Меню Рубрики

Серологические анализы на антигены и антитела

Что показывает серологический анализ крови? Диагностические мероприятия – это важнейший этап в терапии любого заболевания. Успех лечения зависит не только от назначенных препаратов, но и во многом от того, насколько правильно был поставлен диагноз.

Кроме того, диагностика позволяет предотвратить осложнения и сопутствующие заболевания. С помощью серологического анализа крови пациента выявляют наличие антител и антигенов. Исследование помогает найти множество заболеваний, определить их фазу и контролировать прохождение лечения.

Серологией называется отрасль иммунологии, изучающая реакции антигенов на антитела. Данный раздел медицины занимается изучением плазмы крови и ее иммунологических характеристик.

На сегодняшний день серологический анализ крови на антитела – это надежный способ выявления вируса иммунодефицита человека, гепатита, бруцеллеза, ЗППП и других опасных для жизни заболеваний. Разберемся, в каких случаях его назначают.

Серологический анализ крови необходим для выявления возбудителя болезни при затруднениях в постановке диагноза.

Для проведения этой реакции в плазму вводят антигены возбудителей, а затем протекающий процесс изучает лаборант. Либо осуществляют обратную реакцию: в инфицированную кровь вводят антитела для определения конкретной принадлежности возбудителя.

Данное исследование используют в различных отраслях медицины. С помощью этой реакции выявляют специфические клетки и антитела, вырабатываемые организмом для того, чтобы бороться с инфекциями и вирусами.

Кроме этого, с помощью серологического метода определяется группа крови человека.

Подобное серологическое исследование анализа крови используют в гинекологии для диагностики болезней, передаваемых половым путем. Практикуется такой метод и для комплексных обследований беременных женщин (выявление токсоплазмоза, ВИЧ, сифилиса и т. д.). Прохождение этого теста является обязательным при постановке на учет в женской консультации.

У детей серологическая реакция используется для подтверждения диагноза так называемых «детских» заболеваний (ветрянки, кори, краснухи и т. д.) в том случае, если симптоматика не имеет выраженных проявлений и невозможно выявить болезнь, анализируя клинические показания.

Для венерологов это тестирование поистине незаменимо и позволяет поставить диагноз очень точно.

При смазанной клинической картине серологический анализ крови на сифилис, лямблиоз, уреаплазмоз, хламидиоз, герпес и другие заболевания позволяет быстро выявить наличие антител.

Серологический анализ активно используется гастроэнтерологами, гепатологами и инфекционистами для диагностики вирусного гепатита.

Терапевт также может назначить прохождение этого анализа в случае подозрений на инфекционные и вирусные заболевания. Для того чтобы подтвердить диагноз, проводится серологический анализ крови на паразитов с целью определения специфических антител. Это делается при энцефалите, бруцеллезе, аллергических реакциях.

Расшифровка серологического анализа крови дает возможность определить стадию протекания заболевания и ответить на вопрос, насколько необходима госпитализация в данный момент. Как правильно подготовиться?

Серологический анализ крови делают и в государственных, и в коммерческих клиниках. Предпочтение стоит отдать лаборатории, располагающей современным оборудованием и квалифицированным персоналом.

Биологическими образцами для исследования могут быть слюна и кал, но в большинстве случаев используется венозная кровь больного. Кровь для серологического теста берут из локтевой вены в условиях лаборатории. Перед тем как сдавать анализ, следует проконсультироваться с врачом по поводу подготовки к этой процедуре.

Для подготовки к сдаче анализа на серологическое исследование нужно соблюсти несколько несложных правил.

Кровь сдают в спокойном состоянии до приема пищи, то есть натощак. Перед этим не следует проходить другие исследования, например делать рентген, УЗИ и т. д.

Нужно исключить прием антибактериальных и некоторых других препаратов за несколько недель до сдачи крови. Определенные рекомендации в этом случае зависят от того заболевания, на которое делается тест. К примеру, исследование на гепатит предполагает исключение жирной пищи и алкоголя за 48 часов до процедуры.

Среди разновидностей серологических реакций существует реакция флюоресценции. По этой методике используется реагент, подсвечивающий антитела в сыворотке крови.

Постановка серологической реакции прямого типа предполагает маркировку специфических антител флюоресцирующим веществом. Такая реакция является самой быстрой и проводится одноэтапно.

Другой вариант проведения такого анализа имеет название непрямого, или РНИФ. Проводится он в два этапа. На первом этапе антитела не маркируются флюоресцирующими метками, а на втором применяются соответственно отмеченные антитела для определения антигенов и антител. Свечение возникает только после того, как происходит связывание со специфическим антителом.

Что же показывает серологический анализ крови? Итог всей процедуры оценивает специальный прибор, который анализирует силу излучения, выявляет форму и размер исследуемого объекта. Возбудители инфекционных заболеваний выявляются с результатом, достоверность которого составляет 90-95 %, в зависимости от вида и стадии патологии.

В этих видах серологического исследования применяются уникальные стабильные реагенты. Отмеченные вещества как бы приклеиваются к искомым антителам. В итоге мы получаем качественный или количественный результат.

Если выраженных маркеров не обнаружилось, то результат будет считаться отрицательным. Если присутствие антител в биологических образцах при качественном исследовании обнаружено, то результат анализа считается положительным. При количественном определении клеток анализ дает более точный результат.

Анализируя показатели анализа (например, сумму выявленных клеток) специалист определяет, находится ли заболевание на начальном этапе, в острой стадии, или это обострилась хроническая форма патологии. Для того чтобы поставить диагноз, врач учитывает не только данные серологического исследования, но и клиническую картину заболевания.

Проведение данного анализа не всегда способно дать 100%-ную уверенность в том, что определенное заболевание обнаружено. Бывает так, что результаты могут быть неоднозначными и требуется проведение других процедур.

Например, во время исследования на бруцеллез сыворотка крови проходит контроль на самозадержку без антигена. Это существенно повышает достоверность тестирования. Анализ на бруцеллез может иметь положительное или отрицательное значение, а также вызывать сомнения.

При получении сомнительных результатов, не имеющих однозначной трактовки, рекомендовано сдать анализ повторно. Кроме того, бруцеллез можно выявить в результате посевов крови, исследовав костный мозг и спинно-мозговую жидкость.

Диагностические методики с использованием серологических реакций обширно используются в современной медицинской практике. Особенно часто это делается при определении вирусных и инфекционных патологий.

Эти же анализы применяются при проведении географического скрининга и медицинского обследования с целью предупреждения эпидемиологического распространения инфекции.

К достоинствам метода можно отнести:

  • Высокий уровень достоверности.
  • Быстрое проведение реакции и получение результатов. Результаты РСК известны уже через 24 часа. При особой ситуации, в условиях стационара, анализ будет готов через несколько часов.
  • Осуществление контроля развития болезни и эффективности проводимой терапии.
  • Невысокая стоимость и доступность для пациентов.

