Фото с сайта medaboutme.ru
Опыт многолетних исследований показывает, что лабораторные анализы на коклюш одинаково эффективны в отношении малышей и взрослых, привитых и невакцинированных пациентов. Современная медицина научились довольно точно распознавать неустойчивую и прихотливую бактерию, что заметно упрощает диагностику самых сложных случаев недомогания со стертой симптоматикой.
Достоверность и информативность тестов во многом зависит от качества подготовки и времени сдачи анализов. Для каждой из методик существует свой период забора, когда выявляемые компоненты наиболее активны. При соблюдении всех условий исследования на коклюш очень содержательны и дают исчерпывающие сведения о заболевании.
Не менее важно для информативности и место, где выполняется диагностика. Если общий анализ крови можно с одинаковым успехом сделать как в частной, так и в муниципальной клинике, то специфические тесты при коклюше лучше сдавать в платных учреждениях. Несмотря на высокую достоверность исследований, в городских поликлиниках правильный диагноз устанавливается только в половине случаев. Остальные пациенты лечатся от пневмонии, бронхита, ОРВИ и т. д.
Какие анализы сдают на коклюш? В большинстве случаев больным назначают ряд специфических тестов: молекулярно-генетический, серологический и бактериологический. Каждая из этих методик дает верный результат в 95–98% случаев. Из общих наиболее распространен ОАК.
Обычно для подтверждения недомогания не требуется выполнять все исследования сразу. Доктор, исходя из симптоматики и продолжительности недуга, решает, какие именно анализы необходимо сдать на коклюш.
Клинический анализ крови назначают всем пациентам без исключения для обнаружения воспалительного процесса, силы и продолжительности его течения, но определить по нему наличие коклюша невозможно. Данный тест не относится к специфическим и имеет диагностическую значимость лишь в совокупности с другими клиническими признаками недомогания. Анализ крови может только навести врача на мысль о коклюше, но не более того.
Биоматериал для ОАК берут с утра, на голодный желудок. Забранный образец изучается с помощью гемоанализатора, но если в результате обработки обнаруживаются аномалии, выполняется ручной подсчет компонентов.
Какие показатели типичны для заболевания? Как правило, в анализе крови при коклюше заметно возрастает концентрация лейкоцитов — до 20–40*10 9 /л. У младенцев эти значения могут быть несколько ниже — 15–30*10 9 /л. При этом СОЭ остается на прежнем уровне. Исследование проводят только по направлению врача.
Стоимость анализа крови с оценкой количества лейкоцитов и СОЭ не превышает 450 рублей.
Самый капризный и наиболее информативный тест в катаральном периоде коклюша. Его делают только те клиники, где хорошо отлажен процесс доставки и хранения биоматериала. Анализ назначают не позднее третьей недели болезни, обычно дважды, с промежутком в 1–2 дня.
Достоверность теста зависит от сроков посева, разновидности используемых сред, соблюдения правил забора отделяемого. По истечении двадцати суток информативность анализа падает до 20%. Влияет на надежность исследования и прием антибиотиков. Противомикробные лекарства нарушают жизнедеятельность патогенов и ухудшают высеваемость.
Сколько делается культуральный анализ на коклюш? Предварительные сведения могут быть готовы уже на третьи сутки, но они редко несут достоверные данные. Окончательный результат выдают на 6–7 день.
Чтобы увеличить информативность бак-посева на коклюш, перед посещением процедурного кабинета нельзя пить и употреблять пищу, чистить зубы, полоскать горло, рассасывать пастилки от кашля или использовать аэрозоли. У взрослых биоматериал на анализ забирается заднеглоточным тампоном — слизь снимают с миндалин и берут из носа. Для детей чаще используют вариант «кашлевых пластинок». Для этого чашку с питательным субстратом подносят ко рту малыша и просят покашлять.
Расшифровать данные бак-анализа на коклюш очень просто — колонии Bordetella либо присутствуют в пробирках и чашках со средой, либо нет. В последнем случае говорят об отрицательном результате. В некоторых посевах из зева детей могут быть получены микроорганизмы, сходные по своим морфологическим и серологическим качествам с бактерией коклюша. Тогда назначается дополнительный тест с реакцией иммуноэлектрофореза.
