Групповые антитела по системе аво анализ

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, может быть использовано для титрования групповых антител системы АВО. Для определения титра естественных антител в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений сыворотки крови. Инкубируют полученные смеси 20-25 минут при температуре 21-23°C. Далее центрифугируют и определяют титр по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты. Для определения титра полных иммунных антител используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводя ее в четыре раза. Затем прогревают сыворотку в разведении 1:4 в течение 10 минут при температуре 70°. Готовят последующие разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4. Далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси 20-25 минут при температуре 21-23°C, центрифугируют и определяют титр исследуемых антител. Для определения титра неполных иммунных антител используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводят ее в четыре раза. Затем прогревают разведенную сыворотку крови в течение 10 минут при температуре 70°C. Готовят последующие разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4. Далее в каждую колонку гелевой карты с реактивом Кумбса вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси, оставляя гелевую карту или карты с реактивом Кумбса на 20-25 минут при температуре 37°C. После чего гелевую карту или карты с реактивом Кумбса центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты. Использование ланного способа позволяет предотвращать антитело-опосредованной реакции отторжения при проведении АВО-несовместимых трансплантаций органов. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, может быть использовано для предотвращения антитело-опосредованной реакции отторжения при проведении АВО-несовместимых трансплантаций органов.

Недостаток донорских органов приводит к увеличению числа пациентов, ожидающих трансплантацию. Одним из путей, дающих возможность увеличить число доноров печени, почки, сердца, является преодоление иммунологического барьера — АВО-несовместимости. Несовместимость по АВО зачастую приводит к отказу от подходящего по другим параметрам донора. Трансплантация АВО-несовместимого органа может привести к реакции опосредованного антителами молниеносного отторжения (hyperacute rejection). В зависимости от распределения групп крови в различных популяциях исключаются около 30-35% потенциальных доноров вследствие несовместимости по АВО.

Первые АВО-несовместимые трансплантации были проведены в середине прошлого века, однако результат был негативным в связи с реакцией молниеносного отторжения.

После введения в практику специфических анти-А или анти-В иммуносорбционных колонок (Glycosorb®) и анти-CD2O моноклональных антител (rituximab) в различных терапевтических режимах, АВО-несовместимая почечная трансплантация стала обычной процедурой в европейских странах, особенно в Швеции и Германии (Tyden G, Kumlien G, Genberg H, et al. (2005) ABO-incompatible kidney transplantations without splenectomy, using antigen-specific immunoadsorption and rituximab. Am JTransplant, 5:145-148).

Разработка предоперационного протокола подготовки для достижения целевого титра анти-А/В 1 (II) и В (III) ID-DiaCell АВ0 0,8% Bio-Rad или Grifols SerigrupDiana A 1 /B,

— изотонический 0,9% раствор NaCl

— культуральный планшет для разведения сыворотки (вместо него можно использовать пробирки типа эппендорф, планшет для ИФА),

— центрифуга для гелевых карт ID-Centrifuge 12 SII для колоночных карт,

— дозаторы с переменным объемом от 25 до 200 мкл.

Для определения и естественных антител класса Ig M сыворотку, полученную в результате центрифугирования крови пациента, последовательно разводят в планшете от 1:1 до 1:1024.

1. Начиная со второй лунки в каждую лунку планшета вносят 200 мкл изотонического раствора NaCl.

2. В первую и во вторую лунку вносят по 200 мкл неразведенной сыворотки.

Во второй лунке сыворотку перемешивают пипетированием с раствором NaCl, затем 200 мкл разведенной сыворотки переносят в третью лунку, где перемешивают и переносят в четвертую лунку и так далее до последней лунки, где получают разведение 1024.

3. Подписывают гелевую нейтральную карту — Ф.И.О. пациента, дата исследования, разведение сыворотки.

4. В каждую колонку гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов A 1 , если определяют титр изоагглютининов, или 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов В, если определяют титр изоагглютининов. При необходимости определения одновременно титра и антител количество колонок удваивается.

5. В первую колонку вносят 25 мкл неразведенной сыворотки, во вторую и последующие колонки вносят по 25 мкл сыворотки каждого разведения.

6. Карты оставляют на 20-25 минут при комнатной температуре для реакции агглютинации.

7. Затем карты центрифугируют при стандартном режиме в центрифуге для карт 10 минут и оценивают результаты.

Титром считается последнее разведение, при котором в толще колонки гелевой карты будут наблюдаться сагглютинированные эритроциты (следующая колонка, в которой все эритроциты осели на дно, уже считается отрицательной).