Однако серологические исследования имеют и свои недостатки.

К ним относится тот факт, что при проведении анализа следует учитывать инкубационный период заболевания, для того чтобы получить более достоверную картину.

К примеру, определение простого герпеса первого или второго типа возможно лишь спустя 14 дней с момента заражения. Анализ на наличие вируса иммунодефицита проводят через 30 дней, через 90 дней и спустя полгода после контакта с инфицированным человеком.

Безусловно, на достоверность результатов может оказывать влияние и человеческий фактор: пренебрежение правилами подготовки к забору крови или ошибка, допущенная лаборантом при проведении реакции.

По статистике, ошибочный результат может быть получен в 5 % случаев. Опытный врач при обследовании пациента, изучив клиническую картину, в большинстве случаев может вычислить допущенную ошибку.

источник

Иммунологические методы применяют для решения многих задач:
1.Оценка состояния иммунной системы человека (иммунного статуса) по определению количественных и функциональных характеристик клеток иммунной системы и их продуктов.
2. Определение состава и характеристик тканей человека: групп крови, резус фактора, трансплантационных антигенов.
3. Диагностика инфекционных болезней и резистентности к ним по обнаружению и установлению титров антител (серодиагностика), выявлению антигенов возбудителей в организме, определению клеточных реакций на эти антигены.
4. Сероидентификация культур бактерий и вирусов, выделенных из организма человека и животных.
5. Выявление в организме человека и во внешней среде любых веществ, обладающих антигенными или гаптенными свойствами (гормоны, ферменты, яды, лекарства, наркотики и т.п.).
6. Выявление иммунопатологических состояний, аллергий, трансплантационных и противоопухолевых реакций.

В основе иммунологических методов лежат серологические реакции, для постановки которых используют сыворотку (serum), содержащую антитела (основаны на взаимодействии антигенов и антител) и клеточные реакции, базирующиеся на взаимодействии антигенов (аллергенов) с Т-клетками.
Иммуномикробиологические исследования — вид микробиологического экспресс-анализа по выявлению специфических антител и антигенов.

Процесс взаимодействия антигена и антитела в серологических реакциях протекает в две фазы:
1) специфическая — фаза взаимодействия, в которой происходит комплементарное соединение активных центров антител (паратопов) и эпитопов антигена. Обычно эта фаза длится несколько секунд или минут;
2) неспецифическая — фаза проявления, характеризуется внешними признаками образования иммунных комплексов. Эта фаза может развиваться от нескольких минут до нескольких часов.
Оптимальное специфическое взаимодействие антител с антигеном происходит в изотоническом растворе с рН, близким к нейтральному. Реакция антиген-антитело в системе in vitro может сопровождаться возникновением нескольких феноменов — агглютинации, преципитации, лизиса. Внешние проявления реакции зависят от физико-химических свойств антигена (размер частиц, физическое состояние), класса и вида антител (полные и неполные), а также условий опыта (консистенция среды, концентрация солей, рН, температура).

Поливалентность антигенов и антител обеспечивает возникновение видимых невооруженным глазом агрегатов. Это происходит в соответствии с теорией образования сетей, согласно которой к образовавшемуся комплексу антиген-антитело последовательно присоединяются другие молекулы антител и антигена. В результате формируются сетевые структуры, которые превращаются в агрегаты, выпадающие в осадок. Характер и выраженность реакции зависят от количественного соотношения антигенов и антител. Наиболее интенсивно реакции проявляются в том случае, если реагенты находятся в эквивалентном соотношении.

Рис. 1. Схема взаимодействия антигена с антителами.

Необходимое условие образование решетки (сетей) — наличие более трех антигенных детерминант на каждую молекулу антигена и по два активных центра на каждую молекулу антитела. Молекулы антигена являются узлами решетки, а молекулы антител — связующими звеньями. Область оптимальных соотношений (зона эквивалентности) концентраций антигена и антител, когда в надосадочной жидкости после образования осадка не обнаруживаются ни свободные антигены, ни свободные антитела.
Агрегаты, способные выпадать в осадок, образуются при соединении антигенов с полными антителами. Неполные антитела (моновалентные) не вызывают образования сетевых структур и крупных агрегатов. Для выявления таких антител используют специальные методы, основанные на использовании антиглобулинов (см. реакцию Кумбса).
Серологические реакции, благодаря высокой специфичности и чувствительности, применяют для выявления и количественного определения антигенов и антител. Количество иммунореагентов в реакциях выражают титром— максимальным разведением сыворотки или антигена, при котором еще наблюдается реакция.
Серологические реакции в микробиологических и иммунологических лабораториях используют в двух целях:
1) для сероидентификации микроорганизмов, токсинов, антигена вообще с помощью известного антитела (иммунной диагностической сыворотки),
2) для серодиагностики — определения природы антитела в сыворотке крови больного при бактериальных, вирусных, реже других инфекционных заболеваниях с помощью известного антигена (диагностикума).
Для определения родовой, видовой и типовой принадлежности антигена необходимы заведомо известные иммунные диагностические сыворотки. Их получают путем многократного введения животным (чаще кроликам) в нарастающих дозах убитых или живых микроорганизмов, продуктов их распада, обезвреженных или нативных токсинов. После определенного цикла иммунизации животных делают массивное кровопускание или тотальное обескровливание животного. Кровь, собранную в стерильную посуду, сначала помещают в термостат при температуре 37°С на 4 — 6 ч для ускорения свертывания, затем — в ледник на сутки. Полученную прозрачную сыворотку отсасывают в стерильную посуду, добавляют консерванты, определяют титр антител, проверяют на стерильность и разливают в ампулы.
Используются неадсорбированные и адсорбированные диагностические сыворотки. Неадсорбированные сыворотки обладают высокими титрами антител, но способны давать групповые (перекрестные) реакции. Адсорбированные сыворотки отличаются строгой специфичностью действия (реагируют только с гомологичным антигеном). Сыворотки, содержащие антитела только к одному определенному антигену называются монорецепторными.
Выпускают также сыворотки, меченные флюорохромами, ферментами, радиоизотопами, которые позволяют с высокой степенью точности обнаружить даже следы антигена.
В качестве антигенов(диагностикумы) в серологических реакциях применяют взвеси живых или убитых бактерий, продуктов их расщепления, токсины, вирусы. В ряде случаев используют экстракты или выделенные химическим путем антигены из микроорганизмов и тканей животных.

Все иммуномикробиологические методы можно разделить на 3 группы:
1) основанные на прямом взаимодействии антигена с антителом (феномены агглютинации, преципитации, гемагглютинации, иммобилизации и др.);
2) основанные на опосредованном взаимодействии антигена с антителом (реакции непрямой гемагглютинации, коагглютинации, латекс-агглютинации, угольной аггломерации, бентонит-агглютинации, связывания комплемента и др.);
3) с использованием меченых антител или антигенов (метод флюоресцирующих антител, иммуноферментный и радиоиммунный анализы и другие методы).