Сколько стоит подобный анализ для детей и взрослых? Цены на посев возбудителя коклюша не зависят от возраста пациента и колеблются от 900 до 1500 рублей.
Самым трудоемким считается ПЦР-анализ на коклюш. Исследование информативно целый месяц с начала недомогания, дает 100% результат и наиболее эффективно у малышей раннего возраста, но отличается сложностью забора биоматериала. Врачу нужно исхитриться и взять как можно больше слизи, содержащей бактерии коклюша.
Соскоб снимают со слизистой носа или ротоглотки, стараясь проникнуть тупфером как можно глубже. Затем тампон помещают в термоциклер и с помощью комплекта реактивов обнаруживают ДНК возбудителя. Для получения качественного анализа за 2 часа до забора биоматериала нельзя есть и пить, в течение 5 часов перед тестом запрещено орошать горло или пользоваться пастилками.
Сколько готовится молекулярный анализ на коклюш? Данный метод диагностики недаром называют экспресс-тестом — расшифровку можно получить в течение ближайших суток. Делают его в любой лаборатории по вполне демократичной цене — от 500 до 800 рублей за тест.
Положительный результат анализа на коклюш говорит о том, что в крови пациента присутствуют следы возбудителя. Некоторые клиники указывают количественное значение патогенов.
Считается самым надежным анализом на коклюш и позволяет диагностировать болезнь на поздних этапах, когда другие методы уже неэффективны. Среди медиков этот тест называется «золотым стандартом», дает 100% специфичность и диагностическую чувствительность не менее 66%.
Биоматериал для анализа у взрослых берется из вены (3–4 мл), у детей из подушечки среднего пальца (0,5–1,0 мл). Процедура выполняется в первой половине дня, строго натощак. Собранную кровь направляют в лабораторию, где ее обрабатывают методом ИФА.
Тест на антитела к коклюшу бывает качественным или количественным. При проведении анализа определяют 3 класса маркеров — IgA, IgG и IgM. Антитела типа А и М характерны для первичной инфекции и начинают образовываться с двадцатого дня заболевания, а еще через 7 суток появляются антитела уровня G. Они же обнаруживаются после вакцинации и остаются в крови на долгие годы.
О положительном результате можно говорить, если в расшифровке ИФА-анализа на коклюш указаны следующие значения:
- IgA — более 26 ед./мл;
- IgM — более 18 ед./мл;
- IgG — более 18 ед./мл.
При слабом иммунитете или истощении организма анализ может дать ложноотрицательный ответ. В любом случае через 2 недели тест рекомендуется выполнить повторно. Увеличение иммуноглобулина класса G в четыре раза однозначно укажет на развитие коклюша.
Сдать серологический анализ можно в любой клинике. Определение каждого класса титров обойдется в 850 руб. К данной сумме нужно прибавить расходы на забор крови. Это еще примерно 100–130 рублей.
Еще сто лет назад коклюш считался смертельно опасным недугом. От него умирал практически каждый заболевший ребенок. Сегодня положение намного улучшилось, однако Bordetella pertussis по-прежнему доставляет немало проблем.
Токсины, которые производит возбудитель коклюша, отравляют весь организм, вызывают нарушение дыхания и связанную с этим гипоксию. При резком увеличении уровня углекислого газа в крови создаются все условия для развития энцефалопатии. Особенно тяжело переносят коклюш младенцы.
При поздней диагностике и неграмотном лечении у малышей возникают серьезные нарушения со стороны респираторной системы — может произойти спадение доли легкого, развиться пневмония, тяжелый бронхит, астма. Нарушается деятельность сердечно-сосудистой и нервной систем, во время сильного кашля появляются кровоизлияния в кожу и конъюнктиву глаз, возникает рвота.
Кроме того, что пациент мучается сам, в первые недели коклюш очень заразен и представляет серьезную угрозу для окружающих. При раннем выявлении недуга появляется шанс остановить развитие бактерий и снизить вирулентность болезни до минимума. К преимуществам раннего обнаружения недуга можно отнести и быстрое выздоровление правильно пролеченных детей и взрослых.