Определение иммунных антител системы АВО (анти-А и анти-В) проводят следующим образом.

Исследуемую сыворотку в пробирке эппендорф разводят в четыре раза изотоническим 0,9% раствором NaCl (например, 100 мкл сыворотки+300 мкл NaCl), затем прогревают в течение 10 минут при 70°C. Таким образом получают прогретую сыворотку с разведением 1:4.

Далее, для определения полных иммунных антител титруют прогретую сыворотку по методике определения титра естественных групповых антител, описанной нами выше, с применением нейтральных гелевых карт. Сыворотку, полученную в результате центрифугирования крови пациента, разведенную 1/4, прогретую, последовательно разводят в планшете от 1:4 до 1:1024.

1. Начиная со второй лунки в каждую лунку планшета вносят 200 мкл изотонического раствора NaCl.

2. В первую и во вторую лунку вносят по 200 мкл прогретой разведенной 1:4 сыворотки.

Во второй лунке сыворотку перемешивают пипетированием с раствором NaCl, затем 200 мкл разведенной сыворотки переносят в третью лунку, где перемешивают и переносят в четвертую лунку и так далее до последней лунки, где получают разведение 1:1024.

3. Подписывают гелевую нейтральную карту — Ф.И.О. пациента, дата исследования, разведение сыворотки.

4. В каждую колонку гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов A 1 , если определяют титр — Анти-А, и 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов В, если определяют титр Анти-В. При необходимости определения одновременно титра анти-А и анти-В антител количество колонок удваивается.

5. В первую колонку вносят 25 мкл разведенной 1:4 сыворотки, во вторую и последующие колонки вносят по 25 мкл сыворотки каждого разведения.

6. Карты оставляют на 20-25 минут при комнатной температуре для реакции агглютинации.

7. Затем карты центрифугируют при стандартном режиме в центрифуге для карт 10 минут и оценивают результаты.

Титром считается последнее разведение, при котором в толще колонки гелевой карты будут наблюдаться сагглютинированные эритроциты (следующая колонка, в которой все эритроциты осели на дно, уже считается отрицательной).

Для выявления неполных иммунных IgG антител (анти-А и анти-В), выполняют следующие операции.

Сыворотку, полученную в результате центрифугирования крови пациента, разведенную 1/4, прогретую, последовательно разводят в планшете от 1:4 до 1:1024.

1. Определение неполных иммунных антител начинают последующим разведением прогретой сыворотки изотоническим раствором NaCl в культуральном планшете, как для естественных изоагглютининов. Начиная со второй лунки, в каждую лунку вносят 200 мкл изотонического раствора NaCl.

2. В первую и во вторую лунку вносят по 200 мкл прогретой сыворотки с разведением 1/4. Во второй лунке сыворотку перемешивают с раствором NaCl, используя пипетку, затем 200 мкл разведенной сыворотки переносят в третью лунку, где перемешивают, и 200 мкл переносят в четвертую лунку и так далее до последней лунки, где получается разведение 1/4096. Если сыворотка титруется второй раз и известен ее последний титр, то достаточно внести в карточку последнее известное разведение+2 разведения.

3. Подписывают гелевые карты LISS/Coombs Anti-IgG+C3d (Ф.И.О. пациента, дата исследования, разведение сыворотки).

4. Затем в каждую колонку гелевой карты Liss/Coombs вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов A 1 , если определяем титр анти-А, и эритроцитов В, если определяем титр анти-В. При необходимости определения одновременно титра Анти-А и Анти-В антител количество колонок удваивается.

5. В первую колонку вносят 25 мкл сыворотки с разведения 1/4, во вторую и последующие колонки вносят по 25 мкл последовательно разведенных сывороток в соответствующие колонки.

6. Карты оставляют на 20-25 минут при 37°C для реакции агглютинации.

7. Затем карты откручивают в центрифуге при стандартном режиме для карт 10 минут.

Оценивают результаты: титром антител считается последнее разведение, при котором в толще колонки гелевой карты будут наблюдаться сагглютинированные эритроциты (следующая колонка, в которой все эритроциты осели на дно, уже считается отрицательной.).

В результате исследования выявляются естественные антитела — агглютинины и (термолабильные) и иммунные полные и неполные анти-А и анти-В антитела (термостабильные).

Высокий титр естественных агглютининов ( выше чем 1:256 и выше чем 1:128) при отсутствии иммунных антител в момент исследования отражает состояние повышенной сенсибилизации организма, что позволяет сделать предположение о бывшем в прошлом поступления антигена, несовместимого по АВО системе.