В этих реакциях принимают участие антигены в виде частиц (микробные клетки, эритроциты и другие корпускулярные антигены), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок.
Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компонента: 1) антиген (агглютиноген); 2) антитело (агглютинин) и 3) электролит (изотонический раствор натрия хлорида).

Ориентировочная реакция агглютинации (РА)
Ориентировочная, или пластинчатая, РА ставится на предметном стекле при комнатной температуре. Для этого пастеровской пипеткой на стекло наносят раздельно каплю сыворотки в разведении 1:10 — 1:20 и контрольную каплю изотонического раствора натрия хлорида. В ту и другую бактериологической петлей вносят колонии или суточную культуру бактерий (каплю диагностикума) и тщательно перемешивают их. Реакции учитывают через несколько минут визуально, иногда с помощью лупы (х5). При положительной РА в капле с сывороткой отмечают появление крупных и мелких хлопьев, при отрицательной — сыворотка остается равномерно мутной.

Рис. 2. Ориентировочная реакция агглютинации.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА)
Реакция ставится: 1) для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий и других высокодисперстных веществ, риккетсий и вирусов, комплексы которых с агглютининами в обычных РА увидеть не удается, или 2) для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперстным веществам и мельчайшим микроорганизмам.
Под непрямой, или пассивной, агглютинацией понимают реакцию, в которой антитела взаимодействуют с антигенами, предварительно адсорбированными на инертных частицах (латекс, целлюлоза, полистерол, оксид бария и др. или эритроциты барана, I(0)-группы крови человека)
В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика). Если нагрузить эритроциты антителами (эритроцитарный антительный диагностикум), то можно применять для выявления антигенов.

Читайте также:  Анализ антитела эритроциты или лейкоциты

Рис. 3. Схема РПГА: эритроциты (1), нагруженные антигеном (3), связываются специфическими антителами (4).

Постановка. В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных разведений сыворотки. В предпоследнюю лунку вносят — 0,5 мл заведомо положительной сыворотки и в последнюю 0,5 мл физиологического раствора (контроли). Затем во все лунки добавляют по 0,1 мл разведенного эритроцитарного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 2 ч.
Учет. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном — оседают в виде пуговки или колечка.

Рис.4. Учет РНГА (РПГА).

Реакции преципитации (РП) основаны на фенoмене образования видимого осадка (преципитата) или общего помутнения среды после взаимодействия растворимых либо находящихся в коллоидном дисперсном состоянии Аг с АТ. РП ставят в специальных узких пробирках. В качестве реагентов используют гипериммунные преципитирующие сыворотки с высокими титрами АТ к гомологичным Аг. РП позволяет быстро (в течение нескольких секунд) выявлять незначительные количества Аг (можно выявить антиген в таких малых количествах, которые не обнаруживаются химическим путем). Они очень чувствительны, и их применяют для тонкого иммунохимического анализа, выявляющего отдельные компоненты в смеси антигена.

Рис. 5. Схемы реакций преципитации в пробирке (А) и агаре (Б).

Реакция кольцепреципитации Асколи
Постановка.В узкую пробирку диаметром 0,5 см с неразведенной преципитирующей сывороткой в количестве 0,3-0,5 мл, держа ее в наклонном положении, пастеровской пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем антигена. Пробирку осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально. При правильном наслоении преципитиногена на сыворотку четко обозначается граница между двумя слоями жидкости. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.
Учет.Результаты реакции учитывают в зависимости от вида антигена и антител через 5-10 мин, 1-2 ч или через 20-24 ч. В случае положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК)

РСК широко используют для лабораторной диагностики венерических болезней, риккетсиозов, вирусных инфекций. Реакция протекает в две фазы. Первая фаза — взаимодействие антигена и антител при обязательном участии комплемента. Вторая — выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если же комплемент адсорбировался ранее на комплексе антиген-антитело, то гемолиз эритроцитов не наступает.
При наличии в исследуемой сыворотке антител, комплементарных антигену, образующийся комплекс антиген-антитело связывает (адсорбирует) на себе комплемент. При добавлении гемолитической системы гемолиза не происходит (задержка гемолиза), т.к. весь комплемент израсходован на специфическую связь комплекса антиген-антитело, а эритроциты остались неизменными.
При отсутствии в сыворотке антител, комплементарных антигену, специфический комплекс антиген-антитело не образуется и комплемент остается не связанным. Поэтому при добавлении гемолитической системы комплемент присоединяется к ней. Результатом реакции в данном случае будет гемолиз эритроцитов — в пробирках образуется так называемая «лаковая» кровь.

Рис. 6. Схема РСК: а — индикаторная система (эритроциты барана и антитела к ним) в присутствии комплемента определяется в виде гемолиза; б — с сывороткой больного диагностикум (Аг) образует иммунные комплексы и активирует комплемент, результат — задержка гемолиза; в — в сыворотке здорового человека антител нет, комплемент активируется индикаторной системой, результат — гемолиз.

РЕАКЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕЧЕННЫХ АТ И Аг

Реакции с использованием меченных антител и антигенов составляют основу методов экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, так как выявляют минимальное содержание Аг и АТ в исследуемых образцах. В качестве меток могут быть использованы различные ферменты, красители флюорохромы и изотопы.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Данный метод является экспрессным и высокочувствительным. Существуют две его разновидности.
При прямомметоде к исследуемой взвеси микробов, фиксированной на стекле, добавляют сыворотку, меченную флуорохромом. Образующийся комплекс антиген-антитело при освещении ультрафиолетовыми (сине-фиолетовыми) лучами дает ярко-зеленое свечение.
Принепрямом РИФ используют обычные диагностические сыворотки против какого-либо вида микробов. Добавление этой сыворотки к испытуемой взвеси микробов вызывает образование комплекса антиген-антитело. Этот комплекс выявляется с помощью универсальной флюоресцирующей сыворотки, содержащей антитела к гаммаглобулиновой фракции крови того вида животного, от которого была получена диагностическая сыворотка.
Светящийся комплекс выявляют при люминесцентной микроскопии.

Рис. 7. Реакция иммунофлюоресценции (схема).

Иммуноферментный анализ (ИФА)
В основе иммуноферментного анализа лежит известная иммунная реакция антигена и антитела. Один из этих реагентов является определяемым веществом, а другой — узнающим, обладающим известной стандартной специфичностью (избирательностью) по отношению к определяемому веществу.
Для выявления образовавшихся иммунных комплексов (антиген-антитело) используется фермент, которым предварительно метится узнающий компонент (антиген или антитело). Сам фермент, естественно, не виден, поэтому визуализация присутствия вещества, определяемого методом ИФА, достигается применением посредника — хромогена. Это особое химическое соединение, которое хорошо растворимо в воде, и раствор которого бесцветен. Превращение бесцветного хромогена в цветное веществохромофор происходит под действием фермента, для которого хромоген является субстратом.

