СА как в первом, так и во втором центрах связывания [6]. Было установлено, что степень модификации альбумина коррелирует с клиническим состоянием пациента и отражает эффект терапии.

Исходя из выше сказанного, вопрос структурно-функциональных (конформационных) изменений альбумина особенно важен при рассмотрении механизмов развития заболеваний, связанных с действием ионизирующего излучения, особенно в районах, пострадавших от аварии на Чернобыльской АЭС.

  1. Ярец Ю.И. Специфические белки: практическое пособие для врачей: в 2 частях. – Часть I. Лабораторные тесты исследования специфических белков / Ю.И. Ярец. – Гомель, 2015. – 64 с.
  2. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / под ред. Ю.А.Грызунова, Д. Е. Добрецова. − М. : ИРИУС, 1994. − 226 с.
  3. Финкельштейн, А.В.Физика белка. / А.В.Финкельштейн, О. Б. Птицын. − М. : КДУ, 2005. − 456 с.
  4. Гусев Н. Б. Нейродегенеративные болезни и проблема правильного сворачивания белка / Н. Б. Гусев // Соросовский образовательный журнал. − 2004. − Т. 8, № 2. − С. 15-23.
  5. В.Н. Сидоренко, В.А. Муравский, Е.В. Шиманович, Л.И. Зенько. Нарушение транспортной функции сывороточного альбумина при гестозе беременных. Медицинский журнал, БГМУ, Беларусь, 2013, № 1 (2012) с. 149-150.
  6. Liu et al. Changes in the electron paramagnetic resonance spectra of albumin-associated spin-labeled stearic acid as a diagnostic parameter of colorectal cancer. World Journal of Surgical Oncology.– 2013. – 11, N 1. – P. 223-228.

источник

Для разделения белковых фракций используют метод электрофореза, основанный на различной подвижности белков сыворотки в электрическом поле. Это исследование в диа­гностическом отношении более информативно, чем определение только общего белка или альбумина. Однако исследование на белковые фракции позволяет судить о характерном для какого-либо заболевания избытке или дефиците белка только в самой общей форме. Мето­дом электрофореза на ацетат-целлюлозной пленке белки сыворотки делятся на фракции (табл. 4.1). Анализ фореграмм белков позволяет установить, за счет какой фракции у больно­го имеется увеличение или дефицит белка, а также судить о специфичности изменений, ха­рактерных для данной патологии.

Таблица 4.1. Белковые фракции сыворотки крови в норме

Фракция Содержание белковых фракций, %
Преальбумины 2-7
Альбумины 52-65
Альфа-1 -глобулины 2,5-5
Альфа-2-глобулины 7-13
Бета-глобулины 8-14
Гамма-глобулины 12-22

Изменения фракции альбуминов.Увеличения абсолютного содержания альбуминов, как правило, не наблюдается.

Основные виды гипоальбуминемий приведены в разделе «Альбумин в сыворотке».

Изменения фракции альфа-1-глобулинов.Основными компонентами данной фракции являются альфа-1-антитрипсин, альфа-1-липопротеид, кислый альфа-1-гликопротеид.

Увеличение фракции альфа-1-глобулиновнаблюдается при острых, подострых, обостре­нии хронических воспалительных процессов; поражении печени; всех процессах тканевого распада или клеточной пролиферации.

Снижение фракции альфа-1-глобулиновнаблюдается при дефиците альфа-1-антитрипси­на, гипо-альфа-1-липопротеидемии.

Изменения фракции альфа-2-глобулинов.Альфа-2-фракция содержит альфа-2-макрогло-булин, гаптоглобин, аполипопротеины А, В, С, церулоплазмин.

Увеличение фракции альфа-2-глобулиновнаблюдается при всех видах острых воспали­тельных процессов, особенно с выраженным экссудативным и гнойным характером (пнев­мония, эмпиема плевры, другие виды гнойных процессов); заболеваниях, связанных с вовле­чением в патологический процесс соединительной ткани (коллагенозы, аутоиммунные забо­левания, ревматические заболевания); злокачественных опухолях; в стадии восстановления после термических ожогов; нефротическом синдроме; гемолизе крови в пробирке.

Снижение фракции альфа-2-глобулиновнаблюдается при сахарном диабете, панкреати­тах (иногда), врожденной желтухе механического происхождения у новорожденных, токси­ческих гепатитах.

К альфа-глобулинам относится основная масса белков острой фазы. Увеличение их со­держания отражает интенсивность стрессорной реакции и воспалительных процессов при перечисленных видах патологии.

Изменения фракции бета-глобулинов.Бета-фракция содержит трансферрин, гемопек-син, компоненты комплемента, иммуноглобулины и липопротеиды.

Рост фракции бета-глобулиноввыявляют при первичных и вторичных гиперлипопротеи-демиях (особенно II типа), заболеваниях печени, нефротическом синдроме, кровоточащей язве желудка, гипотиреозе.

