Расшифровка анализа на антинуклеарные антитела

Среди прочих исследований лицам, обращающимся по ряду жалоб к терапевту, ревматологу и врачам некоторых иных специальностей, может быть назначен такой не совсем понятный для них анализ, как анализ на антинуклеарные антитела, или ANA-профиль. О том, что это за исследование, в каких ситуациях показано его проведение, какие болезни могут быть диагностированы с его помощью, а также об особенностях подготовки к анализу и его расшифровке вы узнаете из нашей статьи.

Антинуклеарные, антиядерные антитела (сокращенно – ANA) – это группа аутоантител к разным компонентам клеточного ядра (ДНК, РНК и многим другим), которые обнаруживаются почти у всех лиц, страдающих системными заболеваниями соединительной ткани. Анализ крови на антинуклеарные антитела позволяет не только диагностировать эти заболевания, но и провести дифференциальную диагностику между ними, поскольку титры (концентрация) этих антител в крови при разных болезнях различна, кроме того, при каждой из них выявляются лишь определенные разновидности ANA.

Итак, к определенным структурам клеточных ядер организм вырабатывает антитела – аутоантитела. Образуются комплексы антиген-антитело, которые откладываются на базальных мембранах органов, тканей (на клетках кожи, синовиальных и серозных оболочек, почек, головного мозга и прочих) и сосудов, несущих кровь к этим структурам. Развиваются аутоиммунные процессы, результатом которых становится нарушение структуры тканей и воспалительный процесс в них.

Так, антинуклеарные антитела обнаруживаются в крови лиц, страдающих следующими заболеваниями:

Некоторые виды антиядерных антител обнаруживаются в крови лиц, страдающих онкологическими, инфекционными или неиммунными воспалительными заболеваниями:

Стоит отметить, что при заболеваниях неиммунной природы титры антинуклеарных аутоантител нестойки. Чтобы отличить временное повышение их титра от стойкого присутствия в сомнительных случаях, пациенту рекомендуют повторить этот анализ через 1, 2 недели или через месяц. Кроме того, проводить обследование следует в одной и той же лаборатории, поскольку в разных лабораториях могут быть использованы разные методы определения ANA, а также наборы разных антигенов – это существенно исказит результаты, снизит их информативность.

Врач может направить больного на этот анализ при обнаружении следующих изменений состояния его организма:

длительно сохраняющаяся субфебрильная температура тела (до 37,5 °С), лихорадка неясного генеза;
похудение на 5 кг и более за 3-6 месяцев без видимой на то причины (образ жизни больного за этот период не стал активнее, чем был, пищевые привычки не изменились);
увеличение лимфатических узлов неясного генеза;
боли в суставах, артриты неясной этиологии;
боли в мышцах, выраженная общая слабость;
сыпь на коже по типу васкулита;
патологические изменения со стороны одновременно многих органов и систем;
высокая СОЭ без видимых на то причин;
анемия, снижение уровня лейкоцитов и тромбоцитов в периферической крови;
повышенная концентрация гамма-глобулинов в крови;
белок в моче (при необходимости уточнить характер поражения почек, причину протеинурии).

У лиц, страдающих системными заболеваниями соединительной ткани, как правило, обнаруживаются высокие титры антинуклеарных антител (более чем 1:100). Также эти вещества могут быть верифицированы у лиц с неревматическими и у здоровых родственников лиц с аутоиммунными болезнями. Иногда ANA имеются и в крови здоровых, не состоящих в родственных отношениях с больными СЗСТ лиц.

Согласно данным статистики, антиядерные антитела обнаруживаются:

у 1-5 % здоровых людей молодого – до 40 лет – возраста, преимущественно у женщин;
у 10-15 % здоровых людей 60 лет и старше;
у родственников больных системной красной волчанкой – до 60 % случаев;
у родственников больных системной склеродермией – до 30 % случаев;
у 18 % родственников больных гемолитической анемией;
у 9 % родственников больных синдромом Шегрена;
у половины лиц, принимающих новокаинамид и/или гидралазин.

При инфекционных заболеваниях ANA повышаются транзиторно – лишь на некоторое время, и титры их невысоки (до 1:50). Многие лаборатории титр менее 1:100 расценивают как отрицательный результат анализа.

Что касается системных заболеваний, то при повышении активности аутоиммунного процесса титр ANA повышается, а при уменьшении – снижается. Это может служить критерием эффективности лечения болезней данной группы.

Особой подготовки к анализу крови на антинуклеарные антитела не требуется. Единственный момент: анализ следует проводить натощак, то есть за 8-12 часов до исследования пациенту стоит отказаться от приема пищи, особенно – исключить жирные продукты.

На исследование берут 8.5 мл венозной крови.

отрицательным (ANA не обнаружены или они имеются в крови в малом титре – до 1:100);
положительным (титр этих веществ больше, чем 1:100);
«серая зона» – это пограничное, среднее значение, которое не помогает подтвердить или опровергнуть диагноз и требует повторного исследования через некоторое время.

Антинуклеарные антитела – антитела, которые вырабатывает организм на компоненты собственных клеточных ядер. Исследуют их уровень в венозной крови. Как правило, он резко повышен у больных системной красной волчанкой или другими системными заболеваниями соединительной ткани. ANA могут быть обнаружены и у лиц, страдающих онкологическими, воспалительными, но неиммунной природы, и некоторыми инфекционными заболеваниями. Однако титры их в этих ситуациях будут не столь высоки, а нередко и обратимы.

источник

Иммунная система человека – уникальный слаженный механизм, способный реагировать на любые внешние внедрения патогенных факторов, тем самым защищая организм от целого ряда заболеваний. Но как известно, из каждого правила есть исключения, и в данном случае они выглядят как реагирование иммунитета на собственные клетки, что получило название аутоиммунные болезни.

При данных патологиях идет выработка антител, атакующих здоровые клетки, поражая или уничтожая их. В результате происходит нарушение функционирования отдельных тканевых структур и даже органов. Такие патологии из-за своей распространенности и вовлеченности в процесс нескольких органов или систем получили название системных заболеваний.

При появлении современных методов лабораторной диагностики, одним из которых является АНФ анализ крови на поиск антинуклеарного фактора, позволяющий выявить антинуклеарные (антиядерные) антитела и определить причину патологии. Данный показатель является одним из маркеров системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ), принятым как «золотой стандарт» данного вида исследований.

Как уже описывалось выше, патогенез данных патологий берет свое начало со сбоев функционала иммунной системы, и выработке защитных антител к определенным компонентам собственных клеток. Такие клетки за особенность своего происхождения имеют второе название – аутоантитела. В процессе иммунного сбоя они вступают в контакт с белковыми соединениями ядра, нуклеиновыми кислотами и антигенами цитоплазмы, что приводит к появлению симптомов воспалительных заболеваний, таких как:

структурные изменения тканей и органов;
выраженное необоснованное утомление;
болевые ощущения в мышцах и суставах;
поражение кожных покровов;
снижение веса тела и другие.

Антинуклеарные антитела (АНА) могут образовываться при довольно обширном спектре аутоиммунных патологий, но наибольшая вероятность их появления при системной красной волчанке (СКВ).

Справка! По статистике, более чем у 90% пациентов, страдающих СЗСТ, определяется патологическая выработка подобных антител. На текущий момент изучено около 200 их видов, которые получили обобщенное название – антинуклеарный фактор. В основном они представлены иммуноглобулинами класса G, но иногда встречаются М или А.