Рис. 8. Иммуноферментный анализ (схема).

Тема 26.Иммуномикробиологические исследования. Реакции агглютинации и преципитации.

  • Иммуномикробиологические исследования.
  • Иммунологические реакции выявления специфических антигенов.
  • Иммунологические реакции выявления специфических антител.
  • Реакции нейтрализации.
  • Определение групп крови.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Серология – наука, изучающая сыворотку крови человека и её свойства. В современной медицине так называют один из разделов иммунологии, уделяющий основное внимание взаимодействию антител и антигенов в сыворотке крови пациента. Сами серологические реакции по своему механизму действия могут быть двух видов:

  1. Двухкомпонентная или прямая реакция. Сюда относят реакцию агглютинации и пассивной гемагглютинации.
  2. Трёхкомпонентная или косвенная реакция. В этом случае речь идёт о реакции нейтрализации или торможения гемагглютинации.

При их комбинации могут возникать бактериолиз, реакция связывания комплимента и т.д. Серологические реакции широко используются как в диагностической, так и в научной практике.

Определение группы крови, переливание крови и плазмы, определение специфичности белка, контроль эффективности вакцинации и выявление агента инфицирования – всё это стало возможно только благодаря серологическим реакциям.

Также к задачам серологии можно отнести изготовление различных диагностических и лечебных сывороток с постоянным контролем их воздействия на организм пациента.

Образование иммунных комплексов или соединение антител с антигенами носит название серологической реакции и может использоваться в диагностике заболеваний двумя путями:

  1. Введение в сыворотку крови человека точно известного антигена возбудителя и по происходящей химической реакции определение антител для содержащихся в организме патологических клеток.
  2. Добавление к сыворотке крови пациента определённых антител с целью выявления антигена, соответствующего конкретному микроорганизму или вирусу, вызвавшему патологический процесс в организме.

Серологический анализ крови показан больным в определённых случаях. Его применяют при возникновении затруднений при проведении дифференциальной диагностики инфекционного заболевания, когда только выявление конкретного возбудителя позволит поставить правильный диагноз пациенту. Также большая польза от этого метода сказывается при назначении медикаментозного лечения, так как возбудители различных заболеваний резко отличаются своей восприимчивостью к современным антибиотикам, сульфаниламидам и другим лекарственным препаратам.

Одним из основных видов серологического исследования является иммуноферментный анализ крови. Он проводится с целью контроля качественного или количественного содержания антигенов и антител в сыворотке крови пациента. Кроме этого данный метод даёт возможность определить количество гормонов, иммунологических комплексов и других биологических веществ в сыворотке.

Как было указано выше, при попадании в органы и ткани антигенов иммунная система блокирует их воздействие на организм с помощью собственных специальных белков – антител или иммуноглобулинов. Под их воздействием происходит образование комплекса антиген – антитело.

Именно его количественный и качественный анализ и является основой иммуноферментного метода.

Основным биологическим материалом этого лабораторного метода является кровь пациента, хотя исследования спинномозговой жидкости, околоплодных вод, лёгочного пунктата тоже представляют большую ценность в диагностике и лечении многих заболеваний.

Иммуноферментный анализ крови как составляющая серологического анализа основной упор делает на исследование иммунных молекул крови или иммуноглобулинов. Их специфическая особенность обнаруживать и уничтожать определённые возбудители инфекционных болезней, кооперируясь с конкретным антигеном, широко используется для проведения данного исследования.

Из известных в медицинском мире пяти типов иммуноглобулинов широкий клинический эффект получил контроль за наличием в сыворотке крови иммуноглобулинов A, M, и G. Особенно важен иммуноглобулин A, который за счёт своего присутствия на поверхности слизистых оболочек препятствует проникновению чужеродного агента в организм. Важно и то, что возможность определения типа иммуноглобулина при этом исследовании позволяет не только ставить правильный диагноз, но и прогнозировать течение болезни с большим процентом вероятности.

Анализ на ВИЧ (форма 50) призван выявить наличие антител, которые образовались в организме инфицированного — ответ на заражение вирусом иммунодефицита человека: https://krasnayakrov.ru/analizy-krovi/analiz-krovi-na-vich.html

К главным достоинствам иммуноферментного анализа крови относятся:

  • Возможность выявления наличия в организме пациента патологии на ранних стадиях.
  • Постоянный контроль за развития болезни.
  • Быстрота и точность получаемого результата.
  • Отсутствие необходимой подготовки больного к исследованию и финансовая доступность метода.

К недостаткам данного метода лабораторной диагностики можно отнести получаемый в редких случаях ложноотрицательный анализ, что влечёт за собой необходимость периодического контрольного тестирования.

Широкое применение иммуноферментный анализ крови получил при диагностике вирусных заболеваний, урогенитальных инфекций, патологии эндокринной системы, онкологии, аллергологии и многих других заболеваний. Этот метод также востребован при проведении анонимного исследования на наличие ВИЧ, сифилиса и гепатита С. Это особенно важно при наличии явно неблагоприятной эпидемиологической обстановки с этими заболеваниями в стране и в мире.

Серологический или иммуноферментный анализ на сегодняшний день является мощным и важным методом диагностики многих тяжёлых заболеваний, в том числе и социальных.

Хотелось бы надеяться, что наши медики продолжат широко использовать и усовершенствовать такой необходимый для широкого круга больных метод лабораторной диагностики.

Серологический анализ крови позволяет выявить у пациента наличие заболевания, вызванного проникновением в организм инфекции. После его проведения врачами-лаборантами производится расшифровка полученных данных, которые позволяют клиницистам более полно судить о патологическом процессе. Опуская всю профессиональную терминологию, можно сказать, что отсутствие в крови проверяемого антител является положительным результатом и отрицает наличие у него инфекционного заболевания. Но это единичные случаи. Обычно при наличии соответствующей симптоматики серологический анализ крови является последним доводом о присутствии серьёзной патологии.

В этом случае процедура повторяется дважды. Сначала диагностируют наличие возбудителя заболевания, а потом по росту антител определяют степень прогрессивности процесса. Наличие возрастания образования комплексов «антиген-антитело» характеризует скорость заражения человека.

Нормой при проведении серологического анализа крови является нулевое содержание антител. Любой повышенный результат свидетельствует о наличии патологического процесса в организме пациента и требует в большинстве случаев различных дополнительных методов исследования.

источник

Серологические исследования — методы изучения взаимодействия антигенов с антителами в сыворотке крови. Серологическая диагностика базируется на определении специфических антител, которые образуются в процессе иммунного ответа, вызванного проникновением антигена — возбудителя заболевания.

Серологические реакции (реакции «антиген-антитело») применяются для определения антигенов групп крови, в диагностике заболеваний, в судебной медицине для идентификации тканевых, микробных антигенов.