Выявление иммунных антител свидетельствует об имевшем место поступлении в организм человека антигена, несовместимого по АВО системе.

Отсутствие иммунных термостабильных антител при титре естественных изоагглютининов не выше чем 1:256 и не выше чем 1:128 говорит об отсутствии у человека изоиммунизации групповыми факторами системы АВО.

Для доказательства возможности осуществления заявленного изобретения с достижением указанного назначения и технического результата приводим следующие данные.

Нами проведено титрование изоагглютининов по предложенному способу при 38 разногруппных трансплантациях. Для одного пациента, в среднем, проводилось от 2 до 5 титрований до операции и от 5 до 30 титрований после операции (АВО-несовместимой трансплантации). Всего было выполнено 680 титрований. Во всех исследованиях получены результаты, в зависимости от которых проводилась предоперационная подготовка пациентов и их ведение в послеоперационном периоде.

110 титрований были поставлены в параллели с общепринятым солевым методом на плоскости. В 90% случаев разница с солевым методом (способ-прототип) составляла от 1 до 3 разведений. Причем агглютинация была выявлена при проведении заявляемого способа при большем разведении сыворотки.

Пациент М., 03.10.2011 г. рождения. Диагноз: цирроз печени в исходе болезни Caroli. Группа крови 0(I) Rh-фактор положительный.

18.06.2012 г. пациенту была проведена операция трансплантации части печени от донора-родственника — группа крови А(II), Rh-фактор положительный.

При исследовании сыворотки крови пациента до операции методом серийных разведений в солевой среде на плоскости определился титр естественных -антител 1/16, титр иммунных полных антител 0, неполных антител 1/16. При таких исходных показателях предоперационная подготовка с целью снижения титра антител не требуется.

Одновременно проводилось титрование тех же проб сывороток по предложенному способу, титры антител соответственно были равны 1/64; 0; 1/64, что потребовало предоперационной подготовки в виде введения мабтеры, проведения пяти процедур плазмафереза с 8.06.2012 по 17.06.2012 с целью уменьшения титра естественных и неполных иммунных антител в крови пациента. В результате, ко дню операции, титр естественных -антител снизился до 1/1 в геле и до 0 — в солевом методе, титр иммунных неполных анти-А в геле снизился до 1/4. В послеоперационном периоде естественные и полные иммунные групповые антитела не определялись в обоих методах титрования, титр неполных антител в солевом методе не определялся, в предлагаемом методе — постепенно снижался с 1:4 до 0. На фоне проводимой терапии в настоящее время антитела у пациента не определяются.

Таким образом, разница в результатах двух методов была в 1-3 разведения, более чувствительным был предлагаемый способ титрования.

Пациент Л., 19 лет. Диагноз: Врожденная аномалия развития мочевыделительной системы. Аплазия правой почки. Состояние после пластики гидронефроза слева. ХПН, терминальная стадия. Нефрогенная анемия. Группа крови 0(I), Rh-фактор положительный.

01.03.2012 г. пациенту была проведена операция родственной аллотрансплантации почки справа от донора- родственника — группа крови А(II), Rh-фактор положительный.

При исследовании сыворотки крови пациента до операции методом серийных разведений в солевой среде на плоскости определился титр естественных -антител 1/32, титр иммунных полных антител 1/8, неполных антител 1/4.

Одновременно проводилось титрование тех же проб сывороток по предложенному способу, титры антител соответственно были равны 1/128; 1/16; 1/16, что потребовало предоперационной подготовки в виде введения мабтеры 15.02.2012 г. и проведения четырех процедур анти-А иммуносорбции с 22.02.2012 по 29.02.2012 г. с целью уменьшения титра естественных, полных и неполных иммунных антител в крови пациента. В результате, ко дню операции, титр естественных -антител снизился до 1/8 в геле и до 0 — в солевом методе, титр иммунных полных анти-А снизился до 1/8 (в солевом методе 1:4) и титр полных антител до 1/16 в геле (в солевом 1:4).В послеоперационном периоде титр естественных антител в геле был 1:4 (в солевом методе антитела не определялись), полные иммунные групповые антитела не определялись в обоих методах титрования, титр неполных антител в солевом методе не определялся, в предлагаемом методе — 1/8 постепенно снижался до 1/4. На фоне проводимой терапии в настоящее время антитела у пациента не определяются.