Диагностика коклюша основана на множестве лабораторных данных. Каждый анализ по-своему информативен и необходим в строго определенный период. При расшифровке результатов следует учитывать особенности иммунитета у новорожденных, наличие вакцинации и прием антибиотиков. Все эти факторы могут несколько исказить показатели, поэтому не стоит заниматься интерпретацией анализов самостоятельно. Лучше доверить расшифровку специалисту — педиатру либо участковому терапевту.
Автор: Елена Медведева, врач,
специально для lechim-gorlo.ru
Список источников:
- Диагностика типичного случая инфекционной болезни (стандартизованный пациент): учебное пособие /Н. Д. Ющук, Е. В. Волчкова // Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2017.
- Диагностическая ценность метода ИФА при коклюше у детей / Попова О. П., Скирда Т. А., Федорова И. М. и др. // Детские инфекции, 2016.
- Коклюш: эпидемиология, биологические свойства bordetella pertussis, принципы лабораторной диагностики и специфической профилактики / Тюкавкина С. Ю., Харсеева Г. Г. // Эпидемиология и инфекционные болезни, 2014.
- Ценева Г. Я., Курова Н. Н. Микробиологическая характеристика возбудителя коклюша и лабораторная диагностика // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, 2003.
- Руководство по лабораторным методам диагностики / А. А. Кишкун, д. м. н., проф. // ГЭОТАР-Медиа, 2007.
источник
- Эффективность вакцинации (дети 1-14 лет) 4680 руб. Программа включает в себя лабораторные тесты по оценке эффективности вакцинации: гепатита В, кори, краснухи, коклюша, дифтерии, столбняка, эпидпаротита (свинка); для уточнения наличия иммунитета (как постпрививочного так и после перенесенного заболевания) . Заказать
Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.
Метод исследования: Иммуноферментный анализ
Возбудитель коклюша – Bordetella pertussis – грамотрицательная коккобацилла, относится к роду Bordetella.
Согласно Санитарно-эпидемиологическим правилам СП 3.1.2.3162-14 «Профилактика коклюша» (2014) для лабораторной диагностики коклюша применяют бактериологический, серологический (ИФА) и молекулярно-генетический методы исследования. Выбор метода определяется сроком заболевания.
Так как эффективность применения прямых методов ограничено сроками от начала заболевания (бактериологический метод – 2-3 недели, ПЦР – 3 недели), то после 3-й недели необходимо сдать анализ на коклюш для определения антител – иммуноглобулинов классов M, A и G.
При необходимости и по решению лечащего врача через 10-14 дней проводятся повторные анализы крови на коклюш (определение антител методом ИФА).
При наличии типичных клинических проявлений анализы крови на коклюш методом ИФА позволяют подтвердить диагноз, а при стертых и атипичных формах инфекции этот метод может оказаться решающим при выявлении заболевания.
Анализ на коклюш у детей: у детей до 6 лет, вакцинированных против коклюша, можно использовать только анализы крови на коклюш, взятые в динамике (парные сыворотки).
Антитела IgG могут длительное время определяться после перенесенной инфекции или вакцинации.