Прежде чем углубляться в особенности проведения исследования на АНФ, стоит отметить, что методика была изобретена и начала применяться довольно давно – в 60-х годах прошлого века. Но широкое распространение в диагностической практике получила лишь в начале 80-х годов XX века после усовершенствования. В качестве субстрата еще в 1961 году ученый Beck применял клетки лабораторных животных, и только в 1982 году Tan воспользовался перевиваемой клеточной линией человека HEp-2 для поиска АНФ.

Хотя основная цель использования данного теста – это установление диагноза красная волчанка, все же он считается универсальной методикой и для других коллагенозов (СЗСТ). К последним относятся:

Одной из наиболее удобных, и поэтому чаще всего используемых методик для определения в крови пациентов антинуклеарного фактора, считается непрямая иммунофлюорестенция. Исследование проводится при нанесении сыворотки крови на клетки перевиваемой эпителиоидной линии аденокарциномы гортани человека НЕр-2 (содержащих определенный ряд ядерных антигенов) с применением меченого коньюгата (соединения) с антителами.

Этот выбор сделан неслучайно – клетки НЕр-2 – очень удобный субстрат для изучения биоматериала. Они имеют довольно крупные ядра, и при высадке на лабораторных стеклах растут однослойно. В качестве субстрата можно использовать и другие клеточные линии человека, но удачная морфология и культивирование однозначно делает именно НЕр-2 – незаменимым материалом.

В ходе диагностики при инкубации сыворотки обследуемого с клеточным субстратом, при наличии АНА происходит их соединение с соответствующими нуклеарными антигенами. Места связки АНФ с НЕр-2 определяются при использовании меченого флюоресцеином (красителем) коньюгата. Для выполнения оценки результатов произошедших реакций применяется люминесцентный микроскоп, позволяющий дифференцировать характер и степень получившихся связок.

Справка! HEp-2 человека, в отличие от тканевых криосрезов животных, имеют более высокую скорость деления клеток, что дает возможность обнаружить антитела к антигенам, которые экспрессируются лишь при делении. Также в субстрате человека отсутствует клеточный матрикс, снижающий качество визуализации изучаемого свечения.

При расшифровке материалов всегда необходимо брать во внимание, что в спектр АНА входит довольно большая группа аутоантител к нуклеопротеидам, рибонуклеопротеидам, гистонам, ДНК и другим структурным единицам ядра. Из этого следует, что функционал теста направлен на выявление антител к составляющим ядра и цитоплазмы, которые изначально были определены при СКВ.

Позже диагностические возможности исследования были расширены, что обусловлено определением подобных антител при других СЗСТ. В скрининговых методиках для обнаружения суммарных АНА, как правило, применяется определенный набор антигенов, принятых за основные маркеры аутоиммунных ЗСТ.

К ним относятся антитела класса IgG:

SS-A (Ro) – ядерные рибонуклеопротеины;
SS-B (La) – ядерные белки;
Scl-70 – белок-фермент (топоизомераза-1);
нативная двухцепочная ДНК;
RNP/Sm – комплекс антигенов;
Jo-1 – фермент РНК – синтетаза;
CENP-B (центромера)
Hep-2 клетки;
митохондрии (PDC).

АНА практически безвредны для организма – они не способны проникать в живые ткани. Но в отдельных случаях могут соединяться в комплексы антиген-антитело, что в результате приводит к структурным разрушениям тканей. Одним из таких примеров является поражение паренхимы почек при СКВ. Так как при СЗСТ в процесс вовлечено несколько органов, то выявление АНА не является первостепенно важным для диагностики, а считается лишь подтверждением определенной симптоматики.

После проведения всех необходимых процедур – взятия биоматериала и его лабораторной подготовке к исследованию, проводится оценка и интерпретация результатов. Сюда входит определение титра (концентрации) антител и типа свечения. Значимым параметром для диагностики является показатель концентрации свыше 1:160. К примеру, при обострении ревматизма он может превышать отметку 1:640, тогда как в ремиссионном периоде наблюдается понижение до 1:160–1:320.

Тип свечения показывает мишени АНА, что является особо важным клиническим моментом, направляющим последующие действия врача в назначении диагностических мероприятий. По характеру свечения ядер при использовании НЕр-2 определится свыше 20 вариантов ядерного окрашивания, в зависимости от видов присутствующих антител в биоматериале. К основным из них относятся следующие типы свечения.

Периферическое. Свечение свидетельствует о наличии анти-ДНК-антител, что подтверждает СКВ. Основным видом антигенов для периферического типа являются гистоновые белки и ДНК.
Диффузное (гомогенное). Такое свечение наблюдается при СКВ, сопровождающейся поражением структуры почек и похожих ЗСТ, нефрите, склеродермии, а также лекарственно-индуцированной СКВ. Антигены при данном типе представлены дсДНК, гистонатами и нуклеосомами.
Ядрышковое (нуклеарное). Данный тип характерен для системной формы склеродермии, и определяется при присутствии у пациентов антител – PHК полимераза 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
Цитоплазматическое. Подобный тип подсвечивания указывает на наличие АНА к тРНК–синтетазам, а именно Jo-1, и наблюдается при полимиозите.
Гранулярное. Определяется при синдроме Шегрена, инфекционном мононуклеозе, смешанном ЗСТ (Sharp-синдром, MCTD) и лекарственном волчаночном синдроме. Преимущественно присутствующие антигены для этого типа – SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP, и PCNA.
Крупногранулярное. Характерно для смешанных ЗСТ и, по мнению многих ученых, связано с наличием антигена RNP.
Мелкогранулярное. Определяется присутствие антител, образующихся против рибонуклеиновых белков – АSSP (АЦЦП), SS-A, SS-B и других. Такие антитела характерны для СКВ, также ее специфических кожных формах, ревматоидном артрите, склеродермии, полимиозите, синдроме Шегрена.
Центромерное. Данный тип в основном отмечается при склеродермии. Хотя в одном образце крови, особенно у обследуемых с диффузными ЗСТ, в отделенной плазме могут определяться антитела к различным ядерным компонентам.
Точечные вкрапления в ядре. Этот тип преимущественно выявляется при болезнях печени аутоиммунного характера. При нем могут сочетаться несколько флюоресцентных типов, к примеру, ядрышковый и мелкогранулярный, что обусловлено антителами к Scl-70.

На достоверность полученных в ходе исследования данных могут повлиять всего несколько факторов, способных показать и ложноположительный и ложноотрицательный результат. Так, неправдоподобные ответы со сдвигом вверх наблюдаются у пожилых пациентов в возрасте от 60 лет (по статистике в 10–37% случаях) и при приеме медпрепаратов, вызывающих лекарственную волчанку (некоторые антибиотики, контрацептивы, сульфаниламиды, тиазидные диуретики).

Отмечено, что у 5–55% особ женского пола, имеющих грудные имплантаты, повышается уровень концентрации АНА. К ошибочной диагностике со сдвигом вниз может привести употребление глюкокортикоидных препаратов – Преднизолона, Метипреда или Дексаметазона.

источник

Синонимы: АНА, антинуклеарные антитела, антинуклеарный фактор, АНФ, антиядерные антитела, antinuclear antibodies, ANAs, Fluorescent Antinuclear Antibody, Antinuclear factor, ANF

Научный редактор: М. Меркушева, ПСПбГМУ им. акад. Павлова, лечебное дело.

Аутоиммунные заболевания, когда иммунная система атакует собственные ткани организма, считаются одними из самых опасных. Большинство аутоиммунных патологий относятся к хроническим и могут вызывать серьезные нарушения в работе внутренних органов и систем.

Одним из наиболее распространенных тестов, применяемых в диагностике аутоиммунных состояний, является обследование на антинуклеарные антитела (АНА), который проводится тремя способами:

методом иммуноферментного анализа ИФА (определяется общий уровень ANA),
методом реакции непрямой иммунофлуоресценции РНИФ (выявляется до 15 разновидностей ANA)
методом иммуноблоттинга.