Пониженные величинысодержания бета-глобулинов выявляются при гипо-бета-липо-протеинемии.

Изменения фракции гамма-глобулинов.Гамма-фракция содержит иммуноглобулины G, А, М, D, Е. Поэтому повышение содержания гамма-глобулинов отмечается при реакции системы иммунитета, когда происходит выработка антител и аутоантител: при вирусных и бактериальных инфекциях, воспалении, коллагенозе, деструкции тканей и ожогах. Значи­тельная гипергаммаглобулинемия, отражая активность воспалительного процесса, характер­на для хронических активных гепатитов и циррозов печени. Повышение фракции гамма-глобулинов наблюдается у 88—92 % больных хроническим активным гепатитом, причем зна­чительное повышение (до 26 г/л и выше) — у 60—65 % больных. Почти такие же изменения отмечаются у больных при высокоактивном циррозе печени, при далеко зашедшем циррозе, при этом нередко содержание гамма-глобулинов превышает содержание альбуминов, что яв­ляется плохим прогностическим признаком [Хазанов А.И., 1988].

При определенных заболеваниях могут наступить нарушения в синтезе гамма-глобули­нов, и в крови появляются патологические протеины — парапротеины, которые регистриру­ются на фореграмме. Для уточнения характера этих изменений требуется проведение имму-ноэлектрофореза. Такие изменения фореграмм отмечаются при миеломной болезни, болезни Вальденстрема.

Повышение содержания в крови гамма-глобулинов, кроме уже названных, может со­провождать следующие заболевания: ревматоидный артрит, системная красная волчанка, хронический лимфолейкоз, эндотелиомы, остеосаркомы, кандидомикоз.

Уменьшение содержания гамма-глобулинов бывает первичным и вторичным. Различают три основных вида первичных гипогаммаглобулинемий: физиологическую (у детей в возрас­те 3—5 мес), врожденную и идиопатическую. Причинами вторичных гипогаммаглобулине­мий могут быть многочисленные заболевания и состояния, приводящие к истощению им­мунной системы.

Сопоставление направленности изменений содержания альбуминов и глобулинов с из­менениями общего содержания белка дает основание для заключения, что гиперпротеине-мия чаще связана с гиперглобулинемиями, в то время как гипопротеинемия чаще связана с гипоальбуминемией.

В прошлом широко применялось вычисление альбумин-глобулинового коэффициента, т.е. отношения величины фракции альбуминов к величине фракции глобулинов. В норме этот показатель составляет от 2,5 до 3,5. У больных хроническими гепатитами и циррозами печени этот коэффициент понижается до 1,5 и даже до 1 за счет снижения содержания аль­бумина и повышения фракции глобулинов.

В последние годы все больше внимания уделяется определению содержания преальбу­минов. Особенно ценным его определение является у тяжелых реанимационных больных, находящихся на парентеральном питании. Снижение уровня преальбуминов — ранний и чувствительный тест белковой недостаточности в организме больного. Под контролем содер­жания уровня преальбуминов в сыворотке крови производится коррекция нарушений белко­вого обмена у таких больных.

Альбумин в моче

Частота развития диабетической нефропатии (ДН) колеблется от 40 до 50 % у больных с инсулинзависимым сахарным диабетом (ИЗСД) и от 15 до 30 % у больных с инсулинне-зависимым сахарным диабетом (ИНСД) [Дедов И.И., 1995]. Опасность этого осложнения состоит в том, что оно развивается медленно и постепенно, поэтому диабетическое пора­жение почек долгое время остается незамеченным. Наиболее ранним признаком развития диабетической нефропатии (до появления протеинурии) является микроальбуминурия. Микроальбуминурия — это экскреция альбумина с мочой, превышающая допустимые нор­мальные значения, но не достигающая степени протеинурии. В норме экскретируется не более 30 мг альбумина в сутки, чтоэквивалентно концентрации альбумина в моче менее 20 мг/л при ее разовом анализе. При появлении протеинурии экскреция альбумина с мо­чой превышает 300 мг/сут, поэтому диапазон колебаний концентрации альбумина в моче при микроальбуминурии составляет от 30 до 300 мг/сут или от 20 до 200 мкг/мин (табл. 4.2). Появление у больного сахарным диабетом постоянной микроальбуминурии свидетельствует о вероятном развитии (в течение ближайших 5—7 лет) выраженной стадии диабетической нефропатии.

Таблица 4.2. Классификация видов альбуминурии

Вид альбуминурии Экскреция альбумина с мочой Концентрация альбумина в моче, мг/л
при одноразовом сборе мочи, мкг/мин за сутки, мг/мин
Нормоальбуминурия Микроальбуминурия Макроальбуминурия Менее 20 20-200 Более 200 Менее 30 30-300 Более 300 Менее 20 20-200 Более 200

Другим ранним маркером диабетической нефропатии (табл. 4.3) является нарушенная внутрипочечная гемодинамика (гиперфильтрация, гиперперфузия почек). Гиперфильтрация характеризуется повышением скорости клубочковой фильтрации (СКФ) выше 140 мл/мин. Для определения СКФ используется проба Реберга—Тареева, основанная на исследовании клиренса эндогенного креатинина в сутки (см. «Клиренс эндогенного креатинина»).