- Лабораторное подтверждение коклюша
- Обследование детей с длительным кашлем (более 5-7 дней)
- Эпидемиологические исследования
Референсные значения (вариант нормы):
Параметр | Референсные значения | Единицы измерения | |||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Anti-B.pertussis IgG (количественное определение антител класса IgG к возбудителю коклюша Bordetella pertussis) | string(3) «810» [«cito_price»]=> NULL [«parent»]=> string(2) «25» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(1) array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(31) «Кровь (сыворотка)» > > [«within»]=> array(1) array(5) string(44) «effektivnost-vakcinacii-deti-1-14-let-300117» [«name»]=> string(70) «Эффективность вакцинации (дети 1-14 лет)» [«serv_cost»]=> string(4) «4680» [«opisanie»]=> string(1417) « Программа включает в себя лабораторные тесты по оценке эффективности вакцинации: гепатита В, кори, краснухи, коклюша, дифтерии, столбняка, эпидпаротита (свинка); для уточнения наличия иммунитета (как постпрививочного так и после перенесенного заболевания) к данным заболеваниям и решения вопроса о целесообразности повторной вакцинации. Показания к назначению исследования:
Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации. » [«catalog_code»]=> string(6) «300117» > > > | ||||||||||||||||||||||||||
Биоматериал и доступные способы взятия: |
| ||||||||||||||||||||||||||
Подготовка к исследованию: | Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа. Метод исследования: Иммуноферментный анализ Возбудитель коклюша – Bordetella pertussis – грамотрицательная коккобацилла, относится к роду Bordetella. Согласно Санитарно-эпидемиологическим правилам СП 3.1.2.3162-14 «Профилактика коклюша» (2014) для лабораторной диагностики коклюша применяют бактериологический, серологический (ИФА) и молекулярно-генетический методы исследования. Выбор метода определяется сроком заболевания. Так как эффективность применения прямых методов ограничено сроками от начала заболевания (бактериологический метод – 2-3 недели, ПЦР – 3 недели), то после 3-й недели необходимо сдать анализ на коклюш для определения антител – иммуноглобулинов классов M, A и G. При необходимости и по решению лечащего врача через 10-14 дней проводятся повторные анализы крови на коклюш (определение антител методом ИФА). При наличии типичных клинических проявлений анализы крови на коклюш методом ИФА позволяют подтвердить диагноз, а при стертых и атипичных формах инфекции этот метод может оказаться решающим при выявлении заболевания. Анализ на коклюш у детей: у детей до 6 лет, вакцинированных против коклюша, можно использовать только анализы крови на коклюш, взятые в динамике (парные сыворотки). Антитела IgG могут длительное время определяться после перенесенной инфекции или вакцинации.
Референсные значения (вариант нормы):
Колонии коклюша нужно также отличать от бактерий септического бронхита. Последние, в отличие от кокков, растут на субстрате без изменения цвета среды и имеют уреазу. Методы диагностики коклюша иногда включают микроскопическое исследование в качестве вспомогательного. Взрослые бактерии коклюша не имеют отличительных морфологических особенностей, но на ранних стадиях развития их можно определить. На I фазе жизни бактерии имеют S-форму. Они грамотрицательны, отличаются мелкими размерами и однородностью. Представляют собой палочки без спор с нежными капсулами. На II и III фазах бактерии превращаются в полиморфные или коккоидные формы жизни. Поскольку прямые методы исследования (бактериологический и ПЦР) дают результаты только на ранних стадиях развития заболевания, при сроке более 3 недель от заражения используются серологические методы — анализы на антитела к коклюшу. Основная их цель — выявить наличие иммуноглобулинов IgM в крови и IgA в слизи. Основные серологические методы исследования (РПГА, РА, РНГА) применяются также для эпидемиологического анализа. Диагностический титр при реакции пассивной гемагглютинации у непривитого ребенка, не перенесшего коклюш в прошлом — 1:80. У привитых и взрослых пациентов титры считаются диагностическими при нарастании в 4 раза. Иммуноферментный анализ на иммуноглобулины IgM и IgA — это более современный метод анализа на коклюш у детей и взрослых. Интерпретировать положительные (+) и отрицательные (-) результаты можно следующим образом:
Существует два метода анализа, позволяющие диагностировать коклюш в сжатые сроки:
ПЦР также является быстрым методом анализа; его недостатком является невозможность применения на поздних сроках заболевания. Экспресс-диагностика коклюша у детей позволяет ускорить постановку диагноза и начало лечения, а также повысить процент лабораторных подтверждений коклюша. Возбудителем коклюша является короткая неподвижная грамотрицательная палочка, которая называется Bordetella pertussis. Чаще всего она встречается у детей до пятилетнего возраста. Но иногда поражает дыхательные пути взрослых людей. Чтобы выявить истинную причину заболевания, необходимо сделать анализ на коклюш. Его производят несколькими способами в зависимости от стадии течения воспалительного процесса. Палочка рода Бордетеллы передается воздушно-капельным путем, как и любая инфекция, провоцирующая грипп, ОРВИ или другие воспаления дыхательной системы. После ее проникновения в организм развивается коклюш, характеризирующийся циклическим течением с приступообразным судорожным кашлем. Болезнетворный микроорганизм содержит экзотоксины и эндотоксины. Именно эти компоненты палочки Бордетеллы становятся опасными для организма больного, особенно, если заражение произошло у ребенка возрастом до пяти лет. Как происходит развитие коклюша?