Таким образом, разница в результатах двух методов была в 1-3 разведения, более чувствительным был предлагаемый способ титрования

Способ титрования групповых антител системы АВО, при котором определяют титр естественных антител, для чего используют 200-400 мкл сыворотки крови, готовят ее разведения, далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений, инкубируют полученные смеси, оставляя нейтральную гелевую карту или карты на 20-25 минут при температуре 21-23°C, после чего нейтральную гелевую карту или карты центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты; определяют титр полных иммунных антител, для чего используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводят ее в четыре раза, затем прогревают в течение 10 минут при температуре 70°C, готовят разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4, далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений, инкубируют полученные смеси, оставляя нейтральную гелевую карту или карты на 20-25 минут при температуре 21-23°C, после чего нейтральную гелевую карту или карты центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты; определяют титр неполных иммунных антител, для чего используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводят ее в четыре раза, затем прогревают в течение 10 минут при температуре 70°C, готовят разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4, далее в каждую колонку гелевой карты с реактивом Кумбса вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений, инкубируют полученные смеси, оставляя гелевую карту или карты с реактивом Кумбса на 20-25 минут при температуре 37°C, после чего гелевую карту или карты с реактивом Кумбса центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты.

источник

Антигрупповые антитела со стандартными эритроцитами (естественные анти-А, анти-В, иммунные неполные анти-А, анти-В)

Определение наличия антител к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, свидетельствующим о сенсибилизации организма к этим антигенам. Данные антитела являются одной из возможных причин гемолитической болезни новорождённых.

Титр антигрупповых антител, анализ на совместимость по группе крови, анализ на групповую (АВ) сенсибилизацию, анализ на АВО гемолитическую болезнь новорождённых (АВО ГБН), скрининг беременных на анти-А и анти-В, титр анти-А и анти-В.

Синонимы английские

Titration of anti-A/B antibody, screening of antenatal women for anti-A/B antibodies, ABO incompatibility test, test for hemolytic disease ABO, Anti-A and anti-B titers, titers of ABO antibodies, Anti-A/B in blood is maternal IgG.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.
• Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.

Общая информация об исследовании

Эритроциты – это красные кровяные клетки (тельца), главная функция которых заключается в переносе молекул кислорода по организму. На своей поверхности они несут особые белки – агглютиногены. В плазме крови циркулируют агглютинины (антитела) против чужих агглютиногенов, не свойственных собственной группе крови. Существует два групповых агглютиногена – А и В – и два групповых агглютинина – α и β. Наличие тех или иных агглютининов и агглютиногенов определяет группу крови. Если по каким-то причинам в кровяное русло попадают чужие агглютиногены, то запускается реакция антиген-антитело и они уничтожаются агглютинами. При этом происходит склеивание несовместимых эритроцитов – агглютинация. Поэтому так важно при переливании использовать кровь, не содержащую агглютиногенов, против которых у реципиента есть антитела, т.е. полностью совместимую.

Люди с О(I) группой являются универсальными донорами, а с AB (IV) – универсальными реципиентами. У детей возможно переливание цельной крови только одноименной группы. У взрослых же допускается в безвыходных ситуациях использование О (I) группы, но при этом ее количество должно быть ограничено. Это объясняется тем, что групповые антитела у доноров с этой группой (особенно анти-А) иногда носят иммунный характер, бывают очень активными и могут разрушить кровяные тельца в крови реципиента другой группы.

Кроме переливания, также во время беременности возможна такая ситуация, если у матери и плода разные группы крови, а плацента по разным причинам не может выполнять барьерную функцию. В таком случае агглютинины матери «атакуют» красные тельца ребенка, высвобождая гемоглобин и способствуя кислородному голоданию. При этом появляется риск развития гемолитической болезни плода, которая приводит к патологическому развития его органов (головного мозга, сердечно-сосудистой системы, печени). Развитие межгруппового конфликта возможно не ранее 8-10 недели беременности.

Считается, что чуть меньше половины беременных находятся в зоне риска по групповой несовместимости. Такое возможно, если у матери 0 (1) группа, у отца A (II), B (III) или AB (IV); мать имеет A (II), отец – B (III) или AB (IV), у матери B (III), у отца A (II) или AB (IV). Чаще всего конфликт бывает, когда у матери первая группа крови, а у плода – вторая. Это связано с тем, что среди групповых антигенов А и В большей иммуногенностью обладает аллотип А1. По ряду источников, групповая сенсибилизация по А встречается с частотой 1:150 рождений.
Если во время беременности не было факторов, снижающих защитную роль плаценты (например, поражение ее сосудов, отслойка), то риск возникновения конфликта по группе крови минимальный. Но и в этом случае не стоит забывать, что кровь может смешаться во время родов и у новорождённого это проявится желтухой, а в крайне редких случаях разовьется гемолитическая болезнь.