Название «серология» — от латинских слов serum (сыворотка) и logos (знание) — учение о сыворотке крови и ее свойствах.

Серологические реакции:
реакции агглютинации
реакции преципитации
реакции нейтрализации
реакции с участием комплемента
реакции с использованием меченых антител или антигенов
— реакция агглютинации хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител.
— реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют lgA-антитела и lgE-антитела.

Иммунологические исследования позволяют идентифицировать вирусные, бактериальные, паразитарные заболевания, определять титры антител к ним, что позволяет оценивать устойчивость организма к отдельным видам инфекционных заболеваний и прогнозировать их развитие.
Чувствительность И.м.и. превосходит все другие методы исследования антигенов и антител — с их помощью определяют группу и проверяют безопасность крови (гепатит В и ВИЧ-инфекция), при трансплантации тканей и органов определяется совместимость тканей.

Антиген — вещество, которое распознается организмом как чужеродное, и способное запускать иммунную (защитную) реакцию.

Антитела (иммуноглобулины -IgG, IgA, IgM, IgD, IgE) — белки, образующиеся в ответ на проникновение в организм антигена. Связываясь активными участками (антигенными детерминантами) с бактериями или вирусами, антитела препятствуют их размножению, нейтрализуют выделяемые ими токсические вещества.
Реакции агглютинации.

Это реакции, основанные на феномене агглютинации — склеивании носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену. Корпускулярные антигены (крупные частицы — микробные клетки, эритроциты, лейкоциты и т.д., склеиваются антителами и выпадают в осадок на дно пробирки в виде иммунных комплексов в форме хлопьев или зерен, видимых невооруженным глазом).

Различают:
прямые реакции агглютинации, используемые для выявления антител в сыворотке крови больного.
Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям. Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при t°37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация. Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных заболеваний: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, бациллярной дизентерии, сыпного тифа.

Читайте также:  Анализ антитела гепатита с результат

Реакции агглютинации для определения группы крови и резус-фактора основаны на взаимодействии аллоантител (изоантител) и антигенов эритроцитов. Для их обнаружения используют реакцию Кумбса, основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток.

К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, антиглобулиновую сыворотку против lgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов.

реакция пассивной, или непрямой гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами, взаимодействие которых с соответствующими антителами сыворотки крови больных приводит к образованию фестончатого осадка. Используется для определения беременности, выявления повышенной чувствительности больных к лекарственным препаратам и гормонам;
В реакции пассивной (непрямой), гемагглютинации (РПГА, РНГА) используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител.

Эритроциты, сенсибилизированные антителами. называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.

Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.

реакция торможения гемагглютинации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате теряют свойство склеивать эритроциты. Используется для диагностики вирусных болезней;
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на феномене предотвращения (торможении) иммунной сыворотки гемагглютинации эритроцитов вирусами, используется для выявления и титрования противовирусных антител. Она служит основным методом серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители которых обладают гемагглютинирующими свойствами. например, для серодиагностики клещевого энцефалита в лунки панели разливают двукратные разведения сыворотки больного на щелочном боратном буферном растворе. Затем добавляют определенное количество, обычно 8 АЕ (агглютинирующих единиц), антигена клещевого энцефалита и после 18 ч экспозиции при t°4° вносят взвесь гусиных эритроцитов, приготовленную на кислом фосфатно-буферном растворе. Если в сыворотке крови больного есть антитела к вирусу клещевого энцефалита, то антиген нейтрализуется и агглютинация эритроцитов не происходит

реакция коагглютинации — разновидность реакции агглютинации, в которой антигены возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой.
Реакции преципитации.

Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело. Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез), которые носят одновременно качественный и количественный характер.

В результате свободной диффузии в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы — полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген — антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител

Реакция связывания комплемента (РСК) основаны на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам, позволяют титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген — антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.

Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (СЗ). Если к антигену (бактериям, вирусам и др.) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген — антитело, покрытый СЗ-компонентом комплемента. Эту реакцию применяют при изучении ряда вирусных инфекций (клещевого энцефалита, денге), которые сопровождаются иммунопатологическими процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.

Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.

Реакции с использованием химических и физических меток

Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген — антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции. основанный на выявлении комплекса антиген — антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t° 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.

Иммунологические методы исследования основаны на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для определения групп крови, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных заболеваний, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, в научно-исследовательской работе. Они включают серологические исследования (реакции прямого воздействия антигенов и антител сыворотки крови).

При переливании крови и ее компонентов клинически значимыми являются группы крови по следующим системам:

— система АВ0, включающая антигены А, В;

— система Резус, включающая антиген Резус-принадлежности класса D и антигены эритроцитов С, с, Е, е;

— система Келл, включающая антигены эритроцитов класса К.

Исследование образцов донорской крови для определения групп крови по системам АВ0, Резус-принадлежности, определения фенотипа антигенов эритроцитов по системам Резус и Келл, скрининга антиэритроцитарных аллоантител.

Иммунологические методы: метод агглютинации, основанный на слипании и выпадении в осадок частиц (агглютинатов), корпускулярного антигена под воздействием антител (агглютининов) — для определения групп крови по системам АВ0, Резус-принадлежности и фенотипа антигенов эритроцитов по системам Резус и Келл; метод гемагглютинации, основанный на способности эритроцитов с адсорбированными антигенами или антителами агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток или соответствующих антигенов с образованием гемагглютинатов (определение Резус-принадлежности, фенотипа антигенов эритроцитов по системам Резус и Келл, скрининга антиэритроцитарных аллоантител).

Группа крови по системе АВ0 определяется перед каждым взятием у донора крови или ее компонентов с использованием моноклональных антител специфичности анти-А, анти-В одной серии реактивов;повторное определение группы крови по системе АВ0 проводится из образца донорской крови, взятого во время донации перекрестным способом со стандартными эритроцитами А, В

Резус-принадлежность определяется наличием или отсутствием антигена D, выявляемого при исследовании образца донорской крови, взятого во время донации;Резус-принадлежность устанавливается как положительная при наличии антигена D и как отрицательная при отсутствии антигена D; производится типирование антигенов эритроцитов С, с, Е, е системы Резус;определения антигена эритроцитов К системы Келл;скрининг антиэритроцитарных аллоантител донорской крови;устанавливается специфичность антител к антигенам эритроцитов.