Очень сложно выявить заболевание в первые недели после заражения, поскольку врачи направляют пациента на анализ крови на коклюш лишь при появлении симптомов патологического процесса. А возбудитель Бордетелла сразу не вызывает характерных признаков интоксикации острых респираторных инфекций (высокая температура, насморк, кашель, озноб и др.). Кульминация заболевания выявляется через 2-3 недели после начала циклического течения. Опасность коклюша в том, что он способен провоцировать развитие осложнений:
Именно поэтому очень важно как можно раньше сделать анализ крови на коклюш и начать его лечение. Таким образом, удастся избежать осложнений.
Уже на стадии катарального течения можно сделать анализ на выявление палочки Бордетеллы. В этот период начинает беспокоить сухой навязчивый кашель без повышения температуры. Кашлевые толчки усиливаются к вечеру и не проходят даже после приема противокашлевых препаратов. Других симптомов заболевания не отмечается. В катаральный период течения коклюша расшифровка анализа периферической крови поможет определить лейкоцитоз, то есть, значительное повышение лейкоцитов. Обычно показатели поднимаются до 15-40*109/л. При этом скорость оседания эритроцитов (СОЭ) остается в норме. При наступлении судорожного периода все симптомы коклюша станут очевидными. Характерным признаком являются частые кашлевые толчки со свистящим вдохом (реприз). Цикличность кашля повторяется в среднем от 2 до 15 раз. При тяжелом течении у пациентов период может насчитывать 50 циклов. При этом, внешний вид больного не оставляет сомнений, что у него коклюш:
В период обратного развития симптоматика ослабляется и через некоторое время исчезает. Для бакпосева делают забор слизи из задней стенки глотки. Процедура должна осуществляться утром натощак или же через 2-3 часа после приема пищи. Также могут применять метод «кашлевых пластинок» для изучения выделившихся капель мокроты. Но он малоэффективен при заборе отделяемой слизи у деток, которые «плохо» кашляют. Бактериологический посев производят на казеиново-угольный агар. Результат диагностики после прорастания микроорганизма получают через 3-7 суток. Такой анализ будет информативным, если взять забор слизи у пациента, кашляющего не более месяца. Дальше возбудитель не выделяется. Также расшифровка будет ложной, если пациент принимает антибиотики. Бакпосев помогает отличить коклюш от туберкулеза, бронхиальной астмы, ОРВИ, пневмонии. Заключается в исследовании сыворотки человеческой крови на наличие антител или иммуноглобулинов IgM (на раннем сроке) и IgG (на позднем сроке) к антигенам коклюшного микроба. Наиболее достоверный лабораторный метод – это иммуноферментный анализ (ИФА). Он позволяет не только определить болезнетворного возбудителя, но и понять, на какой стадии находится болезнь по количеству антител. Серологическая диагностика коклюша эффективна, потому что после проникновения инфекции в организме человека сразу же вырабатываются иммунные защитные комплексы. В сыворотку крови лаборант добавляет антиген заболевания и после химических реакций выдает результат. Расшифровка анализа крови на коклюш серологическим методом показывает, есть ли в сыворотке пациента антитела к палочке Бордетелла. Повышение титра IgG или IgM в четыре раза подтверждает диагноз острого течения болезни. Слабое увеличение титра может свидетельствовать о перенесенном ранее коклюше, о недавней вакцинации АКДС. Показатель «0» — это норма и говорит об отсутствии анаэробной инфекции. Иммуноферментный анализ крови сдают дважды. Первый раз для выявления болезнетворного возбудителя. А второй – чтобы понять, насколько динамично развивается воспалительный процесс. Очень часто для диагностики коклюша используют иммунофлюоресцентный способ обследования (РНИФ) отделяемого со стенки глотки. Он обнаруживает антитела за 2-6 часов. Латексная микроагглютинация (ЛМА) – это очень быстрый диагностический способ выявить возбудителя коклюша. Процедура длится всего 30-40 минут.