Таблица 4.3. Стадии развития диабетической нефропатии [Mogensen C.E., 1983]

Читайте также:  Анализ басни толстого белка и волк
Стадия ДН Клинико-лабораторная характеристика Сроки развития
Гиперфункция почек Увеличение СКФ более 140 мл/мин, В начале заболевания
увеличение почечного кровотока,
гипертрофия почек,
нормоальбуминурия (менее 30 мг/ сут)
Стадия начальных структурных Утолщение базальных мембран капил- 2—5 лет
изменений ткани почек ляров клубочков,
расширение мезангиума,
сохраняется высокая СКФ,
нормоальбуминурия (менее 30 мг/ сут)
Начинающаяся нефропатия Микроальбуминурия (30—300 мг/сут), 5-15 лет
СКФ высокая или нормальная,
нестойкое повышение АД
Выраженная нефропатия Протеинурия (более 500 мг/сут), 10-25 лет
СКФ нормальная или умеренно сни-
женная,
артериальная гипертензия
Уремия Снижение СКФ менее 10 мл/мин, Более 20 лет от начала
артериальная гипертензия, заболевания или 5—7 лет
симптомы интоксикации от появления протеинурии

Лабораторными критериями, характеризующими развитие выраженной стадии диабети­ческой нефропатии, являются протеинурия (как правило, при неизмененном осадке мочи), снижение скорости клубочковой фильтрации и нарастание азотемии (концентрации мочеви­ны и креатинина в сыворотке крови). У 30 % больных развивается нефротический синдром, признаками которого являются массивная протеинурия (более 3,5 г/сут), гипоальбуминемия, гиперхолестеринемия. С момента появления постоянной протеинурии темп снижения СКФ составляет в среднем 2 мл/мин в мес, что приводит к развитию терминальной почечной не­достаточности уже через 5—7 лет после выявления протеинурии.

На стадии хронической почечной недостаточности (ХПН) лабораторные исследования позволяют определять тактику ведения больных с сахарным диабетом.

• При развитии ХПН у больных с ИЗСД резко снижается суточная потребность в инсу­
лине, в связи с этим возрастает частота гипогликемических состояний, что требует
снижения дозы инсулина.

• Больных с ИНСД, принимающих перорально препараты, снижающие концентрацию
глюкозы в крови, при развитии ХПН рекомендуется переводить на инсулинотерапию,
поскольку большинство этих препаратов метаболизируется и выводится почками.

• При содержании креатинина в сыворотке крови более 500 мкмоль/л необходимо ре­
шать вопрос о подготовке больного к гемодиализу.

• Содержание креатинина в сыворотке 600—700 мкмоль/л (8—9 мг%) и клубочковая филь­
трация менее 10 мл/мин являются показанием к проведению трансплантации почки.

• Повышение креатинина в сыворотке крови до 1000—1200 мкмоль/л (12—16 мг%) и
снижение клубочковой фильтрации менее 10 мл/мин являются показанием к проведе­
нию программного гемодиализа.

Почечная недостаточность, связанная с диабетической нефропатией, служит непосред­ственной причиной смерти приблизительно в половине случаев ИНСД у заболевших в дет­ском и юношеском возрасте.

Весьма важной для клинициста является частота проведения лабораторных исследова­ний для наблюдения за динамикой развития диабетической нефропатии. Согласно рекомен­дации экспертов ВОЗ, при отсутствии протеинурии необходимо исследовать наличие микро­альбуминурии:

— у больных с ИЗСД не реже 1 раза в год спустя 5 лет от начала заболевания (при воз­
никновении сахарного диабета после полового созревания) и не реже 1 раза в год с
момента установления диагноза диабета в возрасте до 12 лет;

— у больных с ИНСД не реже 1 раза в год с момента установления диагноза диабета.

При нормальной экскреции альбумина с мочой следует стремиться удерживать фрак­цию гликозилированного гемоглобина на уровне не более чем 6 %.

При наличии протеинурии у больных сахарным диабетом не реже 1 раза в 4—6 мес ис­следуют:

— скорость нарастания протеинурии (в суточной моче);

Специфические белки

Специфические белки крови выполняют различные функции: осуществляют транспорт различных веществ, участвуют в свертывании крови, ингибируют протеолитические фермен­ты, активно участвуют в иммунологических реакциях. Помимо выполнения специфических функций, белки крови участвуют в общих реакциях организма на различные патологические процессы, отражая при этом в определенной степени состояние органов и тканей, что нашло применение в клинической практике.