В целом риск развития группового конфликта меньше, чем резус-конфликта (по резус-фактору), и проявления менее выражены. В ряде случаев его можно заподозрить только по желтухе новорождённого.

Беременным из группы риска рекомендуется ежемесячно проводить тестирование на групповую сенсибилизацию, а в случае необходимости – еще чаще.

Следует помнить, что при ошибочном переливании несовместимой крови иммунные анти-А или анти-В появляются обычно на 5-7-й день. Их титр постепенно нарастает и становится максимальным к 15-25-му дню с последующим падением. Одновременно с этим повышается титр естественных антител, который также снижается после 25-30-го дня.

Для чего используется исследование?

• Для определения антигруппового конфликта;
• для решения вопроса о причинах гемотрансфузионных осложнений;
• для дифференциальной диагностики возможных причин гемолитической болезни у новорождённого.

Когда назначается исследование?

• При невынашивании беременности;
• при спонтанных выкидышах в анамнезе;
• при наблюдении за беременными из группы риска (профилактика групповой сенсибилизации);
• при подозрении на гемолитическую болезнь плода по данным других исследований (например, увеличение печени по УЗИ);
• при наличии гемолитической болезни новорождённых у предыдущего ребёнка;
• в схеме подготовки к гемотрансфузии;
• при иммуногематологическом обследовании пациентов с гемотрансфузионными осложнениями.

Официальные референсные диапазоны для данного теста не предоставляются. Интерпретация результата должна осуществляться лечащим врачом-клиницистом с учетом всех клинических, анамнестических и лабораторных данных.

Что может влиять на результат?

• Прием лекарственных средств;
• наличие сопутствующих заболеваний;
• «кровяные химеры» (две популяции эритроцитов, отличающихся по группе крови и другим антигенам, одновременно циркулирующих в крови); такое возможно, например, в результате многократного переливания эритроцитной массы или взвеси группы 0(I) реципиентам другой группы .



• Титр антител не всегда указывает на гемолитическую болезнь новорождённых и степень ее тяжести. Возможны ситуации, когда при высоком титре рождается здоровый ребенок, а при низких – с признаками, указывающими на внутриутробную гипоксию. Но в любом случае необходим динамический контроль за анти-А, анти-В, за состоянием плода.
• Если в результате анализа у матери обнаружены только естественные анти-А и анти-В, значит, плацента находится в нормальном состоянии и риск антигруппового конфликта минимален.
• Для объективности получаемых данных необходимо проводить исследование в динамике всей беременности (не реже 1 раза в месяц, после 30-й недели или по показаниям – один раз в 2 недели).
• Возможны скачкообразные изменения титров антигенов, что скажется на динамике выработки антител.

источник

Вступила в действие новая Акция по программе лояльности КАРТА ЗДОРОВЬЯ

Практические занятия для студентов ПМФИ

Функции. Группы крови — это генетически наследуемые признаки, не изменяющиеся в течение жизни при естественных условиях. Группа крови представляет собой определенное сочетание поверхностных антигенов эритроцитов (агглютиногенов) системы АВО.Определение групповой принадлежности широко используется в клинической практике при переливании крови и ее компонентов, в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности. Система групп крови AB0 является основной системой, определяющей совместимость и несовместимость переливаемой крови, т.к. составляющие ее антигены наиболее иммуногенны. Особенностью системы АВ0 является то, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену. Систему группы крови АВ0 составляют два групповых эритроцитарных агглютиногена (А и В) и два соответствующих антитела — агглютинины плазмы альфа(анти-А) и бета(анти-В). Различные сочетания антигенов и антител образуют 4 группы крови:

• Группа 0(I) — на эритроцитах отсутствуют групповые агглютиногены , в плазме присутствуют агглютинины альфа и бета.
• Группа А(II) — эритроциты содержат только агглютиноген А, в плазме присутствует агглютинин бета;
• Группа В(III) — эритроциты содержат только агглютиноген В, в плазме содержится агглютинин альфа;
• Группа АВ(IV) — на эритроцитах присутствуют антигены А и В, плазма агглютининов не содержит.

Определение групп крови проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойной метод, или перекрестная реакция).