ПЦР является информативной диагностической процедурой, поскольку она не зависит от реакции организма на инфекцию, как при ИФА. Молекулярный метод выявляет конкретного микроба даже в инкубационный период, когда еще нет никаких симптомов заболевания. А при коклюше, с продолжительным сроком «тихого» развития, он как раз будет идеальным лабораторным исследованием. Но для получения точного результата анализа и его расшифровки необходимо сохранить чистоту биологического материала. Если на образец случайно попадет чужой фрагмент ДНК палочки коклюша (из воздуха или каких-то других предметов), то может возникнуть «ложное срабатывание». А отсутствие инфекции по показателям анализа при явных симптомах заболевания случается, если материал взят неправильно (мазок не из зева или носоглотки).
В основном перед забором анализов в лаборатории сотрудники предупреждают о том, как правильно сдавать кровь. В профессиональных учреждениях есть свои сайты, где указано, каких правил нужно придерживаться перед приходом к лаборанту. В Инвитро и других крупных медицинских компаниях результаты анализов максимально точные, главное, соблюдать указания врача, чтобы не исказить полученные данные. В расшифровке серологической диагностики показывают, какой должна быть норма показателей крови. Если в анализе пациента содержится значительное количество антител, которое при повторном обследовании увеличивается, значит, диагноз коклюш подтверждается.
Если пациента направляют на неспецифический гематологический анализ крови с пальца, тогда специальной подготовки не требуется. Главное условие – проводить забор натощак утром. Если по результатам анализа в крови повышенное количество лейкоцитов и нейтрофилов, но СОЭ в норме, то такие изменения характерны для коклюша. Если при сдаче анализа крови существует не так много ограничений, то для проведения бакпосева или молекулярного способа диагностики очень важно получить чистый биологический материал без примесей каких-либо добавок (пищевых, лекарственных и др.). Также большое значение имеет профессионализм лаборанта, который будет брать мазок слизи из зева или носоглотки. Если забор производится не из того места, где сосредоточен инфекционный возбудитель, результат анализа будет ложным. Перед сдачей слизистого отделяемого из ротоглотки нужно придерживаться следующих правил:
В настоящее время есть множество различных государственных или частных медучреждений, которые предлагают лабораторную диагностику различных возбудителей. Можно воспользоваться бесплатным проведением анализов в поликлинике по месту жительства или прибегнуть к услугам комфортных лабораторий, где есть все необходимые реагенты и материалы, чтобы получить максимально точные результаты диагностики. Цена таких исследований на наличие возбудителя коклюша зависит от выбранного медучреждения. В профессиональных частных лабораториях результаты анализов выдают с расшифровкой. Пациент самостоятельно может понять, какие у него показатели – в норме или свидетельствуют о наличии инфекционного агента. После этого врач, если потребуется, назначит эффективное лечение или направит на дополнительное обследование. Коклюш – острое инфекционное заболевание органов дыхания, основным проявлением которого является длительный приступообразный кашель. Болеют коклюшем люди любого возраста – у кого нет достаточного иммунитета после вакцинации, тот в зоне риска. Однако тяжелее всего переносят недуг маленькие дети, у них часто возникают осложнения со стороны нервной системы, расстройства дыхания и кровообращения. Своевременная диагностика коклюша в большинстве случаев позволяет избежать затягивания болезни и развития осложнений. 1. Почему важно своевременно диагностировать коклюш 2. В каких случаях показано обследование на коклюш 3. Анализы при подозрении на коклюш – Бактериологический анализ отделяемого глотки на коклюш – Выявление возбудителя коклюша методом ПЦР – Определение концентрации специфических антител в крови – Общий анализ крови при коклюше 4. Стоимость анализов на коклюш 5. Где можно сдать анализы на коклюш
Для этого перед походом в лабораторию обследуемый не должен чистить зубы, кушать, пить, полоскать рот и горло. Если это условие нарушено, сдавать материал можно будет не ранее чем через 2-3 часа.