На течение воспалительной реакции оказывают влияние многие органы, в первую оче­редь печень, с помощью промежуточных метаболитов. Вскоре после начала воспалительного процесса в печени изменяется скорость синтеза, а следовательно, и состав, и количество оп­ределенных видов белков в крови. Белки, синтез которых неспецифически увеличивается в ответ на патологические процессы разного характера (воспаление, повреждение, злокачест­венные новообразования), а также при беременности, называются «реактантами острой фазы воспаления».

Кислый альфа- 1-гликопротеин в сыворотке

Содержание кислого альфа- 1-гликопротеина в сыворотке в норме составляет 13,4—34,1 мкмоль/л.

Кислый альфа-1-гликопротеин (орозомукоид) — белок плазмы крови, наиболее бога­тый углеводами. Углеводная часть представлена несколькими полисахаридными цепочка­ми, присоединенными к полипептидной цепи. Обладает способностью ингибировать ак­тивность протеолитических ферментов, изменять адгезивность тромбоцитов, подавлять им-мунореактивность, связывать многие медикаменты (пропранолол) и некоторые гормоны (прогестерон).

Орозомукоид относится к белкам острой фазы. Его синтез, как реактанта острой фазы, стимулируется липополисахаридами, высвобожденными из макрофагов, активированных интерлейкином-6. Содержание орозомукоида в крови увеличивается при воспалительных процессах (инфекции, ревматические заболевания, травмы, хирургические вмешательства), опухолях. Исследование этого показателя в динамике позволяет оценивать динамику проте­кания воспалительного процесса, а при опухолях, в случае их оперативного лечения, диа­гностировать возникновение рецидива.

Поскольку уровень орозомукоида в крови увеличивается при воспалительных процес­сах, он может связывать повышенное количество принимаемого больным лекарственного препарата, вследствие чего может возникать расхождение между фармакологическим эффек­том и уровнем препарата в крови.

Снижение содержания орозомукоида может быть выявлено в раннем детском возрасте, при беременности (в ранние сроки), тяжелых поражениях печени, нефротическом синдроме, приеме эстрогенов, контрацептивов.

Совместное определение орозомукоида и гаптоглобина в сыворотке крови имеет важное значение для диагностики гемолиза in vivo. Обычно уровни этих двух белков повышаются и снижаются одновременно при острофазовых процессах, если выявляется повышенный уро­вень орозомукоида при нормальном содержании гаптоглобина; это указывает на протекание острофазового процесса с умеренным гемолизом in vivo.

источник

Количественный анализ белков

Для количественного определения белков в биологическом материале или лекарственных препаратах чаще всего употребляются азотометрия, фотоколориметрия, фотонефелометрия и спектрофотометрия.

Азотометрия основана на определении содержания азота белка после минерализации исследуемого образца. Поскольку белки содержат в среднем 16% азота, то найденное количество его умножают на 6,25 (так как 100:16=6,25) и получают содержание белка в пробе. Эти методы (к ним относится классический метод Кьельдаля и его модификации) очень трудоемки и не всегда надежны, так как процентное содержание азота в разных белках колеблется от 14 до 19.

Фотоколориметрическиеметоды основаны на так называемых «цветных» реакциях на функциональные группы белков. Среди них наибольшее применение нашли биуретовая реакция на пептидные группы и реакция Фолина на ароматические радикалы аминокислот (тирозин, триптофан). Биуретовый метод более специфичен, так как пептидные связи имеются только в белках и пептидах. Он широко применяется в клинико-биохимических исследованиях. Метод Лоури, основанный на реакции Фолина, высокочувствительный, но малоспецифичный, поскольку сходную окраску дают свободные ароматические аминокислоты и многие другие соединения, содержащие фенольную группу.

Фотонефелометрические методы определения содержания белка основываются на оценке степени мутности его взвеси в растворах. Эти методы не получили широкого распространения.

Спектрофотометрические методы делятся на прямые и косвенные. Последние представляют собой боле чувствительный и точный вариант фотоколориметрического. После проведения цветной реакции на белки проводят спектрофотометрию окрашенного раствора и по светопоглощению его в монохроматическом свете рассчитывают содержание белка.

Прямой метод состоит в измерении светопоглощения раствора белка в ультрафиолетовой области при 200-220 нм (в этой области абсорбируют пептидные группы белка) и при 280 нм (зона поглощения ароматических радикалов аминокислот, в основном триптофана и тирозина). Эти методы весьма удобны и не требуют предварительного образования окрашенных комплексов. Более специфична спектрофотометрия при 200-220 нм, чем при 280 нм, так как в последнем случае мешает светопоглощение различных низкомолекулярных ароматических соединений, содержащихся в биологическом материале.

Реактивы. Биуретовый реактив * ; хлорид натрия, 0,9%-ный раствор.

Оборудование. Микропипетки и пипетки вместимостью 1 и 5 мл; штатив с пробирками; стеклянные палочки; фотоэлектроколориметр (ФЭК); спектрофотометр (СФ).

Материалы. Сыворотка крови; альбумин, 10%-ный раствор.

а. Биуретовый метод определения содержания белка в сыворотке крови. Метод основан на способности пептидных связей белков и полипептидов образовывать с ионами Cu 2+ в щелочной среде комплексное соединение фиолетового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию белка в среде.