Несовместимость крови наблюдается, если эритроциты одной крови несут агглютиногены (А или В), а в плазме другой крови содержатся соответствующие агглютинины (альфа- или бета), — при этом происходит реакция агглютинации.

Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая групповую совместимость. Чтобы избежать несовместимости крови донора и реципиента, необходимо лабораторными методами точно определить их группы крови. Лучше всего переливать кровь, эритроциты и плазму той же группы, которая определена у реципиента. В экстренных случаях эритроциты группы 0 (но не цельную кровь!) можно переливать реципиентам с другими группами крови; эритроциты группы А можно переливать реципиентам с группой крови А и АВ, а эритроциты от донора группы В — реципиентам группы В и АВ.

Групповые агглютиногены находятся в строме и оболочке эритроцитов. Антигены системы АВО выявляются не только на эритроцитах, но и на клетках других тканей или даже могут быть растворенными в слюне и других жидкостях организма. Развиваются они на ранних стадиях внутриутробного развития, и у новорожденного уже находятся в существенном количестве. Кровь новорожденных детей имеет возрастные особенности — в плазме могут еще не присутствовать характерные групповые агглютинины, которые начинают вырабатываться позже (постоянно обнаруживаются после 10 месяцев) и определение группы крови у новорожденных в этом случае проводится только по наличию антигенов системы АВО.

Помимо ситуаций, связанных с необходимостью переливания крови, определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных.

Гемолитическая болезнь новорожденных

Гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты.. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.

Существуют разновидности (слабые варианты) антигена А (в большей степени) и реже антигена В. Что касается антигена А, имеются варианты: «сильный» А1 (более 80%), слабый А2 (менее 20%), и еще более слабые (А3, А4, Ах — редко). Это теоретическое понятие имеет значение для переливания крови и может вызвать несчастные случаи при отнесении донора А2 (II) к группе 0 (I) или донора А2В (IV) — к группе В (III), поскольку слабая форма антигена А иногда обуславливает ошибки при определении группы крови системы АВO. Правильное определение слабых вариантов антигена А может требовать повторных исследований со специфическими реагентами.

Снижение или полное отсутствие естественных агглютининов альфа и бета иногда отмечается при иммунодефицитных состояниях :

• новообразования и болезни крови — болезнь Ходжкина, множественная миелома, хроническая лимфатическая лейкемия;
• врожденные гипо- и агаммаглобулинемия;
• у детей раннего возраста и у пожилых;
• иммуносупрессивная терапия;
• тяжелые инфекции.

Трудности при определении группы крови вследствие подавления реакции гемагглютинации возникают также после введения плазмозаменителей, переливания крови, трансплатации, септицемии и пр.

В основе закономерностей наследования групп крови лежат следующие понятия. В локусе гена АВО возможны три варианта (аллеля) — 0, A и B, которые экспрессируются по аутосомно-кодоминантному типу. Это означает, что у лиц, унаследовавших гены А и В, экспрессируются продукты обоих этих генов, что приводит к образованию фенотипа АВ (IV). Фенотип А (II) может быть у человека, унаследовавшего от родителей или два гена А, или гены А и 0. Соответственно фенотип В (III) — при наследовании или двух генов В, или В и 0. Фенотип 0 (I) проявляется при наследовании двух генов 0. Таким образом, если оба родителя имеют II группу крови (генотипы AА или А0), кто-то из их детей может иметь первую группу (генотип 00). Если у одного из родителей группа крови A(II) с возможным генотипом АА и А0, а у другого B(III) с возможным генотипом BB или В0 — дети могут иметь группы крови 0(I), А(II), B(III) или АВ (!V).

• Определение трансфузионной совместимости;
• Гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по системе АВ0);
• Предоперационная подготовка;
• Беременность (подготовка и наблюдение в динамике беременных с отрицательным резус-фактором)

Подготовка к исследованию: не требуется

Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)

Метод определения: Фильтрация проб крови сквозь гель, импрегнированный моноклональными реагентами — агглютинация + гель-фильтрация (карточки, перекрестный метод).

При необходимости (обнаружение А2-подтипа) проводится дополнительное тестирование с использованием специфических реактивов.

Результат исследования:

• 0 (I) — первая группа,
• A (II) — вторая группа,
• B (III) — третья группа,
• AB (IV) — четвертая группа крови.

При выявлении подтипов (слабых вариантов) групповых антигенов результат выдается с соответствующим комментарием, например, «выявлен ослабленный вариант А2, необходим индивидуальный подбор крови».