Метод иммунохемилюминесцентного анализа, основанный на выявлении комплекса «антиген-антитело» при взаимодействии антигенов со специфическими антителами для определения маркеров вирусов иммунодефицита человека, гепатитов В и С и возбудителя сифилиса

Метод пассивной гемагглютинации, основанный на способности эритроцитов с адсорбированными растворимыми антигенами агглютинироваться в присутствии специфической иммунной сыворотки с образованием гемагглютинатов, — используется для определения маркеров возбудителя сифилиса

Метод преципитации, основанный на взаимодействии эквивалентных количеств мелкодисперсных растворимых антигенов (преципитиногенов) с соответствующими антителами (преципитинами) с образованием комплекса антиген-антитело (преципитата) и последующим выпадением данного комплекса в осадок, — используется для выявления неспецифических антител к кардиолипиновому антигену при диагностике сифилиса;

антитела к эритроцитарным антигенам

гемолитическая болезнь новорожденных

Определение группы крови системы АВО (простая и перекрестная реакция). Определение группы крови системы Резус
Фенотипирование антигенов эритроцитов всех известных систем.
Выявление, определение активности и специфичности аллоиммунных антиэритроцитарных антител классов IgG и IgM.
Определение аутоиммунизации к антигенам эритроцитов. Индивидуальный подбор эритроцитсодержащих компонентов для переливания.
Диагностика иммуноконфликтной беременности и гемолитической болезни новорожденных.
Иммунологические исследования (анализ крови):

Определение цитокинов в периферической крови
Уровень интерферона и секреция его лейкоцитами (пробирка с гепарином)
Определение фагоцитарной активности (пробирка с гепарином)
Определение спонтанной миграции — моноцитов и нейтрофилов ( пробирка с гепарином)
Окислительная активност
ь фагоцитарных клеток (пон, вт, ср, чтв. до 1100, пробирка с гепарином)
Иммуноглобулины IgE, IgM, IgG, IgA
Определение Rh-фактора
Определение антирезусных антител
Определение антирезусных антител с раститровкой
Определение антигрупповых антител
Определение совместимости крови супругов с определением группы и Rh-фактора
Определение антифосфолипидных антител (lgG+ IgM)
Определение антинуклеарных антител
Определение антител к ДНК
Определение антиспермальных антител в крови (общие)
Определение антиспермальных антител в сперме IgG
Определение антиовариальных антител
Определение антител к Zona pellucida
Определение ревматоидного фактора с латексом
Определение антистрептолизина «0»
Определение С-реактивного белка (качественное)
Определение С-реактивного белка (количественное)
Исследования на сифилис:

Иммуноферментный анализ (IgG)
Обследование на сифилис (иммуноферментный анализ) с раститровкой
Реакция микроагглютинации на сифилис
Исследования на гепатит А:
Антитела класса IgM
Исследования на гепатит В:
Австралийский антиген — HBsAg
НbсогАb — общие
Определение числа копий вируса гепатита В (вирусная нагрузка)
НВеАg
ПЦР (пробирка с ЭДТА)
AнтиHBsAd
b — иммуноглобулины М
АнтиНВеАb
Исследования на гепатит С:

Антитела (общие)
Анализ крови на антитела к NS3, NS4, NS5, cor
ПЦР (пробирка с ЭДТА)
Генотипирование вируса гепатита «С» (пробирка с ЭДТА)
Определение числа копий вируса гепатита «С» (вирусная нагрузка) real-time PCR (пробирка с ЭДТА)
Определение антител IgM
Исследование на краснуху:
Определение антител IgG
Определение антител IgA
Определение антител IgG
Чувствительность к антибиотикам (эппендорф с трансп. ср)
Определение антител IgM
Исследования на герпес I+II типов:
Определение антител к предранним белкам вируса герпеса — маркеру обострения хронической инфекции
Определение антител к вирусу герпеса IgG
Исследование на вирус герпеса 6 типа (синдром хронической усталости) методом ПЦР (пробирка с ЭДТА)
Исследование на вирус герпеса 7 типа (синдром хронической усталости) методом ПЦР (пробирка с ЭДТА
Исследование на вирус Эпштейна-Барра:

Определение антител к вирусу Эпштейна-Барра, IgM
Определение антител к вирусу Эпштейна-Барра, IgG
Определение IgG к капсидному антигену
анализ по капле крови

источник

Анализы крови на антигены и антитела

Антигеном называется вещество (чаще всего белковой природы), на которое иммунная система организма реагирует как на врага: распознает, что оно чужеродное, и делает все, чтобы его уничтожить.

Антигены расположены на поверхности всех клеток (то есть как бы «на виду») всех организмов – они имеются и у одноклеточных микроорганизмов, и на каждой клетке такого сложного организма, каким является человек.

Нормальная иммунная система в нормальном организме не считает собственные клетки врагами. Но когда какая-нибудь клетка становится злокачественной, то она приобретает новые антигены, благодаря которым иммунная система распознает – в данном случае – «изменницу» и вполне способна ее уничтожить. К сожалению, это возможно только в начальной стадии, так как злокачественные клетки очень быстро делятся, а иммунная система справляется только с ограниченным количеством врагов (это относится и к бактериям).

Антигены некоторых видов опухолей могут быть выявлены в крови даже, как предполагается, еще здорового человека. Такие антигены называются опухолевыми маркерами . Правда, эти анализы являются весьма дорогостоящими, и к тому же они не строго специфичны, то есть определенный антиген может присутствовать в крови при разных видах опухолей и даже необязательно опухолей.

В основном анализы на выявление антигенов делаются людям, у которых уже выявлена злокачественная опухоль, – благодаря анализам можно судить об эффективности лечения.

Этот белок вырабатывается клетками печени плода, в связи с чем обнаруживается в крови беременных женщин и даже служит своего рода прогностическим признаком некоторых аномалий развития у плода.

В норме у всех остальных взрослых людей (кроме беременных женщин) он отсутствует в крови. Однако альфа-фетопротеин обнаруживается в крови у большинства людей со злокачественной опухолью печени (гепатомой), а также у некоторых больных со злокачественными опухолями яичников или яичек и, наконец, при опухоли эпифиза (шишковидной железы), которая чаще всего встречается у детей и молодых людей.

Читайте также:  Анализ антиспермальные антитела что означает

Высокая концентрация альфа-фетопротеина в крови беременной женщины свидетельствует о повышенной вероятности таких пороков развития у ребенка, как расщелина позвоночника, анэнцефалия и др., а также о риске самопроизвольного аборта или так называемой замершей беременности (когда плод погибает в утробе женщины). Однако концентрация альфа-фетопротеина повышается иногда и при многоплодной беременности.

Тем не менее этот анализ выявляет аномалии спинного мозга у плода в 80–85 % случаев, если делается на 16–18-й неделе беременности. Исследование, проведенное раньше 14-й недели и позже 21-й, дает гораздо менее точные результаты.

Низкая концентрация альфа-фетопротеинов крови беременных свидетельствует (наряду с другими маркерами) о возможности синдрома Дауна у плода.

Поскольку концентрация альфа-фетопротеина нарастает в течение беременности, слишком низкая или высокая концентрация его может объясняться очень просто, а именно: неправильным определением срока беременности.

Простат-специфический антиген (ПСА)

Концентрация ПСА в крови незначительно повышается при аденоме предстательной железы (примерно в 30–50 % случаев) и в большей степени – при раке предстательной железы. Правда, норма для содержания ПСА весьма условна – менее 5–6 нг/л. При повышении этого показателя более 10 нг/л рекомендуется провести дополнительное обследование для выявления (или исключения) рака предстательной железы.