Предварительный результат бактериологического анализа можно получить уже на 2-3 день после посева, а заключительный – только через 5-7 суток. Bordetella pertussis на искусственных средах растет достаточно медленно, поэтому бактериологом необходимо время для точной идентификации микроорганизмов.
Серологическое исследование применяется для диагностики коклюшной инфекции на поздних сроках ее развития – приблизительно с 3 недели заболевания. В это время описанные выше методы оказываются малоэффективными, поскольку возбудителя в дыхательных путях уже нет, а сохранение кашля связано с остаточными воспалительными явлениями и перевозбуждением кашлевого центра в головном мозге. В ходе серологической диагностики коклюша определяют титры антител к антигенам Bordetella pertussis трех классов:
Основным методом серологической диагностики коклюша является иммуноферментный анализ (ИФА). Исследуемый материал – венозная кровь. Подготовка к сдаче крови должна быть такой же, как и перед другими анализами: приходить в лабораторию необходимо утром натощак, за 12 часов до исследования желательно исключить физические нагрузки и не принимать лекарственные средства, если это возможно. Особенностью серологической диагностики коклюша является необходимость в исследовании парных сывороток, то есть проведении двух анализов с промежутком в 10-14 дней. Такая тактика дает возможность выявить нарастание титров антител, которое говорит в пользу развивающегося заболевания, а не иммунитета, приобретенного вследствие ранее перенесенного коклюша или вакцинации. Согласно рекомендациям ВОЗ подтверждением наличия коклюша у невакцинированных от этой инфекции детей является нарастание уровня антител Ig М и Ig А к одному или нескольким антигенам Bordetella pertussis. Для оптимальной лабораторной диагностики одновременно должны использоваться два метода исследования: бактериологический посев и серологический анализ крови.
В частных клиниках и лабораториях бактериологическое исследование на коклюш стоит в среднем 1,5 тыс. рублей. Определение титра антител к коклюшу обойдется по 750-800 рублей за каждый иммуноглобулин. Приблизительно такая же цена и у анализа глоточного соскоба на коклюш методом ПЦР. Дополнительно оплачивается услуга по забору материала: мазки и соскобы – 300-400 рублей, взятие венозной крови – 100-150 рублей. Коклюш – острая антропонозная инфекционная болезнь с воздушно-капельным механизмом передачи возбудителя, вызываемая коклюшным микробом и характеризующаяся длительным своеобразным спазматическим кашлем с поражением дыхательной, сердечно-сосудистой и нервной систем. Возбудитель коклюша – Bordetella pertussis – грамотрицательная коккобацилла, относится к роду Bordetella. Помимо B. pertussis респираторные инфекции у людей могут вызывать B.parapertussis и B.bronchiseptica. B.parapertussis вызывает паракоклюш – заболевание, подобное коклюшу, но с более легким течением. Перекрестный иммунитет в отношении коклюша и паракоклюша отсутствует. B. bronchiseptica вызывает бронхисептикоз (бордетеллез), протекающий как ОРВИ, возникающий при контакте с инфицированным животным, у людей с ослабленной иммунной системой может вызывать пневмонию. Выделяют типичные (кашель имеет приступообразный характер) и атипичные (отсутствует спастический кашель) формы коклюша. В течении типичных форм коклюша различают 4 периода: инкубационный (в среднем 14 дней), катаральный (1–2 недели), период спазматического кашля (4–6 недель) и период разрешения. Выраженность клинических проявлений зависит от тяжести заболевания, оцениваемой по: длительности катарального периода, частоте приступов кашля, наличию цианоза лица при кашле, гипоксии вне приступов кашля, степени нарушения работы сердечно-сосудистой системы, наличию и степени выраженности энцефалических расстройств. Диагноз коклюша считается подтвержденным, если имеется соответствие клиническому стандартному определению случая коклюша, лабораторное подтверждение и/или имеется эпидемиологическая связь с лабораторно подтвержденным случаем. Возможно сочетанное инфицирование с другими возбудителями ОРЗ, что отягощает течение болезни. Показания к обследованию. Диагностика: больные с подозрением на коклюш и паракоклюш (в соответствии со стандартным определением случая*), а также длительно (5–7 дней и более) кашляющих, независимо от указаний на контакт с больными. По эпидемическим показаниям: дети и взрослые в детских учреждениях, родильных отделениях и детских больницах, в которых были выявлены больные коклюшем.