Основной поверхностный эритроцитарный антиген системы резус, по которому оценивают резус-принадлежность человека.

Функции. Антиген Rh — один из эритроцитарных антигенов системы резус, располагается на поверхности эритроцитов. В системе резус различают 5 основных антигенов. Основным (наиболее иммуногенным) является антиген Rh (D), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Эритроциты примерно 85% людей несут этот белок, поэтому их относят к резус-положительным (позитивным). У 15 % людей его нет, они резус-отрицательны (негативны). Наличие резус-фактора не зависит от групповой принадлежности по системе АВ0, не изменяется в течение жизни, не зависит от внешних причин. Он появляется на ранних стадиях внутриутробного развития, и у новорожденного уже обнаруживается в существенном количестве. Определение резус принадлежности крови применяется в общей клинической практике при переливании крови и ее компонентов, а также в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности.

Несовместимость крови по резус-фактору (резус-конфликт) при переливании крови наблюдается, если эритроциты донора несут Rh -агглютиноген, а реципиент является резус-отрицательным. В этом случае у резус-отрицательного реципиента начинают вырабатываться антитела, направленные против резус-антигена , приводящие к разрушению эритроцитов. Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая совместимость не только по группе крови, но и по резус-фактору. Присутствие и титр уже имеющихся в крови антител к резус-фактору и других аллоиммунных антител можно определить, указав тест «anti-Rh (титр)».

Определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод- резус-положителен. В случае, если у матери Rh +, а плод — резус — отрицателен, опасности гемолитической болезни для плода нет.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденных — гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь может быть обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, N-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам (по статистике 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны с D — резус-антигеном). Любой из указанных антигенов, проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или повторных выкидышей.

В настоящее время существует возможность медицинской профилактики развития резус-конфликта и гемолитической болезни новорожденных. Все резус-отрицательные женщины в период беременности должны находиться под наблюдением врача. Необходимо также контролировать в динамике уровень резус-антител.

Есть небольшая категория резус-положительных лиц, способных образовывать анти-резус антитела. Это лица, эритроциты которых характеризуются значительно сниженной экспрессией нормального антигена Rh на мембране («слабый» D, Dweak) или экспрессией измененного антигена Rh (частичный D, Dpartial). Эти слабые варианты антигена D в лабораторной практике объединяют в группу Du , частота которой составляет около 1%.

Реципиенты, содержание антиген Du, должны быть отнесены к резус-отрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ. Доноры с антигеном Du квалифицируются как резус-положительные доноры, так как переливание их крови может вызвать иммунный ответ у резус-отрицательных реципиентов, а в случае предшествующей сенсибилизации к антигену D — и тяжелые трансфузионные реакции.

Наследование резус-фактора крови.

В основе закономерностей наследования лежат следующие понятия. Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d — рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные — только генотип dd). Человек получает от каждого из родителей по 1 гену — D или d, и у него возможны, таким образом, 3 варианта генотипа — DD, Dd или dd. В первых двух случаях (DD и Dd) анализ крови на резус фактор даст положительный результат. Только при генотипе dd человек будет иметь резус-отрицательную кровь.

Рассмотрим некоторые варианты сочетания генов, определяющих наличие резус фактора, у родителей и ребенка

• 1) Отец резус — позитивный (гомозигота, генотип DD), у матери резус — отрицательный (генотип dd). В этом случае все дети будут резус — положительными (вероятность 100%).
• 2) Отец резус — позитивный (гетерозигота, генотип Dd), мать — резус- отрицательная (генотип dd). В этом случае вероятность рождения ребенка с отрицательным или положительным резусом одинакова и равна 50 %.
• 3) Отец и мать гетерозиготы по данному гену (Dd), оба резус — позитивны. В этом случае возможно (с вероятностью около 25%) рождение ребенка с отрицательным резусом.

• Определение трансфузионной совместимости;
• Гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по резус-фактору);
• Предоперационная подготовка;
• Беременность (профилактика резус-конфликта).

Подготовка к исследованию: не требуется.

Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)

Метод определения: Фильтрация проб крови сквозь гель, импрегнированный моноклональными реагентами — агглютинация + гель-фильтрация (карточки, перекрестный метод).

Результат выдается в форме:
Rh + положительная Rh — отрицательная
При выявлении слабых подтипов антигена D (Du) выдается комментарий : «выявлен слабый резус-антиген (Du), рекомендуется при необходимости переливать резус-отрицательную кровь».