Антинуклеарные (антиядерные) антитела представляют собой группу аутоантител, которые, вступая в реакцию с ядрами собственных клеток организма, разрушают их. Поэтому анализ на АНА считается достаточно чувствительным маркером в диагностике именно аутоиммунных нарушений, большая часть из которых сопровождается поражением соединительной ткани. Однако некоторые из видов антинуклеарных антител обнаруживаются и при заболеваниях не иммунной этиологии: воспалительных, инфекционных, злокачественных и пр.

Наиболее специфичны антинуклеарные антитела к следующим заболеваниям:

системная красная волчанка (СКВ) – заболевание кожи и соединительной ткани;
дерматомиозит – поражение кожи, мышц, скелетной ткани и т.д.;
узелковый периартериит – воспаление артериальной сосудистой стенки;
склеродермия – уплотнение и затвердение соединительной ткани;
ревматоидный артрит – поражение соединительной ткани суставов;
болезнь Шегрена – поражение ткани с железистыми проявлениями (снижение секрета слезных и слюнных желез).

Антинуклеарные антитела могут обнаруживаться более чем у 1/3 больных хроническим рецидивирующим гепатитом. Также уровень АНА может возрастать в случае:

инфекционного мононуклеоза (вирусное заболевание, сопровождается массовым поражением внутренних органов);
лейкоза (злокачественное заболевание крови) в острой и хронической форме;
гемолитической анемии (малокровие в результате разрушения эритроцитов);
болезни Вальденстрема (поражение костного мозга);
цирроза печени (хроническое заболевание, связанное с изменением структуры печеночной ткани);
малярии;
лепры (инфекционное поражение кожи);
хронической почечной недостаточности;
тромбоцитопении (снижение выработки тромбоцитов);
лимфопролиферативных патологий (опухоли лимфатической системы);
миастении (патологическая утомляемость мышц);
тимомы (опухоль из вилочковой железы).

Одновременно с определением антинуклеарных антител в процессе иммуноферментного анализа оценивается концентрация иммуноглобулинов: IgA, IgM, IgG. Обнаружение этих компонентов в крови может свидетельствовать о высокой вероятности развития ревматических заболеваний и коллагенозов.

В случае, когда связь между концентрацией антител и симптоматикой у больного не обнаруживается, само присутствие антиядерных антител в крови является диагностическим критерием и может повлиять на выбор лечения. Сохранение высокого уровня антинуклеарных антител при продолжительном курсе терапии свидетельствует о неблагоприятном прогнозе заболевания. Снижение значений АНА на фоне проводимого лечения может указывать на ремиссию (чаще) или приближающийся летальный исход (реже).

Также антинуклеарные антитела могут быть обнаружены у здоровых людей до 65 лет (3-5% случаев), после 65 (до 37%).

Исследовать антинуклеарный фактор целесообразно в следующих случаях:

Диагностика аутоиммунных и некоторых других системных заболеваний без ярко выраженной симптоматики;
Комплексная диагностика системной красной волчанки, ее формы и стадии, а также выбор тактики лечения и составление прогноза;
Диагностика лекарственной волчанки;
Профилактическое обследование пациентов с диагнозом красная волчанка;
Наличие специфических симптомов: продолжительная лихорадка без установленной причины, боли и ломота в суставах, мышцах, кожные высыпания, повышенная утомляемость и т.д.;
Наличие симптомов системных заболеваний: поражение кожи или внутренних органов (почки, сердце), артрит, эпилептические припадки и судороги, лихорадка, беспричинное повышение температуры и т.д.;
Назначение лекарственной терапии дизопирамидом, гидралазином, пропафеноном, прокаинамидом, ингибиторами АПФ, бета-блокаторами, пропилтиоурацилом, хлорпромазином, литием, карбамазепином, фенитоином, изониазидом, миноциклином, гидрохлортиазидом, статинами, поскольку есть риск развития лекарственной красной волчанки.

Помимо врача общей практики, направляют на анализ такие узкие специалисты, как

В норме антинуклеарные антител в плазме отсутствуют или определяются в небольшом количестве. Результат зависит от способа выполнения теста:

1. Тест делался методом ИФА

менее 0,9 пунктов – отрицательно (норма);
от 0,9 до 1,1 пунктов – сомнительно (рекомендуется сделать повторный тест через 7-14 дней);
более 1,1 пункта – положительно.

2. Для количественного анализа РНИФ нормой считается титр менее 1:160.
3. Иммуноблоттинг – норма «не обнаружено» (общее заключение / напротив каждого вида антител).

нарушение правил подготовки пациентом или алгоритма венепункции медработником;
прием лекарственных препаратов (карбамазепин, метилдопа, пеницилламин, токаинид, нифедилин и др.);
наличие у пациента уремии (отравление продуктами белкового обмена) может дать ложноотрицательный результат.

Обнаружение антинуклеарных антител может указывать на следующие заболевания:

системная красная волчанка;
панкреатит (воспаление поджелудочной железы) аутоиммунной природы;
сахарный диабет I типа;
аутоиммунные поражения щитовидной железы;
злокачественные поражения внутренних органов;
дерматомиозит;
аутоиммунный гепатит;
заболевания соединительной ткани;
болезнь Шегрена;
миастения;
склеродермия;
ревматоидный артрит;
диффузный интерстициальный фиброз (поражение легочной ткани в хронической форме);
синдром Рейно (ишемия мелких концевых артерий) и т.д.

Повышение титра АНА при количественном иммуноферментном анализе (РНИФ) говорит о:

Системной красной волчанке в активной стадии – титр повышен до 98%;
Болезни Крона (гранулематозное поражение пищеварительного тракта) – около 15%;
язвенном колите (воспаление слизистой толстой кишки) – от 50 до 80%;
склеродермии;
болезни Шегрена;
Болезни Рейно – до 20%;
синдроме Шарпа (смешанное заболевание соединительной ткани);
лекарственной волчанке.

Важно! При расшифровке анализа важно понимать, что отрицательный результат не исключает наличия аутоиммунных нарушений у пациентов с характерной симптоматикой. Положительный результат без клинической картины аутоиммунного процесса необходимо интерпретировать с учетом данных других лабораторных анализов.

Биоматериал для проведения ИФА на антинуклеарный фактор – сыворотка венозной крови.

Венепункция выполняется в утреннее время и натощак (с момента последнего приема пищи должно пройти минимум 8 часов). Пить чистую негазированную воду можно;
Непосредственно перед забором крови (за 2-3 часа) не рекомендуется курить и пользоваться никотинозаменителями (пластырь, спрей, жевательная резинка);
Накануне и в день процедуры нельзя употреблять алкогольные и энергетические напитки, волноваться и заниматься тяжелой физической работой;
За 15 дней до теста по согласованию с лечащим врачом отменяется прием лекарственных препаратов (антибиотики, противовирусные, гормоны и др.);
Для получения достоверного результата анализ желательно повторить через 2 недели.

Ответ ИФА можно ожидать в течение 1 суток после венепункции, а в экстренных ситуациях, когда обследование проводится по «cito» – около 3 часов.

Информация с сайтов лаборатории Инвитро и Хеликс;
Данные Национальной медицинской библиотеки США PubMed.

Другие анализы ревматологического скрининга

Важно! Все материалы носят справочный характер и ни в коей мере не являются альтернативой очной консультации специалиста.

Этот сайт использует cookie-файлы для идентификации посетителей сайта: Google analytics, Yandex metrika, Google Adsense. Если для вас это неприемлемо, пожалуйста, откройте эту страницу в анонимном режиме.