Ход определения. Для определения содержания белка в сыворотке крови или в других объектах, содержащих белок, необходимо построить калибровочный график. Для этого применяют стандартный белок – кристаллический альбумин сыворотки крови.

Схема разведения альбумина для построения калибровочного графика приведена в таблице:

№ пробирки Стандартный 10%-ный раствор альбумина, мл 0,9%-ный раствор хлорида натрия, мл Концентрация белка, г/л Экстинкция
0,4 0,6
0,6 0,4
0,8 0,2
1,0

Из каждой пробирки с разведенным стандартным раствором альбумина берут по 0,1 мл раствора и добавляют по 5 мл биуретового реактива. Содержимое смешивают встряхиванием.

Через 30 мин измеряют экстинкцию каждой пробы на ФЭКе против контрольного раствора (0,1 мл 0,9%-ного раствора NaCl + 5,0 мл биуретового реактива) в кювете толщиной 1 см, длина волны 540-560 нм (светофильтр зеленый).

По полученным данным строят калибровочную кривую, откладывая по оси ординат значения экстинкции, по оси абсцисс – концентрацию белка.

Берут 2 пробирки – в одну наливают 0,1 мл исследуемой сыворотки, в другую (контрольную) – 0,1 мл раствора хлорида натрия. В обе пробирки добавляют по 5 мл биуретового реактива. Содержимое смешивают встряхиванием.

Через 30 мин измеряют экстинкцию исследуемого раствора на ФЭКе в кювете толщиной 1 см при длине волны 540-560 нм (зеленый светофильтр) против контрольного раствора.

Содержание белка в сыворотке крови находят по калибровочной кривой.

б. Спектрофотометрический метод определения содержания белка в сыворотке крови. Метод основан на светопоглощении при 280 нм ароматических радикалов тирозина, триптофана и в меньшей степени фенилаланина, содержащихся в белке. Однако при данной длине волны поглощают и нуклеиновые кислоты, хотя их максимум абсорбции приходится на 260 нм. Поэтому измерение экстинкции раствора проводят при 260 и 280 нм, чтобы сделать поправку на примесь нуклеиновых кислот и нуклеотидов. Метод неприменим к материалу, где содержание нуклеиновой кислоты превышает 20%.

Ход определения. В пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови и добавляют 9,9 мл раствора хлорида натрия. Содержимое перемешивают стеклянной палочкой.

Измеряют экстинкцию исследуемого раствора против контрольного раствора хлорида натрия на спектрофотометре в кювете толщиной 1 см при двух длинах волн – 260 и 280 нм.

Расчет можно проводить по формуле, эмпирически полученной Калькаром (поэтому можно не прибегать к калибровочному графику):

где х – концентрация белка в растворе, г/л.

Оформление работы. По калибровочной кривой рассчитать содержание белка. Сравнить результаты, полученные биуретовым методом и спектрофотометрическим. Сделать вывод о наличии отклонения концентрации белка в исследуемой сыворотке крови от нормы и о возможных его причинах.

Практическое значение работы. Сыворотка крови содержит смесь белков, различных по физиологическому значению, структуре и физико-химическим свойствам (более 100 различных белков плазмы крови). Нормальное содержание белка в сыворотке крови (нормопротеинемия) составляет 65-85 г/л. Определение общего белка в сыворотке крови находит широкое применение в практической медицине, так как по изменению его нормального содержания можно судить о различных нарушениях в организме. Повышенное содержание белка (гиперпротеинемия) относительно редко: при сгущении крови из-за потери жидкости (длительная рвота, усиленное потоотделение, холера, тяжелые ожоги и т.п.), при некоторых хронических воспалительных процессах вследствие образования антител (ревматизм, полиартрит). Пониженное содержание белка в крови (гипопротеинемия): при недостаточном поступлении белка с пищей (голодание, нарушение проходимости кишечного тракта), при нарушении образования белка в органах (при поражении печени химическими веществами, опухолями, микроорганизмами и т.д.), при потере белка организмом (кровотечения, повышенная проницаемость сосудов, заболевания почек, беременность и т.д.).

В фармацевтической практике количественные методы определения белка необходимы для контроля белковых лекарственных средств (вакцин, сывороток, γ-глобулина, белковых препаратов крови и т.д.).

Дата добавления: 2014-11-06 ; Просмотров: 3796 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Для разделения белковых фракций используют метод электрофореза, основанный на различной подвижности белков сыворотки в электрическом поле. Это исследование в диа­гностическом отношении более информативно, чем определение только общего белка или альбумина. Однако исследование на белковые фракции позволяет судить о характерном для какого-либо заболевания избытке или дефиците белка только в самой общей форме. Мето­дом электрофореза на ацетат-целлюлозной пленке белки сыворотки делятся на фракции (табл. 4.1). Анализ фореграмм белков позволяет установить, за счет какой фракции у больно­го имеется увеличение или дефицит белка, а также судить о специфичности изменений, ха­рактерных для данной патологии.