Анти — Rh (аллоиммунные антитела к резус-фактору и другим эритроцитарным антигенам)

Антитела к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, в первую очередь резус-фактору, свидетельствующие о сенсибилизации организма к этим антигенам.

Функции. Резус-антитела относятся к так называемым аллоиммунным антителам. Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (к резус-фактору или другим эритроцитарным антигенам) появляются в крови при особых условиях — после переливания иммунологически несовместимой донорской крови или при беременности, когда эритроциты плода, несущие иммунологически чужеродные для матери отцовские антигены, проникают через плаценту в кровь женщины. У неиммунных резусотрицательных людей антител к резус-фактору нет. В системе резус различают 5 основных антигенов, основным (наиболее иммуногенным) является антиген D (Rh), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Помимо антигенов системы резус есть еще ряд клинически важных эритроцитарных антигенов, к которым может возникать сенсибилизация, вызывающая осложнения при переливании крови. Метод скринингового исследования крови на присутствие аллоиммунных антиэритроцитарных антител, использующийся в ИНВИТРО, позволяет, помимо антител к резус-фактору RH1(D), выявить в исследуемой сыворотке аллоиммунные антитела и к другим эритроцитарным антигенам.

Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d — рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные — только генотип dd). Во время беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом возможно развитие иммунологического конфликта матери и плода по резус-фактору. Резус-конфликт может привести к выкидышу или развитию гемолитической болезни плода и новорожденных. Поэтому определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод — резус-положителен. В случае, если у матери резус-антиген положительный, а у плода отрицательный, конфликт по резус-фактору не развивается. Частота развития резус-несовместимости составляет 1 случай на 200-250 родов.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденных — гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО- (групповым) антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Проникновению антигенов в материнский кровоток способствуют инфекционные факторы, повышающие проницаемость плаценты, мелкие травмы, кровоизлияния и другие повреждения плаценты. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.

Во время первой беременности резус-положительным плодом у беременной с Rh «-» риск развития резус-конфликта составляет 10-15 %. Происходит первая встреча организма матери с чужеродным антигеном, накопление антител происходит постепенно, начиная, приблизительно с 7-8 недели беременности. Риск несовместимости возрастает с каждой последующей беременностью резус — положительным плодом, независимо от того, чем она закончилась (искусственным абортом, выкидышем или родами, операцией при внематочной беременности), при кровотечениях во время первой беременности, при ручном отделении плаценты, а также если роды проводятся путем кесарева сечения или сопровождаются значительной кровопотерей. при переливании резус-положительной крови (в том, случае, если они проводились даже в детском возрасте). Если последующая беременность развивается с резус-отрицательным плодом, несовместимость не развивается.

Всех беременных женщин с Rh «-» ставят на специальный учет в женской консультации и проводят динамический контроль над уровнем резус-антител. В первый раз анализ на антитела надо сдать с 8-й до 20-й недели беременности, и затем периодически проверять титр антител: 1 раз в месяц до 30-й недели беременности, дважды в месяц до 36-й недели и 1 раз в неделю до 36-й недели. Прерывание беременности на сроке менее 6-7 недель может не привести к формированию у матери Rh-антител. В этом случае при последующей беременности, если у плода будет положительный резус-фактор, вероятность развития иммунологической несовместимости вновь будет равна 10-15 %.

• Беременность (профилактика резус-конфликта);
• Наблюдение за беременными с отрицательным резус-фактором;
• Невынашивание беременности;
• Гемолитическая болезнь новорожденных;
• Подготовка к гемотрансфузии.

Подготовка к исследованию: не требуется.
Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)

Метод определения: метод агглютинации + гель-фильтрации (карточки). Инкубация стандартных типированных эритроцитов с исследуемой сывороткой и фильтрация путем центрифугирования смеси через гель, импрегнированный полиспецифическим антиглобилиновым реагентом. Агглютинированные эритроциты выявляются на поверхности геля или в его толще.

В методе используются суспензии эритроцитов доноров группы 0(1), типирован-ные по антигенам эритроцитов RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1(K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK (Jk a), JK2(Jk b), LU1 (Lu a), LU2 (LU b), LE1 (LE a), LE2 (LE b), MNS1(M), MNS2 (N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).

При обнаружении аллоиммунных антиэритроцитарных антител проводится их полуколичественное определение.
Результат выдается в титрах (максимальное разведение сыворотки, при котором еще обнаруживается положительный результат).

Единицы измерения и коэффициенты пересчета: Ед/мл

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат: Сенсибилизация к резус-антигену или другим эритроцитарным антигенам.

источник