источник

Антинуклеарные антитела (ANA, АНА) – специфические иммуноглобулины, связывающиеся с компонентами клеточных ядер собственного организма. Определяются в плазме при ревматических болезнях, первичном билиарном циррозе, злокачественных опухолях, инфекциях. Исследование применяется для диагностики и дифференциации аутоиммунных заболеваний в рамках скрининга и при характерных клинических признаках. Забор крови производится из вены. Анализ выполняется тремя способами: иммуноферментным методом (определяется общий уровень ANA), методом иммуноблоттинга и реакции непрямой иммунофлуоресценции (выявляется до 15 разновидностей ANA). В норме результат отрицательный. Срок проведения теста при ИФА – 1 день, при иммуноблоттинге, РНИФ – 8 дней.

В норме погибшие клетки организма фагоцитируются макрофагами. При аутоиммунном заболевании происходит не только утилизация клеточных компонентов (ядрышек, гистонов, оболочек ядер), но и передача информации о них в рамках иммунного ответа. B-лимфоциты запускают выработку антител к ядерным антигенам. Образующиеся иммунные комплексы закрепляются на базальных мембранах сосудов и органов, активируется система комплемента, развивается местное воспаление. Исследование ANA с помощью иммуноферментного анализа обладает невысокой специфичностью, но экономично по времени и трудовым затратам. Иммуноблоттинг и метод РНИФ дают высокоспецифичную информацию, но их распространение ограничивается трудоемкостью и высокой стоимостью процедуры.

Тест на антинуклеарные антитела назначается при аутоиммунных патологиях. Показания к суммарному определению IgG, IgM, IgA с помощью ИФА:

Скрининг коллагенозов. Тест используется для обследования людей из групп риска, при неспецифических и слабовыраженных симптомах: быстрой утомляемости, лихорадке, головных болях. Положительный результат является основанием для выполнения более точных и трудоемких диагностических процедур.
Диагностика СКВ. Анализ назначается пациентам с характерными клиническими проявлениями: мышечной и суставной болью, кожными высыпаниями, одышкой, нарушениями сердечного ритма, отеками.
Мониторинг СКВ. Определение АТ периодически выполняется для уточнения активности патологии, составления прогноза, оценки эффективности лечения.
Диагностика лекарственной волчанки. Тест проводится больным, которые принимают препараты, способные спровоцировать лекарственный волчаночный синдром.

Определение антинуклеарных антител методами иммуноблоттинга и РНИФ используется более узконаправленно. Показания:

Дифференциация аутоиммунных заболеваний. Исследование назначается для выявления СКВ, синдрома Шарпа, синдрома Шегрена, склеродермии, полимиозита, дерматомиозита, ревматоидного артрита, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита. Основанием служат высокие показатели АТ к ядерным антигенам (ИФА), к экстрагируемому ядерному антигену, к ДНК, к нуклеосомам в сочетании с характерной клинической картиной.
Мониторинг ревматических болезней. Тест выполняется для выявления обострений, оценки течения и эффективности терапии артритов, остеоартроза, васкулитов, диффузных заболеваний соединительной ткани.

Уровень АНА определяется в венозной крови. Ее забор выполняется утром, специальной подготовки не требуется, но стоит придерживаться общих правил:

Выдержать период голода 4-6 часов. Пить воду разрешено без ограничений.
Ограничить употребление жирной пищи накануне вечером, в течение дня отказаться от приема алкогольных напитков, выполнения интенсивных физических нагрузок. Избегать влияния стрессовых факторов.
За 7-10 дней сообщить врачу об используемых лекарствах. Их действие будет учтено при интерпретации результата.
Физиотерапевтические процедуры, инструментальные обследования выполнять после сдачи крови.
За 30 минут воздержаться от курения, умеренных физических нагрузок.

Кровь забирается из локтевой вены, доставляется в лабораторию в герметичной пробирке. Предварительно из первичного биоматериала выделяют сыворотку. При определении общего количества антинуклеарных антител выполняется иммуноферментный анализ, при исследовании их разновидностей – иммуноблоттинг, реакция непрямой иммунофлуоресценции. В первом случае результат подготавливается за 1 день, во втором – за 8 дней.

В норме АНА в плазме отсутствуют или определяются в небольшом количестве, не влияя на функционирование тканей. Отрицательный результат выражается по-разному в зависимости от способа выполнения теста:

ИФА – 0-1,0 Ед, «отрицательно».
Иммуноблоттинг – «не обнаружено» (общее заключение / напротив каждого вида АТ).
РНИФ – титр менее 1:160.

На итоговый показатель не влияют физиологические факторы. Нормальный результат не исключает заболевание, но снижает вероятность патологии.

Интерпретация повышенного показателя теста зависит от метода исследования. При определении уровня суммарных ANA причиной увеличения их концентрации являются:

Аутоиммунные заболевания. Положительный результат выявляет СКВ, ревматоидный артрит, синдром Шегрена, склеродермию, сахарный диабет 1 типа, полимиозит, дерматомиозит, миастению, поражение щитовидной железы, печени.
Инфекции. Повышение значения определяется у людей с туберкулезом, вирусным гепатитом, подострым бактериальным эндокардитом, ВИЧ-инфекцией.
Онкопатологии. Образование АНА наиболее характерно для рака легких и печени.
Прием лекарственных препаратов. Показатель теста растет при использовании ингибиторов АПФ, бета-блокаторов, гидралазина, пропилтиоурацила, хлорпромазина, лития, карбамазепина, фенитоина, изониазида, миноциклина, гидрохлортиазида, ловастатина, симвастатина.

При анализе с определением вида антинуклеарных антител интерпретируется повышение отдельных показателей. При иммуноблоттинге выполняется разделение видов АТ. При РНИФ преобладающие АТ выявляются по характеру свечения. Причинами отклонения результатов от нормы могут быть СКВ, синдром Шарпа, синдром Шегрена, склеродермия, ревматоидный артрит, неонатальный волчаночноподобный синдром, полимиозит, изолированный синдром Рейно, волчаночный нефрит, CREST-синдром, полимиозит, дерматомиозит, лекарственная волчанка, билиарный цирроз.

Анализ на антинуклеарные антитела широко распространен в клинической практике как инструмент для скрининга, дифференциальной диагностики и мониторинга аутоиммунных патологий. Способы выявления АНА адаптируют исследование под разные задачи. За интерпретацией результата и назначением лечения нужно обратиться к врачу – ревматологу, дерматовенерологу, нефрологу.

источник

Антиядерные антитела: проведение анализов, показания, расшифровка результатов, норма и патология, возможные заболевания и консультация врача

Антиядерные антитела представляют собой категорию аутоантител, которые при вступлении в реакцию с ядрами клеток организма начинают их разрушать. Поэтому исследование на АНА считается довольно чувствительным маркером при диагностике аутоиммунных нарушений, основная часть которых сопровождается поражениями соединительной ткани. Некоторые из разновидностей антинуклеарных антител обнаруживают также при заболеваниях не иммунного происхождения: воспалительные, инфекционные, злокачественные и пр.

Наиболее специфичны антиядерные антитела к следующим патологиям:

Системная красная волчанка – болезнь соединительной ткани и кожи.
Дерматомиозит – поражение мышц, кожи, скелетной ткани и т. д.
Склеродермия – уплотнение соединительной ткани.
Узелковый периартериит – воспалительный процесс, затрагивающий артериальные сосудистые стенки.
Ревматоидный артрит – поражение соединительной ткани и суставов.
Болезнь Шегрена – поражение тканей с железистыми проявлениями (уменьшение секрета слюнных и слезных желез).

В каких случаях скрининг на антиядерные антитела положительный?