Читайте также:  Анализ белка по методу кьельдаля

Таблица 4.1. Белковые фракции сыворотки крови в норме

Фракция Содержание белковых фракций, %
Преальбумины 2-7
Альбумины 52-65
Альфа-1 -глобулины 2,5-5
Альфа-2-глобулины 7-13
Бета-глобулины 8-14
Гамма-глобулины 12-22

Изменения фракции альбуминов.Увеличения абсолютного содержания альбуминов, как правило, не наблюдается.

Основные виды гипоальбуминемий приведены в разделе «Альбумин в сыворотке».

Изменения фракции альфа-1-глобулинов.Основными компонентами данной фракции являются альфа-1-антитрипсин, альфа-1-липопротеид, кислый альфа-1-гликопротеид.

Увеличение фракции альфа-1-глобулиновнаблюдается при острых, подострых, обостре­нии хронических воспалительных процессов; поражении печени; всех процессах тканевого распада или клеточной пролиферации.

Снижение фракции альфа-1-глобулиновнаблюдается при дефиците альфа-1-антитрипси­на, гипо-альфа-1-липопротеидемии.

Изменения фракции альфа-2-глобулинов.Альфа-2-фракция содержит альфа-2-макрогло-булин, гаптоглобин, аполипопротеины А, В, С, церулоплазмин.

Увеличение фракции альфа-2-глобулиновнаблюдается при всех видах острых воспали­тельных процессов, особенно с выраженным экссудативным и гнойным характером (пнев­мония, эмпиема плевры, другие виды гнойных процессов); заболеваниях, связанных с вовле­чением в патологический процесс соединительной ткани (коллагенозы, аутоиммунные забо­левания, ревматические заболевания); злокачественных опухолях; в стадии восстановления после термических ожогов; нефротическом синдроме; гемолизе крови в пробирке.

Снижение фракции альфа-2-глобулиновнаблюдается при сахарном диабете, панкреати­тах (иногда), врожденной желтухе механического происхождения у новорожденных, токси­ческих гепатитах.

К альфа-глобулинам относится основная масса белков острой фазы. Увеличение их со­держания отражает интенсивность стрессорной реакции и воспалительных процессов при перечисленных видах патологии.

Изменения фракции бета-глобулинов.Бета-фракция содержит трансферрин, гемопек-син, компоненты комплемента, иммуноглобулины и липопротеиды.

Рост фракции бета-глобулиноввыявляют при первичных и вторичных гиперлипопротеи-демиях (особенно II типа), заболеваниях печени, нефротическом синдроме, кровоточащей язве желудка, гипотиреозе.

Пониженные величинысодержания бета-глобулинов выявляются при гипо-бета-липо-протеинемии.

Изменения фракции гамма-глобулинов.Гамма-фракция содержит иммуноглобулины G, А, М, D, Е. Поэтому повышение содержания гамма-глобулинов отмечается при реакции системы иммунитета, когда происходит выработка антител и аутоантител: при вирусных и бактериальных инфекциях, воспалении, коллагенозе, деструкции тканей и ожогах. Значи­тельная гипергаммаглобулинемия, отражая активность воспалительного процесса, характер­на для хронических активных гепатитов и циррозов печени. Повышение фракции гамма-глобулинов наблюдается у 88—92 % больных хроническим активным гепатитом, причем зна­чительное повышение (до 26 г/л и выше) — у 60—65 % больных. Почти такие же изменения отмечаются у больных при высокоактивном циррозе печени, при далеко зашедшем циррозе, при этом нередко содержание гамма-глобулинов превышает содержание альбуминов, что яв­ляется плохим прогностическим признаком [Хазанов А.И., 1988].

При определенных заболеваниях могут наступить нарушения в синтезе гамма-глобули­нов, и в крови появляются патологические протеины — парапротеины, которые регистриру­ются на фореграмме. Для уточнения характера этих изменений требуется проведение имму-ноэлектрофореза. Такие изменения фореграмм отмечаются при миеломной болезни, болезни Вальденстрема.

Повышение содержания в крови гамма-глобулинов, кроме уже названных, может со­провождать следующие заболевания: ревматоидный артрит, системная красная волчанка, хронический лимфолейкоз, эндотелиомы, остеосаркомы, кандидомикоз.

Уменьшение содержания гамма-глобулинов бывает первичным и вторичным. Различают три основных вида первичных гипогаммаглобулинемий: физиологическую (у детей в возрас­те 3—5 мес), врожденную и идиопатическую. Причинами вторичных гипогаммаглобулине­мий могут быть многочисленные заболевания и состояния, приводящие к истощению им­мунной системы.

Сопоставление направленности изменений содержания альбуминов и глобулинов с из­менениями общего содержания белка дает основание для заключения, что гиперпротеине-мия чаще связана с гиперглобулинемиями, в то время как гипопротеинемия чаще связана с гипоальбуминемией.