Материал для исследований
Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение чистой культуры бордетелл и определение их видовой принадлежности; выявление ДНК B.pertussis, B.parapertussis, B.Bronchiseptica методом ПЦР, выявление АГ B. pertussis в гортанно-глоточных смывах с использованием РНИФ; обнаружение специфических АТ. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. При выявлении бордетелл выполняют выделение чистой культуры микроорганизмов и определение их видовой принадлежности методами микроскопии, постановкой РА с видоспецифическими сыворотками, проведением биохимических тестов и оценкой подвижности микроба. Культуральный метод характеризуются большой продолжительностью исследования, его диагностическая чувствительность не превышает 10–20%; аналитические характеристики во многом зависят от качества используемых сред (добавление крови животных является обязательным условием) и реагентов для иммунологических и биохимических идентификационных тестов.
Выявление АТ позволяет диагностировать коклюш на поздних сроках. Обнаружение специфических АТ проводят с использованием: РА для диагностики коклюша и паракоклюша, ИФА для обнаружения АТ (Ig M, A, G) к различным антигенам B.pertussis и B.parapertussis. Выявление специфических IgА методом РНИФ практически не используется по причине отсутствия стандартизации; чувствительность анализа, по данным авторов метода, варьирует в широком диапазоне от 103 до 105 микробных клеток в 1 мл, при этом положительные результаты исследования можно учитывать только при наличии типичной симптоматики коклюша. Показания к применению различных лабораторных исследований. Культуральное исследование с диагностической целью следует проводить в ранние сроки заболевания (1–2 недели болезни); в более поздние сроки высеваемость возбудителя резко снижается. Оптимальное время для обнаружения ДНК методом ПЦР – до 3-х недель от начала заболевания. Определение АТ целесообразно с 3-й по 6-ю недели от начала заболевания, далее титры АТ начинают снижаться. У детей до 6 лет, вакцинированных против коклюша, можно использовать только пробы крови, взятые в динамике (парные сыворотки), причем первый раз кровь берется не ранее чем через 3 недели от начала заболевания, повторно – спустя 2 недели. Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Диагноз коклюша считается лабораторно подтвержденным в случае выделения культуры B.pertussis; обнаружения специфического фрагмента генома B. pertussis методом ПЦР; выраженной сероконверсии (увеличение в 4 и более раз уровня специфических IgG и/или IgA в парных сыворотках, или обнаружении у не привитого пациента специфических IgM). Диагностическим титром реакции агглютинации у не привитых и не болевших детей считают разведение 1:80.
parapertussis методом ПЦР, или при обнаружении АТ методом РА в титре не менее 1:80. Заболевание, вызванное B.bronchiseptica, диагностируется при выделении культуры или обнаружения специфического фрагмента генома методом ПЦР. Стандартное определение случая заболевания коклюшем – острое заболевание, характеризующееся: сухим кашлем с постепенным его усилением и приобретением характера приступообразного спазматического на 2-3 неделе заболевания, особенно в ночное время суток или после физической и эмоциональной нагрузки; явлениями апноэ, гиперемией лица, цианозом, слезотечением, рвотой, лейко- и лимфоцитозом в периферической крови, развитием «коклюшного легкого», жестким дыханием, отделением вязкой мокроты; незначительным повышением температуры.
Как правильно подготовиться к исследованию? За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна. Общая информация об исследовании Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель – Bordetella pertussis (палочка Борде — Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса. В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев). Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме – лейкоцитоз, лимфоцитоз. Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений. Паракоклюш – это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей. Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами. В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя коклюша. Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.
Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает. Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов. У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания. Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней. Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша. Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
источник |