Карциноэмбриональный антиген (КЭА)

Высокая концентрация этого антигена обнаруживается в крови многих людей, страдающих циррозом печени, неспецифическим язвенным колитом, а также в крови заядлых курильщиков. Тем не менее КЭА является опухолевым маркером, так как его часто выявляют в крови при раке толстой кишки, поджелудочной железы, молочной железы, яичника, шейки матки, мочевого пузыря.

Концентрация этого антигена в крови повышается при различных заболеваниях яичников у женщин, очень часто – при раке яичника.

Содержание антигена СА-15–3 повышается при раке молочной железы.

Повышенная концентрация этого антигена отмечается у большинства больных раком поджелудочной железы.

Этот белок является опухолевым маркером при множественной миеломной болезни.

Антитела – это вещества, которые иммунная система вырабатывает для борьбы с антигенами. Антитела строго специфичны, то есть против определенного антигена действуют строго определенные антитела, поэтому их наличие в крови позволяет сделать вывод о том, с каким именно «врагом» борется организм. Иногда антитела (например, ко многим возбудителям инфекционных заболеваний), образованные в организме во время болезни, остаются уже навсегда. В подобных случаях врач на основании лабораторного исследования крови на те или иные антитела может определить, что человек в прошлом перенес то или иное заболевание. В других случаях – например, при аутоиммунных заболеваниях – в крови выявляются антитела против определенных собственных антигенов организма, на основании чего можно поставить точный диагноз.

Антитела к двухспиральной ДНК выявляются в крови почти исключительно при системной красной волчанке – системном заболевании соединительной ткани.

Антитела к ацетилхолиновым рецепторам обнаруживаются в крови при миастении. При нервно-мышечной передаче рецепторы «мышечной стороны» получают сигнал от «нервной стороны» благодаря веществу-посреднику (медиатору) – ацетилхолину. При миастении иммунная система атакует именно эти рецепторы, вырабатывая антитела против них.

Ревматоидный фактор обнаруживается у 70 % больных ревматоидным артритом.

Кроме того, ревматоидный фактор часто присутствует в крови при синдроме Шегрена, иногда – при хронических заболеваниях печени, некоторых инфекционных болезнях, изредка – у здоровых людей.

Антиядерные антитела обнаруживаются в крови при системной красной волчанке, синдроме Шегрена.

Антитела SS-B выявляются в крови при синдроме Шегрена.

Антинейтрофильные цитоплазматические антитела обнаруживаются в крови при гранулематозе Вегенера.

Антитела к внутреннему фактору обнаруживаются у большинства людей, страдающих пернициозной анемией (связанной с дефицитом витамина В12). Внутренний фактор – это особый белок, который образуется в желудке и который необходим для нормального всасывания витамина В12.

Антитела к вирусу Эпштейна–Барра выявляются в крови больных инфекционным мононуклеозом.

Анализы для диагностики вирусных гепатитов

Поверхностный антиген гепатита В (HbsAg) – входит в состав оболочки вируса гепатита В. Обнаруживается в крови людей, зараженных гепатитом В, в том числе у вирусоносителей.

Антиген «е» гепатита В (HBeAg) – присутствует в крови в период активного размножения вируса.

ДНК вируса гепатита В (HBV-DNA) – генетический материал вируса, тоже присутствует в крови в период активного размножения вируса. Содержание ДНК вируса гепатита В в крови уменьшается или сходит на нет по мере выздоровления.

IgM антитела – антитела против вируса гепатита А; обнаруживаются в крови при остром гепатите А.

IgG антитела – другой тип антител против вируса гепатита А; появляются в крови по мере выздоровления и остаются в организме пожизненно, обеспечивая иммунитет к гепатиту А. Наличие их в крови указывает на то, что в прошлом человек перенес данное заболевание.

Ядерные антитела гепатита В (HBcAb) – выявляются в крови человека, недавно зараженного вирусом гепатита В, а также в период обострения хронического гепатита В. Имеются также в крови вирусоносителей гепатита В.

Поверхностные антитела гепатита В (HBsAb) – антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В. Иногда обнаруживаются в крови людей, полностью излечившихся от гепатита В.

Наличие HBsAb в крови свидетельствует об иммунитете к этому заболеванию. При этом, если в крови отсутствуют поверхностные антигены, значит, иммунитет возник не вследствие перенесенной болезни, а в результате вакцинации.

Антитела «е» гепатита В – появляются в крови по мере того, как вирус гепатита В перестает размножаться (то есть по мере выздоровления), одновременно исчезают «е»-антигены гепатита В.

Антитела к вирусам гепатита С присутствуют в крови большинства инфицированных им людей.

Анализы для диагностики ВИЧ-инфекции

Лабораторные исследования для диагностики ВИЧ-инфекции на ранних стадиях основаны на выявлении специальных антител и антигенов в крови. Наиболее широко применяется такой метод определения антител к вирусу, как иммуноферментный анализ (ИФА). Если при постановке ИФА получают положительный результат, то анализ выполняют еще 2 раза (с той же сывороткой).

В случае хотя бы одного положительного результата диагностика ВИЧ-инфекции продолжается более специфичным методом иммунного блотинга (ИБ), позволяющего выявить антитела к отдельным белкам ретровируса. Только после положительного результата этого анализа можно сделать заключение об инфицировании человека ВИЧ.

источник

Серологическое исследование (СИ) основано на способности антигенов и антител связываться друг с другом. СИ позволяет с точностью выявить наличие у пациента определённого вируса либо бактерии, группу крови и резус, реактивность организма к антибиотикам, аутоиммунные заболевания, гормональные нарушения, индивидуальную специфичность белков, определить эффективность терапии.

Система иммунитета борется с проникающими в организм болезнетворными микробами (антигенами) при помощи антител, при этом создавая к каждому из вирусов, паразитов либо бактерий свой определённый тип защиты.

Способность иммунитета вырабатывать особые вещества, нейтрализующие вредоносные частицы, была известна учёным давно. Но увидеть реакцию антиген-антитело в лабораторных условиях удалось только в конце XIX века. Было обнаружено, что в результате образования связки, комплексы выпадают в осадок, образуя хлопья либо помутнение. Такие реакции получили названия агглютинации и преципитации. В XX веке серология — наука о свойствах сыворотки, стремительно развивалась, обнаруживались новые методы диагностирования на основе реакций антиген-антитело. На сегодняшний день существует множество способов выявления иммунных комплексов, а СИ являются незаменимым звеном в диагностике, лечении, создании новых медицинских препаратов и вакцин.