В прошлом широко применялось вычисление альбумин-глобулинового коэффициента, т.е. отношения величины фракции альбуминов к величине фракции глобулинов. В норме этот показатель составляет от 2,5 до 3,5. У больных хроническими гепатитами и циррозами печени этот коэффициент понижается до 1,5 и даже до 1 за счет снижения содержания аль­бумина и повышения фракции глобулинов.

В последние годы все больше внимания уделяется определению содержания преальбу­минов. Особенно ценным его определение является у тяжелых реанимационных больных, находящихся на парентеральном питании. Снижение уровня преальбуминов — ранний и чувствительный тест белковой недостаточности в организме больного. Под контролем содер­жания уровня преальбуминов в сыворотке крови производится коррекция нарушений белко­вого обмена у таких больных.

Альбумин в моче

Частота развития диабетической нефропатии (ДН) колеблется от 40 до 50 % у больных с инсулинзависимым сахарным диабетом (ИЗСД) и от 15 до 30 % у больных с инсулинне-зависимым сахарным диабетом (ИНСД) [Дедов И.И., 1995]. Опасность этого осложнения состоит в том, что оно развивается медленно и постепенно, поэтому диабетическое пора­жение почек долгое время остается незамеченным. Наиболее ранним признаком развития диабетической нефропатии (до появления протеинурии) является микроальбуминурия. Микроальбуминурия — это экскреция альбумина с мочой, превышающая допустимые нор­мальные значения, но не достигающая степени протеинурии. В норме экскретируется не более 30 мг альбумина в сутки, чтоэквивалентно концентрации альбумина в моче менее 20 мг/л при ее разовом анализе. При появлении протеинурии экскреция альбумина с мо­чой превышает 300 мг/сут, поэтому диапазон колебаний концентрации альбумина в моче при микроальбуминурии составляет от 30 до 300 мг/сут или от 20 до 200 мкг/мин (табл. 4.2). Появление у больного сахарным диабетом постоянной микроальбуминурии свидетельствует о вероятном развитии (в течение ближайших 5—7 лет) выраженной стадии диабетической нефропатии.

Таблица 4.2. Классификация видов альбуминурии

Вид альбуминурии Экскреция альбумина с мочой Концентрация альбумина в моче, мг/л
при одноразовом сборе мочи, мкг/мин за сутки, мг/мин
Нормоальбуминурия Микроальбуминурия Макроальбуминурия Менее 20 20-200 Более 200 Менее 30 30-300 Более 300 Менее 20 20-200 Более 200

Другим ранним маркером диабетической нефропатии (табл. 4.3) является нарушенная внутрипочечная гемодинамика (гиперфильтрация, гиперперфузия почек). Гиперфильтрация характеризуется повышением скорости клубочковой фильтрации (СКФ) выше 140 мл/мин. Для определения СКФ используется проба Реберга—Тареева, основанная на исследовании клиренса эндогенного креатинина в сутки (см. «Клиренс эндогенного креатинина»).

Таблица 4.3. Стадии развития диабетической нефропатии [Mogensen C.E., 1983]

Стадия ДН Клинико-лабораторная характеристика Сроки развития
Гиперфункция почек Увеличение СКФ более 140 мл/мин, В начале заболевания
увеличение почечного кровотока,
гипертрофия почек,
нормоальбуминурия (менее 30 мг/ сут)
Стадия начальных структурных Утолщение базальных мембран капил- 2—5 лет
изменений ткани почек ляров клубочков,
расширение мезангиума,
сохраняется высокая СКФ,
нормоальбуминурия (менее 30 мг/ сут)
Начинающаяся нефропатия Микроальбуминурия (30—300 мг/сут), 5-15 лет
СКФ высокая или нормальная,
нестойкое повышение АД
Выраженная нефропатия Протеинурия (более 500 мг/сут), 10-25 лет
СКФ нормальная или умеренно сни-
женная,
артериальная гипертензия
Уремия Снижение СКФ менее 10 мл/мин, Более 20 лет от начала
артериальная гипертензия, заболевания или 5—7 лет
симптомы интоксикации от появления протеинурии

Лабораторными критериями, характеризующими развитие выраженной стадии диабети­ческой нефропатии, являются протеинурия (как правило, при неизмененном осадке мочи), снижение скорости клубочковой фильтрации и нарастание азотемии (концентрации мочеви­ны и креатинина в сыворотке крови). У 30 % больных развивается нефротический синдром, признаками которого являются массивная протеинурия (более 3,5 г/сут), гипоальбуминемия, гиперхолестеринемия. С момента появления постоянной протеинурии темп снижения СКФ составляет в среднем 2 мл/мин в мес, что приводит к развитию терминальной почечной не­достаточности уже через 5—7 лет после выявления протеинурии.

На стадии хронической почечной недостаточности (ХПН) лабораторные исследования позволяют определять тактику ведения больных с сахарным диабетом.