Аутоиммунные патологии, когда иммунная система начинает атаку на собственные ткани клетки, в клинической медицине считаются самыми опасными. Большинство аутоиммунных заболеваний относятся к категории хронических и могут провоцировать серьезные нарушения функций внутренних органов.

Одним из распространенных тестов, используемых при диагностике различных аутоиммунных состояний, является исследование на уровень антиядерных антител (антинуклеарных), который осуществляется тремя способами:

метод иммуноферментного анализа ИФА, при котором определяется общий уровень антител;
метод реакции непрямой иммунофлуоресценции РНИФ, посредством которого можно выявить до 15 разновидностей антител;
метод иммуноблоттинга.

Это методика лабораторного исследования крови на наличие антител к ВИЧ. Является более точным анализом, чем ИФА, и применяется для подтверждения результата ИФА. Иммуноблотинг (вестерн-блот) применяется при диагностике ВИЧ-инфекций, определения уровня антиядерных антител, в качестве вспомогательного экспертного метода, который призван подтверждать результат ИФА. Как правило, данной методикой перепроверяют положительные результаты при ИФА, так как она считается более специфичной и чувствительной.

Иммунный блоттинг комбинирует в себе иммуноферментный анализ с электрофоретическим разделением вирусных белков в геле и переносом их на нитроцеллюлозные мембраны. Иммуноблот состоит из нескольких этапов. Сначала очищенный и разрушенный белок подвергается электрофорезу, при котором входящие в его состав антигены разделяются на молекулы. Затем способом блоттинга антигены переносятся из геля на полоску нейлонового фильтра или нитроцеллюлозы, которые содержат определенный спектр белков.

Далее на стрип наносят исследуемый материал, и если в пробе присутствуют специфические антитела, они начинают связываться с соответствующими им полосками антигенов. Результат такого взаимодействия делается видимым. Присутствие полос на некоторых участках стрипа подтверждает наличие в исследованной крови антител к определенным антигенам. Иммунный блоттинг часто используется для подтверждения ВИЧ-инфекции. Положительными считаются сыворотки крови, в которых посредством иммунного блотинга обнаруживают антитела к двум белкам оболочки ВИЧ. Если скрининг положительный, значит, в организме развивается определенное аутоиммунное заболевание.

Антинуклеарные антиядерные антитела могут наблюдаться более чем у 1/3 пациентов с рецидивирующим хроническим гепатитом. Кроме того, уровень АНА может повышаться в случае развития следующих патологий:

инфекционный мононуклеоз (вирусное заболевание, при котором возникает массовое поражение внутренних органов);
лейкоз (злокачественная болезнь крови) в острой и хронической формах;
гемолитическая анемия (малокровие вследствие разрушения эритроцитов);
болезнь Вальденстрема (поражает костный мозг);
цирроз печени (хроническая патология, связанная с изменением структур печеночной ткани);
малярия;
лепра (инфекционное поражение кожного покрова);
почечная недостаточность хронических форм;
тромбоцитопения (снижение продуцирования тромбоцитов);
лимфопролиферативные патологии (опухоли в лимфатической системе);
миастения (утомляемость мышц);
тимома (опухоль вилочковой железы).

Одновременно с оценкой уровня антиядерных антинуклеарных антител в процессе анализа оценивается уровень иммуноглобулинов: IgM, IgA, IgG. Обнаружение таких компонентов в крови может говорить о высоком риске возникновения коллагенозов и ревматических заболеваний.

В случаях, когда связь между уровнем антител и симптоматикой у пациента обнаруживается, само по себе наличие антиядерных антител в составе крови является диагностическим признаком и может повлиять на выбор терапевтической методики для того или иного заболевания. Сохранение высокой концентрации антинуклеарных антител при длительном курсе терапии свидетельствует о крайне неблагоприятном прогнозе для пациента. Снижение значений на фоне проводимой терапии может указывать на период ремиссии или приближающийся смертельный исход.

Кроме того, антинуклеарные антитела могут фиксироваться у здоровых людей в 3-5% случаев — до 65 лет, и в 37% случаев — после 65 лет.

Исследовать антинуклеарный фактор необходимо в следующих случаях:

при диагностике аутоиммунных и прочих системных заболеваний без выраженной симптоматики;
при комплексной диагностике системной красной волчанки, ее стадии и формы, а также при выборе терапевтической тактики и составлении прогноза;
при диагностике лекарственной волчанки;
при профилактическом обследовании пациентов с красной волчанкой;
при наличии специфических симптомов: длительная лихорадка без определенной причины, боль и ломота в мышцах, суставах, кожные высыпания, высокая утомляемость и т. д.;
при наличии симптомов системных патологий: поражение внутренних органов или кожи, артрит, судороги, эпилептические припадки, лихорадка, повышение температуры;
при назначении медикаментозной терапии гидралазином, дизопирамидом, пропафеноном, ингибиторами АПФ, прокаинамидомбета-блокаторами, пропилтиоурацилом, литием, хлорпромазином, карбамазепином, изониазидом, фенитоином, гидрохлортиазидом, миноциклином, статинами, так как имеется вероятность возникновения лекарственной красной волчанки.

Помимо специалиста общей практики, возможно консультирование и получение направления на проведение исследования у таких узких специалистов:

Какова норма антиядерных антител?

В норме антиядерные антитела в плазме, как правило, отсутствуют либо определяются в небольших количествах. Результат зависит от метода выполнения тестирования:

меньше 0,9 пунктов – норма (отрицательно);
0,9-1,1 пунктов – сомнительный результат (рекомендуют провести повторный тест через 14 дней);
больше 1,1 пункта – положительный результат.

2. Для анализа РНИФ нормальным результатом считают титр менее 1:160.

3. При иммуноблоттинге норма – «не обнаружено».

В каких ситуациях может быть анализ на антиядерные антитела положительным?

В перечень факторов, которые способствуют искажению результатов лабораторного исследования, входят:

нарушение норм подготовки к анализу или алгоритма венепункции;
прием фармакологических препаратов («Метилдопа», «Карбамазепин», «Пеницилламин», «Нифедипин», «Токаинид» и др.);
наличие у больного уремии часто дает ложноотрицательный результат.

Интерпретация результатов проводится комплексно. Определить точный диагноз на основании единственного диагностического исследования невозможно.

Венепункция производится натощак в утреннее время (с момента приема пищи должно пройти 8 часов). Пить можно только воду. Перед забором крови не рекомендуется пользоваться никотинозаменителями и курить. Накануне и в день исследования нельзя употреблять энергетические и алкогольные напитки, заниматься физической работой и волноваться. За 15 дней до тестирования по согласованию с врачом отменяется прием медикаментозных препаратов (противовирусные и гормональные средства, антибиотики и др.). Для получения правильного результата анализ рекомендуется повторить через 2 недели.

Мы рассмотрели, что это — скрининг на антиядерные антитела.

источник

Антинуклеарные антитела — это патологические компоненты иммунной системы, ведущие к возникновению аутоиммунных заболеваний соединительной ткани, таких как системная красная волчанка, синдром и болезнь Шегрена, системная склеродермия.

Антинуклеарные антитела представляют из себя белки-иммуноглобулины, вырабатываемые защитными клетками человеческого тела (лимфоцитами). Из-за сбоя в работе иммунной системы ядра собственных клеток распознаются ею как чужеродные и вредные, что приводит к ошибочной выработке антител к разным компонентам клеточных ядер.

Всего выявлено более 190 компонентов ядра, к которым может вырабатываться патологический иммунный ответ, однако диагностическое значение имеют около 20 из них. К наиболее важным относят антитела к одно- и двуспиральной ДНК, гистонам, нуклеосомам и рибосомальному P-протеину.