Серологические исследования сопровождают современного человека на протяжении всей жизни. Первые анализы на выявление определённых антител проводятся, когда малыш находится ещё в утробе. Беременная женщина сдаёт кровь на различные СИ для определения возможного резус-конфликта либо инфекций, способных навредить вынашиваемому плоду. Когда ребёнок появляется на свет, его ожидают серологические исследования, позволяющие диагностировать врождённые заболевания. Впоследствии анализы сдаются по следующим причинам:

  • вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции;
  • выявление активности, стадии развития болезни;
  • гормональные патологии;
  • бесплодие;
  • аутоиммунные заболевания;
  • нарушение обмена веществ;
  • аллергии;
  • онкологические заболевания;
  • планирование беременности, период вынашивания, патологии беременных;
  • выявление ревматоидного фактора;
  • определение группы крови и резус-фактора;
  • эффективность терапии при различных болезнях;
  • эффективность вакцинации;
  • предоперационный и постоперационный период при необходимости оценки уровня некоторых антител;
  • изучение иммунного состояния организма.

Так как серологические исследования охватывают широкий спектр анализов, в каждом конкретном случае может понадобиться определённая подготовка, но существуют общие правила сдачи серологического теста:

  • За сутки до исследования следует ограничить в рационе жирное и жареное, исключить алкоголь.
  • Последний приём пищи должен завершиться за 10 — 12 часов до анализа.
  • В день сдачи крови не следует употреблять кофе, чай либо иные напитки. Можно в небольшом количестве пить чистую воду.
  • Лекарственные средства перед анализом исключаются. Если приём отменить невозможно, необходимо предоставить врачу полный перечень препаратов, в том числе витаминов, пероральных контрацептивов.
  • Все другие исследования либо медицинские манипуляции проводятся после СИ.
  • Курение рекомендуется прекратить за 12 часов до взятия образца крови.
  • В предыдущий день следует избегать физических и эмоциональных нагрузок, а перед исследованием желательно 15 минут посидеть в полном покое.
  • СИ назначаются на утреннее время и сдаются натощак.

Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.

Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).

Методы серологических исследований:

  • Агглютинация. Связывание Ат с Аг с последующим формированием хлопьев либо осадка. Применяются прямые, непрямые, развёрнутые, ориентировочные реакции, позволяющие выявить антитела в сыворотке.
  • Гемагглютинация. Используются эритроциты с адсорбированными на них Аг либо Ат, которые склеиваются с соответствующими Ат и Аг. Образуемые комплексы выпадают в виде фестонного осадка.
  • Преципитация. Образование комплекса Аг-Ат с последующим осаждением в виде помутнения, именуемого преципитатом.
  • Коагглютинация. Выявление Аг при помощи Ат, адсорбированных на белке клеток стафилококка.
  • Торможение гемагглютинации. Ат иммунной сыворотки подавляют вирусные Аг, в итоге вирусы теряют способность склеиваться с эритроцитами.
  • Непрямая реакция Кумбса. Определяются Ат к поверхностным Аг эритроцитов.
  • Кольцепреципитация. Проводится на основе иммунной сыворотки с наслоением растворимого Аг.
  • Двойная радиальная иммунодиффузия. Реакция основана на диффундировании компонентов антисыворотки и Аг в лунках агара либо агарозы.
  • Реакция связывания комплемента. Связь Аг и Ат сопровождается адсорбцией комплемента, в качестве индикатора используются эритроциты барана и Ат к ним в составе гемолитической сыворотки.
  • Нейтрализация. Основана на нейтрализации вирусного агента антителами.
  • Реакции, основанные на маркировании Ат и Аг флуоресцентным либо ферментным составом — иммунофлюорисцентный (РИФ) и иммуноферментный (ИФА) методы.

Данный метод основан на использовании Ат, меченных флуоресцентным веществом. Чаще всего в качестве метки используется флуоресцеинизотиоционат, обладающий зелёным свечением в лучах ультрафиолета. Результат анализа оценивается по степени яркости свечения. Может быть использован ручной метод определения при помощи люминесцентного микроскопа, оптического микроскопа с люминесцентной насадкой, а также автоматический способ с применением микрочипового цитомера, проточного цитомера либо роботизированного флуоресцентного микроскопа.

РИФ проводится прямым и непрямым методом. Прямой способ означает непосредственное связывание сорбированного Аг с меченым Ат. Непрямой метод подразумевает использование немаркированных Ат для связки с Аг, а затем добавление меченых Ат, что позволяет избежать неспецифических реакций.

ИФА основан на выявлении комплексов Аг-Ат при помощи маркирования одного из компонентов. В качестве метки используются различные ферменты, которые в результате ферментативной реакции образуют окрашивание. Существуют разнообразные методы ИФА, их можно классифицировать как гомогенные и гетерогенные методы.

Гомогенные означают, что все этапы реакции происходят в растворе.

Гетерогенные методы включают разделение на фазы с использованием твёрдого носителя.

Гомогенно-гетерогенные способы основываются на том, что комплексы Аг-Ат формируются в растворе, а затем для разделения используется твёрдая фаза.

Существует множество вариаций методов ИФА, некоторые из них представлены ниже.

  1. Сэндвич-метод. К иммобилизованным Ат добавляется раствор с Аг, после образования комплексов носитель отмывают от лишних компонентов и добавляют маркированные Ат. В результате, Аг оказываются зажатыми иммобилизованными и мечеными Ат, откуда и произошло название метода.
  2. Неконкурентный непрямой ИФА. К иммобилизованным Аг присоединяют исследуемую сыворотку с Ат. Когда образуются комплексы, лишние Ат смывают и добавляют маркированные Ат, способные связаться с прикреплёнными к поверхностям лунок иммунными комплексами.
  3. Конкурентный прямой ИФА. К иммобилизованным Аг вносят исследуемую сыворотку и конъюгат, содержащий маркированные Ат. Формируются комплексы Аг-Ат нескольких видов: с мечеными Ат и с немаркированными Ат, которые вступают между собой в конкуренцию за связь с Аг.

Если у пациента присутствует определённая симптоматика либо иные исследования указывают на заболевание, назначается серологический анализ.

Серологические исследования используют для диагностики следующих инфекций:

  • вирус гепатита А, В, С, D, Е;
  • сифилис;
  • ВИЧ;
  • герпес;
  • цитомегаловирус;
  • краснуха;
  • корь;
  • паротит;
  • Эпштейн-Барр;
  • хеликобактер;
  • хламидии;
  • микоплазмы;
  • токсоплазмы;
  • лямблии;
  • гельминты;
  • уреаплазмы;
  • парвовирус;
  • вирус ветряной оспы;
  • вирус клещевого энцефалита;
  • вирус Денге;
  • коклюш;
  • боррелии;
  • легионеллы.
  1. Высокая чувствительность и специфичность.
  2. Широкий спектр определяемых инфекций.
  3. Ранняя диагностика инфицирования.
  4. Возможность мониторинга развития заболевания.
  5. Быстрота и удобство в исполнении.
  6. Возможность использования минимального объёма исследуемого материала.
  7. Безопасность исследования.

источник