• При развитии ХПН у больных с ИЗСД резко снижается суточная потребность в инсу­
лине, в связи с этим возрастает частота гипогликемических состояний, что требует
снижения дозы инсулина.

• Больных с ИНСД, принимающих перорально препараты, снижающие концентрацию
глюкозы в крови, при развитии ХПН рекомендуется переводить на инсулинотерапию,
поскольку большинство этих препаратов метаболизируется и выводится почками.

• При содержании креатинина в сыворотке крови более 500 мкмоль/л необходимо ре­
шать вопрос о подготовке больного к гемодиализу.

• Содержание креатинина в сыворотке 600—700 мкмоль/л (8—9 мг%) и клубочковая филь­
трация менее 10 мл/мин являются показанием к проведению трансплантации почки.

• Повышение креатинина в сыворотке крови до 1000—1200 мкмоль/л (12—16 мг%) и
снижение клубочковой фильтрации менее 10 мл/мин являются показанием к проведе­
нию программного гемодиализа.

Почечная недостаточность, связанная с диабетической нефропатией, служит непосред­ственной причиной смерти приблизительно в половине случаев ИНСД у заболевших в дет­ском и юношеском возрасте.

Весьма важной для клинициста является частота проведения лабораторных исследова­ний для наблюдения за динамикой развития диабетической нефропатии. Согласно рекомен­дации экспертов ВОЗ, при отсутствии протеинурии необходимо исследовать наличие микро­альбуминурии:

— у больных с ИЗСД не реже 1 раза в год спустя 5 лет от начала заболевания (при воз­
никновении сахарного диабета после полового созревания) и не реже 1 раза в год с
момента установления диагноза диабета в возрасте до 12 лет;

— у больных с ИНСД не реже 1 раза в год с момента установления диагноза диабета.

При нормальной экскреции альбумина с мочой следует стремиться удерживать фрак­цию гликозилированного гемоглобина на уровне не более чем 6 %.

При наличии протеинурии у больных сахарным диабетом не реже 1 раза в 4—6 мес ис­следуют:

— скорость нарастания протеинурии (в суточной моче);

Специфические белки

Специфические белки крови выполняют различные функции: осуществляют транспорт различных веществ, участвуют в свертывании крови, ингибируют протеолитические фермен­ты, активно участвуют в иммунологических реакциях. Помимо выполнения специфических функций, белки крови участвуют в общих реакциях организма на различные патологические процессы, отражая при этом в определенной степени состояние органов и тканей, что нашло применение в клинической практике.

На течение воспалительной реакции оказывают влияние многие органы, в первую оче­редь печень, с помощью промежуточных метаболитов. Вскоре после начала воспалительного процесса в печени изменяется скорость синтеза, а следовательно, и состав, и количество оп­ределенных видов белков в крови. Белки, синтез которых неспецифически увеличивается в ответ на патологические процессы разного характера (воспаление, повреждение, злокачест­венные новообразования), а также при беременности, называются «реактантами острой фазы воспаления».

Кислый альфа- 1-гликопротеин в сыворотке

Содержание кислого альфа- 1-гликопротеина в сыворотке в норме составляет 13,4—34,1 мкмоль/л.

Кислый альфа-1-гликопротеин (орозомукоид) — белок плазмы крови, наиболее бога­тый углеводами. Углеводная часть представлена несколькими полисахаридными цепочка­ми, присоединенными к полипептидной цепи. Обладает способностью ингибировать ак­тивность протеолитических ферментов, изменять адгезивность тромбоцитов, подавлять им-мунореактивность, связывать многие медикаменты (пропранолол) и некоторые гормоны (прогестерон).

Орозомукоид относится к белкам острой фазы. Его синтез, как реактанта острой фазы, стимулируется липополисахаридами, высвобожденными из макрофагов, активированных интерлейкином-6. Содержание орозомукоида в крови увеличивается при воспалительных процессах (инфекции, ревматические заболевания, травмы, хирургические вмешательства), опухолях. Исследование этого показателя в динамике позволяет оценивать динамику проте­кания воспалительного процесса, а при опухолях, в случае их оперативного лечения, диа­гностировать возникновение рецидива.

Поскольку уровень орозомукоида в крови увеличивается при воспалительных процес­сах, он может связывать повышенное количество принимаемого больным лекарственного препарата, вследствие чего может возникать расхождение между фармакологическим эффек­том и уровнем препарата в крови.

Снижение содержания орозомукоида может быть выявлено в раннем детском возрасте, при беременности (в ранние сроки), тяжелых поражениях печени, нефротическом синдроме, приеме эстрогенов, контрацептивов.

Совместное определение орозомукоида и гаптоглобина в сыворотке крови имеет важное значение для диагностики гемолиза in vivo. Обычно уровни этих двух белков повышаются и снижаются одновременно при острофазовых процессах, если выявляется повышенный уро­вень орозомукоида при нормальном содержании гаптоглобина; это указывает на протекание острофазового процесса с умеренным гемолизом in vivo.

источник