Ядро содержится практически в любой клетке человеческого тела, за исключением некоторых кровяных. Оно находится внутри клетки и защищено собственной оболочкой, цитозолем и внешней клеточной мембраной. Антитела находятся во внеклеточной среде и чаще всего не могут напрямую контактировать с ядром, повреждая его. Однако при любом нарушении целостности клеточных оболочек антинуклеарные антитела, если они имеются в организме, способны связываться с компонентами ядра, образуя нерастворимые комплексы. Именно они и являются причиной возникновения разнообразных аутоиммунных заболеваний соединительной ткани.

В норме собственные клетки организма даже в разрушенном состоянии иммунного ответа не вызывают. Однако сбои в работе иммунной системы наблюдаются постоянно даже у здоровых лиц, и при неблагоприятном стечении обстоятельств иммунитет может сформироваться на любой из компонентов клетки. В организме предусмотрена своеобразная система «отбраковки» патологических антител, в большинстве случаев она срабатывает, антитела уничтожаются, не вызывая болезнь.

Однако в некоторых случаях антинуклеарные антитела возникают в больших количествах и оказываются вовремя не распознаны организмом как патологические. Чаще всего это бывает при обширных солнечных ожогах, когда миллионы клеток кожи оказываются повреждены ультрафиолетом. Ядра погибших клеток оказываются непосредственно во внутренней межклеточной среде организма, где их встречают иммунные клетки — лимфоциты и макрофаги.

ДНК из ядер, гистоновые белки и другие белковые и нуклеиновые компоненты могут быть настолько повреждены ультрафиолетовым излучением, что в некоторых случаях изменяются до неузнаваемости. Именно это и провоцирует иммунные клетки вырабатывать против них антитела, как против чужеродных веществ.

Нормальным значением является полное отсутствие антинуклеарных антител. При скрининговом ИФА-исследовании отрицательный ответ чаще всего записывается с указанием титра (разведения), пример: «Отрицательно, Причины повышения ANA

Положительный результат анализа может свидетельствовать о наличии одного или нескольких следующих заболеваний:

системная красная волчанка,
лекарственная волчанка,
синдром или болезнь Шегрена,
системная склеродермия,
синдром Шарпа.

Слабоположительный результат может быть вызван как наличием вышеперечисленных заболеваний, так и заболеваниями, не связанными с системой иммунитета. Перечислим основные болезни, которые могут его вызвать:

ревматоидный артрит, в том числе ювенильный (детский),
первичная легочная гипертензия,
идиопатический легочной фиброз,
синдром Рейно (дигитальный васкулит),
болезнь Крона,
узелковый периартериит,
гепатиты различной природы,
злокачественные новообразования (опухоли),
некоторые инфекционные болезни (туберкулез, шистосомоз, малярия).

Слабоположительный результат анализа иногда выявляется у здоровых лиц, чаще у женщин в возрасте старше 60 лет.

Исследование показано при симптомах, не исключающих аутоиммунную патологию соединительной ткани:

длительно сохраняющаяся повышенная температура тела;
беспричинное снижение массы тела;
уменьшение регионарных лимфатических узлов;
болезненность и скованность в суставах, когда не установлена иная причина патологии;
боли в мышцах;
кожная сыпь, особенно на лице в виде «красной бабочки» (нос и щеки рядом с крыльями носа);
перикардит и плеврит неясной причины;
изменения в общем и биохимическом анализе крови, когда исключены другие виды патологии.

Также анализ назначается при имеющемся аутоиммунном заболевании для контроля за эффективностью лекарственной терапии.

Анализ сдается утром натощак либо в другое время, однако не ранее 5-6 часов после последнего приема пищи. Также желательно не принимать никакие лекарственные средства до взятия крови на исследование.

Существует несколько вариантов проведения анализа, отличающихся по своей точности и возможности количественной оценки концентрации антител.

Скрининговое ИФА-исследование (иммуноферментный анализ) позволяет выявить наличие суммарных антинуклеарных антител и их титра. К плюсам метода относится его относительная дешевизна и возможность выяснить, необходимы ли расширенные исследования. При отрицательном результате анализа дальнейшие исследования чаще не показаны.

Непрямая флуоресцентная микроскопия — это метод, основанный на окрашивании антител специальными веществами, дающими под ультрафиолетовым светом зеленое свечение. Тип и характер свечения позволяет врачу лабораторной диагностики определить, с какими компонентами клетки связались антитела, а также примерно узнать их количество.

Иммуноблот-исследование позволяет определить наличие каждого типа антинуклеарных антител по отдельности. Чаще всего этот анализ назначается после положительного результата другого исследования для уточнения диагноза.

Ложноположительный результат анализа может быть вызван приемом некоторых групп лекарственных препаратов:

антидепрессанты;
антиаритмики (бисопролол, биосотал);
противосудорожные препараты (карбамазепин, фенитоин);
препараты для лечения атеросклероза (ловастатин, аторвастатин);
средства для понижения артериального давления.

Для лечения аутоиммунных заболеваний соединительной ткани применяются следующие группы препаратов:

кортикостероиды (позволяют уменьшить иммунный ответ организма и снизить концентрацию патологических антител);
антифиброзные препараты (уменьшаю явления склерозирования соединительной ткани);
иммуносупрессивные средства;
ангиопротекторы (препараты, защищающие сосуды);
нестероидные противовоспалительные средства.

Стоит заметить, что диагностика данной группы заболеваний сложна и требует ряда дополнительных исследований, кроме выявления антинуклеарных антител и их вида. Диагноз чаще всего не может быть установлен после однократного исследования крови.

источник

Антитела к ядерным антигенам (ANA) – это гетерогенная группа аутоантител, направленных против компонентов собственных ядер. Они являются маркером аутоиммунных заболеваний и определяются для их диагностики, оценки активности и контроля за их лечением.

В рамках исследования определяются антитела классов IgG , IgA , IgM .

Антиядерные антитела, антинуклеарные антитела, антинуклеарный фактор, АНФ.

Antinuclear Antibody, ANA, Fluorescent Antinuclear Antibody, FANA, Antinuclear factor, ANF.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Антитела к ядерным антигенам (ANA) – это гетерогенная группа аутоантител, направленных против компонентов собственных ядер. Они выявляются в крови пациентов с разнообразными аутоиммунными заболеваниями, такими как системные заболевания соединительной ткани, аутоиммунный панкреатит и первичный билиарный цирроз, а также с некоторыми злокачественными новообразованиями. Исследование ANA используется в качестве скрининга аутоиммунных заболеваний у пациента с клиническими признаками аутоиммунного процесса (длительная лихорадка неясного генеза, суставной синдром, кожные высыпания, слабость и др.). Такие пациенты при положительном результате анализа нуждаются в дальнейшем лабораторном обследовании, включающем более специфичные для каждого аутоиммунного заболевания тесты (например, анти-Scl-70 при подозрении на системную склеродермию, антитела к митохондриям при подозрении на первичный билиарный цирроз). Следует отметить, что отрицательный результат исследования ANA не исключает наличия аутоиммунного заболевания.

ANA наиболее характерны для пациентов с системной красной волчанкой (СКВ). Они обнаруживаются у 98 % больных ею, что позволяет считать это исследование основным тестом для диагностики СКВ. Высокая чувствительность ANA в отношении СКВ означает, что повторные отрицательные результаты делают диагноз «СКВ» сомнительным. При этом отсутствие ANA полностью не исключает заболевания. У небольшой части больных ANA отсутствуют на момент появления симптомов СКВ, но возникают в течение первого года болезни. У 2 % больных антитела к ядерным антигенам не выявляются никогда. При отрицательном результате анализа у пациента с симптомами СКВ целесообразно провести более специфичные для СКВ лабораторные тесты, в первую очередь на антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA). Выявление анти-dsDNA у пациента с клиническими признаками СКВ трактуется в пользу диагноза «СКВ» даже при отсутствии ANA.

СКВ возникает в результате комплекса иммунологических нарушений, развивающихся в течение длительного времени. Степень дисбаланса иммунной системы с течением болезни постепенно нарастает, что находит свое отражение в увеличении спектра аутоантител. Первый этап аутоиммунного процесса характеризуется наличием генетических особенностей иммунного ответа (например, определенных аллелей главного комплекса гистосовместимости, HLA) при отсутствии отклонений лабораторных исследований. На втором этапе в крови удается выявить аутоантитела, при этом клинических признаков СКВ нет. Антитела к ядерным антигенам, а также анти-Ro-, анти-La-, антифосфолипидные антитела наиболее часто выявляются на этом этапе. Обнаружение ANA ассоциировано с 40-кратным увеличением риска СКВ. Период между появлением ANA и развитием клинических симптомов бывает разным и составляет в среднем 3,3 года. Пациенты с положительным результатом анализа на ANA относятся к группе риска по развитию СКВ и нуждаются в периодическом наблюдении у ревматолога и в лабораторном обследовании. Третий этап аутоиммунного процесса характеризуется появлением симптомов болезни, при этом в крови удается обнаружить наиболее широкий спектр аутоантител, включая анти-Sm-антитела, антитела к двухцепочечной ДНК и рибонуклеопротеину. Таким образом, для получения полной информации о степени иммунологических нарушений при СКВ тест на ANA необходимо дополнять анализом на другие аутоантитела.

Течение СКВ варьируется от стойкой ремиссии до фульминантного люпус-нефрита. Чтобы дать прогноз заболевания, оценить его активность и эффективность лечения, используют различные клинические и лабораторные критерии. Так как ни один из тестов не позволяет однозначно предсказать обострение или поражение внутренних органов, мониторинг СКВ – это всегда комплексная оценка, включающая исследование ANA, а также других аутоантител и некоторых общеклинических показателей. На практике врач самостоятельно определяет набор тестов, наиболее точно отражающих, как изменяется течение заболевания у каждого пациента.

Особый клинический синдром представляет лекарственная волчанка. Она развивается на фоне приема некоторых лекарственных препаратов (чаще всего прокаинамида, гидралазина, некоторых ингибиторов АПФ и бета-блокаторов, изониазида, миноциклина, сульфасалазина, гидрохлортиазида и др.) и характеризуется симптомами, напоминающими СКВ. В крови большинства пациентов с лекарственной волчанкой также удается выявить ANA. При симптомах аутоиммунного процесса у пациента, принимающего эти препараты, рекомендуется анализ на ANA, чтобы исключить лекарственную волчанку. Особенность лекарственной волчанки заключается в исчезновении иммунологических нарушений и симптомов болезни после полной отмены препарата – в это время рекомендуется контрольное исследование ANA, и отрицательный результат подтверждает диагноз «лекарственная волчанка».

ANA выявляются у 3-5 % здоровых людей (в группе пациентов старше 65 лет эта цифра может достигать 10-37 %). Положительный результат у пациента без симптомов аутоиммунного процесса необходимо интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических, клинических и лабораторных данных.

Для чего используется исследование?

Для скрининга аутоиммунных заболеваний, таких как системные заболевания соединительной ткани, аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз и др.
Для диагностики системной красной волчанки, оценки ее активности, составления прогноза и контроля за ее лечением.
Для диагностики лекарственной волчанки.

Когда назначается исследование?

При симптомах аутоиммунного процесса: длительной лихорадке неясного генеза, болях в суставах, кожной сыпи, немотивированной утомляемости и др.

При симптомах системной красной волчанки (лихорадка, поражения кожи), артралгий/артрита, пневмонита, перикардита, эпилепсии, поражения почек.

Каждые 6 месяцев или чаще при обследовании пациента с диагнозом «СКВ».

При назначении прокаинамида, дизопирамида, пропафенона, гидралазина и других лекарственных препаратов, ассоциированных с развитием лекарственной волчанки.

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

системная красная волчанка;
аутоиммунный панкреатит;
аутоиммунные заболевания щитовидной железы;
злокачественные новообразования печени и легких;
полимиозит/дерматомиозит;
аутоиммунный гепатит;
смешанное заболевание соединительной ткани;
миастения;
диффузный интерстициальный фиброз;
синдром Рейно;
ревматоидный артрит;
системная склеродермия;
синдром Шегрена;
прием таких лекарств, как прокаинамид, дизопирамид, пропафенон, некоторые ингибиторы АПФ, бета-блокаторы, гидралазин, пропилтиоурацил, хлорпромазин, литий, карбамазепин, фенитоин, изониазид, миноциклин, гидрохлортиазид, ловастатин, симвастатин.

Причины отрицательного результата:

Что может влиять на результат?

Уремия может приводить к ложноотрицательному результату.
Многие лекарственные препараты ассоциированы с развитием лекарственной волчанки и появлением ANA в крови.

Отрицательный результат у пациента с признаками аутоиммунного процесса не исключает наличия аутоиммунного заболевания.
ANA выявляются у 3-5 % здоровых людей (10-37 % в возрасте старше 65 лет).
Положительный результат у пациента без симптомов аутоиммунного процесса необходимо интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических, клинических и лабораторных данных (риск СКВ у таких пациентов увеличен в 40 раз).

Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
Лейкоцитарная формула
Общий анализ мочи с микроскопией осадка
Креатинин в сыворотке
Альбумин в сыворотке
С3 компонент комплемента
Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
Билирубин общий
Скрининг болезней соединительной ткани
Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
Диагностика системной красной волчанки
Антифосфолипидные антитела IgG
Антифосфолипидные антитела IgM
Диагностика антифосфолипидного синдрома (АФС)

Кто назначает исследование?

Ревматолог, дерматовенеролог, нефролог, педиатр, врач общей практики.

Arbuckle MR, McClain MT, Rubertone MV, Scofield RH, Dennis GJ, James JA, Harley JB. Development of autoantibodies before the clinical onset of systemic lupus erythematosus. N Engl J Med. 2003 Oct 16;349(16):1526-33.
Bizzaro N, Tozzoli R, Shoenfeld Y. Are we at a stage to predict autoimmune rheumatic diseases? Arthritis Rheum. 2007 Jun;56(6):1736-44.
Guidelines for referral and management of systemic lupus erythematosus in adults. American College of Rheumatology Ad Hoc Committee on Systemic Lupus Erythematosus Guidelines. Arthritis Rheum. 1999 Sep;42(9):1785-96.
Fauci et al. Harrison’s Principles of Internal Medicine/A. Fauci, D. Kasper, D. Longo, E. Braunwald, S. Hauser, J. L. Jameson, J. Loscalzo; 17 ed. – The McGraw-Hill Companies, 2008.

источник

Лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний

журнал «Terra Medica nova» № 3 (15) 2007

С. В. Лапин,кандидат медицинских наук
А. А. Тотолян, доктор медицинских наук
Научно-методический центр по молекулярной медицине;
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова

Залогом эффективного лечения многих аутоиммунных заболеваний и предотвращения инвалидизации больного является тщательное лабораторное обследование. Его основу составляет выявление аутоантител в сыворотке крови и биологических жидкостях. В обзоре представлены принципиальные подходы к использованию аутоантител в качестве диагностических маркеров, описаны основные семейства аутоантител и применение конкретных серологических тестов в диагностике широкого спектра аутоиммунных заболеваний.

Заболевания, в патогенезе которых лежит патологическая реакция иммунной системы против собственных антигенов организма, относят к аутоиммунным. Врачам практически всех специальностей приходится сталкиваться с аутоиммунными процессами. Аутоиммунные состояния преобладают в ревматологии, нефрологии, дерматологии, часто отмечаются в гастроэнтерологии, неврологии, пульмонологии и многих других терапевтических специальностях (табл. 1). Распространенные аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, инсулинзависимый сахарный диабет, системные заболевания соединительной ткани, ускоряют течение атеросклероза и приводят к сердечно-сосудистой патологии. В основе атеросклероза, как полагают многие исследователи, лежит аутоиммунная реакция в отношении компонентов соединительной ткани сосудистой стенки и компонентов плазмы крови.

Таблица 1. Частота основных аутоиммунных заболеваний в США (данные за 1996 г.)

Механизмы нарушения иммунологической толерантности при аутоиммунных заболеваниях изучены плохо. Очевидно, что важную роль играет генетическая предрасположенность, обусловленная набором генов системы HLA, которые определяют направление иммунного ответа. На фоне предрасположенности определенное сочетание факторов внешней среды, включающее тканевое воспаление, вирусные и бактериальные инфекции, разрушение ткани или нарушение функций гематотканевых барьеров, приводит к сенсибилизации по отношению к собственным антигенам.

Хотя клеточный иммунный ответ лежит в основе аутоиммунных заболеваний, однако до сих пор не существует надежных и стандартизованных методов определения клеточных реакций против собственных антигенов. В то же время гуморальные иммунные ответы, характеризующиеся появлением аутоантител, широко используются в диагностике аутоиммунных заболеваний.

Аутоантитела представляют собой иммуноглобулины классов IgG, IgA, IgM, специфически связывающиеся с антигенными эпитопами молекул человеческого организма, хотя в лабораторных методах иногда используются близкие или идентичные человеческим антигены лабораторных животных. Известно, что аутоантитела, реагирующие с человеческими антигенами, изредка могут отмечаться на фоне нормального функционирования иммунной системы. Характерно, что в норме или на фоне неиммунных заболеваний аутоантитела выявляются в низких титрах, т. е. обладают низкой аффинностью. Среди аутоантител, которые чаще других отмечаются в норме, выделяют антинуклеарные антитела, небольшое содержание которых может быть выявлено у 2–3% здоровых лиц, несколько чаще — у пожилых, а также ревматоидный фактор, встречаемость которого в пожилом возрасте может достигать 10% популяции. Сравнительно часто на фоне неиммунных заболеваний выявляются антикардиолипиновые антитела, антитела к тиреопероксидазе и тиреоглобулину. Причина появления аутоантител на фоне нормального функционирования иммунной системы неизвестна, однако, как полагают, аутоантитела в норме могут играть определенную роль в осуществлении аутотолерантности и предотвращении развития аутоиммунных процессов.

Роль аутоантител в патогенезе большинства аутоиммунных процессов четко не определена. При подавляющем большинстве аутоиммунных заболеваний аутоантитела не принимают участия в конкретных патогенетических механизмах и являются свидетелями аутоиммунного процесса. Действительно, практически при каждом аутоиммунном заболевании может быть определена группа так называемых серонегативных форм, при которых аутоантитела не обнаруживаются даже при классическом течении заболевания. Прежде всего, это связано с несовершенством применяемых лабораторных методов, и по мере описания новых разновидностей аутоантител группа «серонегативных» пациентов сужается. В то же время этот факт подчеркивает разнообразие мишеней аутоантител и широкую направленность иммунного ответа.

Антинуклеарный фактор и антинуклеарные антитела

Антинуклеарные антитела (АНА) представляют собой семейство аутоантител, насчитывающее около 200 разновидностей, которые способны связываться с нуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками. Они встречаются более чем у 90% пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка, склеродермия, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена, аутоиммунные заболевания печени. Представители этого семейства аутоантител могут быть обнаружены при множестве инфекционных, воспалительных и онкологических заболеваний. Все это обусловливает большое клиническое значение серологического обследования больных с подозрением на системное аутоиммунное заболевание. Действительно, тесты по определению АНА являются наиболее часто выполняемыми лабораторными анализами во всех клинических иммунологических лабораториях.

Общепризнанный стандарт определения АНА — выявление антинуклеарного фактора (АНФ) на перевиваемой клеточной линии НЕр-2 с помощью непрямой иммунофлуоресценции. Совместно с НЕр-2 клетками может использоваться печень приматов, применение которой улучшает выявление некоторых разновидностей АНА. Этот подход широко используется в наборах для непрямой иммунофлуоресценции, предлагаемых немецкой фирмой «EUROIMMUN». Подобный подход позволяет лучше дифференцировать ряд антинуклеарных антигенов, включая SSA, RNP, Ku. Другим надежным субстратом является модифицированная линия клеток НЕр-2 — клетки Hep-20–10, обладающая высоким митотическим потенциалом и увеличивающая выявляемость антител к антигенам митотических клеток, таких как PCNA и центромеры. Некоторые фирмы («Immunoconcepts», США) предлагают также клетки Hep-2000, которые содержат дополнительный ген SSA антигена и обладают повышенной чувствительностью для его выявления.

Результат метода выражается в титре, который указывает на содержание и аффинность аутоантител. Норма составляет менее 1/80, причем низкие титры АНФ 1/80–1/160 изредка могут отмечаться у клинически здоровых лиц. Обнаружение высоких титров АНФ более 1/320 с большей вероятностью указывает на системное ревматическое заболевание. Кроме определения титра, АНФ на перевиваемой клеточной линии НEр-2 позволяет описать тип свечения ядра клетки, который указывает, с какими антигенными мишенями взаимодействуют аутоантитела. Определяются 6 основных типов свечения и около 20 минорных типов свечения, описание которых самостоятельного диагностического значения не имеет. Гомогенный и периферический типы свечения ядра наиболее характерны для системной красной волчанки; гранулярный отмечается при синдроме Шегрена, смешанном заболевании соединительной ткани и артритах; ядрышковый и центромерный типы свечения характерны для склеродермии и ее разновидностей. Цитоплазматический тип свечения клетки отмечается при аутоиммунных заболеваниях печени.

К сожалению, в связи с методическими ограничениями, в большинстве отечественных лабораторий популярность получили скрининговые иммуноферментные тесты для определения антинуклеарных антител (антител к экстрагируемым ядерным антигенам), основанные на методе ИФА. Их иногда приравнивают к определению АНФ, хотя мы считаем целесообразным называть термином «АНФ» только иммунофлуоресцентный тест выявления АНА. Иммуноферментные тесты определяют АНА, направленные только к растворимым антигенам ядра клетки. По нашему опыту, они могут упускать до трети положительных результатов выявления АНА, и в то же время эти методы являются сравнительно неспецифичными.

После обнаружения АНФ или антител к экстрагируемым ядерным антигенам необходимо установить клеточную мишень АНА, так как определение спектра АНА тесно связано с конкретным диагнозом. Минимальный набор обычно включает определение антител к Sm, RNP, SS-A и SS-B антигенам, а также Scl-70, CENT-B и Jo-1. Такой спектр обобщает наиболее часто встречающиеся мишени АНА, а также основные ревматические заболевания.

Одним из наилучших подходов к определению спектра АНА является использование метода иммуноблота, который представляет собой надежную (и более дешевую) альтернативу ИФА. Так, в лайн-блоте «АНА-профиль 3», основанном на очищенных и рекомбинантных антигенах, производимом фирмой «EUROIMMUN», в одном тесте выявляются антитела к 15 различным внутриклеточным антигенам, охватывающим большинство ядерных мишеней АНА.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник